Intoxicação de cães por venenos de anuros: prevalência, danos aos animais e protocolos clínicos / Dog poisoning by anuran poisons: prevalence, animal damage and clinical protocols

Indivíduos da família Bufonidae são comumente associados a casos de intoxicação de cães após contato com o veneno secretado nas glândulas presentes no tegumento, reforçando a importância de tratamentos efetivos após esta interação. Neste trabalho apresentamos uma revisão sobre casos de intoxicação de cães por venenos de anuros, relacionando os principais sintomas nos cães e os protocolos clínicos utilizados. Realizamos uma busca por artigos que relatem casos de intoxicação de cães por anuros nos repositórios Google Scholar, Scielo e PubMed. Utilizamos palavras-chave nos idiomas português e inglês. Um total de 430 artigos foram encontrados, sendo apenas 17 de acordo com a proposta da pesquisa. Os registros encontrados foram para o Brasil, Austrália e Estados Unidos. As espécies de anuros reportadas na literatura foram exclusivamente as do gênero Rhinella. O maior número dos casos registrados no Brasil ocorreu em ambiente urbano. Os principais sintomas descritos após intoxicação de cães foram salivação em excesso, convulsão e vômito. Óbitos também foram encontrados durante a busca. Principais protocolos para o tratamento após envenenamento foram lavagem da cavidade oral do cão, e administração de atropina, diazepam e fluidoterapia. Foi observado que há influência do tamanho dos cães na severidade após intoxicação, sendo os de pequeno porte mais suscetíveis a quadros letais. Sugerimos, por conta do baixo número de registros, que possivelmente a quantidade de casos acerca desta temática seja subestimado. Neste estudo evidenciamos que os protocolos utilizados para o cuidado dos cães intoxicados não são realizados de forma padrão, alterando de acordo com o quadro clínico apresentado.

Individuals of the Bufonidae family are commonly associated with cases of poisoning in dogs after contact with the venom secreted in glands present in the tegument, reinforcing the importance of effective treatments after this interaction. In this paper, we present a review of cases of poisoning in dogs by anuran venom, relating the main symptoms in dogs and the clinical protocols used. We performed a search for articles reporting cases of anuran poisoning in dogs in the Google Scholar, Scielo, and PubMed repositories. We used keywords in Portuguese and English. A total of 430 articles were found and only 17 of which were in accordance with the research proposal. The records found were for Brazil, Australia, and the United States. The species of anurans reported in the literature were exclusively those of the genus Rhinella. The greatest number of cases registered in Brazil occurred in an urban environment. The main symptoms described after intoxication in dogs were excessive salivation, convulsion, and vomiting. Deaths were also found during the search. The main protocols for treatment after poisoning were washing the dog's oral cavity, and administration of atropine, diazepam, and fluid therapy. It was observed that the size of the dogs influences the severity after intoxication, with small dogs being more susceptible to lethal conditions. Due to the low number of records, we suggest that the number of cases on this topic is possibly underestimated. In this study, we showed that the protocols used for the care of intoxicated dogs are not performed in a standard way, changing according to the clinical picture presented.

Peixes peçonhentos do baixo Tietê / Venomous fish from baixo Tietê / Pescado venenoso del bajo Tietê

O rio Tietê faz parte de uma das principais hidrovias do Brasil, a hidrovia Paraná ­ Tietê, sendo grande fonte de subsistência para os pescadores que possuem risco na atividade devido peixes que podem causar acidentes traumatizantes e envenenamento por inoculação de veneno por meio de algum aparato ósseo, como ferrão. A arraia fluvial possui ferrão na cauda e causa ferimento de grande importância podendo afastar o pescador de suas atividades por um longo período, devido à demora da cicatrização do ferimento.

The Tietê River is part of one of the main waterways in Brazil, the Paraná ­ Tietê waterway, being a great source of livelihood for fishermen who are at risk in the activity due to fishes that can cause traumatizing accidents and poisoning by inoculation of poison through some bone apparatus, like stinger. The river stingray has a stinger in its tail and causes an injury of great importance, which can keep the fisherman away from his activities for a long period, due to the delay in healing the wound.

El río Tietê forma parte de una de las principales vías fluviales de Brasil, la vía fluvial Paraná - Tietê, una gran fuente de sustento para los pescadores que se encuentran en riesgo en la actividad debido a pescados que pueden causar accidentes traumatizantes y envenenamiento por inoculación de veneno a través de algún aparato óseo, como aguijón. La mantarraya del río tiene un aguijón en la cola y provoca una lesión de gran importancia, que puede alejar al pescador de sus actividades por un largo período, debido al retraso en la cicatrización de la herida.

Evaluation of mesenchymal cells and dapsone for the treatment of dermonecrotic wounds caused by Loxosceles laeta venom in rabbits / Avaliação de células mesenquimais e dapsona para o tratamento de feridas dermonecróticas causadas pelo veneno de Loxosceles laeta em coelhos

This study aimed to evaluate the efficacy of mesenchymal stem cells (MSC), alone or associated with dapsone (DAP), in treating dermonecrotic wounds caused by Loxosceles laeta venom. Twenty-five male rabbits were distributed into five groups. Negative control received ultrapure water (C-), whilst all other groups were injected with 20 μg of L. laeta venom. After 4 hours, each group received one of the following treatments: PBS (C+), DAP, MSC, and DAP+MSC. Animals were evaluated daily and photographic records made for analysis of wound area. Twelve days after, animals were euthanized and skin samples removed for histological analysis. We observed that DAP showed the best percentage of wound contraction at day 3. In the treatments using MSCs, a negative value of wound contraction was observed for the isolated MSCs, as well as a lower contraction value for the association of the MSC + DAP when compared to PBS, probably, by the increase in initial infammation after the application of stem cells, due to the fact that MSCs secrete a broad spectrum of bioactive molecules such as cytokines and growth factors that favor regeneration. Histologically, it was observed that animals of C+ showed extensive areas of necrosis, ulcers, neutrophilic infiltrate, and mineralization. Collagen deposition showed increase in MSC+DAP treatment, however vascularization remained unchanged. This is the first report using MSC and MSC+DAP as a treatment for cutaneous loxoscelism and more studies are needed to determine its use as an alternative therapy for dermonecrotic lesions caused by Loxosceles spider.

Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia das células-tronco mesenquimais (CTMs), isoladas ou associadas à dapsona (DAP), no tratamento de feridas dermonecróticas causadas pelo veneno de Loxosceles laeta. Vinte e cinco coelhos machos foram distribuídos em cinco grupos. O controle negativo recebeu água ultrapura (C-), enquanto todos os outros grupos foram injetados com 20 μg de veneno de L. laeta. Após 4 horas, cada grupo recebeu um dos seguintes tratamentos: PBS (C+), DAP, CTMs e DAP + CTMs. Os animais foram avaliados diariamente durante 12 dias, e feitos registros fotográficos para análise da ferida e no 12º dia, foram eutanasiados e, retiradas amostras de pele para análise histológica. Observou-se que a DAP apresentou o melhor percentual de contração da ferida no terceiro dia. Nos tratamentos com CTMs, observou-se uma contração negativa da ferida tanto para as CTMs isoladas, bem como a associação CTMs + DAP em relação ao PBS, possivelmente, pelo aumento da infamação inicial após a aplicação de células-tronco. Isso é devido ao fato de que as CTMs secretam um amplo espectro de moléculas bioativas como citocinas e fatores de crescimento que favorecem a regeneração. Histologicamente, observou-se que os animais de C+ apresentaram extensas áreas de necrose, úlceras, infiltrado neutrofílico, além de mineralização. Houve aumento de deposição de colágeno no tratamento CTMs + DAP, no entanto, a vascularização permaneceu inalterada. Este é o primeiro relato usando CTMs e CTMs + DAP como tratamento para loxoscelismo cutâneo e mais estudos são necessários para determinar seu uso como terapia alternativa para lesões demonecróticas causadas pela aranha Loxosceles.

Putative poison gland in the thorny catfish Acanthodoras spinosissimus (Siluriformes: Doradidae) / Suposta glândula de veneno no bagre rebeca Acanthodoras spinosissimus (Siluriformes: Doradidae)

Acanthodoras is the only genus of catfish known to secrete a conspicuous and abundant milky-looking substance through an axillary pore located just below the base of the posterior cleithral process. Despite this remarkable feature, there is no published information on the anatomical structures that produce the secretion and its possible biological/ecological functions. Dissection and histological analysis of preserved specimens of A. spinosissimus revealed the presence of a saccular axillary gland with large, binuclear secretory cells, similar to those found in other poisonous catfish. Secretory cells near the lumen appear to lose nuclei and become filled with secretory products, possibly with proteinaceous elements, as indicated by their eosinophilic appearance. As far as we know, the saccular morphology of the gland appears to constitute a unique characteristic of Acanthodoras among Doradidae catfishes. Further studies are necessary to determine the chemical composition of the secretion, as well as its possible uses by the catfish in its natural environment.

Acanthodoras é o único gênero de bagre conhecido por secretar uma substância de aparência leitosa conspícua e abundante através de um poro axilar localizado logo abaixo da base do processo cleitral posterior. Apesar dessa característica marcante, não há informações publicadas sobre as estruturas anatômicas que produzem a secreção, nem sobre suas possíveis funções biológicas/ecológicas. A dissecção e análise histológica de espécimes preservados de A. spinosissimus revelaram a presença de uma glândula axilar sacular com células secretoras binucleares, semelhantes às encontradas em outros bagres venenosos. As células secretoras próximas ao lúmen parecem perder os núcleos e são preenchidas com produtos secretores, possivelmente com elementos proteicos, conforme indicado por sua aparência eosinofílica. Até onde sabemos, a morfologia sacular da glândula parece constituir uma característica única de Acanthodoras entre os bagres Doradidae. Mais estudos são necessários para determinar a composição química da secreção, bem como seus possíveis usos pelo bagre em seu ambiente natural.

Putative poison gland in the thorny catfish Acanthodoras spinosissimus (Siluriformes: Doradidae)

ABSTRACT Acanthodoras is the only genus of catfish known to secrete a conspicuous and abundant milky-looking substance through an axillary pore located just below the base of the posterior cleithral process. Despite this remarkable feature, there is no published information on the anatomical structures that produce the secretion and its possible biological/ecological functions. Dissection and histological analysis of preserved specimens of A. spinosissimus revealed the presence of a saccular axillary gland with large, binuclear secretory cells, similar to those found in other poisonous catfish. Secretory cells near the lumen appear to lose nuclei and become filled with secretory products, possibly with proteinaceous elements, as indicated by their eosinophilic appearance. As far as we know, the saccular morphology of the gland appears to constitute a unique characteristic of Acanthodoras among Doradidae catfishes. Further studies are necessary to determine the chemical composition of the secretion, as well as its possible uses by the catfish in its natural environment.

RESUMO Acanthodoras é o único gênero de bagre conhecido por secretar uma substância de aparência leitosa conspícua e abundante através de um poro axilar localizado logo abaixo da base do processo cleitral posterior. Apesar dessa característica marcante, não há informações publicadas sobre as estruturas anatômicas que produzem a secreção, nem sobre suas possíveis funções biológicas/ecológicas. A dissecção e análise histológica de espécimes preservados de A. spinosissimus revelaram a presença de uma glândula axilar sacular com células secretoras binucleares, semelhantes às encontradas em outros bagres venenosos. As células secretoras próximas ao lúmen parecem perder os núcleos e são preenchidas com produtos secretores, possivelmente com elementos proteicos, conforme indicado por sua aparência eosinofílica. Até onde sabemos, a morfologia sacular da glândula parece constituir uma característica única de Acanthodoras entre os bagres Doradidae. Mais estudos são necessários para determinar a composição química da secreção, bem como seus possíveis usos pelo bagre em seu ambiente natural.

Putative poison gland in the thorny catfish Acanthodoras spinosissimus (Siluriformes: Doradidae) / Suposta glândula de veneno no bagre rebeca Acanthodoras spinosissimus (Siluriformes: Doradidae)

Acanthodoras is the only genus of catfish known to secrete a conspicuous and abundant milky-looking substance through an axillary pore located just below the base of the posterior cleithral process. Despite this remarkable feature, there is no published information on the anatomical structures that produce the secretion and its possible biological/ecological functions. Dissection and histological analysis of preserved specimens of A. spinosissimus revealed the presence of a saccular axillary gland with large, binuclear secretory cells, similar to those found in other poisonous catfish. Secretory cells near the lumen appear to lose nuclei and become filled with secretory products, possibly with proteinaceous elements, as indicated by their eosinophilic appearance. As far as we know, the saccular morphology of the gland appears to constitute a unique characteristic of Acanthodoras among Doradidae catfishes. Further studies are necessary to determine the chemical composition of the secretion, as well as its possible uses by the catfish in its natural environment.(AU)

Acanthodoras é o único gênero de bagre conhecido por secretar uma substância de aparência leitosa conspícua e abundante através de um poro axilar localizado logo abaixo da base do processo cleitral posterior. Apesar dessa característica marcante, não há informações publicadas sobre as estruturas anatômicas que produzem a secreção, nem sobre suas possíveis funções biológicas/ecológicas. A dissecção e análise histológica de espécimes preservados de A. spinosissimus revelaram a presença de uma glândula axilar sacular com células secretoras binucleares, semelhantes às encontradas em outros bagres venenosos. As células secretoras próximas ao lúmen parecem perder os núcleos e são preenchidas com produtos secretores, possivelmente com elementos proteicos, conforme indicado por sua aparência eosinofílica. Até onde sabemos, a morfologia sacular da glândula parece constituir uma característica única de Acanthodoras entre os bagres Doradidae. Mais estudos são necessários para determinar a composição química da secreção, bem como seus possíveis usos pelo bagre em seu ambiente natural.(AU)

Antioxidant, genotoxic, antigenotoxic, and antineoplastic activities of apitoxin produced by Apis mellifera in Northeast, Brazil / Atividades antioxidantes, genotóxicas, antigenotóxicas e antineoplásicas da apitoxina produzida por Apis mellifera no Nordeste do Brasil

The objective was to evaluate the in vitro antioxidant, genotoxic, antigenotoxic, and antineoplastic activities of apitoxin produced by the bee Apis mellifera. The antioxidant activity of the apitoxin solution was evaluated using the DPPH (2,2-diphenyl-1-picrilhydrazyl) method. Genotoxic potential of apitoxin was analyzed by comparing the mean DNA damage indices (idDNA) of L929 strain fibroblasts exposed to hydrogen peroxide (H2O2 - genotoxic substance), distilled water, or apitoxin. The antigenotoxic effect of apitoxin was analyzed by assessing the percentage decrease in H2O2-induced genotoxicity in L929 fibroblasts co-treated with three concentrations of the aqueous apitoxin solution and subjected to comet assay. In vitro antineoplastic activity in human tumor cell lines of prostate adenocarcinoma (PC3), hepatocellular carcinoma (HEPGE2), melanoma (MAD-MB435), and astrocytoma (SNB19), were verified by MTT [3- (4) bromide colorimetric method, 5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium]. Apitoxin had no genotoxic effect on L929 cells at concentrations of 30, 10, and 5 µg/mL after 24 hours of exposure. This effect was only evident at 50 µg/mL. Apitoxin promoted a significant reduction in DNA damage index (idDNA) at all concentrations tested. At 30 µg/mL, apitoxin attenuated the genotoxic effects induced by H2O2. Apitoxin also demonstrated in vitro antineoplastic potential, since the cytotoxic effect was observed at concentrations of 50 µg/mL and 25 µg/mL, with significant reduction in viability percentage of PC3 tumor cell lines, HEPGE2, MAD-MB435, and SNB19. The high antioxidant activity associated with the absence of genotoxic effect and the genoprotective and antineoplastic effect demonstrated by apitoxin here provide indications of apitoxins therapeutic potential.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar as atividades antioxidantes, genotóxicas, antigenotóxicas e antineoplásicas in vitro da apitoxina produzida pela abelha Apis mellifera. A atividade antioxidante da solução da apitoxina foi avaliada pelo método DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazil). O potencial genotóxico da apitoxina foi analisado através dos índices médios de dano ao DNA (idDNA) dos fibroblastos da linhagem L929 expostos à peróxido de hidrogênio (H2O2 - substância genotóxica), água destilada ou apitoxina. O efeito antigenotóxico da apitoxina foi analisado através da avaliação da diminuição percentual na genotoxicidade induzida por H2O2 nos fibroblastos L929 co-tratados com três concentrações da solução aquosa de apitoxina e submetidos ao ensaio cometa. A atividade antineoplásica in vitro em linhagens celulares tumorais humanas de adenocarcinoma da próstata (PC3), carcinoma hepatocelular (HEPGE2), melanoma (MAD-MB435) e astrocitoma (SNB19), foram verificadas pelo método colorimétrico do brometo de MTT [3- (4), 5-dimetiltiazol -2-il) -2,5-difeniltetrazólio]. A apitoxina não teve efeito genotóxico nas células L929 nas concentrações de 30, 10 e 5 µg / mL após 24 horas de exposição. Este efeito foi apenas evidente a 50 µg / mL. A apitoxina promoveu uma redução significativa no índice de danos ao DNA (idDNA) em todas as concentrações testadas. A 30 µg / mL, a apitoxina atenuou os efeitos genotóxicos induzidos por H2O2. A apitoxina também demonstrou potencial antineoplásico in vitro, uma vez que o efeito citotóxico foi observado em concentrações de 50 µg / mL e 25 µg / mL, com redução significativa na porcentagem de viabilidade das linhagens celulares de PC3, HEPGE2, MAD-MB435 e SNB19. A alta atividade antioxidante associada à ausência de efeito genotóxico e o efeito genoprotetor e antineoplásico demonstrado pela apitoxina aqui fornecem indicações do potencial terapêutico da apitoxina.(AU)

Melittin-induced metabolic changes on the Madin-Darby Bovine Kidney cell line / [Mudanças metabólicas induzidas por melitina em células da linhagem Madin-Darby Bovine Kidney]

In this study, the toxic effects of melittin on Madin-Darby Bovine Kidney cells (MDBK) were analyzed with respect to mitochondrial functionality by reduction of MTT and flow cytometry, apoptosis potential, necrosis, oxygen reactive species (ROS) production, lipid peroxidation, and DNA fragmentation using flow cytometry and cell membrane destabilization by confocal microscopy. The toxicity presented dose-dependent characteristics and mitochondrial activity was inhibited by up to 78.24 ±3.59% (P<0.01, n = 6) in MDBK cells exposed to melittin (10µg/mL). Flow cytometry analysis revealed that melittin at 2µg/mL had the highest necrosis rate (P<0.05) for the cells. The lipoperoxidation of the membranes was also higher at 2µg/mL of melittin (P<0.05), which was further confirmed by the microphotographs obtained by confocal microscopy. The highest ROS production occurred when the cells were exposed to 2.5µg/mL melittin (P<0.05), and this concentration also increased DNA fragmentation (P<0.05). There was a significative and positive correlation between the lipoperoxidation of membranes with ROS (R=0.4158), mitochondrial functionality (R=0.4149), and apoptosis (R=0.4978). Thus, the oxidative stress generated by melittin culminates in the elevation of intracellular ROS that initiates a cascade of toxic events in MDBK cells.(AU)

Neste estudo, os efeitos tóxicos da melitina em células Madin-Darby Bovine Kidney (MDBK) foram analisados quanto à funcionalidade mitocondrial, por redução de MTT e citometria de fluxo, potencial de apoptose, necrose, produção de espécies reativas de oxigênio (ROS), peroxidação lipídica e fragmentação de DNA, utilizando-se citometria de fluxo e desestabilização da membrana celular, por microscopia confocal. A toxicidade apresentou características dose-dependentes e a atividade mitocondrial foi inibida até 78,24±3,59% (P<0,01, n = 6) em células MDBK expostas à melitina (10µg/mL). Análises por citometria de fluxo revelaram que a melitina a 2µg/mL apresentou o maior índice necrótico celular (P<0,05). A maior lipoperoxidação de membranas também foi na concentração de 2µg/mL de melitina (P<0,05), o que foi posteriormente confirmado por microscopia confocal. A maior produção de ROS aconteceu quando as células foram expostas a 2,5µg/mL de melitina (P<0,05), e essa concentração também aumentou a fragmentação de DNA (P<0,05). Houve uma significativa correlação positiva entre a lipoperoxidação de membranas e a produção de ROS (R=0,4158), funcionalidade mitocondrial (R=0,4149) e apoptose (R=0,4978). Portanto, o estresse oxidativo gerado pela melitina culminou na elevação de ROS intracelular, que inicia uma cascata de eventos tóxicos nas células MDBK.(AU)

Antimicrobial effect of bothropstoxin-i in broilers / Atividade antimicrobiana da bothropstoxin-i em frangos de corte

Bacterial resistance is a sanitary issue explained by indiscriminate use of nonprescription drugs, and antimicrobial use in food production for growth promotion. Bothropstoxin-I (BthTx-I) is a phospholipase A2 (PLA2) from Bothrops jararacussu venom, which has a known antimicrobial effect. The goal of this study was the unprecedented evaluation of in vivo antimicrobial activity of BthTx-I in broilers. Microbiological, biochemical, and histological parameters were determined using 84 21-day old broilers that were kept in cages with four birds each at a density of 625 cm2/broiler. The experiment was randomized by three treatments with seven repetitions of four broilers each that lasted seven days. The treatments were: 1) bacitracin zinc diet; 2) PLA2-BthTx-I; 3) without additives. The data obtained from the studied variables was subjected to analysis of variance and an F-test at the 5% significance level. Averages of each variable in each treatment were compared by Tukey’s test. Broiler bacterial cloacal counts showed that BthTx-I decreased the microbial population without reducing body weight, intestinal morphology, or liver or kidney histopathological damage. The toxin showed in vivo activity, being an alternative for better performance in the production of broiler chickens, because it acted by decreasing the microbial load of potentially pathogenic bacteria in the intestinal(AU)

A resistência bacteriana é uma questão sanitária, explicada pelo uso indiscriminado de medicamentos sem receita médica e pelo uso de antimicrobianos na produção de alimentos para promover o crescimento. Bothropstoxin-I (BthTx-I) é uma fosfolipase A2 (PLA2) obtida do veneno da Bothrops jararacussu. A PLA2 do veneno de cobra tem efeito antimicrobiano conhecido. Objetivou-se com este estudo avaliar sem precedentes a atividade antimicrobiana in vivo de BthTx-I em frangos de corte. Os parâmetros microbiológicos, bioquímicos e histológicos foram realizados em 84 frangos de corte com 21 dias de idade mantidos em gaiolas com quatro animais cada e densidade de 625 cm2/frango. O experimento foi dividido em três tratamentos com sete repetições de quatro frangos cada um, com duração de sete dias. Os tratamentos foram: 1) dieta com bacitracina de zinco; 2) PLA2-BthTx-I; 3) sem aditivos. Os dados obtidos das variáveis estudadas foram submetidos à análise de variância e teste F ao nível de significância de 5%. As médias dos tratamentos em cada variável foram comparadas pelo teste de Tukey. A contagem cloacal bacteriana de frangos de corte mostrou que o BthTx-I diminuiu a população microbiana sem comprometer o peso corporal, a morfologia intestinal ou causar danos histopatológico no fígado e rins. Concluiu-se que a toxina apresentou atividade in vivo, sendo uma alternativa para um melhor desempenho na produção de frangos de corte, pois agiu diminuindo a carga microbiana de bactérias potencialmente patogênicas na microbiota intestinal das aves e não causou danos musculares, hepáticos ou renais na dosagem avaliada.(AU)

Antimicrobial effect of bothropstoxin-i in broilers / Atividade antimicrobiana da bothropstoxin-i em frangos de corte

Bacterial resistance is a sanitary issue explained by indiscriminate use of nonprescription drugs, and antimicrobial use in food production for growth promotion. Bothropstoxin-I (BthTx-I) is a phospholipase A2 (PLA2) from Bothrops jararacussu venom, which has a known antimicrobial effect. The goal of this study was the unprecedented evaluation of in vivo antimicrobial activity of BthTx-I in broilers. Microbiological, biochemical, and histological parameters were determined using 84 21-day old broilers that were kept in cages with four birds each at a density of 625 cm2/broiler. The experiment was randomized by three treatments with seven repetitions of four broilers each that lasted seven days. The treatments were: 1) bacitracin zinc diet; 2) PLA2-BthTx-I; 3) without additives. The data obtained from the studied variables was subjected to analysis of variance and an F-test at the 5% significance level. Averages of each variable in each treatment were compared by Tukey’s test. Broiler bacterial cloacal counts showed that BthTx-I decreased the microbial population without reducing body weight, intestinal morphology, or liver or kidney histopathological damage. The toxin showed in vivo activity, being an alternative for better performance in the production of broiler chickens, because it acted by decreasing the microbial load of potentially pathogenic bacteria in the intestinal

A resistência bacteriana é uma questão sanitária, explicada pelo uso indiscriminado de medicamentos sem receita médica e pelo uso de antimicrobianos na produção de alimentos para promover o crescimento. Bothropstoxin-I (BthTx-I) é uma fosfolipase A2 (PLA2) obtida do veneno da Bothrops jararacussu. A PLA2 do veneno de cobra tem efeito antimicrobiano conhecido. Objetivou-se com este estudo avaliar sem precedentes a atividade antimicrobiana in vivo de BthTx-I em frangos de corte. Os parâmetros microbiológicos, bioquímicos e histológicos foram realizados em 84 frangos de corte com 21 dias de idade mantidos em gaiolas com quatro animais cada e densidade de 625 cm2/frango. O experimento foi dividido em três tratamentos com sete repetições de quatro frangos cada um, com duração de sete dias. Os tratamentos foram: 1) dieta com bacitracina de zinco; 2) PLA2-BthTx-I; 3) sem aditivos. Os dados obtidos das variáveis estudadas foram submetidos à análise de variância e teste F ao nível de significância de 5%. As médias dos tratamentos em cada variável foram comparadas pelo teste de Tukey. A contagem cloacal bacteriana de frangos de corte mostrou que o BthTx-I diminuiu a população microbiana sem comprometer o peso corporal, a morfologia intestinal ou causar danos histopatológico no fígado e rins. Concluiu-se que a toxina apresentou atividade in vivo, sendo uma alternativa para um melhor desempenho na produção de frangos de corte, pois agiu diminuindo a carga microbiana de bactérias potencialmente patogênicas na microbiota intestinal das aves e não causou danos musculares, hepáticos ou renais na dosagem avaliada.

Creolin® administered by different pathways in rats experimentally poisoned with Bothrops jararaca venom / Creolina® administrada por diferentes vias em ratos envenenados experimentalmente com veneno de Bothrops jararaca

This study aimed to evaluate the effects of Creolin® when administered by different pathways in rats experimentally poisoned with Bothrops jararaca venom. In female Wistar rats, the Bothropic venom was inoculated intramuscularly, and then the rats were either treated with Creolin® (administered orally, topically, or intramuscularly), or with amixture of venom + Creolin® intramuscularly. Animals that received Creolin®, apart from the venom, by oral, topical, or intramuscular routes developed local symptoms and showed laboratory findings similar to those animals that received only the venom. Conversely, animals inoculated with the venom incubated with Creolin® showed no signs of local venom toxicity (necrosis or hemorrhage) and displayed hematological parameters within the normal range for the species. These results suggest that Creolin® exhibited an antiophidian effect only when it is mixed with the venom and administered intramuscularly.(AU)

Esse estudo objetivou avaliar os efeitos da Creolina® quando administrada por diferentes vias de acesso em ratos experimentalmente envenenados pela peçonha de Bothrops jararaca. Em ratas Wistar fêmeas foi inoculada a peçonha botrópica por via intramuscular, e em seguida as ratas foram tratadas com Creolina® (administrada oralmente, topicamente e intramuscularmente) ou a mistura de veneno + Creolina®. Os animais que receberam a Creolina®, além do veneno, por via oral, tópica e muscular desenvolveram a sintomatologia local e achados laboratoriais semelhantes ao grupo que recebeu apenas o veneno. De forma controversa, os animais inoculados com o veneno misturado a Creolina® não apresentaram sinais característicos da ação local do veneno (necrose, hemorragia) e apresentaram parâmetros hematológicos dentro da normalidade para espécie. Esses resultados sugerem que a Creolina® apresentou efeito antiofídico apenas quando misturada ao veneno e administrada intramuscularmente.(AU)

Bothrops alternatus snake venom induces apoptosis of skeletal muscle cells in a rabbit model / O veneno da serpente Bothrops alternatus induz apoptose nas células musculares de coelhos

Este estudo objetiva reportar a ocorrência de apoptose in vivo induzida pelo veneno da serpente Bothrops alternatus em células musculares esqueléticas. Cinco coelhos machos, adultos, receberam 150µg/kg de veneno no músculo vasto lateral, enquanto outros cinco animais receberam 0,1% de BSA diluído em PBS no mesmo local. Após 12 horas, os animais foram eutanasiados, e amostras do local de inoculação foram coletadas para análise histopatológica. Foram evidenciadas necrose e hemorragia nas células musculares. Além disso, a análise imuno-histoquímica para identificação de caspase-3 ativada revelou marcações granulares e agregadas no citoplasma das células musculares, compatíveis com o processo de apoptose. Este é o primeiro relato que confirma o veneno de B. alternatus como causador de apoptose in vivo em células musculares esqueléticas.(AU)

Systemic toxic reaction due to multiple honeybee stings in equine: Case report / Reação tóxica sistêmica devido a múltiplas ferroadas de abelha em equino: relato de caso

Accidents caused by insects of the Hymenoptera are rarely described in large animals. The attacks caused by honeybee (Apis mellifera) may cause severe consequences and its intensity changes according to the number of stings. Local and systemic reactions can occur, including progression to death. This report describes a case of honeybee attack on an equine, which took place in the city of Lages, in the state of Santa Catarina, Brazil. In the clinical assessment the horse showed apathy, anorexia, head and pectoral edemas, dyspnea, icteric mucosa, increased mandibular lymph nodes and darkened urine. The blood count showed anemia and serum biochemical tests suggested, muscular and hepatic lesions. The urinalysis test indicated hemoglobinuria and increased clotting time. Treatment included lactate Ringer's solution fluid therapy, furosemide, promethazine, corticosteroids and 20% mannitol solution. Hot and cold compresses were applied alternately on areas with edema. There was a satisfactory response to treatment and the animal was discharged after 30 days in veterinary hospital. The description of honeybee sting accidents in large animals is important because of the evolution that can lead to death. The early approach associated with appropriate treatment, avoiding the worsening of the lesions is fundamental for the recovery of the patient.(AU)

Os acidentes causados por insetos da ordem Hymenoptera são raramente descritos em grandes animais. Os ataques provocados por abelhas (Apis mellifera) causam consequências graves, e sua intensidade varia de acordo com a quantidade de ferroadas. Reações locais a sistêmicas podem ocorrer, incluindo a evolução para a morte. Este relato descreve um caso de ataque por abelhas em equino, ocorrido no município de Lages, SC. No exame clínico, o equino apresentava apatia, anorexia, edema de cabeça e região peitoral, dispneia inspiratória, mucosas ictéricas, linfonodos mandibulares aumentados e urina de coloração marrom-escura. O hemograma evidenciou anemia hemolítica, e os exames de bioquímica sérica sugeriram lesão muscular e lesão hepática. A urinálise demonstrou hemoglobinúria, e o tempo de coagulação apresentava-se aumentado. Como tratamento, foram administrados solução de ringer com lactato, furosemida, prometazina, corticosteroides e solução de manitol a 20%. Compressas quentes e frias foram aplicadas alternadamente sobre as áreas de edema. Houve adequada resposta ao tratamento instituído e o animal recebeu alta hospitalar após 30 dias de internamento. A descrição de casos de acidentes por picadas de abelhas em grandes animais é importante devido à evolução, que pode levar à morte. A abordagem precoce associada ao tratamento adequado, evitando o agravamento das lesões, é fundamental para a recuperação do paciente.(AU)

Systemic toxic reaction due to multiple honeybee stings in equine: Case report / Reação tóxica sistêmica devido a múltiplas ferroadas de abelha em equino: relato de caso

Accidents caused by insects of the Hymenoptera are rarely described in large animals. The attacks caused by honeybee (Apis mellifera) may cause severe consequences and its intensity changes according to the number of stings. Local and systemic reactions can occur, including progression to death. This report describes a case of honeybee attack on an equine, which took place in the city of Lages, in the state of Santa Catarina, Brazil. In the clinical assessment the horse showed apathy, anorexia, head and pectoral edemas, dyspnea, icteric mucosa, increased mandibular lymph nodes and darkened urine. The blood count showed anemia and serum biochemical tests suggested, muscular and hepatic lesions. The urinalysis test indicated hemoglobinuria and increased clotting time. Treatment included lactate Ringer's solution fluid therapy, furosemide, promethazine, corticosteroids and 20% mannitol solution. Hot and cold compresses were applied alternately on areas with edema. There was a satisfactory response to treatment and the animal was discharged after 30 days in veterinary hospital. The description of honeybee sting accidents in large animals is important because of the evolution that can lead to death. The early approach associated with appropriate treatment, avoiding the worsening of the lesions is fundamental for the recovery of the patient.(AU)

Os acidentes causados por insetos da ordem Hymenoptera são raramente descritos em grandes animais. Os ataques provocados por abelhas (Apis mellifera) causam consequências graves, e sua intensidade varia de acordo com a quantidade de ferroadas. Reações locais a sistêmicas podem ocorrer, incluindo a evolução para a morte. Este relato descreve um caso de ataque por abelhas em equino, ocorrido no município de Lages, SC. No exame clínico, o equino apresentava apatia, anorexia, edema de cabeça e região peitoral, dispneia inspiratória, mucosas ictéricas, linfonodos mandibulares aumentados e urina de coloração marrom-escura. O hemograma evidenciou anemia hemolítica, e os exames de bioquímica sérica sugeriram lesão muscular e lesão hepática. A urinálise demonstrou hemoglobinúria, e o tempo de coagulação apresentava-se aumentado. Como tratamento, foram administrados solução de ringer com lactato, furosemida, prometazina, corticosteroides e solução de manitol a 20%. Compressas quentes e frias foram aplicadas alternadamente sobre as áreas de edema. Houve adequada resposta ao tratamento instituído e o animal recebeu alta hospitalar após 30 dias de internamento. A descrição de casos de acidentes por picadas de abelhas em grandes animais é importante devido à evolução, que pode levar à morte. A abordagem precoce associada ao tratamento adequado, evitando o agravamento das lesões, é fundamental para a recuperação do paciente.(AU)

Análise jurídico-econômica-ambiental do uso de agrotóxicos na sociedade contemporânea no contexto do projeto de lei 6.299/02 (pacote do veneno)

O desenvolvimento econômico em detrimento da saúde humana e ambiental vem ocorrendo desde o início da industrialização.  O robusto poder industrial interfere nos interesses políticos que são alheios aos interesses sociais. Como exemplo empírico disso, está o PL. 6.299/02 (Pacote do Veneno). Consiste em um projeto de lei com 29 outros projetos apensos, com o fim de flexibilizar o uso, bem como a autorização de novos produtos agrotóxicos baseando-se em riscos aceitáveis. Contrariando inúmeros estudos realizados por diversas instituições públicas, privadas, nacionais e internacionais, além da opinião da sociedade. O tema nasce de forma interdisciplinar, uma vez que para analisar a narrativa acima se fazem necessários os estudos em diversas esferas do conhecimento, por exemplo analisar os danos à saúde ambiental e humana pelo uso de agrotóxicos, conceituar o termo risco e comparar a lei atual, que trata sobre os agrotóxicos, com o PL. 6.299/02. A metodologia utilizada é a qualitativa, em uma revisão de literatura com estudo de caso.

Evaluation of the antibacterial activity of Crotalus durissus terrificus crude venom / Avaliação da atividade antibacteriana do veneno bruto de Crotalus durissus terrificus

Snake venoms are recognized as a promising source of pharmacologically active substances and are potentially useful for the development of new antimicrobial drugs. This study aimed to investigate the antimicrobial activity of the venom from the rattlesnake Crotalus durissus terrificus against several bacteria. Antibacterial activity was determined by using the plate microdilution method and the activity on the bacterial envelope structure was screened by using the crystal violet assay. The proteins in crude venom were separated by electrophoresis and characterized regarding their proteolytic activity. C. d. terrificus venom exhibited antimicrobial action against gram-positive and gram-negative bacteria. MIC values were defined for Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (62.5 µg/mL), Staphylococcus aureus ATCC 25923 (125 µg/mL), and Micrococcus luteus ATCC 9341 (≤500 µg/mL). For Salmonella enterica serovar typhimurium ATCC 14028 and Corynebacterium glutamicum ATCC 13032, the decrease in bacterial growth was not detected visually, but was statistically significant. The crystal violet assay demonstrated that the crude venom increased bacterial cell permeability and the secreted protein profile agreed with previous reports. The results suggest that the proteins with lytic activity against bacteria in C. d. terrificus venom deserve further characterization as they may offer reinforcements to the weak therapeutic arsenal used to fight microbial multidrug resistance.

Os venenos de serpentes são reconhecidos como uma fonte promissora de substâncias farmacologicamente ativas e potencialmente úteis para o desenvolvimento de novas drogas antimicrobianas. Esse trabalho teve como objetivo investigar a atividade antimicrobiana do veneno de Crotalus durissus terrificus contra várias bactérias. A determinação da atividade antibacteriana foi realizada pelo método de microdiluição em placas e a ação na estrutura do envelope bacteriano pelo ensaio violeta de cristal. As proteínas do extrato bruto foram separadas por eletroforese e caracterizadas quanto à sua atividade proteolítica. O veneno de C. d. terrificus apresentou ação antimicrobiana frente bactérias gram-positivas e gram-negativas. Os valores de MIC foram definidos para Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (62.5 µg/ mL), Staphylococcus aureus ATCC 25923 (125 µg/mL) e Micrococcus luteus ATCC 9341 (≤ 500 µg/mL). Para Salmonella enterica serovar typhimurium ATCC 14028 e Corynebacterium glutamicum ATCC 13032, o decréscimo no crescimento bacteriano não foi detectado visualmente, mas foi estatisticamente significante. O teste do cristal violeta demonstrou que o veneno bruto aumentou a permeabilidade das células bacterianas e o perfil de proteína secretada está em consonância com relatos anteriores. Os resultados sugerem que as proteínas com atividade lítica contra bactérias no veneno de C. d. terrificus merecem atenção para uma melhor caracterização, uma vez que podem trazer reforços para o escasso arsenal terapêutico empregado para combater a multirresistência microbiana.

Evaluation of the antibacterial activity of Crotalus durissus terrificus crude venom / Avaliação da atividade antibacteriana do veneno bruto de Crotalus durissus terrificus

Snake venoms are recognized as a promising source of pharmacologically active substances and are potentially useful for the development of new antimicrobial drugs. This study aimed to investigate the antimicrobial activity of the venom from the rattlesnake Crotalus durissus terrificus against several bacteria. Antibacterial activity was determined by using the plate microdilution method and the activity on the bacterial envelope structure was screened by using the crystal violet assay. The proteins in crude venom were separated by electrophoresis and characterized regarding their proteolytic activity. C. d. terrificus venom exhibited antimicrobial action against gram-positive and gram-negative bacteria. MIC values were defined for Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (62.5 µg/mL), Staphylococcus aureus ATCC 25923 (125 µg/mL), and Micrococcus luteus ATCC 9341 (≤500 µg/mL). For Salmonella enterica serovar typhimurium ATCC 14028 and Corynebacterium glutamicum ATCC 13032, the decrease in bacterial growth was not detected visually, but was statistically significant. The crystal violet assay demonstrated that the crude venom increased bacterial cell permeability and the secreted protein profile agreed with previous reports. The results suggest that the proteins with lytic activity against bacteria in C. d. terrificus venom deserve further characterization as they may offer reinforcements to the weak therapeutic arsenal used to fight microbial multidrug resistance.(AU)

Os venenos de serpentes são reconhecidos como uma fonte promissora de substâncias farmacologicamente ativas e potencialmente úteis para o desenvolvimento de novas drogas antimicrobianas. Esse trabalho teve como objetivo investigar a atividade antimicrobiana do veneno de Crotalus durissus terrificus contra várias bactérias. A determinação da atividade antibacteriana foi realizada pelo método de microdiluição em placas e a ação na estrutura do envelope bacteriano pelo ensaio violeta de cristal. As proteínas do extrato bruto foram separadas por eletroforese e caracterizadas quanto à sua atividade proteolítica. O veneno de C. d. terrificus apresentou ação antimicrobiana frente bactérias gram-positivas e gram-negativas. Os valores de MIC foram definidos para Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (62.5 µg/ mL), Staphylococcus aureus ATCC 25923 (125 µg/mL) e Micrococcus luteus ATCC 9341 (≤ 500 µg/mL). Para Salmonella enterica serovar typhimurium ATCC 14028 e Corynebacterium glutamicum ATCC 13032, o decréscimo no crescimento bacteriano não foi detectado visualmente, mas foi estatisticamente significante. O teste do cristal violeta demonstrou que o veneno bruto aumentou a permeabilidade das células bacterianas e o perfil de proteína secretada está em consonância com relatos anteriores. Os resultados sugerem que as proteínas com atividade lítica contra bactérias no veneno de C. d. terrificus merecem atenção para uma melhor caracterização, uma vez que podem trazer reforços para o escasso arsenal terapêutico empregado para combater a multirresistência microbiana.(AU)

Potencial antiviral e virucida da melitina e apamina contra herpesvírus bovino tipo 1 e vírus da diarreia viral bovina / Antiviral and virucidal potential of melittin and apamin against bovine herpesvirus type 1 and bovine viral diarrhea virus

A busca por alternativa aos fármacos sintéticos têm revelado descobertas no campo da farmacologia e, nesse sentido, melitina e apamina, dois constituintes do veneno de abelhas, foram descritas com várias ações farmacológicas. Este estudo objetivou avaliar in vitro as capacidades antiviral e virucida destes componentes. Para tanto, células MDBK (Madin Darby Bovine Kidney), após verificação das respectivas doses tóxicas por ensaio MTT ((3-(4,5 dimetiltiazol-2yl)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo), foram cultivadas em microplacas e tratadas com diferentes concentrações de apamina, melitina e sua associação. Esse tratamento ocorreu antes e após a infecção com 0,1 MOI (multiplicidade de infecção) de cepas citopatogênicas de herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) cepa Los Angeles e vírus da diarreia viral bovina (BVDV) cepa NADL. Após incubação por 72 horas, 37oC, as células foram submetidas ao ensaio MTT para estimativa da viabilidade celular. Em experimento paralelo, placas que foram submetidas ao mesmo procedimento sofreram ciclo de congelamento e descongelamento das células, para rompimento das mesmas e mensuração dos títulos virais. O ensaio virucida foi realizado incubando-se suspensões de BoHV-1 e BVDV com as soluções de apamina, melitina e associação por 24 horas a 37oC e 22oC. O título viral foi avaliado às 0 horas, 1, 2, 4, 8 e 24 horas de incubação. A concentração citotóxica para 50% das células (CC50) de melitina foi 2,32 μg/ml e apamina não demonstrou toxicidade à maior concentração testada (100μg/ml). Houve efeito antiviral da melitina sobre BoHV-1, especialmente na concentração de 2μg/ml, onde observou-se 85,96% de viabilidade celular quando o tratamento foi realizado antes da infecção e 86,78% de viabilidade quando o tratamento foi realizado após a infecção. Houve ainda redução de 90% das partículas virais de BoHV-1. Em menores concentrações (1 e 1,5μg/ml) de melitina não houve atividade antiviral, pois a viabilidade celular foi baixa, demonstrando efeito citopático do vírus. Na associação das duas substâncias houve queda no título de BVDV e observou-se maior viabilidade celular quando comparados à ação isolada dos composto sobre este vírus. Isso se confirma na atividade virucida, uma vez que houve decréscimo de 90% das partículas virais de BVDV com a associação dos dois compostos do veneno de abelhas. Atuando individualmente, melitina apresentou efeito antiviral e virucida frente ao BoHV-1, zerando seu título em apenas 2 horas a 37oC. Conclui-se que melitina tem ação antiviral e virucida frente ao BoHV-1 e sua associação com apamina potencializou seus efeitos frente ao BVDV.(AU)

The search for an alternative to synthetic drugs have revealed discoveries in the field of pharmacology and, according to melittin and apamin, two components of bee venom which have been described were with various pharmacological actions.This study aimed to evaluate the in vitro antiviral and virucidal capabilities of these components. Therefore, after verification of their toxic doses by MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay, MDBK cells (Madin Darby Bovine Kidney) have been cultivated in microplates and treated with different concentrations of apamin, melittin and its association. This treatment occurred before and after infection with MOI (multiplicity of infection) 0.1 of cytopathogenic strains of bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) strain Los Angeles and bovine viral diarrhea virus (BVDV) strain NADL. After incubation for 72 hours, 37°C, the cells were submitted to MTT assay to estimate cell viability. In parallel experiments, plates were subjected to the same procedure suffered freezing and thawing cycle the cells to rupture the same and measurement of viral titers. The virucidal assay was performed by incubating suspension of bovine herpesvirus type-1 and BVDV with apamin solutions, melittin and association for 24 hours at 37°C and 22°C. The viral titer was evaluated at 0 hours, 1, 2, 4, 8 and 24 hours of incubation. The cytotoxic concentration to 50% of the cells (CC50) of melittin was 2.32g/mL and apamin did not show toxicity at the greater concentration tested (100μg/mL). There was antiviral effect of melittin on bovine herpesvirus type-1, especially at a concentration of 2μg/mL, where was observed 85.96% cell viability when treatment was performed before the infection and 86.78% viability when the treatment was carried out after infection. There was also a 90% reduction of viral particles of bovine herpesvirus type-1. In lower concentrations (1 and 1.5μg/mL) melittin no antiviral activity because cell viability was low, showing cytopathic effect of the virus. At the association two substances there were a decrease in the title of BVDV and there was higher cell viability when compared to the isolated action of the compounds of this virus. This is confirmed in the virucidal activity, since there was a decrease of 90% of the viral particles of BVDV with the combination of the two compounds of bee venom. Acting individually, melittin showed antiviral effect and virucidal against for BoHV-1, zeroing its title in just 2 hours at 37°C. It is concluded that melittin has antiviral and virucidal action against the BoHV-1 and its association with apamin potentiate its effects against BVDV.(AU)

Potencial antiviral e virucida da melitina e apamina contra herpesvírus bovino tipo 1 e vírus da diarreia viral bovina / Antiviral and virucidal potential of melittin and apamin against bovine herpesvirus type 1 and bovine viral diarrhea virus

A busca por alternativa aos fármacos sintéticos têm revelado descobertas no campo da farmacologia e, nesse sentido, melitina e apamina, dois constituintes do veneno de abelhas, foram descritas com várias ações farmacológicas. Este estudo objetivou avaliar in vitro as capacidades antiviral e virucida destes componentes. Para tanto, células MDBK (Madin Darby Bovine Kidney), após verificação das respectivas doses tóxicas por ensaio MTT ((3-(4,5 dimetiltiazol-2yl)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo), foram cultivadas em microplacas e tratadas com diferentes concentrações de apamina, melitina e sua associação. Esse tratamento ocorreu antes e após a infecção com 0,1 MOI (multiplicidade de infecção) de cepas citopatogênicas de herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) cepa Los Angeles e vírus da diarreia viral bovina (BVDV) cepa NADL. Após incubação por 72 horas, 37oC, as células foram submetidas ao ensaio MTT para estimativa da viabilidade celular. Em experimento paralelo, placas que foram submetidas ao mesmo procedimento sofreram ciclo de congelamento e descongelamento das células, para rompimento das mesmas e mensuração dos títulos virais. O ensaio virucida foi realizado incubando-se suspensões de BoHV-1 e BVDV com as soluções de apamina, melitina e associação por 24 horas a 37oC e 22oC. O título viral foi avaliado às 0 horas, 1, 2, 4, 8 e 24 horas de incubação. A concentração citotóxica para 50% das células (CC50) de melitina foi 2,32 μg/ml e apamina não demonstrou toxicidade à maior concentração testada (100μg/ml). Houve efeito antiviral da melitina sobre BoHV-1, especialmente na concentração de 2μg/ml, onde observou-se 85,96% de viabilidade celular quando o tratamento foi realizado antes da infecção e 86,78% de viabilidade quando o tratamento foi realizado após a infecção. Houve ainda redução de 90% das partículas virais de BoHV-1. Em menores concentrações (1 e 1,5μg/ml) de melitina não houve atividade antiviral, pois a viabilidade celular foi baixa, demonstrando...(AU)

The search for an alternative to synthetic drugs have revealed discoveries in the field of pharmacology and, according to melittin and apamin, two components of bee venom which have been described were with various pharmacological actions.This study aimed to evaluate the in vitro antiviral and virucidal capabilities of these components. Therefore, after verification of their toxic doses by MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay, MDBK cells (Madin Darby Bovine Kidney) have been cultivated in microplates and treated with different concentrations of apamin, melittin and its association. This treatment occurred before and after infection with MOI (multiplicity of infection) 0.1 of cytopathogenic strains of bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) strain Los Angeles and bovine viral diarrhea virus (BVDV) strain NADL. After incubation for 72 hours, 37°C, the cells were submitted to MTT assay to estimate cell viability. In parallel experiments, plates were subjected to the same procedure suffered freezing and thawing cycle the cells to rupture the same and measurement of viral titers. The virucidal assay was performed by incubating suspension of bovine herpesvirus type-1 and BVDV with apamin solutions, melittin and association for 24 hours at 37°C and 22°C. The viral titer was evaluated at 0 hours, 1, 2, 4, 8 and 24 hours of incubation. The cytotoxic concentration to 50% of the cells (CC50) of melittin was 2.32g/mL and apamin did not show toxicity at the greater concentration tested (100μg/mL). There was antiviral effect of melittin on bovine herpesvirus type-1, especially at a concentration of 2μg/mL, where was observed 85.96% cell viability when treatment was performed before the infection and 86.78% viability when the treatment was carried out after infection. There was also a 90% reduction of viral particles of...(AU)

Potencial antiviral e virucida da melitina e apamina contra herpesvírus bovino tipo 1 e vírus da diarreia viral bovina

ABSTRACT: The search for an alternative to synthetic drugs have revealed discoveries in the field of pharmacology and, according to melittin and apamin, two components of bee venom which have been described were with various pharmacological actions.This study aimed to evaluate the in vitro antiviral and virucidal capabilities of these components. Therefore, after verification of their toxic doses by MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay, MDBK cells (Madin Darby Bovine Kidney) have been cultivated in microplates and treated with different concentrations of apamin, melittin and its association. This treatment occurred before and after infection with MOI (multiplicity of infection) 0.1 of cytopathogenic strains of bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) strain Los Angeles and bovine viral diarrhea virus (BVDV) strain NADL. After incubation for 72 hours, 37°C, the cells were submitted to MTT assay to estimate cell viability. In parallel experiments, plates were subjected to the same procedure suffered freezing and thawing cycle the cells to rupture the same and measurement of viral titers. The virucidal assay was performed by incubating suspension of bovine herpesvirus type-1 and BVDV with apamin solutions, melittin and association for 24 hours at 37°C and 22°C. The viral titer was evaluated at 0 hours, 1, 2, 4, 8 and 24 hours of incubation. The cytotoxic concentration to 50% of the cells (CC50) of melittin was 2.32g/mL and apamin did not show toxicity at the greater concentration tested (100g/mL). There was antiviral effect of melittin on bovine herpesvirus type-1, especially at a concentration of 2g/mL, where was observed 85.96% cell viability when treatment was performed before the infection and 86.78% viability when the treatment was carried out after infection. There was also a 90% reduction of viral particles of bovine herpesvirus type-1. In lower concentrations (1 and 1.5g/mL) melittin no antiviral activity because cell viability was low, showing cytopathic effect of the virus. At the association two substances there were a decrease in the title of BVDV and there was higher cell viability when compared to the isolated action of the compounds of this virus. This is confirmed in the virucidal activity, since there was a decrease of 90% of the viral particles of BVDV with the combination of the two compounds of bee venom. Acting individually, melittin showed antiviral effect and virucidal against for BoHV-1, zeroing its title in just 2 hours at 37°C. It is concluded that melittin has antiviral and virucidal action against the BoHV-1 and its association with apamin potentiate its effects against BVDV.

RESUMO: A busca por alternativa aos fármacos sintéticos têm revelado descobertas no campo da farmacologia e, nesse sentido, melitina e apamina, dois constituintes do veneno de abelhas, foram descritas com várias ações farmacológicas. Este estudo objetivou avaliar in vitro as capacidades antiviral e virucida destes componentes. Para tanto, células MDBK (Madin Darby Bovine Kidney), após verificação das respectivas doses tóxicas por ensaio MTT ((3-(4,5 dimetiltiazol-2yl)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo), foram cultivadas em microplacas e tratadas com diferentes concentrações de apamina, melitina e sua associação. Esse tratamento ocorreu antes e após a infecção com 0,1 MOI (multiplicidade de infecção) de cepas citopatogênicas de herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) cepa Los Angeles e vírus da diarreia viral bovina (BVDV) cepa NADL. Após incubação por 72 horas, 37oC, as células foram submetidas ao ensaio MTT para estimativa da viabilidade celular. Em experimento paralelo, placas que foram submetidas ao mesmo procedimento sofreram ciclo de congelamento e descongelamento das células, para rompimento das mesmas e mensuração dos títulos virais. O ensaio virucida foi realizado incubando-se suspensões de BoHV-1 e BVDV com as soluções de apamina, melitina e associação por 24 horas a 37oC e 22oC. O título viral foi avaliado às 0 horas, 1, 2, 4, 8 e 24 horas de incubação. A concentração citotóxica para 50% das células (CC50) de melitina foi 2,32 g/ml e apamina não demonstrou toxicidade à maior concentração testada (100g/ml). Houve efeito antiviral da melitina sobre BoHV-1, especialmente na concentração de 2g/ml, onde observou-se 85,96% de viabilidade celular quando o tratamento foi realizado antes da infecção e 86,78% de viabilidade quando o tratamento foi realizado após a infecção. Houve ainda redução de 90% das partículas virais de BoHV-1. Em menores concentrações (1 e 1,5g/ml) de melitina não houve atividade antiviral, pois a viabilidade celular foi baixa, demonstrando efeito citopático do vírus. Na associação das duas substâncias houve queda no título de BVDV e observou-se maior viabilidade celular quando comparados à ação isolada dos composto sobre este vírus. Isso se confirma na atividade virucida, uma vez que houve decréscimo de 90% das partículas virais de BVDV com a associação dos dois compostos do veneno de abelhas. Atuando individualmente, melitina apresentou efeito antiviral e virucida frente ao BoHV-1, zerando seu título em apenas 2 horas a 37oC. Conclui-se que melitina tem ação antiviral e virucida frente ao BoHV-1 e sua associação com apamina potencializou seus efeitos frente ao BVDV.