Cryptosporidium sp. in cultivated oysters and the natural oyster stock of the state of Maranhão, Brazil / Detecção de Cryptosporidium sp. em ostras de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão, Brasil

ABSTRACT: This study detected Cryptosporidium spp. in cultivated oysters and the natural oyster stock of the state of Maranhão and determine the elective tissue(s) to examine this protozoan. For this purpose, 200 cultivated oysters were purchased from the municipality of Raposa and another 100 from Paço do Lumiar. Additionally, 100 oysters were extracted from the natural stock of the municipality of Primeira Cruz, thus making up a total of 400 oysters. They were grouped into 80 pools consisting of 5 oysters each. From each pool, the gills and visceral mass were removed to obtain 160 pools, 80 pools for the gill group and another 80 for the visceral mass group. Then, DNA was extracted from each pool using a commercial kit with modifications. Subsequently, the protozoan DNA was detected using nested polymerase chain reaction. With this technique, the DNA of the protozoan under investigation was detected in 2.5% (n = 2/80) of the pools containing gills, with 1.25% of the pools (n = 1/80) belonging to the cultivation group of oysters and the other 1.25% (n = 1/80) to the natural stock. With the results obtained in this study, it was concluded that the analyzed oysters of the genus Crassostrea, from cultivation and natural stock groups, found in the state of Maranhão, were contaminated by Cryptosporidium spp. and may become potential sources of infection in humans and other animals. In addition, the gills are the elective tissue for the study of Cryptosporidium spp. in oysters.

RESUMO: Objetivou-se com o estudo detectar Cryptosporidium sp. em ostras de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão e determinar o(s) tecido(s) eletivo(s) para pesquisa desse protozoário. Para a realização do estudo foram adquiridas 200 ostras de cultivo do município de Raposa e 100 de Paço do Lumiar, além de 100 ostras extraídas de estoque natural do município de Primeira Cruz, totalizando 400 ostras. Estas foram agrupadas em 80 pools constituídos por cinco animais. De cada pool, as brânquias e a massa visceral foram removidas totalizando 160 pools, sendo 80 para o grupo das brânquias e 80 para o grupo de massa visceral. Na sequência, procedeu-se à extração de DNA de cada pool com a utilização de kit comercial com modificações. Posteriormente, realizou-se a detecção do DNA do protozoário por meio da técnica de Nested-PCR. Com a técnica utilizada, foi detectado o DNA do protozoário pesquisado em 2,5% (n=2/80) pools apenas de brânquias, sendo 1,25% pools (n=1/80) oriundos de cultivo e os outros 1,25% (n=1/80) de estoque natural. Com os resultados obtidos nesse estudo, conclui-se que as ostras analisadas do gênero Crassostrea sp., oriundas de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão, estavam contaminadas por Cryptosporidium sp. e podem se reverter em fontes potenciais para seres humanos e outros animais. Para a pesquisa de Cryptosporidium sp. em ostras, as brânquias são o tecido eletivo.

Cryptosporidium sp. in cultivated oysters and the natural oyster stock of the state of Maranhão, Brazil / Detecção de Cryptosporidium sp. em ostras de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão, Brasil

This study detected Cryptosporidium spp. in cultivated oysters and the natural oyster stock of the state of Maranhão and determine the elective tissue(s) to examine this protozoan. For this purpose, 200 cultivated oysters were purchased from the municipality of Raposa and another 100 from Paço do Lumiar. Additionally, 100 oysters were extracted from the natural stock of the municipality of Primeira Cruz, thus making up a total of 400 oysters. They were grouped into 80 pools consisting of 5 oysters each. From each pool, the gills and visceral mass were removed to obtain 160 pools, 80 pools for the gill group and another 80 for the visceral mass group. Then, DNA was extracted from each pool using a commercial kit with modifications. Subsequently, the protozoan DNA was detected using nested polymerase chain reaction. With this technique, the DNA of the protozoan under investigation was detected in 2.5% (n = 2/80) of the pools containing gills, with 1.25% of the pools (n = 1/80) belonging to the cultivation group of oysters and the other 1.25% (n = 1/80) to the natural stock. With the results obtained in this study, it was concluded that the analyzed oysters of the genus Crassostrea, from cultivation and natural stock groups, found in the state of Maranhão, were contaminated by Cryptosporidium spp. and may become potential sources of infection in humans and other animals. In addition, the gills are the elective tissue for the study of Cryptosporidium spp. in oysters.

Objetivou-se com o estudo detectar Cryptosporidium sp. em ostras de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão e determinar o(s) tecido(s) eletivo(s) para pesquisa desse protozoário. Para a realização do estudo foram adquiridas 200 ostras de cultivo do município de Raposa e 100 de Paço do Lumiar, além de 100 ostras extraídas de estoque natural do município de Primeira Cruz, totalizando 400 ostras. Estas foram agrupadas em 80 pools constituídos por cinco animais. De cada pool, as brânquias e a massa visceral foram removidas totalizando 160 pools, sendo 80 para o grupo das brânquias e 80 para o grupo de massa visceral. Na sequência, procedeu-se à extração de DNA de cada pool com a utilização de kit comercial com modificações. Posteriormente, realizou-se a detecção do DNA do protozoário por meio da técnica de Nested-PCR. Com a técnica utilizada, foi detectado o DNA do protozoário pesquisado em 2,5% (n=2/80) pools apenas de brânquias, sendo 1,25% pools (n=1/80) oriundos de cultivo e os outros 1,25% (n=1/80) de estoque natural. Com os resultados obtidos nesse estudo, conclui-se que as ostras analisadas do gênero Crassostrea sp., oriundas de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão, estavam contaminadas por Cryptosporidium sp. e podem se reverter em fontes potenciais para seres humanos e outros animais. Para a pesquisa de Cryptosporidium sp. em ostras, as brânquias são o tecido eletivo.

First report of detection of Toxoplasma gondii DNA in oysters (Crassostrea sp) in the state of Maranhão / Primeiro relato da detecção de DNA de Toxoplasma gondii em ostras (Crassostrea sp) no Estado do Maranhão

The aim of this study was to report on detection of Toxoplasma gondii DNA in oysters (Crassostrea sp.) in the state of Maranhão. To conduct this study, 200 farmed oysters were acquired in the municipality of Raposa and 100 in Paço do Lumiar; and a further 100 oysters were taken from the natural stock in the municipality of Primeira Cruz. This total of 400 specimens sampled was divided into 80 pools composed of five animals each. The gills and visceral mass of each oyster were removed for DNA extraction (per pool of oysters), using a commercial kit. The nested PCR technique (with the primer SAG-1) was then used to investigate any presence of protozoa. This molecular technique demonstrated the presence of DNA of T. gondii in 2.5% of the pools of oysters (n = 2/80): these oysters were exclusively from farms. The results from this study allow the conclusion that oysters of the genus Crassostrea that are farmed in the state of Maranhão are capable of filtering oocysts of T. gondii and maintaining them in their tissues. They are therefore potential sources of contamination for humans and other animals.(AU)

Objetivou-se com este estudo relatar a detecção do DNA de Toxoplasma gondii em ostras (Crassostrea sp.) no estado do Maranhão. Para a realização do estudo foram adquiridas 200 ostras de cultivo do município de Raposa, e 100 de Paço do Lumiar, além de 100 ostras extraídas de estoque natural do município de Primeira Cruz. Do total de 400 exemplares amostrados, formaram-se 80 pools em que cada pool foi constituído por cinco animais. De cada ostra foi procedida à retirada das brânquias e massa visceral, seguido da extração de DNA de cada pool de ostras, com a utilização de kit comercial. Posteriormente, realizou-se a pesquisa do protozoário por meio da técnica de nested PCR (primer SAG-1). Com a técnica molecular utilizada, foi diagnosticado o DNA do protozoário pesquisado em 2,5% (n=2/80) pools de ostras oriundas exclusivamente de cultivo. Com os resultados obtidos neste estudo, conclui-se que ostras do gênero Crassostrea sp., cultivadas no estado do Maranhão, são capazes de filtrar e manter nos seus tecidos oocistos de T. gondii, sendo, portanto, fontes potenciais de contaminação para seres humanos e outros animais.(AU)

Virulence genes in Escherichia coli isolates from commercialized saltwater mussels Mytella guyanensis (Lamarck, 1819) / Presença de genes de virulência em isolados de Escherichia coli provenientes de sururu Mytella guyanensis (Lamarck, 1819) comercializado

The isolation of Escherichia coli from food is a major concern. Pathogenic strains of these bacteria cause diseases which range from diarrhea to hemolytic-uremic syndrome. Therefore the virulence genes in E. coli isolates from the mussel ( Mytella guyanensis) commercialized in Cachoeira, Bahia, Brazil were investigated. Samples were purchased from four vendors: two from supermarkets and two from fair outlets. They were conditioned into isothermal boxes with reusable ice and transported to the laboratory for analysis. E. coli strains were isolated in eosin methylene blue agar, preserved in brain-heart infusion medium with 15% glycerol and stored at -20 °C, after microbiological analysis. Virulence genes in the isolated strains were identified by specific primers, with Polymerase Chain Reaction. Twenty-four isolates were obtained, with a prevalence of elt gene, typical from enterotoxigenic infection, in 75% of the isolates. The stx and bfpA genes, prevalent in enterohemorragic and enteropathogenic E. coli, respectively, were not detected. The occurrence of elt virulence-related gene in the E. coli isolates of Mytella guyanensis reveals urgent improvement in food processing, including good handling practices, adequate storage and cooking before consumption, to ensure consumers health.(AU)

O isolamento de Escherichia coli a partir de alimentos é uma grande preocupação, pois cepas patogênicas desta bactéria podem causar desde diarreia até síndrome hemolítico-urêmica. Diante do exposto, o objetivo do trabalho foi pesquisar genes de virulência em isolados de Escherichia coli provenientes do sururu Mytella guyanensis comercializado na cidade de Cachoeira, Bahia, Brasil. As amostras foram adquiridas de quatro comerciantes, sendo duas de mercados e duas em pontos de venda na feira livre da cidade de Cachoeira, acondicionadas em caixas isotérmicas com gelo reutilizável e transportadas até o laboratório para a análise. Após a análise microbiológica, as cepas de Escherichia coli foram isoladas em ágar Eosina Azul de Metileno e preservadas em caldo Brian Heart Infusion e glicerol a 15% e mantidas a - 20° C. A identificação dos genes de virulência nas cepas isoladas foi realizada utilizando primers específicos, por meio da Reação em Cadeia da Polimerase. Foram obtidos 24 isolados de Escherichia coli, destes a prevalência do gene elt , característico de Escherichia coli enterotoxigênica, foi de 75% dos isolados. Não houve a detecção dos genes stx e bfpA nos isolados, os quais são prevalentes nas cepas de Escherichia coli enterohemorrágica e Escherichia coli enteropatogênica, respectivamente. A presença do gene elt relacionado à virulência de Escherichia coli nos isolados de Mytella guyanensis revela a necessidade da melhoria no processamento, incluindo boas práticas de manipulação, armazenamento adequado e cocção previa ao consumo, visando a garantia da saúde do consumidor.(AU)

Virulence genes in Escherichia coli isolates from commercialized saltwater mussels Mytella guyanensis (Lamarck, 1819)

Abstract The isolation of Escherichia coli from food is a major concern. Pathogenic strains of these bacteria cause diseases which range from diarrhea to hemolytic-uremic syndrome. Therefore the virulence genes in E. coli isolates from the mussel ( Mytella guyanensis) commercialized in Cachoeira, Bahia, Brazil were investigated. Samples were purchased from four vendors: two from supermarkets and two from fair outlets. They were conditioned into isothermal boxes with reusable ice and transported to the laboratory for analysis. E. coli strains were isolated in eosin methylene blue agar, preserved in brain-heart infusion medium with 15% glycerol and stored at -20 °C, after microbiological analysis. Virulence genes in the isolated strains were identified by specific primers, with Polymerase Chain Reaction. Twenty-four isolates were obtained, with a prevalence of elt gene, typical from enterotoxigenic infection, in 75% of the isolates. The stx and bfpA genes, prevalent in enterohemorragic and enteropathogenic E. coli, respectively, were not detected. The occurrence of elt virulence-related gene in the E. coli isolates of Mytella guyanensis reveals urgent improvement in food processing, including good handling practices, adequate storage and cooking before consumption, to ensure consumers health.

Resumo O isolamento de Escherichia coli a partir de alimentos é uma grande preocupação, pois cepas patogênicas desta bactéria podem causar desde diarreia até síndrome hemolítico-urêmica. Diante do exposto, o objetivo do trabalho foi pesquisar genes de virulência em isolados de Escherichia coli provenientes do sururu Mytella guyanensis comercializado na cidade de Cachoeira, Bahia, Brasil. As amostras foram adquiridas de quatro comerciantes, sendo duas de mercados e duas em pontos de venda na feira livre da cidade de Cachoeira, acondicionadas em caixas isotérmicas com gelo reutilizável e transportadas até o laboratório para a análise. Após a análise microbiológica, as cepas de Escherichia coli foram isoladas em ágar Eosina Azul de Metileno e preservadas em caldo Brian Heart Infusion e glicerol a 15% e mantidas a - 20° C. A identificação dos genes de virulência nas cepas isoladas foi realizada utilizando primers específicos, por meio da Reação em Cadeia da Polimerase. Foram obtidos 24 isolados de Escherichia coli, destes a prevalência do gene elt , característico de Escherichia coli enterotoxigênica, foi de 75% dos isolados. Não houve a detecção dos genes stx e bfpA nos isolados, os quais são prevalentes nas cepas de Escherichia coli enterohemorrágica e Escherichia coli enteropatogênica, respectivamente. A presença do gene elt relacionado à virulência de Escherichia coli nos isolados de Mytella guyanensis revela a necessidade da melhoria no processamento, incluindo boas práticas de manipulação, armazenamento adequado e cocção previa ao consumo, visando a garantia da saúde do consumidor.

Virulence genes in Escherichia coli isolates from commercialized saltwater mussels Mytella guyanensis (Lamarck, 1819)

Abstract The isolation of Escherichia coli from food is a major concern. Pathogenic strains of these bacteria cause diseases which range from diarrhea to hemolytic-uremic syndrome. Therefore the virulence genes in E. coli isolates from the mussel ( Mytella guyanensis) commercialized in Cachoeira, Bahia, Brazil were investigated. Samples were purchased from four vendors: two from supermarkets and two from fair outlets. They were conditioned into isothermal boxes with reusable ice and transported to the laboratory for analysis. E. coli strains were isolated in eosin methylene blue agar, preserved in brain-heart infusion medium with 15% glycerol and stored at -20 °C, after microbiological analysis. Virulence genes in the isolated strains were identified by specific primers, with Polymerase Chain Reaction. Twenty-four isolates were obtained, with a prevalence of elt gene, typical from enterotoxigenic infection, in 75% of the isolates. The stx and bfpA genes, prevalent in enterohemorragic and enteropathogenic E. coli, respectively, were not detected. The occurrence of elt virulence-related gene in the E. coli isolates of Mytella guyanensis reveals urgent improvement in food processing, including good handling practices, adequate storage and cooking before consumption, to ensure consumers health.

Resumo O isolamento de Escherichia coli a partir de alimentos é uma grande preocupação, pois cepas patogênicas desta bactéria podem causar desde diarreia até síndrome hemolítico-urêmica. Diante do exposto, o objetivo do trabalho foi pesquisar genes de virulência em isolados de Escherichia coli provenientes do sururu Mytella guyanensis comercializado na cidade de Cachoeira, Bahia, Brasil. As amostras foram adquiridas de quatro comerciantes, sendo duas de mercados e duas em pontos de venda na feira livre da cidade de Cachoeira, acondicionadas em caixas isotérmicas com gelo reutilizável e transportadas até o laboratório para a análise. Após a análise microbiológica, as cepas de Escherichia coli foram isoladas em ágar Eosina Azul de Metileno e preservadas em caldo Brian Heart Infusion e glicerol a 15% e mantidas a - 20° C. A identificação dos genes de virulência nas cepas isoladas foi realizada utilizando primers específicos, por meio da Reação em Cadeia da Polimerase. Foram obtidos 24 isolados de Escherichia coli, destes a prevalência do gene elt , característico de Escherichia coli enterotoxigênica, foi de 75% dos isolados. Não houve a detecção dos genes stx e bfpA nos isolados, os quais são prevalentes nas cepas de Escherichia coli enterohemorrágica e Escherichia coli enteropatogênica, respectivamente. A presença do gene elt relacionado à virulência de Escherichia coli nos isolados de Mytella guyanensis revela a necessidade da melhoria no processamento, incluindo boas práticas de manipulação, armazenamento adequado e cocção previa ao consumo, visando a garantia da saúde do consumidor.

Population structure of the bivalve Anomalocardia brasiliana, (Gmelin, 1791) in the semi-arid estuarine region of northeastern Brazil / Estrutura populacional do bivalve Anomalocardia brasiliana, (Gmelin, 1791) em região estuarina do semi-árido do nordeste brasileiro

For several decades, the bivalve mollusk Anomalocardia brasiliana has been extracted in estuarine areas in the semi-arid region of northeastern Brazil. However, information on both dynamics and abundance of their populations are missing. In this context, the present study, therefore, investigated several aspects of the population structure of A. brasiliana on beaches near the estuary of the Apodi River in Northeast Brazil. The aims were to determine the population density of A. brasiliana during different times of the year, to estimate population parameters, and to relate species density and distribution to the abiotic characteristics of the region. Sampling was performed from March/2007 and May/2008, we collected samples of sediments and mollusks along 180 m transects in the intertidal area on the beaches Barra and Pernambuquinho, Grossos - RN. At each sampling site, samples of sediments and mollusks were collected in the intertidal area along 180 m transects. The highest and lowest average densities on Pernambuquinho beach were 1148 (April/2007), and 100 individuals.m2 (May/ 2008), respectively. On Barra beach, the highest and lowest densities were 1813 (April/2007) and 951 individuals.m2, (November/2007), respectively. The densities of A. brasiliana on both beaches were significantly different only in the months of January, April and May/ 2008. Length of the individuals ranged from 1 to 28 mm, with most individuals measuring between 22 and 24 mm. Length growth rate parameters for A. brasiliana were L = 28.68 mm and k = 0.61 year1 on Barra beach, and L = 29.87 mm and k = 0.48 year1 on Pernambuquinho beach. The growth rate curves for A. brasiliana suggest the presence of three well defined cohorts, thus pointing to a continuous reproduction cycle with peak recruitment between October/2007 and March/2008. A. brasiliana density decreased predominantly during the heavy rains of 2008, probably due to an accumulation of sediments and decreasing salinity. This disturbance probably affected population of this species in the region.

O molusco bivalve Anomalocardia brasiliana há décadas vem sendo coletado em região estuarina do semi-árido do nordeste Brasileiro. No entanto, são escassas as informações sobre a dinâmica e abundância de suas populações na região. Neste contexto, o presente trabalho objetivou estudar aspectos da estrutura populacional de A. brasiliana em praias localizadas próximas à região de estuário do rio Apodi/Mossoró - RN no intuito de verificar a densidade populacional de A. brasiliana durante as diferentes épocas do ano; estimar os parâmetros populacionais e relacionar as características abióticas de região com a distribuição e densidade desta espécie. As coletas foram realizadas no período de março/2007 a maio/2008 nas praias de Barra e Pernambuquinho no município de Grossos - RN. Em cada ponto foram realizados transcectos de 180 metros na região de entremarés e coletadas amostras de sedimento e de moluscos. O maior valor médio de densidade na praia de Pernambuquinho foi de 1148 indivíduos/m2, no mês de abril/07 e o menor foi em maio/08 (100 indivíduos/m2). Na praia de Barra o maior valor foi de 1813 indivíduos/m2, no mês de abril/08 e o menor foi em novembro/07 com 951 indivíduos/m2. Os comprimentos variaram de 1 a 28 mm, sendo mais frequentes indivíduos com comprimentos entre 22 a 24 mm. Foram constatadas diferenças significativas entre as densidades de A. brasiliana em ambas as praias, apenas nos meses de janeiro, abril e maio de 2008. Os parâmetros que descrevem o crescimento em comprimento de A. brasiliana na praia de Barra foram: L = 28,68 mm e k = 0,61 ano1, enquanto que para a praia de Pernambuquinho foram: L = 29,87 mm e k = 0,48 ano1. As curvas de crescimento de A. brasiliana sugerem a presença de três coortes bem definidas, indicando uma reprodução contínua com picos de recrutamento ocorrerendo entre os meses de outubro/07 a março/08. Pode-se verificar uma diminuição da densidade de A. brasiliana, especialmente no período de chuvas intensas do ano de 2008, o que provavelmente esteve associado ao aporte de sedimentos e a diminuição da salinidade. Esta perturbação provavelmente afetou as populações desta espécie na região.

Population structure of the bivalve Anomalocardia brasiliana, (Gmelin, 1791) in the semi-arid estuarine region of northeastern Brazil / Estrutura populacional do bivalve Anomalocardia brasiliana, (Gmelin, 1791) em região estuarina do semi-árido do nordeste brasileiro

For several decades, the bivalve mollusk Anomalocardia brasiliana has been extracted in estuarine areas in the semi-arid region of northeastern Brazil. However, information on both dynamics and abundance of their populations are missing. In this context, the present study, therefore, investigated several aspects of the population structure of A. brasiliana on beaches near the estuary of the Apodi River in Northeast Brazil. The aims were to determine the population density of A. brasiliana during different times of the year, to estimate population parameters, and to relate species density and distribution to the abiotic characteristics of the region. Sampling was performed from March/2007 and May/2008, we collected samples of sediments and mollusks along 180 m transects in the intertidal area on the beaches Barra and Pernambuquinho, Grossos - RN. At each sampling site, samples of sediments and mollusks were collected in the intertidal area along 180 m transects. The highest and lowest average densities on Pernambuquinho beach were 1148 (April/2007), and 100 individuals.m2 (May/ 2008), respectively. On Barra beach, the highest and lowest densities were 1813 (April/2007) and 951 individuals.m2, (November/2007), respectively. The densities of A. brasiliana on both beaches were significantly different only in the months of January, April and May/ 2008. Length of the individuals ranged from 1 to 28 mm, with most individuals measuring between 22 and 24 mm. Length growth rate parameters for A. brasiliana were L = 28.68 mm and k = 0.61 year1 on Barra beach, and L = 29.87 mm and k = 0.48 year1 on Pernambuquinho beach. The growth rate curves for A. brasiliana suggest the presence of three well defined cohorts, thus pointing to a continuous reproduction cycle with peak recruitment between October/2007 and March/2008. A. brasiliana density decreased predominantly during the heavy rains of 2008, probably due to an accumulation of sediments and decreasing salinity. This disturbance probably affected population of this species in the region.(AU)

O molusco bivalve Anomalocardia brasiliana há décadas vem sendo coletado em região estuarina do semi-árido do nordeste Brasileiro. No entanto, são escassas as informações sobre a dinâmica e abundância de suas populações na região. Neste contexto, o presente trabalho objetivou estudar aspectos da estrutura populacional de A. brasiliana em praias localizadas próximas à região de estuário do rio Apodi/Mossoró - RN no intuito de verificar a densidade populacional de A. brasiliana durante as diferentes épocas do ano; estimar os parâmetros populacionais e relacionar as características abióticas de região com a distribuição e densidade desta espécie. As coletas foram realizadas no período de março/2007 a maio/2008 nas praias de Barra e Pernambuquinho no município de Grossos - RN. Em cada ponto foram realizados transcectos de 180 metros na região de entremarés e coletadas amostras de sedimento e de moluscos. O maior valor médio de densidade na praia de Pernambuquinho foi de 1148 indivíduos/m2, no mês de abril/07 e o menor foi em maio/08 (100 indivíduos/m2). Na praia de Barra o maior valor foi de 1813 indivíduos/m2, no mês de abril/08 e o menor foi em novembro/07 com 951 indivíduos/m2. Os comprimentos variaram de 1 a 28 mm, sendo mais frequentes indivíduos com comprimentos entre 22 a 24 mm. Foram constatadas diferenças significativas entre as densidades de A. brasiliana em ambas as praias, apenas nos meses de janeiro, abril e maio de 2008. Os parâmetros que descrevem o crescimento em comprimento de A. brasiliana na praia de Barra foram: L = 28,68 mm e k = 0,61 ano1, enquanto que para a praia de Pernambuquinho foram: L = 29,87 mm e k = 0,48 ano1. As curvas de crescimento de A. brasiliana sugerem a presença de três coortes bem definidas, indicando uma reprodução contínua com picos de recrutamento ocorrerendo entre os meses de outubro/07 a março/08. Pode-se verificar uma diminuição da densidade de A. brasiliana, especialmente no período de chuvas intensas do ano de 2008, o que provavelmente esteve associado ao aporte de sedimentos e a diminuição da salinidade. Esta perturbação provavelmente afetou as populações desta espécie na região.(AU)

IMPACTO DO EL NIÑO NA AMAZÔNIA: INFLUÊNCIA NO CRESCIMENTO DA OSTRA-DO-MANGUE CULTIVADA NO LITORAL PARAENSE, NORTE DO BRASIL

As anomalias climáticas, tais como o fenômeno El Niño, causam impactos socioeconômicos e ambientais imensuráveis em todo o globo, principalmente na produção de alimentos. Embora o Brasil não esteja incluso entre os países em situação de risco, influências dos El Niños passados na Amazônia e em outras regiões do país são documentadas em literatura. Este estudo tem como objetivo avaliar a influência do El Niño no crescimento da ostra-do-mangue Crassostrea tulipa, cultivada no litoral amazônico. Para o experimento, utilizou-se o método de marcação utilizando fluorocromo calceína, que é recomendado na literatura para estudos de crescimento de moluscos bivalves tropicais. O experimento iniciou-se em abril de 2016 (durante o auge do El Niño 2015/16) e perpetuou por um período de um ano. Todas as condições experimentais foram baseadas em um estudo anterior, realizado (em 2013) em ano sem presença de anomalia climática. A cada coleta, amostrou-se 30 ostras, realizando (in locu) a retirada da epifauna bentônica associada a concha, posteriormente mensurando as medidas morfométricas e, por fim, codificados e transportados ao laboratório para o procedimento seguinte. Em laboratório, após lavadas e secas, as conchas das ostras foram emblocadas em resina cristal e cortados longitudinalmente, usando uma serra diamantada. Depois do polimento dos cortes resultantes com diferentes graus de pó de carboneto e óxido de alumínio, determinou-se a taxa de crescimento absoluto, detectando as marcas da calceína com um microscópio de fluorescência, que emite luz azul. Para estimar dos parâmetros de crescimento (K e L) utilizou-se a função de crescimento de von Bertalanffy, ajustada aos dados de tamanho de incremento (modelo de Appeldoorn). Avaliou-se a influência do El Niño no crescimento de C. tulipa por meio da comparação dos parâmetros de crescimento, utilizando o Overall Growth Performance OGP. O OGP analisa os parâmetros de crescimento das espécies e ordena os dados em uma grade auximétrica. Os resultados deste estudo apresentam distinção nos parâmetros de crescimento das ostras sob influência do El Niño. Essa influência ocorre de modo distinto, correlacionada com a força da anomalia climática. Neste estudo, evidenciou-se uma influência negativa no crescimento das ostras C. tulipa cultivada no litoral amazônico, quando comparadas ao crescimento em anos normais. Além disso, estima-se que as ostras cultivadas em ano de El Niño, demora aproximadamente três meses a mais para atingir seu tamanho comercial. Deste modo, recomenda-se que, em anos de El Niño, aumente os cuidados no manejo do cultivo (e.g. retirada do biofouling, diminuir a densidade estocada) para reduzir os fatores ambientais adicionais que, também, influenciam no crescimento das ostras.

Climate anomalies, such as the El Niño phenomenon, cause immeasurable socioeconomic and environmental impacts across the globe, especially in food production. Although Brazil is not included among the countries at risk, influences of El Niños passed in the Amazon and other regions of the country are documented through the available literature. This study aims to evaluate the influence of El Niño on the growth of the mangrove oyster Crassostrea tulipa, cultivated on the Amazonian coast. For the experiment, the labeling method was used using fluorochrome calcein, which is recommended in the literature for growth studies of tropical bivalve molluscs. The experiment started in April and 2016 (during the height of El Niño 2015/16) and perpetuated for a period of one year. All experimental conditions were based on an earlier study, carried out (in 2013) in year without climatic anomaly. At each collection, 30 oysters were sampled, performing (in locu) the removal of the benthic epiphyseal associated with the shell, then measuring the morphometric measurements and, finally, coded and transported to the laboratory for the next procedure. In the laboratory, after washing and drying, the oyster shells were embedded in crystal resin and cut lengthwise using a diamond saw. After polishing the resulting cuts with different degrees of carbide and aluminum oxide powder, the absolute growth rate was determined by detecting the calcein tags with a fluorescence microscope which emits blue light. The growth parameters (K and L) were used for the von Bertalanffy growth function, adjusted for incremental size data (Appeldoorn model). The influence of El Niño on the growth of C. tulipa was evaluated by comparing the growth parameters using the Overall Growth Performance OGP. The OGP analyzes the growth parameters of the species and sorts the data in an auximetric grid. The results of this study show a distinction in the growth parameters of oysters under El Niño influence. This influence occurs in a different way, correlated with the force of the climatic anomaly. In this study, a negative influence was observed in the growth of C. tulipa oysters grown on the Amazonian coast, when compared to growth in normal years. In addition, it is estimated that the oysters grown in El Niño year, takes approximately three more months to reach its commercial size. Thus, it is recommended that in El Niño years increase care in crop management (eg withdrawal of biofouling, decrease in stocking density) to reduce additional environmental factors that also influence oyster growth.

ANÁLISE MICROBIOLÓGICA DE OSTRAS (Mollusca, Bivalvia) OBTIDAS DE DIFERENTES PONTOS DE EXTRAÇÃO NA ILHA DE SÃO LUIS MA.

O Maranhão é um estado com um extenso litoral, que possibilita a muitas famílias um meio de sobrevivência através da pesca. O Estado tem o segundo maior litoral e é o segundo maior produtor de pescado da Região Nordeste, compreendendo cerca de oitenta por cento do manguezal brasileiro. Nesse cenário os municípios de Raposa e Paço do Lumiar se destacam pelas condições litorâneas e pelos ricos manguezais, fazendo com que o pescado e mariscos sejam a principal fonte de renda e alimentação da população local. A ostra é considerada como uma excelente fonte nutricional e de renda para a população, e também um atrativo turístico. A preferência pelo consumo in natura, nos chama a atenção, uma vez que alimentos crus ou mal cozidos são importantes veiculadores de doenças. Este estudo foi conduzido com o objetivo de avaliar a presença de dois micro-organismos de grande relevância para a saúde pública em ostras do gênero Crassostrea. Foram analisadas no período de maio de 2014 a dezembro de 2014, um total de 64 amostras de ostras, coletadas em quatro pontos de extrações naturais nos municípios de Raposa (Porto do Braga e Cais da Raposa) e Paço do Lumiar (Porto do Cumbique e Porto do Pau Deitado), pertencentes à Ilha de São Luís MA. Buscou-se identificar a ocorrência de Vibrio parahaemolyticus e Staphylococcus spp. Para o isolamento e contagem de V. parahaemolyticus, utilizou-se o método descrito no BAM/FDA, com modificações segundo a ISO/TS-21872-1 para temperatura. Para contagem de Staphylococcus spp utilizou-se a IN Nº62/MAPA.

Maranhão is a state with a long coastline, which allows many families a means of survival through fishing. The state has the second longest coastline and is the second largest fish producer in the Northeast, comprising about eighty percent of Brazilian mangroves. In this scenario the municipalities of Fox and Lumiar Palace stand out for coastal conditions and the rich mangroves, causing the fish and shellfish are the main source of income and food for the local population. The oyster is considered an excellent source of nutrition and income for the population, and also a tourist attraction. The preference for fresh consumption, draws our attention, since raw or undercooked foods are important backers of diseases. This study was conducted to evaluate the presence of two very important micro-organisms to public health in the genre Crassostrea oysters. Were analyzed in the period May 2014 to December 2014, a total of 64 samples of oysters collected at four points of natural extractions in the municipalities of Fox (Porto Braga and Clothes fox) and Paco do Lumiar (Port Cumbique and port Pau Laying) belonging to the Saint Louis Island - MA. Sought to identify the occurrence of Vibrio parahaemolyticus and Staphylococcus sp. For the isolation and V. parahaemolyticus count, we used the method described in BAM / FDA, with modifications according to ISO / TS 21872-1 to-temperature. Staphylococcus spp count used to IN 62 / MAP.

Biomarcadores e Análise microbiológica para avaliação do potencial de ostra (Mollusca, Bivalvia) como indicadore de poluentes aquáticos

O presente estudo teve como objetivo utilizar biomarcadores bioquímicos associados à análise microbiológica para avaliar ostras do gênero Crassostrea como indicador de poluição aquática, além de analisar a qualidade microbiológica da água e questões socioeconômicas e higienicossanitárias sobre os marisqueiros de ostras. Para tanto, foram analisadas no período de dezembro de 2013 a janeiro de 2015, 64 amostras de água dos locais de extração de ostras e 64 amostras de ostras do gênero Crassostrea coletadas em municípios da Ilha de São Luís - MA para quantificação da atividade enzimática dos biomarcadores bioquímicos glutationa-stransferase (GST) e catalase (CAT) por meio de espectrofotometria. Para avaliação da qualidade higienicossanitária das ostras foram utilizados métodos analíticos oficiais para determinação do Número Mais Provável - NMP de Coliformes totais e termotolerantes, quantificação de bactérias aeróbias mesófilas e pesquisa de Aeromonas spp. Para a determinação de Coliformes totais e E. coli nas amostras de água foi utilizada a técnica do substrato enzimático cromogênico e fluorogênico ONPG/MUG. Paralelamente, foram entrevistados 19 marisqueiros utilizando-se questionário semiestruturado abordando questões socioeconômicas e de percepção higienicossanitária. Os resultados indicaram que no período chuvoso e de estiagem a atividade da enzima glutationa s-transferase foi maior nas ostras do Porto do Cumbique. Enquanto para as ostras da área do Porto do Pau Deitado, essa atividade foi quase nula no período chuvoso. Para a atividade da enzima catalase os maiores níveis ocorreram nas ostras do Porto do Cumbique, nos dois períodos (chuvoso e estiagem), Cais da Raposa no período chuvoso, seguido de Porto do Braga no período de estiagem. Em relação a água, 100% das amostras analisadas, em ambos os períodos, apresentaram contaminação por Coliformes totais (Ct) e E. coli, 69% das amostras de ostras apresentaram Ct, 47% Coliformes termotolerantes (CT) e 8,33% de E. coli no período chuvoso. Enquanto no período de estiagem 57% das ostras apresentaram Ct, 39% CT e 21,42% E. coli. Além disso, 47% das amostras de ostras estavam contaminadas por bactérias do gênero Aeromonas, sendo todas confirmadas para a espécie A. hydrophila. As contagens de bactérias heterotróficas mesófilas variaram de 8 x 102 ± 6 x 102 a 2,8 x 104 ± 4,7 x 104 . Quanto a aplicação dos questionários observou-se que os marisqueiros pertenciam exclusivamente ao sexo masculino com média estimada de 33 anos de idade, sendo a maior parte proveniente de outros municípios maranhenses que não fazem parte da Ilha de São Luís. A maioria possui ensino fundamental incompleto, são casados ou possuem união estável. Possuem pouca noção sobre os cuidados higiênicos que devem ser adotados para a comercialização das ostras. Os dados obtidos sugerem que a alteração da atividade enzimática da glutationa s-transferase nas ostras analisadas é um indicativo de efeito adverso de contaminantes carreados para os corpos hídricos na Ilha de São Luís, principalmente na área do Porto do Pau Deitado. Essas ostras estão com a qualidade higienicossanitária inadequada para o consumo e podem ser um importante veículo de patógenos de origem alimentar, como A. hydrophila e E. coli. A água dos locais de coleta de ostras está dentro dos padrões microbiológicos estabelecidos pela legislação vigente. A atividade extrativista de coleta de ostra representa uma importante fonte de renda para a comunidade, entretanto é realizada sem recursos tecnológicos e por método artesanal.

This study aimed to use biochemical biomarkers associated with microbiological analysis to assess gender Crassostrea oysters as water pollution indicator, in addition to analyzing the microbiological quality of water and socioeconomic and hygienic sanitary issues on oyster seller. Thus, we analyzed in december 2013 to january 2015, 64 water samples of 64 oysters and oyster Crassostrea genus sample extraction sites collected in municipalities of São Luís Island - MA to quantify the enzymatic activity of biochemical biomarker glutathione-stransferase (GST) and catalase (CAT) by spectrophotometry. To evaluate the quality of hygienic sanitary oysters were used official analytical methods for determination of total coliforms and thermotolerant Most Probable Number - MPN, quantification of mesophilic aerobic bacteria and research Aeromonas spp. For the determination of total Coliforms and E. coli in water samples was used the technique of chromogenic and fluorogenic enzyme substrate ONPG / MUG. At the same time, we interviewed 19 oyster seller using semistructured questionnaire addressing socioeconomic and hygienic sanitary perception issues. The results indicated that in the rainy season and the dry season the activity of glutathione stransferase enzyme was higher in oysters of the Port of Cumbique. As for the oysters of the Port of Pau Laying area, this activity was almost nil during the rainy season. For the catalase enzyme activity the highest levels occurred in oysters of the Port of Cumbique, in both periods (wet and dry), Cais da Raposa in the rainy season, followed by Port of Braga in the dry season. In relation to water, 100% of the samples analyzed in both periods, showed levels of total Coliforms (Ct) and E. coli, 69% of oyster samples showed Ct, 47% thermotolerant coliforms (CT) and 8.33% E. coli in the rainy season. While in the dry season 57% of the oysters showed Ct, CT 39% and 21,42% E. coli. In relation to water, 100% of the samples analyzed in both periods, showed levels of total coliforms (Ct) and E. coli, 69% of oyster samples showed Ct, 47% thermotolerant coliforms (CT) and 8.33% E. coli in the rainy season. Furthermore, 47% of the samples of oysters were contaminated by bacteria of the genus Aeromonas, and all confirmed for A. hydrophila. The counts of heterotrophic bacteria mesophilic ranged from 8 x 102 ± 6 x 102 to 2,8 x 104 ± 4,7 x 104 . As the questionnaires showed that the oyster seller belonged exclusively to men with estimated average of 33 years old, most of it from other Maranhão municipalities that are not part of the São Luís Island. Most have incomplete primary education, are married or in a stable relationship. They have little idea about the hygienic care to be adopted for the marketing of oysters. The data obtained showed that the change of enzymatic activity of glutathione s-transferase in oysters analyzed is indicative of adverse effects of contaminants carted to the water bodies in São Luís Island, especially in the area of the Port of Pau Laying. These oysters are with inadequate higienicossanitária quality for consumption and can be an important vehicle for foodborne pathogens such as A. hydrophila and E. coli. The water of oyster collection sites are within the microbiological standards set by law. The oyster collection mining activity is an important source of income for the community, but is performed without technological resources and artisan method.

Larvicultura de mexilhão Perna perna em sistema de recirculação de água

O cultivo de mexilhões é praticado globalmente e de diferentes formas. Novas tecnologias têm surgido para estabilizar a produção, tornando mais eficiente a produção de formas jovens. Este estudo tem por objetivo avaliar densidade de estocagem e concentração de alimento de larvas de Perna perna em sistema de recirculação de água. O experimento foi realizado em delineamento inteiramente ao acaso em esquema fatorial sendo um fator concentração de alimento com três níveis (1,26 a 2,19 cél.mL¹, 2,36 a 3,94 x 104 cél.mL¹ e 5,03 a 7,29 x 104 cél.mL¹) e o outro fator a densidade larval, também com três níveis (D20 = 20 larvas.mL¹, D80 = 80 larvas.mL¹ e D200 = 200 larvas.mL¹), com 3 repetições de cada tratamento. O alimento foi composto pelas microalgas Isochrysis galbana e Chaetoceros calcitrans na proporção 70 e 30%. A temperatura se manteve em 27,8 ± 0,4°C e salinidade em 35. Quando alimentadas na concentração de 2,36 a 3,94 x 104 cél.mL¹, o rendimento médio de larvas olhadas na densidade de D20, D80 e D200 foi de 21,8% ± 7,45, 27,4% ± 9,91 e 0,80% ± 0,26 respectivamente. As larvas cultivadas nas concentrações 1,26 a 2,19 cél.mL¹ e 7,29 x 104 cél.mL¹ apresentaram menor tamanho médio e menor rendimento do que as cultivadas na concentração 2,36 a 3,94 x 104 cél.mL¹. As primeiras larvas olhadas foram observadas no 14ª dia após a fertilização. Enquanto a maioria das larvas olhadas foram observadas no 16º dia. O tamanho médio das larvas foi de 215,48 µm ± 6,86 na densidade D20, 211,97 µm ± 5,57 em D80 e 187,72 µm ± 7,88 em D200. A diferença de tamanho foi significativa entre D200 e as outras densidades de estocagem, com D200 apresentando tamanho menor. Entre os tratamentos, os melhores resultados foram obtidos em D20 e D80 quando alimentadas na concentração 2,36 a 3,94 x 104 cél.mL¹. Estas condições de cultivo nos permitiram obter de 21 a 27% de larvas com 235µm e aptas ao assentamento no 16º dia de cultivo

Mussel culture is practiced globally and in a variety of ways. New technologies are emerging to help stabilize production by more efficiently rearing seed to past the larval life-stage. This study aims to evaluate Perna perna larvae stocking densities and concentrations of food in a recirculating aquaculture system. The experiment was conducted in a completely randomized and full-factorial design of food concentration at three levels (1.26 to 2.19 cels.mL¹, 2.36 to 3,94x104 cels.mL¹ and 5,03 to 7.29 x 104 cels.mL¹) and the factor of larval density, also at three levels (20 larvae.mL¹ = D20, 80 larvae.mL¹ = D80 and 200 larvae. mL¹ = D200). Diets were composed of the microalgae Isochrysis galbana and Chaetoceros calcitrans at 70 and 30%, respectively. The temperature was maintained at 27.8 ± 0.4 °C and salinity 35. When fed a diet of 2.36 to 3.94 x 104 cells mL¹, the average yield of larvae capable of settlement at stocking densities of D20, D80, and D200 were 21,8 ± 7.45%, 27,4 ± 9,91% and 0,80 ± 0,26 %, respectively. Larvae reared under low and high food concentrations were smaller and less developed than those reared with a diet at 2,36 to 3,94x104 cels.ml-1 . The first eyed larvae were observed on the 14th day after fertilization, while the majority of the larvae became eyed at the 16th day. The average shell length of eyed larvae held at D20, D80, and D200 was 215.48 ± 6.86 µm, 211.97 ± 5.57 µm, and 187.72 ± 7.88 µm, respectively. The size differences between D200 larvae and all other stocking density treatments were significantly smaller. Among treatments evaluated, we found the optimum stocking density for P. perna to be between 20 and 80 larvae.mL-1 when fed at concentration of 2.36 to 3.94 x 104 cels.mL-1. These rearing conditions allowed us to obtain larvae in which 21 to 27 % were 235 µm and capable of setting on the 16th day of culture