Effects of renal denervation on endogenous ouabain in spontaneously hypertensive rats

Purpose: To investigate the role of renal denervation (RDN) on endogenous ouabain (EO) secretion in spontaneously hypertensive rats (SHR). Methods: Sixteen 12-week-old male SHR were randomly separated into the renal denervation group (RDNX group) and sham operation group (sham group), and eight age-matched Wistar Kyoto rats (WKY) were served as control group. EO concentrations, the Na+- K+-ATPaseactivity, and the expression of Na+-K+-ATPase were assessed. Results: EO levels in serum, kidneys and hypothalamus of sham group were higher than in RDNX group (p < 0.05). Renal Na+-K+-ATPase activity subjected to denervation surgery showed significantly reduction when compared with the sham groups (p < 0.05). A positive correlation existed between norepinephrine (NE) content and Na+-K+-ATPase activity in the kidney (r2 = 0.579). Renal Na+-K+-ATPase α1 subunit mRNA expression was down-regulated in the RDNX group compared with the sham group (P < 0.05), while renal Na+-K+-ATPase α1 subunit mRNA expression was no statistical significance between the groups (P = 0.63). Immunohistochemical analysis showed that there were significant differences in the renal expression of Na+-K+-ATPasebetween the three groups (P < 0.05). Conclusions: These experiments demonstrate that RDN exerted an anti-hypertensive effect with reduction of EO levels and Na+-K+-ATPase activity and Na+-K+-ATPase α1 subunit expression of kidney in SHR.

Isoquinolone alkaloids mitigate microscopic digestive tract lesions induced by sub-acute ruminal acidosis (SARA) in feedlot cattle / Alcaloides isoquinolínicos atenuam lesões microscópicas digestivas induzidas por acidose ruminal subaguda em bovinos confinados

Feedlot cattle is submitted to a diet rich in energy and reduced in fibres that induces the sub-acute ruminal acidosis (SARA) with its lesions and clinical signs. Recent studies have demonstrated some amelioration of this condition by the use of isoquinolone alkaloids found in Macleaya cordata (Papaveraceae) such as Sanguinarine and Chelerythrine. These compounds have demonstrated antimicrobial, antiinflammatory and immune-modulatory effects in both humans and animals The aim on this study, using histopathology and a score system, was to evaluate the differences between a non-treated and a treated group feed with these alkaloids, present in trade preparation Sangrovit-RS® as a source of sanguinarine (SG), chelerythrine (CH) and protropine (PA) standardized to 0.15% w/w SG, using feedlot cattle under a high-grain diet as an inflammatory model for gastrointestinal system. The samples of forestomachs were evaluated and graded using scores ranging from zero (0) to three (3) obtained at light-microscopic fields of 400X. Parameters such as inflammation, hydropic degeneration, hyperkeratosis, and vesicle formation were accessed in the different layers of the tissues, considering the severity and dispersion of the microscopic lesions. The soft tissues such as the abomasum, small intestine, cecum and colon had their total amount of inflammatory cells counted at light-microscopic fields of 200X. The rumen of the SG-CH-PRO-treated group showed a significant reduction in the epithelial hydropic degeneration scores (p ≤ 0.001) and lamina propria inflammation (p ≤ 0.001).The reticulum had a similar reduction in scores of epithelial (p ≤ 0.002) and stratum corneum hydropic degeneration (p ≤ 0.001), hyperkeratosis (p ≤ 0.002) and inflammation in lamina propria (p ≤ 0.001) and epithelium (p ≤ 0.002). The omasum had no significant differences. All non-keratinized tissues, except for ileum, had a significant decrease (p ≤ 0.001) in the total counting of inflammatory cells. In this trial, the feedlot cattle feed with high grain diet and treated with isoquinolone alkaloids expressed lesions that indicate ameliorations and worsening's. Ameliorating effects of the alkaloids were better demonstrated in tissues with reduced or no corneal layer in the mucosa and in the absence of a lipopolysaccharides rich acidic environment reinforcing the notion of the topic action, the dependence of the media pH and the time of exposure modulating the pharmacological mechanisms of these alkaloids. The observed cytolytic (oncolysis) effect in epithelial forestomachs cells under low pH values, worsening the osmotic status, should be considered before clinical applications.(AU)

As dietas para bovinos confinados possuem alta quantidade de alimentos energéticos com menor quantidade de alimentos volumosos (fibras), favorecendo a indução de acidose ruminal subaguda com formação de lesões gastrointestinais e sintomas clínicos deletérios. Recentes trabalhos têm demonstrado alguma amenização desta condição pelo uso de alcaloides isoquinolínicos encontrados na Macleaya cordata (Papaveraceae) tais como a sanguinarina e a cheleretrina, os quais tem demonstrado efeitos anti-inflamatórios, antimicrobianos e imuno modulatórios em humanos e animais. O objetivo deste estudo foi, através da histopatologia e de um sistema de escores, avaliar as diferenças entre um grupo não tratado e um grupo tratado com alcaloides isoquinolínicos, presentes na formulação Sangrovit RS® como fonte de sanguinarina (SG), chelerethrina (CH) and protropina (PA) padronizadas em 0,15 % w/w SG, usando bovinos em confinamento recebendo uma dieta rica em grãos como modelo inflamatório para o sistema gastrointestinal. Amostras dos pré-estômagos foram avaliadas por escores variando de zero a três, obtidos por microscopia de luz em diferentes campos em aumentos de 400X. Inflamação, degeneração hidrópica, hiperqueratose e formação de vesículas foram avaliadas nas diferentes camadas dos pré-estômagos tendo em vista a intensidade e a extensão das lesões. Tecidos não queratinizados como abomaso e intestino delgado, ceco e cólon tiveram seu total de células inflamatórias contadas por microscopia de luz em diferentes campos com aumentos de 200X. No rumem do grupo tratado houve uma redução significante no número de campos contendo degeneração hidrópica epitelial (p ≤ 0,001) e inflamação de lâmina própria (p ≤ 0,001). O retículo teve uma redução similar nos escores scores de degeneração hidrópica epitelial (p ≤ 0.002), degeneração hidrópica no estrato córneo (p ≤ 0.001), hiperqueratose (p ≤ 0.002) e inflamação na lamina própria (p ≤ 0.001) e inflamação epitelial (p ≤ 0.002). Não foram encontradas diferenças significantes no omaso. Todos os tecidos não queratinizados, exceto pelo íleo, tiveram uma redução significativa (p ≤ 0.001) no total de células inflamatórias. Neste experimento, bovinos em confinamento recebendo dieta rica em grãos e tratados com alcaloides isoquinolínicos tiveram lesões que tiveram melhoras e pioras. Os efeitos de melhora foram melhor demonstrados em tecidos sem camada córnea e na ausência de um meio ácido rico em lipopolisacarídeos, reforçando a noção da ação tópica, da dependência do pH do meio e do tempo de exposição modulando os mecanismos farmacológicos destes alcalóides. O efeito citolítico (oncólise) sobre células epiteliais de pré-estômagos em baixos valores de pH, piorando o estado osmótico das células, deveria ser considerado antes das aplicações clínicas.(AU)

Genetic characterization of tambaqui stocks from two pisciculture stations in the lower São Francisco River / Caracterização genética de estoques de tambaqui de duas estações de piscicultura no baixo rio São Francisco

Pisciculture has been an important part of the economy in many regions of Brazil, and the tambaqui (Colossoma macropomum) stands out as one of the country's most commercialized native freshwater fish species. Loss of genetic variability can affect characteristics such as reproduction and growth rates, as well as disease resistance and is of great concern in this field. Molecular markers such as mitochondrial DNA genes have been increasingly used to understand genetic variability in species of economic importance. This study aimed to characterize the genetic variability of tambaqui populations reared in two fish farms (Itiúba, AL and Betume, SE) of the lower São Francisco River by analyzing the control region and ATPase genes of mitochondrial DNA. Sequencing of samples from progenies and breeding individuals identified 42 haplotypes (32 unique), of which four haplotypes were shared between the two fish farms as a result of a founder effect, because individuals from Itiúba formed the stock of the Betume fish farming Station. Haplotype diversity was high in both locations. Analysis of Molecular Variance (AMOVA) revealed greater genetic variation within populations (96.76%) than between them (3.24%) and the FST value (0.03) indicated low genetic differentiation between the two populations. The observed high genetic variability can be explained by the number of breeders in the two fish farms (200 in Itiúba and 1400 in Betume) and the breeding management system, which seems to be effective in maintaining stock variability.

A piscicultura tem ocupado um lugar de destaque na economia de muitas regiões do Brasil, e o tambaqui (Colossoma macropomum) se sobressai por ser uma das espécies nativas de peixes de água doce mais comercializadas do país. A diminuição da variabilidade genética pode afetar características como as taxas de reprodução e crescimento, bem como resistência a doenças e é de grande preocupação nesse ramo. Marcadores moleculares, como os genes do DNA mitocondrial, vem sendo cada vez mais utilizados para investigar a variabilidade genética em espécies de importância econômica. Assim, este estudo teve como objetivo caracterizar a variabilidade genética de populações de tambaqui cultivados em duas pisciculturas (Itiúba, AL e Betume, SE) do baixo Rio São Francisco, utilizando a região controle e os genes da ATPase do DNA mitocondrial. O sequenciamento de amostras de progênies e reprodutores identificou 42 haplótipos (32 únicos). Destes, quatro haplótipos foram compartilhados entre as duas pisciculturas estudadas, o que é resultado de um efeito fundador, uma vez que indivíduos de Itiúba foram levados para compor o estoque da Estação de Piscicultura de Betume. A diversidade haplotípica foi alta em ambas as localidades. Análise de Variância Molecular (AMOVA) demonstrou maior variação genética dentro das populações (96.76%) do que entre elas (3.24%) e o valor de Fst (0.03) indicou pouca diferenciação genética entre as duas populações analisadas. A alta variabilidade genética encontrada pode ser explicada pelo número de reprodutores nas duas pisciculturas (200 em Itiúba e 1400 em Betume) e o manejo reprodutivo, que parece ser eficaz na manutenção da variabilidade de estoques.

Genetic characterization of tambaqui stocks from two pisciculture stations in the lower São Francisco River / Caracterização genética de estoques de tambaqui de duas estações de piscicultura no baixo rio São Francisco

Pisciculture has been an important part of the economy in many regions of Brazil, and the tambaqui (Colossoma macropomum) stands out as one of the country's most commercialized native freshwater fish species. Loss of genetic variability can affect characteristics such as reproduction and growth rates, as well as disease resistance and is of great concern in this field. Molecular markers such as mitochondrial DNA genes have been increasingly used to understand genetic variability in species of economic importance. This study aimed to characterize the genetic variability of tambaqui populations reared in two fish farms (Itiúba, AL and Betume, SE) of the lower São Francisco River by analyzing the control region and ATPase genes of mitochondrial DNA. Sequencing of samples from progenies and breeding individuals identified 42 haplotypes (32 unique), of which four haplotypes were shared between the two fish farms as a result of a founder effect, because individuals from Itiúba formed the stock of the Betume fish farming Station. Haplotype diversity was high in both locations. Analysis of Molecular Variance (AMOVA) revealed greater genetic variation within populations (96.76%) than between them (3.24%) and the FST value (0.03) indicated low genetic differentiation between the two populations. The observed high genetic variability can be explained by the number of breeders in the two fish farms (200 in Itiúba and 1400 in Betume) and the breeding management system, which seems to be effective in maintaining stock variability.(AU)

A piscicultura tem ocupado um lugar de destaque na economia de muitas regiões do Brasil, e o tambaqui (Colossoma macropomum) se sobressai por ser uma das espécies nativas de peixes de água doce mais comercializadas do país. A diminuição da variabilidade genética pode afetar características como as taxas de reprodução e crescimento, bem como resistência a doenças e é de grande preocupação nesse ramo. Marcadores moleculares, como os genes do DNA mitocondrial, vem sendo cada vez mais utilizados para investigar a variabilidade genética em espécies de importância econômica. Assim, este estudo teve como objetivo caracterizar a variabilidade genética de populações de tambaqui cultivados em duas pisciculturas (Itiúba, AL e Betume, SE) do baixo Rio São Francisco, utilizando a região controle e os genes da ATPase do DNA mitocondrial. O sequenciamento de amostras de progênies e reprodutores identificou 42 haplótipos (32 únicos). Destes, quatro haplótipos foram compartilhados entre as duas pisciculturas estudadas, o que é resultado de um efeito fundador, uma vez que indivíduos de Itiúba foram levados para compor o estoque da Estação de Piscicultura de Betume. A diversidade haplotípica foi alta em ambas as localidades. Análise de Variância Molecular (AMOVA) demonstrou maior variação genética dentro das populações (96.76%) do que entre elas (3.24%) e o valor de Fst (0.03) indicou pouca diferenciação genética entre as duas populações analisadas. A alta variabilidade genética encontrada pode ser explicada pelo número de reprodutores nas duas pisciculturas (200 em Itiúba e 1400 em Betume) e o manejo reprodutivo, que parece ser eficaz na manutenção da variabilidade de estoques.(AU)

Assessing the growth of Arctic Charr (Salvelinus alpinus) (Linnaeus, 1758) in four salinities, under experimental conditions / Avaliando o crescimento do Charr Ártico (Salvelinus alpinus) (Linnaeus, 1758) em quatro salinidades, sob condições experimentais

Studies in Salvelinus alpinus, Arctic charr, indicate that it has a low capacity to hyposmorregulatory or adaption to sea in winter periods in Arctic waters. The investigation finds to determinate the rank optimum of salinity to can cultivate this species at Chile. The weight adequate was determined to join on the sea by analysis of gill Na+, K+-ATPase activity, that it was found between the ranks 80-130 g, with 14.5 U/mg. It underwent evaluation of fish growth of 72 g salinities from 0 (control), 18, 25 and 33 g/L (sea water) for 94 days. The results indicate that the largest increases were obtained in brackish water. T18 g/L and T25 g/L achieved growth of 25% and 19% on day 94 and term sampling respectively. It is important to mention that the 8% that survived in seawater introduced percentages growth 16.6% equivalent to brackish water and control. These results suggest that Salvelinus alpinus can grow in seawater, with levels of Na+, K+-ATPase similar to those submitted by Salmo salar with a weight not less than 80 g.(AU)

Estudos em Salvelinus alpinus, Charr Ártico, indicam que tem baixa capacidade de hiposmorregulação ou adaptação ao mar em períodos de inverno nas águas do Ártico. A investigação determina o melhor nível de salinidade para cultivar esta espécie no Chile. Determinou-se o peso adequado para se unir ao mar pela análise da atividade da Na +, K + -ATPase das brânquias, que foi encontrada entre as faixas de 80 a 130 g, com 14,5 U/mg. Foi avaliado o crescimento de 72 g salinidades de 0 (controle), 18, 25 e 33 g/L (água do mar) por 94 dias. Os resultados indicam que os maiores aumentos foram obtidos em água salobra. T18 g/L e T25 g/L alcançaram crescimento de 25% e 19% no dia 94 e amostragem a termo, respectivamente. É importante mencionar que os 8% que sobreviveram na água do mar apresentaram percentuais de crescimento de 16,6% equivalentes a água salobra e controle. Estes resultados sugerem que o Salvelinus alpinus pode crescer em água do mar, com níveis de Na +, K + -ATPase semelhantes aos apresentados por Salmo salar com um peso não inferior a 80 g.(AU)

Water pH and hardness alter ATPases and oxidative stress in the gills and kidney of pacu ( Piaractus mesopotamicus )

This study aimed to assess the effects of low and high water hardness in interaction with different water pH in pacu (Piaractus mesopotamicus). Pacu juveniles were subjected to low (50 mg CaCO3 L-1 - LWH) or high water hardness (120 mg CaCO3 L-1 - HWH) at water pH of 5.5 (acidic), 7.5 (circumneutral) or 9.0 (alkaline) for 15 days. Gills and kidneys were collected (days 1, 5 and 15). Gill Na+/K+-ATPase (NKA) and vacuolar-type H+-ATPase (V-ATPase) activities were higher in alkaline pH with HWH on day 1. Gill and kidney NKA and V-ATPase activities were higher in acidic pH with LWH on day 15. Gill NKA activity of pacus under alkaline pH with LWH was higher than those exposed to HWH. Reduced antioxidant capacity in the gills and kidney and enhanced thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) levels were demonstrated in fish exposed to acidic or alkaline pH, mainly with LWH. HWH increased glutathione-S-transferase (GST) activity and reduced TBARS levels in the gills and kidney. On day 15, GST activity was increased at acidic pH with LWH. In conclusion, circumneutral pH presents less oxidative stress and fewer variations in ATPases and HWH reduced deleterious effects in fish exposed to acidic or alkaline pH.(AU)

Este estudo objetivou analisar o efeito de baixa e alta dureza da água em interação com diferentes pH da água em pacu (Piaractus mesopotamicus). Juvenis de pacu foram submetidos a baixa (50 mg CaCO3 L-1 - BDA) ou alta dureza da água (120 mg CaCO3 L-1 - ADA) em pH da água de 5.5 ácido), 7.5 (circum-neutro) ou 9.0 (alcalino) por 15 dias. Foram coletados brânquias e rim (dias 1, 5 e 15). Atividade de Na+/K+-ATPase (NKA) e H+-ATPase do tipo vacuolar (V-ATPase) branquial foram maiores em pH alcalino com ADA no dia 1. Atividade de NKA e V-ATPase branquial e renal foram maiores em pH ácido com BDA no dia 15. Atividade de NKA branquial de pacus submetidos a pH alcalino com BDA foi maior que aqueles expostos para ADA. Em peixes expostos a pH ácido ou alcalino com BDA houve redução da capacidade antioxidante nas brânquias e rim e aumento dos níveis de "substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico" (TBARS). Em ADA aumentou a atividade da "glutationa-S-transferase" (GST) e reduziu níveis de TBARS nas brânquias e rim. No dia 15, a atividade da GST foi maior em pH ácido com BDA. Em conclusão, pH circum-neutro apresentou menor estresse oxidativo e poucas variações na atividade de ATPases e ADA reduziu efeitos deletérios em peixes expostos a pH ácido ou alcalino.(AU)

Water pH and hardness alter ATPases and oxidative stress in the gills and kidney of pacu ( Piaractus mesopotamicus )

This study aimed to assess the effects of low and high water hardness in interaction with different water pH in pacu (Piaractus mesopotamicus). Pacu juveniles were subjected to low (50 mg CaCO3 L-1 - LWH) or high water hardness (120 mg CaCO3 L-1 - HWH) at water pH of 5.5 (acidic), 7.5 (circumneutral) or 9.0 (alkaline) for 15 days. Gills and kidneys were collected (days 1, 5 and 15). Gill Na+/K+-ATPase (NKA) and vacuolar-type H+-ATPase (V-ATPase) activities were higher in alkaline pH with HWH on day 1. Gill and kidney NKA and V-ATPase activities were higher in acidic pH with LWH on day 15. Gill NKA activity of pacus under alkaline pH with LWH was higher than those exposed to HWH. Reduced antioxidant capacity in the gills and kidney and enhanced thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) levels were demonstrated in fish exposed to acidic or alkaline pH, mainly with LWH. HWH increased glutathione-S-transferase (GST) activity and reduced TBARS levels in the gills and kidney. On day 15, GST activity was increased at acidic pH with LWH. In conclusion, circumneutral pH presents less oxidative stress and fewer variations in ATPases and HWH reduced deleterious effects in fish exposed to acidic or alkaline pH.(AU)

Este estudo objetivou analisar o efeito de baixa e alta dureza da água em interação com diferentes pH da água em pacu (Piaractus mesopotamicus). Juvenis de pacu foram submetidos a baixa (50 mg CaCO3 L-1 - BDA) ou alta dureza da água (120 mg CaCO3 L-1 - ADA) em pH da água de 5.5 ácido), 7.5 (circum-neutro) ou 9.0 (alcalino) por 15 dias. Foram coletados brânquias e rim (dias 1, 5 e 15). Atividade de Na+/K+-ATPase (NKA) e H+-ATPase do tipo vacuolar (V-ATPase) branquial foram maiores em pH alcalino com ADA no dia 1. Atividade de NKA e V-ATPase branquial e renal foram maiores em pH ácido com BDA no dia 15. Atividade de NKA branquial de pacus submetidos a pH alcalino com BDA foi maior que aqueles expostos para ADA. Em peixes expostos a pH ácido ou alcalino com BDA houve redução da capacidade antioxidante nas brânquias e rim e aumento dos níveis de "substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico" (TBARS). Em ADA aumentou a atividade da "glutationa-S-transferase" (GST) e reduziu níveis de TBARS nas brânquias e rim. No dia 15, a atividade da GST foi maior em pH ácido com BDA. Em conclusão, pH circum-neutro apresentou menor estresse oxidativo e poucas variações na atividade de ATPases e ADA reduziu efeitos deletérios em peixes expostos a pH ácido ou alcalino.(AU)

Assessing the growth of Arctic charr (Salvelinus alpinus) (Linnaeus, 1758) in four salinities, under experimental conditions

Abstract Studies in Salvelinus alpinus, Arctic charr, indicate that it has a low capacity to hyposmorregulatory or adaption to sea in winter periods in Arctic waters. The investigation finds to determinate the rank optimum of salinity to can cultivate this species at Chile. The weight adequate was determined to join on the sea by analysis of gill Na+, K+-ATPase activity, that it was found between the ranks 80-130 g, with 14.5 U/mg. It underwent evaluation of fish growth of 72 g salinities from 0 (control), 18, 25 and 33 g/L (sea water) for 94 days. The results indicate that the largest increases were obtained in brackish water. T18 g/L and T25 g/L achieved growth of 25% and 19% on day 94 and term sampling respectively. It is important to mention that the 8% that survived in seawater introduced percentages growth 16.6% equivalent to brackish water and control. These results suggest that Salvelinus alpinus can grow in seawater, with levels of Na+, K+-ATPase similar to those submitted by Salmo salar with a weight not less than 80 g.

Resumo Estudos em Salvelinus alpinus, Charr Ártico, indicam que tem baixa capacidade de hiposmorregulação ou adaptação ao mar em períodos de inverno nas águas do Ártico. A investigação determina o melhor nível de salinidade para cultivar esta espécie no Chile. Determinou-se o peso adequado para se unir ao mar pela análise da atividade da Na +, K + -ATPase das brânquias, que foi encontrada entre as faixas de 80 a 130 g, com 14,5 U/mg. Foi avaliado o crescimento de 72 g salinidades de 0 (controle), 18, 25 e 33 g/L (água do mar) por 94 dias. Os resultados indicam que os maiores aumentos foram obtidos em água salobra. T18 g/L e T25 g/L alcançaram crescimento de 25% e 19% no dia 94 e amostragem a termo, respectivamente. É importante mencionar que os 8% que sobreviveram na água do mar apresentaram percentuais de crescimento de 16,6% equivalentes a água salobra e controle. Estes resultados sugerem que o Salvelinus alpinus pode crescer em água do mar, com níveis de Na +, K + -ATPase semelhantes aos apresentados por Salmo salar com um peso não inferior a 80 g.

Na/K-ATPase and Regulation of Sperm Function

A standard bull breeding soundness evaluation (BBSE) identifies bulls with semen that is grossly abnormal. Nonetheless, semen samples classified as satisfactory based on these traditional approaches differ in fertility; perhaps there are submicroscopic differences in sperm characteristics affecting fertility. Therefore, a better understanding of molecular regulation of sperm function could promote development of novel, evidence-based approaches to predict male fertility. Recently the α4 isoform of Na/K-ATPase (ATP1A4) has received considerable attention, due to its testisspecific expression in post-meiotic germ cells and mature sperm, in addition to its regulation of sperm motility and capacitation. Using fresh bull sperm, we determined that ATP1A4 resided in specialized microdomains (raft and non-raft) of the sperm plasma membrane and activated specific signaling (caveolin-1, EGFR, Src, ERK1/2) molecules during sperm capacitation. Furthermore, ATP1A4 was the predominant isoform responsible for total Na/K-ATPase activity in capacitated sperm. Despite the widely accepted dogma of transcriptional/translational quiescence, bovine sperm translated ATP1A4 mRNA on mitochondrial or mitochondrial-type ribosomes, increasing their content and activity during capacitation. Proteomic analysis of raft and non-raft fractions revealed a significant interaction between ATP1A4 and plakoglobin, a member of the β-catenin family of proteins involved in cell adhesion, in the equatorial segment of capacitated sperm, suggesting a potential role in sperm-oolemma fusion. In frozen-thawed sperm, ATP1A4 content and activity was greater in high- versus low-fertility bulls. Additionally, ATP1A4-induced increases in ROS, calcium, actin polymerization and tyrosine phosphorylation were also involved in regulating post-thaw sperm function in these bulls. Overall, results demonstrated that ATP1A4 had unique roles in controlling several aspects of sperm physiology, acting through well-established enzyme activity and signaling functions. Consequently, isoforms of Na/K-ATPase are potential biomarkers for male fertility.

Na/K-ATPase and Regulation of Sperm Function

A standard bull breeding soundness evaluation (BBSE) identifies bulls with semen that is grossly abnormal. Nonetheless, semen samples classified as satisfactory based on these traditional approaches differ in fertility; perhaps there are submicroscopic differences in sperm characteristics affecting fertility. Therefore, a better understanding of molecular regulation of sperm function could promote development of novel, evidence-based approaches to predict male fertility. Recently the α4 isoform of Na/K-ATPase (ATP1A4) has received considerable attention, due to its testisspecific expression in post-meiotic germ cells and mature sperm, in addition to its regulation of sperm motility and capacitation. Using fresh bull sperm, we determined that ATP1A4 resided in specialized microdomains (raft and non-raft) of the sperm plasma membrane and activated specific signaling (caveolin-1, EGFR, Src, ERK1/2) molecules during sperm capacitation. Furthermore, ATP1A4 was the predominant isoform responsible for total Na/K-ATPase activity in capacitated sperm. Despite the widely accepted dogma of transcriptional/translational quiescence, bovine sperm translated ATP1A4 mRNA on mitochondrial or mitochondrial-type ribosomes, increasing their content and activity during capacitation. Proteomic analysis of raft and non-raft fractions revealed a significant interaction between ATP1A4 and plakoglobin, a member of the β-catenin family of proteins involved in cell adhesion, in the equatorial segment of capacitated sperm, suggesting a potential role in sperm-oolemma fusion. In frozen-thawed sperm, ATP1A4 content and activity was greater in high- versus low-fertility bulls. Additionally, ATP1A4-induced increases in ROS, calcium, actin polymerization and tyrosine phosphorylation were also involved in regulating post-thaw sperm function in these bulls. Overall, results demonstrated that ATP1A4 had unique roles in controlling several aspects of sperm physiology, acting through well-established enzyme activity and signaling functions. Consequently, isoforms of Na/K-ATPase are potential biomarkers for male fertility.(AU)

Assessing the growth of Arctic charr (Salvelinus alpinus) (Linnaeus, 1758) in four salinities, under experimental conditions

Abstract Studies in Salvelinus alpinus, Arctic charr, indicate that it has a low capacity to hyposmorregulatory or adaption to sea in winter periods in Arctic waters. The investigation finds to determinate the rank optimum of salinity to can cultivate this species at Chile. The weight adequate was determined to join on the sea by analysis of gill Na+, K+-ATPase activity, that it was found between the ranks 80-130 g, with 14.5 U/mg. It underwent evaluation of fish growth of 72 g salinities from 0 (control), 18, 25 and 33 g/L (sea water) for 94 days. The results indicate that the largest increases were obtained in brackish water. T18 g/L and T25 g/L achieved growth of 25% and 19% on day 94 and term sampling respectively. It is important to mention that the 8% that survived in seawater introduced percentages growth 16.6% equivalent to brackish water and control. These results suggest that Salvelinus alpinus can grow in seawater, with levels of Na+, K+-ATPase similar to those submitted by Salmo salar with a weight not less than 80 g.

Resumo Estudos em Salvelinus alpinus, Charr Ártico, indicam que tem baixa capacidade de hiposmorregulação ou adaptação ao mar em períodos de inverno nas águas do Ártico. A investigação determina o melhor nível de salinidade para cultivar esta espécie no Chile. Determinou-se o peso adequado para se unir ao mar pela análise da atividade da Na +, K + -ATPase das brânquias, que foi encontrada entre as faixas de 80 a 130 g, com 14,5 U/mg. Foi avaliado o crescimento de 72 g salinidades de 0 (controle), 18, 25 e 33 g/L (água do mar) por 94 dias. Os resultados indicam que os maiores aumentos foram obtidos em água salobra. T18 g/L e T25 g/L alcançaram crescimento de 25% e 19% no dia 94 e amostragem a termo, respectivamente. É importante mencionar que os 8% que sobreviveram na água do mar apresentaram percentuais de crescimento de 16,6% equivalentes a água salobra e controle. Estes resultados sugerem que o Salvelinus alpinus pode crescer em água do mar, com níveis de Na +, K + -ATPase semelhantes aos apresentados por Salmo salar com um peso não inferior a 80 g.

Tolerance of piava juveniles to different ammonia concentrations / Tolerância de juvenis de piava para diferentes concentrações de amônia na água

The objective of this study was to evaluate the tolerance of piavas (Leporinus obtusidens) to ammonia (NH3) by measuring its effects on plasma ion levels and tissue metabolic parameters. Piava juveniles (25-30 g) were exposed to five concentrations of NH3 (mg L-1): 0.003 (control), 0.1, 0.4, 0.7, and 1.4; after 96 hours, plasma levels of Na+, K+, Cl- and NH4+ ions and metabolic and enzyme activity in tissues (liver, kidneys, gills and muscle) were measured. The lethal concentration (LC50; 96h) of NH3 was 0.27 mg L-1. As NH3 increased, Na+ and NH4+ in the plasma increased and K+ decreased. In addition, Na+/K+- ATPase activity concomitantly increased in the gills and decreased in the kidneys. Glucose, glycogen, and protein levels decreased, while lactate and ammonia increased in the tissues of piava juveniles that were treated with higher concentrations of ammonia. The observed lethal toxicity could be due to a gradual depletion of plasma ion levels and a reduction of metabolic and Na+/K+-ATPase activity in tissues. Both can lead to dysfunction in ionoregulatory and physiological systems. This finding has implications for the management of fish culture of piavas.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a tolerância de piava (Leporinus obtusidens) a diferentes concentrações de amônia da água e os efeitos sobre seus íons plasmáticos e parâmetros metabólicos. Juvenis de piava (25-30 g) foram expostos a diferentes concentrações de amônia da água (mg/L NH3): 0,003 (controle); 0,1; 0,4; 0,7 e 1,4, por 96 horas. Foram analisados níveis de Na+, K+, Cl-e NH4+ no plasma e metabolismo e atividade enzimática nos tecidos (fígado, rim, brânquias e músculo). A concentração letal (LC50; 96h) foi de 0,27 mg/L de NH3, e os níveis plasmáticos de Na+e NH4+aumentaram, enquanto os níveis de K+diminuíram com o aumento das concentrações de NH3 na água. A atividade de Na+/K+-ATPase aumentou nas brânquias e diminuiu nos rins com o aumento das concentrações de NH3 na água. Níveis de glicose, glicogênio e proteína (exceto no músculo) também reduziram, mas níveis de lactato aumentaram nos tecidos dos juvenis expostos as maiores concentrações de NH3 na água. A toxicidade letal observada poderia ser devido a depleção gradual de íons no plasma, a redução do metabolismo e a atividade nos tecidos de Na+/K+-ATPase. O aumento das concentrações de amônia na água leva ao acúmulo de amônia no plasma e nos tecidos, o que reduz o gradiente de difusão plasma-água de NH3 e induz alterações metabólicas e ionoregulatórias nas piavas, o que tem implicações para o manejo de piavas.(AU)

Effect of salinity on survival, growth and biochemical parameters in juvenile Lebranch mullet Mugil liza (Perciformes: Mugilidae)

Teleost fish growth may be improved under isosmotic condition. Growth and metabolic performance of juvenile Mugil liza (isosmotic point: 12‰) were evaluated after 40 days in different salinities (0, 6, 12 and 24‰). Tests were performed in quadruplicate (30 fish/tank; 0.48 ± 0.1 g body weight; 3.27 ± 0.1 cm total length) under controlled water temperature (28.2 ± 0.1ºC) and oxygen content (>90% saturation). Fish were fed on artificial diet (50% crude protein) four times a day until apparent satiation. Results showed that salinity influenced juvenile mullet growth. Fish reared at salinity 24‰ grew better than those maintained in freshwater (salinity 0‰). Gill Na+,K+-ATPase activity and whole body oxygen consumption showed an U-shape-type response over the range of salinities tested, with the lower values being observed at the intermediate salinities. Although no significant difference was observed in liver glycogen content at different salinities, it tended to augment with increasing salinity. These findings indicate that energy demand for osmorregulation in juvenile M. liza can be minimized under isosmotic condition. However, the amount of energy spared is not enough to improve fish growth. Results also suggest that M. liza is able to alternate between different energy-rich substrates during acclimation to environmental salinity.(AU)

O crescimento de peixes teleósteos pode ser melhorado em condição isosmótica. O crescimento e o desempenho metabólico de juvenis da tainha Mugil liza (ponto isosmótico: salinidade de 12‰) foram avaliados após 40 dias de cultivo em diferentes salinidades (0, 6, 12 e 24‰). Os testes foram realizados em 4 réplicas (30 peixes/tanque; 0,48 ± 0,1 g de peso corporal; 3,27 ± 0,1 cm de comprimento total) em condições controladas de temperatura (28,2 ± 0,1ºC) e conteúdo de oxigênio (>90% saturação). Os peixes foram alimentados quatro vezes ao dia com dieta artificial (50% de proteína bruta) até a saciedade aparente. Os resultados mostraram que a salinidade influenciou o crescimento dos juvenis da tainha. Os peixes cultivados na salinidade 24‰ cresceram melhor que aqueles mantidos na água doce (salinidade 0‰). A atividade da Na+,K+-ATPase branquial e o consumo corporal de oxigênio mostraram uma resposta do tipo em forma de U, na faixa de salinidade testada, com os menores valores sendo observados nas salinidades intermediárias. Apesar de não ter sido observada diferença significativa no conteúdo de glicogênio entre os peixes mantidos nas diferentes salinidades, este parâmetro tendeu a aumentar com o incremento da salinidade. Estes achados indicam que a demanda energética para osmorregulação em juvenis de M. liza podem ser minimizados em condição isosmótica. Entretanto, a quantidade de energia poupada não é suficiente para melhorar o crescimento. Os resultados também sugerem que M. liza é capaz de alternar entre diferentes substratos ricos em energia durante a aclimatação à salinidade da água.(AU)

Acclimation of juvenile Mugil liza Valenciennes, 1836 (Mugiliformes: Mugilidae) to different environmental salinities

Survival and physiological parameters associated with metabolism and osmoregulation were evaluated in juveniles of the Lebranche mullet Mugil liza acclimated to different water salinities (5, 10, 20, 30, and 40‰) for 15 days. Room temperature (25ºC) and photoperiod (12L:12D) were fixed. Fish were fed twice-a-day with commercial diet (28% crude protein) until satiation. After acclimation, whole body oxygen consumption was measured and fish were euthanized and sampled for blood, gills, and liver. Whole body oxygen consumption and plasma osmolality did not change in the range of salinities tested. The isosmotic point was estimated as 412.7 mOsmol kg-1 (13.5‰). Gill Na+,K+-ATPase activity tended to be lower at 20 and 30‰, while liver glycogen content was significantly higher at 20‰ than at 5 and 40‰. These results indicate that juvenile M. lizais able to acclimate for a short-period of time (15 days) to a wide range of salinities (5-40‰). This condition is achieved through adjustments in gill Na+,K+-ATPase activity and carbohydrate metabolism to regulate plasma osmolality and aerobic/energy metabolism. Therefore, our findings support the idea of catching juveniles M. lizain sea water and rear them in estuarine and marine waters.(AU)

A sobrevivência e parâmetros fisiológicos associados ao metabolismo e a osmorregulação foram avaliados em juvenis da tainha Mugil lizaaclimatada à diferentes salinidades (5, 10, 20, 30 e 40‰) por 15 dias. Foram fixadas a temperatura (25ºC) e o fotoperíodo (12L:12D) da sala onde os experimentos foram realizados. Os peixes foram alimentados duas vezes ao dia com ração comercial (28% de proteína bruta) até a saciedade. Após aclimatação, foi medido o consumo corporal de oxigênio e os peixes foram eutanasiados e foram coletadas amostras de sangue, brânquias e fígado. O consumo corporal de oxigênio e a osmolalidade plasmática não variaram na faixa de salinidade testada. O ponto isosmótico foi estimado em 412,7 mOsmol kg-1 (13,5‰). A atividade da Na+,K+-ATPase branquial tendeu a ser menor em 20 e 30‰, enquanto o conteúdo de glicogênio hepático foi significativamente maior em 20‰ do que em 5 e 40‰. Estes resultados indicam que o juvenil de M. liza é capaz de se aclimatar a uma ampla faixa de salinidade (5-40‰) por um curto período de tempo (15 dias). Esta condição é atingida através de ajustes na atividade da Na+,K+-ATPase branquial e no metabolismo de carboidratos para regular a osmolalidade plasmática e o metabolismo aeróbico/energético. Portanto, nossos achados suportam a ideia de que é possível capturar juvenis da tainha M. liza em água do mar e cultivá-los em águas estuarinas e marinhas.(AU)

Standardization of metachromatic staining method of myofibrillar ATPase activity of myosin to skeletal striated muscle of mules and donkeys / Padronização do método de coloração metacromático da atividade da miosina ATPase miofibrilar para músculo estriado esquelético de muares e asininos

This study aims at standardizing the pre-incubation and incubation pH and temperature used in the metachromatic staining method of myofibrillar ATPase activity of myosin (mATPase) used for asses and mules. Twenty four donkeys and 10 mules, seven females and three males, were used in the study. From each animal, fragments from the Gluteus medius muscle were collected and percutaneous muscle biopsy was performed using a 6.0-mm Bergstrõm-type needle. In addition to the metachromatic staining method of mATPase, the technique of nicotinamide adenine dinucleotide tetrazolium reductase (NADH-TR) was also performed to confirm the histochemical data. The histochemical result of mATPase for acidic pre-incubation (pH=4.50) and alkaline incubation (pH=10.50), at a temperature of 37ºC, yielded the best differentiation of fibers stained with toluidine blue. Muscle fibers were identified according to the following colors: type I (oxidative, light blue), type IIA (oxidative-glycolytic, intermediate blue) and type IIX (glycolytic, dark blue). There are no reports in the literature regarding the characterization and distribution of different types of muscle fibers used by donkeys and mules when performing traction work, cargo transportation, endurance sports (horseback riding) and marching competitions. Therefore, this study is the first report on the standardization of the mATPase technique for donkeys and mules.(AU)

O presente estudo objetivou padronizar o pH e a temperatura da pré-incubação e incubação do método de coloração metacromática de myofibrillar atividade ATPase da miosina (mATPase) utilizada para asininos e muares. Vinte e quatro jumentos e 10 muares, sete machos e três fêmeas, foram usados no estudo. De cada animal, fragmentos do músculo Gluteus medius foram coletados e biópsia muscular percutânea foi realizada por meio de uma agulha Bergstrõm tipo de 6,0 mm. Em adição ao método de coloração metacromática de mATPase, a técnica de nicotinamida adenina dinucleótido tetrazólio redutase (NADH-TR) foi também realizada para confirmar os dados histoquímicos. O resultado histoquímico da mATPase por pré-incubação ácida (pH=4,50) e incubação alcalina (pH=10,50), a uma temperatura de 37ºC, foi o que proporcionou a melhor diferenciação das fibras coradas com azul de toluidina. As fibras musculares foram identificadas de acordo com as seguintes cores: tipo I (oxidativa, azul claro), tipo IIA (oxidativo-glicolítico, azul intermediário) e tipo IIX (glycolytic, azul escuro). Na literatura, não foram encontradas publicações pertinentes à caracterização e distribuição dos diferentes tipos de fibras musculares utilizadas pelos asininos e muares nos trabalhos de tração, no transporte de cargas, em provas esportivas de resistência (cavalgadas) e concursos de marcha. Dessa forma, essa pesquisa é o primeiro relato sobre padronização da técnica de mATPase para muares e asininos.(AU)

Osmorregulação e desempenho zootécnico do pirarucu (Arapaima gigas) alimentado com dietas suplementadas com cloreto de sódio

O pirarucu é um peixe Amazônico que apresenta umas das melhores perspectivas para desenvolvimento da produção piscícola no Brasil. Essa espécie exibe excelentes índices zootécnicos e respiração aérea, possibilitando assim, que possam ser criados sob elevadas densidades ou até mesmo em águas com baixos níveis de oxigênio dissolvido. Apesar da respiração aérea favorecer a criação, também faz com que os mecanismos de osmorregulação sejam distintos dos demais peixes de respiração aquática obrigatoria em função do maior papel dos rins na absorção de íons em comparação com as brânquias. Associado a isso, para os peixes de modo geral, manter os íons corporais em ambientes de água doce é um desafio que envolve elevado custo energético. Assim, investigamos os efeitos da suplementação com NaCl na osmorregulação e no desempenho zootécnico de juvenis de pirarucu. Durante 60 dias, os animais foram alimentados diariamente com dieta controle (8,23 g.kg -1 ), dieta experimental 1 (16,46 g.kg -1 ) e dieta experimental 2 (32,92 g.kg -1 ). Após 60 dias, os animais que foram alimentados com maior nível de sal nas dietas apresentaram desempenho satisfatório no ganho de massa, massa final, taxa de crescimento específico e de sobrevivência nos peixes. Além disso, a quantidade de sal utilizada no presente estudo não causou alterações nos parâmetros hematológicos glicose plasmática e proteínas totais. Porém, houve alterações nos níveis plasmáticos de Cl. Em relação ao fluxo iônico, não houve alterações nas primeiras seis horas, apenas nos tempos de 6-18 horas para o J (Na) e J (Cl) e no tempo de 12-18 e 18-24 horas para o J (K) nos peixes alimentados com (32.92g.kg -1 ) de NaCl na ração foram observadas mudanças significativas. Além desses resultados, o maior nível de sal diminuiu a atividade da enzima Na + /K + -ATPase sem alterar a H + -ATPase nas brânquias. Um efeito oposto das dietas foi encontrado para atividade dessas mesmas enzimas nos rins, elevação da Na + /K + -ATPase, juntamente com H + -ATPase. A amônia plasmática T (amm) foi incrementada com as dietas suplementadas sem alterar o fluxo de amônia J (NH4 - ).

Pirarucu is an Amazonian fish that presents a better perspective for the development of fish production in Brazil. This species exhibits excellent zootechnical indexes and aerial respiration, thus enabling them to be reared under high densities or even in waters with low levels of dissolved oxygen. Although aerial respiration favours breeding, it also makes the osmoregulation mechanisms distinct from the other aquatic breathing fish due to the greater role of the kidneys in the absorption of ions compared to the gills. Associated with this, for fish in general, keeping body ions in freshwater environments is a challenge that involves high energy costs. Thus, we investigated the effects of NaCl supplementation on the osmorregulation and zootechnical performance of juveniles of pirarucu. During 60 days, the animals were fed daily with control diet (8,23 g.kg -1 ), experimental diet 1 (16,46g.kg -1 ) and experimental diet 2 (32,92g.kg -1 ). After 60 days, the animals presented acceptable performance in the mass gain, final mass, specific growth rate and survival in the fish fed with higher levels of salt in the diets. In addition, the amount of salt used in the present study did not cause changes in haematological, plasma glucose and total protein. However, there were changes in plasma levels of Cl. In relation to the ionic flux, there were no changes in the first six hours; only at times of 6-18 hours for J (Na) and J (Cl) and at the intervals of 12-18 and 18-24 hours for J (K) in the fish fed with (32,92g.kg -1 ) NaCl in the diet, significant changes were observed. In addition to these results, the higher salt level caused a decrease of Na + /K + -ATPase activity and no changes in H + -ATPase in the gills. An opposite effect was observed for the activity of these same enzymes in the kidney, ie, increased Na + /K + -ATPase H + - ATPase activities. Plasma ammonia T (amm) was increased with the supplemented diets without altering the flux of ammonia J (NH4) .

Phylogeography of Hypostomus strigaticeps (Siluriformes: Loricariidae) inferred by mitochondrial DNA reveals its distribution in the upper Paraná River basin

In this study, phylogenetic and phylogeographic analyses of populations identified as Hypostomus strigaticeps from the upper Paraná River basin were conducted in order to test whether these different populations comprises cryptic species or structured populations and to assess their genetic variability. The sequences of the mitochondrial DNA ATP sintetase (subunits 6/8) of 27 specimens from 10 populations (one from Mogi-Guaçu River, five from Paranapanema River, three from Tietê River and one from Peixe River) were analyzed. The phylogeographic analysis showed the existence of eight haplotypes (A-H), and despite the ancestral haplotype includes only individuals from the Tietê River basin, the distribution of H. strigaticeps was not restricted to this basin. Haplotypes A, B and F were the most frequent. Haplotypes D, E, F, G, and H were present in the sub-basin of Paranapanema, two (A and B) were present in the sub-basin of the Tietê River, one (C) was exclusively distributed in the sub-basin of the Peixe River, and one (B) was also present in the sub-basin of the Grande River. The phylogenetic analysis showed that the populations of H. strigaticeps indeed form a monophyletic unit comprising two lineages: TG, with representatives from the Tietê, Mogi-Guaçu and Peixe Rivers; and PP, with specimens from the Paranapanema River. The observed degree of genetic divergence within the TG and PP lineages was 0.1% and 0.2%, respectively, whereas the genetic divergence between the two lineages themselves was approximately 1%. The results of the phylogenetic analysis do not support the hypothesis of existence of crypt species and the phylogeographic analysis confirm the presence of H. strigaticeps in other sub-basins of the upper Paraná River: Grande, Peixe, and Paranapanema sub-basins.(AU)

Neste estudo, foram conduzidas análises filogenéticas e filogeográficas de populações identificadas como Hypostomus strigaticeps na bacia do alto rio Paraná a fim de testar se essas populações compreendem espécies crípticas ou populações estruturadas e avaliar a variabilidade genética das mesmas. Foram analisadas sequências do DNA mitocondrial ATP sintetase (subunidades 6/8) de 27 espécimes de 10 populações (uma do rio Mogi-Guaçu, cinco do rio Paranapanema, três do rio Tietê e uma do rio do Peixe). A análise filogeográfica mostrou a existência de oito haplótipos (A-H), e apesar do haplótipo ancestral incluir apenas indivíduos da bacia do rio Tietê, a distribuição de H. strigaticeps não se restringe a esta bacia. Os haplótipos A, B e F foram os mais frequentes. D, E, F, G e H estão presentes na sub-bacia do rio Paranapanema, dois (A e B) estão presentes na sub-bacia do rio Tietê, um (C) está exclusivamente distribuído na sub-bacia do rio do Peixe, e um (B) também está presente na sub-bacia do rio Grande. A análise filogenética mostrou que as populações de H. strigaticeps realmente formam uma unidade monofilética que compreende duas linhagens: TG, com representantes do rio Tietê, rio Mogi-Guaçu e rio do Peixe, e PP, com espécimes do rio Paranapanema. O grau de divergência genética observada nas linhagens de TG e PP foram de 0,1% e 0,2%, respectivamente, enquanto que a divergência genética entre as duas linhagens foi de aproximadamente 1%. Os resultados da análise filogenética não suportam a hipótese da existência de espécies crípticas e a análise filogeográfica confirma a presença de H. strigaticeps em outras sub-bacias do alto rio Paraná: sub-bacias do rio Grande, rio do Peixe e rio Paranapanema.(AU)

Molecular variants in populations of Bryconamericus aff. iheringii (Characiformes, Characidae) in the upper Paraná river basin / Variantes moleculares em populações de Bryconamericus aff. iheringii (Characiformes, Characidae) da bacia do alto rio Paraná

There are evidences that Bryconamericus aff. iheringii represents a species complex. DNA molecular markers have been effective in studies on phylogeny, taxonomy, and identification of cryptic species. In this study, partial sequences of genes of ATPase 6 and 8 were used to assess genetic diversity within and among populations of B. aff. iheringii of sub-basins of Tibagi, Pirapó and Ivaí rivers, belonging to the Upper Paraná river basin. The analysis of the sequences of genes pointed out high genetic diversity in B. aff. iheringii from the sub-basins studied with genetic distance values comparable to those found among different species. There was a division of the individuals into five groups. The comparison with other species of Bryconamericus that have sequences available in GenBank confirmed that the individuals studied have relevant values of genetic distance, found among different species. Nevertheless, with the available data it is not possible to refute the hypothesis that the populations correspond to a group resulting from hybridization or that there might have been introgression of mitochondrial DNA among different species.(AU)

Há indícios de que Bryconamericus aff. iheringii represente um complexo de espécies. Os marcadores moleculares de DNA têm sido eficazes em estudos de filogenia, taxonomia e identificação de espécies crípticas. Neste estudo, as seqüências parciais de genes da ATPase 6 e 8 foram utilizados para avaliar a diversidade genética dentro e entre populações de B. aff. iheringii das sub-bacias dos rios Tibagi, Pirapó e Ivaí, pertencentes a bacia do Alto Rio Paraná. As análises das seqüências dos genes apresentaram alta diversidade genética em B. aff. iheringii das sub-bacias estudadas, com valores de distâncias genéticas semelhantes às encontradas entre espécies diferentes. Houve uma divisão dos indivíduos em cinco grupos. A comparação com outras espécies de Bryconamericus que têm seqüências disponíveis no GenBank confirmou que os indivíduos estudados possuem valores relevantes de distância genética encontrados entre espécies diferentes. No entanto, com os dados disponíveis não é possível descartar a hipótese de que as populações correspondem a um grupo resultante de hibridação, nem que houve introgressão de DNA mitocondrial entre espécies diferentes.(AU)

The effect of salinity on osmoregulation and development of the juvenile fat snook, Centropomus parallelus (POEY) / O efeito da salinidade sobre a osmoregulação e o desenvolvimento do juvenil de robalo-peva, Centropomus parallelus (POEY)

Eurihaline fish support waters with different salt concentration. However, numerous studies have shown that salinity can affect fish development. Thus, the effect of salinity change from 20 to 5 and 35 on survival, weight, length, gill chloride cell ultrastructure and gill Na+, K+ ATPase activity was evaluated in Centropomus parallelus following short-term (6, 24 and 96 hours) and long-term exposure (30 and 60 days). Salinity did not affect C. parallelus survival, final weight and length. The quantity of chloride cells increased visibly at salinities of 5 and 35, with the cells exhibiting the typical features of uptake and secretory cells, respectively. Na+, K+ ATPase activity in the gill of the C. parallelus was significantly greater at a salinity of 5 than at a salinity of 20 or 35 after 96 hours, but not after 30 or 60 days. These results indicate that salinity change from high to low salt water induces gill chloride cell and Na+, K+ ATPase activity adaptations after short-term exposure. However, after long-term exposure at salinity 5, gill Na+, K+ ATPase activity is no more necessary at high levels. The increase in salinity to 35 does not induce significant change in gills. Juveniles of C. parallelus may thus be capable of acclimating to salinities of 5 to 35 for 60 days without significant effects on development.(AU)

Peixes eurihalinos suportam águas com diferentes concentrações de sal. Contudo, muitos estudos têm mostrado que a salinidade pode afetar o desenvolvimento do peixe. Portanto, o efeito da mudança de salinidade de 20 para 5 e 35 na taxa de sobrevivência, peso, comprimento, morfologia das células de cloreto branquiais e atividade da Na+, K+ ATPase foram avaliadas no Centropomus parallelus após curto (6, 24 e 96 horas) e longo tempo de exposição (30 e 60 dias). A salinidade não afetou a sobrevivência, o peso e comprimento final do robalo-peva. A quantidade de células de cloreto aumentou visivelmente nas salinidades 5 e 35, exibindo morfologias típicas de células que absorvem e secretam sal, respectivamente. A atividade da Na+, K+ ATPase nas brânquias do C. parallelus foi significativamente maior na salinidade 5 do que nas salinidades 20 ou 35 após 96 horas, mas não após 30 e 60 dias. Esses resultados indicam que a mudança de alta para baixa salinidade provoca adaptações nas células de cloreto e na atividade da Na+, K+ ATPase branquial em curto prazo. Contudo, após longa exposição na salinidade 5, a alta atividade da Na+, K+ ATPase branquial não é mais necessária. O aumento de salinidade para 35 não induz mudanças significativas nas brânquias. Portanto, juvenis de C. parallelus possuem a capacidade de aclimatação nas salinidades de 5 a 35 semefeitos significativos no desenvolvimento após 60 dias.(AU)

Physiological effects of gasoline on the freshwater fish Prochilodus lineatus (Characiformes: Prochilodontidae)

The purpose of this work was to evaluate the effects of the water-soluble fraction of gasoline (WSFG) on the Neotropical freshwater fish Prochilodus lineatus. The WSFG was prepared by mixing gasoline in water (1:4) and animals were exposed for 6, 24 and 96h to 5% diluted WSFG or only to water. After exposure, blood was collected from the caudal vein and the gills were removed. The following parameters were analyzed: hematological (hemoglobin, hematocrit, number of red blood cells), osmo-ionic (plasma Na+, Cl- and K+ and plasma osmolarity), metabolic (total plasma proteins and glucose), endocrine (cortisol), density and distribution of chloride cells [CC] in the gills (immunohistochemistry), and branchial Na+/K+-ATPase (NKA) activity. Hemolysis was found to occur after 96h exposure to WSFG, as indicated by the decrease in the hematological parameters analyzed, followed by an increase in plasma K+. Secondary stress response was revealed by the occurrence of hyperglycemia in the three periods of exposure, despite the absence of significant increases in the plasma cortisol. The exposure to WSFG also caused an increase in the quantity of CC and in plasma Na+, after 24h, as well as in the enzymatic activity of NKA and plasma osmolarity, after 24h and 96h. These results indicate that fish exposed to the WSFG showed physiological adjusts to maintain their osmotic balance. However, the increase in the quantity of CC in the lamellae may interfere in the gas exchange impairing respiration.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da fração solúvel da gasolina (FSG) em Prochilodus lineatus. A FSG foi preparada misturando-se a gasolina à água (1:4) e os animais foram expostos por 6, 24 e 96h à FSG diluída 5% ou apenas à água. Após a exposição, o sangue foi coletado pela veia caudal e as brânquias foram retiradas. Os seguintes parâmetros foram analisados: hematológicos (hemoglobina, hematócrito, quantidade de células vermelhas), osmo-iônicos (concentrações plasmáticas de Na+, Cl-, K+ e osmolaridade), metabólicos (concentrações plasmáticas de proteínas totais e glicose), endócrino (cortisol plasmático), densidade e distribuição de células-cloreto [CC] nas brânquias (imunohistoquímica) e a atividade da enzima Na+/K+-ATPase (NKA) branquial. Hemólise foi observada após 96h de exposição à FSG, indicada pela diminuição dos parâmetros hematológicos analisados, seguido pelo aumento do K+ plasmático. Houve resposta secundária de estresse visualizada pela ocorrência da hiperglicemia nos três tempos de exposição, apesar da ausência de diferenças significativas na concentração plasmática do cortisol. A exposição à FSG também provocou aumento na quantidade das CC e na concentração de Na+, após 24h, e na atividade enzimática da NKA e osmolaridade, após 24h e 96h. Esses resultados indicam que peixes expostos à FSG apresentaram ajustes fisiológicos para manter o equilíbrio osmótico. Entretanto, o aumento na quantidade de CC nas lamelas pode ter interferido nas trocas gasosas prejudicando a respiração.(AU)