Avaliação microscópica de superfícies de aço inoxidável usados em ensaios de biofilmes / Microscopic evaluation on stainless steel surfaces used in biofilm assays

Superfícies de aço inoxidável com especificações determinadas pela American Society for Testing and Materials (ASTM) são usadas em testes in vitro para simular a formação e a remoção de biofilmes. Muitas vezes estas superfícies são reutilizadas nos ensaios de formação de biofilmes. O objetivo deste trabalho foi avaliar se cupons de aço inoxidável anteriormente utilizados para formação de biofilmes multiespécies podem ser reutilizados em novos ensaios. Assim, cupons submetidos a diferentes procedimentos de higienização foram analisados por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e perfilometria . A reutilização das superfícies em novos experimentos deve ser realizada com cautela, aplicando procedimentos que removam as células bacterianas e a substância polimérica extracelular (EPS) aderidas na superfície. Além disso, observações da superfície (topografia e rugosidade) devem ser avaliadas, comprovando as especificações da ASTM.(AU)

Avaliação da capacidade de formação de biofilmes de Bacillus cereus isolados de produtos lácteos frente a diferentes temperaturas / Evaluation of the capacity to form biofilm by Bacillus cereus isolated from dairy products at different temperatures

Bacillus cereus encontra-se entre os patógenos de maior preocupação na indústria de alimentos por sua capacidade em formar biofilmes. Como resultado, podem contaminar os alimentos que entram em contato com as superfícies, representando dessa forma um obstáculo para conservação de leite e produtos lácteos, o que coloca em risco a saúde dos consumidores. Objetivou-se avaliar a capacidade de formação de biofilmes de estirpes de B. cereus frente à diferentes temperaturas encontradas na indústria de laticínios em superfície de aço inoxidável. A capacidade de formação de biofilme foi avaliada em diferentes temperaturas (5, 15, 25 e 32 ºC) e intervalos de tempo (24, 48,72, 96 e 120h). As estirpes de B. cereus apresentaram diferenças significativas nas temperaturas avaliadas e na capacidade de adesão, onde uma das estirpes apresentou maior capacidade de se aderir. Constatou-se que altas temperaturas favoreceram o desenvolvimento do biofilme e baixas temperaturas retardaram esse processo.(AU)

Avaliação microscópica de superfícies de aço inoxidável usados em ensaios de biofilmes / Microscopic evaluation on stainless steel surfaces used in biofilm assays

Superfícies de aço inoxidável com especificações determinadas pela American Society for Testing and Materials (ASTM) são usadas em testes in vitro para simular a formação e a remoção de biofilmes. Muitas vezes estas superfícies são reutilizadas nos ensaios de formação de biofilmes. O objetivo deste trabalho foi avaliar se cupons de aço inoxidável anteriormente utilizados para formação de biofilmes multiespécies podem ser reutilizados em novos ensaios. Assim, cupons submetidos a diferentes procedimentos de higienização foram analisados por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e perfilometria . A reutilização das superfícies em novos experimentos deve ser realizada com cautela, aplicando procedimentos que removam as células bacterianas e a substância polimérica extracelular (EPS) aderidas na superfície. Além disso, observações da superfície (topografia e rugosidade) devem ser avaliadas, comprovando as especificações da ASTM.

Avaliação da capacidade de formação de biofilmes de Bacillus cereus isolados de produtos lácteos frente a diferentes temperaturas / Evaluation of the capacity to form biofilm by Bacillus cereus isolated from dairy products at different temperatures

Bacillus cereus encontra-se entre os patógenos de maior preocupação na indústria de alimentos por sua capacidade em formar biofilmes. Como resultado, podem contaminar os alimentos que entram em contato com as superfícies, representando dessa forma um obstáculo para conservação de leite e produtos lácteos, o que coloca em risco a saúde dos consumidores. Objetivou-se avaliar a capacidade de formação de biofilmes de estirpes de B. cereus frente à diferentes temperaturas encontradas na indústria de laticínios em superfície de aço inoxidável. A capacidade de formação de biofilme foi avaliada em diferentes temperaturas (5, 15, 25 e 32 ºC) e intervalos de tempo (24, 48,72, 96 e 120h). As estirpes de B. cereus apresentaram diferenças significativas nas temperaturas avaliadas e na capacidade de adesão, onde uma das estirpes apresentou maior capacidade de se aderir. Constatou-se que altas temperaturas favoreceram o desenvolvimento do biofilme e baixas temperaturas retardaram esse processo.

Salmonella Enteritidis forms biofilm under low temperatures on different food industry surfaces / Salmonella Enteritidis forma biofilme sob baixas temperaturas em diferentes superfícies da indústria de alimentos

We evaluated the influence of temperature on the ability of Salmonella Enteritidis (SE) to form biofilms on stainless steel, polyethylene, and polyurethane surfaces under different hygiene procedures. These materials were placed on SE culture and incubated at 42±1 ºC, 36±1 ºC, 25±1 ºC, 9±1 ºC, and 3±1 ºC for 4, 8, 12, and 24 h. Hot water at 45 ºC and 85 ºC, 0.5% peracetic acid solution, and 1% quaternary ammonia were used for hygienization. Biofilm formation occurred at all temperatures evaluated, highlighting at 3 ºC which has not been reported as an ideal temperature for the adhesion of SE to these materials. The SE adhered more often to polyethylene surfaces than to polyurethane and stainless steel surfaces (P<0.05). Peracetic acid and water at 85 ºC had similar hygienization efficiency (P<0.05) followed by quaternary ammonia whereas water at 45 ºC was not effective. SE adhered to these materials under low temperatures which to date have been deemed safe for food preservation.(AU)

Avaliou-se o efeito da temperatura na capacidade de Salmonella Enteritidis (SE) formar biofilme em superfícies de aço inoxidável, polietileno e poliuretano e diferentes processos de higienização. Corpos de prova destes materiais foram postos frente a culturas de SE e incubados a 42±1 ºC, 36±1 ºC, 25±1 ºC, 9±1 ºC e 3±1 ºC por 4, 8, 12 e 24 horas. Para a higienização foram testados água aquecida a 45ºC e 85 ºC e soluções de ácido peracético 0,5% e amônia quaternária 1%. Verificou-se a formação de biofilmes em todas as temperaturas avaliadas, ressaltando-se a 3 ºC, ainda não citada como propícia para adesão de SE. Houve maior adesão ao polietileno do que ao poliuretano e ao aço inoxidável (P<0.05). Para higienização, o ácido peracético e a água a 85 ºC tiveram ação semelhante (P<0.05), seguidos por amônia quaternária, enquanto que a água a 45 ºC não foi eficaz. Todos os materiais avaliados propiciaram a aderência de SE, mesmo sob temperaturas baixas, consideradas até então seguras para a conservação dos alimentos.(AU)

Molecular identification and microbiological evaluation of isolates from equipments and food contact surfaces in a hospital Food and Nutrition Unit / Avaliação microbiológica e identificação molecular de isolados de equipamentos e superfícies de contato com alimentos em um hospital Unidade de Alimentação e Nutrição

The hygienic and sanitary control in Food and Nutrition Units (FNU) is considered a standard procedure to produce adequate meals and reduce the risk of foodborne diseases and hospital infections. This study aimed to evaluate the isolation and identification of bacteria from equipment and food contact surfaces in a hospital FNU as well as to evaluate the sanitary condition. Likewise, it was analyzed the adhesion of the microorganisms on polyethylene cutting boards. The presence of aerobic mesophilic microorganisms, yeasts, molds, coagulase-positive staphylococci, coliform and fecal coliform, and Escherichia coli were analyzed on eating tables, countertop surfaces and cutting boards used for meat or vegetable handling, and equipment such as microwaves and refrigerators. The molecular identification it was done by 16S rRNA gene sequencing. The adhesion of the microorganisms (biofilm formation) on meat and vegetable cutting boards was also evaluated by scanning electron microscopy. The results showed high numbers of all microorganisms, except for E. coli , which was not observed in the samples. The molecular analysis identified species of the Enterobacteriaceae family and species of the Pseudomonadaceae family. Scanning electron microscopy analyses revealed bacterial adhesion on the cutting board surfaces. The results obtained in this study indicated that the hygienic conditions of surfaces like plastic cutting boards and equipment in this hospital FNU were inadequate. The achievement and application of standard operating procedures could positively help in the standardization of sanitary control, reducing the microbial contamination and providing a safe food to hospitalized patients.(AU)

O controle higiênico e sanitário nas Unidades de Alimentação e Nutrição (UAN) é considerado um procedimento padrão para produzir refeições adequadas e reduzir o risco de doenças transmitidas pelos alimentos e infecções hospitalares. Este estudo teve como objetivo isolar e identificar bactérias de equipamentos e superfícies de contato com alimentos em uma UAN hospitalar, bem como avaliar a condição sanitária. Do mesmo modo, analisou-se a adesão dos micro-organismos em tábuas de corte de polietileno. A presença de micro-organismos aeróbios mesófilos, leveduras, fungos, Sthapylococcus coagulase-positivos, coliformes, coliformes fecais e Escherichia coli foi analisadas na superfície de mesas do refeitório, superfícies de bancada e tábuas de corte usadas para manuseio de carne ou vegetais e, em equipamentos como micro-ondas e refrigeradores. A identificação molecular foi feita pelo sequenciamento do gene 16S rRNA. A adesão dos micro-organismos (formação de biofilmes) em tábuas de corte de carne e de vegetais também foi avaliada por microscopia eletrônica de varredura. Os resultados mostraram elevada contagem para todos os micro-organismos analisados, exceto para E. coli, a qual não foi observada nas amostras. A análise molecular identificou espécies da família Enterobacteriaceae e Pseudomonadaceae. A análise de microscopia eletrônica de varredura revelaram adesão bacteriana nas superfícies das placsa de corte. Os resultados obtidos neste estudo indicaram que as condições higiênicas das superfícies e de equipamentos nesta UAN hospitalar estavam inadequadas. A aplicação de procedimentos operacionais padrão poderia auxiliar positivamente na padronização do controle higiênico-sanitário, reduzindo a contaminação microbiana e fornecendo um alimento seguro para pacientes hospitalizados.(AU)

Bacillus cereus group: genetic aspects related to food safety and dairy processing / Grupo do Bacillus cereus: aspectos genéticos relacionados à segurança alimentar e ao processamento de derivados lácteos

Bacillus cereus group includes not pathogenic and high pathogenic species. They are considered as a risk to public health due to foodborne diseases and as an important cause of economic losses to industries due to production of spoilage enzymes. Some researches have been performed in order to assess the possible factors that contribute to put public health into risk because of consumption of food contaminated with viable cells or toxins which have complex mechanisms of production. The control of these bacteria in food is difficult because they are resistant to several processes used in industries. Thus, in this way, this review focused on highlighting the risk due to toxins production by bacteria from B. cereus group in food and the consequences for food safety and dairy industries.(AU)

Diversas espécies fazem parte do grupo de Bacillus cereus, desde algumas apatogênicas até outras com alta patogenicidade. Consistem em risco à saúde pública decorrentes de toxinfecções alimentares, além de causarem importantes perdas econômicas para as indústrias em virtude da produção de enzimas deteriorantes. O controle da contaminação em alimentos por esses micro-organismos é difícil, visto que são resistentes a vários tratamentos utilizados pelas indústrias. Assim, diante do exposto, esta revisão objetivou fornecer informações em relação aos aspectos genéticos desse grupo de bactérias e seus mecanismos de produção de toxinas, além de ressaltar a importância e as novas estratégias de controle para as companhias alimentícias e de laticínios.(AU)

Bacillus cereus group: genetic aspects related to food safety and dairy processing / Grupo do Bacillus cereus: aspectos genéticos relacionados à segurança alimentar e ao processamento de derivados lácteos

Bacillus cereus group includes not pathogenic and high pathogenic species. They are considered as a risk to public health due to foodborne diseases and as an important cause of economic losses to industries due to production of spoilage enzymes. Some researches have been performed in order to assess the possible factors that contribute to put public health into risk because of consumption of food contaminated with viable cells or toxins which have complex mechanisms of production. The control of these bacteria in food is difficult because they are resistant to several processes used in industries. Thus, in this way, this review focused on highlighting the risk due to toxins production by bacteria from B. cereus group in food and the consequences for food safety and dairy industries.(AU)

Diversas espécies fazem parte do grupo de Bacillus cereus, desde algumas apatogênicas até outras com alta patogenicidade. Consistem em risco à saúde pública decorrentes de toxinfecções alimentares, além de causarem importantes perdas econômicas para as indústrias em virtude da produção de enzimas deteriorantes. O controle da contaminação em alimentos por esses micro-organismos é difícil, visto que são resistentes a vários tratamentos utilizados pelas indústrias. Assim, diante do exposto, esta revisão objetivou fornecer informações em relação aos aspectos genéticos desse grupo de bactérias e seus mecanismos de produção de toxinas, além de ressaltar a importância e as novas estratégias de controle para as companhias alimentícias e de laticínios.(AU)

Molecular identification and microbiological evaluation of isolates from equipments and food contact surfaces in a hospital Food and Nutrition Unit

Abstract The hygienic and sanitary control in Food and Nutrition Units (FNU) is considered a standard procedure to produce adequate meals and reduce the risk of foodborne diseases and hospital infections. This study aimed to evaluate the isolation and identification of bacteria from equipment and food contact surfaces in a hospital FNU as well as to evaluate the sanitary condition. Likewise, it was analyzed the adhesion of the microorganisms on polyethylene cutting boards. The presence of aerobic mesophilic microorganisms, yeasts, molds, coagulase-positive staphylococci, coliform and fecal coliform, and Escherichia coli were analyzed on eating tables, countertop surfaces and cutting boards used for meat or vegetable handling, and equipment such as microwaves and refrigerators. The molecular identification it was done by 16S rRNA gene sequencing. The adhesion of the microorganisms (biofilm formation) on meat and vegetable cutting boards was also evaluated by scanning electron microscopy. The results showed high numbers of all microorganisms, except for E. coli , which was not observed in the samples. The molecular analysis identified species of the Enterobacteriaceae family and species of the Pseudomonadaceae family. Scanning electron microscopy analyses revealed bacterial adhesion on the cutting board surfaces. The results obtained in this study indicated that the hygienic conditions of surfaces like plastic cutting boards and equipment in this hospital FNU were inadequate. The achievement and application of standard operating procedures could positively help in the standardization of sanitary control, reducing the microbial contamination and providing a safe food to hospitalized patients.

Resumo O controle higiênico e sanitário nas Unidades de Alimentação e Nutrição (UAN) é considerado um procedimento padrão para produzir refeições adequadas e reduzir o risco de doenças transmitidas pelos alimentos e infecções hospitalares. Este estudo teve como objetivo isolar e identificar bactérias de equipamentos e superfícies de contato com alimentos em uma UAN hospitalar, bem como avaliar a condição sanitária. Do mesmo modo, analisou-se a adesão dos micro-organismos em tábuas de corte de polietileno. A presença de micro-organismos aeróbios mesófilos, leveduras, fungos, Sthapylococcus coagulase-positivos, coliformes, coliformes fecais e Escherichia coli foi analisadas na superfície de mesas do refeitório, superfícies de bancada e tábuas de corte usadas para manuseio de carne ou vegetais e, em equipamentos como micro-ondas e refrigeradores. A identificação molecular foi feita pelo sequenciamento do gene 16S rRNA. A adesão dos micro-organismos (formação de biofilmes) em tábuas de corte de carne e de vegetais também foi avaliada por microscopia eletrônica de varredura. Os resultados mostraram elevada contagem para todos os micro-organismos analisados, exceto para E. coli, a qual não foi observada nas amostras. A análise molecular identificou espécies da família Enterobacteriaceae e Pseudomonadaceae. A análise de microscopia eletrônica de varredura revelaram adesão bacteriana nas superfícies das placsa de corte. Os resultados obtidos neste estudo indicaram que as condições higiênicas das superfícies e de equipamentos nesta UAN hospitalar estavam inadequadas. A aplicação de procedimentos operacionais padrão poderia auxiliar positivamente na padronização do controle higiênico-sanitário, reduzindo a contaminação microbiana e fornecendo um alimento seguro para pacientes hospitalizados.

Relationship between virulence factor genes in coagulase-negative Staphylococcus spp. and failure of antimicrobial treatment of subclinical mastitis in sheep / Relação entre genes de fatores de virulência em Staphylococcus spp. coagulase-negativos e a falha do tratamento antimicrobiano da mastite subclínica ovina

Coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) are the main microorganisms involved in ovine mastitis. Treatment at the end of lactation can contribute towards cure and prevention of subclinical cases during the subsequent lactation. However, virulence factors and resistance mechanisms presented by CNS can decrease cure rates. The aims of the study were to identify the species of CNS in milk of mastitic ewes with and without antimicrobial treatment, and to investigate the presence of genes relating to resistance of β-lactam antimicrobials, formation of biofilms, production of enterotoxins and production of the toxic shock syndrome toxin. Cases of failure in the treatment were related with the presence/absence of the respective genes. Sixty sheep were divided into three groups: G1, without treatment; G2, animals treated via the intramammary route with 100mg of cloxacillin during drying off; and G3, sheep treated via the intramammary route with 50 mg of nanoparticulate cloxacillin. Milk samples were gathered during drying off and 15 and 30 days after the parturition of the subsequent lactation. The analyses to identify the species of CNS were carried out by means of the internal transcribe spacer technique and the investigation of the genes responsible for the virulence factors and resistance to oxacillin was performed using the polymerase chain reaction (PCR) technique. No sample was positive for the mecA gene. The only gene relating to production of enterotoxins was sec. Among the genes relating to production of biofilm, icaD was the only one identified in the three experimental groups. Staphylococcus warneri was the main species of CNS isolated during the pre and post-partum periods of the sheep. The species carrying genes relating to production of enterotoxins and biofilms were present in uncured sheep.(AU)

Staphylococus spp. coagulase-negativos (SCN) estão entre os principais micro-organismos envolvidos na mastite ovina. O tratamento ao final da lactação pode contribuir com a cura e a prevenção de casos subclínicos durante a lactação seguinte. Todavia, fatores de virulência e mecanismos de resistência apresentados por SCN podem reduzir as taxas de cura. Os objetivos desse estudo foram identificar as espécies de SCN no leite de ovelhas com mastite com e sem tratamento antimicrobiano e investigar a presença de genes relacionados com resistência a antibióticos beta lactâmicos, formação de biofilmes, produção de enterotoxinas e produção da toxina da síndrome do choque tóxico. Casos de falhas no tratamento foram relacionados com a presença/ausência dos respectivos genes. Sessenta ovelhas foram divididas em três grupos: G1, sem tratamento; G2, animais tratados via intramamária com 100mg de cloxacilina antes da secagem; e G3, ovelhas tratadas via intramamária com 50 mg de cloxacilina nanoparticulada. Amostras de leite foram obtidas durante a secagem e 15 e 30 dias depois do parto na lactação seguinte. As análises para identificar as espécies de SCN foram conduzidas por meio da técnica de Internal transcribe spacer e a investigação dos genes responsáveis pelos fatores de virulência e resistência à oxacilina foi realizada usando a técnica reação em cadeia da polimerase. Nenhuma amostra foi positiva para o gene mecA. O único gene relacionado com a produção de enterotoxinas foi o sec. Dentre os genes relacionados com a produção de biofilme, icaD foi o único identificado nos três grupos experimentais. Staphylococcus warneri foi a principal espécie de SCN isolada durante o pré e pós-parto. As espécies que apresentaram genes relacionados com a produção de enterotoxinas e biofilmes estavam presentes nas ovelhas não curadas.(AU)

Relationship between virulence factor genes in coagulase-negative Staphylococcus spp. and failure of antimicrobial treatment of subclinical mastitis in sheep / Relação entre genes de fatores de virulência em Staphylococcus spp. coagulase-negativos e a falha do tratamento antimicrobiano da mastite subclínica ovina

Coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) are the main microorganisms involved in ovine mastitis. Treatment at the end of lactation can contribute towards cure and prevention of subclinical cases during the subsequent lactation. However, virulence factors and resistance mechanisms presented by CNS can decrease cure rates. The aims of the study were to identify the species of CNS in milk of mastitic ewes with and without antimicrobial treatment, and to investigate the presence of genes relating to resistance of β-lactam antimicrobials, formation of biofilms, production of enterotoxins and production of the toxic shock syndrome toxin. Cases of failure in the treatment were related with the presence/absence of the respective genes. Sixty sheep were divided into three groups: G1, without treatment; G2, animals treated via the intramammary route with 100mg of cloxacillin during drying off; and G3, sheep treated via the intramammary route with 50 mg of nanoparticulate cloxacillin. Milk samples were gathered during drying off and 15 and 30 days after the parturition of the subsequent lactation. The analyses to identify the species of CNS were carried out by means of the internal transcribe spacer technique and the investigation of the genes responsible for the virulence factors and resistance to oxacillin was performed using the polymerase chain reaction (PCR) technique. No sample was positive for the mecA gene. The only gene relating to production of enterotoxins was sec. Among the genes relating to production of biofilm, icaD was the only one identified in the three experimental groups. Staphylococcus warneri was the main species of CNS isolated during the pre and post-partum periods of the sheep. The species carrying genes relating to production of enterotoxins and biofilms were present in uncured sheep.(AU)

Staphylococus spp. coagulase-negativos (SCN) estão entre os principais micro-organismos envolvidos na mastite ovina. O tratamento ao final da lactação pode contribuir com a cura e a prevenção de casos subclínicos durante a lactação seguinte. Todavia, fatores de virulência e mecanismos de resistência apresentados por SCN podem reduzir as taxas de cura. Os objetivos desse estudo foram identificar as espécies de SCN no leite de ovelhas com mastite com e sem tratamento antimicrobiano e investigar a presença de genes relacionados com resistência a antibióticos beta lactâmicos, formação de biofilmes, produção de enterotoxinas e produção da toxina da síndrome do choque tóxico. Casos de falhas no tratamento foram relacionados com a presença/ausência dos respectivos genes. Sessenta ovelhas foram divididas em três grupos: G1, sem tratamento; G2, animais tratados via intramamária com 100mg de cloxacilina antes da secagem; e G3, ovelhas tratadas via intramamária com 50 mg de cloxacilina nanoparticulada. Amostras de leite foram obtidas durante a secagem e 15 e 30 dias depois do parto na lactação seguinte. As análises para identificar as espécies de SCN foram conduzidas por meio da técnica de Internal transcribe spacer e a investigação dos genes responsáveis pelos fatores de virulência e resistência à oxacilina foi realizada usando a técnica reação em cadeia da polimerase. Nenhuma amostra foi positiva para o gene mecA. O único gene relacionado com a produção de enterotoxinas foi o sec. Dentre os genes relacionados com a produção de biofilme, icaD foi o único identificado nos três grupos experimentais. Staphylococcus warneri foi a principal espécie de SCN isolada durante o pré e pós-parto. As espécies que apresentaram genes relacionados com a produção de enterotoxinas e biofilmes estavam presentes nas ovelhas não curadas.(AU)

Relationship between virulence factor genes in coagulase-negative Staphylococcus spp. and failure of antimicrobial treatment of subclinical mastitis in sheep

ABSTRACT: Coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) are the main microorganisms involved in ovine mastitis. Treatment at the end of lactation can contribute towards cure and prevention of subclinical cases during the subsequent lactation. However, virulence factors and resistance mechanisms presented by CNS can decrease cure rates. The aims of the study were to identify the species of CNS in milk of mastitic ewes with and without antimicrobial treatment, and to investigate the presence of genes relating to resistance of -lactam antimicrobials, formation of biofilms, production of enterotoxins and production of the toxic shock syndrome toxin. Cases of failure in the treatment were related with the presence/absence of the respective genes. Sixty sheep were divided into three groups: G1, without treatment; G2, animals treated via the intramammary route with 100mg of cloxacillin during drying off; and G3, sheep treated via the intramammary route with 50 mg of nanoparticulate cloxacillin. Milk samples were gathered during drying off and 15 and 30 days after the parturition of the subsequent lactation. The analyses to identify the species of CNS were carried out by means of the internal transcribe spacer technique and the investigation of the genes responsible for the virulence factors and resistance to oxacillin was performed using the polymerase chain reaction (PCR) technique. No sample was positive for the mecA gene. The only gene relating to production of enterotoxins was sec. Among the genes relating to production of biofilm, icaD was the only one identified in the three experimental groups. Staphylococcus warneri was the main species of CNS isolated during the pre and post-partum periods of the sheep. The species carrying genes relating to production of enterotoxins and biofilms were present in uncured sheep.

RESUMO: Staphylococus spp. coagulase-negativos (SCN) estão entre os principais micro-organismos envolvidos na mastite ovina. O tratamento ao final da lactação pode contribuir com a cura e a prevenção de casos subclínicos durante a lactação seguinte. Todavia, fatores de virulência e mecanismos de resistência apresentados por SCN podem reduzir as taxas de cura. Os objetivos desse estudo foram identificar as espécies de SCN no leite de ovelhas com mastite com e sem tratamento antimicrobiano e investigar a presença de genes relacionados com resistência a antibióticos beta lactâmicos, formação de biofilmes, produção de enterotoxinas e produção da toxina da síndrome do choque tóxico. Casos de falhas no tratamento foram relacionados com a presença/ausência dos respectivos genes. Sessenta ovelhas foram divididas em três grupos: G1, sem tratamento; G2, animais tratados via intramamária com 100mg de cloxacilina antes da secagem; e G3, ovelhas tratadas via intramamária com 50 mg de cloxacilina nanoparticulada. Amostras de leite foram obtidas durante a secagem e 15 e 30 dias depois do parto na lactação seguinte. As análises para identificar as espécies de SCN foram conduzidas por meio da técnica de Internal transcribe spacer e a investigação dos genes responsáveis pelos fatores de virulência e resistência à oxacilina foi realizada usando a técnica reação em cadeia da polimerase. Nenhuma amostra foi positiva para o gene mecA. O único gene relacionado com a produção de enterotoxinas foi o sec. Dentre os genes relacionados com a produção de biofilme, icaD foi o único identificado nos três grupos experimentais. Staphylococcus warneri foi a principal espécie de SCN isolada durante o pré e pós-parto. As espécies que apresentaram genes relacionados com a produção de enterotoxinas e biofilmes estavam presentes nas ovelhas não curadas.

Molecular identification and microbiological evaluation of isolates from equipments and food contact surfaces in a hospital Food and Nutrition Unit

Abstract The hygienic and sanitary control in Food and Nutrition Units (FNU) is considered a standard procedure to produce adequate meals and reduce the risk of foodborne diseases and hospital infections. This study aimed to evaluate the isolation and identification of bacteria from equipment and food contact surfaces in a hospital FNU as well as to evaluate the sanitary condition. Likewise, it was analyzed the adhesion of the microorganisms on polyethylene cutting boards. The presence of aerobic mesophilic microorganisms, yeasts, molds, coagulase-positive staphylococci, coliform and fecal coliform, and Escherichia coli were analyzed on eating tables, countertop surfaces and cutting boards used for meat or vegetable handling, and equipment such as microwaves and refrigerators. The molecular identification it was done by 16S rRNA gene sequencing. The adhesion of the microorganisms (biofilm formation) on meat and vegetable cutting boards was also evaluated by scanning electron microscopy. The results showed high numbers of all microorganisms, except for E. coli , which was not observed in the samples. The molecular analysis identified species of the Enterobacteriaceae family and species of the Pseudomonadaceae family. Scanning electron microscopy analyses revealed bacterial adhesion on the cutting board surfaces. The results obtained in this study indicated that the hygienic conditions of surfaces like plastic cutting boards and equipment in this hospital FNU were inadequate. The achievement and application of standard operating procedures could positively help in the standardization of sanitary control, reducing the microbial contamination and providing a safe food to hospitalized patients.

Resumo O controle higiênico e sanitário nas Unidades de Alimentação e Nutrição (UAN) é considerado um procedimento padrão para produzir refeições adequadas e reduzir o risco de doenças transmitidas pelos alimentos e infecções hospitalares. Este estudo teve como objetivo isolar e identificar bactérias de equipamentos e superfícies de contato com alimentos em uma UAN hospitalar, bem como avaliar a condição sanitária. Do mesmo modo, analisou-se a adesão dos micro-organismos em tábuas de corte de polietileno. A presença de micro-organismos aeróbios mesófilos, leveduras, fungos, Sthapylococcus coagulase-positivos, coliformes, coliformes fecais e Escherichia coli foi analisadas na superfície de mesas do refeitório, superfícies de bancada e tábuas de corte usadas para manuseio de carne ou vegetais e, em equipamentos como micro-ondas e refrigeradores. A identificação molecular foi feita pelo sequenciamento do gene 16S rRNA. A adesão dos micro-organismos (formação de biofilmes) em tábuas de corte de carne e de vegetais também foi avaliada por microscopia eletrônica de varredura. Os resultados mostraram elevada contagem para todos os micro-organismos analisados, exceto para E. coli, a qual não foi observada nas amostras. A análise molecular identificou espécies da família Enterobacteriaceae e Pseudomonadaceae. A análise de microscopia eletrônica de varredura revelaram adesão bacteriana nas superfícies das placsa de corte. Os resultados obtidos neste estudo indicaram que as condições higiênicas das superfícies e de equipamentos nesta UAN hospitalar estavam inadequadas. A aplicação de procedimentos operacionais padrão poderia auxiliar positivamente na padronização do controle higiênico-sanitário, reduzindo a contaminação microbiana e fornecendo um alimento seguro para pacientes hospitalizados.

Efeito da gelatina incolor e comercial associada a extratos vegetais como revestimento comestível na pós-colheita do morango / Effect of gelatine colourless and commercial associated with plant extracts as edible coating in strawberry post-harves

In order to preserve the shelf life of the strawberry and other fruits for as long as possible, technologies are presently being studied to increase in post-harvest durability. The aim of this paper was to assess the effect of gelatine associated to vegetable extracts in the post-harvest life of strawberries. The strawberries were obtained from a commercial cultivation, in the town of Goioerê/PR. Four successive treatments of five repetitions were applied, being: 1st Witness (only the strawberries); 2nd Gelatine; 3rd Gelatine with peppermint vegetable extract; 4th Gelatine with clove vegetable extract. The analyses made were of the pH, titratableacidity, soluble solids, ratio, loss of mass and visual assessment. The results obtained show that the biofilms were not sufficient to prolong the life of the strawberries.

Para que a vida de prateleira do morango e outras frutas sejam preservadas pelo maior período possível, atualmente são estudadas tecnologias que visam o aumento da durabilidade pós-colheita. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da gelatina associada a extratos vegetais na vida útil pós-colheita do morango. Os morangos foram adquiridos em cultivo comercial, na cidade de Goioerê/PR. Foram aplicados quatro tratamentos seguidos de cinco repetições, sendo: 1º Tratamento controle (só os morangos); 2º Gelatina; 3º Gelatina com extrato vegetal de hortelã e 4º Gelatina com extrato vegetal de cravo da índia. As análises realizadas foram de pH, acidez titulável, sólidos solúveis, ratio, perda de massa e avaliação visual. Os resultados obtidos demonstram que os biofilmes de gelatina comercial e incolor associada a extratos vegetais não foram suficientes para prolongar a vida útil do morango.

Efeito da gelatina incolor e comercial associada a extratos vegetais como revestimento comestível na pós-colheita do morango / Effect of gelatine colourless and commercial associated with plant extracts as edible coating in strawberry post-harves

In order to preserve the shelf life of the strawberry and other fruits for as long as possible, technologies are presently being studied to increase in post-harvest durability. The aim of this paper was to assess the effect of gelatine associated to vegetable extracts in the post-harvest life of strawberries. The strawberries were obtained from a commercial cultivation, in the town of Goioerê/PR. Four successive treatments of five repetitions were applied, being: 1st Witness (only the strawberries); 2nd Gelatine; 3rd Gelatine with peppermint vegetable extract; 4th Gelatine with clove vegetable extract. The analyses made were of the pH, titratableacidity, soluble solids, ratio, loss of mass and visual assessment. The results obtained show that the biofilms were not sufficient to prolong the life of the strawberries.(AU)

Para que a vida de prateleira do morango e outras frutas sejam preservadas pelo maior período possível, atualmente são estudadas tecnologias que visam o aumento da durabilidade pós-colheita. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da gelatina associada a extratos vegetais na vida útil pós-colheita do morango. Os morangos foram adquiridos em cultivo comercial, na cidade de Goioerê/PR. Foram aplicados quatro tratamentos seguidos de cinco repetições, sendo: 1º Tratamento controle (só os morangos); 2º Gelatina; 3º Gelatina com extrato vegetal de hortelã e 4º Gelatina com extrato vegetal de cravo da índia. As análises realizadas foram de pH, acidez titulável, sólidos solúveis, ratio, perda de massa e avaliação visual. Os resultados obtidos demonstram que os biofilmes de gelatina comercial e incolor associada a extratos vegetais não foram suficientes para prolongar a vida útil do morango.(AU)

Viabilidade, resistência antimicrobiana e ação antagônica de Lactobacillus spp. isolados de leites fermentados frente a cepas de Listeria monocitogenes

Objetivou-se analisar a viabilidade, resistência antimicrobiana e a ação antagônica de Lactobacillus spp. isolados de leites fermentados frente a cepas de Listeria monocitogenes. Foram analisadas nove marcas de leites fermentados comerciais, adquiridas em duplicata, e inicialmente foram submetidas a avaliação da rotulagem, onde se utilizou padrões estabelecidos pela legislação brasileira. Em seguida, realizou-se a medição do pH e a avaliação da viabilidade das amostras, por contagem de Lactobacillus spp. Posteriormente foram realizados o isolamento de Lactobacillus spp. e a avaliação do perfil de resistência a antimicrobianos e a detecção da atividade antagonista dos isolados. Analisou ainda a capacidade dos isolados formarem biofilmes in vitro e sua ação frente a biofilmes consolidados de L. monocytogenes. Por fim, realizou-se a co-inoculação experimental com L. monocytogenes durante dez dias. Todos os leites fermentados avaliados se apresentaram conformes, de acordo com a legislação de rotulagem. Constatou-se que os valores de pH das amostras não apresentaram diferença acentuada, verificando-se valores entre 3,60 a 4,53 e que os produtos apresentaram viabilidade, do ponto de vista da presença de Lactobacillus spp.. Nove cepas de Lactobacillus spp. foram isoladas e todas apresentaram resistência a pelo menos um dos antimicrobianos testados. 66,66% (06/09) dos isolados se apresentaram resistentes à vancomicina, à ciproflaxicina e à gentamicina. Foram resistentes à oxacilina, 88,88% (08/09) das cepas. Já para ceftazidima e penicilina, constatou-se uma resistência de 100% (09/09). Tetraciclina e clindamicina apresentaram maior sensibilidade às cepas, onde o primeiro apresentou 33,33% (03/09) dos isolados resistentes e o segundo um percentual de apenas 11,11% (01/09) de resistência. As nove cepas foram submetidas a análise da atividade antagonista, onde não se observou inibição do crescimento de L. monocytogenes. As mesmas cepas também foram submetidas a avaliação da capacidade de formar biofilmes microbianos e cinco delas foram classificadas como fortes formadoras de biofilme e essas foram testadas frente a biofilmes consolidados de L. monocytogenes, no entanto nenhuma obteve resultado satisfatório. Na inoculação experimental, foi observado o crescimento da cepa de L. monocytogenes, em todas as amostras, ao longo dos dez dias analisados, bem como se percebeu que não houve redução nas populações de BAL que foram inoculadas com o patógeno. Nesse contexto, o consumo de leites fermentados pode trazer benefícios para a saúde da população, principalmente quando apresentam bactérias consideradas probióticas. A pesquisa de bactérias do gênero Lactobacillus nos produtos forneceu dados favoráveis, pois evidenciou que todas as amostras esses microrganismos ativos e viáveis. Foi possível constatar que não houve falhas na rotulagem, de acordo com às normas de produtos de origem animal nos leites fermentados analisados, no entanto destaca-se a presença de embalagens que estimulam o consumo do produto pelo público infantil, bem como a não identificação da alegação de produto probiótico na maioria das amostras. Também foi possível observar que, apesar da presença de Lactobacillus spp, não houve inibição do patógeno L. monocytogenes em todas as análises realizadas, não se evidenciando efeito bacteriocinogênico nos microrganismos que compõem os leites fermentados comerciais analisados. Além disso, é importante destacar que é fundamental a realização de análises voltadas à resistência de bactérias do grupo L. casei a antimicrobianos, sendo preciso realizar uma seleção de cepas comerciais que, comprovadamente, não apresentem resistência adquirida a antimicrobianos para a composição de produtos como os leites fermentados, tendo em vista que essa pesquisa constatou resistência de cepas de Lactobacillus spp. aos antimicrobianos testados.

The aim of this study was to analyze the viability, antimicrobial resistance and antagonistic action of Lactobacillus spp. isolated from fermented milk against Listeria monocytogenes strains. Nine brands of commercial fermented milk, purchased in duplicate, were analyzed and initially subjected to labeling evaluation, using standards established by Brazilian legislation. Then, the pH was measured and the viability of the samples was evaluated by counting Lactobacillus spp. Later, the isolation of Lactobacillus spp. and the evaluation of the antimicrobial resistance profile and the detection of the antagonistic activity of the isolates. It also analyzed the capacity of isolates to form biofilms in vitro and their action against consolidated biofilms of L. monocytogenes. Finally, experimental co-inoculation with L. monocytogenes was carried out for ten days. All the fermented milks evaluated were in compliance with the labeling legislation. It was found that the pH values of the samples did not show a marked difference, with values between 3.60 to 4.53 and that the products showed viability, from the point of view of the presence of Lactobacillus spp. Nine strains of Lactobacillus spp. were isolated and all showed resistance to at least one of the antimicrobials tested. 66.66% (06/09) of the isolates were resistant to vancomycin, ciproflaxicin and gentamicin. 88.88% (08/09) of the strains were resistant to oxacillin. As for ceftazidime and penicillin, a resistance of 100% was found (09/09). Tetracycline and clindamycin showed greater sensitivity to strains, where the first showed 33.33% (03/09) of resistant isolates and the second a percentage of only 11.11% (01/09) of resistance. The nine strains were subjected to analysis of antagonist activity, where no inhibition of L. monocytogenes growth was observed. The same strains were also submitted to evaluation of their ability to form microbial biofilms and five of them were classified as strong biofilm formers and these were tested against consolidated biofilms of L. monocytogenes, however none of them had a satisfactory result. In the experimental inoculation, the growth of the L. monocytogenes strain was observed, in all samples, over the ten days analyzed, and it was noticed that there was no reduction in the populations of BAL that were inoculated with the pathogen. In this context, the consumption of fermented milk can bring benefits to the health of the population, especially when they contain bacteria considered to be probiotic. The research of bacteria of the Lactobacillus genus in the products provided favorable data, as it showed that all samples had these active and viable microorganisms. It was found that there were no labeling failures, in accordance with the standards for animal products in the analyzed fermented milk, however, the presence of packaging that encourages the consumption of the product by children, as well as the non-identification of the product, stands out. probiotic product claim in most samples. It was also possible to observe that, despite the presence of Lactobacillus spp, there was no inhibition of the pathogen L. monocytogenes in all the analyzes performed, with no evidence of a bacteriocinogenic effect on the microorganisms that make up the commercial fermented milk analyzed. In addition, it is important to highlight that it is essential to carry out analyzes aimed at the resistance of bacteria of the L. casei group to antimicrobials, it being necessary to carry out a selection of commercial strains that, demonstrably, do not show acquired resistance to antimicrobials for the composition of products such as fermented milks, considering that this research found resistance of strains of Lactobacillus spp. to tested antimicrobials.

FATORES DE PATOGENICIDADE DE Staphylococcus spp. EM LEITE DE VACAS COM TRATAMENTO NÃO CONVENCIONAL DA MASTITE

Objetivou-se caracterizar e comparar a formação de biofilme, suscetibilidade a antimicrobianos in vitro, presença e distribuição de genes de virulência e de resistência antimicrobiana, além de determinar a diversidade clonal de estirpes de Staphylococcus spp. isoladas em leite de vacas tratadas e não tratadas com homeopatia. Os isolados de Staphylococcus spp. foram identificados por reação em cadeia da polimerase-espaço transcrito interno (ITS-PCR) e foram investigados quanto a presença dos genes sea, seb, sec, sed, see, tsst-1, pvl e eta codificadores de toxinas, dos genes icaABCD, bap, aap, atlE e bhp relacionados com a produção de biofilme e dos genes blaZ e mecA associados com a resistência antimicrobiana. Amostras mecA positivas foram tipadas para o tipo SCCmec por Multiplex Polymerase Chain Reaction (PCR Multiplex), enquanto a pesquisa de produção in vitro de bioflme ocorreu pelo método de aderência em placas de poliestireno. O perfil de resistência antimicrobiana foi determinado pelo método de disco-difusão em ágar e o perfil de restrição enzimática por Pulsed-Field Gel Electroforesis (PFGE). Clusters de S. aureus e S. epidermidis com três ou mais isolados tiveram uma linhagem selecionada para tipagem por Multilocus Sequence Typing (MLST), cujas sequências foram analisadas por banco de dados (http://www.mlst.net). Verificou-se prevalência de S. aureus (50,5%), que apresentou distribuição semelhante nos dois grupos, enquanto Staphylococcus spp. coagulase-negativos (CoNS) (70,8%) foram frequentes em vacas tratadas (p=0,036). O gene sec ocorreu apenas em S. chromogenes, com maior frequência em animais tratados (p=0,004) e o gene pvl foi encontrado em 66,7% de S. aureus. O operon icaADBC e os genes icaA e icaD associados prevaleceram em S. aureus, porém o gene icaD foi predominante no grupo de vacas tratadas (p=0,012). Os genes atlE e aap foram carreados apenas por S. epidermidis. Entre as estirpes com produção de biofilme in vitro, 76,8% continham pelo menos um gene relacionado com esta característica. Os genes mecA e Blaz apresentaram distribuição similar em vacas tratadas e não tratadas, porém mecA foi identificado apenas em S. epidermidis (12,1%), todos tipados como SCCmec tipo I. A susceptibilidade antimicrobiana revelou um perfil de multirresistência em 29,3% das estirpes. Houve predominância de um cluster majoritário em S. epidermidis e S. chromogenes, o que não ocorreu para S. aureus. A sequência do tipo (ST) 81 foi predominante em S. epidermidis, enquanto as STs 1, 5 e 126 em S. aureus. A presença de genes de toxinas, resistência antimicrobiana e biofilme, bem como a produção in vitro deste fator de patogenicidade, aliados à persistência de perfis clonais bacterianos, demonstram que sistemas em transição para manejos orgânicos podem representar risco à saúde pública pela circulação de patógenos zoonóticos em leite bovino. Medidas eficazes devem ser tomadas no controle dos produtos lácteos e manejo dos animais.

The present study aimed to characterize and compare biofilm formation, in vitro antimicrobial susceptibility, and the presence and distribution of virulence and antimicrobial resistance genes, as well as to determine the clonal diversity of Staphylococcus spp. strains isolated in milk from cows treated or not with homeopathy. The Staphylococcus spp. isolates were identified by polymerase chain reaction targeting the internal transcribed spacer (ITS-PCR) and were investigated regarding the presence of the sea, seb, sec, sed, see, tsst-1, pvl, and eta toxin-encoding genes, the icaABCD, bap, aap, atlE, and bhp genes, related to the production of biofilm, and the blaZ and mecA genes, which are associated with antimicrobial resistance. mecA-positive samples were typed for SCCmec by Multiplex Polymerase Chain Reaction (Multiplex PCR), while the assessment of in vitro biofilm production was carried out using the polystyrene plate adhesion method. The antimicrobial resistance profile was determined using the agar disc diffusion method, and the enzyme restriction profile, by Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE). Clusters of S. aureus and S. epidermidis with three or more isolates had one strain selected for typing by Multilocus Sequence Typing (MLST), and the sequences were analyzed on an online database (http://www.mlst.net). A 50.5% prevalence of S. aureus was observed, with similar distribution in both groups, while coagulase-negative Staphylococcus spp. (CoNS) were frequent (70.8%) in treated cows (p=0.036). The sec gene was found only in S. chromogenes and more frequently in treated animals (p=0.004), while the pvl gene was observed in 66.7% of the S. aureus. The icaADBC operon and the associated icaA and icaD genes prevailed in S. aureus, although the icaD gene was predominant in the treated cows group (p=0.012). The atlE and aap genes were carried only by S. epidermidis. Among the strains presenting in vitro biofilm production, 76.8% had at least one gene related to this trait. The mecA and Blaz genes exhibited similar distribution in treated and untreated cows, although mecA was identified only in S. epidermidis (12.1%), all of which were typed as SCCmec type I. The antimicrobial susceptibility assay revealed a multiresistance profile in 29.3% of the strains. There was a predominance of a major cluster in S. epidermidis and S. chromogenes, which did not occur for S. aureus. Sequence type (ST) 81 was predominant in S. epidermidis, while STs 1, 5, and 126 were prevalent in S. aureus. The presence of genes related to toxin production, antimicrobial resistance, and biofilm formation, as well as the in vitro production of this pathogenicity factor, combined with the persistence of bacterial clonal profiles, demonstrate that systems in transition to organic management can represent a risk to public health due to the circulation of zoonotic pathogens in bovine milk. Effective measures must be taken to control dairy products and animal management.

ATIVIDADE ANTIMICROBIANA E ANTIOXIDANTE DE SOLANUM AMERICANUM E SOLANUM CORYMBIFLORUM COM POTENCIAL USO EM ENFERMIDADES DE REBANHOS LEITEIROS

A mastite é uma inflamação da glândula mamária que tem como causa principal infecções bacterianas. É a doença que mais utiliza antimicrobianos no sistema de produção, comprometendo a sustentabilidade e gerando problemas de saúde pública. Seguindo o conhecimento tradicional de povos nativos, que utilizam solanáceas para tratamento de mastite, o objetivo desse estudo foi realizar uma pesquisa bio-guiada sobre a atividade antimicrobiana e antioxidante a partir da elaboração de extratos: aquoso (AQU), metanólico (MET) e alcaloídico (ALK), das espécies de Solanum americanum (SA) e Solanum corymbiflorum (SC). Os extratos foram utilizados em ensaio de microdiluição em caldo e coloração com cristal violeta, para avaliar a multiplicação bacteriana e a formação do biofilme de Staphylococcus aureus e Escherichia coli, e à reação com o radical DPPH, para avaliar a capacidade antioxidante. Os dados de absorbância foram obtidos por densidade ótica e submetidos à análise de variância (ANOVA). As médias foram comparadas pelos testes de Dunnett e Tukey, adotando um nível de significância de P<0.05. Seguindo a pesquisa bio-guiada, os extratos que apresentaram atividade biológica foram submetidos à caracterização química através de cromatografia em camada delgada (CCD), cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e espectrometria de massas (EM) de alta resolução. O extrato AQU de SA estimulou a multiplicação de S. aureus e E. coli. O extrato MET de SC estimulou a formação do biofilme para S. aureus, mas reduziu essa capacidade em relação à E. coli. O extrato ALK de ambas as espécies inibiu a formação de biofilme de S. aureus. Com base na comparação de dados quanto à massa exata, via de fragmentação e ao espectro UV, foi possível indicar a presença do alcaloide N-trans-feruloiltiramina (m/z 314.1382) no extrato ALK de SA. Todos os extratos de SA e o extrato MET de SC à 250 g/mL apresentaram mais de 50% de atividade antioxidante. Os resultados obtidos nestes ensaios in vitro podem estar relacionados ao conhecimento tradicional que utiliza folhas de SC no tratamento e redução dos sintomas da mastite. O presente estudo evidenciou a inibição da formação do biofilme de S. aureus e a ação antioxidante como potenciais modos de atuação dos compostos ativos.

Mastitis is a mammary gland inflammation caused mainly by bacterial infections. It is the disease that most uses antimicrobials in the production system, compromising sustainability and generating public health problems, such as the development of resistant strains. Following the traditional knowledge of native tribes, who use solanaceous to treat mastitis, the aim of this study was to conduct a bio-guided research on antimicrobial and antioxidant activity based on elaboration of extracts: aqueous (AQU), methanolic (MET), and alkaloid (ALK), from the species Solanum americanum (SA) and Solanum corymbiflorum (SC). The extracts were used in a broth microdilution assay and stained with violet crystal, to evaluate the bacterial growth and biofilm formation of Staphylococcus aureus and Escherichia coli, and to the reaction with the radical DPPH, to evaluate the antioxidant capacity. The absorbance data were obtained by optical density and subjected to statistical analysis (ANOVA). The means compared by the Dunnett and Tukey tests, adopting a significance level of P<0.05. Following bio-guided research, extracts that showed biological activity were subjected to chemical characterization through thin layer chromatography (TLC), high-performance liquid chromatography (HPLC), and high-resolution mass spectrometry (HRMS). AQU extract of SA stimulated the growth of S. aureus and E. coli. MET extract of SC stimulated biofilm formation for S. aureus but reduced this ability for E. coli. The ALK extract from both species inhibited biofilm formation S. aureus. Based on the data comparison of exact mass, fragmentation pathway and UV spectrum, it was possible to indicate the presence of the alkaloid N-trans-feruloyltyramine (m/z 314.1382) in the ALK extract of SA. All the extracts of SA and the MET extract of SC at 250 g/mL showed more than 50% of antioxidant activity. The results obtained in these in vitro tests may be related to the traditional knowledge that uses SC leaves in the treatment and reduction of mastitis symptoms. The present study showed the inhibition of the biofilm formation of S. aureus and the antioxidant action as potential modes of action of the active compounds.

Biofilm formation of Shiga toxin-producing Escherichia coli O153 H25, O113 H21 and O111 H8 on the stainless steel surface and the effectiveness of sanitizer / Formação de biofilmes de Escherichia coli produtora de toxina Shiga sorotipos O153 H25, O113 H21 e O111 H8 em superfície de aço inoxidável e eficácia de sanitizante

This study aimed at evaluating the biofilm formation of Shiga toxin-producing Escherichia coli O153:H25, O113:H21 and O111:H8 (STEC non-O157), isolated from Brazilian cattle, on the stainless steel surface, and also the efficacy of different s concentrations of sodium hypochlorite for inactivating these biofilms. The ability to form biofilm was demonstrated in all of Shiga toxin-producing E. coli strains. In assessing the effectiveness of sodium hypochlorite sanitizer, a reduction to 1 log CFU/cm2 was observed in all of the evaluated strains and times. These data strengthen the relevance of the correct cleaning procedure, considering that biofilms formations might be an important source of food contamination(AU)

Neste estudo as cepas de Escherichia coli produtora de toxina Shiga (STEC) O153:H25, O113:H21 e O111:H8, isoladas de rebanhos do país, foram avaliadas quanto à capacidade de formar biofilmes em superfície de aço inoxidável utilizada na indústria de alimentos, bem como a eficácia de diferentes concentrações de hipoclorito de sódio na inativação desses biofilmes. A capacidade de formação de biofilme foi detectada em todas as cepas de E. coli produtoras de toxina Shiga. Na avaliação da eficácia do sanitizante hipoclorito de sódio, nas concentrações de 100 mg.L-1 e 200 mg.L-1, observou-se a redução a 1 log UFC/cm2 em todas as cepas e nos tempos avaliados. Estes dados reforçam a importância do correto procedimento de higienização, uma vez que biofilmes podem tornar-se importantes fontes de contaminação no ambiente de produção de alimentos(AU)

Dinâmica da formação de biofilmes puros e mistos de Listeria monocytogenes e Salmonella Typhimurium em superfície de polipropileno

Biofilmes multiespécies são ecossistemas microbianos complexos que podem ser fonte de contaminação entre ambientes industriais e alimentos. O estudo, teve como objetivos realizar a caracterização molecular e avaliar expressão de genes relacionados à formação de biofilme, bem como, a dinâmica de formação e arquitetura de biofilmes puros e mistos de Listeria monocytogenes e Salmonella Typhimurium. Os três isolados de L. monocytogenes foram submetidos a caracterização de genes relacionados a formação de biofilme (flaA, prfA, luxS, agrA, agrB, agrC, agrD), a resistência a biocidas (mdrT, mdrM, mdrL, idE), a adaptação ao pH e a concentrações de sal (SSI-1 lmo 0444, SSI-1 lmo 0445, SSI-1 lmo 0446). Um isolado de S. Typhimurium foi submetido a avaliação de genes envolvidos na produção de fímbrias, adesão, virulência, formação de celulose e biofilme (adrA, lpfA, agfA, sipA), a quorum sensing (sidA) e a resistência ao amônio quaternário (qacE1). A dinâmica de formação de biofilmes puros e mistos foi avaliada nos tempos de 1 h, 24 h, 96 h e 120 h em superfície de polipropileno a 12 °C e 37 °C. Os biofilmes maduros de L. monocytogenes na condição pura e associada com S. Typhimurium em superfície de polipropileno a 12 °C e 37 °C foram submetidos a expressão dos genes flaA, prfA, luxS e agrABCD. Os isolados de L. monocytogenes apresentaram os genes flaA, prfA, luxS, agrA, agrB, agrC, agrD, mdrT, mdrM, mdrL e idE, e S. Typhimurium carreava os genes adrA, lpfA, agfA, sipA, sidA. O crescimento planctônico e séssil de L. monocytogenes e S. Typhimurium foi relacionado a temperatura de incubação, obtendo-se contagens mais elevadas em 24 h a 37 °C, e em 96 h e 120 h a 12 °C. A adesão inicial de L. monocytogenes e S. Typhimurium foi afetada negativamente pela condição mista (p<0,001). Biofilmes puros de L. monocytogenes e S. Typhimurium apresentaram contagens mais elevadas em 96 h e 120 h quando comparados as populações individuais em biofilmes mistos. Contudo, não foi observado diferença estatística na contagem entre biofilmes puros de L. monocytogenes, puros de S. Typhimurium e a população total em biofilmes mistos (Listeria+Salmonella) a 12 °C. Em MEV, pode-se observar estrutura de aspecto viscoso promovendo a adesão (1 h) bacteriana em biofilmes mistos, e a partir de 24 h a presença de matriz exopolissacarídeos (EPS). Biofilmes puros e mistos foram capazes de manter células viáveis por 3000 h a 10 °C com contagens superiores a 120 h (p<0,05). Biofilmes maduros de L. monocytogenes não sofreram interferência da temperatura, superfície e condição mista com S. Typhimurium sobre a expressão dos genes prfA, luxS e agrBCD, contudo houve interferência na expressão de flaA e agrA. Desse modo, a caracterização da dinâmica de formação de biofilmes mistos, juntamente com presença e expressão de genes relacionados a formação de biofilme, demostrou a associação desses patógenos para a formação e manutenção de biofilmes mistos, e além disso, torna-se resultados importantes para a indústrias de alimentos e saúde pública.

Multispecies biofilms are complex microbial ecosystems that can be a source of contamination between industrial environments and food. The study aimed to evaluate the molecular characterization and expression of genes related to biofilm formation and stressful conditions, and the dynamics of formation and architecture of pure and mixed biofilms of L. monocytogenes and S. Typhimurium. L. monocytogenes isolates were subjected to the characterization of genes related to biofilm formation (flaA, prfA, luxS), to stressful conditions (agrA, agrB, agrC, agrD), biocide resistance (mdrT, mdrM, mdrL, idE), adaptation to pH and salt concentrations (SSI-1 lmo 0444, SSI-1 lmo 0445, SSI-1 lmo 0446, LMOf2365_0481). S. Typhimurium was evaluated for genes linked to fimbriae production, adhesion, virulence, cellulose and biofilm formation (adrA, lpfA, agfA, sipA), quorum sensing (sidA) and resistance to quaternary ammonium (qacE1). The formation of pure and mixed biofilms was evaluated at 1h, 24h, 96h and 120h on the polypropylene surface at 12°C and 37°C. The mature biofilms of L. monocytogenes were subjected to the gene expression the flaA, prfA, luxS, and agrABCD. The isolates of L. monocytogenes presented the genes flaA, prfA, luxS, agrA, agrB, agrC, agrD, mdrT, mdrM, mdrL and idE, and S. Typhimurium demonstrated the genes adrA, lpfA, agfA, sipA, sidA. Planktonic and sessile growth was directly related to incubation temperature, obtaining higher counts in 24h at 37°C, and in 96h at 12°C. The initial adhesion of L. monocytogenes and S. Typhimurium was affected by the mixed condition (p<0.001). Pure biofilms from L. monocytogenes and S. Typhimurium showed higher counts in 96h and 120h when compared to individual populations in mixed biofilms. However, no statistical difference was observed between pure biofilms of L. monocytogenes, pure S. Typhimurium and the total population in mixed biofilms (Listeria+Salmonella), especially at 120h/12°C. It was observed that the dispersion of adhered cells directly affected the maintenance of planktonic cells, especially after 96h in both temperatures. In SEM, structure of the viscous aspect could be observed promoting bacterial adhesion (1h) in mixed biofilms, and after 24h with the presence of matrix exopolysaccharides (EPS). The pure and mixed biofilms were able to maintain viable cells for 3000h at 10°C with counts greater in 120h (p<0.05). Mature biofilms of L. monocytogenes were not affected by temperature, surface, and association with S. Typhimurium on the expression of prfA, luxS and agrBCD genes, interfering with the expression of flaA and agrA. Thus, the dynamics of the formation of mixed biofilms, linked to the presence and expression of genes related to the formation biofilms, are factors that prove the association of these pathogens for the formation and maintenance of mixed biofilms, it becomes important results for the food industries and the public health.