Padronização de uma PCR para diagnóstico molecular de Microsporum canis em amostras de pelos e crostas de cães e gatos / Standardization of a pcr for molecular diagnosis of microsporum canis in samples of fur and crusts of dogs and cats

Objetivou-se neste estudo padronizar um protocolo de reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção de Microsporum canis em amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos. Foram selecionadas 48 amostras previamente identificadas por meio de cultura. Destas, 23 foram positivas para dermatófitos no cultivo. Padronizou-se a PCR a partir de primers desenhados para o alvo M. canis. Sessenta e um por cento (14/23) das amostras positivas para dermatófitos foram identificadas como M. canis em cultura. Desse total, 71,4% (10/14) apresentaram um fragmento de 218pb compatível com o esperado para a espécie fúngica alvo dessa reação. Observou-se uma sensibilidade de 71,4% e especificidade de 100% na PCR, além de uma boa concordância entre essas técnicas de diagnóstico (Kappa: 0,78; P<0,0001). O protocolo utilizado neste estudo apresentou alta especificidade na detecção de M. canis diretamente de amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos, viabilizando um diagnóstico mais rápido e específico, podendo esse protocolo ser empregado como um método confirmatório para agilizar a detecção de M. canis.(AU)

The aim of this study was to standardize a Polymerase Chain Reaction protocol (PCR) for the detection of Microsporum canis in fur and/or crusts of dogs and cats. 48 samples previously identified by culture were selected. Of these, 23 were positive for dermatophytes in culture. PCR was standardized from drawn primers whose target is M. canis. A total of 61% (14/23) of the dermatophyte positive samples were identified as M. canis in culture. Of this total, 71.4% (10/14) presented a fragment of 218bp compatible with that expected for the fungal species target of the reaction. A sensitivity of 71.4% and specificity of 100% in the PCR were observed, in addition to a good agreement between the techniques (Kappa: 0.78; P<0.0001). The protocol used in this study showed high specificity in the detection of M. canis directly from fur and/or crusts of dogs and cats, making possible a faster and more specific diagnosis. This protocol could be used as a confirmatory method, speeding the detection of M. canis.(AU)

Padronização de uma PCR para diagnóstico molecular de Microsporum canis em amostras de pelos e crostas de cães e gatos / Standardization of a pcr for molecular diagnosis of microsporum canis in samples of fur and crusts of dogs and cats

Objetivou-se neste estudo padronizar um protocolo de reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção de Microsporum canis em amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos. Foram selecionadas 48 amostras previamente identificadas por meio de cultura. Destas, 23 foram positivas para dermatófitos no cultivo. Padronizou-se a PCR a partir de primers desenhados para o alvo M. canis. Sessenta e um por cento (14/23) das amostras positivas para dermatófitos foram identificadas como M. canis em cultura. Desse total, 71,4% (10/14) apresentaram um fragmento de 218pb compatível com o esperado para a espécie fúngica alvo dessa reação. Observou-se uma sensibilidade de 71,4% e especificidade de 100% na PCR, além de uma boa concordância entre essas técnicas de diagnóstico (Kappa: 0,78; P<0,0001). O protocolo utilizado neste estudo apresentou alta especificidade na detecção de M. canis diretamente de amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos, viabilizando um diagnóstico mais rápido e específico, podendo esse protocolo ser empregado como um método confirmatório para agilizar a detecção de M. canis.(AU)

The aim of this study was to standardize a Polymerase Chain Reaction protocol (PCR) for the detection of Microsporum canis in fur and/or crusts of dogs and cats. 48 samples previously identified by culture were selected. Of these, 23 were positive for dermatophytes in culture. PCR was standardized from drawn primers whose target is M. canis. A total of 61% (14/23) of the dermatophyte positive samples were identified as M. canis in culture. Of this total, 71.4% (10/14) presented a fragment of 218bp compatible with that expected for the fungal species target of the reaction. A sensitivity of 71.4% and specificity of 100% in the PCR were observed, in addition to a good agreement between the techniques (Kappa: 0.78; P<0.0001). The protocol used in this study showed high specificity in the detection of M. canis directly from fur and/or crusts of dogs and cats, making possible a faster and more specific diagnosis. This protocol could be used as a confirmatory method, speeding the detection of M. canis.(AU)

Estimativa do intervalo pós-morte em um canino (Canis lupus familiaris Linnaeus 1758) pela entomologia forense em Cabedelo-PB, Brasil: relato de caso / Estimate of postmortem interval through forensic entomology in a canine (Canis lupus familiaris Linnaeus 1758) in Cabedelo-PB, Brazil: case report

O intervalo pós-morte (IPM) é um instrumento importante de diagnóstico relacionado à prática forense. O uso de insetos tem sido relatado como um modo eficiente para estimá-lo, quando o cadáver encontra-se em estágio avançado de decomposição. Objetivou-se com este trabalho estimar o IPM com base em evidências entomológicas em um canino. Foram coletadas larvas de moscas no cadáver e encaminhadas ao laboratório de entomologia, onde foram criadas e eclodiram adultos da espécie Chrysomya albiceps (Wiedemann, 1819). Somando-se os dados abióticos de temperatura e umidade relativa do local de coleta e do local de criação, estimou-se um IPM mínimo de 3,34 dias do momento da postura dos ovos pelas moscas até a coleta das larvas. Com base nos resultados obtidos, conclui-se que a entomologia forense, como ferramenta para estimativa do IPM, mostrou-se eficaz e determinante na elucidação do caso em questão.(AU)

The postmortem interval (PMI) is an important tool for diagnosis related to the forensic practice. The use of insects has proved to be an efficient diagnosis tool when the cadaver is in advanced decomposition stage. The objective of this work was to estimate PMI based on entomological evidence in a canine. Fly larvae was collected from the cadaver and forwarded to the Entomology laboratory. The fly larvae were reared and hatched adults of Chrysomya albiceps (Wiedemann 1819). With these insects and the abiotic data of temperature and relative humidity, from the places of collection and rearing larvae, a minimum PMI of 3.34 days from the laying of eggs by the flies until the time that we collected the larvae was obtained. The results show that Forensic Entomology as tool to estimate PMI is decisive and effective in the elucidation of the case.(AU)

Perfil de sensibilidade antimicrobiana de agentes contagiosos e ambientais isolados de mastite clínica e subclínica de búfalas

ABSTRACT With the objective of examining the frequency of bacterial agents involved in the clinical and subclinical inflammatory processes of the mammary glands of buffalos and to study the sensitivity profile of the isolated agents 128 lactating buffalos (a total of 512 mammary quarters) were examined. The California Mastitis Test was the method used for the diagnosis of frequency of subclinical cases and physical examination of the udder and a screened mug test for identification of the clinical cases. Samples of milk were collected from the quarters that showed a reaction to CMT (scores 1+, 2+, 3+) and from those with clinical mastitis. All samples were previously microbiologically tested for the identification of the agents involved together with the sensitivity tests and antimicrobials. The results indicated that the bacteria isolated and associated in the clinical and subclinical cases of the disease were mainly Staphylococcus coagulase negative.The in vitrosensitivity tests showed greater efficacy for gentamicin antibiotics (97.98%), florfenicol (93.94%) and enrophloxine (90.90%). Gentamicin showed 100% efficacy in the treatment of the clinical cases and was considered the best treatment for the control of the disease in the herd in this study.

RESUMO Com o objetivo de estudar a freqüência de agentes bacterianos envolvidos nos processos inflamatórios clínicos e subclínicos da glândula mamária de búfalas e realizar o perfil de sensibilidade dos agentes isolados, foram estudadas 128 búfalas em lactação, totalizando 512 quartos mamários. Realizou-se o California Mastitis Test para diagnóstico da freqüência de casos subclínicos e o exame físico da glândula mamária e teste da caneca telada para identificar os casos clínicos. As amostras de leite foram colhidas dos quartos que apresentaram reação ao C.M.T. (escores 1+, 2+, 3+) e daqueles com mastite clínica, sendo posteriormente realizados os exames microbiológicos para a identificação dos agentes envolvidos, além dos testes de sensibilidade a antimicrobianos. Observaram-se bactérias isoladas e associações destas em casos clínicos e subclínicos da doença, destacando-se o Staphylococcus coagulase negativa como o mais freqüente. Os testes de sensibilidade in vitro demonstraram maior eficácia para os antibióticos gentamicina (97,98%), florfenicol (93,94%) e enrofloxacina (90,90%). A gentamicina apresentou 100% de eficácia no tratamento dos casos clínicos, sendo considerada uma boa opção para o controle da doença no rebanho estudado.

Corynebacterium pseudotuberculosis experimental infection of goats mamary gland

ABSTRACT The objective of this study is to describe some aspects of the pathogeny of Corynebacterium pseudotuberculosis, isolated from a natural case of caseous lymphadenitis. The study was comprised with 2 groups of 3 animals each; inoculated with a C. pseudotuberculosis strain, group 1 (GI) via intra dermal and group 2 (GII) via the mammary gland. The animals were clinically examined on a daily basis and hemograms carried out over a period of time at different intervals. Only 2 animals from GII showed changes in the clinical examination characterized by hyperthermia. All the animals in both groups developed papule and edema at the inoculation site. There were no significant alterations in the erythrogram but in the leucogram there was leucocytosis indicated by the presence of neutrophilia in 2 animals from GII. Results of the cellular analysis of the gland showed that 2 animals from GII developed acute mastitis. This experiment has proven that C. pseudotuberculosis, isolated from a natural infection of caseous lymphadenitis, could cause clinical mastitis, losses in goat keeping and that the expression cytology test could be used as an alternative diagnosis for mastitis.

RESUMO Objetivou-se com este trabalho descrever alguns aspectos da patogenia da infecção da glândula mamária por Corynebacterium pseudotuberculosis isolado de um caso natural de linfadenite caseosa. Os animais em número de seis, foram separados em dois grupos, no primeiro (GI) foi realizada inoculação da cepa de C. pseudotuberculosis pela via intradérmica e no segundo grupo (GII) pela via intramamária. Esses animais foram acompanhados diariamente por exame clínico e por hemogramas em diferentes tempos. Apenas dois animais do GII apresentaram alteração ao exame clínico caracterizada por hipertermia. Todos os animais (GI e GII) apresentaram pápula e edema no local da inoculação. No eritrograma, não foram observadas alterações significativas, contudo no leucograma, observou-se leucocitose por neutrofilia em dois animais do GII. A análise da celularidade das glândulas demonstrou que apenas dois animais do GII apresentaram mastite aguda. Comprovou-se com este experimento que o C. pseudotuberculosis isolado de infecção natural de linfadenite caseosa, pode ocasionar mastite clínica, causando prejuízos para caprinocultura, assim como a citologia de expressão pode ser utilizada como método de diagnóstico alternativo nos casos de mastite.