Perfil da expressão de ISG15 no sangue periférico durante o período de reconhecimento materno da gestação em bovinos

O período de reconhecimento materno da gestação (RMG) em ruminantes é um evento complexo, envolvendo diversos mecanismos celulares. O período de RMG é caracterizado pela secreção de interferon tau (IFNT) pelas células do trofloblasto do embrião, com maior intensidade aos 18 dias de gestação. A principal função dessa proteína é manter o corpo lúteo em plena atividade, evitando a luteólise. A ação direta do IFNT em tecidos extrauterinos eleva a expressão de genes estimulados por interferon (ISGs destacando-se o gene estimulado por interferon 15 (ISG15). As células polimorfonucleares do sangue periférico (PMN) são mais sensíveis ao estimulo do IFNT comparadas às células mononucleares do sangue periférico (PBMC). Os objetivos deste estudo são: (1) determinar o tempo mais precoce possível para identificar a expressão de ISG15 em novilhas de corte gestantes; (2) estabelecer a fração celular sanguínea para determinar o diagnóstico precoce de gestação com alta acurácia em novilhas de corte; e, (3) demonstrar o perfil da expressão de ISG15 nos dias 16 e 18 após a inseminação artificial (IA). A sincronização do ciclo estral foi realizada em 28 novilhas. O diagnóstico de gestação foi realizado nos dias 29 e 60 após IA e resultou em 10 novilhas gestantes, 14 novilhas não gestantes, e 4 novilhas não inseminadas (grupo controle negativo). O sangue foi coletado da veia coccígea após a IA (dias 16 e 18). As frações celulares de PBMC e PMN foram coletadas e armazenadas a -80ºC até a posterior manipulação de RNA, cDNA e qPCR. A expressão relativa de ISG15 diferiu entre a fração celular de PMN e PBMC de novilhas gestantes (p < 0,0001). A expressão do ISG15em células PMN no dia 16 diferiu de novilhas gestantes e novilhas não inseminadas (p < 0,04), bem como no dia 18 após IA (p < 0,01). No entanto, a expressão do ISG15 em células PMN no dia 16 não diferiu entre novilhas gestantes e novilhas não gestantes. Em PBMC, a expressão do ISG15 no dia 16 não diferiu entre as novilhas gestantes, não gestantes e não inseminadas. No entanto, no dia 18 após AI, há uma diferença na expressão de ISG15 entre novilhas gestantes e não gestantes (p < 0,02). A expressão de ISG15 nas células PMN aos 16 e 18 de gestação é ao menos 30 vezes maior do que a expressão em PBMC. Além disso, a expressão de ISG15 em PMN pode ser usada para identificação da sinalização embrionária aos 16 e 18 dias após a inseminação em novilhas de corte. A expressão de ISG15 em PMN no dia 18 após a IA resultou em 93% de acurácia para o diagnóstico de gestação. Sugerimos que ambas as frações celulares (PMN e PBMC) podem ser utilizadas como ferramentas para identificar a sinalização embrionária aos 18 dias de gestação em novilhas de corte.

The maternal recognition of pregnancy (MRP) in ruminants is a complex event, involving several cellular mechanisms. It is at that moment that the highest embryonic mortality occurs in cattle. The MRP period is characterized by the secretion of interferon tau (IFNT) by the embryo. IFNT is produced and secreted by the trofloblast cells of the embryo, with greater intensity at 18 days of pregnancy. The main function of this protein is to keep the corpus luteum fully active, avoiding luteolysis. Direct action of IFNT on extrauterine tissues raises the expression of interferon-stimulated genes (ISGs). Among the ISGs stimulated by IFNT, the gene stimulated by interferon 15 (ISG15) stands out. Studies have demonstrated endocrine action of IFNT. An elevation in ISG expression levels in blood and luteal cells was observed shortly after signaling by IFNT at the start of gestation in ruminants. Peripheral blood polymorphonuclear cells (PMN) are more sensitive to the IFNT stimulus compared to peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). The objectives of this study are: (1) to determine the earliest possible time to identify ISG15 expression in pregnant heifers; (2) establish the cell fraction to determine the early diagnosis of pregnancy with high accuracy in cut heifers; (3) demonstrate the expression profile of ISG15 on days 16 and 18 after artificial insemination (AI). Synchronization of the estrous cycle was performed in 28 heifers. The pregnancy diagnosis was performed on days 29 and 60 after AI and resulted in 10 pregnant heifers, 14 non-pregnant heifers, and 4 non-inseminated heifers (negative control group). Blood was collected from the coccygeal vein after AI (Days 16 and 18). Cellular fractions of PBMC and PMN were collected and stored at -80 ° C until further extraction of RNA, cDNA and qPCR, respectively. The relative expression of ISG15 differed between the PMN and PBMC cell fraction of pregnant heifers (p <0.0001). ISG15 expression in PMN cells on Day 16 differed from heifers and non-inseminated heifers (p <0.04), as well as on Day 18 after AI (p <0.01). However, ISG15 expression in PMN cells on Day 16 did not differ from pregnant heifers and non-pregnant heifers. In PBMC cells, ISG15 expression on Day 16 did not differ from pregnant, non-pregnant and non-inseminated heifers. However, on Day 18 after AI, there is a difference in ISG15 expression of pregnant and non-pregnant heifers (p <0.02). Expression of ISG15 in PMN cells on Days 16 and 18 pregnancy is greater 30 times than expression in PBMC. In addition, the expression of ISG15 in PMN can be used to identify embryonic signaling on Day 16 after insemination in beef heifers. Expression of ISG15 in PMN on Day 18 after AI resulted in 93% accuracy for the diagnosis of pregnancy. We suggest that both cellular fractions (PMN and PBMC) can be used as a tool to identify embryonic signaling on Day 18 of pregnancy in beef heifers.

TESTE IMUNOENZIMÁTICO VISUAL PARA DETECÇÃO DE GLICOPROTEÍNAS ASSOCIADAS À PRENHEZ EM OVELHAS

O diagnóstico precoce da gestação visa o aumento da produtividade e otimização dos sistemas de criação animal. Na investigação de métodos mais precoces de detecção da prenhez, foram descobertas as glicoproteínas associadas à prenhez (PAG), que são produzidas pela placenta dos mamíferos euterianos e pertencem à família das proteases aspárticas. Liberadas na circulação periférica materna logo após a implantação podem ser um indicador de gestação para muitas espécies, variando a quantidade de PAG e o tempo de aparecimento. O Idexx Visual Pregnancy Test é um ensaio ELISA-PAG visual que detecta PAG no sangue materno e permite a leitura visual dos resultados pela coloração das amostras; no entanto foi validado apenas para bovinos, nos quais são detectadas, com melhor precisão, a partir de 28 dias de gestação. Com o objetivo de avaliar o ELISA-PAG visual para a espécie ovina, foram utilizadas duas raças ovinas brasileiras, Santa Inês e Morada Nova, em quatro fases. Na primeira fase foram utilizadas 41 ovelhas, diagnosticadas como positivas para prenhez, por ultrassonografia. Amostras de sangue foram colhidas aos 26, 28, 30 e 32 dias, após a observação da última cobertura natural, e utilizadas para realização, em duplicata, do diagnóstico de prenhez pelo ELISA-PAG visual, com base na presença de PAG. Na segunda fase, amostras de sangue foram colhidas 30 dias após inseminação artificial, de 65 ovelhas Santa Inês, para diagnóstico gestacional pelo ELISA-PAG visual. Posteriormente, na terceira fase, com o intuito de se conhecer o tempo de detecção sérica das PAG nas ovelhas, após os 30 dias de gestação, continuaram-se as colheitas de sangue em 10 ovelhas, a cada sete dias até 92 dias pós-parição. Na quarta fase, foram utilizadas 34 fêmeas ovinas, sabidamente não prenhes, para avaliar o teste quanto à identificação de ovelhas negativas. A detecção ou não detecção de PAG foi analisada pelo modelo logístico do PROC GENMOD do SAS e as diferenças foram detectadas pelo teste qui quadrado. Os resultados da primeira fase, com amostras de 26, 28, 30 e 32 dias de gestação, pelo ELISA-PAG visual, mostraram percentual positivo de 75,0, 93,2, 97,6 e 97,6, respectivamente. Na segunda fase, das 65 ovelhas inseminadas, 49 estavam gestantes à ultrassonografia sendo todas diagnosticadas corretamente como positivas; contudo houve a presença de um diagnóstico falso positivo pelo ELISA-PAG visual. Na terceira fase, as PAG permaneceram na circulação periférica das fêmeas durante todo o período pré-parto até a parição e pós-parto, até o 7º dia em 100% das ovelhas, decaindo após esse período. Entretanto, as PAG se mantiveram circulantes em 30% das ovelhas durante todo o período avaliado (92 dias). Na fase de identificação das fêmeas não prenhes, pelo ELISA-PAG visual, 97,06% das ovelhas foram diagnosticadas como negativas para prenhez e 2,94% positivas, indicando novamente a presença de um falso positivo. Conclui-se que o ELISA-PAG visual é um método eficaz, prático e rápido para o diagnóstico precoce de gestação em ovelhas. O ELISA-PAG visual pode ser aplicado às ovelhas a partir do 30º dia de gestação.

Early diagnosis of pregnancy is aimed to increase productivity and optimization of breeding systems. In the investigation of the earliest methods for the detection of pregnancy, were findings the pregnancy-associated glycoproteins (PAG), which are produced by the placenta of eutherian mammals and belong to the family of aspartic proteases. Released in the maternal peripheral circulation after implantation it can be an indicator of pregnancy in many species, with a variation in the amount of PAG and the onset time. The Idexx Visual Pregnancy Test is a visual ELISA-PAG detecting PAG in maternal serum and permits the visual reading of results by the staining of the samples, however it was only validated for cattle, in which are detected with better results from 28 days gestation. In order to evaluate the visual ELISA-PAG for sheep, two Brazilian sheep breeds were used, Santa Inês and Morada Nova in four phases. In the first phase we used 41 sheep, diagnosed as positive for pregnancy by ultrasound. Blood samples were collected at 26; 28; 30 and 32 days after observation of the last natural cover, and used for performing, in duplicate, diagnosis of pregnancy for the visual ELISA-PAG, based on presence of PAG. In the second phase, blood samples were collected 30 days after artificial insemination from 65 Santa Ines sheep, for pregnancy diagnosis by visual ELISA-PAG. Subsequently, in the third phase, the blood samples continued to be harvested in 10 pregnant ewes, every seven days to 92 days post-calving. In the fourth phase, 34 female sheep known non-pregnant were used to evaluate the test as to the identification of negative sheep. The detection or non-detection of PAG was analyzed by logistic model PROC GENMOD of SAS and the differences were detected by the chi-square test. The results of the first phase, samples 26; 28; 30 and 32 days of gestation, the visual ELISA-PAG showed positive percentage of 75.0, 93.2, 97.6 and 97.6, respectively. In the second phase of the 65 inseminated sheep, 49 were diagnosed pregnant by ultrasound and that diagnosis as positive was confirmed as correct; but there was the presence of a false positive diagnosis by visual ELISA-PAG. The clock phase of expression, the PAG remained in the peripheral circulation of the females throughout the antepartum period until the parturition and post partum, from the 7th day in 100% of the sheep, declining thereafter. However, PAG kept current by 30% of the sheep throughout the study period (92 days). The identification phase of non-pregnant females, for the visual ELISA-PAG, 97.06% of the sheep were diagnosed as negative for pregnancy and 2.94% positive, again indicating the presence of a false positive. It follows that the visual ELISA-PAG is an effective, convenient and fast method for early pregnancy diagnosis in sheep. The visual ELISA-PAG can be applied from the sheep from the 30th day of gestation.

Effect of timing of artificial insemination on the fertility and sex ratio in nelore heifers / Influência do momento da inseminação artificial sobre a fertilidade e o sexo da cria de novilhas da raça nelore

The aim of this study was to evaluate the effect of timing of artificial insemination on the fertility and calf sex ratio in Nelore heifers (n = 200) submitted a protocol of timed artificial insemination (TAI).  The heifers, distributed into five groups (GC, GT6, GT12, GT18 and GT24), presented a mean of 2.5 years old and 342 Kg of body weight. The inseminations were performed in the moments 0 (GC), 6 (GT6), 12 (GT12), 18 (GT18) and 24 (GT24) hours after the injection of GnRH. The conception rates were 87.5% (GC), 82.5% (GT6), 77.5% (GT12), 85.0% (GT18) and 77.5% (GT24). There was no statistical difference (p>0.05) in the conception rates between the five treatments. The percentage of calved males was 38.2% (GC), 48.5% (GT6), 45.2% (GT12), 55.9% (GT18) and 58.6% (GT24). The male/female ratio was 0.62 (GC), 0.94 (GT6), 0.82 (GT12), 1.27 (GT18) and 1.42 (GT24). Statistical difference was found (p 0.05) in the male/female ratio between the five treatments. The timing of artificial insemination has influence on the sex ratio, showing an increase in the proportion of calved males when the insemination is progressively delayed. Within of the measured interval of time (0-24h after GnRH), the fertility of Nelore heifers is not influenced by the moment of the artificial insemination.KEY WORDS: Beef cattle, management, pregnancy test, ultrasound, sexing.

Objetivou-se avaliar o efeito do momento da inseminação artificial (IA) sobre a fertilidade e a proporção do sexo da cria de novilhas da raça Nelore (n = 200) submetidas a protocolo de IATF. As novilhas, distribuídas em cinco tratamentos (GC, GT6, GT12, GT18 e GT24), apresentavam idade média de 2,5 anos e peso médio de 342 kg. Realizaram-se as inseminações nos momentos 0 (GC), 6 (GT6), 12 (GT12), 18 (GT18) e 24 (GT24) horas após a aplicação do GnRH. As taxas de concepção foram de 87,5% (GC), 82,5% (GT6), 77,5% (GT12), 85,0% (GT18) e de 77,5% (GT24). Não houve diferença estatística (p>0,05) entre as taxas de concepção dos cinco tratamentos. A proporção de machos foi 38,2% (GC), 48,5% (GT6), 45,2% (GT12), 55,9% (GT18) e de 58,6% (GT24). A relação macho/fêmea foi de 0,62 (GC), 0,94 (GT6), 0,82 (GT12), 1,27 (GT18) e de 1,42 (GT24). Houve diferença significativa (p 0,05) na relação macho/fêmea entre os cinco tratamentos. O momento da inseminação artificial exerce influência sobre a relação macho/fêmea, aumentando a proporção de machos na medida em que as inseminações são realizadas mais tardiamente. Dentro do intervalo de tempo avaliado (0 a 24h após GnRH), a fertilidade das novilhas da raça Nelore não é influenciada pelo momento da inseminação artificial.PALAVRAS-CHAVES: Diagnóstico de gestação, gado de corte, manejo, ultra-sonografia, sexagem.

Ultrasonographic evaluation of the fetal development of Santa Ines breed ovine / Avaliação ultra-sonográfica do desenvolvimento fetal de ovinos da raça Santa Inês

Aiming the accompaniment of the fetal development, the quantification of the fetus number and the establishment of the correlation between gestational age and fetal measures of the biparietal diameter (DBP) and abdominal diameter (DA) in sheeps of the Santa Ines breed, ultrasound exams (US) were carried out every two weeks, in 40 females, using transductors of 6 and 8 MHz, transrectal and transabdominal, according to the gestational phase. The results showed that the best period to evaluate fetal development through DBP and DA was between 80 and 129 days of gestation. When correlated with fetal age, the DBP presented R2 equal to 0.637 and 0.628 and the DA was R2 equal to 0.631 and 0.670 to the simple and double gestation, respectively (P 0,05). It was concluded that US is an essential tool for the evaluation of the fetal development, as well as the fetal measures can be used to predict gestational age.

Com o objetivo de efetuar o monitoramento do desenvolvimento fetal, quantificar o numero de fetos e estabelecer correlação entre a idade gestacional e as medidas fetais do diâmetro biparietal (DBP) e diâmetro abdominal (DA) em ovelhas da raça Santa Inês, foram realizados exames ultrassonográficos (US), quinzenalmente, em 40 fêmeas, utilizando transdutor de 6 e 8 MHz, por via endoretal e transabdominal, de acordo com a fase gestacional. Os resultados obtidos demonstraram que o melhor período para avaliação do desenvolvimento fetal, através das medidas de DBP e DA, foi entre os dias 80 e 129 de gestação. Quando correlacionados com a Idade fetal, o DBP apresentou R2 igual a 0,637 e 0,628 e o DA obteve R2 igual a 0,631 e 0,670, para gestação simples e dupla, respectivamente (P 0,05). Conclui-se que a US é uma ferramenta imprescindível para o monitoramento do desenvolvimento fetal, bem como as medidas fetais podem ser utilizadas para predizer a idade gestacional.

DIAGNÓSTICO DE GESTAÇÃO NA VACA PELA ULTRA-SONOGRAFIA

SUMMARY The aim of this study was to investigate the embryonic development and the age of the pregnancy, in which may firstly be detected by ultrasound. One hundred and forty two cows, performing two groups were submitted to echographic examination for pregnancy diagnosis. A Pie Medical Inc. scanner Mod. 450 with a 5MHz linear array transducer and a printer were used for echographic purposes. In the first group constituted of 12 charolais cows were studied some characteristics of the fetal anatomy from the 10th to the 50th day. The first detection of the subsequent structures was made in the following days: embryonic vesicle (18.0 ± 0.7); embryo proper (24.1 ± 0.5); heartbeat (26.2 ± 0.6); amnion (30.7 ± 0.7); limbs (32.7 ± 0.6); vertebres (40.2 ± 0.7); fetal movements(45.6 ± 0.5). In the second group constituted of 130 cross bred charolais cows the embryonic development from the 23rd to the 50th day of gestation was observed. In this period the embryonic vesicle reached a diameter of 46.4mm with a daily growth of 38mm and the embryo, a length (crown-rump) of 36.4rnm with a daily increase of 1.15mm (P 0.0001). The eariy pregnancy diagnosis as well as the monitoring of gestation, is feasible through uttrasonography.

RESUMO O objetivo do trabalho foi de estudar o desenvolvimento embrionário e revelar quando a prenhez pode ser detectada em bovinos. Constituindo dois grupos, 142 vacas foram submetidas a exames ecográficos para diagnóstico de gestação. Utilizou-se um aparelho Pie Medical Inc., Mod. 450 com transdutor de 5MHz, arranjo linear e uma impressora. No primeiro grupo, constituído de 12 vacas charolesas foram estudadas algumas características da anatomia fetal entre o 10° e o 50° dia. Estruturas foram detectadas na seguinte ordem e tempo (dias): vesícula embrionária (18,0 ± 0,7); embrião (24,1 ± 0,5); batimentos cardíacos (26,2 ± 0,6); âmnio (30,7 ± 0,7); membros (32,7 ± 0,6); vértebras (40,2 ± 0,7) e movimentos fetais (45,6 ± 0,5). No segundo grupo, composto de 130 vacas cruza charolesa, foi observado o desenvolvimento embrionário do 23° até o 50° dia de gestação. Neste período a vesícula embrionária atingiu um diâmetro de 46,4mm, com crescimento diário de 1,38mm; enquanto o comprimento (cabeça-anca) do embrião atingiu 36,4mm, com aumento diário de 1,15mm (P 0,0001). O diagnóstico precoce da gestação, e o seu monitoramento através da ultra-sonografia é possível a partir do 18° dia pós-serviço.

Diagnóstico de gestação na vaca pela ultra-sonografia

SUMMARY The aim of this study was to investigate the embryonic development and the age of the pregnancy, in which may firstly be detected by ultrasound. One hundred and forty two cows, performing two groups were submitted to echographic examination for pregnancy diagnosis. A Pie Medical Inc. scanner Mod. 450 with a 5MHz linear array transducer and a printer were used for echographic purposes. In the first group constituted of 12 charolais cows were studied some characteristics of the fetal anatomy from the 10th to the 50th day. The first detection of the subsequent structures was made in the following days: embryonic vesicle (18.0 ± 0.7); embryo proper (24.1 ± 0.5); heartbeat (26.2 ± 0.6); amnion (30.7 ± 0.7); limbs (32.7 ± 0.6); vertebres (40.2 ± 0.7); fetal movements(45.6 ± 0.5). In the second group constituted of 130 cross bred charolais cows the embryonic development from the 23rd to the 50th day of gestation was observed. In this period the embryonic vesicle reached a diameter of 46.4mm with a daily growth of 38mm and the embryo, a length (crown-rump) of 36.4rnm with a daily increase of 1.15mm (P 0.0001). The eariy pregnancy diagnosis as well as the monitoring of gestation, is feasible through uttrasonography.

RESUMO O objetivo do trabalho foi de estudar o desenvolvimento embrionário e revelar quando a prenhez pode ser detectada em bovinos. Constituindo dois grupos, 142 vacas foram submetidas a exames ecográficos para diagnóstico de gestação. Utilizou-se um aparelho Pie Medical Inc., Mod. 450 com transdutor de 5MHz, arranjo linear e uma impressora. No primeiro grupo, constituído de 12 vacas charolesas foram estudadas algumas características da anatomia fetal entre o 10° e o 50° dia. Estruturas foram detectadas na seguinte ordem e tempo (dias): vesícula embrionária (18,0 ± 0,7); embrião (24,1 ± 0,5); batimentos cardíacos (26,2 ± 0,6); âmnio (30,7 ± 0,7); membros (32,7 ± 0,6); vértebras (40,2 ± 0,7) e movimentos fetais (45,6 ± 0,5). No segundo grupo, composto de 130 vacas cruza charolesa, foi observado o desenvolvimento embrionário do 23° até o 50° dia de gestação. Neste período a vesícula embrionária atingiu um diâmetro de 46,4mm, com crescimento diário de 1,38mm; enquanto o comprimento (cabeça-anca) do embrião atingiu 36,4mm, com aumento diário de 1,15mm (P 0,0001). O diagnóstico precoce da gestação, e o seu monitoramento através da ultra-sonografia é possível a partir do 18° dia pós-serviço.

Ultrasonographic evaluation of the fetal development of Santa Ines breed ovine / Avaliação ultra-sonográfica do desenvolvimento fetal de ovinos da raça Santa Inês

Aiming the accompaniment of the fetal development, the quantification of the fetus number and the establishment of the correlation between gestational age and fetal measures of the biparietal diameter (DBP) and abdominal diameter (DA) in sheeps of the Santa Ines breed, ultrasound exams (US) were carried out every two weeks, in 40 females, using transductors of 6 and 8 MHz, transrectal and transabdominal, according to the gestational phase. The results showed that the best period to evaluate fetal development through DBP and DA was between 80 and 129 days of gestation. When correlated with fetal age, the DBP presented R2 equal to 0.637 and 0.628 and the DA was R2 equal to 0.631 and 0.670 to the simple and double gestation, respectively (P 0,05). It was concluded that US is an essential tool for the evaluation of the fetal development, as well as the fetal measures can be used to predict gestational age.

Com o objetivo de efetuar o monitoramento do desenvolvimento fetal, quantificar o numero de fetos e estabelecer correlação entre a idade gestacional e as medidas fetais do diâmetro biparietal (DBP) e diâmetro abdominal (DA) em ovelhas da raça Santa Inês, foram realizados exames ultrassonográficos (US), quinzenalmente, em 40 fêmeas, utilizando transdutor de 6 e 8 MHz, por via endoretal e transabdominal, de acordo com a fase gestacional. Os resultados obtidos demonstraram que o melhor período para avaliação do desenvolvimento fetal, através das medidas de DBP e DA, foi entre os dias 80 e 129 de gestação. Quando correlacionados com a Idade fetal, o DBP apresentou R2 igual a 0,637 e 0,628 e o DA obteve R2 igual a 0,631 e 0,670, para gestação simples e dupla, respectivamente (P 0,05). Conclui-se que a US é uma ferramenta imprescindível para o monitoramento do desenvolvimento fetal, bem como as medidas fetais podem ser utilizadas para predizer a idade gestacional. 

EFFECT OF TIMING OF ARTIFICIAL INSEMINATION ON THE FERTILITY AND SEX RATIO IN NELORE HEIFERS / INFLUÊNCIA DO MOMENTO DA INSEMINAÇÃO ARTIFICIAL SOBRE A FERTILIDADE E O SEXO DA CRIA DE NOVILHAS DA RAÇA NELORE

The aim of this study was to evaluate the effect of timing of artificial insemination on the fertility and calf sex ratio in Nelore heifers (n = 200) submitted a protocol of timed artificial insemination (TAI).  The heifers, distributed into five groups (GC, GT6, GT12, GT18 and GT24), presented a mean of 2.5 years old and 342 Kg of body weight. The inseminations were performed in the moments 0 (GC), 6 (GT6), 12 (GT12), 18 (GT18) and 24 (GT24) hours after the injection of GnRH. The conception rates were 87.5% (GC), 82.5% (GT6), 77.5% (GT12), 85.0% (GT18) and 77.5% (GT24). There was no statistical difference (p>0.05) in the conception rates between the five treatments. The percentage of calved males was 38.2% (GC), 48.5% (GT6), 45.2% (GT12), 55.9% (GT18) and 58.6% (GT24). The male/female ratio was 0.62 (GC), 0.94 (GT6), 0.82 (GT12), 1.27 (GT18) and 1.42 (GT24). Statistical difference was found (p 0.05) in the male/female ratio between the five treatments. The timing of artificial insemination has influence on the sex ratio, showing an increase in the proportion of calved males when the insemination is progressively delayed. Within of the measured interval of time (0-24h after GnRH), the fertility of Nelore heifers is not influenced by the moment of the artificial insemination.KEY WORDS: Beef cattle, management, pregnancy test, ultrasound, sexing.

Objetivou-se avaliar o efeito do momento da inseminação artificial (IA) sobre a fertilidade e a proporção do sexo da cria de novilhas da raça Nelore (n = 200) submetidas a protocolo de IATF. As novilhas, distribuídas em cinco tratamentos (GC, GT6, GT12, GT18 e GT24), apresentavam idade média de 2,5 anos e peso médio de 342 kg. Realizaram-se as inseminações nos momentos 0 (GC), 6 (GT6), 12 (GT12), 18 (GT18) e 24 (GT24) horas após a aplicação do GnRH. As taxas de concepção foram de 87,5% (GC), 82,5% (GT6), 77,5% (GT12), 85,0% (GT18) e de 77,5% (GT24). Não houve diferença estatística (p>0,05) entre as taxas de concepção dos cinco tratamentos. A proporção de machos foi 38,2% (GC), 48,5% (GT6), 45,2% (GT12), 55,9% (GT18) e de 58,6% (GT24). A relação macho/fêmea foi de 0,62 (GC), 0,94 (GT6), 0,82 (GT12), 1,27 (GT18) e de 1,42 (GT24). Houve diferença significativa (p 0,05) na relação macho/fêmea entre os cinco tratamentos. O momento da inseminação artificial exerce influência sobre a relação macho/fêmea, aumentando a proporção de machos na medida em que as inseminações são realizadas mais tardiamente. Dentro do intervalo de tempo avaliado (0 a 24h após GnRH), a fertilidade das novilhas da raça Nelore não é influenciada pelo momento da inseminação artificial.PALAVRAS-CHAVES: Diagnóstico de gestação, gado de corte, manejo, ultra-sonografia, sexagem.

DIAGNÓSTICO DE GESTAÇÃO POR ULTRA-SONOGRAFIA

The advantagens, the principles, the technic and the updated status of pregnancy diagnosis in the cow, mare and ewe, by ultrasound scanning are presented in this paper. The early diagnosis twin pregnancies, evaluation of embryo viability and inocuity are some of the advantages of ultrasonography in domestic species. Pregnancy diagnosis through ultrasound scanning allows safe early recognition of this state with imediate positive ecnonomic benefits.

Apresentam-se as vantagens, os princípios fundamentais da técnica e a situação atual do diagnóstico de gestação por ultra-sonografia nas espécies bovina, eqüina e ovina. Entre as vantagens da ultra-sonografia para o diagnóstico de gestação destaca-se a precocidade, a inocuidade, o diagnóstico de prenhez gemelar e a possibilidade de estimar a viabilidade embrionária. O diagnóstico de gestação por ultra-sonografia possibilita um reconhecimento precoce e seguro desse estado com reflexos econômicos positivos e imediatos.

Diagnóstico de gestação por ultra-sonografia

The advantagens, the principles, the technic and the updated status of pregnancy diagnosis in the cow, mare and ewe, by ultrasound scanning are presented in this paper. The early diagnosis twin pregnancies, evaluation of embryo viability and inocuity are some of the advantages of ultrasonography in domestic species. Pregnancy diagnosis through ultrasound scanning allows safe early recognition of this state with imediate positive ecnonomic benefits.

Apresentam-se as vantagens, os princípios fundamentais da técnica e a situação atual do diagnóstico de gestação por ultra-sonografia nas espécies bovina, eqüina e ovina. Entre as vantagens da ultra-sonografia para o diagnóstico de gestação destaca-se a precocidade, a inocuidade, o diagnóstico de prenhez gemelar e a possibilidade de estimar a viabilidade embrionária. O diagnóstico de gestação por ultra-sonografia possibilita um reconhecimento precoce e seguro desse estado com reflexos econômicos positivos e imediatos.

Uso de doppler colorido na avaliação funcional do corpo lúteo em bovinos

Objetivou-se avaliar o padrão vascular luteal entre o 12º e 20º dias pós-inseminação em bovinos e determinar a confiabilidade do uso de Doppler colorido para predizer animais não-gestantes 20 dias após a Inseminação artificial em tempo fixo (IATF), utilizando como único parâmetro a avaliação visual do fluxo sanguíneo no corpo lúteo (FSCL). Foram utilizadas vacas e novilhas mestiças de Holandês x Gir, submetidas a protocolo de IATF, em duas repetições. No primeiro estudo, os animais (n=115) foram monitorados no período de 12 a 20 dias após a primeira IATF, e o corpo lúteo (CL) avaliado a cada 48h utilizando-se um equipamento portátil de ultrasonografia equipado com a função Doppler colorido (MyLab30, Esaote, Italia) e probe linear retal de 7,5 MHz. Foi calculada a área total do CL (ACL), área da cavidade luteal (CCL), área de tecido luteal (ATL, ACL menos área da CCL, se presentes), área do sinal Doppler (AV) e proporção entre AV e ATL (PV). No D30, os animais foram submetidos ao diagnóstico de gestação. A atividade luteal foi monitorada pela determinação da concentração plasmática de progesterona (CPP) no sangue, coletado em todos os dias em que ocorriam os exames ultrassonográficos. Os valores de ACL, CCL, ATL, AV, PV e CPP entre o D12 e D20 foram comparados entre animais posteriormente classificados como gestantes ou não gestantes. Não houve efeito de dia nas variáveis ACL, CCL, ATL, AV, PV e CPP de animais posteriormente diagnosticados como gestantes (P>0,05). Nos animais não gestantes, houve redução (P<0,01) nos parâmetros luteais até o D20. Apesar das medidas realizadas com Doppler colorido (AV e PV) apresentarem elevados CVs (>50%), elas apresentaram diferenças significativas entre animais gestantes e não gestantes mais cedo em relação à ATL (diferenças a partir de D18), a CPP (D18) e ACL (D20). No experimento 2, foram consideradas as avaliações (n=208) realizadas nos animais nas duas baterias de IATF 20 dias após a inseminação (D20). Os animais tiveram o fluxo sanguíneo luteal avaliado por ultrasonografia Doppler, conforme descrito no primeiro experimento. Com base unicamente na avaliação visual e subjetiva do FSCL, os animais foram classificados como ?gestantes? ou ?não gestantes?. No D30, o mesmo operador realizou o diagnóstico de gestação (DG) final. O DG final foi comparado retrospectivamente com o diagnóstico baseado no FSCL e o resultado de cada animal classificado como ?correto? ou 8 ?incorreto?. O número de verdadeiro-positivos (VP), verdadeiro-negativos (VN), falsopositivos (FP) e falso-negativos (FN) foram inseridos em uma tabela de contingência 2x2. A sensibilidade (SEN), especificidade (ESP), valor preditivo positivo (VPP), valor preditivo negativo (VPN) e acurácia/confiabilidade (ACC) do diagnóstico por FSCL foram calculados com as seguintes equações: SEN=VP/(VP+FN); ESP=VN/(FP+VN); VPP=VP/(VP+FP); VPN=VN/(FN+VN); e ACC=(VP+VN)/n total. Variáveis binomiais (taxa de gestação e proporções) foram analisadas pelo teste quiquadrado. Os parâmetros de desempenho do diagnóstico baseado no FSCL foram: SEN=97,1%; ESP=51,9%; VPP=66,9%; VPN=94,7%; e ACC=74,5%. A proporção de FP foi 24,0% (50/208) e a de FN foi 1,4% (3/208). Conclui-se que o uso do Doppler colorido pode resultar em diagnósticos mais precoces e mais acurados de alterações da função luteal no período de reconhecimento materno da gestação e que a avaliação visual do FSCL 20 dias após a IATF pode ser utilizada na identificaçã

Momento da inseminação artificial em tempo fixo sobre a fertilidade e sexo da cria em novilhas da raça nelore

Em sistemas de produção de bovinos, a possibilidade de modificar a relação de sexo da cria pode resultar em aumento significativo da produtividade, ou seja, mais leite ou mais carne por hectare. O momento da inseminação é um aspecto importante para o sucesso da mesma, com reflexos sobre a fertilidade, duração do período de serviço e também sobre a proporção de sexo da cria. O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito do momento da inseminação artificial (IA) sobre a fertilidade e a proporção de sexo da cria em novilhas da raça Nelore submetidas a protocolo de inseminação artificial em tempo fixo (IATF). O experimento foi conduzido na Fazenda Tarumã, localizada no município de Jussara, Estado de Goiás, no período de dezembro de 2004 a março de 2005. Foram utilizadas 200 novilhas com idade média de 2,5 anos, peso corporal médio de 342 kg, escore corporal seis (em escala de um a nove pontos). As novilhas foram distribuídas de forma aleatória em cinco grupos, segundo o momento da inseminação, sendo esta realizada utilizando-se sêmen de cinco touros da raça Nelore. O protocolo de IATF utilizado foi, D0 inserção de dispositivo intra-vaginal bovino (DIB) com progesterona, seguido de aplicação de 2,0 mg de benzoato de estradiol (BE); D8 retirada do DIB, seguida de aplicação de 0,150 mg de prostaglandina F2 (PGF e 300 UI de gonadotrofina coriônica eqüina (eCG); D10 aplicação de 25 mg de hormônio liberador de gonadotropinas (GnRH). O momento da inseminação artificial foi diferente para cada grupo, GC (grupo controle) com IA no momento da aplicação de GnRH: GT6 IA seis horas após aplicação de GnRH; GT12 IA 12 horas após aplicação de GnRH; GT18 IA 18 horas após aplicação de GnRH; GT24 IA 24 horas após aplicação de GnRH. O diagnóstico de gestação foi realizado 30 dias após inseminação com auxílio de ultra-sonografia. As novilhas que tiveram o diagnóstico de gestação negativo foram ressincronizadas utilizando-se o mesmo protocolo de IATF. As taxas de concepção acumulada ao final das duas IATF foram 87,5%, 82,5%, 77,5%, 85,0% e 77,5%, para GC, GT6, GT12, GT18 e GT24 respectivamente. Não houve diferença estatística (p>0,05) entre as taxas de concepção nos cinco tratamentos. Não houve influência do momento da IA na fertilidade de novilhas Nelore inseminadas em tempo fixo. A sexagem fetal foi realizada no período de 55 a 85 dias de gestação das novilhas. A proporção acumulada de machos foi 38,2%, 48,5%, 45,2%, 55,9% e 58,6%, para GC, GT6, GT12, GT18 e GT24 respectivamente. A relação macho/fêmea acumulada foi 0,62, 0,94, 0,82, 1,27 e 1,42 para GC, GT6, GT12, GT18 e GT24 respectivamente. Houve diferença significativa (p<0,05) na relação macho/fêmea entre cinco tratamentos. Portanto, o momento da inseminação artificial influenciou significativamente a relação macho/fêmea, em favor dos machos na medida em que as inseminações foram sendo realizadas mais tardiamente