Caseous stomatitis caused by Pseudomonas aeruginosa in Boa constrictor amarali

Background: Pseudomonas aeruginosa is a bacterium that belongs to the microbiota of snakes, but it may also be anopportunistic pathogen and contaminate humans through fecal contact, bites, and injuries. In snakes, this microorganismmay present high pathogenicity at certain conditions and have been associated with high morbidity and mortality. Reportsof infection of Boa constrictor by this pathogen are rare. Thus, this study aimed to describe the P. aeruginosa oral infection in a snake specimen (Boa constrictor amarali), approaching the isolation and identification of the infectious agentsinvolved, the antimicrobial sensitivity and resistance, and the therapeutic protocol adopted.Case: A free-living adult female specimen of Boa constrictor amarali (Amaral’s boa), with no described previous history was rescued in an urban area by the Environmental Police. Clinical evaluations showed structures of caseous aspectin the oral cavity, with hyperemia spots in the mucosa. Samples of these lesions were sent for mycological examination,and fungal forms were not found. Samples were collected for isolation and culture. The antimicrobial susceptibility of theisolated microorganisms was determined by the modified Kirby-Bauer disk diffusion method. P. aeruginosa was isolatedand showed susceptibility to amikacin, gentamicin, and polymyxin-B; intermediate susceptibility to azithromycin, and ciprofloxacin; and resistance to cephalexin, ceftiofur, chloramphenicol, and enrofloxacin. The treatment consisted of cleaningof the oral cavity, local infiltration of lidocaine for debridement of the caseous area that were later cauterized with iodine.Systemic antibiotic therapy was used, with intramuscular administration of amikacin (5 mg/kg) for the first dose and (2.5mg/kg) for the other doses with intervals of 72 h, and oral administration of metronidazole...

Caseous stomatitis caused by Pseudomonas aeruginosa in Boa constrictor amarali

Background: Pseudomonas aeruginosa is a bacterium that belongs to the microbiota of snakes, but it may also be anopportunistic pathogen and contaminate humans through fecal contact, bites, and injuries. In snakes, this microorganismmay present high pathogenicity at certain conditions and have been associated with high morbidity and mortality. Reportsof infection of Boa constrictor by this pathogen are rare. Thus, this study aimed to describe the P. aeruginosa oral infection in a snake specimen (Boa constrictor amarali), approaching the isolation and identification of the infectious agentsinvolved, the antimicrobial sensitivity and resistance, and the therapeutic protocol adopted.Case: A free-living adult female specimen of Boa constrictor amarali (Amarals boa), with no described previous history was rescued in an urban area by the Environmental Police. Clinical evaluations showed structures of caseous aspectin the oral cavity, with hyperemia spots in the mucosa. Samples of these lesions were sent for mycological examination,and fungal forms were not found. Samples were collected for isolation and culture. The antimicrobial susceptibility of theisolated microorganisms was determined by the modified Kirby-Bauer disk diffusion method. P. aeruginosa was isolatedand showed susceptibility to amikacin, gentamicin, and polymyxin-B; intermediate susceptibility to azithromycin, and ciprofloxacin; and resistance to cephalexin, ceftiofur, chloramphenicol, and enrofloxacin. The treatment consisted of cleaningof the oral cavity, local infiltration of lidocaine for debridement of the caseous area that were later cauterized with iodine.Systemic antibiotic therapy was used, with intramuscular administration of amikacin (5 mg/kg) for the first dose and (2.5mg/kg) for the other doses with intervals of 72 h, and oral administration of metronidazole...(AU)

Streptococcus agalactiae infection in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) / Infecção por Streptococcus agalactiae em tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus)

This review aims to provide greater understanding of estreptococosis in reared tilapia and thereby assist in choosing the best method of prevention and control of this disease. Streptococcus agalactiae is a cosmopolitan pathogen and the main etiologic agent of septicaemia and meningoencephalitis in teleost. Outbreaks caused by this bacteria lead to high rates of morbidity and mortality of fish, resulting in serious economic losses, especially in the cage tilapia culture that is a branch of aquaculture which produces most in Brazil. This paper presents the main estreptococosis characteristics in Nile tilapia and its prevention by using intraperitoneal vaccines. Further studies should be conducted with the intention of clarifying its pathogenesis and improving the prevention and control.

Esta revisão tem por objetivo proporcionar maior entendimento sobre a estreptococose na criação de tilápias e com isso auxiliar na escolha do melhor método de profilaxia e controle desta enfermidade. Streptococcus agalactiae é um patógeno cosmopolita e o principal agente etiológico de septicemia e meningoencefalite em teleósteos. Surtos provocados por essa bactéria levam a altas taxas de morbidade e mortalidade de peixes, resultando em sérios prejuízos econômicos, especialmente na tilapicultura que é o ramo da aquicultura que mais produz no Brasil. Este trabalho traz as principais características da estreptococose em tilápias do Nilo e sua prevenção pelo uso de vacinas intraperitoneais. Novos estudos devem ser realizados com intuito de esclarecer ainda mais sua patogênese e aperfeiçoar os métodos profiláticos e de controle.

Streptococcus agalactiae infection in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) / Infecção por Streptococcus agalactiae em tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus)

This review aims to provide greater understanding of estreptococosis in reared tilapia and thereby assist in choosing the best method of prevention and control of this disease. Streptococcus agalactiae is a cosmopolitan pathogen and the main etiologic agent of septicaemia and meningoencephalitis in teleost. Outbreaks caused by this bacteria lead to high rates of morbidity and mortality of fish, resulting in serious economic losses, especially in the cage tilapia culture that is a branch of aquaculture which produces most in Brazil. This paper presents the main estreptococosis characteristics in Nile tilapia and its prevention by using intraperitoneal vaccines. Further studies should be conducted with the intention of clarifying its pathogenesis and improving the prevention and control.(AU)

Esta revisão tem por objetivo proporcionar maior entendimento sobre a estreptococose na criação de tilápias e com isso auxiliar na escolha do melhor método de profilaxia e controle desta enfermidade. Streptococcus agalactiae é um patógeno cosmopolita e o principal agente etiológico de septicemia e meningoencefalite em teleósteos. Surtos provocados por essa bactéria levam a altas taxas de morbidade e mortalidade de peixes, resultando em sérios prejuízos econômicos, especialmente na tilapicultura que é o ramo da aquicultura que mais produz no Brasil. Este trabalho traz as principais características da estreptococose em tilápias do Nilo e sua prevenção pelo uso de vacinas intraperitoneais. Novos estudos devem ser realizados com intuito de esclarecer ainda mais sua patogênese e aperfeiçoar os métodos profiláticos e de controle.(AU)

USO DE ADITIVOS NA ÁGUA DO TRANSPORTE DE TAMBAQUI Colossoma macropomum: INFLUÊNCIA SOBRE DESEMPENHO PRODUTIVO E NO CONTROLE DE INFECÇÕES BACTERIANAS

Foram investigados cinco surtos de mortalidade pós-transporte de tambaquis oriundos de diferentes regiões do Amazonas. Neste primeiro ensaio, os peixes manifestaram sinais clínicos sugestivos de columnariose e foram analisados microbiologicamente através da estriagem de fragmentos de tecidos em meio ágar triptona soja (TSA) e Hsu-Shotts (MHS), incubados a 28°C/24h e 25°C/ até 5 dias, respectivamente. As colônias obtidas foram analisadas quanto às proteínas ribossômicas em espectrometria de massas Maldi-ToF e quanto ao genótipo predominante, com PCR-multiplex. A partir destes resultados, foi realizado um segundo ensaio para investigação de métodos preventivos às enfermidades bacterianas, com uso de aditivos na água de transporte. Foram usados o cloreto de sódio NaCl (8 g/L), óleo essencial (OE) de Melaleuca alternifolia (11,12 mg/L, diluído em álcool absoluto 1:9) e oxitetraciclina (TM700, 60 mg/L do princípio ativo), além de dois grupos controle (água do transporte, e álcool diluente). Os juvenis (25 peixes/saco, ± 7 cm, ± 0,94 g) foram transportados por 3 h em sacos plásticos de 5 L (1 L água, preenchido com O2 100%, simulando densidade adotada pelos produtores da região amazônica), com quatro réplicas em cada grupo. Após o transporte, os peixes foram estocados em 20 caixas (5 grupos, 4 réplicas), sem os aditivos e mantidos com alimentação diária (SID) até saciedade aparente, durante 30 dias. Os animais foram pesados e medidos (dias 0, 15 e 30) e o consumo de ração aferido diariamente para avaliação do desempenho produtivo. Foram realizadas avaliações diárias dos sinais clínicos, alterações comportamentais e mortalidades. Peixes recém-mortos foram submetidos à análise microbiológica e os isolados foram identificados por Maldi-ToF. As bactérias sugestivas de serem patogênicas foram selecionadas para um terceiro ensaio, do Postulado de Koch para confirmação da patogenicidade e confirmação da mortalidade após o transporte. Seis cepas (A. caviae, A. hydrophila, A. jandaei, C. freundii e F. columnare; OD600 = 0,500) foram selecionadas para o desafio, os quais foram inoculados intracelomaticamente com as bactérias, após realização da DL50 para padronização do inóculo (7 peixes/grupo; 0,1ml inóculo/ 10g de peso vivo). As bactérias foram re-isoladas e identificadas por MaldiToF. Após a identificação das bactérias, foi realizado um quarto experimento, o teste in vitro, para determinação das concentrações mínimas bacteriostáticas (CMI) e bactericidas (CMB) de cada aditivo contra cada cepa-alvo através da técnica de microdiluição em placas de ELISA. No primeiro estudo, constatamos que a F. columnare (genótipo IV) é o agente etiológico predominante no transporte de juvenis de tambaqui. No segundo estudo, o melhor status sanitário foi atribuído ao grupo transportado com sal, que apresentou 100% de sobrevivência do lote, além de ser o único grupo que não manifestou alterações comportamentais e sinais clínicos de doenças, consequentemente, apresentou maior ganho de peso e menor conversão alimentar quando comparado ao grupo transportado com oxitetraciclina, grupo que não diferiu dos demais quanto à presença de múltiplos agentes infecciosos (poli-infecção) nos peixes doentes e desempenho produtivo. No quarto estudo, certificamos que a ação do sal foi bactericida, enquanto a oxitetraciclina foi bacteriostática e o fitoterápico apresentou ação mista. Todas as cepas mostraram-se resistentes à oxitetraciclina. Este estudo estabelece informações fundamentais para o desenvolvimento da cadeia produtiva de tambaquis na região Norte, que é a maior produtora da espécie, e sugere que 0,8% de sal usado na água de transporte de tambaquis amazônicos, pode tornar esta etapa crítica mais eficiente e lucrativa, prevenindo a columnariose e enfermidades associadas (Aeromonas spp. e Citrobacter freundii) e interferindo de forma benéfica no desenvolvimento dos juvenis.

Five mortality outbreaks post-transport of tambaqui from different regions of Amazonas were investigated. In this first trial, the fish showed clinical signs suggestive of columnariosis and were examined microbiologically by streaking tissue fragments on soybean tryptone agar (TSA) and Hsu-Shotts (MHS), incubated at 28°C/24h and 25°C/ up to 5 days, respectively. The samples obtained were analyzed for ribosome proteins in Maldi-ToF mass spectrometry and for the predominant genotype, with multiplex PCR. From these results, a second trial was carried out to investigate methods to prevent bacterial diseases, using additives in the transport water. Sodium chloride NaCl (8 g/L), essential oil (OE) from Melaleuca alternifolia (11.12 mg/L, diluted in absolute alcohol 1: 9) and oxytetracycline (TM700, 60) were used as mitigation measures on bacterial pathogens. mg/L of the active ingredient), in addition to two control groups (carrier water, and diluent alcohol). Juveniles (25 fish/ bag, ± 7 cm) were transported for 3 h in 5 L plastic bags (1 L water, filled with 100% O2, simulating density adopted by producers in the Amazon region), with four replicates in each group. After transport, the fish were stored in 20 boxes (5 groups, 4 replicates), without the additives and kept with daily food (SID) until apparent satiety, for 30 days. The animals were evaluated for biometrics (days 0, 15 and 30) and feed consumption (daily) for analysis of zootechnical parameters. Manifestations of clinical signs, behavioral changes and mortality were assessed daily. Freshly killed fish were subjected to the same microbiological tests and the isolates were identified by Maldi-ToF. Bacteria suggestive of greater pathogenic potential were selected for a third Koch Postulate assay to confirm pathogenicity and certify the cause of mortality after transport. Six strains (A. caviae, A. hydrophila, A. jandaei, C. freundii and F. columnare; OD600 = 0.500) were selected for the challenge (7 fish/ group; 0.1ml inoculum / 10g of live weight). After mortality, the bacteria were re-isolated and identified in terms of gender and species as in Maldi-ToF. After confirmation of the bacteria, a fourth in vitro experiment was carried out to determine the minimum bacteriostatic (CMI) and bactericidal (CMB) concentrations of each additive against each target strain using the ELISA plate microdilution technique. In the first study, we found that F. columnare (genotype IV) is a predominant etiological agent in the transport of tambaqui juveniles. In the second study, the best health status was attributed to the group transported with salt, which showed 100% survival of the batch, in addition to being the only group that did not show behavioral changes and clinical signs, indicating the absence of an infectious biological source after transport. Consequently, it presented better weight gain and feed conversion when compared to the group transported with oxytetracycline, a group that did not differ from the others in terms of the presence of multiple infectious agents (poly-infection), presence of sick fish indicating biological risk and regarding performance parameters. In the fourth study, we certify that the action of salt was bactericidal, while oxytetracycline was bacteriostatic and the herbal medicine presented mixed action. All strains are resistant to oxytetracycline. This study establishes fundamental information for the development of the tambaqui productive chain in the North region, which is the largest producer of the species, and suggests that the 0.8% salt used as an additive in the transport water of Amazonian tambaqui, may make this step critical more efficient and profitable production, preventing columnariosis and associated diseases (Aeromonas spp. and Citrobacter freundii) and beneficially interfering in the development of juveniles.

Juvenis de pirarucu alimentados com níveis proteicos crescentes: desempenho zootécnico, hematologia e desafio à Aeromonas hydrophila

O pirarucu é uma espécie de rápido crescimento e alto valor comercial. O conhecimento de sua exigência proteica pode promover a máxima retenção proteica corporal, melhorando sua saúde e sobrevivência. O presente estudo teve como objetivo determinar a exigência em proteína bruta para juvenis de pirarucu, avaliando seu desempenho zootécnico, parâmetros hematológicos e sua resistência quando desafiados à Aeromonas hydrophila. Foram utilizados 720 juvenis de pirarucus (2,4 ± 0,08 g), distribuídos em 18 tanques de 140 L, sendo 40 peixes por tanque, em um delineamento inteiramente casualizado, com seis tratamentos e três repetições em um sistema de recirculação de água com aeração artificial constante. Os peixes foram alimentados em 5 refeições diárias (7:00, 10:00, 13:00, 16:00 e 19:00 h) até a saciedade aparente por 58 dias, com dietas contendo níveis crescentes de proteína bruta: 30, 40, 45, 50, 55 e 65%. Neste ensaio avaliou-se a sobrevivência, consumo de ração aparente, ganho em peso, conversão alimentar aparente, e as taxas de eficiência alimentar, crescimento relativo, crescimento específico, retenção proteica e eficiência proteica. Após o período experimental foi realizada a biometria final dos peixes, foram separados 14 peixes por unidade experimental. Destes, 2 foram destinados para coleta sanguínea, 2 foram eutanasiados por secção medular e destinados para análises de composição centesimal e 10 foram destinados para o desafio bacteriano. O ensaio de desafio bacteriano foi realizado no Laboratório de Imunologia de Organismos Aquáticos UFAM. Os peixes foram distribuídos em 18 tanques de polietileno de 70 L, sendo 10 peixes por tanque, com três repetições em um sistema estático. Em cada unidade experimental foram adicionados 315 mL de inóculo bacteriano na concentração de 1,2x10 9 UFC/ mL e os sinais clínicos e a mortalidade foram observados durante 15 dias. A taxa de sobrevivência não foi afetada pelos níveis de proteína bruta da dieta. O consumo de ração aparente, taxa de crescimento relativo, taxa de crescimento específico, taxa de eficiência alimentar e taxa de eficiência proteica foram afetados pelos níveis de proteína bruta na dieta. A conversão alimentar aparente foi inversamente proporcional ao aumento dos níveis de proteína bruta. Os melhores níveis de proteína bruta estimados para ganho em peso e taxa de retenção proteica foram 61,96 % e 57,26 %, respectivamente, ajustados por função polinomial quadrática. A menor porcentagem de proteína bruta corporal 59,03% foi determinada nos peixes alimentados com dietas de 30% de proteína bruta, as porcentagens de lipídios e cinzas foram diminuindo de acordo com o aumento da proteína na dieta. Os parâmetros hematológicos não foram afetados pelos níveis de proteína dietética. Não houve mortalidade durante o desafio bacteriano, porém os peixes que se alimentaram com dietas de 30% de proteína bruta apresentaram a maior porcentagem na frequência de lesões caudais 66,7%, enquanto que os peixes alimentados com dietas de 65% proteína bruta não apresentaram lesões na nadadeira caudal. Recomenda-se o nível de 57,26% de proteína bruta em formulações de dietas para proporcionar a máxima retenção proteica e resistência imunológica em juvenis de pirarucu.

Pirarucu is a fast growing fish with high commercial value. The knowledge of its dietary protein requirement can promote maximum body protein retention, improving its health and survival. This study aimed to determine the crude protein requirement for juvenile pirarucu, evaluating its zootechnical performance, hematological parameters and its resistance when challenged by Aeromonas hydrophila. This trial was carried out at Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia INPA. Juveniles of pirarucus (2.4 ± 0.08 g) were used in a completely randomized design with six treatments (n = 3; 40 fish per tank) in a water recirculation system with constant artificial aeration. Fish were fed 5 times a day (7:00, 10:00, 13:00, 16:00 and 19:00 h) to apparent satiety for 58 days, with diets containing increasing levels of crude protein: 30, 40, 45, 50, 55 and 65%. We evaluated, apparent feed intake, weight gain, survival, feed conversion, feed efficiency, relative growth, specific growth, protein retention, and protein efficiency ratios. After the feed trial, 14 fish from each experimental unit were sampled. Two fish were intended for blood collection, 10 fish were intended to the bacterial challenge test and 2 were euthanized and intended to analyzes of centesimal composition. The bacterial challenge was carried out at Laboratory of Immunology of Aquatic Organisms - UFAM. Fish were housed in 18 polyethylene tanks (useful volume of 70 L, 10 fish per tank, n = 3) in a static system. In each experimental unit, were added 315 mL of bacterial inoculum at the concentration of 1.2 x 10 9 CFU / mL and clinical signs and mortality were observed for 15 days. Apparent feed intake, relative growth rate, specific growth rate, feed efficiency ratio and protein efficiency rate were affected by crude protein levels in the diet. The apparent feed conversion was inversely proportional to the increase in crude protein levels. The best crude protein levels estimated for weight gain and protein retention rate were 61.96% and 57.26%, respectively, adjusted by quadratic polynomial function. The survival rate was not affected by crude dietary protein levels. The lowest percentage of whole body protein (59,03%) was determined in fish fed the 30% crude protein diet. Lipid and ash percentages were decreased according to dietary protein increase. Hematological parameters were not affected by dietary protein levels. There was no mortality during the bacterial challenge, however, the group of fish fed the 30% crude protein presented the highest percentage of caudal lesions (66.7%), whereas fish fed with 65% crude protein diets did not present lesions in the caudal fin. The crude protein level of 57.26% in diet formulations is recommended to provide maximum protein retention and immunological resistance in pirarucu juveniles.

PROSPECÇÃO DE BACTÉRIAS INTESTINAIS EM BEIJUPIRÁ CULTIVADO

A ocorrência de doenças bacterianas representa restrição à expansão do cultivo intensivo de beijupirá (Rachycentron candum) em tanques-rede e são tratadas normalmente com administração de antibióticos, que usados inadequadamente podem provocar o desenvolvimento de bactérias resistentes, chegar aos peixes selvagens, outros animais e afetar piscicultores e consumidores do produto. Objetivou-se identificar a diversidade bacteriana Gram-negativa, potencialmente patogênica multirresistentes a antibióticos e Gram-positiva, potencialmente probiótica frente a Vibrio spp., isoladas do intestino de beijupirá cultivado offshore sob influência de distintos períodos do ano. Foram coletados dez alevinos e 30 juvenis, dos quais 82,5% exibiram indícios de infecção bacteriana e 47,5% de nefrocalcinose. Das 72 linhagens Gram-negativas identificadas por bioquímicos, 86,11% apresentaram concordância com a classificação molecular. Foram descritas 18 espécies, 12 gêneros e cinco famílias, Aeromonaceae, Neisseriaceae, Pseudomonadaceae, Vibrionaceae e Enterobacteriaceae, sendo a útima mais representativa (63,88%). As espécies mais frequentes foram Enterobacter cloacae (27,78%) e Photobacterium damselae subsp. damselae (25%), maior patógeno do beijupirá. 95,83% dos isolados foram resistentes à penicilina (6,25 g), 62,50% a ampicilina (10g) e 15,28% a enrofloxacina (5 g). 69,44% foram multirresistentes aos antibióticos e a linhagem com maior índice de resistência múltipla a antimicrobianos (MAR) foi da espécie E. cloacae (0,8571). Com relação às bactérias Gram-positivas, foram isoladas 53 linhagens classificadas em 13 espécies, pertencentes às famílias Enterococcaceae, Paenibacillaceae, Staphylococcaceae, Streptococcaceae e Bacillaceae, sendo a última mais representativa na qual inclui Bacillus cereus, a espécie mais frequente (39,62%). 16,98% dos isolados apresentaram atividade antibacteriana, produzindo halos de inibição que variaram de 9,33 ± 0,58 a 28,77 ± 0,25 mm, frente ao Vibrio vulnificus, V. parahaemolyticus e V. alginolyticus. As espécies com atividade antibacteriana foram Staphylococcus piscifermentans, S. lugdunensis, Bacillus spp., Enterococcus spp., E. faecium e Lactococcus lactis subsp. lactis. E. faecium (33,33%) foi a espécie mais representativa, incluída no gênero Enterococcus spp. responsável pelos maiores halos de inibição especialmente frente ao V. vulnificus. O período do ano não influenciou significativamente (P 0,05) na diversidade bacteriana intestinal do beijupirá, na multirresistência das Gram-negativas, nem no número de Gram-positivas com propriedades antimicrobianas. O intestino do R. canadum inclui bactérias Gram-negativas potencialmente patogênicas para animais aquáticos e humanos, com elevadas taxas de multirresistência aos antimicrobianos testados, Gram-positivas patogênicas oportunistas para humanos e linhagens com atividade antimicrobiana frente à víbrios. As espécies Gram-positivas identificadas são consideradas probióticas para outras espécies de peixes e após os resultados encontrados nesse estudo, potenciais probióticas para beijupirá como alternativa profilática e/ou terapêutica frente às vibrioses.

IMUNOHISTOQUÍMICA EM ÓRGÃOS DE TILÁPIAS-DO-NILO IMUNIZADAS COM ANTÍGENO INSOLÚVEL DE Streptococcus agalactiae

A infecção causada por Streptococcus agalactiae provoca grandes perdas em sistemas de criação intensiva de tilápias no Brasil e uma das soluções para minimizar estas perdas é a utilização de vacinas. Assim, este estudo avaliou a partir da marcação de células por meio da imunohistoquímica com anticorpo Ig M as respostas e participação do rim, baço e fígado na resposta imune humoral induzida pela vacina contra S. agalactiae. Para tanto foram utilizadas 166 tilápias-do-Nilo (Oreochromis niloticus) com peso médio de 200 ± 25 g. Foi determinada a concentração bacteriana letal para 50,0% dos peixes (DL50) forma utilizados 40 tilápias distribuídas em 4 caixas de fibra de vidro de 250 L, 10 animais/. Os animais foram inoculados com doses crescentes de S. agalactiae (1x102; 1x104; 1x106 e 1x108), obtendo a DL50 estimada em 1x107,71 e com o limite inferior e superior em 1x106,52 e 1x107,98, respectivamente. Posteriormente foi realizado o ensaio para coleta dos órgãos para posterior avaliação histológica e imunohistoquímica. Para tanto foram utilizados dois grupos (n= 63), sendo eles; grupo injetado com 200 L salina 0,65% (controle) e grupo imunizado com a vacina contendo a porção insolúvel do produto da sonicação do S. agalactiae adicionado ao adjuvante incompleto de Freund (1:1), com volume final de 200 L. A vacina e a salina foram aplicadas por via intracelomática (i.c) e em todos os grupos foram realizada a coleta dos órgãos pré imunização e coletas seriadas pós imunização nos tempos de 7, 14, 21, 28, 35, 42, 60 e 90 dias, para avaliação da dinâmica da resposta imune humoral por meio da imunohistoquímica com o anticorpo Ig M e avaliação histológica na coloração de hematoxilia e eosina. Os resultados foram comparados por meio de análise de variância (ANOVA) ao nível de 5% de probabilidade e a diferença entre as médias foi comparada pelo teste de Tukey. A imunização de tilápias-do-Nilo com antígeno insolúvel de S. agalactiae induziu a proliferação de linfócitos esplênicos, levando ao aumento significativo de células produtoras da imunoglobulina M no baço e rim dos animais vacinados, a partir de 14 e 28 dias após o estímulo, respectivamente, mantendo-se elevados até 90 dias. Também apresentaram maior quantidade de centro de melanomacrófagos no baço a partir de 21 dias pós-estímulo quando comparadas as tilápias do grupo controle.

The infection caused by Streptococcus agalactiae causes heavy losses in intensive farming of tilapia systems in Brazil and one of the solutions to minimize these losses is the use of vaccines. Thus, this study evaluated the tag from the cells by immunohistochemistry Ig M antibody responses and participate in the kidney, spleen and liver in the humoral immune response induced by the vaccine against S. agalactiae. Therefore, we analyzed 166 of the tilapia (Oreochromis niloticus) with an average weight of 200 ± 25 g. It determined the bacterial concentration lethal to 50.0% of the fish (LD50) 40 tilapias used medium 4 distributed in 250 L glass fiber boxes 10 animals. The animals were inoculated with increasing doses of S. agalactiae (1x102, 1x104, 1x106 and 1x108), getting the LD50 estimated at 1x107,71 and the lower and upper limit in 1x106,52 and 1x107,98 respectively. Later the test was carried out to collect the bodies for subsequent histological and immunohistochemical evaluation. Therefore, we used two groups (n = 63), namely; group injected with 200 uL saline 0.65% (control) and group immunized with the vaccine containing the insoluble portion of the product of sonication S. agalactiae added to Freund's incomplete adjuvant (1:1) with final volume of 200 uL. The vaccine and saline were applied via intracelomic (i.c) and in all the groups were made to collect the pre immunization organs and graded post immunization collected on days 7, 14, 21, 28, 35, 42, 60 and 90 days to evaluate the dynamics of humoral immune response by immunohistochemistry with the Ig M antibody and histological evaluation in the coloring hematoxilia and eosin. The results were compared using analysis of variance (ANOVA) at 5% probability and the difference between the means were compared by Tukey test. Immunization of the Nile tilapia with S. agalactiae insoluble antigen-induced proliferation of splenic lymphocytes, leading to significant increases in immunoglobulin-producing cells in the spleen and kidney M of the vaccinated animals from 14 and 28 days after challenge respectively, remaining elevated for up to 90 days. Also exhibit increased melanomacrophages center in the spleen from 21 days post-stimulation when compared to the control group tilapia.