Influência dos meios de estocagem durante o transporte de ovários bovinos a 4c sobre a recuperação e qualidade oocitária / Influence of storage media during transport of bovine ovaries at 4°c on oocyte recovery and quality

O objetivo foi avaliar diferentes meios na presença e ausência de soro fetal bovino (SFB; 10%) durante o transporte por 24 h de ovários a 4°C sobre a recuperação e a qualidade oocitária bovina. Cinco experimentos foram realizados comparando: (E1) NaCl vs. NaCl+SFB vs. controle (não resfriado), (E2) PBS vs. PBS+SFB vs. controle, (E3) DMEM vs. DMEM+SFB vs. controle, (E4) DPBS vs. DPBS+SFB vs. controle e (E5) melhores resultados dos experimentos anteriores. Após a aspiração folicular, oócitos foram avaliados quanto à qualidade por critérios morfológicos e ensaio de azul cresil brilhante. Ainda, células dos cumulus de oócitos viáveis foram avaliadas quanto à viabilidade pelo azul de tripan. No E1, NaCl permitiu uma maior taxa de recuperação em relação ao NaCl+SFB (46,0% vs. 39,6%), enquanto que os demais parâmetros não foram alterados. Já no E2, o SFB em PBS influenciou positivamente a taxa de recuperação (41,2% vs. 32,8%) e a viabilidade celular (46,3% vs. 41,7%), quando comparado ao PBS. No E3, o SFB em DMEM teve uma influência negativa sobre a taxa de recuperação (39,9% vs. 40,7%) e avaliação morfológica (59,0% vs. 73,1%). Contudo, a adição de SFB ao DMEM se mostrou benéfica à viabilidade celular (42,0% vs. 34,5%). Em relação ao E4, a presença de SFB em DPBS influenciou positivamente a viabilidade celular (50,7% vs. 47,0%). Já no E5, comparando os melhores grupos [NaCl, PBS+SFB, DMEM, DPBS+SFB], a viabilidade celular mostrou uma maior porcentagem em DMEM (54,0%) e DPBS (54,5%), quando comparada a NaCl (48,3%) e PBS (50,1%). Em conclusão, a presença do SFB em meios com alta capacidade de tamponamento (PBS e DPBS) pode se mostrar benéfica. Contudo, DMEM e DPBS resultam num ambiente mais propício para o resfriamento de ovários bovinos.

The aim was to evaluate different media in the presence and absence of fetal bovine serum (FBS; 10%) during 24 h transport of ovaries at 4°C on bovine oocyte recovery and quality. Five experiments were performed comparing: (E1) NaCl vs. NaCl+FBS vs. control (not cold), (E2) PBS vs. PBS+FBS vs. control, (E3) DMEM vs. DMEM+FBS vs. control, (E4) DPBS vs. DPBS+FBS vs. control and (E5) better results from previous experiments. After follicular aspiration, oocytes were evaluated for quality by morphological criteria and brilliant cresyl blue assay. Also, cumulus cells of viable oocytes were evaluated for viability by trypan blue. In E1, NaCl allowed a higher rate of recovery compared to NaCl+FBS (46.0% vs. 39.6%), while the other parameters were not altered. Already in E2, FBS in PBS positively influenced recovery rate (41.2% vs. 32.8%) and cell viability (46.3% vs. 41.7%) when compared to PBS. In E3, FBS in DMEM had a negative influence on the recovery rate (39.9% vs. 40.7%) and morphological evaluation (59.0% vs. 73.1%). Nevertheless, the addition of SFB to DMEM was shown to be beneficial to cell viability (42.0% vs. 34.5%). Regarding E4, the presence of FBS in DPBS positively influenced cell viability (50.7% vs. 47.0%). Already in E5, comparing the best groups (NaCl, PBS+FBS, DMEM, DPBS+FBS), cell viability showed a higher percentage in DMEM (54.0%) and DPBS (54.5%) when compared to NaCl (48.3%) and PBS (50.1%). In conclusion, the presence of FBS in media with high buffering capacity (PBS and DPBS) may show to be beneficial. Nevertheless, DMEM and DPBS result in an environment more favorable to the cooling of bovine ovaries.

Influência dos meios de estocagem durante o transporte de ovários bovinos a 4c sobre a recuperação e qualidade oocitária / Influence of storage media during transport of bovine ovaries at 4°c on oocyte recovery and quality

O objetivo foi avaliar diferentes meios na presença e ausência de soro fetal bovino (SFB; 10%) durante o transporte por 24 h de ovários a 4°C sobre a recuperação e a qualidade oocitária bovina. Cinco experimentos foram realizados comparando: (E1) NaCl vs. NaCl+SFB vs. controle (não resfriado), (E2) PBS vs. PBS+SFB vs. controle, (E3) DMEM vs. DMEM+SFB vs. controle, (E4) DPBS vs. DPBS+SFB vs. controle e (E5) melhores resultados dos experimentos anteriores. Após a aspiração folicular, oócitos foram avaliados quanto à qualidade por critérios morfológicos e ensaio de azul cresil brilhante. Ainda, células dos cumulus de oócitos viáveis foram avaliadas quanto à viabilidade pelo azul de tripan. No E1, NaCl permitiu uma maior taxa de recuperação em relação ao NaCl+SFB (46,0% vs. 39,6%), enquanto que os demais parâmetros não foram alterados. Já no E2, o SFB em PBS influenciou positivamente a taxa de recuperação (41,2% vs. 32,8%) e a viabilidade celular (46,3% vs. 41,7%), quando comparado ao PBS. No E3, o SFB em DMEM teve uma influência negativa sobre a taxa de recuperação (39,9% vs. 40,7%) e avaliação morfológica (59,0% vs. 73,1%). Contudo, a adição de SFB ao DMEM se mostrou benéfica à viabilidade celular (42,0% vs. 34,5%). Em relação ao E4, a presença de SFB em DPBS influenciou positivamente a viabilidade celular (50,7% vs. 47,0%). Já no E5, comparando os melhores grupos [NaCl, PBS+SFB, DMEM, DPBS+SFB], a viabilidade celular mostrou uma maior porcentagem em DMEM (54,0%) e DPBS (54,5%), quando comparada a NaCl (48,3%) e PBS (50,1%). Em conclusão, a presença do SFB em meios com alta capacidade de tamponamento (PBS e DPBS) pode se mostrar benéfica. Contudo, DMEM e DPBS resultam num ambiente mais propício para o resfriamento de ovários bovinos.(AU)

The aim was to evaluate different media in the presence and absence of fetal bovine serum (FBS; 10%) during 24 h transport of ovaries at 4°C on bovine oocyte recovery and quality. Five experiments were performed comparing: (E1) NaCl vs. NaCl+FBS vs. control (not cold), (E2) PBS vs. PBS+FBS vs. control, (E3) DMEM vs. DMEM+FBS vs. control, (E4) DPBS vs. DPBS+FBS vs. control and (E5) better results from previous experiments. After follicular aspiration, oocytes were evaluated for quality by morphological criteria and brilliant cresyl blue assay. Also, cumulus cells of viable oocytes were evaluated for viability by trypan blue. In E1, NaCl allowed a higher rate of recovery compared to NaCl+FBS (46.0% vs. 39.6%), while the other parameters were not altered. Already in E2, FBS in PBS positively influenced recovery rate (41.2% vs. 32.8%) and cell viability (46.3% vs. 41.7%) when compared to PBS. In E3, FBS in DMEM had a negative influence on the recovery rate (39.9% vs. 40.7%) and morphological evaluation (59.0% vs. 73.1%). Nevertheless, the addition of SFB to DMEM was shown to be beneficial to cell viability (42.0% vs. 34.5%). Regarding E4, the presence of FBS in DPBS positively influenced cell viability (50.7% vs. 47.0%). Already in E5, comparing the best groups (NaCl, PBS+FBS, DMEM, DPBS+FBS), cell viability showed a higher percentage in DMEM (54.0%) and DPBS (54.5%) when compared to NaCl (48.3%) and PBS (50.1%). In conclusion, the presence of FBS in media with high buffering capacity (PBS and DPBS) may show to be beneficial. Nevertheless, DMEM and DPBS result in an environment more favorable to the cooling of bovine ovaries.(AU)

Caracterização histomorfológica do sistema tegumentar auricular de cateto - Pecari tajacu Linnaeus, 1758) / Histomorphological characterization of collared peccary (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) ear integumentary system

A criopreservação de tecido somático derivado da pele de catetos consiste numa alternativa para a conservação da biodiversidade por meio da associação com a transferência nuclear. Nesse contexto, a manipulação de tecidos da pele é uma etapa crucial para o sucesso dessa biotécnica. Portanto, o objetivo do presente estudo, foi caracterizar o sistema tegumentar auricular periférico de catetos, visando aprimorar a conservação tecidual. Para tanto, fragmentos auriculares de oito animais foram avaliados quanto às camadas teciduais, aos componentes, à atividade proliferativa e à viabilidade metabólica, usando-se as colorações hematoxilina-eosina e tricrômico de Gomori, quantificação de AgNORs e microscopia eletrônica de transmissão. Assim, tamanhos de 104,2µm e 222,6µm foram observados para epiderme e derme, com uma proporção volumétrica de 36,6% e 58,7%, respectivamente. Além disso, na epiderme, foram evidenciadas as camadas basal (22,5µm), intermediárias (53,5µm) e córnea (28,2µm), com valores médios de 65,3 células epidermais, 43,4 melanócitos e 14,8 halos perinucleares. Já a derme apresentou 127 fibroblastos, com 2,5 AgNORs/nucléolo. Adicionalmente, a atividade metabólica foi de 0,243. Em conclusão, o sistema tegumentar auricular periférico de catetos possui algumas marcantes variações em relação a outros mamíferos, quanto ao número de camadas e espessura da epiderme, quantidade de células epidermais, melanócitos e parâmetros proliferativos.(AU)

The cryopreservation of somatic tissue derived from skin of collared peccaries is an alternative for biodiversity conservation through association with nuclear transfer. In this context, tissue manipulation of skin is a critical step for the success of this biotechnique. Therefore, the aim was to characterize the peripheral ear integumentary system derived from collared peccaries, directing to improve tissue conservation. Thus, ear fragments of eight animals were evaluated for tissue layers, components, proliferative activity and metabolic viability, using hematoxylin-eosin and Gomori Trichrome, AgNORs quantification and transmission electronic microscopy. Hence, sizes of 104.2 µm and 222.6 µm were observed in the epidermis and dermis, with a volumetric ratio of 36.6% and 58.7%, respectively. Moreover, basal layer (22.5 µm), intermediate (53.5 µm) and cornea (28.2 µm), with mean values of 65.3 epidermal cells, 43.4 melanocytes and 14.8 perinuclear halos were evidenced in the epidermal. Already the dermis has 127 fibroblasts with 2.5 AgNORs/nucleolus. Additionally, the metabolic activity was 0.243. In conclusion, the peripheral ear integumentary system derived from collared peccaries possessed some important variations compared to other mammals, as the number of layers and thickness of the epidermis, number of epidermal cells, melanocytes and proliferative parameters.(AU)

Caracterização histomorfológica do sistema tegumentar auricular de cateto - Pecari tajacu Linnaeus, 1758) / Histomorphological characterization of collared peccary (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) ear integumentary system

A criopreservação de tecido somático derivado da pele de catetos consiste numa alternativa para a conservação da biodiversidade por meio da associação com a transferência nuclear. Nesse contexto, a manipulação de tecidos da pele é uma etapa crucial para o sucesso dessa biotécnica. Portanto, o objetivo do presente estudo, foi caracterizar o sistema tegumentar auricular periférico de catetos, visando aprimorar a conservação tecidual. Para tanto, fragmentos auriculares de oito animais foram avaliados quanto às camadas teciduais, aos componentes, à atividade proliferativa e à viabilidade metabólica, usando-se as colorações hematoxilina-eosina e tricrômico de Gomori, quantificação de AgNORs e microscopia eletrônica de transmissão. Assim, tamanhos de 104,2µm e 222,6µm foram observados para epiderme e derme, com uma proporção volumétrica de 36,6% e 58,7%, respectivamente. Além disso, na epiderme, foram evidenciadas as camadas basal (22,5µm), intermediárias (53,5µm) e córnea (28,2µm), com valores médios de 65,3 células epidermais, 43,4 melanócitos e 14,8 halos perinucleares. Já a derme apresentou 127 fibroblastos, com 2,5 AgNORs/nucléolo. Adicionalmente, a atividade metabólica foi de 0,243. Em conclusão, o sistema tegumentar auricular periférico de catetos possui algumas marcantes variações em relação a outros mamíferos, quanto ao número de camadas e espessura da epiderme, quantidade de células epidermais, melanócitos e parâmetros proliferativos.(AU)

The cryopreservation of somatic tissue derived from skin of collared peccaries is an alternative for biodiversity conservation through association with nuclear transfer. In this context, tissue manipulation of skin is a critical step for the success of this biotechnique. Therefore, the aim was to characterize the peripheral ear integumentary system derived from collared peccaries, directing to improve tissue conservation. Thus, ear fragments of eight animals were evaluated for tissue layers, components, proliferative activity and metabolic viability, using hematoxylin-eosin and Gomori Trichrome, AgNORs quantification and transmission electronic microscopy. Hence, sizes of 104.2 µm and 222.6 µm were observed in the epidermis and dermis, with a volumetric ratio of 36.6% and 58.7%, respectively. Moreover, basal layer (22.5 µm), intermediate (53.5 µm) and cornea (28.2 µm), with mean values of 65.3 epidermal cells, 43.4 melanocytes and 14.8 perinuclear halos were evidenced in the epidermal. Already the dermis has 127 fibroblasts with 2.5 AgNORs/nucleolus. Additionally, the metabolic activity was 0.243. In conclusion, the peripheral ear integumentary system derived from collared peccaries possessed some important variations compared to other mammals, as the number of layers and thickness of the epidermis, number of epidermal cells, melanocytes and proliferative parameters.(AU)

Influência do método de recuperação oocitária sobre os parâmetros quanti-qualitativos de oócitos bovinos / Influence of the recovery method on the quanti-qualitative parameters of bovine oocytes

Os objetivos foram avaliar os parâmetros quanti-qualitativos de oócitos bovinos após recuperação usando diferentes métodos de colheita e tipos de êmbolo da seringa de aspiração. Assim, dois experimentos foram realizados usando ovários de fêmeas post-mortem. No primeiro experimento, duas técnicas de colheita oocitária foram empregadas: aspiração de folículos (2–8 mm) com agulha 21G e seringa de 5 mL e, fatiamento da superfície ovariana (slicing). No segundo experimento, folículos (2–8 mm) foram aspirados usando seringa com distintos êmbolos (borracha vs. plástico). Os complexos cumulus-oócito (CCOs) foram classificados por critérios morfológicos em viáveis e não viáveis. Em seguida, CCOs foram corados com o azul de cresil brilhante (ACB) (60 min; 26 μM) e classificados como ACB+ (viáveis) e ACB- (não viáveis). Um total de cinco repetições por experimento foi realizado e os dados analisados pelo teste exato de Fisher (P0,05) foi observada entre os tipos de êmbolos quanto aos parâmetros quantitativos. Quanto à qualidade oocitária avaliada por critérios morfológicos, um percentual maior de oócitos viáveis foi recuperado usando êmbolo de borracha (75,4% vs. 58,2%; P<0,05). Em conclusão, oócitos de melhor qualidade podem ser obtidos a partir da aspiração folicular, especialmente usando seringa com êmbolo de borracha.

The aims were to evaluate qualitative-quantitative parameters of bovine oocytes after recovery using different collectionmethods and piston type from the aspiration syringe. Thus, two experiments were performed using ovaries from postmortemfemales. In the first experiment, two techniques of oocyte recovery were used: aspiration of follicles (2–8 mm)with 21G needle and 5 mL syringe, and slicing of the ovarian surface. In the second experiment, follicles (2–8 mm)were aspirated using syringes with different pistons (rubber vs. plastic). The cumulus-oocyte complexes (COCs) wereclassified by morphological criteria as viable and non-viable. Then, COCs were stained with brilliant cresyl blue (BCB)(60 min, 26 µM) and categorized as BCB+(viable) and BCB-(non-viable). A total of five repetitions per experimentwas performed and the data analyzed by Fisher's exact test (P0.05) was observed the piston type as the quantitativeparameters. As the oocyte quality evaluated by morphological criteria, a higher percentage of viable oocytes wererecovered using rubber piston (75.4% vs. 58.2%; P<0.05). In conclusion, better quality oocytes can be obtained fromfollicular aspiration, especially by using a rubber piston syringe

Cultivo in vitro de células derivadas de pele em mamíferos silvestres - estado da arte / In vitro culture of wild mammals skin derived cells - state of art

O cultivo de células somáticas derivadas da pele consiste numa técnica de relevante aplicabilidade,tanto para a investigação básica quanto para o uso em biotécnicas reprodutivas. Além disso, o cultivo de célulasda pele derivadas de mamíferos silvestres tem sido uma etapa interessante na formação de criobancos, visando àpreservação da biodiversidade genética. Assim, o objetivo desta revisão é apresentar os progressos técnicosalcançados no cultivo de células somáticas em mamíferos silvestres, destacando as principais variaçõesencontradas nos meios e evidenciando os avanços em algumas espécies.(AU)

The culture of somatic cells derived from skin is a technique of important applicability, both for basicresearch and for the use in reproductive biotechnologies. Moreover, skin cell culture derived from wildmammals has been an interesting step to build a cryobank, aimed at preserving genetic biodiversity. Thus, theaim of this review is to present the technical progress achieved in the somatic cell culture in wild mammals,highlighting the main variances found in the media and showing the progress in some species.(AU)

Cultivo in vitro de células derivadas de pele em mamíferos silvestres - estado da arte / In vitro culture of wild mammals skin derived cells - state of art

O cultivo de células somáticas derivadas da pele consiste numa técnica de relevante aplicabilidade,tanto para a investigação básica quanto para o uso em biotécnicas reprodutivas. Além disso, o cultivo de célulasda pele derivadas de mamíferos silvestres tem sido uma etapa interessante na formação de criobancos, visando àpreservação da biodiversidade genética. Assim, o objetivo desta revisão é apresentar os progressos técnicosalcançados no cultivo de células somáticas em mamíferos silvestres, destacando as principais variaçõesencontradas nos meios e evidenciando os avanços em algumas espécies.

The culture of somatic cells derived from skin is a technique of important applicability, both for basicresearch and for the use in reproductive biotechnologies. Moreover, skin cell culture derived from wildmammals has been an interesting step to build a cryobank, aimed at preserving genetic biodiversity. Thus, theaim of this review is to present the technical progress achieved in the somatic cell culture in wild mammals,highlighting the main variances found in the media and showing the progress in some species.

INFLUÊNCIA DOS MEIOS DE ESTOCAGEM DURANTE O TRANSPORTE DE OVÁRIOS BOVINOS A 4°C SOBRE A RECUPERAÇÃO E QUALIDADE OOCITÁRIA

O objetivo foi avaliar diferentes meios na presença e ausência de soro fetal bovino (SFB; 10%) durante o transporte por 24 h de ovários a 4°C sobre a recuperação e a qualidade oocitária bovina. Cinco experimentos foram realizados comparando: (E1) NaCl vs. NaCl+SFB vs. controle (não resfriado), (E2) PBS vs. PBS+SFB vs. controle, (E3) DMEM vs. DMEM+SFB vs. controle, (E4) DPBS vs. DPBS+SFB vs. controle e (E5) melhores resultados dos experimentos anteriores. Após a aspiração folicular, oócitos foram avaliados quanto à qualidade por critérios morfológicos e ensaio de azul cresil brilhante. Ainda, células dos cumulus de oócitos viáveis foram avaliadas quanto à viabilidade pelo azul de tripan. No E1, NaCl permitiu uma maior taxa de recuperação em relação ao NaCl+SFB (46,0% vs. 39,6%), enquanto que os demais parâmetros não foram alterados. Já no E2, o SFB em PBS influenciou positivamente a taxa de recuperação (41,2% vs. 32,8%) e a viabilidade celular (46,3% vs. 41,7%), quando comparado ao PBS. No E3, o SFB em DMEM teve uma influência negativa sobre a taxa de recuperação (39,9% vs. 40,7%) e avaliação morfológica (59,0% vs. 73,1%). Contudo, a adição de SFB ao DMEM se mostrou benéfica à viabilidade celular (42,0% vs. 34,5%). Em relação ao E4, a presença de SFB em DPBS influenciou positivamente a viabilidade celular (50,7% vs. 47,0%). Já no E5, comparando os melhores grupos [NaCl, PBS+SFB,