Probiotics supplementation reduces cigarette smoke-induced damage in the respiratory micro-architecture of mice / Suplementação com probióticos reduz os danos causados pela fumaça de cigarro na microarquitetura respiratória de camundongos

This study evaluated the protective efficacy of probiotics supplementation against cigarette smoke-induced lung emphysema, inflammation, and loss of cilia in mice. Probiotics are known to promote mucosal tolerance and mitigate respiratory injuries. Twenty-four adult mice were randomly divided into three groups: control (Ctr), cigarette smoke (CS), and cigarette smoke + probiotics (CS+P). Probiotics were given for 7 days before exposure to smoke in the CS+P group. Tissue samples of the trachea (goblet cell count and index, loss of cilia), lungs (airspace distention), and bronchoalveolar lavage fluid (BALF) were collected and processed. The results showed a significant increase in acidic and neutral goblet cells in the CS group compared to the Ctr and CS+P groups (P < 0.05). Overall, goblet cell number and index were lower in the CS+P group (41.71 ± 5.76, 0.67 ± 0.073) than CS group (56.28 ± 5.34, 1.31 ± 0.28). Inflammatory cells and loss of cilia significantly decreased in mice fed probiotics before exposure to cigarette smoke (P < 0.05). Lung emphysema was also significantly reduced in the CS+P group compared to the CS group (P < 0.05). In conclusion, dietary supplementation of probiotics reduced lung emphysema, inflammatory cells, goblet cell index, and loss of cilia under conditions of cigarette smoke exposure in mice.(AU)

O presente trabalho avaliou a eficácia da suplementação com probióticos contra a indução de enfisema, inflamação e perda de cílios por fumaça de cigarro em camundongos. Sabe-se que os probióticos promovem a tolerância da mucosa e mitigam as injúrias respiratórias. Vinte e quatro camundongos foram divididos, ao acaso, em três grupos: controle (CTR), fumaça de cigarro (CS) e fumaça de cigarro + probióticos (CS+P). Os probióticos foram fornecidos por sete dias antes da exposição à fumaça no grupo CS+P. Foram colhidas e processadas amostras de tecidos da traqueia (contagem de células caliciformes e index, perda de cílios), pulmões (distensão do espaço aéreo) e fluido de lavagem broncoalveolar. Os resultados obtidos revelaram um aumento significativo em células caliciformes acidificadas e neutralizadas no grupo CS quando comparado aos grupos Ctr e CS+P (P<0,05). Os números global e o índice de células caliciformes foram menores no grupo CS+P (41,71+ 5,76; 0,67+ 0,073) que no grupo CS (56,28+ 5,34 e 1,131+ 0,28). As células inflamatórias e a perda de cílios decresceram em camundongos alimentados com probióticos antes da exposição à fumaça de cigarro (P<0,05). O enfisema pulmonar também foi significativamente reduzido no grupo CS+P quando comparado ao grupo CS (P<0,05). A conclusão obtida foi que o fornecimento de dieta suplementada com probióticos reduziu o enfisema pulmonar, as células inflamatórias, o índice de células caliciformes e a perda de cílios nos camundongos expostos à fumaça de cigarro.(AU)

Effect of In Ovo Ascorbic Acid Injection and Thermal Manipulation During Incubation on Intestine Morphology of Broilers Reared under Cold and Heat Stress

It was investigated if pre-incubation ascorbic acid (AA) injection in fertile eggs incubated at high temperature impacts the performance, the yield of carcass and parts, and the intestine morphology of broilers reared under heat stress. Three thousand Cobb® fertile broiler eggs were randomly distributed according to weight into three incubations treatments (eggs not injected with AA and incubated at 37.5°C; eggs not injected with AA and incubated at 39°C; and eggs injected with 6 µg AA/100 µL water prior to incubation and incubated at 39ºC). The hatched birds were reared at thermoneutral, cold, and hot house temperatures. Broilers reared under hot temperature presented lower feed intake and weight gain than the broilers of the different rearing temperatures. Egg incubation at 39.0 ºC and 39.0 ºC + AA reduced broiler viability. Carcass and cut yields were not influenced by incubation and rearing procedures. Duodenal goblet cell count was lower in broilers from eggs of the treatment 39ºC + AA than in broilers from the other incubation treatments and in broiler rearing in hot temperature. In the jejunum, the goblet cell counts were higher in broilers that were reared under hot than thermoneutral temperatures. The incubation treatment of 39 ºC+AA increased the goblet cell counts in the ileum of broilers reared under cold temperatures. Rearing temperature influenced the duodenal villi counts, which were lower under cold rearing conditions than in the two other rearing temperatures. The results showed that egg incubation at 39°C, independently of ascorbic acid injection, did not produce an effective epigenetic heat adaptation in broilers.(AU)

Effect of 0, 15% sodium hialuronate and 0, 5% carboxymethylcellulose on tear film breakup time in healthy dogs and in dogs with keratoconjunctivitis sicca / Efeito do hialuronato de sódio a 0, 15% e da carboximetilcelulose sódica a 0, 5% no tempo de ruptura do filme lacrimal de cães saudáveis e com ceratoconjuntivite seca

This study aimed to evaluate the effect of the 0.15% sodium hyaluronate (SH) and of 0.5% carboxymethylcellulose (CMC) on tear film breakup time (TFBUT) in 10 healthy dogs and in 32 eyes of dogs with keratoconjunctivis sicca (KCS). In addition, the goblet cell density (GCD) of this population was quantified. TFBUT was assessed at baseline and at different time points following the instillation of SH and CMC. KCS was graded as mild, moderate, and severe. GCD were quantified from conjunctival biopsies. The number of GCD differed significantly between patients with mild and moderate KCS (P<0.01). TFBUT of healthy dogs increased only for 1 minute after treatment with SH (P<0.01). Regarding baseline and treatments, SH significantly increased TFBUT for up to 30 minutes on the ocular surface, in comparison to CMC, in all categories of KCS (P<0.01). TFBUT and GCD correlated positively when the healthy and diseased eyes were grouped (r=0.41, P=0.006). It can be concluded that in dogs with KCS, SH lasts longer periods on the ocular surface than CMC, but such agents does not increase TFBUT in healthy dogs. Additionally, tear film stability tends to reduce in a linear fashion from the mild to severe form of KCS.(AU)

Objetivou-se avaliar os efeitos do hialuronato de sódio a 0,15% (HS) e da carboximetilcelulose a 0,5% (CMC) no teste de ruptura do filme lacrimal (TRFL) em 10 cães saudáveis e em 32 olhos de cães com ceratoconjuntivite seca (CCS). Ademais, quantificou-se a densidade de células caliciformes (DCC) deles. Mensurou-se o TRFL em momentos distintos antes e após a instilação do HS e da CMC. Graduou-se a CCS em leve, moderada e severa. Quantificou-se a DCC a partir de biópsias conjuntivais. A DCC diferiu apenas entre pacientes com CCS leve e severa (P<0,01). Em cães saudáveis, o TRFL se elevou apenas após um minuto do tratamento com HS (P<0,01). Relativamente ao período basal e entre os tratamentos, o HS elevou o TRFL de forma mais eficaz e permaneceu por até 30 minutos na superfície ocular, comparativamente à CMC, em todas as categorias de CCS (P<0,01). Ao se agruparem os olhos saudáveis e os com CCS, o TRFL se correlacionou com a DCC (r=0.41, P=0.006). Conclui-se que o HS permanece por maior tempo na superfície ocular que a CMC em cães com CCS, mas que tais substâncias não elevam o TRFL em cães saudáveis. Ademais, a estabilidade do filme lacrimal tende a se reduzir de modo linear da forma leve até à severa da CCS.(AU)

Effect of 0, 15% sodium hialuronate and 0, 5% carboxymethylcellulose on tear film breakup time in healthy dogs and in dogs with keratoconjunctivitis sicca / Efeito do hialuronato de sódio a 0, 15% e da carboximetilcelulose sódica a 0, 5% no tempo de ruptura do filme lacrimal de cães saudáveis e com ceratoconjuntivite seca

This study aimed to evaluate the effect of the 0.15% sodium hyaluronate (SH) and of 0.5% carboxymethylcellulose (CMC) on tear film breakup time (TFBUT) in 10 healthy dogs and in 32 eyes of dogs with keratoconjunctivis sicca (KCS). In addition, the goblet cell density (GCD) of this population was quantified. TFBUT was assessed at baseline and at different time points following the instillation of SH and CMC. KCS was graded as mild, moderate, and severe. GCD were quantified from conjunctival biopsies. The number of GCD differed significantly between patients with mild and moderate KCS (P<0.01). TFBUT of healthy dogs increased only for 1 minute after treatment with SH (P<0.01). Regarding baseline and treatments, SH significantly increased TFBUT for up to 30 minutes on the ocular surface, in comparison to CMC, in all categories of KCS (P<0.01). TFBUT and GCD correlated positively when the healthy and diseased eyes were grouped (r=0.41, P=0.006). It can be concluded that in dogs with KCS, SH lasts longer periods on the ocular surface than CMC, but such agents does not increase TFBUT in healthy dogs. Additionally, tear film stability tends to reduce in a linear fashion from the mild to severe form of KCS.(AU)

Objetivou-se avaliar os efeitos do hialuronato de sódio a 0,15% (HS) e da carboximetilcelulose a 0,5% (CMC) no teste de ruptura do filme lacrimal (TRFL) em 10 cães saudáveis e em 32 olhos de cães com ceratoconjuntivite seca (CCS). Ademais, quantificou-se a densidade de células caliciformes (DCC) deles. Mensurou-se o TRFL em momentos distintos antes e após a instilação do HS e da CMC. Graduou-se a CCS em leve, moderada e severa. Quantificou-se a DCC a partir de biópsias conjuntivais. A DCC diferiu apenas entre pacientes com CCS leve e severa (P<0,01). Em cães saudáveis, o TRFL se elevou apenas após um minuto do tratamento com HS (P<0,01). Relativamente ao período basal e entre os tratamentos, o HS elevou o TRFL de forma mais eficaz e permaneceu por até 30 minutos na superfície ocular, comparativamente à CMC, em todas as categorias de CCS (P<0,01). Ao se agruparem os olhos saudáveis e os com CCS, o TRFL se correlacionou com a DCC (r=0.41, P=0.006). Conclui-se que o HS permanece por maior tempo na superfície ocular que a CMC em cães com CCS, mas que tais substâncias não elevam o TRFL em cães saudáveis. Ademais, a estabilidade do filme lacrimal tende a se reduzir de modo linear da forma leve até à severa da CCS.(AU)

Análise morfométrica da parede intestinal e dinâmica de mucinas secretadas no jejuno de frangos suplementados com probiótico Bacillus subtilis cepa C3102 / Morphometric analysis of the intestinal wall and the dynamic of mucins secreted in the jejunum of broilers supplemented with Bacillus subtilis strain C3102

O objetivo deste estudo foi analisar a morfometria da parede intestinal e a dinâmica de mucinas secretadas no jejuno de frangos de corte suplementadas com probiótico Bacillus subtilis cepa C3102. Foram utilizados 720 pintinhos com um dia de vida, divididos em dois grupos: GA (Grupo controle) - aves alimentadas com ração sem suplementação de Bacillus subtilis cepa C3102 (1º ao 35º dia) e GB (Grupo tratado) - aves alimentadas com ração com suplementação de Bacillus subtilis cepa C3102 (1º ao 35º dia). Aos 7 e 35 dias 2cm do jejuno foram coletados e submetidos à rotina de processamento histológico. Cortes transversais de 1μm foram corados pela técnica do Alcian Blue (AB) para detecção de sialomucinas (pH 0,5) e sulfomucinas (pH 2,5), como também para contagem de células caliciformes presentes. A análise histoquímica revelou uma maior quantidade de sialomucinas presentes no jejuno dos animais que foram suplementados com probiótico Bacillus subtilis cepa C3102 (GB), quando comparados com os animais do grupo controle (GA). O número de células caliciformes presentes no grupo tratado (GB) foi superior ao grupo controle (GA).(AU)

The aim of this study was to analyze the morphology of the intestinal wall and the dynamics of mucins secreted in the jejunum of broilers supplemented with probiotic Bacillus subtilis strain C3102. We used 720 chicks with a day of life, divided into two groups: GA (control group) - birds fed diet without supplementation of Bacillus subtilis strain C3102 (1 to 35 days) and GB (treated group) - birds fed with supplementation of Bacillus subtilis strain C3102 (1 to 35 days). On the 7th and the 35th day, 2cm of jejunum were collected and submitted to histological processing. 1μm cross sections were stained by Alcian blue (AB) for detecting of sialomucins (pH 0.5) and sulphomucins (pH 2.5) as well as to count goblet cells. Histochemical analysis revealed a greater amount of sialomucins in the jejunum of animals that were supplemented with probiotic Bacillus subtilis strain C3102 (GB), when compared with the control group (GA). The number of goblet cells in the treated group (GB) was higher than the control group (GA).(AU)

MICROINJEÇÕES INTRAMURAIS DE CLORETO DE BENZALCÔNIO NA SÍNDROME DO INTESTINO CURTO EM RATOS WISTAR APÓS ENTERECTOMIA EXTENSA.

A síndrome do intestino curto (SIC) representa uma condição clínica grave, caracterizada pela deficiente absorção intestinal de nutrientes, causada pela perda extensa do intestino delgado, culminando em altas taxas de mortalidade tanto em pacientes humanos quanto veterinários. Os tratamentos disponíveis não possuem, até então, resultados satisfatórios para resolução desta importante afecção e consistem em terapias paliativas. Diversos estudos demostraram que o método de desnervação intestinal intrínseca, com utilização do Cloreto de Benzalcônio (CB), consiste em promissora esperança na busca de terapias menos invasivas e eficazes no tratamento da SIC, permitindo melhora nas condições pós-cirúrgicas e prognóstico dos pacientes, por aumentar a área absortiva do intestino. Objetivou-se, com esse trabalho, avaliar a população de células neuroendócrinas, caliciformes e serotoninérgicas na Síndrome do Intestino Curto, a fim de compreender de que maneira a desnevação mientérica com Cloreto de Benzalcônio 0,3% no íleo poderia influenciar no tratamento de pacientes portadores de SIC. Foram utilizados 18 ratos, distribuídos em três grupos (GC - Grupo Controle; GE Grupo Enterectomia-enteroanastomose e GECB - Grupo enterectomia/enteroanastomose com uso do CB) contendo seis animais cada. Os animais do GC receberam microinjeções intramurais de solução salina estéril 0,9%, os animais do GE foram submetidos à ressecção intestinal extensa e os animais do GECB foram submetidos também à ressecção intestinal extensa, porém, receberam microinjeções intramurais de CB. Posteriormente, foi realizada a análise histopatológica, histoquímica e imunoistoquímica, para avaliação da população de células neuroendócrinas no jejuno e íleo. Houve aumento significativo (p<0,05) na contagem de células serotoninérgicas no GECB nos dois segmentos intestinais estudados e não houve alteração significativa na população de células caliciformes nos diferentes grupos. Os resultados obtidos foram possíveis por meio da avaliação da marcação específica positiva para PAS na histoquímica para as células caliciformes e Anticorpo anti-serotoninérgico na imunoistoquímica para as células serotoninérgicas. Nas condições em que este trabalho fora conduzido é possível concluir que o tratamento com microinjeções intramurais de CB 0,3% no íleo de ratos Wistar não foi suficiente para alterar a população de células caliciformes nos segmentos jejunais e ileais. Conclui-se também que o CB foi capaz de promover aumento da população de células serotoninérgicas, o que por sua vez, pode auxiliar no aumento das funções promovidas pela serotonina no intestino, auxiliando no trânsito intestinal de pacientes com SIC.

Short bowel syndrome (SBS) represents a serious clinical condition in medicine, characterized by deficient intestinal absorption of nutrients, caused by extensive loss of the small intestine, culminating in high mortality rates in both human and veterinary patients. The available treatments do not have, until then, satisfactory results for the resolution of this important condition and consist of palliative therapies. Several studies have shown that the intrinsic intestinal denervation method, with the use of Benzalconium Chloride (BC), consists of promising hope in the search for less invasive and effective therapies in the treatment of SBS, allowing improvement in the post-surgical conditions and prognosis of patients, by increasing the absorptive area of the intestine. The objective of this work was to evaluate the population of neuroendocrine, callic and serotonergic cells in SBS, in order to understand how myenteric destination with 0.3% BC in the ileum may influence the treatment of patients with SBS. 18 rats were divided into three groups (CG - Control Group; EGEnterectomy-enteroanastomosis group and GEBC - Enterectomy/enteroanastomosis group using BC) containing six animals each. The animals of the CG received intramural microinjections of 0.9% sterile saline solution, the eg animals were submitted to extensive intestinal resection and the GEBC animals were also submitted to extensive intestinal resection, but received intramural microinjections of BC. Subsequently, histopathological, histochemistry and immunohistochemical analysis was performed to evaluate the population of neuroendocrine cells in the jejunum and ileus. There was a significant increase (p<0.05) in the count of serotonergic cells in the GEBC in the two intestinal segments studied and there was no significant change in the population of goblet cells in the different groups. The results obtained were possible by evaluating the specific positive marking for SBP in histochemistry for the goblet cells and anti-serotonergic antibody in immunohistochemistry for serotonin cells. Under the conditions in which this study was conducted, it is possible to conclude that treatment with intramural microinjections of 0.3% BC in the ileum of Wistar rats was not sufficient to alter the population of goblet cells in the jejunal and ileasegments. It is also concluded that it was able to promote an increase in the population of serotonergic cells, which in turn can help in increasing the functions promoted by serotonin in the intestine, assisting in the intestinal transit of patients with SIC.

Effect of dietary arginine supplementation after hatching on the intestinal morphometry and integrity of chicks housed under health challenge conditions

Background: Arginine (Arg) is an essential amino acids for birds, especially in the starter phase. The degradation of Argproduces ornithine, a precursor of polyamines that are considered nutritionally important local factors for growth and thedevelopment of small intestinal of the newly hatched chick. The first week is a critical time intestine development andthe aggression to the mucosa may compromise the final productive result. This study aimed to evaluate the productiveperformance, intestinal morphometry and integrity of broilers housed under health challenge conditions and supplementedwith L-Arginine in the pre-starter diet.Materials, Methods & Results: Three-hundred-twenty male Cobb chicks were randomly assigned according to a completelyrandomized design with 4 treatments and 5 replications of 16 birds each. Treatments consisted of: A: control (basal diet);B: diet with 1% L-Arginine; C: health challenge (reused poultry manure litter) + basal diet; D: health challenge (reusedpoultry manure litter) + diet with 1% L-Arginine. The reused poultry manure litter was obtained from a commercial poultryfarm with birds in the final growth phase and without any previous treatment. In order to achieve the supplemented dietsit was added 1% Arg replacing the inert. At the ages of seven days, all the birds and the feed remains were weighed inorder to determine body weight gain, feed intake and feed conversion ratio. The small intestine of twenty birds per treatment was weighed and measured; samples of duodenum, jejunum and ileum were taken for injury assessment scores, formorphometric study and counting of goblet cells in segments of the duodenum...(AU)

Effect of dietary arginine supplementation after hatching on the intestinal morphometry and integrity of chicks housed under health challenge conditions

Background: Arginine (Arg) is an essential amino acids for birds, especially in the starter phase. The degradation of Argproduces ornithine, a precursor of polyamines that are considered nutritionally important local factors for growth and thedevelopment of small intestinal of the newly hatched chick. The first week is a critical time intestine development andthe aggression to the mucosa may compromise the final productive result. This study aimed to evaluate the productiveperformance, intestinal morphometry and integrity of broilers housed under health challenge conditions and supplementedwith L-Arginine in the pre-starter diet.Materials, Methods & Results: Three-hundred-twenty male Cobb chicks were randomly assigned according to a completelyrandomized design with 4 treatments and 5 replications of 16 birds each. Treatments consisted of: A: control (basal diet);B: diet with 1% L-Arginine; C: health challenge (reused poultry manure litter) + basal diet; D: health challenge (reusedpoultry manure litter) + diet with 1% L-Arginine. The reused poultry manure litter was obtained from a commercial poultryfarm with birds in the final growth phase and without any previous treatment. In order to achieve the supplemented dietsit was added 1% Arg replacing the inert. At the ages of seven days, all the birds and the feed remains were weighed inorder to determine body weight gain, feed intake and feed conversion ratio. The small intestine of twenty birds per treatment was weighed and measured; samples of duodenum, jejunum and ileum were taken for injury assessment scores, formorphometric study and counting of goblet cells in segments of the duodenum...

Immune response and use of organic acids in broilers challenged with Salmonella Minnesota / Resposta imunológica e uso de ácidos orgânicos em frangos desafiados com Salmonella Minnesota

Background: Salmonella control in poultry industry is of great importance to prevent foodborne diseases in humans. Theintense control of Salmonella Enteritidis caused an increased isolation of other serotypes as Salmonella Minnesota (SM),and it cannot be affi rmed that additives used to control Salmonella Enteritidis showed the same effi cacy to control of otherserovars. Therefore, the aim of this study was to evaluate the pathogenesis of SM in challenged broilers and the use ofdifferent organic acids for SM control in broilers.Materials, Methods & Results: In the present study, three experiments were conducted. In the fi rst experiment an in vivostudy to evaluate the pathogenesis of the SM in broilers where the birds were divided into 4 treatments with 15 animalseach: T1 - animals inoculated orally with SM, T2 - animals inoculated through feed with SM, T3 - “in-contact” birds cagedwith SM challenged birds and T4 - negative control. At 12, 24 and 48 h after the challenge, the crop, duodenum, cecumand liver were collected to detect SM. It was also collected fragments of jejunum, ileum and cecum for histopathologicaland immunohistochemistry analysis. At the microbiological evaluation 12 h after inoculation, it has already been possibleto observe the presence of SM in the crop, duodenum and cecum of birds challenged orally and through feed. Twentyfour h after contact with the challenged birds, the in-contact group have already shown the presence of SM in crop andduodenum. It was observed a signifi cant increase of goblet cells in the jejunum 24 h post inoculation (PI) in the orallyinoculated birds, and in the ileum 48 h PI in the feed challenged birds. In immunohistochemical evaluation, 12 h PI thebirds challenged orally have already shown a signifi cant increase in the number of CD3+ cells in the jejunum and 24 h PIa signifi cant increase of these cells in the ileum and cecum. In the second experiment an in vitro study was also performedto...(AU)

Immune response and use of organic acids in broilers challenged with Salmonella Minnesota / Resposta imunológica e uso de ácidos orgânicos em frangos desafiados com Salmonella Minnesota

Background: Salmonella control in poultry industry is of great importance to prevent foodborne diseases in humans. Theintense control of Salmonella Enteritidis caused an increased isolation of other serotypes as Salmonella Minnesota (SM),and it cannot be affi rmed that additives used to control Salmonella Enteritidis showed the same effi cacy to control of otherserovars. Therefore, the aim of this study was to evaluate the pathogenesis of SM in challenged broilers and the use ofdifferent organic acids for SM control in broilers.Materials, Methods & Results: In the present study, three experiments were conducted. In the fi rst experiment an in vivostudy to evaluate the pathogenesis of the SM in broilers where the birds were divided into 4 treatments with 15 animalseach: T1 - animals inoculated orally with SM, T2 - animals inoculated through feed with SM, T3 - “in-contact” birds cagedwith SM challenged birds and T4 - negative control. At 12, 24 and 48 h after the challenge, the crop, duodenum, cecumand liver were collected to detect SM. It was also collected fragments of jejunum, ileum and cecum for histopathologicaland immunohistochemistry analysis. At the microbiological evaluation 12 h after inoculation, it has already been possibleto observe the presence of SM in the crop, duodenum and cecum of birds challenged orally and through feed. Twentyfour h after contact with the challenged birds, the in-contact group have already shown the presence of SM in crop andduodenum. It was observed a signifi cant increase of goblet cells in the jejunum 24 h post inoculation (PI) in the orallyinoculated birds, and in the ileum 48 h PI in the feed challenged birds. In immunohistochemical evaluation, 12 h PI thebirds challenged orally have already shown a signifi cant increase in the number of CD3+ cells in the jejunum and 24 h PIa signifi cant increase of these cells in the ileum and cecum. In the second experiment an in vitro study was also performedto...

Morfologia ultraestrutural de células caliciformes da conjuntiva palpebral de cães

Objetivo Descrever a morfologia de células caliciformes da conjuntiva palpebral de cães por microscopia eletrônica de transmissão e varredura. Animais estudados Dez cães (20 olhos), machos e fêmeas, de diferentes raças, sem alterações oculares. Procedimentos Dez amostras da conjuntiva palpebral de cães foram coletadas e processadas para as microscopias eletrônicas de varredura (MEV) e transmissão (MET) e outras10 amostras foram coradas com PAS e Alcian blue, pH 2,5 e analisadas por microscopia de luz. Resultados Através da MEV foram observados vários pontos de extrusão de muco na porção apical livre das células caliciformes, além de ampla distribuição de folículos linfoides e de macrófagos entremeando microvilosidades das células do epitélio palpebral. Por MET foram visualizadas células caliciformes normais, predominantemente ovaladas com citoplasma amplo de diferentes diâmetros, podendo-se observar grandes vesículas com grânulos heterogêneos e bordas livres sugerindo liberação de conteúdo mucoso na superfície conjuntival. Foram observadas, ainda, organelas citoplasmáticas como o aparelho de Golgi, retículo endoplasmático e uma alta concentração de mitocôndrias. Todas as amostras foram positivas para PAS e Alcian blue. Conclusão Este estudo descreveu as células caliciformes da conjuntiva palpebral de cães saudáveis através de técnicas de microscopia eletrônica de forma pioneira. Estes resultados poderão ser utilizados para descrição comparativa com animais que cursem com alterações oculares, bem como com outras espécies.

Objective To describe the morphology of goblet cells of the palpebral conjunctiva of dogs by transmission and scanning electron microscopy. Studied animals Ten dogs (20 eyes), male and female, from different breeds, without ocular alterations. Procedures Ten samples of the palpebral conjunctiva of dogs were collected and processed for scanning electron microscopy (SEM) and transmission (MET) and another 10 samples were stained with PAS and Alcian blue, pH 2.5 and analyzed by light microscopy. Results Through the SEM, several mucus extrusion points were observed in the free apical portion of the goblet cells, as well as a wide distribution of lymphoid follicles and macrophages interspersed with microvilli of the palpebral epithelial cells. By MET, normal goblet cells were seen, predominantly oval with broad cytoplasm of different diameters, being possible to observe large vesicles with heterogeneous granules and free borders suggesting the release of mucous contents on the conjunctival surface. Cytoplasmic organelles such as the Golgi apparatus, endoplasmic reticulum and a high concentration of mitochondria were also observed. All samples were positive for PAS and Alcian blue. Conclusion This study described the goblet cells of the palpebral conjunctiva of healthy dogs using electron microscopy techniques in a pioneering way. These results may be used for comparative description of animals with ocular changes as well as other species.

Alterações histológicas do epitélio intestinal de juvenis de dourado Salminus brasiliensis alimentados com dietas contendo fontes proteicas vegetais

Restrições econômicas e ambientais trazem a necessidade de substituir a farinha de peixe em dietas de organismos aquáticos por matérias-primas menos dispendiosas de origem vegetal. Entretanto, tais fontes proteicas vegetais possuem fatores antinutricionais que podem ter efeitos negativos sobre o sistema digestório dos peixes, alterando a saúde e, em consequência, a produção. O objetivo deste trabalho foi avaliar a digestibilidade e alterações na histologia do epitélio intestinal de juvenis do Characiforme carnívoro dourado, Salminus brasiliensis, alimentados com dietas contendo farelo de soja (FSO), farelo de algodão (FAl) e farelo de amendoim (FAM) como principais fontes proteicas. Foram conduzidos dois experimentos: digestibilidade (Ensaio I) e histológico (Ensaio II). O Ensaio I foi conduzido em protocolo padrão utilizando dietas práticas adicionadas do marcador inerte óxido de crômio III (CR2O3) e sistema Guelph modificado para coleta de fezes e consequente cálculo dos coeficientes de digestibilidade. No Ensaio II as mesmas fonte proteicas FSO, FAL e FAM foram utilizadas em substituição à proteína da farinha de peixe em uma dieta controle com cinco níveis de inclusão: 0 (controle), 25,0 %; 50%; 75,0% e 100%, em um delineamento inteiramente aleatorizado (n=3). O experimento teve a duração de 40 dias, e as coleta de amostras de tecido foram feitas aos 20 e 40 dias. As amostras do intestino posterior foram analisadas quanto às características histológicas e morfológicas, além de quantificação de células caliciformes e análise histomorfométrica do tecido intestinal. Não foram registradas diferenças para os coeficientes de digestibilidade da proteína e energia no ensaio de digestibilidade. O ensaio de desempenho mostrou que a inclusão de FAM e FAL nas dietas melhora o consumo de alimento comparativamente ao FSO Em relação as variáveis histológicas, os níveis que condicionaram alterações significativas nos parâmetros morfométricos foram FSO50 e FOS75. O FSO50 promoveu uma redução das dobras intestinais aos 20 dias, porém aos 40 dias houve aumento na altura das dobras, no espessamento da lâmina-própria e aumento na densidade das células caliciformes. Considerando a microscopia de varredura, sinais acentuados de enterite foram registrados. A alteração na morfologia e histologia do epitélio intestinal foi reflexo da interação de efeitos dos fatores antinutricionais presentes em cada fonte proteica vegetal. Consequentemente, registrou-se menor ganho de peso, crescimento e diminuição da homeostase intestinal, embora os melhores consumos e CAA fossem registrados para os peixes alimentados com FAL e FP. Conclui-se que o FSO causou enterite nos juvenis de dourado e FAL e FAM podem ser utilizados na alimentação de dourado

Economic and environment constraints have brought the need to replace fishmeal (FM) in diets of aquatic organisms by less expensive feedstuff, especially dietary protein sources. However, such protein sources generally of plant origin, e.g. soybean meal, have antinutritional factors that can negatively affect digestive system of the fish, impairing health and consequently, production. To identify possible effects of plant protein sources in the diets for carnivore fish, this study evaluated effects of various dietary plant protein sources on digestibility, performance, histology of the intestinal epithelium of the carnivore, Neotropical Characin dourado, Salminus brasiliensis, fed plant protein-based diets. A digestibility trial was carried out in standard protocol using diets with inert marker chromium oxide III (Cr2O3) and modified system Guelph for feces. A performance test evaluated the use of three plant protein sources, soybean meal (SBM), cottonseed meal (CTM) and peanut meal (PTM) as surrogate protein source to fishmeal in a practical diet in five levels inclusion: 0 (control); 25.0%; 50.0%; 75.0% and 100%, in a randomized block design (n=3). Samples of tissue of intestinal tract of fish were collected in the distal segment at 20 and 40 days of the feeding period, and analyzed for histological and morphological characteristics. No differences were recorded for apparent digestibility coefficients (ADC) of feedstuff and energy and protein of feedstuffs. Dietary CM and PM elicited better feed consumption comparatively to the other feedstuff, Fish fed diet diet SBM50 presented reduction of intestinal folds at 20 days, but at 40 days had increased folds height, lamina propria thickening, and increased goblet cell density. Considering a scanning microscopy, evident signs of enteritis were registered. The alteration in the morphology and histology of the intestinal epithelium reflected the interaction of effects of the antinutritional factors present in each vegetable protein source, resulting in lower weight gain, growth and decreased intestinal homeostasis, even though best feed consumption and ADC were registered for fish fed CTM and FM.Concluded that SBM caused enteritis and CTM and PM can be used in feeding dourado.

Avaliação microbiológica, histológica e imunológica de frangos de corte desafiados com Salmonella Enteritidis e Minnesota e tratados com ácidos orgânicos / Microbiology, histology and immunology evaluation of broiler chickens challenged against Salmonella Enteritidis and Minnesota and treated with organic acids

Dois experimentos foram desenvolvidos para avaliar a eficiência de ácidos orgânicos frente a Salmonella enterica enterica sorovar Enteritidis (SE) e Minnesota (SM) em frangos. No primeiro experimento foram avaliados 3 tratamentos: T1 - ração adicionada de ácido orgânico, T2 - ração adicionada de ácido orgânico e ácido orgânico na água de bebida, T3 - grupo controle. Todos os animais foram inoculados com SE, via oral. A utilização de ácidos orgânicos na ração (T1) e na ração e na água (T2) diminuíram a excreção de Salmonella no papo e no ceco 7 dias pós inoculação com SE e houve redução de células CD3+ no jejuno dos frangos. No segundo experimento foram avaliados 4 tratamentos sendo T1 - controle, T2 - controle inoculado via oral com Salmonella Minnesota (SM), T3 - animais inoculados via oral com SM e ácidos orgânicos na ração e T4 - animais inoculados via oral com SM e ácidos orgânicos na ração e na água de bebida. Ácidos orgânicos a ração (T3) e na ração e na água (T4) reduziram a excreção de SM em papo de frangos de corte desafiados, 7 dias após inoculação. O uso de ácidos orgânicos na ração e na ração e na água foram mais eficientes em reduzir SE do que SM.(AU)

Two experiments were carried out to evaluate effectiveness of organic acids against Salmonella enterica enterica serovars Enteritidis (SE) and Minnesota (SM) in broilers. In the first experiment three treatments were evaluated: T1 - feeding with organic acids, T2 - feeding with organic acids and organic acids in drink water, and T3 - control group. All animals were oral challenged with SE. Organic acids in diet (T1) and organic acids in diet and drink water (T2) reduced the shadding of Salmonella in crop and cecum 7 days post challenged with SE and reduced the CD3+ cells in jejunal mucosa of broilers. In the second experiment four treatments were evaluated, T1 - control group, T2 - control group oral challenged with Salmonella Minnesota (SM); T3 - oral challenged animals with SM and treated with organic acids in diet; T4 - oral challenged animals with SM and treated with organic acids in diet and in drink water. Organic acids in diet (T3) and organic acids in diet and in drink water (T4) reduced the shadding of SM in crop of challenged broilers, 7 days post inoculation The use of organic acids in diet and in water was more effective to control SE than SM.(AU)

EFEITO DOS COLÍRIOS HIALURONATO DE SÓDIO (0,15%) E CARBOXIMETILCELULOSE SÓDICA (0,5%) NO TEMPO DE RUPTURA DO FILME LACRIMAL DE CÃES COM CERATOCONJUNTIVITE SECA E CÃES SAUDÁVEIS E O EFEITO DO COLÍRIO HIALURONATO DE SÓDIO (0,15%) EM GATOS SAUDÁVEIS ANTES E

Objetivou-se avaliar os efeitos do hialuronato de sódio a 0.15% (HS) e da carboximetilcelulose a 0.5% (CMC) no tempo de ruptura do filme lacrimal (TRFL) em 10 cães saudáveis e em 32 olhos de cães com ceratoconjuntivite seca (CCS). Ademais, considerou-se quantificar a densidade de células caliciformes (DCC) dos mesmos. O TRFL foi aferido para obtenção de valores basais e em momentos distintos após a instilação do HS e da CMC. A CCS foi graduada em leve, moderada e severa. A DCC foi quantificadas a partir de biópsias conjuntivais. O número da DCC diferiu apenas entre pacientes com CCS leve e severa (P<0.01). O TRFL em cães saudáveis teve um aumento apenas após 1 minuto do tratamento com HS (P<0.01). Relativamente ao período basal e entre os tratamentos, o HS elevou o TRFL de forma mais eficaz e permaneceu por até 30 minutos na superfície ocular, comparativamente à CMC, em todas as categorias de CCS (P<0.01). Ao se agrupar os olhos saudáveis e os com CCS, o TRFL se correlacionou com a DCC (r=0.41, p=0.006). Conclui-se que com a severidade da CCS as CC tende a diminuir, sendo assim a permanência da lágrima na superfície ocular tende a reduzir de forma linear. O HS permanece por maior tempo na superfície ocular que a CMC em cães com CCS, mas que tais substâncias não elevam o TRFL em cães saudáveis.

This study aimed to evaluate the effect of the 0.15% sodium hyaluronate (SH) and of 0.5% carboxymethylcellulose (CMC) on tear film breakup time (TFBUT) in 10 healthy dogs and in 32 eyes of dogs with keratoconjunctivis sicca (KCS). In addition, the goblet cell density (GCD) of this population was quantified. TFBUT was assessed at baseline and at different time points following the instillation of SH and CMC. KCS was graded as mild, moderate and severe. GCD were quantified from conjunctival biopsies. The number of GCD differed significantly between patients with mild and moderate KCS (P<0.01). TFBUT of healthy dogs increased only at 1 minute after treatment with SH (P<0.01). Regarding baseline and treatments, SH significantly increased TFBUT for up to 30 minutes on the ocular surface, in comparison to CMC, in all categories of KCS (P<0.01). TFBUT and GCD correlated positively when the healthy and diseased eyes were grouped (r=0.41, P=0.006). It can be concluded that in GCD the TFBUT showed that the tear film stability tends to reduce in a linear fashion from the mild to severe form of KCS. And in dogs with KCS, SH lasts longer periods on the ocular surface than CMC, but such agents does not increase TFBUT in healthy dogs.

Efeitos do uso tópico do conservante Cloreto de Benzalcônio e Ciclosporina na conjuntiva de coelhos - Estudo Histomorfométrico e Imuno-histoquímico

A presente dissertação de mestrado buscou contribuir com informações sobre os efeitos tóxicos do conservante cloreto de benzalcônio (BAK) tópico na conjuntiva de coelhos e o possível efeito protetor da ciclosporina 0,05% nessa toxicidade, particularmente no que diz respeito à ação dessas drogas sobre as células caliciformes, fibrose tecidual, inflamação do endotélio vascular, estimulação da angiogênese, além da ativação de linfócitos T reativos. O primeiro capítulo aborda o estudo histomorfométrico da conjuntiva em amostras coradas com Hematoxilina e Eosina (HE) e Ácido periódico de Schiff (PAS) e a análise da ação do BAK unicamente sobre as células caliciformes e a neovascularização do tecido inflamado, assim como a ação da ciclosporina sobre esses parâmetros. O segundo capítulo aborda a avaliação imuno-histoquímica das alterações induzidas pelo BAK e a possível inibição dessas alterações pela ciclosporina, analisando a indução de fibrose tecidual pela expressão de colágeno tipo I e III, a expressão de vasos sanguíneos reativos por meio do anticorpo anti-VCAM-1 e a expressão de linfócitos T reativos por meio do anticorpo anti-CD45RO. O objetivo do estudo foi oferecer uma alternativa de tratamento que atenue os efeitos deletérios da inflamação crônica causada pelos conservantes presentes em colírios no tratamento contínuo do glaucoma (mais especificamente o BAK), comprovando que a ciclosporina possui ação positiva em alguns dos parâmetros estudados.

This dissertation sought to investigate the toxic effects of topical benzalkonium chloride (BAK) on the conjunctiva of rabbits and a possible protective effect for the use of cyclosporine 0.05% against this toxicity, particularly with respect to the action of these drugs on goblet cells, tissue fibrosis, inflammation of vascular endothelium, stimulation of angiogenesis, and activation of reactive T lymphocytes. The first chapter is a classic histomorphometric study of the conjunctiva in samples stained with Hematoxylin and Eosin (HE) and PAS and the analysis of the BAK activity only on goblet cells and the neovascularization of the inflamed tissue, as well as the action of cyclosporine on these parameters. The second chapter is an immunohistochemical evaluation of BAK-induced changes and the possible inhibition of these alterations by cyclosporine, analyzing the induction of tissue fibrosis by the expression of collagen type I and III, the expression of reactive blood vessels by anti- VCAM-1 and the expression of reactive T lymphocytes by the anti-CD45RO antibody. The objective of the study was to investigate and perhaps to offer a treatment alternative that would alleviate the deleterious effects of chronic inflammation caused by preservatives present in eye drops in the continuous treatment of glaucoma (more specifically BAK), proving that cyclosporine has a positive preventing activity in some of the toxic effects studied.

Estudos morfológicos, histoquímicos e ultraestruturais do tubo digestivo de três espécies do gênero Leporinus (Characiformes, Anostomidae)

Este trabalho descreveu o tubo digestivo Leporinus elongatus, L. macrocephalus e L. obtusidens, por meio de estudos anatômicos, histológicos, histoquímicos e ultraestruturais. Fragmentos de esôfago, estômago e intestino foram destinados para rotinas morfológicas, histoquímicas de mucossubstâncias e citoquímica para detecção de fosfatase alcalina. A estrutura do tubo digestivo das três espécies estudadas estava composta por esôfago curto, estômago cecal em formato de Y e intestino enovelado com pregas circulares relacionadas ao aumento do tempo de passagem do alimento. Cecos pilóricos foram observados no intestino anterior, associados à digestão e aumento da superfície de absorção. O esôfago apresentou epitélio estratificado pavimentoso, composto por células epiteliais e células caliciformes. As células epiteliais voltadas para o lúmen esofágico apresentaram microssaliências digitiformes na membrana plasmática apical, associadas a proteção e ancoragem de mucossubstâncias. As células caliciformes apresentaram citoplasma repleto de grânulos de secreção com eletrondensidades diferentes. Os grânulos foram compostos por mucossubstâncias neutras e ácidas em diferentes intensidades dependendo da região do órgão observada e da espécie estudada. Em L. macrocephalus foram encontrados botões gustativos na região anterior do esôfago, importantes para o paladar e seleção do alimento. O estômago foi dividido em regiões cárdica e fúndica glandulares e região pilórica aglandular com presença de esfíncter pilórico. O epitélio de revestimento gástrico apresentou-se simples colunar com mucossubstâncias apicais neutras relacionadas a proteção da mucosa contra os sucos gástricos. O intestino apresentou epitélio simples colunar composto principalmente por enterócitos com microvilosidades apicais que diminuíram em altura na direção posterior, e células caliciformes que aumentaram em número na direção do reto. A enzima fosfatase alcalina foi observada na borda em escova com maior intensidade no intestino anterior. As células caliciformes mostraram grânulos de secreção neutros e ácidos, importantes para proteção, lubrificação e transformação do alimento em quimo. Ainda, observou-se células rodlet no epitélio intestinal de L. macrocephalus e L. elongatus associadas ao sistema imune de teleósteos. Os resultados apresentados possibilitaram correlacionar as características morfológicas e funcionais do tubo digestivo de três espécies importantes do gênero Leporinus, contribuindo para o desenvolvimento de estudos nutricionais, essenciais para a melhoria da piscicultura baseada nessas espécies.

This work described the digestive tube of Leporinus elongatus, L. macrocephalus and L. obtusidens by anatomic, hislogical, histochemical and ultrastructural studies. Fragments of esophagus, stomach, and intestine were destined to morphological, histochemical and cytochemistry routines. The structure of the digestive tube of the three species studied were composed by short esophagus, Y-shaped caecal stomach and coiled intestine with circular folds related to an increase in time of food passage. Pyloric caeca were observed in the anterior intestine associated with digestion and a increase of absorption surface. The esophagus presented a stratified squamous epithelium, composed by ephitelial cells and goblet cells. The epithelial cells turned to the esophageal lumen presented fingerprint-like microridges in the apical plasmatic membrane associated to the protection and Anchorage of mucosubstances. The goblet cells presented cytoplasm filled with secretion granules showing different eletrodensities. The granules were composed of neutral and acidic mucosubstances in different instensities dependind of the organ region observed and specie studed. In L. macrocephalus were found taste buds in the anterior region of esophagus, important for taste and food selection. The stomach was divided in glandular cardic and fundic regions and aglandular pyloric region with the presence of pyloric sphincter. The gastric lining epithelium was identified as columnar simple with neutral apical mucosubstances related to musoca protection against gastric acids. The instestine presented simple columnar epithelium composed mainly for enterocytes with apical microridges that decreased in height in the posterior direction and goblet cells that increased in number toward the rectum. The enzyme alkaline phosphatase was observed in the brush border with higher intensity in the anterior intestine. The goblet cells showed neutral and acidic secretion granules important for protection, lubrication and conversion of food into chyme. Furthermore, it was observed rodlet cells in the intestinal epithelium of L. macrocephalus and L. obtusidens associated with the imune system of teleosts. The results presented allow to correlate the morphological and functional characteristics of the digestive tube of three important species in Leporinus genre, contributing to the development of nutritional studies, essential to the improvement of Brazilian fish culture.

AVALIAÇÃO DA RESPOSTA IMUNOLÓGICA NO TRATO GASTRINTESTINAL DE FRANGOS DESAFIADOS COM Salmonella enterica: USO DE ADITIVOS FITOGÊNICOS E ÁCIDOS ORGÂNICOS.

Salmonella é uma bactéria responsável por perdas econômicas na cadeia avícola e por toxinfecções alimentares em pessoas. A bactéria pode ser sistêmica como Salmonella Pullorum e Salmonella Gallinarum, causando septicemia e mortalidade ou não sistêmica, como Salmonella Typhimurium, Salmonella Enteritidis, Salmonella Heidelberg e Salmonella Minnesota que desenvolvem poucos sinais clínicos nos animais. A presente Tese está dividida em 6 capítulos. O capítulo 1 refere-se à Introdução, abordando aspectos básicos da epidemiologia da Salmonella e o objetivo geral do trabalho. No capítulo 2 é apresentada uma revisão sobre a patogenicidade da Salmonella, abordando seus principais fatores de virulência na célula hospedeira. Além disso, também são abordadas as principais alterações na dinâmica celular do trato gastrintestinal ocasionada pela Salmonella e as principais medidas de controle da enfermidade em plantéis avícolas. Essas medidas de controle vão desde medidas básicas de biosseguridade até aditivos como ácidos orgânicos, aditivos fitogênicos e produtos que proporcionam exclusão competitiva. No capítulo 3 foi demonstrado que o extrato de sanguinarina na água de bebida é eficiente em reduzir a contagem de Salmonella Enteritidis no papo e ceco de frangos, além de reduzir a expressão de células caliciformes e CD3+ no duodeno e jejuno e aumentar a expressão de células imunológicas no sangue periférico quando comparados ao grupo que não recebeu sanguinarina. No capítulo 4 foi avaliada a patogenia da Salmonella Minnesota em frangos de corte e avaliou-se o efeito in vitro e in vivo de diferentes ácidos orgânicos demonstrando a baixa eficiência destes no controle da Salmonella Minnesota. No capítulo 5 foi realizada a análise retrospectiva de resultados de microbiologia e dinâmica da imunidade celular do trato gastrintestinal de frangos desafiados com Salmonella enterica sorovares Enteritidis, Minnesota e Heidelberg, onde se observou que a quantidade de salmonela no ceco e a mobilização de células imunológicas no trato gastrintestinal de frangos desafiados é dependente do sorovar avaliado. No capítulo 6, em trabalho realizado em parceria com a Universidade da Geórgia, foi avaliada a contribuição de genes da Salmonella Typhimurium de função desconhecida na colonização do trato gastrointestinal de frangos. Estes estudos demonstram a interferência dos diferentes sorovares de salmonelas paratíficas na dinâmica celular do trato gastrointestinal de aves e algumas medidas de controle desta enfermidade. Palavras-chave: Salmonella enterica, imunoistoquímica, células caliciformes, sistema imunológico, linfócitos T, aditivos.

Salmonella is a bacterium responsible for economic losses in the poultry chain and food poisoning in humans. This bacterium can be systemic in birds such as Salmonella Pullorum and Salmonella Gallinarum causing septicemia and mortality or non-sistemic such as Salmonella Typhimurium, Salmonella Enteritidis, Salmonella Heidelberg and Salmonella Minnesota that present few clinical signs in animals. This Thesis is divided into six chapters. Chapter 1 refers to Introduction, addressing basic aspects of Salmonella epidemiology and the overall objective of the thesis. Chapter 2 presents a review of Salmonella pathogenicity, addressing its major virulence factors into the host cell. It is also addressed the major changes in cellular dynamics of the gastrointestinal tract caused by Salmonella and the main forms of disease control in poultry flocks. These forms of control range from basic biosecurity measures to additives such as organic acids, phytogenic additives and products that provide competitive exclusion. Chapter 3 shows that sanguinarine extract in drinking water is effective in reducing Salmonella Enteritidis count in crop and cecum of chickens, while reducing the expression of goblet cells and CD3+ cells in duodenum and jejunum and increasing immune cell expression in the peripheral blood when compared to the group that did not receive sanguinarine. Chapter 4 presents the evaluation of Salmonella Minnesota pathogenesis in broilers where the effect in vitro and in vivo of different organic acids was evaluated showing their low efficiency of Salmonella Minnesota control. Chapter 5 demonstrates a retrospective analysis of results of microbiology and immune cellular dynamics of gastrointestinal tract of challenged chickens with Salmonella enterica serovar Enteritidis, Minnesota and Heidelberg, where it was observed that the number of Salmonella in the cecum and the mobilization of immunological cells in gastroint estinal tract of challenged chickens is dependent on the assessed serovar. Chapter 6 presents the study performed in partnership with the University of Georgia where it was evaluated Salmonella Typhimurium gene contribution of unknown function in colonizing the gastrointestinal tract of chickens. These studies demonstrate the interference of different paratyphoid Salmonella serovars in cellular dynamics of poultry gastrointestinal tract and some control measurements of this disease.

Efeito do -glucano dietético na dinâmica metabólica, na resposta imunológica inata e no desempenho do pacu (Piaractus mesopotamicus) após ciclos curtos de jejum e realimentação

Este trabalho avaliou o efeito da administração oral de -glucano no crescimento, no aproveitamento do alimento, na dinâmica metabólica e nas respostas imunes inatas de juvenis de pacu (Piaractus mesopotamicus) submetidos a ciclos curtos de restrição alimentar e realimentação, e a ação imunoestimulante de -glucano oferecido por 15 dias na fase final dos ciclos. Um total de 210 peixes foi distribuído em 21 tanques e submetido a diferentes estratégias de alimentação durante sete semanas: GC - Alimentação todo dia com ração comercial (RC); G 6/1- Alimentação com RC por 6 dias e jejum por 1 dia (6/1); G 2/1 - Alimentação com RC por 2 dias e jejum por 1 dia (2/1); GCS - Alimentação todo dia com RC, e com suplementação de 0,5% de -glucano (RCS), nos últimos 15 dias; GS 6/1 - Alimentação com RC por 6 dias e 1 dia de jejum, e RCS nos últimos 15 dias; GS 2/1 - Alimentação com RC, por 2 dias de alimentação e 1 dia de jejum, e RCS nos últimos 15 dias. Um sétimo grupo (GC-PBS) foi alimentado todos os dias para controle do efeito da manipulação e do veículo da inoculação bacteriana. No dia 50, nove peixes de cada tratamento foram anestesiados com benzocaína (1,0g/15L de água) e pesados antes da obtenção de amostras de sangue, fígado, intestino anterior e músculo branco. Foram determinadas a taxa de crescimento especifico (TCE), a conversão alimentar (CA), a morfologia da mucosa intestinal, a concentração de metabólitos circulantes e teciduais, a atividade respiratória dos leucócitos (ARL), a concentração sérica de lisozima (CLS), a atividade hemolítica do sistema complemento no soro (AHC), a contagem total e diferencial de leucócitos e o infiltrado leucocitário epitelial (ILI) no intestino anterior. Os peixes restantes de cada tanque foram inoculados por injeção intraperitoneal de Aeromonas hydrophila, diluída em PBS. Um grupo (GC-PBS) foi injetado com o veículo PBS. Para determinação da resposta imunológica ao desafio com A. hydrophila, foram amostrados nove peixes de cada tratamento, às três e 24 horas depois do desafio. Os resultados mostraram que a TCE foi menor apenas no grupo 2/1 e a CA foi melhor em todos os peixes alimentados com -glucano. A estratégia alimentar 2/1 elevou a glicose circulante e mobilizou maior quantidade de reservas energéticas do fígado e músculo. O comprimento das vilosidades intestinais foi menor no grupo 2/1 e o número de células caliciformes diminuiu com a severidade da restrição alimentar, sendo que o -glucano aumentou esse número, inclusive nos peixes controle. A restrição alimentar prejudicou a resposta imunológica, diminuindo a ARL e a concentração de lisozima. O -glucano melhorou a resposta imunológica, causando aumento na ARL, AHC, lisozima, contagem de células de defesa no sangue e ILI. A infecção bacteriana aumentou a contagem de neutrófilos e monócitos e diminuiu os linfócitos, enquanto o -glucano aumentou a contagem de linfócitos, diminui-o os neutrófilos, potencializou o aumento de monócitos e aumentou o número de células granulocíticas especiais. Houve diminuição progressiva na IL no intestino dos peixes à medida que aumentou a frequência do jejum, mas o -glucano aumentou a IL, inclusive nos peixes controle. Concluindo, as estratégias alimentares testadas, embora afetassem negativamente alguns indicadores do sistema imune inato dos peixes, não impediram a resposta deste sistema frente a um desafio bacteriano. A suplementação com 0,5% de -glucano melhorou o aproveitamento do alimento independente da estratégia alimentar e melhorou a resposta imunológica do pacu ao desafio com Aeromonas hydrophila.

The objective of this study was to evaluate the effect of oral administration of -glucan on growth, feed utilization, metabolic dynamics and the innate immune responses of pacu (Piaractus mesopotamicus) subjected to short-term starvation and refeeding and the immunostimulatory action of -glucan offered for 15 days in the final phase of the cycle. A total of 210 fish was distributed in 21 tanks and submitted to different feeding strategies for seven weeks: GC - feeding daily with commercial feed (RC); G 6/1- 6- day feeding with RC and 1 restraint day (6/1); G 2/1 - 2-day feeding with RC and 1 restraint day (2/1); GCS - Feeding daily with RC and supplemented with 0.5% - glucan (RCS) in the last 15 days; GS 6/1 - 6-day feeding with RC and 1 restraint day, and RCS in the last 15 days; GS 2/1 - 2-day feeding with RC and 1 restraint day, and RCS in the last 15 days. A seventh group (GC-PBS) was fed every day to control the effect of the handling and bacterial inoculation (injected PBS control). On day 50, nine fish of each treatment were sampled, weighed and anaesthetized with benzocaine (1.0g / 15L water) for blood, liver, white muscle and foregut sampling, to determine the specific growth rate (SGR), feed conversion (CA), morphology of intestinal mucosa, concentration of circulating and tissue metabolites, leukocyte respiratory burst, serum lysozyme concentrations, serum hemolytic activity of complement system (alternative pathway), total leukocyte differential count and intestinal leukocyte infiltration (ILI). The remaining fish were inoculated with A. hydrophila, and the injected PBS control group received only PBS. Nine fish per treatment were sampled at three and 24 hours after inoculation. The results showed that the specific growth rate was lower in the fish G 2/1 and feed conversion was better in all fish fed with 0.5% -glucan. In fish G 2/1, blood glucose levels and non-esterified fatty acids were higher and triglyceride levels were lower Liver glycogen and lipid concentrations and lipid muscle concentration gradually decreased in fish G 6/1 and G 2/1 in relation to the CG showing higher mobilization of energy in liver and muscle. Length of intestinal villi was lower in fish 2/1, and the number of goblet cells decreased with the severity of feed restriction while -glucan increased this number, including in control fish. Food restriction affected the immune response, reducing the leukocyte respiratory activity, and the serum lysozyme. The - glucan supplementation improved immune response, increasing ARL, AHC, lysozyme, defense cell count and ILI. Bacterial infection increased neutrophils and monocytes and decreased lymphocytes, while the -glucan increased lymphocytes, decreased neutrophils and potentiated the increase of monocytes and increased the number of special granulocytic cells. There was a progressive decrease in ILI as the frequency of fasting increased, but the -glucan reversed this decrease, including in control fish. In conclusion, feeding strategies, although had affected negatively some indicators of the innate immune system, they did not avoid the response of this system to a bacterial challenge. In conclusion, feeding strategies, although had affected negatively some indicators of the innate immune system, they did not avoid the response of this system to a bacterial challenge. -glucan supplementation improved the utilization of food by pacu, independent on the feeding strategy, and improved their immune response against challenge with Aeromonas hydrophila.

EFEITO DA INOCULAÇÃO DE PROBIOTICO IN OVO SOBRE A MORFOMETRIA INTESTINAL E CONTROLE DE Salmonella Enteritidis

EFEITO DE DIFERENTES VIAS DE APLICAÇÃO DE PROBIÓTICO SOBRE O DESEMPENHO DE FRANGOS DE CORTE Resumo ¿ Com o objetivo de avaliar o desempenho zootécnico, a biometria entérica e o rendimento de carcaça e cortes comerciais de frangos de corte, um experimento foi realizado com 720 pintos machos, de um dia de idade da linhagem Cobb ® , com densidade populacional de 12 aves/m 2 . O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com 3 tratamentos e 8 repetições de 30 aves cada. Os tratamentos foram: T1 (controle): pintos provenientes de ovos vacinados in ovo no 18º dia de incubação contra a doença de Marek ; T2: pintos provenientes de ovos inoculados com probiótico no 18º dia de incubação utilizando como diluente a vacina de Marek; T3: pintos provenientes de ovos vacinados in ovo no 18º dia de incubação contra a doença de Marek e pulverizados ao nascimento com solução contendo probiótico. Foi avaliado o ganho de peso, consumo de ração, conversão alimentar e viabilidade aos 7, 21, 35 e 42 dias de idade; e índice de eficiência produtiva ao final do período de criação. As análises de biometria entérica foram realizadas ao nascimento, 7, 21, 35 e 42 dias de idade, sendo utilizado 15 aves por tratamento, totalizando 45 aves por abate. Aos 42 dias de idade para as análises de rendimento de carcaça foram coletadas, ao acaso, 25 aves por tratamento. Os resultados foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5%. A conversão alimentar na fase pré-inicial de criação, apresentou diferença; sendo que as aves submetidas à inoculação de probiótico in ovo apresentaram melhor conversão alimentar quando comparado com as aves que receberam probiótico pulverizado via spray, mas sem diferirem do tratamento controle. Aos 21 dias de idade observou-se diferença no comprimento do segmento de jejuno, sendo os maiores comprimentos encontrados no tratamento in ovo, porém sem diferir do tratamento pulverizado via spray. O uso de probiótico não influenciou o rendimento de carc aça e cortes comerciais. Assim, a utilização de probióticos apresentou melhor conversão alimentar para as aves submetidas à inoculação de probiótico in ovo na primeira semana pós-eclosão, e atuou na biometria entérica aos 21 dias de idade. HISTOMORFOMETRIA E ULTRAESTRUTURA DA MUCOSA INTESTINAL EM FRANGOS DE CORTE SUBMETIDOS A DIFERENTES VIAS DE APLICAÇÃO DE PROBIÓTICO E DESAFIADOS COM Salmonella Enteritidis Resumo ¿ Com o objetivo de avaliar histomorfometria, a integridade entérica de frangos de corte e a eficácia do probiótico frente ao desafio com Salmonella Enteritidis, foram alojados 720 pintos em aviário experimental e 45 pintos em infectório, machos, de um dia, da linhagem Cobb ® . O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com 3 tratamentos para ambos os estudos, constando 8 repetições de 30 aves cada para a avaliação sem desafio e de 15 aves cada para a avaliação com desafio. Foram utilizadas amostras de Salmonella Enteritidis e as aves foram desafiadas por inoculação intraesofágica, no 3 o dia de idade. Os tratamentos foram : T1 (controle): pintos provenientes de ovos vacinados in ovo no 18º dia de incubação contra a doença de Marek; T2: pintos provenientes de ovos inoculados com probiótico no 18º dia de incubação utilizando como diluente a vacina de Marek; T3: pintos provenientes de ovos vacinados in ovo no 18º dia de incubação contra a doença de Marek e pulverizados ao nascimento com solução contendo probiótico. Foram utilizadas 15 aves por experimento nas diversas fases estudadas, para as análises histomorfométricas, contagem do número de células, integridade intestinal e avaliação microbiológica. Os resultados foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5%, sendo os dados de contagem de células e análise microbiológica submetidos a teste de Kruskal-Wallis. O probiótico influenciou a contagem do número de células caliciformes, porém sem alterar a morfometri a e o número de enterócitos. A integridade da mucosa cecal das aves submetidas aos tratamentos com probiótico mostrou-se melhor preservada quando comparada a mucosa cecal das aves do tratamento controle. A avaliação microbiológica do conteúdo cecal aos 7 dias de idade, mostrou que o tratamento com probiótico pulverizado via spray apresentou menor contagem para Salmonella spp. quando comparado com os demais tratamentos. A utilização de probiótico melhorou a integridade da mucosa cecal de frangos de corte nas diferentes fases de criação e mostrou maior eficácia em estabelecer microbiota protetora no controle de Salmonella Enteritidis aos 7 dias de idade.

EFFECTS OF DIFFERENT ROUTES OF ADMINISTRATION OF PROBIOTICS ON BROILER PERFORMANCE A trial was conducted to evaluate broiler performance, intestinal biometric parameters, carcass and commercial cuts yield. Day-old male Cobb ® chicks (720; stocking density 12 birds/m 2 ) were allotted to one of three treatments (T1, T2 and T3; eight replications per treatment; 30 birds per pen) in a completely randomized design. Chicks were vaccinated in ovo against Marek¿s disease on day 18 of incubation (T1, control), inoculated in ovo with probiotics diluted in Marek¿s disease vaccine on day 18 of incubation (T2), or vaccinated in ovo against Marek¿s disease on day 18 of incubation and sprayed with probiotic solution at hatching (T3). Weight gain, feed intake, feed conversion rate (FCR) and livability were evaluated at 7, 21, 35 and 42 days of age; production efficiency factor was determined at the end of the rearing period. Intestinal biometric analysis (15 birds per treatment; 45 birds per slaughter) was performed at hatching and at 7, 21, 35 and 42 days of age; 42 day-old birds (25 birds per treatment) were randomly selected for carcass yield determination. Data were analyzed using analysis of variance and means compared using the Tukey test at a 5% significance level. In the pre-starter phase, birds submitted to T2 had significantly higher FCR than birds submitted to T3, but similar FCR to birds submitted to T1 (control). At 21 days of age, birds submitted to T2 or T3 had significantly longer jejunal segments than birds submitted to T1 (control). Probiotic inoculation in ovo improved feed conversion rates in the first week of life and affected intestinal biometric parameters at 21 days of age. Probiotic treatment had no impact on carcass or commercial cuts yield. Keywords: alternative feed additives, b roilers, competitive exclusion, gastrointestinal tract, in ovo nutrition. HISTOMORPHOMETRIC AND ULTRASTRUCTURAL ANALYSIS OF INTESTINAL MUCOSA OF BROILERS SUBMITTED TO PROBIOTIC TREATMENT BY DIFFERENT ROUTES AND CHALLENGED WITH Salmonella Enteritidis This study evaluated intestinal integrity and histomorphometric aspects of broilers treated with probiotics and compared the efficacy of probiotics in broilers challenged or not with Salmonella Enteritidis. Day-old male Cobb ® chicks were housed in experimental poultry house or quarantine facilities (n=720 and n=45 respectively); all chicks were assigned to one of three treatments, with eight replications per treatment and 30 (non-challenged) or 15 (challenged) birds per pen in a completely randomized design. Treatments consisted of vaccination in ovo against Marek¿s disease on day 18 of incubation (T1, control), inoculation in ovo with probiotics diluted in Marek¿s disease vaccine on day 18 of incubation (T2), or vaccination in ovo against Marek¿s disease on day 18 of incubation and spraying with probiotic solution at hatching (T3). Birds were challenged via intraesophageal inoculation of Salmonella Enteritidis samples at 3 days of age. Fifteen challenged and 15 non-challenged birds (5 birds per treatment group respectively) were submitted to histomorphometric analysis, cell counting, intestinal integrity determination and microbiological assessment at the different time points considered. Data were treated using analysis of variance and means compared using the Tukey test (5% significance level); cell counting and mi crobiological data were analyzed using the Kruskal-Wallis test. Probiotic treatment affected goblet cell counts, but not enterocyte counts and morphometry. Cecal mucosa integrity was better preserved in probiotic treated birds compared to birds submitted t o the control treatment. Microbiological analysis of cecal contents at 7 days of age revealed significantly lower Salmonella spp. counts in birds submitted to T3 than in birds submitted to T2 or T1 (control). Probiotic treatment enhanced cecal mucosa integrity of broilers at different stages of rearing and was more effective in fostering the establishment of microbiota protective against Salmonella Enteritidis at 7 days of age. Keywords: broilers, competitive exclusion, enterocytes, goblet cells, trophic agen.

Análise morfométrica da parede intestinal e dinâmica de mucinas secretadas no íleo de frangos infectados por Toxoplasma gondii

The effects of toxoplasmosis on the intestinal wall morphometry and the dynamic of mucins secreted in the chicken ileum were analyzed. Sixteen 26-day-old, male, Cobb broiler chicks (Gallus gallus) were used and randomly divided into three groups (G1, G2 and G3). G1 received no inoculum characterizing the control group, G2 was inoculated with tissue cysts of ME49 strain of Toxoplasma gondii, and G3 was inoculated with oocytes of M7741 strain of T. gondii. After 60 days of inoculation, the animals were killed and had their ileum collected and submitted to histological processing. Tranversal cuts (4mm) were stained with Hematoxilin-Eosine (HE), Periodic Acid Schiff (PAS), Alcian Blue pH 2.5 and Alcian Blue (AB) pH 1.0. Intestinal wall increase was noticed for the animals from G2 - mostly the muscle tunic, the muscularis mucosae, and the mucous tunic, including the increase of secretion of neutral mucins. The animals from G3 presented atrophy of the intestinal wall - mostly the mucous tunic, and increase of the secretion of neutral mucins.

Objetivou-se analisar os efeitos da toxoplasmose sobre a morfometria da parede intestinal e a dinâmica de mucinas secretadas no íleo de frangos. Foram utilizados 16 frangos de corte machos (Gallus gallus) da linhagem Cobb, com 26 dias de idade. As aves foram divididas aleatoriamente em três grupos (G1, G2 e G3). O G1 não recebeu nenhum inóculo caracterizando o grupo controle, o G2 foi inoculado com cistos teciduais da cepa ME49 de Toxoplasma gondii, e o G3 foi inoculado com oocistos da cepa M7741 de T. gondii. Após 60 dias da inoculação, os animais foram mortos, e coletou-se o íleo, o qual foi submetido à rotina de processamento histológico. Cortes transversais de 4mm foram corados com Hematoxilina-Eosina (HE), Periodic Acid Schiff (PAS), Alcian Blue pH 2,5 e Alcian Blue (AB) pH 1,0. Nos animais do G2, observou-se aumento da parede intestinal, sobretudo a túnica muscular, muscular da mucosa e túnica mucosa, além de aumento na secreção de mucinas neutras. Já nos animais do G3, houve uma atrofia da parede intestinal, sobretudo para a túnica mucosa, e aumento na secreção de mucinas neutras.