Dimethyl acetamide and dimethyl sulfoxide associated at glucose and egg yolk for cryopreservation of Pseudoplatystoma corruscans semen

This study aimed to develop a protocol for the cryopreservation of Pseudoplatystoma corruscans semen. For this, mature males were hormonally induced with a single dose of carp pituitary extract (5 mg/kg body weight). Semen was collected and evaluated. Two cryoprotectants were tested to compose the diluents: dimethyl acetamide (DMA) and dimethyl sulfoxide (Me2SO), in two concentrations (8% and 10%), + 5.0% glucose + 10% egg yolk. The semen was diluted in a 1: 4 ratio (semen: extender), packed in 0.5 mL straws and frozen in a dry shipper container in liquid nitrogen vapors. After thawing, sperm kinetics, sperm morphology and DNA integrity of cryopreserved sperm were evaluated. Pseudoplatystoma corruscans males produced semen with sperm motility > 80%. After thawing, all treatments provided semen with total sperm motility > 40%, with no significant difference (P < 0.05) between them, as well as between the other sperm kinetic parameters evaluated. The treatments with DMA provided a smaller fragmentation of the DNA of the gametes. Sperm malformations were identified in both fresh and cryopreserved semen, with a slight increase in these malformations being identified in sperm from thawed P. corruscans semen samples.(AU)

Este estudo teve como objetivo desenvolver um protocolo para a criopreservação do sêmen de Pseudoplatystoma corruscans. Para tal, machos maduros foram induzidos hormonalmente com uma dose única de extrato de hipófise de carpa (5 mg/kg de peso vivo). O sêmen foi coletado e avaliado. Sendo testados para compor os diluentes, dois crioprotetores: dimetil acetamida (DMA) e dimetil sulfóxido (Me2SO), em duas concentrações (8% e 10%), + 5,0% glicose + 10% gema de ovo. O sêmen foi diluído na proporção 1: 4 (sêmen: extensor), embalado em palhetas de 0,5 mL e congelado em container dryshipper em vapores de nitrogênio líquido. Após o descongelamento, foram avaliados os aspectos cinéticos espermáticos, a morfologia espermática e a integridade do DNA dos espermatozoides criopreservados. Os machos de P. corruscans produziram sêmen com motilidade espermática > 80%. Todos os tratamentos proporcionaram após o descongelamento sêmen com motilidade espermática total > 40%, sem diferença significativa (P < 0,05) entre eles, como também entre os demais parâmetros cinéticos espermáticos avaliados. Os tratamentos com DMA proporcionaram uma menor fragmentação do DNA dos gametas. Malformações espermáticas foram identificadas, tanto no sêmen fresco, como no criopreservado, sendo identificado um aumento discreto dessas malformações nos espermatozoides das amostras de sêmen descongeladas de P. corruscans.(AU)

Prevalence and severity of claw lesions in sows in intensive systems in Brazil / Prevalência e severidade de lesões de casco em porcas confinadas no Brasil

Swines raised in intensive systems are highly susceptible to claw lesions. Moderate to severe lesions trigger an inflammatory response, causing pain and impairing reproductive and economic performance. Foot lesions in sows can cause considerable losses owing to reduced fertility and herd longevity. Proper diagnosis is an important step in correcting this problem; however, the seriousness of the impact of these lesions on swine herds remains unclear to most farm owners. Health monitoring has become an essential tool for veterinarians because it enables the detection of disease incidence and severity. In this study, we assessed claw lesions in sows reared under an intensive system to ascertain the prevalence and severity of lesions in Brazilian herds. The hind limb claws of 2,660 sows from 30 farms were examined for the following lesions: heel overgrowth and erosion (HOE), heel-sole cracks, white line lesions (WL), horizontal and vertical cracks in the toe wall, overgrown toes, and overgrown or missing dew claws. Claws were classified as normal (score = 0), mild (score = 1), moderate (score = 2), or severe (score = 3). At least one type of lesion was observed in 99.1% of the sows, whereas 29.7% displayed severe lesions. HOE was the most common lesion (89.9% of sows) and severe WL was observed in 16.8% of the sows. Lesions increased in prevalence and severity with parity, except for WL. In young females, lesions on the volar surface were more common than those on cracked walls or overgrown toes, which should be considered when selecting gilts for breeding. A high prevalence of claw lesions was observed in Brazilian sows. Monitoring of these lesions is fast and simple. Regular monitoring provides information on claw health in a herd over time, allowing us to take measures to control and treat claw lesions, avoiding worsening of the problem, early culling of animals, and the associated productive and economic losses.

Suínos criados em sistemas intensivos são altamente suscetíveis a lesões de casco. Quando moderadas a graves, essas lesões desencadeiam uma resposta inflamatória, causando dor e prejudicando o desempenho reprodutivo e econômico. Em porcas, as lesões nos cascos podem causar consideráveis perdas devido à redução da fertilidade e longevidade do rebanho. O diagnóstico adequado é um dos passos mais importantes para corrigir esse problema, mas a gravidade do impacto dessas lesões nos rebanhos suínos passa despercebida na maioria das propriedades. O monitoramento sanitário tornou-se uma ferramenta essencial para os médicos veterinários, pois possibilita a detecção da incidência e gravidade da doença. O presente estudo utilizou um método de avaliação de lesões de casco em porcas criadas em sistema intensivo para verificar a prevalência e gravidade das lesões em rebanhos brasileiros. Os cascos dos membros pélvicos de 2.660 porcas, de 30 granjas, foram examinados para as seguintes lesões: crescimento e erosão da almofada plantar (AP), rachadura entre almofada plantar e sola, lesão na linha branca (LB), rachaduras horizontal e vertical da parede do casco, sobrecrescimento da unha principal e sobrecrescimento ou amputação da unha acessória. Os cascos foram classificados como normais (escore = 0) ou apresentando lesões leves (escore = 1), moderadas (escore = 2) ou graves (escore = 3). Pelo menos um tipo de lesão foi observado em 99,1% das porcas, enquanto 29,7% apresentaram lesões graves. AP foi a lesão mais comum (89,9% das porcas) e LB severa foi observada em 16,8% das porcas. As lesões aumentaram em prevalência e severidade com as ordens de parto, com exceção para LB. Em fêmeas jovens, as lesões na face plantar foram mais comuns do que as rachaduras ou sobrecrescimento das unhas, algo que deve ser levado em consideração na seleção de leitoas para reprodução. Alta prevalência de lesões de casco foi observada em porcas brasileiras. A avaliação dessas lesões é rápida e simples. O monitoramento frequente fornece informações sobre a saúde dos cascos de um rebanho ao longo do tempo, permitindo tomar medidas para o controle e tratamento das lesões dos cascos, evitando o agravamento do problema, o descarte precoce dos animais e as perdas produtivas e econômicas associadas.

Influence of different types of margins in the fish assemblage from an urban river / Influência de diferentes tipos de margens na assembleia de peixes de um rio urbano

The presence or absence of a fish species may be associated with the physical and chemical characteristics of the water, in addition to the state of preservation of the riparian zone. This study examined whether the taxonomic fish composition in an urban river varies along three riparian zone preservation conditions: preserved, intermediate preservation and degraded. Six urban stretches of the Sorocaba/São Paulo River were selected for this study, with monthly sampling being carried out from June 2019 to February 2020. The samplings were carried out with the aid of a sieve, dip net, and trawl. Regarding the types of margins and environmental variables, the Principal Component Analysis explained 97.49% of the data variation, axis 1, which explained 91.85% of the total variation, was formed by the variables conductivity and total dissolved solids. Axis 2, which explained 5.64% of the variation, was formed by Sun Rays% and Siltation%, being inversely proportional to Riparian Forest%. For the ichthyofauna, the samples consisted in 50,983 fish distributed in 5 orders, 8 families, and 12 species. Cyprinodontiformes had the highest abundance, with 96.96% of the total number of individuals, followed by Siluriformes (2.39%), and the sum of the other orders did not reach 1% of the total collected. According to each type of margin, it was possible to register 11,592 individuals for the Margin A ­ preserved, with S=8 species, being 2 exclusive (Corydoras flaveolus and Hoplosternum littorale) and 3 exotic (Coptodon rendalli, Pterygoplichthys ambrosettii, and Poecilia reticulata), the latter was dominant in all types of margins. For Margin B ­ intermediate preservation, 19,645 individuals were sampled, with S=5 species, no exclusive species, only exotic and more tolerant native species such as Hoplias malabaricus and Hypostomus ancistroides. For Margin C ­ degraded, 19,746 individuals were recorded, the largest number of species (S=10), 3 were exclusive to this type of mar-gin (Psalidodon fasciatus, Rhamdia Quelen, and Geophagus brasiliensis). The pairwise comparison (similarity percentage) showed that the assemblage structure was different for the types of margins. The Canonical Cor-respondence Analysis explained 92.46% of the total data variation, showing the relationship of species to envi-ronmental data. It is evident the importance of preservation of micro-habitats still present in the locals sampled, since different anthropic pressures cause great loss of diversity, especially for native and more sensitive species.

A presença ou ausência de uma espécie de peixe que vive em rios urbanos pode estar associada às características físicas e químicas da água, além do estado de preservação da zona ripária. O presente estudo verificou se a composição taxonômica de peixes de um rio urbano varia em três condições de preservação da zona ripária: preservada, preservação intermediária e degradada. Seis trechos urbanos do rio Sorocaba, localizado no estado de São Paulo, foram selecionados para este estudo, com coletas mensais de junho de 2019 a fevereiro de 2020 com auxílio de peneira, puçá e rede de arrasto. Com relação aos tipos de margens e às variáveis ambientais, a análise de componentes principais explicou 97,49% da variação dos dados. O eixo 1, que explicou 91,85% da variação total, foi formado pelas variáveis condutividade e total de sólidos dissolvidos. O eixo 2, que explicou 5,64% da variação, foi formado pelo percentual das variáveis raios solares e assoreamento, revelando-se inversamente proporcional ao de mata ripária. Para a ictiofauna, foram amostrados 50.983 indivíduos compreendidos em cinco ordens, oito famílias e 12 espécies. Cyprinodontiformes apresentou maior abundância, com 96,96% do total de indivíduos, seguida de siluriformes (2,39%); a soma das demais ordens não atingiu 1% do total coletado. De acordo com cada tipo de margem, foi possível registrar 11.592 indivíduos para a margem A preservada, com a s=8 espécies, das quais duas foram exclusivas (C. flaveolus e H. littorale) e três exóticas (C. rendalli, P. ambrosettii e P. reticulata), sendo esta última dominante em todos os tipos de margens. Para a margem B intermediária, foram amostrados 19.645 indivíduos, com S=5 espécies, dos quais nenhum representante de espécie exclusiva, apenas espécies exóticas e nativas mais tolerantes, como H. malabaricus e H. ancistroides. Já para margem C degradada, foram registrados 19.746 exemplares, maior número de espécies (s=10), três delas exclusivas desse tipo de margem (P. fasciatus, R. quelen e G. brasiliensis). A comparação par a par (porcentagem similar) mostrou que a estrutura da assembleia se apresentou distinta para os tipos de margens. A análise de correspondência canônica explicou 92,46% da variação total dos dados, evidenciando a relação das espécies com os dados ambientais. Torna-se evidente a importância da preservação dos micro-habitatsainda presentes nas margens amostradas, visto que diferentes pressões antrópicas causam grande perda de diversidade, sobretudo para espécies nativas e espécies mais sensíveis a essas alterações.

Seminal characteristics and sensitivity of Astyanax lacustris (Characiformes: Characidae) sperm to cryoprotective solutions based on dimethylsufoxide and methylglicol

This study aimed to determine the semen characteristics of Astyanax lacustris after hormonal induction and to evaluate the sensitivity of the species sperm to cryoprotective solutions based on the cryoprotectants dimethyl sulfoxide and methyl glycol. Volume, color, sperm concentration, total motility and aspects of sperm movement were analyzed using "Integrated Semen Analysis System". Three different extenders were tested: A) glucose 5%+egg yolk 10%, B) BTS®5% and C) glucose 5% and two permeable cryoprotectants: dimethyl sulfoxide (Me2SO) and methyl glycol (MTG). Fresh A. lacustris semen presented total motility of 76.6±11.2%, motility duration of 33.0±2.2s, sperm concentration of 7.22±3.2×109sptz/mL and seminal osmolality of 219±0.03mOsm/kg-1. The toxicity test showed the highest total motility values at the MTG15%+A, Me2SO15%+B and Me2SO10%+C dilutions, and the Me2SO10%+C and Me2SO15%+C dilutions presented the highest values for curvilinear velocity, linear velocity and average velocity. The tested protocol was not effective at maintaining the viability of A. lacustris semen after freezing because no motility was observed in any of the dilutions. However, the Comet Assay demonstrated that cryoprotectant solutions were effective in protecting the genetic material of cells, as DNA damage levels were low, with no difference between control and Me2SO10% + A, dilutions MTG10%+C, Me2SO10%+B and Me2SO15%+B.(AU)

O objetivo deste estudo foi determinar as características do sêmen de Astyanax lacustris após indução hormonal e avaliar a sensibilidade dos espermatozoides da espécie a soluções crioprotetoras baseadas nos crioprotetores dimetilsulfóxido e metilglicol. Volume, cor, concentração espermática, motilidade total e aspectos do movimento espermático foram analisados usando o "Sistema Integrado de Análise de Sêmen (ISAS®CASA)". Três extensores diferentes foram testados: A) glicose 5%+gema de ovo 10%, B) BTS® 5% e C) glicose 5% e dois crioprotetores permeáveis: dimetilsulfóxido (Me2SO) e metilglicol (MTG). O sêmen fresco de A. lacustris apresentou motilidade total 76,6±11,2%, duração da motilidade 33,0±2,2s, concentração de espermatozoides 7,22±3,2×109sptz/mL e osmolalidade seminal 219±0,03mOsm/kg-1. O teste de toxicidade apresentou maiores valores de motilidade total nas diluições MTG15%+A, Me2SO15%+B e Me2SO10%+C, e as diluições Me2SO10%+C e Me2SO15%+C apresentaram maiores valores de velocidade curvilínea, velocidade linear e velocidade média. O protocolo testado não foi eficaz em manter a viabilidade do sêmen de A. lacustris pós-congelamento, pois não foi observada motilidade em nenhuma das diluições. No entanto, o Ensaio Cometa demonstrou que as soluções crioprotetoras eram eficazes na proteção do material genético das células, pois os níveis de dano ao DNA eram baixos, sem diferença entre controle e Me2SO10%+A, MTG10%+C, Me2SO10%+B e Me2SO15%+B.(AU)

Seminal characteristics and sensitivity of Astyanax lacustris (Characiformes: Characidae) sperm to cryoprotective solutions based on dimethylsufoxide and methylglicol

This study aimed to determine the semen characteristics of Astyanax lacustris after hormonal induction and to evaluate the sensitivity of the species sperm to cryoprotective solutions based on the cryoprotectants dimethyl sulfoxide and methyl glycol. Volume, color, sperm concentration, total motility and aspects of sperm movement were analyzed using "Integrated Semen Analysis System". Three different extenders were tested: A) glucose 5%+egg yolk 10%, B) BTS®5% and C) glucose 5% and two permeable cryoprotectants: dimethyl sulfoxide (Me2SO) and methyl glycol (MTG). Fresh A. lacustris semen presented total motility of 76.6±11.2%, motility duration of 33.0±2.2s, sperm concentration of 7.22±3.2×109sptz/mL and seminal osmolality of 219±0.03mOsm/kg-1. The toxicity test showed the highest total motility values at the MTG15%+A, Me2SO15%+B and Me2SO10%+C dilutions, and the Me2SO10%+C and Me2SO15%+C dilutions presented the highest values for curvilinear velocity, linear velocity and average velocity. The tested protocol was not effective at maintaining the viability of A. lacustris semen after freezing because no motility was observed in any of the dilutions. However, the Comet Assay demonstrated that cryoprotectant solutions were effective in protecting the genetic material of cells, as DNA damage levels were low, with no difference between control and Me2SO10% + A, dilutions MTG10%+C, Me2SO10%+B and Me2SO15%+B.(AU)

O objetivo deste estudo foi determinar as características do sêmen de Astyanax lacustris após indução hormonal e avaliar a sensibilidade dos espermatozoides da espécie a soluções crioprotetoras baseadas nos crioprotetores dimetilsulfóxido e metilglicol. Volume, cor, concentração espermática, motilidade total e aspectos do movimento espermático foram analisados usando o "Sistema Integrado de Análise de Sêmen (ISAS®CASA)". Três extensores diferentes foram testados: A) glicose 5%+gema de ovo 10%, B) BTS® 5% e C) glicose 5% e dois crioprotetores permeáveis: dimetilsulfóxido (Me2SO) e metilglicol (MTG). O sêmen fresco de A. lacustris apresentou motilidade total 76,6±11,2%, duração da motilidade 33,0±2,2s, concentração de espermatozoides 7,22±3,2×109sptz/mL e osmolalidade seminal 219±0,03mOsm/kg-1. O teste de toxicidade apresentou maiores valores de motilidade total nas diluições MTG15%+A, Me2SO15%+B e Me2SO10%+C, e as diluições Me2SO10%+C e Me2SO15%+C apresentaram maiores valores de velocidade curvilínea, velocidade linear e velocidade média. O protocolo testado não foi eficaz em manter a viabilidade do sêmen de A. lacustris pós-congelamento, pois não foi observada motilidade em nenhuma das diluições. No entanto, o Ensaio Cometa demonstrou que as soluções crioprotetoras eram eficazes na proteção do material genético das células, pois os níveis de dano ao DNA eram baixos, sem diferença entre controle e Me2SO10%+A, MTG10%+C, Me2SO10%+B e Me2SO15%+B.(AU)

Electrical conductivity as an indicator of damage due to low temperatures in beans leaves / Condutividade elétrica como indicador de danos por temperaturas baixas em folhas de feijão

The electrical conductivity test indirectly evaluates cell membrane disorganization by quantifying the electrolytes released into the water after tissue imbibing. The objective of this work was to evaluate methodological variations in the electrical conductivity test, for it to serve as an indicator of low temperature-induced damages and estimate the cold tolerance of bean plants. Cultivar IPR Uirapuru plants were subjected to minimum temperatures of 4°C, 2°C, 0°C, -1°C, -2°C, -3°C, and -4°C for 1 h in a growth chamber under controlled conditions. After the treatment period, the response of plants to cold stress was evaluated by determination of the total protein content, and catalase (CAT) and ascorbate peroxidase (APX) enzymatic activities, and evaluation of photosystem II (Fm/Fv) efficiency and leaf anatomy. These results were compared with those obtained in the electrical conductivity test, which was performed in plants under cold stress as well as under a non-stress environment, with 2, 4, 6, and 8 leaf discs immersed in 30 mL of distilled water for 24 h in BOD, at temperatures of 25°C, 30°C, and 35°C. Analysis of variance was performed using a completely randomized design, and for electrical conductivity, a number of discs × cold stress temperature combinations were used for each soak temperature. The averages were compared using the Turkeys test at 5% and 10% probability. Pearson correlation coefficient (r) between the conductivity averages and other cold stress evaluation data was also performed. The results showed a marked reduction in the ratio (Fv/Fm) only in the treatments at -3°C and -4°C, which indicated tissue death. At temperatures below 0°C, there was a collapse of the leaf blade tissues, and it was not possible to differentiate the palisade parenchyma from the spongy parenchyma in the treatments at -2°C, -3°C, and -4°C. There was an increase in the protein content since the temperature -3°C...(AU)

O teste de condutividade elétrica avalia de forma indireta a desorganização da membrana celular, pela quantificação dos eletrólitos liberados na água após a embebição dos tecidos. Assim, o objetivo do trabalho foi avaliar as variações de metodologias no teste de condutividade elétrica como indicador de danos por temperaturas baixas para estimar a tolerância ao frio de plantas de feijão preto. Dessa forma, as plantas da cultivar IPR Uirapuru foram submetidas às temperaturas mínimas de 4°C, 2°C, 0°C, -1°C, -2°C, -3°C e -4°C, por uma hora, em câmara de crescimento sob condições controladas. Após esse período, a resposta das plantas ao estresse por frio foi avaliada pela determinação do teor de proteínas totais, atividade enzimática da catalase (CAT) e da ascorbato peroxidase (APX), além da avaliação da eficiência do fotossistema II (Fv/Fm) e da anatomia foliar. Esses resultados foram comparados com os obtidos no teste de condutividade elétrica o qual foi realizado nas plantas após o estresse frio e em plantas não estressadas (ambiente) com 2, 4, 6 e 8 discos foliares imersos em 30 ml de água destilada, mantidos por 24 horas em B.O.D nas temperaturas de 25°C, 30°C e 35°C. A análise de variância foi realizada em delineamento inteiramente casualizado, e para condutividade elétrica utilizou-se fatorial número de discos x temperatura de estresse ao frio para cada temperatura de embebição separadamente. As médias foram comparadas pelo teste Tukey a 5 e 10% de probabilidade. Realizou-se a correlação de Pearson (r) entre as médias de condutividade e os demais testes de avaliação do estresse por frio. Nos resultados observou-se acentuada redução da relação (Fv/Fm) apenas nos tratamentos -3°C e -4°C indicando morte dos tecidos. Para temperaturas inferiores a 0°C houve colapso dos tecidos do limbo foliar, não sendo possível diferenciar o parênquima paliçádico do parênquima esponjoso nos tratamentos -2, -3 e -4°C...(AU)

Electrical conductivity as an indicator of damage due to low temperatures in beans leaves / Condutividade elétrica como indicador de danos por temperaturas baixas em folhas de feijão

The electrical conductivity test indirectly evaluates cell membrane disorganization by quantifying the electrolytes released into the water after tissue imbibing. The objective of this work was to evaluate methodological variations in the electrical conductivity test, for it to serve as an indicator of low temperature-induced damages and estimate the cold tolerance of bean plants. Cultivar IPR Uirapuru plants were subjected to minimum temperatures of 4°C, 2°C, 0°C, -1°C, -2°C, -3°C, and -4°C for 1 h in a growth chamber under controlled conditions. After the treatment period, the response of plants to cold stress was evaluated by determination of the total protein content, and catalase (CAT) and ascorbate peroxidase (APX) enzymatic activities, and evaluation of photosystem II (Fm/Fv) efficiency and leaf anatomy. These results were compared with those obtained in the electrical conductivity test, which was performed in plants under cold stress as well as under a non-stress environment, with 2, 4, 6, and 8 leaf discs immersed in 30 mL of distilled water for 24 h in BOD, at temperatures of 25°C, 30°C, and 35°C. Analysis of variance was performed using a completely randomized design, and for electrical conductivity, a number of discs × cold stress temperature combinations were used for each soak temperature. The averages were compared using the Turkey’s test at 5% and 10% probability. Pearson correlation coefficient (r) between the conductivity averages and other cold stress evaluation data was also performed. The results showed a marked reduction in the ratio (Fv/Fm) only in the treatments at -3°C and -4°C, which indicated tissue death. At temperatures below 0°C, there was a collapse of the leaf blade tissues, and it was not possible to differentiate the palisade parenchyma from the spongy parenchyma in the treatments at -2°C, -3°C, and -4°C. There was an increase in the protein content since the temperature -3°C...

O teste de condutividade elétrica avalia de forma indireta a desorganização da membrana celular, pela quantificação dos eletrólitos liberados na água após a embebição dos tecidos. Assim, o objetivo do trabalho foi avaliar as variações de metodologias no teste de condutividade elétrica como indicador de danos por temperaturas baixas para estimar a tolerância ao frio de plantas de feijão preto. Dessa forma, as plantas da cultivar IPR Uirapuru foram submetidas às temperaturas mínimas de 4°C, 2°C, 0°C, -1°C, -2°C, -3°C e -4°C, por uma hora, em câmara de crescimento sob condições controladas. Após esse período, a resposta das plantas ao estresse por frio foi avaliada pela determinação do teor de proteínas totais, atividade enzimática da catalase (CAT) e da ascorbato peroxidase (APX), além da avaliação da eficiência do fotossistema II (Fv/Fm) e da anatomia foliar. Esses resultados foram comparados com os obtidos no teste de condutividade elétrica o qual foi realizado nas plantas após o estresse frio e em plantas não estressadas (ambiente) com 2, 4, 6 e 8 discos foliares imersos em 30 ml de água destilada, mantidos por 24 horas em B.O.D nas temperaturas de 25°C, 30°C e 35°C. A análise de variância foi realizada em delineamento inteiramente casualizado, e para condutividade elétrica utilizou-se fatorial número de discos x temperatura de estresse ao frio para cada temperatura de embebição separadamente. As médias foram comparadas pelo teste Tukey a 5 e 10% de probabilidade. Realizou-se a correlação de Pearson (r) entre as médias de condutividade e os demais testes de avaliação do estresse por frio. Nos resultados observou-se acentuada redução da relação (Fv/Fm) apenas nos tratamentos -3°C e -4°C indicando morte dos tecidos. Para temperaturas inferiores a 0°C houve colapso dos tecidos do limbo foliar, não sendo possível diferenciar o parênquima paliçádico do parênquima esponjoso nos tratamentos -2, -3 e -4°C...

Can centrifugation force compromise the plasmatic membrane, acrosome and DNA integrity of goat spermatozoa? / A força de centrifugação pode comprometer a integridade de membrana plasmática, acrossomal e DNA de espermatozoides caprinos?

Protocols for cooling or freezing goat semen usually recommend centrifugation for seminal plasma removal. However, little is known about the effect of this process on goat sperm viability and functionality. The present study evaluated the effects of centrifugation force on the plasma membrane, acrosomes, and DNA integrity of goat semen. Four ejaculates from each of the four different Anglo Nubian male goats were used. Semen samples were obtained using artificial vagina, and immediately after collection, ejaculates were diluted using Ringer's sodium lactate solution and split into three groups: Control (CG, without centrifugation), G1 (centrifugation 600 x g/10 min), G2 (centrifugation 1200 x g/10 min). After centrifugation, seminal plasma was removed, the sperm pellets were resuspended using Tris-egg yolk extender (80 x 106 spermatozoa/mL) and the sperm morphology was analyzed. Samples were cooled at 5°C for 5, 24, 36, and 48 h and then sperm plasma membrane and acrosome integrity (PMAI, %) and sperm DNA fragmentation index (SDF, %) were evaluated at each time-point, using a flow cytometer. Additionally, sperm movement was determined using computer semen analysis (CASA) after 5, 24, and 48 h of refrigeration period. The semen centrifugation did not induce additional sperm morphology defect or reduction in sperm kinetics in the experimental groups. Differences were not observed (p > 0.05) in PMAI and SDF among different groups, in any of each time-point of the cooling process. In conclusion, centrifugation, even at high speeds, did not affect goat sperm integrity and functionality when submitted to refrigeration process. (AU)

A maior parte dos protocolos de refrigeração e criopreservação do sêmen caprino recomenda o uso de centrifugação para remoção do plasma seminal. No entanto, não existe consenso sobre o risco que esse tipo de processamento pode ocasionar à viabilidade espermática. Nesse contexto, o presente trabalho investigou os possíveis efeitos deletérios da centrifugação sobre a integridade estrutural e DNA de espermatozoides caprinos. Para a pesquisa foram selecionados quatro reprodutores para colheita de sêmen (n = 4 ejaculados/bode). Cada ejaculado foi fracionado em três alíquotas iguais, diluídas em ringer e divididas em três grupos: Controle (GC, não centrifugado), G1 (centrifugação a 600 g/10 minutos) e G2 (centrifugação a 1200 g/10 minutos). As amostras seminais por grupo foram diluídas em meio Tris gema respeitando-se a concentração final de 80 milhões de espermatozoides/mL e foram submetidas à avaliação de morfologia espermática. Todas as amostras foram acondicionadas a 5°C, sendo analisadas nos momentos 5, 24, 36 e 48 horas do processo de refrigeração por meio da avaliação da integridade de membrana plasmática e acrossomal (MPAI, %) e índice de fragmentação de DNA (IDF, %). Adicionalmente, a cinética espermática foi avaliada com o emprego de um sistema computadorizado de análise (CASA) nos momentos 5, 24 e 48 horas da refrigeração. A centrifugação não induziu a manifestação de defeitos morfológicos ou redução significativa da cinética de espermatozoides caprinos. Não foram observadas diferenças para a integridade de membrana plasmática e para o índice de fragmentação de DNA quando comparados, respectivamente, GC, G1 e G2 em cada um dos quatro momentos experimentais. Conclui-se que mesmo quando empregadas altas forças de rotação não ocorre lesão à ultraestrutura dos espermatozoides caprinos submetidos ao processo de refrigeração.(AU)

Can centrifugation force compromise the plasmatic membrane, acrosome and DNA integrity of goat spermatozoa? / A força de centrifugação pode comprometer a integridade de membrana plasmática, acrossomal e DNA de espermatozoides caprinos?

Protocols for cooling or freezing goat semen usually recommend centrifugation for seminal plasma removal. However, little is known about the effect of this process on goat sperm viability and functionality. The present study evaluated the effects of centrifugation force on the plasma membrane, acrosomes, and DNA integrity of goat semen. Four ejaculates from each of the four different Anglo Nubian male goats were used. Semen samples were obtained using artificial vagina, and immediately after collection, ejaculates were diluted using Ringer's sodium lactate solution and split into three groups: Control (CG, without centrifugation), G1 (centrifugation 600 x g/10 min), G2 (centrifugation 1200 x g/10 min). After centrifugation, seminal plasma was removed, the sperm pellets were resuspended using Tris-egg yolk extender (80 x 106 spermatozoa/mL) and the sperm morphology was analyzed. Samples were cooled at 5°C for 5, 24, 36, and 48 h and then sperm plasma membrane and acrosome integrity (PMAI, %) and sperm DNA fragmentation index (SDF, %) were evaluated at each time-point, using a flow cytometer. Additionally, sperm movement was determined using computer semen analysis (CASA) after 5, 24, and 48 h of refrigeration period. The semen centrifugation did not induce additional sperm morphology defect or reduction in sperm kinetics in the experimental groups. Differences were not observed (p > 0.05) in PMAI and SDF among different groups, in any of each time-point of the cooling process. In conclusion, centrifugation, even at high speeds, did not affect goat sperm integrity and functionality when submitted to refrigeration process. (AU)

A maior parte dos protocolos de refrigeração e criopreservação do sêmen caprino recomenda o uso de centrifugação para remoção do plasma seminal. No entanto, não existe consenso sobre o risco que esse tipo de processamento pode ocasionar à viabilidade espermática. Nesse contexto, o presente trabalho investigou os possíveis efeitos deletérios da centrifugação sobre a integridade estrutural e DNA de espermatozoides caprinos. Para a pesquisa foram selecionados quatro reprodutores para colheita de sêmen (n = 4 ejaculados/bode). Cada ejaculado foi fracionado em três alíquotas iguais, diluídas em ringer e divididas em três grupos: Controle (GC, não centrifugado), G1 (centrifugação a 600 g/10 minutos) e G2 (centrifugação a 1200 g/10 minutos). As amostras seminais por grupo foram diluídas em meio Tris gema respeitando-se a concentração final de 80 milhões de espermatozoides/mL e foram submetidas à avaliação de morfologia espermática. Todas as amostras foram acondicionadas a 5°C, sendo analisadas nos momentos 5, 24, 36 e 48 horas do processo de refrigeração por meio da avaliação da integridade de membrana plasmática e acrossomal (MPAI, %) e índice de fragmentação de DNA (IDF, %). Adicionalmente, a cinética espermática foi avaliada com o emprego de um sistema computadorizado de análise (CASA) nos momentos 5, 24 e 48 horas da refrigeração. A centrifugação não induziu a manifestação de defeitos morfológicos ou redução significativa da cinética de espermatozoides caprinos. Não foram observadas diferenças para a integridade de membrana plasmática e para o índice de fragmentação de DNA quando comparados, respectivamente, GC, G1 e G2 em cada um dos quatro momentos experimentais. Conclui-se que mesmo quando empregadas altas forças de rotação não ocorre lesão à ultraestrutura dos espermatozoides caprinos submetidos ao processo de refrigeração.(AU)

Avaliação da qualidade fisiológica de sementes florestais através do teste de condutividade elétrica / Evaluation of the physiological quality of forest seeds species through the electrical conductivity test

A avaliação da condutividade elétrica é um dos testes mais rápidos na avaliação da qualidade de sementes, assim, o objetivo foi verificar a qualidade fisiológica de sementes de oito espécies florestais por meio do teste de condutividade elétrica massal e, se este é eficiente para tal, correlacionando-o com a germinação. O delineamento foi inteiramente casualizado com 4 repetições de 25 sementes, avaliando-se os períodos de embebição (2, 4, 6, 8, 24 e 48 horas). Após cada período, realizou-se a leitura da condutividade, sendo que em seguida as mesmas sementes foram postas para germinar com intuito de correlacionar os valores de condutividade com a germinação. Foi realizada a análise de correlação entre condutividade elétrica e germinação dentro de cada período de embebição. O teste de condutividade elétrica massal se mostrou eficiente para avaliação da qualidade das sementes das espécies estudadas, quando comparado ao teste padrão de germinação, podendo ser uma alternativa rápida para avaliação da qualidade fisiológica de sementes florestais.

The evaluation of the electrical conductivity is one of the rapid tests in the assessment of quality seeds, so the goal was to evaluate the physiological quality efficiency of eight forest species seeds through the individual electrical conductivity test and the efficiency of this. The design was completely randomized with 4 replications of 25 seeds, evaluating the soaking periods (2, 4, 6, 8, 24 and 48 hours). After each period, there was the reading of conductivity, and then the seeds were germinated in order to correlate the conductivity values with germination. The test of the individual electrical conductivity was efficient to evaluate the quality of the seeds.

Avaliação da qualidade fisiológica de sementes florestais através do teste de condutividade elétrica / Evaluation of the physiological quality of forest seeds species through the electrical conductivity test

A avaliação da condutividade elétrica é um dos testes mais rápidos na avaliação da qualidade de sementes, assim, o objetivo foi verificar a qualidade fisiológica de sementes de oito espécies florestais por meio do teste de condutividade elétrica massal e, se este é eficiente para tal, correlacionando-o com a germinação. O delineamento foi inteiramente casualizado com 4 repetições de 25 sementes, avaliando-se os períodos de embebição (2, 4, 6, 8, 24 e 48 horas). Após cada período, realizou-se a leitura da condutividade, sendo que em seguida as mesmas sementes foram postas para germinar com intuito de correlacionar os valores de condutividade com a germinação. Foi realizada a análise de correlação entre condutividade elétrica e germinação dentro de cada período de embebição. O teste de condutividade elétrica massal se mostrou eficiente para avaliação da qualidade das sementes das espécies estudadas, quando comparado ao teste padrão de germinação, podendo ser uma alternativa rápida para avaliação da qualidade fisiológica de sementes florestais.(AU)

The evaluation of the electrical conductivity is one of the rapid tests in the assessment of quality seeds, so the goal was to evaluate the physiological quality efficiency of eight forest species seeds through the individual electrical conductivity test and the efficiency of this. The design was completely randomized with 4 replications of 25 seeds, evaluating the soaking periods (2, 4, 6, 8, 24 and 48 hours). After each period, there was the reading of conductivity, and then the seeds were germinated in order to correlate the conductivity values with germination. The test of the individual electrical conductivity was efficient to evaluate the quality of the seeds.(AU)

Trypan blue staining is not efficient in determining oocyte viability in Colossoma macropomum and Brycon amazonicus / Coloração com azul de tripan não é eficiente na determinação da viabilidade de oócitos em Colossoma macropomum e Brycon amazonicus

Currently, there is no effective technique to evaluate the quality of oocytes in fish farming in apractical and affordable way. The cell membrane integrity test with the vital dye trypan blue (TB)could be an option. In this study, Colossoma macropomum and Brycon amazonicus oocytes were exposed to different TB concentrations seeking to verify a possible relationship between the results of staining tests and reproductive rates. Oocytes were exposed to concentrations of 0.05, 0.04, 0.03, 0.02 and 0.01% TB for 1 minute and subsequently were evaluated under a stereomicroscope. The percentage of unstained (viable) oocytes from each sample was correlated with fertilization and hatching rates using a linear regression (P>0.05). We observed a weak correlation between the results of the staining tests and the fertilization and hatching rates in both species. TB integrity tests were not effective in predicting spawning viability in C. macropomum and B. amazonicus.(AU)

Atualmente não existem técnicas efetivas para avaliar a qualidade de oócitos na piscicultura deforma prática e acessível. O teste de integridade da membrana celular com corante vital azul detripan (AT) surge como uma alternativa. Nesse estudo, oócitos de Colossoma macropomum e Bryconamazonicus foram expostos a diferentes concentrações de AT, buscando verificar uma possível relação entre os resultados dos testes de coloração e as taxas reprodutivas. Oócitos foram expostos a concentrações de 0,05; 0,04; 0,03; 0,02 e 0,01% de AT durante 1 minuto e, posteriormente avaliados em estereomicroscópio. A porcentagem de oócitos não corados (intactos) de cada amostra foicorrelacionada com as taxas de fertilização e eclosão utilizando análise de regressão linear (P>0,05). Fraca correlação entre resultados dos tratamentos e as taxas de fertilização e eclosão nas duas espécies foi observada. Os testes de integridade com AT foram ineficazes em predizer o sucesso da desova em C. macropomum e B. amazonicus(AU)

Trypan blue staining is not efficient in determining oocyte viability in Colossoma macropomum and Brycon amazonicus / Coloração com azul de tripan não é eficiente na determinação da viabilidade de oócitos em Colossoma macropomum e Brycon amazonicus

Currently, there is no effective technique to evaluate the quality of oocytes in fish farming in apractical and affordable way. The cell membrane integrity test with the vital dye trypan blue (TB)could be an option. In this study, Colossoma macropomum and Brycon amazonicus oocytes were exposed to different TB concentrations seeking to verify a possible relationship between the results of staining tests and reproductive rates. Oocytes were exposed to concentrations of 0.05, 0.04, 0.03, 0.02 and 0.01% TB for 1 minute and subsequently were evaluated under a stereomicroscope. The percentage of unstained (viable) oocytes from each sample was correlated with fertilization and hatching rates using a linear regression (P>0.05). We observed a weak correlation between the results of the staining tests and the fertilization and hatching rates in both species. TB integrity tests were not effective in predicting spawning viability in C. macropomum and B. amazonicus.

Atualmente não existem técnicas efetivas para avaliar a qualidade de oócitos na piscicultura deforma prática e acessível. O teste de integridade da membrana celular com corante vital azul detripan (AT) surge como uma alternativa. Nesse estudo, oócitos de Colossoma macropomum e Bryconamazonicus foram expostos a diferentes concentrações de AT, buscando verificar uma possível relação entre os resultados dos testes de coloração e as taxas reprodutivas. Oócitos foram expostos a concentrações de 0,05; 0,04; 0,03; 0,02 e 0,01% de AT durante 1 minuto e, posteriormente avaliados em estereomicroscópio. A porcentagem de oócitos não corados (intactos) de cada amostra foicorrelacionada com as taxas de fertilização e eclosão utilizando análise de regressão linear (P>0,05). Fraca correlação entre resultados dos tratamentos e as taxas de fertilização e eclosão nas duas espécies foi observada. Os testes de integridade com AT foram ineficazes em predizer o sucesso da desova em C. macropomum e B. amazonicus

The protected areas system in Brazil as a baseline condition for wetlands management and fish conservancy: the example of the Pantanal National Park

Considering the need for the Brazilian government to develop tools for environmental monitoring for biodiversity conservancy purposes in the national protected areas system, this paper focuses on determining reference site metrics (or baselines) for adapting the Index of Biotic Integrity (IBI) based on the fish assemblages in the Pantanal National Park (PNP). The habitats in the PNP were grouped into four categories: main rivers, corixos (channels connecting the floodplain), permanent bays, and temporary bays. Fish samplings were performed at 12 points during the dry season (Oct-Nov 2010 and 2011). 146 fish species were identified from the total 18,954 individuals collected with standardized fishing gear. There was no association between the structure of the fish assemblage and categories, suggesting a theory on homogeneity of habitats. The final IBIPNP consists of nine metrics, most of them were framed in excellent class, some in fair, and none in poor. There was no significant difference in IBIPNP scores between the two sampled years. This approach provides a direct application for wetland management purposes.(AU)

É iminente que o Brasil desenvolva ferramentas para monitorar o sistema de áreas protegidas do país, formado especialmente pelas Unidades de Conservação e tendo como foco a proteção efetiva da biodiversidade. Nesse contexto, esse trabalho discute métricas de referência (ou linhas de base) para compor um Índice de Integridade Biótica (IIB) baseado nas comunidades de peixes, tendo como área de estudo o Parque Nacional do Pantanal Matogrossense. Os hábitats encontrados no Parque foram agrupados em quatro estratos ambientais: rios, corixos (cursos d´água que se conectam à planície de inundação) e baías permanentes e temporárias. As coletas de peixes foram realizadas em 12 pontos amostrais durante o período seco (out/nov de 2010 e 2011). Foram identificadas 146 espécies de peixes, totalizando 18.954 exemplares coletados em amostragens padronizadas. Não houve associação entre a estrutura da comunidade e os estratos ambientais, sugerindo homogeneidade de hábitats. O IIB final foi composto por nove métricas, a maior parte alocada na classe excelente de integridade biótica, poucas na classe regular e nenhuma na classe pobre. Não houve diferença significativa no IIB entre os dois anos consecutivos. Esses resultados oferecem subsídios técnicos para a tomada de decisão sobre a gestão das áreas alagáveis no Pantanal brasileiro.(AU)

The protected areas system in Brazil as a baseline condition for wetlands management and fish conservancy: the example of the Pantanal National Park

Considering the need for the Brazilian government to develop tools for environmental monitoring for biodiversity conservancy purposes in the national protected areas system, this paper focuses on determining reference site metrics (or baselines) for adapting the Index of Biotic Integrity (IBI) based on the fish assemblages in the Pantanal National Park (PNP). The habitats in the PNP were grouped into four categories: main rivers, corixos (channels connecting the floodplain), permanent bays, and temporary bays. Fish samplings were performed at 12 points during the dry season (Oct-Nov 2010 and 2011). 146 fish species were identified from the total 18,954 individuals collected with standardized fishing gear. There was no association between the structure of the fish assemblage and categories, suggesting a theory on homogeneity of habitats. The final IBIPNP consists of nine metrics, most of them were framed in excellent class, some in fair, and none in poor. There was no significant difference in IBIPNP scores between the two sampled years. This approach provides a direct application for wetland management purposes.(AU)

É iminente que o Brasil desenvolva ferramentas para monitorar o sistema de áreas protegidas do país, formado especialmente pelas Unidades de Conservação e tendo como foco a proteção efetiva da biodiversidade. Nesse contexto, esse trabalho discute métricas de referência (ou linhas de base) para compor um Índice de Integridade Biótica (IIB) baseado nas comunidades de peixes, tendo como área de estudo o Parque Nacional do Pantanal Matogrossense. Os hábitats encontrados no Parque foram agrupados em quatro estratos ambientais: rios, corixos (cursos d´água que se conectam à planície de inundação) e baías permanentes e temporárias. As coletas de peixes foram realizadas em 12 pontos amostrais durante o período seco (out/nov de 2010 e 2011). Foram identificadas 146 espécies de peixes, totalizando 18.954 exemplares coletados em amostragens padronizadas. Não houve associação entre a estrutura da comunidade e os estratos ambientais, sugerindo homogeneidade de hábitats. O IIB final foi composto por nove métricas, a maior parte alocada na classe excelente de integridade biótica, poucas na classe regular e nenhuma na classe pobre. Não houve diferença significativa no IIB entre os dois anos consecutivos. Esses resultados oferecem subsídios técnicos para a tomada de decisão sobre a gestão das áreas alagáveis no Pantanal brasileiro.(AU)

Use of a balancing food additive of the intestinal flora for broilers and laying / Uso de aditivo alimentar equilibrador da flora intestinal em aves de corte e de postura

The general aspects on the use of zootechnical additives that balance the intestinal flora in diets of broilers and laying were reviewed, highlighting the use of prebiotics, mainly Mannan-oligosaccharides (MOS). These promote the growth of microbial population, thus improving luminal conditions. The use of additives balancing the intestinal flora has been shown to improve the integrity of the intestinal epithelium (increased villus height and width), performance (improvement in production and feed conversion), and quality of the final product (quality of shell eggs). This review also addresses issues related to the characteristics, mechanism of action, in addition to the beneficial effects of using these additives as an alternative to antibiotics in the poultry production, including Japanese quail.

Aspectos gerais sobre a utilização de aditivos zootécnicos equilibradores da flora intestinal em rações de aves de corte e de postura foram abordados nesta revisão, destacando-se a utilização de prebióticos, especialmente dos mananoligossacarídeos (MOSs), os quais promovem o crescimento das populações microbianas que melhoram as condições luminais. A utilização de aditivos equilibradores da flora intestinal tem revelado melhorias na integridade do epitélio intestinal (aumento da altura e largura das vilosidades), no desempenho (melhora na produção e conversão alimentar) e na qualidade do produto final (qualidade da casca dos ovos). Esta revisão objetivou abordar também aspectos relacionados às características, ao mecanismo de ação, além dos efeitos benéficos da utilização desses aditivos alternativos aos antibióticos na avicultura de corte e de postura, incluindo codornas japonesas.

Uso de aditivo alimentar equilibrador da flora intestinal em aves de corte e de postura / Use of a balancing food additive of the intestinal flora for broilers and laying

Aspectos gerais sobre a utilização de aditivos zootécnicos equilibradores da flora intestinal em rações de aves de corte e de postura foram abordados nesta revisão, destacando-se a utilização de prebióticos, especialmente dos mananoligossacarídeos (MOSs), os quais promovem o crescimento das populações microbianas que melhoram as condições luminais. A utilização de aditivos equilibradores da flora intestinal tem revelado melhorias na integridade do epitélio intestinal (aumento da altura e largura das vilosidades), no desempenho (melhora na produção e conversão alimentar) e na qualidade do produto final (qualidade da casca dos ovos). Esta revisão objetivou abordar também aspectos relacionados às características, ao mecanismo de ação, além dos efeitos benéficos da utilização desses aditivos alternativos aos antibióticos na avicultura de corte e de postura, incluindo codornas japonesas.(AU)

The general aspects on the use of zootechnical additives that balance the intestinal flora in diets of broilers and laying were reviewed, highlighting the use of prebiotics, mainly Mannan-oligosaccharides (MOS). These promote the growth of microbial population, thus improving luminal conditions. The use of additives balancing the intestinal flora has been shown to improve the integrity of the intestinal epithelium (increased villus height and width), performance (improvement in production and feed conversion), and quality of the final product (quality of shell eggs). This review also addresses issues related to the characteristics, mechanism of action, in addition to the beneficial effects of using these additives as an alternative to antibiotics in the poultry production, including Japanese quail.(AU)

Use of a balancing food additive of the intestinal flora for broilers and laying / Uso de aditivo alimentar equilibrador da flora intestinal em aves de corte e de postura

The general aspects on the use of zootechnical additives that balance the intestinal flora in diets of broilers and laying were reviewed, highlighting the use of prebiotics, mainly Mannan-oligosaccharides (MOS). These promote the growth of microbial population, thus improving luminal conditions. The use of additives balancing the intestinal flora has been shown to improve the integrity of the intestinal epithelium (increased villus height and width), performance (improvement in production and feed conversion), and quality of the final product (quality of shell eggs). This review also addresses issues related to the characteristics, mechanism of action, in addition to the beneficial effects of using these additives as an alternative to antibiotics in the poultry production, including Japanese quail.(AU)

Aspectos gerais sobre a utilização de aditivos zootécnicos equilibradores da flora intestinal em rações de aves de corte e de postura foram abordados nesta revisão, destacando-se a utilização de prebióticos, especialmente dos mananoligossacarídeos (MOSs), os quais promovem o crescimento das populações microbianas que melhoram as condições luminais. A utilização de aditivos equilibradores da flora intestinal tem revelado melhorias na integridade do epitélio intestinal (aumento da altura e largura das vilosidades), no desempenho (melhora na produção e conversão alimentar) e na qualidade do produto final (qualidade da casca dos ovos). Esta revisão objetivou abordar também aspectos relacionados às características, ao mecanismo de ação, além dos efeitos benéficos da utilização desses aditivos alternativos aos antibióticos na avicultura de corte e de postura, incluindo codornas japonesas.(AU)

Níveis de suplementação do aditivo alimentar VILIGEN em dietas para juvenis de tilápia-do-nilo: efeito na estrutura do epitélio intestinal e junção oclusiva

Aditivos alimentares são empregados na nutrição animal e desencadeiam múltiplas respostas benéficas ao organismo dos peixes. O VILIGEN (Alltech®, EUA) é um aditivo alimentar que contém butirato de sódio, levedura hidrolisada e proteinato de zinco desenvolvido com o propósito de promover a saúde intestinal em animais de produção. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da suplementação dietética deste aditivo 1) na morfologia e integridade intestinal, 2) na barreira intestinal, por meio da quantificação da proteína claudina-2; em juvenis de tilápia-do-nilo (Oreochromis niloticus). O ensaio de dose-resposta durou 60 dias, onde 840 peixes (peso médio inicial de 1,98 g) foram distribuídos em 30 unidades experimentais (200 L), pertencente a um sistema de recirculação com temperatura controlada em 28 °C. Os animais foram alimentados com dietas contendo níveis crescentes de inclusão de VILIGEN (0,00; 0,60; 1,20; 2,40 e 4,80 g kg-1), testados em seis repetições. Para analisar as alterações morfológicas ou na estrutura da barreira física intestinal, a porção medial do intestino dos peixes foi analisada com auxílio da microscopia eletrônica de transmissão e de varredura. Além disso, quantificou-se a proteína da junção oclusiva claudina-2 através da técnica de western blot. Os dados de morfologia intestinal e da proteína claudina-2 foram submetidos à análise de regressão polinomial para determinação do melhor nível de inclusão de VILIGEN nas dietas, a um nível de significância de 5%. Nas eletromicrografias detectou-se diferença significativa na altura das microvilosidades, as quais apresentaram uma resposta quadrática ao aumento dos níveis dietéticos de VILIGEN. A maior altura das microvilosidades e melhor desenvolvimento das pregas intestinais foi com a inclusão de 2,50 g kg-1 e 2,40 g kg-1 do aditivo na dieta, respectivamente. A integridade macroestrutural foi notavelmente diferente entre os peixes alimentados com dietas contendo diferentes doses do aditivo. O intestino das tilápias suplementadas com 2,40 g kg-1 apresentaram a melhor integridade do tecido intestinal, com menor fusão das pregas intestinais, sem a presença de deformidades e lesões, indicando que essa dose preveniu ou reparou possíveis danos intestinais. Já os peixes que não receberam suplementação e os que receberam a maior suplementação (4,80 g kg-1) apresentaram maior deformidade e fusões das pregas, respectivamente. A quantificação da proteína da junção claudina-2 não foi significativamente afetada pela suplementação. Por fim, conclui-se que a suplementação dietética do aditivo VILIGEN a 2,50 g kg-1 na dieta melhora a morfologia intestinal e a integridade do epitélio do intestino de juvenis de tilápia-do-nilo, sem alterar a barreira física intestinal.

Feed additives are used in animal nutrition and trigger multiple beneficial responses to fish organisms. VILIGEN (Alltech®, USA), a feed additive designed to promote intestinal health includes sodium butyrate, hydrolyzed yeast, and zinc proteinate. This study aimed to evaluate the effect of dietary supplementation of this additive on 1) intestinal morphology and integrity, 2) intestinal barrier by quantifying the claudin-2 protein in juvenile Nile tilapia (Oreochromis niloticus). The dose-response trial lasted 60 days, where 840 fish (1.98 g) were randomly distributed into 30 experimental units (200 L), connected to a water recirculation system with controlled temperature (average 28 °C). The fish were fed experimental diets with increasing levels of VILIGEN (0.00, 0.60, 1.20, 2.40, and 4.80 g kg-1) with six replicates per dietary treatment. To analyze changes in the morphology or structure of the intestinal physical barrier, the medial portion of the gut was analyzed by transmission and scanning electron microscopy. In addition, the claudin-2 tight junction protein was quantified using the western blot technique. Gut morphology and claudin-2 protein data were submitted to polynomial regression analysis to determine the best inclusion level of VILIGEN in the diets, at a 5% significance level. Electron micrographs enabled us to register a significant difference in the height of the microvilli that showed a quadratic response to the increasing dietary levels of VILIGEN. The highest height of microvilli and the best development of gut folds was registered at 2.50 g kg-1 and 2.40 g kg-1 inclusion levels, respectively. The macrostructural integrity was notably different among fish fed diets containing different doses of the additive. The intestines of tilapia supplemented with 2.40 g kg-1 showed the best integrity of intestinal tissue, presenting less fusion of the gut folds, without deformities or lesions, indicating that that dose prevented or repaired possible intestinal damage. Fish fed diet devoid of supplementation and those fed the highest supplementation level (4.80 g kg-1) had the highest fold deformity and fold fusions, respectively. The amount of the claudin-2 junction protein was not affected by the different levels of supplementation. Our findings show that the dietary supplementation of VILIGEN at 2.50 g kg-1 improves the gut morphology and the integrity of the intestinal epithelium of juvenile Nile tilapia, without altering the intestinal physical barrier.

EFEITO DA ADIÇÃO DE HIPOTAURINA NOS MEIOS DE TRANSPORTE E CONGELAÇÃO SOBRE A QUALIDADE DAS CÉLULAS ESPERMÁTICAS OBTIDAS DE TESTÍCULOS DE GATOS DOMÉSTICOS

Durante o processo de criopreservação de gametas ou tecidos, as células podem sofrer danos morfofuncionais causados pelo choque térmico ou estresse osmótico e oxidativo. Nesse contexto, propomos que a adição de antioxidantes nos meios durante este processo pode promover proteção das células contra a ação dos radicais livres. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar os efeitos da suplementação de hipotaurina nos meios de transporte e congelação de tecido testicular de gatos domésticos. Para isso, testículos (n = 30) de quinze gatos foram transportados a aproximadamente 4ºC por 1 ou 6 horas e criopreservados em meios contendo diferentes concentrações de hipotaurina. Após os períodos de refrigeração e pós-descongelação os espermatozoides obtidos foram analisados quanto à integridade de membrana e DNA. Durante a refrigeração a integridade da membrana plasmática não foi afetada pelo tempo ou pelos diferentes meios de transporte (P > 0,05). Quando a hipotaurina foi adicionada apenas no meio de transporte e procedeu-se a criopreservação, a integridade da membrana plasmática dos espermatozoides testiculares somente se manteve no meio contendo 25 mM de hipotaurina (P = 0,08), nos demais houve diminuição significativa após a criopreservação quando o tecido foi refrigerado por 6 horas (P = 0,04 e P = 0,02, respectivamente). A integridade do DNA não foi afetada pelo tempo de refrigeração nem pelo meio de transporte. Quando analisada a influência da hipotaurina tanto no meio de transporte quanto no meio de criopreservação, observou-se diminuição na porcentagem de espermatozoides com membrana e DNA íntegros quando utilizado crioprotetor com concentrações mais altas de antioxidante. Estas lesões foram possivelmente causadas por alteração da osmolaridade ou ainda pelo efeito redutor devido ao excesso de antioxidante. Pode-se concluir que a hipotaurina deve estar presente no meio de transporte de testículos de gatos domésticos, uma vez que a adição deste antioxidante, melhora as características dos espermatozoides recuperados pós-descongelação. Mais estudos são necessários para verificar as possíveis causas de prejuízo na qualidade espermática quando esse antioxidante é adicionado no meio de criopreservação.

During the cryopreservation process, the thermal shock or osmotic and oxidative stress can cause morphofunctional damage to gamete or tissue cells. In this context, the addition of antioxidants to the medium is proposed as a method for promoting cell protection against the action of free radicals. This study aims to investigate whether hypotaurine supplemented to the medium allows for longer transport times while reducing the damage caused to the testicular parenchyma of cats by the refrigeration and cryopreservation processes. For this, testicles (n = 30) from fifteen cats were transported at about 4ºC for 1 or 6 hours and cryopreserved in medium containing different concentrations of hypotaurine. In the post-refrigeration and post-thaw periods, the sperm samples were analyzed to determine membrane and DNA integrity. During refrigeration, the plasma membrane integrity was not affected by transportation time or the different transportation means (P> 0.05). After adding hypotaurine only in the transport medium and accomplished cryopreservation, the integrity of the plasma membrane of testicular sperm was maintained only in the medium with 25 mM of hypotaurine (P = 0.08), whereas plasma membrane integrity decreased significantly in the other two treatments, MTh0 and MTh10, after cryopreservation (P = 0.04 and P = 0.02, respectively) and after being refrigerated for 6 hours. DNA integrity was not affected by the refrigeration time or transportation means. However, when adding hypotaurine in both the transportation medium and the cryopreservation medium, the percentage of sperm with intact membrane and DNA decreased when the added cryoprotectant had higher antioxidant concentrations. The observed damage possibly resulted from either the changing osmolarity or the reduction effect due to an excess of antioxidants. The results show that hypotaurine must be present in the transportation medium used to transfer the testicles of domestic cats, since the added antioxidant protects the testicular tissue, improving the characteristics of sperm recovered after thawing. However, further studies are needed to determine the possible causes of impaired sperm quality when this antioxidant is added to the cryopreservation medium as well.