Diagnostic performance of a commercial ELISA used as a complementary test for bovine tuberculosis in two bovine herds with different disease status / Desempenho diagnóstico de um ELISA comercial usado como teste complementar para tuberculose bovina em dois rebanhos bovinos com diferentes estágios de controle da doença

Bovine tuberculosis is a worldwide spread zoonotic disease. Intradermal tuberculinizations are the most used diagnostic tests in the world. Serological tests can be an ancillary diagnosis for bovine tuberculosis. The objective of this study was to evaluate the diagnostic performance of the ELISA Mycobacterium Bovis Antibody Test Kit IDEXX ™ in infected herds, which were in different disease control stages. One hundred and twenty animals from two dairy herds of Minas Gerais state, Brazil, were subjected to the ELISA serological test and the comparative cervical tuberculin test (CCT). Diagnostic test parameters were estimated using Bayesian latent class models and concordance between tests estimated by the frequentist approach. The ELISA test presented lower sensitivity than CCT in both herds. Its sensitivity was higher in the herd in sanitation process. Specificity estimates were above 95% in both herds. Kappa index indicated low concordance or even disagreement between tests. According to the results, the ELISA IDEXX should not be used as substitution for CCT. The tests must not be associated in series. Parallel association increased diagnostic sensitivity in the herd which was in the process of sanitation.(AU)

A tuberculose bovina é uma zoonose de distribuição mundial cujos testes mais utilizados para o diagnóstico são as tuberculinizações intradérmicas, simples e compartivas. Contudo, testes sorológicos podem constituir diagnósticos auxiliares. O objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho diagnóstico do teste ELISA Mycobacterium Bovis Antibody Test Kit IDEXX ® em rebanhos bovinos infectados, que se encontravam em diferentes estágios de controle da doença. Cento e vinte animais de dois rebanhos leiteiros provenientes do estado de Minas Geais-Brasil foram submetidos ao ELISA e à tuberculinização cervical compartiva (TCC). Avaliou-se o desempenho dos testes por meio de modelos Bayesianos de classe latente e a concordância entre os eles, por meio de estatística frequentista. Uma maior sensibilidade do teste foi observada no rebanho previamente tuberculinizado. Em ambos os rebanhos o TCC foi mais sensível que o ELISA. Especificidade acima de 95% foi encontrada em ambos os rebanhos. Foram observadas baixa concordância ou mesmo discordância entre os testes. De acordo com os resultados obtidos, o teste ELISA-IDEXX não deve ser utilizado em substituição à TCC, tampouco devem ser associados em série. Houve aumento da sensibilidade quando os testes foram associados em paralelo no rebanho que já se encontrava em processo de saneamento.(AU)

Diagnostic performance of a commercial ELISA used as a complementary test for bovine tuberculosis in two bovine herds with different disease status / Desempenho diagnóstico de um ELISA comercial usado como teste complementar para tuberculose bovina em dois rebanhos bovinos com diferentes estágios de controle da doença

Bovine tuberculosis is a worldwide spread zoonotic disease. Intradermal tuberculinizations are the most used diagnostic tests in the world. Serological tests can be an ancillary diagnosis for bovine tuberculosis. The objective of this study was to evaluate the diagnostic performance of the ELISA Mycobacterium Bovis Antibody Test Kit IDEXX ™ in infected herds, which were in different disease control stages. One hundred and twenty animals from two dairy herds of Minas Gerais state, Brazil, were subjected to the ELISA serological test and the comparative cervical tuberculin test (CCT). Diagnostic test parameters were estimated using Bayesian latent class models and concordance between tests estimated by the frequentist approach. The ELISA test presented lower sensitivity than CCT in both herds. Its sensitivity was higher in the herd in sanitation process. Specificity estimates were above 95% in both herds. Kappa index indicated low concordance or even disagreement between tests. According to the results, the ELISA IDEXX should not be used as substitution for CCT. The tests must not be associated in series. Parallel association increased diagnostic sensitivity in the herd which was in the process of sanitation.(AU)

A tuberculose bovina é uma zoonose de distribuição mundial cujos testes mais utilizados para o diagnóstico são as tuberculinizações intradérmicas, simples e compartivas. Contudo, testes sorológicos podem constituir diagnósticos auxiliares. O objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho diagnóstico do teste ELISA Mycobacterium Bovis Antibody Test Kit IDEXX ® em rebanhos bovinos infectados, que se encontravam em diferentes estágios de controle da doença. Cento e vinte animais de dois rebanhos leiteiros provenientes do estado de Minas Geais-Brasil foram submetidos ao ELISA e à tuberculinização cervical compartiva (TCC). Avaliou-se o desempenho dos testes por meio de modelos Bayesianos de classe latente e a concordância entre os eles, por meio de estatística frequentista. Uma maior sensibilidade do teste foi observada no rebanho previamente tuberculinizado. Em ambos os rebanhos o TCC foi mais sensível que o ELISA. Especificidade acima de 95% foi encontrada em ambos os rebanhos. Foram observadas baixa concordância ou mesmo discordância entre os testes. De acordo com os resultados obtidos, o teste ELISA-IDEXX não deve ser utilizado em substituição à TCC, tampouco devem ser associados em série. Houve aumento da sensibilidade quando os testes foram associados em paralelo no rebanho que já se encontrava em processo de saneamento.(AU)

Somatic cell count in the diagnosis of subclinical mastitis in sheep of different breeds / Contagem de células somáticas para o diagnóstico da mastite subclínica ovina em diferentes raças

The aims of this study were to determine the occurrence of subclinical mastitis in sheep of different breeds and the values for somatic cell count (SCC) in milk for the diagnosis of the disease at lactation and weaning, a fundamental prerequisite for identifying animals in need of control measures. Milk samples were obtained from 1,457 mammary halves of Santa Inês, Texel, Ile de France, and Dorper sheep at two different periods, during the second week of lactation and at weaning. After teats antisepsis, the samples were collected, and identification of the infectious etiology of mastitis and determination of SCC were performed. Microorganisms were identified in 117/762 (15.3%) mammary halves in the second week of lactation and in 86/694 (12.4%) at weaning. Coagulase-negative staphylococci (CoNS) were the etiological agents with the highest incidence alone and in association with other microorganisms, with percentages of 58.1% and 60.6%, respectively. The Santa Inês presented a higher incidence of subclinical mastitis when compared to the other breeds. The cut-off values of SCC for subclinical mastitis were determined at both sampling periods and varied according to stage of lactation, as well breed. These results illustrate the lack of a universal value that can be used for the diagnosis of mastitis and suggests the need for permanent follow-up in herds in order to control the disease.(AU)

Os objetivos do trabalho foram estabelecer a ocorrência da mastite subclínica em ovelhas de diferentes raças e os respectivos valores de triagem da contagem de células somáticas (CCS) no leite para o diagnóstico da doença durante a lactação e ao desmame, um pré-requisito fundamental para a identificação dos animais para o estabelecimento de medidas de controle. As amostras de leite foram obtidas de 1.457 metades mamárias de ovelhas das raças Santa Inês, Texel, Ile de France e Dorper, em dois diferentes períodos, durante a segunda semana de lactação e ao desmame. Após a antissepsia dos tetos, as amostras de leite foram colhidas para identificação da etiologia infecciosa dos casos de mastite e determinação da CCS. Dentre as metades mamárias investigadas, 117/763 (15,3%) apresentaram micro-organismos no leite na segunda semana de lactação e 86/694 (12,4%) apresentaram resultados microbiológicos positivos ao desmame. Estafilococos coagulase-negativos (ECN) foram os agentes etiológicos com maior ocorrência isoladamente e em associação com outros micro-organismos, 58,1% e 60,6%, respectivamente. A raça Santa Inês apresentou maior ocorrência de mastite subclínica, quando comparada às outras raças. Diferentes pontos de corte para CCS foram determinados em ambos os períodos. Os valores das contagens celulares para a triagem da mastite subclínica nas ovelhas variaram de acordo com a fase da lactação em que as amostras foram obtidas, assim como com as raças dos animais, o que denota não existir um valor universal que possa ser usado para o diagnóstico da mastite, sugerindo a necessidade de acompanhamento técnico permanente nos rebanhos para o controle da doença.(AU)

Orientações para o diagnóstico de influenza em suínos / Guidelines for diagnosis of swine influenza

Este trabalho descreve a colheita adequada de amostras, as técnicas/procedimentos disponíveis para o diagnóstico de influenza A em suínos, assim como os resultados e suas respectivas interpretações, para auxiliar médicos veterinários de campo na identificação dessa doença. Em suínos vivos, as amostras adequadas são: secreção nasal, fluido oral e sangue (soro). Para suínos mortos, colher preferencialmente amostras de pulmão com consolidação cranioventral. Secreção nasal e fragmentos de pulmão refrigerado são utilizados para detectar partícula viral viável (isolamento viral - IV) ou ácido nucleico viral (RT-PCR convencional e RT-PCR em tempo real). As amostras não devem ser congeladas, pois o vírus é inativado a -20°C. A caracterização molecular dos isolados é feita pela análise filogenética obtida pelo sequenciamento de DNA. O soro é utilizado para a detecção de anticorpos (Acs) por meio do teste da inibição da hemaglutinação e ELISA. O fluido oral pode ser utilizado para detecção de anticorpo (ELISA) ou de vírus. Fragmentos de pulmão fixados em formol a 10% são examinados microscopicamente para identificar pneumonia broncointersticial e para detecção de antígeno viral pela imuno-histoquímica (IHQ). Para o sucesso do diagnóstico, as amostras devem ser colhidas de suínos que estão preferencialmente na fase aguda da doença, para aumentar as chances de detecção viral. As melhores opções para o diagnóstico de influenza A em suínos vivos são RT-PCR e isolamento viral de amostras de swab nasal ou fluido oral. Pulmão para análise por RT-PCR, isolamento viral ou IHQ é a amostra de escolha em suínos mortos. Testes sorológicos têm valor diagnóstico limitado e são utilizados apenas para determinar o estado imune do rebanho, não indicando doença clínica, pois os Acs são detectados 7-10 dias pós-infecção (fase subaguda). O diagnóstico de influenza é importante para avaliar o envolvimento desse agente no complexo de doença respiratória suína. Além disso, o isolamento do vírus influenza é essencial para o monitoramento dos principais subtipos circulantes em uma determinada região ou país, assim como para a detecção de novos rearranjos virais, já que influenza é considerada uma zoonose.(AU)

This article is intended to describe the adequate sample collection, the laboratory procedures/techniques, the expected results and their interpretation for diagnosis of influenza infection in swine, serving as a support for field veterinarians. In live pigs, the samples to be taken are nasal secretions, oral fluids and blood. For dead pigs, preference should be given to samples of cranioventral lung consolidation. Nasal discharge and chilled lung fragments are used for detection of virus (virus isolation - VI) or viral nucleic acids (conventional RT-PCR and real-time RT-PCR). Samples should not be frozen, because the virus is inactivated at -20°C. Molecular characterization of isolates is performed by phylogenetic analysis of gene sequences obtained by DNA sequencing. Serum is used for the detection of antibodies using hemagglutination inhibition (HI) test and ELISA. Oral fluid may be used for either antibody (ELISA) or viral detection. Fragments of lung fixed in 10% formaldehyde are used for histopathological analysis to identify bronchointerstitial pneumonia, and for immunohistochemistry (IHC) for antigens. For a successful diagnosis, sampling should be preferably performed in the acute phase of the disease to improve chances of virus detection. The best options to perform the diagnosis of influenza A in a swine herd are RT-PCR and VI from nasal swabs or oral fluid in live pigs and/or lung tissue for RT-PCR, VI or IHC in dead pigs. Serological tests are of very limited diagnostic value and are useful only to determine the immune status of the herd, not indicating clinical disease, because antibodies are detected after 7-10 days post infection (subacute phase). The diagnosis of influenza is important to evaluate the involvement of this agent in the complex of respiratory diseases in pigs. Furthermore, the isolation of influenza virus is essential for monitoring the main subtypes circulating in a given region or country, as well as for the detection of potential new viral reassortants, because influenza is considered a zoonosis.(AU)

NOVAS ESTRATÉGIAS PARA O AUMENTO DA EFICÁCIA EM PROGRAMAS DE ERRADICAÇÃO DE STREPTOCOCCUS AGALACTIAE EM REBANHOS BOVINOS LEITEIROS

O objetivo deste estudo foi avaliar novas estratégias de identificação e tratamento de mastite subclínica causada por Streptococcus agalactiae. Dois estudos foram conduzidos para alcançar os objetivos propostos: 1) um ensaio clínico randomizado, para avaliar a eficácia do tratamento de S. agalactiae com cloxacilina intramamária (CLOXIMM), cefquinoma intramamária (CEFIMM) e cefquinoma intramuscular (CEFIM); e avaliar a não-inferioridade da CLOXIMM em relação a CEFIMM. E, 2) um estudo de acurácia diagnóstica, para estimar a acurácia do Somaticell, California Mastitis Test (CMT) e do exame microbiológico do leite composto (leite dos quatro quartos) na detecção de quartos e animais infectados com S. agalactiae. Os resultados indicaram que quartos tratados com CEFIM apresentaram menor taxa de cura bacteriológica (55%) do que aqueles tratados com CLOXIMM (86%) ou CEFIMM (98%). A diferença na proporção de cura bacteriológica entre CEFIMM e CLOXIMM foi de 0,121 (intervalo de confiança de 95%: 0,056 - 0,184). A CLOXIMM foi considerada não inferior a CEFIMM quando margens de não inferioridade de 0,20 e 0,25 foram utilizadas. Contudo, a determinação da não inferioridade foi inconclusiva para margens de 0,10 e 0,15. A cultura do leite composto apresentou acurácia diagnóstica satisfatória (95,7%) quando comparada a cultura individual por quarto. Para identificação dos quartos infectados com S. agalactiae, o ponto de corte considerado mais adequado foi de 205.000 células/mL para o teste Somaticell e escore 1 para o teste CMT. O teste Somaticell foi considerado mais acurado para uso em programas de erradicação, pois apresentou maior sensibilidade e menor proporção de resultados falso-negativos. Resultados deste estudo podem ser aplicados diretamente em nível de campo, para aumentar a eficiência de programas de erradicação de S. agalactiae.

The objective of the present study was to assess new strategies to identify and treat Streptococcus agalactiae subclinical mastitis. Two studies were conducted to achieve the proposed objectives: 1) a randomized clinical trial, to assess the efficacy of intramammary cloxacillin (CLOXIMM), intramammary cefquinome (CEFIMM), and intramuscular cefquinome (CEFIM), to treat S. agalactiae intramammary infections (IMI); and assess whether CLOXIMM was non-inferior to CEFIMM to treat S. agalactiae IMI. And, 2) a diagnostic accuracy study, to estimate the accuracy of the Somaticell, California Mastitis Test (CMT), and the composite milk microbiological examination of milk to detect S. agalactiae IMI. Results indicated that the bacteriological cure rate was lower for quarters treated with CEFIM (55%), as compared with CLOXIMM (86%) or CEFIMM (98%). The bacteriological cure difference between CEFIMM and CLOXIMM was 0.121 (95% confidence interval: 0.056 - 0.184). The CLOXIMM was considered non-inferior to CEFIMM when the non-inferiority margins of 0.20 and 0.25 were considered. Nevertheless, determination of non-inferiority was inconclusive for margins of 0.10 and 0.15. Microbiological examination of composite milk was of high accuracy (95.7%), as compared with microbiological examination of quarter milk samples. The thresholds of 205,000 cells/mL for the Somaticell and of score 1 for the CMT can be considered the most appropriate for diagnosing S. agalactiae IMI. The higher sensitivity and lower proportion of false-negative results are characteristics that can justify the use of the Somaticell in S. agalactiae eradication programs, as an alternative to the CMT. Results of this study can be directly applied at the farm level, to improve the efficiency of S. agalactiae eradication programs.

Comparação de métodos diagnósticos para dermatofitose em animais de companhia

O objetivo deste estudo foi comparar os resultados de três exames de diagnóstico para dermatofitose em 71 cães e cinco gatos com lesões de pele: microscopia direta, cultura de fungos e fluorescência à lâmpada de Wood. A concordância entre os três testes foi avaliada pela estimativa do coeficiente Kappa. A sensibilidade e a especificidade dos testes de microscopia direta e fluorescência foram calculadas com base nos resultados das culturas de fungos. Dos 76 cães e gatos avaliados, 18 (23,6%) tiveram culturas positivas. As espécies de fungos isoladas foram Microsporum canis (88,8%), Microsporum gypseum (5,5%) e Trichophyton mentagrophytes variedade mentagrophytes (5,5%). A estimativa dos coeficientes Kappa indicou concordância fraca entre os três métodos diagnósticos. A sensibilidade da microscopia direta e fluorescência em lâmpada de Wood foram respectivamente 64,71% e 41,18% e especificidade de 27,12% e 66,10%, respectivamente. Considerando as conseqüências dos resultados falso-positivos e falso-negativos para o diagnóstico das dermatofitoses, é recomendado não usar esses três testes separadamente, mas combiná-los para obter resultados mais confiáveis.

Diagnosis of histoplasmosis

Endemic mycoses can be challenging to diagnose and accurate interpretation of laboratory data is important to ensure the most appropriate treatment for the patients. Although the definitive diagnosis of histoplasmosis (HP), one of the most frequent endemic mycoses in the world, is achieved by direct diagnosis performed by micro and/or macroscopic observation of Histoplasma capsulatum (H. capsulatum), serologic evidence of this fungal infection is important since the isolation of the etiologic agents is time-consuming and insensitive. A variety of immunoassays have been used to detect specific antibodies to H. capsulatum. The most applied technique for antibody detection is immunodiffusion with sensitivity between 70 to 100 % and specificity of 100%, depending on the clinical form. The complement fixation (CF) test, a methodology extensively used on the past, is less specific (60 to 90%). Detecting fungal antigens by immunoassays is valuable in immunocompromised individuals where such assays achieve positive predictive values of 96-98%. Most current tests in diagnostic laboratories still utilize unpurified antigenic complexes from either whole fungal cells or their culture filtrates. Emphasis has shifted, however, to clinical immunoassays using highly purified and well-characterized antigens including recombinant antigens. In this paper, we review the current conventional diagnostic tools, such as complement fixation and immunodiffusion, outline the development of novel diagnostic reagents and methods, and discuss their relative merits and disadvantages to the immunodiagnostic of this mycosis.

As micoses endêmicas podem ser um desafio com relação ao diagnóstico e a interpretação acurada dos dados laboratoriais é importante para garantir um tratamento mais apropriado para os pacientes. Embora o diagnóstico definitivo da histoplasmose (HP), uma das micoses endêmicas no mundo, seja determinado pelo exame direto com a observação de micro e macroconídeos do Histoplasma capsulatum (H. capsulatum), evidências sorológicas da infecção fúngica se torna importante uma vez que o isolamento dos agentes etiológicos é um procedimento demorado e com baixa sensibilidade. Uma variedade de imunoensaios tem sido usada para detectar anticorpos específicos contra o H. capsulatum. A técnica mais aplicada para a detecção de anticorpos é a imunodifusão, apresentando uma sensibilidade entre 70 a 100% e especificidade de dependendo da forma clínica. A fixação de complemento (CF), uma metodologia que foi extensivamente usada no passado, apresenta uma menor especificidade (60 to 90%). A detecção de antígenos fúngicos pelos imunoensaios é valiosa para indivíduos imunocomprometidos onde cada ensaio garante valores preditivos positivos variando de 96-98%. A maioria dos testes atual ainda utiliza antígenos complexos não-purificados obtidos de parede celular fúngica ou filtrados de cultura. Contudo, importância tem sido dada a imunoensaios clínicos utilizando antígenos altamente purificados e caracterizados, incluindo antígenos recombinantes. Neste manuscrito, nós revisamos as ferramentas atuais utilizadas no diagnóstico, como fixação de complemento e imunodifusão, sumarizando o desenvolvimento de novas tecnologias, reagentes e métodos, e discutiremos aqui os seus méritos relativos e desvantagens no imunodiagnóstico desta micose.

Somatic cell count in the diagnosis of subclinical mastitis in sheep of different breeds / Contagem de células somáticas para o diagnóstico da mastite subclínica ovina em diferentes raças

The aims of this study were to determine the occurrence of subclinical mastitis in sheep of different breeds and the values for somatic cell count (SCC) in milk for the diagnosis of the disease at lactation and weaning, a fundamental prerequisite for identifying animals in need of control measures. Milk samples were obtained from 1,457 mammary halves of Santa Inês, Texel, Ile de France, and Dorper sheep at two different periods, during the second week of lactation and at weaning. After teats antisepsis, the samples were collected, and identification of the infectious etiology of mastitis and determination of SCC were performed. Microorganisms were identified in 117/762 (15.3%) mammary halves in the second week of lactation and in 86/694 (12.4%) at weaning. Coagulase-negative staphylococci (CoNS) were the etiological agents with the highest incidence alone and in association with other microorganisms, with percentages of 58.1% and 60.6%, respectively. The Santa Inês presented a higher incidence of subclinical mastitis when compared to the other breeds. The cut-off values of SCC for subclinical mastitis were determined at both sampling periods and varied according to stage of lactation, as well breed. These results illustrate the lack of a universal value that can be used for the diagnosis of mastitis and suggests the need for permanent follow-up in herds in order to control the disease.

Os objetivos do trabalho foram estabelecer a ocorrência da mastite subclínica em ovelhas de diferentes raças e os respectivos valores de triagem da contagem de células somáticas (CCS) no leite para o diagnóstico da doença durante a lactação e ao desmame, um pré-requisito fundamental para a identificação dos animais para o estabelecimento de medidas de controle. As amostras de leite foram obtidas de 1.457 metades mamárias de ovelhas das raças Santa Inês, Texel, Ile de France e Dorper, em dois diferentes períodos, durante a segunda semana de lactação e ao desmame. Após a antissepsia dos tetos, as amostras de leite foram colhidas para identificação da etiologia infecciosa dos casos de mastite e determinação da CCS. Dentre as metades mamárias investigadas, 117/763 (15,3%) apresentaram micro-organismos no leite na segunda semana de lactação e 86/694 (12,4%) apresentaram resultados microbiológicos positivos ao desmame. Estafilococos coagulase-negativos (ECN) foram os agentes etiológicos com maior ocorrência isoladamente e em associação com outros micro-organismos, 58,1% e 60,6%, respectivamente. A raça Santa Inês apresentou maior ocorrência de mastite subclínica, quando comparada às outras raças. Diferentes pontos de corte para CCS foram determinados em ambos os períodos. Os valores das contagens celulares para a triagem da mastite subclínica nas ovelhas variaram de acordo com a fase da lactação em que as amostras foram obtidas, assim como com as raças dos animais, o que denota não existir um valor universal que possa ser usado para o diagnóstico da mastite, sugerindo a necessidade de acompanhamento técnico permanente nos rebanhos para o controle da doença.

COMPARAÇÃO DE MÉTODOS DIAGNÓSTICOS PARA DERMATOFITOSE EM ANIMAIS DE COMPANHIA

O objetivo deste estudo foi comparar os resultados de três exames de diagnóstico para dermatofitose em 71 cães e cinco gatos com lesões de pele: microscopia direta, cultura de fungos e fluorescência à lâmpada de Wood. A concordância entre os três testes foi avaliada pela estimativa do coeficiente Kappa. A sensibilidade e a especificidade dos testes de microscopia direta e fluorescência foram calculadas com base nos resultados das culturas de fungos. Dos 76 cães e gatos avaliados, 18 (23,6%) tiveram culturas positivas. As espécies de fungos isoladas foram Microsporum canis (88,8%), Microsporum gypseum (5,5%) e Trichophyton mentagrophytes variedade mentagrophytes (5,5%). A estimativa dos coeficientes Kappa indicou concordância fraca entre os três métodos diagnósticos. A sensibilidade da microscopia direta e fluorescência em lâmpada de Wood foram respectivamente 64,71% e 41,18% e especificidade de 27,12% e 66,10%, respectivamente. Considerando as conseqüências dos resultados falso-positivos e falso-negativos para o diagnóstico das dermatofitoses, é recomendado não usar esses três testes separadamente, mas combiná-los para obter resultados mais confiáveis.