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The cryopreservation reduces ram sperm quality, decreasing the pregnancy rate of ewes inseminated with thawed sperm. Hence, we aimed to improve the post-thaw quality of ram sperm replacing egg yolk on Tris-Glucose extender with different concentrations of LDL (2 or 8%), associated with the addition of 10 mM non-enzymatic antioxidants (ascorbic acid, hydroxytoluene butylate, ascorbyl palmitate, and trehalose). Semen samples were collected from six rams, split into different treatments, and frozen. After thawing, kinematic (CASA), structural (propidium iodide and carboxyfluorescein diacetate) and functional (hypoosmotic test) sperm membrane integrity was assessed. Total motility, VCL, and LIN were also assessed in thawed samples during 3 h of incubation (38 °C). The results showed that hydroxytoluene butylate at 10 mM in Tris-Glucose extender with 8% LDL improved velocity parameters immediately post-thaw compared with Tris-Glucose egg yolk extender, as well as prevented the reduction of total motility and VCL after incubation. There was no benefit of adding ascorbic acid and trehalose. Moreover, for the first time, it was shown the motility impairment promoted by ascorbyl palmitate to ram sperm.(AU)

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The aim of this study was to evaluate the association of different concentrations of Trolox® and the addition of a fixed concentration of DHA in the freezing of semen of Mangalarga Marchador stallions. To that end, 16 ejaculates were frozen in the following extenders: E1) BotuCrio® (BC; Control); E2) BC + 50 ngml-1 DHA + 30 µM Trolox® (BCDHA30T); E3) BC + 50 ngml-1 DHA + 40 µM Trolox® (BCDHA40T); E4) BC + 50 ngml-1 DHA + 50 µM Trolox® (BCDHA50T). All the tested extenders were similar in preserving different kinematic parameters, cell functional integrity, compacted DNA, and high and intermediate mitochondrial activity (P>0.05). However, sperm cryopreserved in BCDHA40T showed higher velocities than sperm frozen in the control extender (P<0.05). The 30 µM concentration of Trolox® was worse for sperm motility and the 50 µM concentration of Trolox® did not adequately preserve the structural integrity of the membranes in an extender containing DHA when compared to the BotuCrio® (P<0.05) extender. The use of Trolox® in freezing extenders containing DHA did not maximize the effect of BotuCrio®, except for in the case of sperm velocity parameters when at a concentration of 40 µM.(AU)

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Equine semen has historically been chilled using milk-based media. However, the use of animal-based components presents several potential concerns, such as variability in formulations, microbial contamination and regulatory issues. We aimed to evaluate the potential of including different concentrations of soy lecithin (LS) in chemically defined Biggers, Whitten and Whittingham (BWW) medium for cooling equine semen to 15°C. Ejaculates were diluted as six different experimental groups: 1) BotuSêmen® (control); 2) BWW; 3) BWW + 1% LS; 4) BWW + 2% LS; 5) BWW + 4% LS and 6) BWW + 6% LS. BWW medium, did not preserve motility, velocity, straightness (STR), linearity (LIN), amplitude of lateral sperm head displacement (ALH), cross flagellar beat frequency (BCF), functional and structural integrity of equine spermatozoa during 24 h of refrigeration when compared to BotuSêmen® (P <0.05). The use of BWW for cooling equine semen was only possible with the addition of LS, being the concentrations equal or higher than 2% better, because they preserved total motility, curvilinear velocity (VCL) and LIN with the same potential of BotuSêmen® (P >0.05). Nevertheless, BotuSêmen® showed superiority in preserving the percentage of sperm progressive motility, average path velocity (VAP), linear progressive velocity (VSL) and BCF during cooling compared to the other extenders (P <0.05). The inclusion of soy lecithin, from 2 to 6% in the BWW medium, allowed maintaining the viability of equine semen cooled at 15ºC for up to 24 hours.

O sêmen equino tem sido historicamente refrigerado usando meios à base de leite. No entanto, o uso de componentes de origem animal causa várias preocupações potenciais, como variabilidade nas formulações, contaminação microbiana e questões regulatórias. Objetivou-se avaliar o potencial de inclusão de diferentes concentrações de lecitina de soja (LS) no meio quimicamente definido BWW - Biggers, Whitten e Whittingham para refrigeração de sêmen equino e armazenamento na temperatura de 15°C. Os ejaculados foram diluídos em seis diferentes grupos experimentais: 1) BotuSêmen® (controle); 2) BWW; 3) BWW + 1% lecitina de soja (LS); 4) BWW + 2% LS; 5) BWW + 4% LS e 6) BWW + 6% LS. O meio BWW, não preservou a motilidade, a velocidade, a retilinearidade (STR), a linearidade (LIN), a amplitude do deslocamento lateral da cabeça (ALH), a frequência de batimento flagelar cruzado (BCF), a integridade funcional e estrutural dos espermatozoides equino durante 24 h de refrigeração quando comparado ao BotuSêmen® (P <0,05). O uso de BWW para refrigeração de sêmen equino só foi possível com adição de lecitina de soja, sendo as concentrações igual ou superior a 2% melhores, pois preservaram a motilidade total, a velocidade curvilinear (VCL) e LIN com mesmo potencial do BotuSêmen® (P >0,05). Ainda assim, o diluidor comercial BotuSêmen® apresentou superioridade em preservar o percentual de espermatozoides progressivamente móveis, a velocidade média da trajetória (VAP), a velocidade linear progressiva (VSL) e a frequência do batimento flagelar cruzado (BCF) durante a refrigeração comparado aos demais diluidores (P <0,05). A inclusão de lecitina de soja, de 2 a 6% no meio BWW, permitiu a manutenção da viabilidade do sêmen equino refrigerado a 15ºC por até 24 horas.

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Abstract The aim of this research was to evaluate the use of pyridoxine hydrochloride and its associated side effects in the treatment of pseudopregnancy in female dogs. A total of 40 female dogs, with no defined breed, in non-gestational diestrus, with clinical complaint of milk production were selected. The female dogs were divided into four experimental groups of 10 animals each, treated orally for 20 days with 10mg/kg/day (G1) and 50mg/kg/day (G2) of pyridoxine hydrochloride (vitamin B6), 5μg/kg/day of cabergoline (G3), and with a placebo, in the case of the control group (G4). The effects of the treatments on milk production were investigated, as well as possible systemic side effects, macroscopic uterine and ovarian alterations, and uterine histology. During the investigated period, G2 and G3 were equally efficient (P>0.05) in lactation suppression, differing (P>0.05) from the other groups. There were no systemic side effects or uterine changes associated with administration of the studied drug. Vitamin B6 (50mg/kg) has shown to be a safe and economically viable alternative for lactation interruption in female dogs with pseudopregnancy.

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The objective of this study was to evaluate the effect of and determine the optimum level of inclusion of docosahexaenoic acid (DHA) in the diluent for goat semen cryopreservation. Five Boer males underwent semen collection, totaling 10 viable collections per animal. After evaluation, the ejaculates were pooled and fractionated in Tris-yolk medium with the addition of 0; 30; 45; or 60ng mL-1 of DHA and 0.4 mmol of alpha-tocopherol (Vitamin E). The semen was cryopreserved in a freezing machine (TK 3000TM) and placed in a cryogenic cylinder for subsequent analysis. Data were evaluated by regression analysis at 5% significance. There were no differences (P > 0.05) in sperm kinetic parameters evaluated by computer assisted sperm analysis: total motility (79.17 ± 17.31%), progressive motility (14.04 ± 5.73%), curvilinear speed (58.82 ± 6.35µm/s), progressive linear speed (22.49 ± 3.63µm/s), mean path speed (35.17 ± 4.52µm/s), linearity (38.69 ± 5.79%), rectilinearity (63.99 ± 6.64%), and oscillation index (59.68 ± 2.99%). There were no differences (P > 0.05) found from the membrane functional integrity test for reactive spermatozoa (69.66 ± 9.76%), plasma and acrosomal membrane integrity of intact spermatozoa (29.86 ± 7.57%), mitochondrial potential of Class I cryopreserved goat semen (72.75 ± 9.81%), and chromatin compaction of intact chromatin (96.87 ± 4.37%).

O estudo teve como objetivo avaliar o efeito e determinar o melhor nível de inclusão de ácido docosahexaenoico (DHA) no diluidor para criopreservação de sêmen caprino. Cinco machos Boer foram submetidos a coletas de sêmen, totalizando 10 coletas viáveis por animal. Após avaliação, os ejaculados foram agrupados (pool) e fracionados em meio Tris gema, acrescido de 0; 30; 45 e 60ng mL-1 de DHA e 0,4mmol de alfa-tocoferol. O sêmen foi criopreservado em máquina de congelamento TK 3000® e acondicionado em botijão criogênico para posterior análise. Os dados foram avaliados por análise de regressão a 5% de significância. Não houve diferença (P > 0,05) nos parâmetros cinéticos espermáticos avaliados pela análise assistida por computador: motilidade total (79,17 ± 17,31%), motilidade progressiva (14,04 ± 5,73%), velocidade curvilínea (58,82 ± 6,35µm/s), velocidade linear progressiva (22,49 ± 3,63µm/s), velocidade média do caminho (35,17 ± 4,52µm/s), linearidade (38,69 ± 5,79%), retilinearidade (63,99 ± 6,64%) e índice de oscilação (59,68 ± 2,99%). Não foram encontradas diferenças (P> 0,05) no teste de integridade funcional da membrana para espermatozoides reativos (69,66 ± 9,76%), integridade plasmática e membrana acrossomal dos espermatozoides intactos (29,86 ± 7,57%), potencial mitocondrial do sêmen caprino de classe I (72,75 ± 9,81%) e compactação da cromatina intacta (96,87 ± 4,37%). A inclusão de até 60ng mL-1 de DHA não promoveu melhora nos parâmetros de qualidade seminal de caprinos pós-descongelamento.

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The objective of this study was to compare the BotuCrio® extender with the Merk - egg yolk and the INRA 82 modified by the inclusion of acetamide, methyl cellulose and trehalose in substitution of glycerol for freezing equine semen. The semen was diluted after centrifugation to obtain 100 x 106 of sperm/ml in: BotuCrio® (control); Merk - egg yolk or INRA 82 modified (Experiment 1). The extended semen was packaged in 0.5 ml straws, cooled and frozen in a freezing machine. The control extender was superior in preserving the motility, VCL, VSL, VAP, LIN, STR and the BCF when compared to the Merk - egg yolk and INRA 82 modified (P 0.05). The fertility rate after AI with frozen semen in BotuCrio LDL was 37.5%.

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A ovulação em gatas é induzida por um reflexo neuroendócrino atribuído à estimulação mecânica dos receptores sensoriais durante o coito. Esta estimulação pode ser simulada com auxílio do swab vaginal, desencadeando a pseudogestação. Objetivou-se verificar a eficiência da indução de ovulação com swab, a fim de estabelecer um tratamento contraceptivo natural para felinos domésticos, bem como os efeitos sobre o útero do uso repetido dessa técnica. Na primeira fase do trabalho, foram avaliados 12 animais em três ciclos estrais consecutivos. No primeiro ciclo (T1), houve estimulação vaginal com swab. No segundo ciclo (T2), foi utilizado macho vasectomizado para cópula. No último ciclo (T3), a ovulação foi acompanhada sem estímulo (controle). Na segunda etapa do trabalho, 13 gatas foram submetidas a sucessivos estados de pseudogestação com intuito de verificar os efeitos da estimulação mecânica sobre o útero. A confirmação da ovulação em todas as etapas do trabalho foi realizada por meio da mensuração dos níveis de progesterona. A estimulação vaginal com swab apresentou resposta similar à obtida por monta natural (P>0,05). Algumas gatas apresentaram modificações uterinas discretas; no entanto, nenhum desses achados foi considerado de relevância patológica. Desta forma, a indução de ovulação com swab mostrou-se segura e sem efeitos colaterais expressivos.

A neuroendocrine reflex attributed to the mechanical stimulation of sensory receptors during copulation induces ovulation in cats. This stimulation can be simulated with a vaginal swab, triggering pseudopregnancy. The efficiency of ovulation induction with swab was evaluated in order to establish a natural contraceptive treatment for domestic cats as well as to analyze the effect on uterus of the repeated use of this technique. At the first phase of the study, 12 animals were evaluated in three consecutive estrous cycles. In the first cycle (T1), vaginal swab stimulation was applied. In the second cycle (T2), a vasectomized male was used. In the third cycle (T3), ovulation was accompanied unstimulated (control). At the second phase of the study, 13 female cats were induced to successive pseudopregnancy states to check the effects on the uterus. Confirmation of ovulation in the two phases of the study was carried out by measuring progesterone serum levels. The vaginal swab stimulation showed a similar response to that obtained by natural mating (P>0.05). Some cats showed mild uterine changes without pathological relevance. Thus, ovulation induction with swab is secure and without significant side effects.

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Objetivou-se aumentar a longevidade dos espermatozoides resfriados a 5°C com uso da técnica de renovação de diluidor. Foram coletados quatro ejaculados de diferentes garanhões da raça Mangalarga Marchador que foram diluídos uma parte em Kenney e outra em BotuSêmen®. O sêmen diluído foi submetido ao resfriamento utilizando a caixa Botuflex® e depois transferido para geladeira com temperatura entre 4 e 6°C. Os parâmetros de motilidade, vigor, integridade funcional, morfologia espermática, pH, osmolaridade e glicose foram avaliados diariamente. A renovação do meio foi realizada pela substituição dos diluidores a cada 48 horas. O diluidor Kenney preservou a motilidade e vigor espermático até o 1º dia de resfriamento (P>0,05), enquanto o BotuSêmen® preservou a motilidade até o 2º dia de resfriamento e o vigor até o 3º dia de resfriamento (P>0,05), depois houve redução desses parâmetros (P0,05). O percentual de espermatozoides morfologicamente normais,o pH e a osmolaridade não variaram nas amostras diluídas em Kennney até o 5º dia de resfriamento (P>0,05), mas houve variação naquelas diluídas em BotuSêmen® (P0,05).

This experiment aimed to increase the longevity of sperm cooled to 5° C with medium exchanges. Four ejaculates from different Mangalarga Marchador stallions were collected and diluted in Kenney or BotuSemen® extender. The diluted semen was cooled using the Botuflex® box and was maintained in a temperature between 4 and 6°C in a domestic refrigerator. The motility and vigour parameters, functional integrity of sperm membrane, sperm morphology, pH, osmolarity and glucose were assessed daily. The exchange of the medium was performed by replacing the extender every 48 hours. Kenney preserved sperm motility and vigour similar until the first cooling day (P>0.05) while BotuSemen® preserved motility until the 2nd cooling day and vigour until the 3rd cooling day (P>0.05), afterthat motility and vigour decreased (P0.05). The percentage of normal morphology sperm, pH and osmolarity did not change in samples diluted in Kennney cooled until the 5th day (P>0.05) but there was differences in samples diluted in BotuSemen® (P0.05).

El objetivo de este trabajo es aumentar la longevidad de los espermatozoides enfriados a 5°C con el uso de la técnica de renovación de diluyente. Se recogieron cuatro eyaculaciones de diferentes sementales de la raza Mangalarga Marchador que fueron diluidos una parte en Kenney y otra en BotuSemen®. El semen diluido se sometió al enfriamiento utilizando el kit Botuflex® y luego se transfirió a la heladera con una temperatura entre 4 y 6°C. Los parámetros de motilidad, vigor, integridad funcional, morfología espermática, pH, osmolaridad y glucosa fueron evaluados diariamente. La renovación del medio fue realizada por sustitución de los diluyentes cada 48 horas. El diluyente Kenney preservó la motilidad y vigor espermático hasta el primer día de enfriamiento (P>0,05), mientras que el BotuSémen® preservó la motilidad hasta el 2º día Enfriamiento y el vigor hasta el 3º día de enfriamiento (P>0,05), de esta forma hubo reducción de estos parámetros (P0,05). El porcentaje de espermatozoides morfológicamente normales, el pH y la osmolalidad no variaron en las muestras diluidas en Kennney hasta el 5º día de enfriamiento (P>0,05), pero hubo variación en aquellas diluidas en BotuSemen® (P0,05).

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As preguiças-de-coleira (Bradypus torquatus) são mamíferos arborícolas da família Bradypodidae. Podem ser encontradas nos trechos de Mata Atlântica do Brasil e a maior diversidade genética de suas populações ocorre em matas do sul da Bahia. A observação desses animais na natureza é muito difícil, pois passam a maior parte da vida escondidos no denso emaranhado das copas, por isso, dados sobre aspectos reprodutivos são escassos e não existem informações sobre ciclo estral dessa espécie. Este trabalho teve por objetivo identificar as células do epitélio vaginal da preguiça-de-coleira (Bradypus torquatus) como forma de viabilizar o uso dessa técnica para estudar as fases do ciclo estral desses animais. As amostras para citologia vaginal foram obtidas de quatro preguiças de coleira que habitavam áreas de Mata Atlântica do sul da Bahia. Após captura manual do animal, procedeu-se a coleta de material biológico, introduzindo uma escova ginecológica estéril, na comissura dorsal da vulva. Para cada amostra foram feitos dois esfregaços rotacionando a extremidade da escova sobre cada lâmina de vidro, fazendo-se em geral três impressões lineares. O esfregaço foi imediatamente corado pelo método Panótico rápido (Laborclin®). Nas preguiças BT033, BT065 e BT042 foi possível identificar respectivamente 30%, 33% e 7% de células parabasais (PB); 56%, 22% e 10% de células intermediárias pequenas (IP); 6%, 18% e 6% de células intermediárias grandes (IG); 2%, 13% e 24% de células superficiais nucleadas (SN); 6%, 14% e 53% de células superficiais anucleadas (SA). Na preguiça BT464 foi possível fazer duas coletas com intervalo de 13 meses. Os dados da primeira e segunda coleta foram, respectivamente: 6% e 17,5 de células PB, 5% e 25% de células IP, 11% e 15,5% de células IG, 8% e 19,5% de células SN e 70% e 22,5% de células SA. Enfatiza-se que as porcentagens de células do epitélio vaginal variaram entre indivíduos e também na mesma preguiça. Isto sugere que a citologia vaginal possa ser uma ferramenta de avaliação do ciclo estral em preguiça-de-coleira.

Maned sloths (Bradypus torquatus) are arboreal mammals of the family Bradypodidae. They can be only found in the Atlantic coast forest of Brazil and its most genetically diverse populations occur in forests of southern Bahia. The observation of these animals in the wild is very difficult as they spend most of their lifetime hidden in the dense forest canopy. Data on their reproductive aspects are scarce, and there is none information about their estrous cycle. This research aimed at identifying the vaginal epithelial cells of maned sloths (Bradypus torquatus) as a possible way to study the phases of the estrous cycle of this animal. The samples for vaginal cytology were obtained from four free ranging maned sloths living in a protected area of coastal forest in the South of Bahia. The sterile gynecological brush was inserted up to the necessary distance to reach the pelvic channel. For each sample two smears were made by rotating the tip of the brush onto each glass slide, producing in general three linear impressions. Staining was performed using rapid Panotic Kit (Laborclin®). Maned sloths BT033, BT065, and BT042 presented, respectively, 30%, 33%, and 7% of parabasal epithelial cells (PB); 56%, 22%, and 10% of small intermediate cells (IP); 6%, 18%, and 6% of large intermediate cells (IG); 2%, 13%, and 24% of superficial epithelial cell with a nucleus (SN); 6%, 14%, and 53% of anucleated superficial epithelial cell (AS). Two cell samples were collected for maned sloth BT464 with a 13 months interval. Cytological differences were observed between the two samples (1st and 2nd): 6% and 17,5% of PB cells, 5% and 25% of IP cells, 11% and 15,5% of IG cells, 8% and 19,5% of SN cells and 70% and 22,5% of AS cells, respectively. It’s interesting to remark that the percentage of vaginal epithelial cells varied among sloths and also for the same animal. This result suggests that vaginal cytology of maned sloth can be used as a tool to evaluate of estrous cycle.

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The aim of this study was to evaluate Campolina stallions testicular measurements in relation to their age and body weight. The right and left testecal mesurements used a pair of compasses to determine length (RL, LL), width (RW, LW), height (RH, LH), and total scrotal width (STW). Twenty five stallions were evaluated and classified into three age groups: Group I ( 60 months), Group II (>60 e 120 months), and Group III (> 120 months). The biometric testicular parameters for Group I were: 10.0 ± 1.5 cm (RL); 10.1 ± 1.2 cm (LL); 5.8 ± 0.5 cm (RW); 6.2 ± 0.6 cm (LW); 6.6 ± 0.8 cm (RH); 7.0 ± 0.8 cm (LH); 10.6 ± 1.0 cm (STW). The testicular measurements for GII were: 10.9 ± 1.1 cm (RL); 10.4 ± 0.8 cm (LL); 6.5 ± 0.5 cm (RW); 6.8 ± 0.6 cm (LW); 7.5 ± 1.0 cm (RH); 7.8 ± 0.5 cm (LH); 12.0 ± 1.0 cm (STW). For GIII the same measurements were: 9.8 ± 0.8 cm (RL); 10.3 ± 0.5 cm (LL); 7.0 ± 0.8 cm (RW); 7.4 ± 0.8 cm (LW); 7.1 ± 0.7 cm (RH); 7.6 ± 1.1 cm (LH); 11.9 ± 0.8 cm (STW). The length, width and height of the left and right testis did not differ significantly from stallions measured. The average width of the testis was the only measurement that differ between stallions from group I and stallions from group II and III (P 005). Total scrotal width had medium correlation with age (r = 0.42, P 0.05), and poor correlation with body weight (r=0.34, P>0.05).

O objetivo deste trabalho foi avaliar a biometria testicular de garanhões Campolina, correlacionando-a com a idade e peso corporal do animal. Foram realizadas medidas lineares dos testículos direito e esquerdo de comprimento (CD, CE), largura (LD, LE), altura (HD, HE), e a largura escrotal total (LET). Vinte e cinco garanhões foram avaliados e divididos em três grupos etários: Grupo I ( 60 meses), Grupo II (>60 e 120 meses) e Grupo III (> 120 meses). Os parâmetros de biometria testicular no GI foram: 10,0 ± 1,5 cm (CD); 10,1 ± 1,2 cm (CE); 5,8 ± 0,5 cm (LD); 6,2 ± 0,6 cm (LE); 6,6 ± 0,8 cm (HD); 7,0 ± 0,8 cm (HE); 10,6 ± 1,0 cm (LET). As medidas do GII foram: 10,9 ± 1,1 cm (CD); 10,4 ± 0,8 cm (CE); 6,5 ± 0,5 cm (LD); 6,8 ± 0,6 cm (LE); 7,5 ± 1,0 cm (HD); 7,8 ± 0,5 cm (HE); 12,0 ± 1,0 cm (LET). No GIII foram: 9,8 ± 0,8 cm (CD); 10,3 ± 0,5 cm (CE); 7,0 ± 0,8 cm (LD); 7,4 ± 0,8 cm (LE); 7,1 ± 0,7 cm (HD); 7,6 ± 1,1 cm (HE); 11,9 ± 0,8 cm (LET). Não houve diferença entre as medidas lineares de comprimento, largura e altura, entre os testículos direito e esquerdo dos animais estudados. Das medidas testiculares lineares somente a largura testicular média no grupo I diferiu dos grupos etários II e III (P 0,05). A LET teve correlação média com a idade (r = 0,42, P 0,05) e baixa com o peso (r=0,34, P>0,05).

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The aim of this study was to evaluate the motility, kinetics and membrane integrity of ovine sperm cryopreserved in extenders containing 8% LDL with enzymatic antioxidants at different concentrations. Four Santa Inês rams were used to form four pools of semen (each pool containing ejaculates from four ram, totaling four ejaculates per animal). Each seminal pool was divided into eight aliquots for the following treatments: 1) Tris-glucose-glycerol (TGG) + (16%) egg yolk (control 1); 2) TGG + 8% (w/v) LDL (control 2); 3) TGG + 8% LDL + catalase 100 U/mL; 4) TGG + 8% LDL + catalase 200 U/mL; 5) TGG + 8% LDL + superoxide dismutase 100 U/mL; 6) TGG + 8% LDL + superoxide dismutase 200 U/mL; 7) TGG + 8% LDL + reduced glutathione 5 mM; and 8) TGG + 8% LDL + reduced glutathione 10 mM. The samples were packed into 0.25 mL straws, cooled (-0.25 C/ min), maintained at 5 C for 2 h and then frozen (-25 C/ min) using a TK4000®. Immediately after thawing (38 C/ 30 s), sperm motility and movement characteristics were assessed by computer sperm analysis (CASA). The structural integrity of the plasma and acrosomal membranes was analyzed using fluorescent dyes. The functional integrity of membranes was assessed using a hypoosmotic swelling test. As assessed by ANOVA, significant differences (P 0.05) among treatments were only observed for VCL, VSL and VAP. For the VCL variable, the 2, 3, 4...

Objetivou-se avaliar a motilidade, cinética e integridade das membranas de espermatozoides ovinos criopreservados em diluidores contendo 8% de LDL com antioxidantes enzimáticos em diferentes concentrações. Quatro carneiros da raça Santa Inês foram utilizados para formar quatro pools de sêmen (cada pool contendo ejaculados provenientes dos quatro carneiros, totalizando quatro ejaculados por animal). Cada pool de sêmen foi dividido em oito alíquotas para os seguintes tratamentos: 1) Tris-glicose-glicerol (TGG) + (16%) gema de ovo (controle 1); 2) TGG + 8% (g/L) LDL (controle 2); 3) TGG + 8% LDL + catalase 100 U/mL; 4) TGG + 8% LDL + catalase 200 U/mL; 5) TGG + 8% LDL + superóxido dismutase 100 U/mL; 6) TGG + 8% LDL + superóxido dismutase 200 U/mL; 7) TGG + 8% LDL + glutationa reduzida 5 mM; and 8) TGG + 8% LDL + glutationa reduzida 10 mM. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,25 mL, resfriadas (-0,25 C/min), mantidas a 5 C por duas horas e em seguida congeladas (-25 C/ min) usando uma máquina de congelar TK4000®. Imediatamente depois da descongelação (38 C/30 s), as amostras foram submetidas à análise computadorizada (CASA) para avaliação da motilidade e cinética. A integridade estrutural das membranas plasmática e acrossomal foi analisada utilizando corantes fluorescentes. A integridade funcional das membranas foi avaliada utilizando o teste hiposmótico. Como...

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The aim of this study was to test different concentrations of low density lipoprotein (LDL) in replacement of whole egg yolk in extenders preserved in the aqueous or lyophilized form, for ram sperm cryopreservation using two cooling curves (-40C/min from 5 to 140C and nitrogen vapor). One ejaculate from six Santa Inês rams was collected. Each ejaculate was divided into nine different diluents as follows: Tris-16% yolk (control), and Tris with 2, 4, 6 and 8% fresh LDL, and criopreserved in the aqueous or lyophilized form. The samples were diluted to a final concentration of 100 x 106 sperm/mL and filled into 0.25 ml straws. After thaw, sperm cells were evaluated for motility and sperm kinetics (CASA), and submitted to the hypoosmotic swelling test and the evaluation of the structural integrity of sperm membranes using fluorescent dyes (CFDA: PI), as well as sperm morphology and longevity. The experimental design was randomized blocks, and results were submitted to ANOVA and the averages were compared using the Scott-Knott test. There were no differences in progressive motility and functional and structural integrity of the membrane evaluated when different concentrations of aqueous or lyophilized low density lipoproteins or egg yolk were added to the extender (P>0.05). As for the velocity of sperm movement, the control medium had some kinetic scores similar to the extender containing LDL, both aqueous and lyophilized (P> 0.05). Results were similar between cooling curves. Therefore, we conclude that the media containing all concentrations of LDL, aqueous or lyophilized, were able to protect the ram sperm cells during the cryopreservation process, as whole egg yolk did.

O objetivo deste trabalho foi testar para criopreservação de sêmen ovino diferentes concentrações de lipoproteína de baixa densidade (LBD) em substituição à gema de ovo em meios diluidores, armazenados na forma aquosa e liofilizada, utilizando-se duas curvas de congelação (-40C/min de 5 à 140C ou vapor de nitrogênio). Os ejaculados de seis carneiros da raça Santa Inês foram fracionados e distribuídos em nove tratamentos, sendo o primeiro o meio controle (Tris-gema 16%) e os demais meios Tris contendo lipoproteínas de baixa densidade nas concentrações de 2, 4, 6 e 8% (v/v), criopreservados tanto na forma aquosa quanto liofilizada. As amostras foram diluídas para a concentração final de 100 x 106 espermatozoides/mL e envasadas em palhetas de 0,25 mL. Após a descongelação foram avaliadas a motilidade e cinética espermática (CASA), morfologia e longevidade espermáticas, além da integridade funcional (HOST) e estrutural (CFDA/IP) das membranas. O delineamento experimental foi blocos ao acaso e os resultados foram submetidos a ANOVA, sendo as médias comparadas pelo teste de Scott-Knott. Quanto aos parâmetros de motilidade progressiva e integridade funcional e estrutural da membrana, todos os tratamentos testados foram similares (P>0,05). Quanto às velocidades do movimento espermático, o meio controle obteve alguns valores similares aos meios contendo LBD, tanto na forma aquosa quanto liofilizada (P>0,05). Não houve diferenças entre curvas de congelação. Dessa forma, é possível concluir que os meios contendo todas as concentrações de LBD, aquosa ou liofilizada, foram igualmente capazes de proteger as células espermáticas de ovinos, durante o processo de criopreservação, tanto quanto o meio contendo gema de ovo total.