Renovação de diluidor na tecnologia de sêmen de pequenos ruminantes / Extender renewal in the technology of small ruminants semen

O objetivo desta revisão foi compilar o que se tem na literatura a respeito do efeito da renovação de diluidor seminal, mediante centrifugação, na qualidade do sêmen refrigerado de caprinos e ovinos e no tempo de viabilidade seminal. Um dos primeiros estudos publicados com essa metodologia foi realizado com sêmen de cão, em 2005, por Verstegen et al., seguido por estudos em outras espécies, como a equina e suína. Nosso grupo de pesquisa desenvolveu alguns estudos com diferentes metodologias para avaliar a eficiência do método, a necessidade do uso da centrífuga refrigerada nesse processo, o uso de antioxidantes no diluidor para renovação e o tempo de renovação do diluidor em pequenos ruminantes.(AU)

The objective of this revision was to compile what exists in literature regarding the effect of seminal diluent renewal, through centrifugation, in the quality of cooled semen of goat and sheep and during seminal viability time. One of the first studies published with this methodology was performed with dog semen in 2005 by Verstegen et al., followed by studies in other species, such as equine and swine. Our research group developed some studies using different methodologies to evaluate method efficiency, the need to use a cooled centrifuge in this process, the use of antioxidants in the diluent for renewal and the diluent renewal time in small ruminants.(AU)

Trehalose addition to a Tris-fructose egg yolk extender on quality of ram sperm preserved at 0 °C

The present study investigated the effects of various concentrations of trehalose in Tris-fructose egg yolk diluent on ram semen preservation at 0 ℃. Semen was collected by artificial vagina ejaculation from six rams of proven fertility. High-quality ejaculates were diluted with 0 (control), 5, 10, 15, and 20 mM trehalose of Tris-fructose egg yolk extender and control (tris-fructose egg yolk extender without trehalose), respectively. Then, the ejaculates were diluted to a concentration of 5×108 sperm/mL, cooled to 0 ℃ for 90 min, and maintained at that temperature for twelve days. The diluted semen samples were examined, and their sperm progressive motility, membrane functionality, and acrosome integrity recorded at 0, 24, 72, 144, 216, and 288 h. Two hundred ninety-six ewes were transcervically inseminated with the 216-h control (without trehalose) or the optimal trehalose concentration group semen, and the pregnancy and lambing rates were measured. No significant differences were established in the sperm progressive motility and membrane functionality among the control and 5, 10, 15, and 20 mM groups. The sperm samples of trehalose addition groups had no significant difference in the acrosome integrity of sperm, but they were, nonetheless, significantly higher than those in the control. No significant difference was detected in the lambing and pregnancy rates between the 5 mM and control groups. These results suggest that ram sperm is capable of fertilization after cooling and preservation at 0 ℃ by the use of 5 mM trehalose for Tris-fructose egg yolk diluent. Under these conditions, ram sperm can be more effectively preserved than under other four concentrations of diluents.(AU)

Uso de quercetina em meio de refrigeração de sêmen equino a base de leite em pó desnatado / Use of quercetin in equine semen cooling medium based on skimded milk poder

A biotécnica de refrigeração de sêmen equino para o trasporte de material genético está amplamente distribuida. Com a necessidade da manutenção da viabilidade espermática é indispensável a autilização e diluentes para este fim. O objetivo deste estudo foi avaliar se a adição de quercetina, que é um flavonóide antioxidante, em diluentes espermáticos altera a viabilidade dos espermatozoides equinos refrigerados. Foram avaliados cinco ejaculados de um garanhão, por meio da análise de motilidade e vigor espermático, em diferentes períodos de refrigeração em quatro meios de diluição: BotuSêmen®; BotuSêmen® adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®); Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) ou Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®). Por meio dos resultados obtidos no presente estudo, foi possível verificar que não há diferença estatística entre a motilidade espermática de sêmen de garanhão diluído em BotuSêmen® em relação ao diluído solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) pelo período de refrigeração avaliado (36h).

The biotechnique of equine semen cooling for the transfer of genetic material is widely distributed. With the need to maintain sperm viability, it is indispensable to use and thinners for this purpose. The aim of this study was to evaluate whether the addition of quercetin, which is an anti-oxidant flavonoid, in spermatic diluents alters the viability of refrigerated equine spermatozoa. Five ejaculates of a stallion were evaluated by analysis of motility and spermatic vigor in different cooling periods in four dilution media: BotuSêmen® ; BotuSêmen® added 20 µg/mL of quercetin (SIGMA® ); Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) or Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) added 20 µg/mL quercetin (SIGMA® ). Through the data obtained, it was possible to verify that there is no statistical difference between the sperm motility of diluted stallion semen in BotuSêmen® in relation to the diluted aqueous solution with 10% skimmed milk powder (Molico® ) for the evaluated refrigeration period (36h).

Uso de quercetina em meio de refrigeração de sêmen equino a base de leite em pó desnatado / Use of quercetin in equine semen cooling medium based on skimded milk poder

A biotécnica de refrigeração de sêmen equino para o trasporte de material genético está amplamente distribuida. Com a necessidade da manutenção da viabilidade espermática é indispensável a autilização e diluentes para este fim. O objetivo deste estudo foi avaliar se a adição de quercetina, que é um flavonóide antioxidante, em diluentes espermáticos altera a viabilidade dos espermatozoides equinos refrigerados. Foram avaliados cinco ejaculados de um garanhão, por meio da análise de motilidade e vigor espermático, em diferentes períodos de refrigeração em quatro meios de diluição: BotuSêmen®; BotuSêmen® adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®); Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) ou Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®). Por meio dos resultados obtidos no presente estudo, foi possível verificar que não há diferença estatística entre a motilidade espermática de sêmen de garanhão diluído em BotuSêmen® em relação ao diluído solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) pelo período de refrigeração avaliado (36h).(AU)

The biotechnique of equine semen cooling for the transfer of genetic material is widely distributed. With the need to maintain sperm viability, it is indispensable to use and thinners for this purpose. The aim of this study was to evaluate whether the addition of quercetin, which is an anti-oxidant flavonoid, in spermatic diluents alters the viability of refrigerated equine spermatozoa. Five ejaculates of a stallion were evaluated by analysis of motility and spermatic vigor in different cooling periods in four dilution media: BotuSêmen® ; BotuSêmen® added 20 µg/mL of quercetin (SIGMA® ); Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) or Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) added 20 µg/mL quercetin (SIGMA® ). Through the data obtained, it was possible to verify that there is no statistical difference between the sperm motility of diluted stallion semen in BotuSêmen® in relation to the diluted aqueous solution with 10% skimmed milk powder (Molico® ) for the evaluated refrigeration period (36h).(AU)

Functional assessment of diluent choice for semen cryopreservation from stallions with high and low freezability

Background: Fertility using horse frozen-thawed semen remains lower than in other livestock species. This fact suggeststhat horse semen hold intrinsic sensitivity to cryoinjury that must be investigated. Moreover, there is substantial evidenceof genetic factors upon horse cryopreservation outcome. Nonetheless, diluent and cryoprotectant choice for horse semencryopreservation are under intense research. Thus these factors could be explored to identify conditions that may increasesemen viability after thawing. The aim of this work was to evaluate the effect of diluents Botu-Crio®,Lactose-EDTA®, andINRA-82® on cryopreserved semen from stallions with high (HFA) and low freezability (LFA).Materials, Methods & Results: Frozen-thawed semen was evaluated for motility and membrane integrity using computerassisted semen analysis (CASA), and also inferred for sperm DNA fragmentation by sperm chromatin structure assay during the thermoresistance test (TRT). Comparisons for each parameter were done in a pair-wise fashion between HFA andLFA semen at one-hour intervals during the TRT (0 h - 4 h). Sperm motility in HFA, regardless of the diluent, was larger(P 0.05)at 0 h and 3 h. Sperm DNA fragmentation was lower (P < 0.05) in HFA semen at 0 h and 1 h.Discussion: Artificial insemination in horses using frozen-thawed semen is gaining wider acceptance under commercialsettings, although its current limited outreach due to low semen viability after thawing. Therefore, several efforts weremade toward ...

Functional assessment of diluent choice for semen cryopreservation from stallions with high and low freezability

Background: Fertility using horse frozen-thawed semen remains lower than in other livestock species. This fact suggeststhat horse semen hold intrinsic sensitivity to cryoinjury that must be investigated. Moreover, there is substantial evidenceof genetic factors upon horse cryopreservation outcome. Nonetheless, diluent and cryoprotectant choice for horse semencryopreservation are under intense research. Thus these factors could be explored to identify conditions that may increasesemen viability after thawing. The aim of this work was to evaluate the effect of diluents Botu-Crio®,Lactose-EDTA®, andINRA-82® on cryopreserved semen from stallions with high (HFA) and low freezability (LFA).Materials, Methods & Results: Frozen-thawed semen was evaluated for motility and membrane integrity using computerassisted semen analysis (CASA), and also inferred for sperm DNA fragmentation by sperm chromatin structure assay during the thermoresistance test (TRT). Comparisons for each parameter were done in a pair-wise fashion between HFA andLFA semen at one-hour intervals during the TRT (0 h - 4 h). Sperm motility in HFA, regardless of the diluent, was larger(P < 0.05) than LFA, both on 0h and 1h. In the 2h evaluation, sperm motility using Botu-Crio® and Lactose-EDTA® wasgreater (P < 0.05) for HFA. Analysis of sperm membrane integrity was similar between HFA and LFA semen (P > 0.05)at 0 h and 3 h. Sperm DNA fragmentation was lower (P < 0.05) in HFA semen at 0 h and 1 h.Discussion: Artificial insemination in horses using frozen-thawed semen is gaining wider acceptance under commercialsettings, although its current limited outreach due to low semen viability after thawing. Therefore, several efforts weremade toward ... (AU)

Diluentes seminais para pequenos ruminantes / Seminal extenders for small ruminants

Visando prolongar a conservação e o uso seminal, muitos diluentes vêm sendo utilizados em pequenos ruminantes, como os convencionais e os alternativos à base de substâncias vegetais, tendo como funções principais a proteção das membranas, a nutrição e a manutenção da pressão osmótica, bem como a multiplicação das doses inseminantes. Desta forma, este artigo tem como objetivo levantar os principais diluentes convencionais e alternativos utilizados na criopreservação seminal em pequenos ruminantes, a fim de maximizar seu uso e promover uma melhor qualidade espermática.

Looking to prolong preservation and seminal use, diluent muts are used in small ruminants, such as conventional ones and alternative ones based on vegetais substitions, tending as main functions to membrane protection, to nutrição e manutenção da pressão osmótica, bem as a multiplicação You give two inseminants. This way, this article aims to raise the main conventional and alternative diluents used in seminal cryopreservation, in small ruminants, in order to maximize its use and promote a better sperm quality.

Diluentes seminais para pequenos ruminantes / Seminal extenders for small ruminants

Visando prolongar a conservação e o uso seminal, muitos diluentes vêm sendo utilizados em pequenos ruminantes, como os convencionais e os alternativos à base de substâncias vegetais, tendo como funções principais a proteção das membranas, a nutrição e a manutenção da pressão osmótica, bem como a multiplicação das doses inseminantes. Desta forma, este artigo tem como objetivo levantar os principais diluentes convencionais e alternativos utilizados na criopreservação seminal em pequenos ruminantes, a fim de maximizar seu uso e promover uma melhor qualidade espermática.(AU)

Looking to prolong preservation and seminal use, diluent muts are used in small ruminants, such as conventional ones and alternative ones based on vegetais substitions, tending as main functions to membrane protection, to nutrição e manutenção da pressão osmótica, bem as a multiplicação You give two inseminants. This way, this article aims to raise the main conventional and alternative diluents used in seminal cryopreservation, in small ruminants, in order to maximize its use and promote a better sperm quality.(AU)

Comparação de diluidores comerciais na motilidade, funcionalidade e integridade da membrana plasmática do espermatozoide bovino / Comparison of commercial diluents on motility, functionality and integrity of plasma membrane of bovine spermatozoa

O objetivo do estudo foi comparar o efeito de três diluidores comerciais (Tryladil®, Botu-Bov® e OptiXcell®) na qualidade doespermatozoide bovino após o processo de criogenia. Para tal, foram utilizados oito touros da raça Nelore (2 ejaculados/touro).As amostras de sêmen fresco, diluído e pós-descongelamento foram avaliadas, comparando os parâmetros de motilidade total,vigor, funcionalidade da membrana (HOST) e integridade da membrana (eosina). Os dados foram expressos em média e desviopadrão. As variáveis foram submetidas às análises de ANOVA e Tukey ou teste de Friedman e Dunns, dependendo da normalidade(p 0,05). Os achados mostram que no momento da diluição não houve diferença (p0,005) entre os diluidores comerciais nosparâmetros avaliados (exceto integridade da membrana plasmática). No entanto, no momento do pós-descongelamento osespermatozoides criopreservados utilizando-se o diluidor Tryladil® apresentaram maiores valores (p0,005) referentes a integridade efuncionalidade da membrana plasmática comparado aos diluídos em Botu-Bov® e OptIXcell®. Os parâmetros relacionados a cinéticaespermática (motilidade e vigor) não se diferiram (p0,005) entre os diluidores comerciais utilizados. Em conclusão, no momentopós-descongelamento o diluidor Tryladil® apresentou os melhores resultados nos parâmetros de integridade e funcionalidade damembrana plasmática. Sendo assim, recome

The main of the study was to compare the quality of frozen bull semen processed with three different commercially extenders (Tryladil®, Botu-Bov® and OptiXcell®). For this, eight Nelore bulls (two ejaculate per bull). Sperm samples were analyzed fresh, diluted and frozen-thawed. The parameters analyzed were total motility, sperm vigor, functional integrity of sperm plasma membrane (HOST) and plasma membrane integrity (eosin). Date were expressed as mean and standard deviation. The variables were subjected to ANOVA (Tukey test) or Friedman (Dunns test) test according to normality (p< 0,05). The results indicate that there was no difference (p˃0,005) among all treatments in the parameters evaluated (except plasma membrane integrity) at dilution moment. However, Tryladil extender promoted an increase (p˂0,005) in functional and integrity of sperm plasma membrane compared with others extenders at the post-thawing analyze. After thawing, there was no difference (p˃0,005) among all treatments in the kinetic parameters. In conclusion, the Tryladil® extender promoted an increase in functional and integrity of frozen-thawed sperm plasma membrane. Therefore, the Tryladil® extender is recommended to be use as an extender for Nelore bull sperm cryopreservation.(AU)

Motilidade, vigor e qualidade acrossomal do sêmen descongelado de varrão em diferentes diluentes / Boar semen motility, vigour and acrosomal quality in diferents extender after thawing

Objetivou-se determinar um diluente que proporcionasse uma boa manutenção da viabilidade do sêmen do varrão, após descongelação. Foram utilizados os seguintes diluentes: Beltsville Thawing Solution (BTS), BTS + ácido 3-indol a cético(IAA)E Androhep (ADHP). Os 24 ejaculados foram analisados in natura e após diluição, quanto ao vigor, motilidade espermática e integridade do acrossoma. Em seguida, foi retirado de cada ejaculado um total de 10,2 x109 espermatozoides, que foram repartidos igualmente entre os diferentes tratamentos experimentais. Os ejaculados foram diluídos em partes iguais (1:1) a 30oC, permanecendo incubados por 2 horas, antes de iniciar a curva de congelação. Posteriormente, o sêmen foi envazado em palhetas de 0,5 mL, em uma concentração de 112 x10 6sptz/mL, submetidos a vapor de nitrogênio por quatro minutos, em seguida, mergulhado no nitrogênio líquido (-196 oC). As amostras foram descongeladas em banho-maria à temperatura de (37ºC/30s), em seguida, o conteúdo foi ressuspenso nos diferentes diluentes (1:5). As amostras foram avaliadas quantosàs mesmas características do sêmen in natura. Na análise estatística, foram utilizados os testes de Mann-Whitney, com intervalo de confiança de 5%. O diluente BTS apresentou motilidade e vigorespermático melhores, em relação aquele contendo ADPH, em 5 minutos de incubação; porém, não houve diferenças significativas sobre as mesmas avaliações, quando os tratamentos foram incubados por 1 hora. A integridade acrossomal do diluente ADPH proporcionou maior número de espermatozoides íntegros (p<0,05), em relação aos demais tratamentos. Um diluente que favoreça a conservação de uma melhor qualidade espermática após descongelação ainda precisa ser desenvolvido.

The objective of this study was to determine a diluent that would provide good maintenance of the boar's semen viability after thawing. The following diluents were used: Beltsville Thawing Solution (BTS), BTS + 3-indole acetic acid (IAA) and Androhep (ADHP). The 24 ejaculates were analyzed in natura and after dilution, regarding sperm vigor and motility and acrosome integrity. Then, a total of 10,2x109 spermatozoa were removed from each ejaculate, which were equally distributed among the different experimental treatments. The ejaculates were diluted in equal parts (1:1) at 30 oC and incubated for 2 hours before starting the freezing curve. Subsequently the semen was packed in 0,5 mL vats, at a concentration of 112 x106spermatozoa/mL, submitted to nitrogen vapor for 4 minutes and then immersed in liquid nitrogen (-196oC). Samples were thawed in a water bath at (37 °C/30s), then the contents were resuspended in the different diluents (1:5). The samples were evaluated as many as the same characteristics of semen in natura. In the statistical analysis, the Mann-Whitney tests were used, with a confidence interval of 5%. The BTS diluent had better sperm motility and vigor compared to ADPH in 5 minutes of incubation, but there were no significant differences on the same evaluations when the treatments were incubated for 1 hour. The acrosomal integrity of the ADPH diluent provided a higher number of intact spermatozoa (p<0.05) in relation to the other treatments. A extender that favors the conservation of a better sperm quality after thawing, still needs to be developed.

Motilidade, vigor e qualidade acrossomal do sêmen descongelado de varrão em diferentes diluentes / Boar semen motility, vigour and acrosomal quality in diferents extender after thawing

Objetivou-se determinar um diluente que proporcionasse uma boa manutenção da viabilidade do sêmen do varrão, após descongelação. Foram utilizados os seguintes diluentes: Beltsville Thawing Solution (BTS), BTS + ácido 3-indol a cético(IAA)E Androhep (ADHP). Os 24 ejaculados foram analisados in natura e após diluição, quanto ao vigor, motilidade espermática e integridade do acrossoma. Em seguida, foi retirado de cada ejaculado um total de 10,2 x109 espermatozoides, que foram repartidos igualmente entre os diferentes tratamentos experimentais. Os ejaculados foram diluídos em partes iguais (1:1) a 30oC, permanecendo incubados por 2 horas, antes de iniciar a curva de congelação. Posteriormente, o sêmen foi envazado em palhetas de 0,5 mL, em uma concentração de 112 x10 6sptz/mL, submetidos a vapor de nitrogênio por quatro minutos, em seguida, mergulhado no nitrogênio líquido (-196 oC). As amostras foram descongeladas em banho-maria à temperatura de (37ºC/30s), em seguida, o conteúdo foi ressuspenso nos diferentes diluentes (1:5). As amostras foram avaliadas quantosàs mesmas características do sêmen in natura. Na análise estatística, foram utilizados os testes de Mann-Whitney, com intervalo de confiança de 5%. O diluente BTS apresentou motilidade e vigorespermático melhores, em relação aquele contendo ADPH, em 5 minutos de incubação; porém, não houve diferenças significativas sobre as mesmas avaliações, quando os tratamentos foram incubados por 1 hora. A integridade acrossomal do diluente ADPH proporcionou maior número de espermatozoides íntegros (p<0,05), em relação aos demais tratamentos. Um diluente que favoreça a conservação de uma melhor qualidade espermática após descongelação ainda precisa ser desenvolvido.(AU)

The objective of this study was to determine a diluent that would provide good maintenance of the boar's semen viability after thawing. The following diluents were used: Beltsville Thawing Solution (BTS), BTS + 3-indole acetic acid (IAA) and Androhep (ADHP). The 24 ejaculates were analyzed in natura and after dilution, regarding sperm vigor and motility and acrosome integrity. Then, a total of 10,2x109 spermatozoa were removed from each ejaculate, which were equally distributed among the different experimental treatments. The ejaculates were diluted in equal parts (1:1) at 30 oC and incubated for 2 hours before starting the freezing curve. Subsequently the semen was packed in 0,5 mL vats, at a concentration of 112 x106spermatozoa/mL, submitted to nitrogen vapor for 4 minutes and then immersed in liquid nitrogen (-196oC). Samples were thawed in a water bath at (37 °C/30s), then the contents were resuspended in the different diluents (1:5). The samples were evaluated as many as the same characteristics of semen in natura. In the statistical analysis, the Mann-Whitney tests were used, with a confidence interval of 5%. The BTS diluent had better sperm motility and vigor compared to ADPH in 5 minutes of incubation, but there were no significant differences on the same evaluations when the treatments were incubated for 1 hour. The acrosomal integrity of the ADPH diluent provided a higher number of intact spermatozoa (p<0.05) in relation to the other treatments. A extender that favors the conservation of a better sperm quality after thawing, still needs to be developed.(AU)

QUALIDADE DO SÊMEN SUÍNO CONSERVADO EM DIFERENTES DILUENTES ADICIONADOS DE GELATINA EM PÓ

A gelatina em pó adicionada ao diluente de sêmen, pode melhorar o processo de armazenamento, minimizando a ação de fatores que podem prejudicar a qualidade da dose inseminante, com relação aos resultados de fertilidade. O sêmen de cinco reprodutores foi coletado 1x/semana pela técnica da mão enluvada. Foi separado de cada ejaculado 1,75 x109 sptz, repartidos igualmente entre tratamentos a uma concentração de 35 x106 sptz/mL. Foram utilizados dois diluentes: O Beltsville Tawing Solution (BTS) e a água de coco em pó (ACP), acrescidos de gelatina em pó em três diferentes concentrações: 1,5%, 3,0% e 4,5%. No tratamento controle não houve adição de gelatina. Os tubos foram conservados a 17 °C, sendo o dia da coleta considerado dia zero (D0) e o sêmen conservado durante 5 dias (D4), com análises em D0, D1, D2, D3 e D4. A influência dos diferentes tratamentos sobre o sêmen conservado, foi avaliada através dos seguintes testes: vigor espermático (0 a 5), motilidade espermática (%), morfologia acrossomal (%), vitalidade espermática (%) e teste de resistência osmótica (%). O delineamento experimental inteiramente casualizado, sendo distribuído em blocos ao acaso. Os dados quantitativos com distribuição normal foram submetidos a Análise de Variância (ANOVA) e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey, usando o R version 3.5.2 (2018-12-20) -- "Eggshell Igloo" Copyright (C) 2018 The R Foundation for Statistical Computing. Todos os testes foram realizados com um índice de significância de 5% (p<0,05).

Powdered gelatine added to semen diluent can improve the storage process, minimizing the action of factors that may impair the quality of the inseminating dose, with respect to fertility results. Semen from five breeders was collected 1x / week using the gloved hand technique. 1.75 x109 sptz was separated from each ejaculate, equally distributed between treatments at a concentration of 35 x106 sptz / ml. Two diluents were used: Beltsville Tawing Solution (BTS) and powdered coconut water (ACP), plus powdered gelatin in three different concentrations: 1.5%, 3.0% and 4.5%. In the control treatment, no gelatin was added. The tubes were kept at 17 ° C, the collection day being considered day zero (D0) and the semen kept for 5 days (D4), with analyzes in D0, D1, D2, D3 and D4. The influence of different treatments on conserved semen was assessed using the following tests: sperm vigor (0 to 5), sperm motility (%), acrosomal morphology (%), sperm vitality (%) and osmotic resistance test (%). The experimental design was completely randomized, being distributed in random blocks. Quantitative data with normal distribution were subjected to Analysis if Variance (ANOVA) and averages were compared by Tukeys test, using R version 3.5.2 (2018-12-20) Eggshell Igloo Copyright © 2018 The R Foundation for Statistical Computing. All tests were performed with a significance level of 5% (p<0.05).

Atividade antioxidante do extrato aquoso de noni em diluente para congelação de sêmen ovino / Antioxidant activity of aqueous extract of noni in dilutent for ram semen cryopreservation

O noni (Morinda citrifolia L) é um fruto consumido no mundo por apresentar propriedades nutricionais e terapêuticas devido a grande quantidade de compostos fenólicos, o que desperta o interesse da comunidade científica. Com o intuito de buscar novas fontes naturais de antioxidantes objetivou-se avaliar o desempenho do noni em diluente para congelação de sêmen ovino. Foi utilizado um delineamento inteiramente casualizado com quatro tratamentos e três repetições por tratamento. Os tratamentos diferiram quanto à concentração do extrato aquoso do noni adicionado ao meio diluidor: controle, sem adição do extrato; e com três concentrações 24 µg/mL; 72 µg/mL; 120 µg/mL. Foram avaliadas as variáveis físicas e químicas do fruto maduro para acidez total (8,78), pH (4,12) e sólidos solúveis (8,18%). Para vitamina C, foi obtido 309,42 mg em 100 g de matéria fresca. O extrato aquoso do noni também foi avaliado quanto à quantificação de compostos fenólicos totais, atividade antioxidante e capacidade de inibição da peroxidação lipídica. O extrato aquoso do noni apresentou moderada quantidade de compostos fitoquímicos do tipo fenólicos de 47,96 ± 1,95 mg Eq. ácido gálico/100 g do extrato. A concentração de 72 e 120 µg/mL do extrato aquoso do noni inibiu a lipoperoxidação no meio diluidor para congelação de sêmen na ordem de 21,75% e 51,32%, respectivamente, e a menor concentração (24 µg/mL) não apresentou efeito positivo. O índice de atividade antioxidante do noni foi de 33,33, o que representa atividade antioxidante muito forte. O extrato aquoso do noni apresenta capacidade antioxidante muito forte e quando incluso ao meio diluidor para criopreservação de sêmen é capaz de inibir a lipoperoxidação a partir da concentração de 72 µg/mL...

Noni (Morinda citrifolia L.) is a fruit consumed worldwide because of its nutritional and therapeutic properties resulting from the large amount of phenolic compounds, which has aroused interest of the scientific community. In order to identify new natural sources of antioxidants, the objective of this study was to evaluate the performance of noni in diluent for ram semen cryopreservation. A completely randomized design consisting of four treatments and three repetitions per treatment was used. The treatments differed in terms of the concentration of the aqueous extract of noni added to the diluent: control, no addition of the extract, and three concentrations (24, 72, and 120 µg/mL). The physical and chemical variables of the mature fruit were evaluated: total acidity (8.78), pH (4.12), and soluble solids (8.18%). The vitamin C content was 309.42 mg per 100 g fresh matter. The aqueous extract of noni was also evaluated regarding the quantity of total phenolic compounds, antioxidant activity, and lipid peroxidation inhibition capacity. The aqueous extract contained a moderate amount of phenolic compounds (47.96 ± 1.95 mg gallic acid equivalent/100 g extract). The concentrations of the aqueous extract of 72 and 120 µg/mL in diluent used for semen cryopreservation inhibited lipid peroxidation by 21.75% and 51.32%, respectively. There was no positive effect of the lowest concentration (24 µg/mL). The antioxidant activity index of noni was 33.33, corresponding to very strong antioxidant activity. The aqueous extract of noni exhibits very strong antioxidant activity and its addition to the diluent for semen cryopreservation at a concentration of 72 µg/mL is able to inhibit lipid peroxidation...

Motilidade espermática no sêmen suíno adicionado de gema de ovo de quatro linhagens de galinhas / Sperm motility in the swine semen added of egg yolk of four line of chickens

Objetivou-se testar a gema de ovo de quatro diferentes linhagens de galinhas, adicionada ao diluente Beltsville Thawing Solution (BTS), para verificar sua proteção sobre a célula espermática contra o choque térmico. Foram utilizados ejaculados de quatro reprodutores suínos com idade entre 12 e 24 meses, durante 8 semanas (n=32), em um delineamento experimental de blocos ao acaso e esquema fatorial 5x2 (cinco diluentes e duas temperaturas). Ao BTS, adicionou-se 2,5% de gema de ovo de galinhas das linhagens: Plymounth Rock Barrada (PRB); Postura Comercial (PC); Gigante Negra do Pescoço Pelado (GnPP) e Hubbart (Hubb). Os ejaculados foram submetidos aos seguintes tratamentos: 01. A (BTS-controle); 02. B (BTS+PRB); 03. C (BTS+PC); 04. D (BTS+GnPP); 05. E (BTS+Hubb) e avaliados, quanto ao vigor e motilidade, durante cinco dias. Valores do vigor espermático a 17 °C foram semelhantes entre os tratamentos até o D1. A partir do D2, melhores valores de vigor foram observados nos diluentes A e B. Já no sêmen a 4 °C, não foram verificadas diferenças, em relação ao vigor, entre os tratamentos durante o período avaliado. A partir do D0 observou-se queda nos valores de vigor, em todos os tratamentos. Na motilidade espermática a 17 °C, somente a partir do D2, o diluente A manteve maiores valores. No sêmen a 4 °C, não foram observadas diferenças significativas entre os diluentes testados, quanto à motilidade espermática. Concluiu-se que a gema de ovo na concentração de 2,5 % não conferiu proteção às células espermáticas contra o choque térmico, sendo necessários maiores estudos para uma definição da concentração ideal, que permita a manutenção da viabilidade espermática.

The objective of this study was to test the egg yolk of four different lines of chickens added to the Beltsville Thawing Solution and to verify its protection against the sperm cell thermal shock. Ejaculates of four boars aged between 12 and 24 months, during 8 weeks (n=32) in a randomized block design, in a 5x2 factorial scheme (five extenders and two temperatures). To the BTS extender was added 2.5% egg yolk from lines of chickens: Plymounth Rock Barrada (PRB); Business Posture (PC); Black Giant of the Peeled Neck (GnPP) and Hubbart (Hubb). The ejaculates were submitted to the following treatments: 01. A (BTS-control); 02. B (BTS+PRB); 03. C (BTS+PC); 04. D (BTS+GnPP); 05. E (BTS+Hubb) and evaluated for vigor and sperm motility for five days. Sperm vigor values at 17 °C were similar between treatments up to D1, since D2, the best vigour values were observed in the extenders A and B. In the case of semen stored at 4 °C, no differences were observed in relation to the vigor between the treatments during the evaluated period. From the D0, vigour values were observed in all treatments. In relation to the sperm motility at 17 °C, only from D2, the diluent A maintained higher values in relation to the other diluents. In the semen at 4 °C, no significant differences were observed between the extenders tested for sperm motility. It was concluded that 2.5% egg yolk did not protect the sperm cells against thermal shock, and further studies are needed to define the optimal concentration to maintain sperm viability.

Motilidade espermática no sêmen suíno adicionado de gema de ovo de quatro linhagens de galinhas / Sperm motility in the swine semen added of egg yolk of four line of chickens

Objetivou-se testar a gema de ovo de quatro diferentes linhagens de galinhas, adicionada ao diluente Beltsville Thawing Solution (BTS), para verificar sua proteção sobre a célula espermática contra o choque térmico. Foram utilizados ejaculados de quatro reprodutores suínos com idade entre 12 e 24 meses, durante 8 semanas (n=32), em um delineamento experimental de blocos ao acaso e esquema fatorial 5x2 (cinco diluentes e duas temperaturas). Ao BTS, adicionou-se 2,5% de gema de ovo de galinhas das linhagens: Plymounth Rock Barrada (PRB); Postura Comercial (PC); Gigante Negra do Pescoço Pelado (GnPP) e Hubbart (Hubb). Os ejaculados foram submetidos aos seguintes tratamentos: 01. A (BTS-controle); 02. B (BTS+PRB); 03. C (BTS+PC); 04. D (BTS+GnPP); 05. E (BTS+Hubb) e avaliados, quanto ao vigor e motilidade, durante cinco dias. Valores do vigor espermático a 17 °C foram semelhantes entre os tratamentos até o D1. A partir do D2, melhores valores de vigor foram observados nos diluentes A e B. Já no sêmen a 4 °C, não foram verificadas diferenças, em relação ao vigor, entre os tratamentos durante o período avaliado. A partir do D0 observou-se queda nos valores de vigor, em todos os tratamentos. Na motilidade espermática a 17 °C, somente a partir do D2, o diluente A manteve maiores valores. No sêmen a 4 °C, não foram observadas diferenças significativas entre os diluentes testados, quanto à motilidade espermática. Concluiu-se que a gema de ovo na concentração de 2,5 % não conferiu proteção às células espermáticas contra o choque térmico, sendo necessários maiores estudos para uma definição da concentração ideal, que permita a manutenção da viabilidade espermática.(AU)

The objective of this study was to test the egg yolk of four different lines of chickens added to the Beltsville Thawing Solution and to verify its protection against the sperm cell thermal shock. Ejaculates of four boars aged between 12 and 24 months, during 8 weeks (n=32) in a randomized block design, in a 5x2 factorial scheme (five extenders and two temperatures). To the BTS extender was added 2.5% egg yolk from lines of chickens: Plymounth Rock Barrada (PRB); Business Posture (PC); Black Giant of the Peeled Neck (GnPP) and Hubbart (Hubb). The ejaculates were submitted to the following treatments: 01. A (BTS-control); 02. B (BTS+PRB); 03. C (BTS+PC); 04. D (BTS+GnPP); 05. E (BTS+Hubb) and evaluated for vigor and sperm motility for five days. Sperm vigor values at 17 °C were similar between treatments up to D1, since D2, the best vigour values were observed in the extenders A and B. In the case of semen stored at 4 °C, no differences were observed in relation to the vigor between the treatments during the evaluated period. From the D0, vigour values were observed in all treatments. In relation to the sperm motility at 17 °C, only from D2, the diluent A maintained higher values in relation to the other diluents. In the semen at 4 °C, no significant differences were observed between the extenders tested for sperm motility. It was concluded that 2.5% egg yolk did not protect the sperm cells against thermal shock, and further studies are needed to define the optimal concentration to maintain sperm viability.(AU)

Atividade antioxidante do extrato aquoso de noni em diluente para congelação de sêmen ovino / Antioxidant activity of aqueous extract of noni in dilutent for ram semen cryopreservation

O noni (Morinda citrifolia L) é um fruto consumido no mundo por apresentar propriedades nutricionais e terapêuticas devido a grande quantidade de compostos fenólicos, o que desperta o interesse da comunidade científica. Com o intuito de buscar novas fontes naturais de antioxidantes objetivou-se avaliar o desempenho do noni em diluente para congelação de sêmen ovino. Foi utilizado um delineamento inteiramente casualizado com quatro tratamentos e três repetições por tratamento. Os tratamentos diferiram quanto à concentração do extrato aquoso do noni adicionado ao meio diluidor: controle, sem adição do extrato; e com três concentrações 24 µg/mL; 72 µg/mL; 120 µg/mL. Foram avaliadas as variáveis físicas e químicas do fruto maduro para acidez total (8,78), pH (4,12) e sólidos solúveis (8,18%). Para vitamina C, foi obtido 309,42 mg em 100 g de matéria fresca. O extrato aquoso do noni também foi avaliado quanto à quantificação de compostos fenólicos totais, atividade antioxidante e capacidade de inibição da peroxidação lipídica. O extrato aquoso do noni apresentou moderada quantidade de compostos fitoquímicos do tipo fenólicos de 47,96 ± 1,95 mg Eq. ácido gálico/100 g do extrato. A concentração de 72 e 120 µg/mL do extrato aquoso do noni inibiu a lipoperoxidação no meio diluidor para congelação de sêmen na ordem de 21,75% e 51,32%, respectivamente, e a menor concentração (24 µg/mL) não apresentou efeito positivo. O índice de atividade antioxidante do noni foi de 33,33, o que representa atividade antioxidante muito forte. O extrato aquoso do noni apresenta capacidade antioxidante muito forte e quando incluso ao meio diluidor para criopreservação de sêmen é capaz de inibir a lipoperoxidação a partir da concentração de 72 µg/mL...(AU)

Noni (Morinda citrifolia L.) is a fruit consumed worldwide because of its nutritional and therapeutic properties resulting from the large amount of phenolic compounds, which has aroused interest of the scientific community. In order to identify new natural sources of antioxidants, the objective of this study was to evaluate the performance of noni in diluent for ram semen cryopreservation. A completely randomized design consisting of four treatments and three repetitions per treatment was used. The treatments differed in terms of the concentration of the aqueous extract of noni added to the diluent: control, no addition of the extract, and three concentrations (24, 72, and 120 µg/mL). The physical and chemical variables of the mature fruit were evaluated: total acidity (8.78), pH (4.12), and soluble solids (8.18%). The vitamin C content was 309.42 mg per 100 g fresh matter. The aqueous extract of noni was also evaluated regarding the quantity of total phenolic compounds, antioxidant activity, and lipid peroxidation inhibition capacity. The aqueous extract contained a moderate amount of phenolic compounds (47.96 ± 1.95 mg gallic acid equivalent/100 g extract). The concentrations of the aqueous extract of 72 and 120 µg/mL in diluent used for semen cryopreservation inhibited lipid peroxidation by 21.75% and 51.32%, respectively. There was no positive effect of the lowest concentration (24 µg/mL). The antioxidant activity index of noni was 33.33, corresponding to very strong antioxidant activity. The aqueous extract of noni exhibits very strong antioxidant activity and its addition to the diluent for semen cryopreservation at a concentration of 72 µg/mL is able to inhibit lipid peroxidation...(AU)

AVALIAÇÃO IN VITRO E IN VIVO DO SÊMEN EQUINO SUBMETIDO A DIFERENTENTES TRATAMENTOS APÓS A DESCONGELAÇÃO

Nesta Tese, constituída de dois experimentos, objetivou-se testar, in vitro e in vivo, a adição de diferentes pós-diluentes ao sêmen equino descongelado e seus efeitos sobre a motilidade espermática e a atividade da acrosina imediatamente após o descongelamente e durante o teste de termoresistência (TTR). A avaliação in vivo foi realizada considerando-se a fertilidade de éguas artificialmente inseminadas. O sêmen foi envasado em palhetas de 4 mL, descongelado a 50°C por 40 segundos e incubado a 37ºC no TTR durante 90 e 120 minutos, respectivamente, no primeiro e no segundo experiemento. No primeiro adicionou-se a Solução Ringer e o Diluente Merk ao sêmen de dois reprodutores (R1 e R2). Somente a motilidade progressiva no sêmen do R2 decresceu (P<0.05), respectivamente, aos 60 e 90 minutos no sêmen do grupo Controle (14.3±7.7; 3.3±2.7) em relação ao acrescido do Diluente Merk (23.0±2.7; 10.0±0.0), não diferindo daquele acrescido da Solução Riger (20.0±5.0; 8.0±4.4). A motilidade total no sêmen de ambos os animais decresceu (P<0.05), respectivamente, aos 60 e 90 minutos no sêmen do grupo Controle (R1= 26.0±4.1 vs 7.0±2.7; R2= 20.0±3.5 vs 6.0±2.2) em relação ao acrescido da Solução Ringer (R1= 35.0±5.0 vs 19.0±6.5; R2= 32.0±3.7 vs 13.0±2.7) e do Diluente Merk (R1= 40.0±5.0 vs 23.0±6.7; R2= 38.0±5.7 vs 22.0±2.7). A atividade da acrosina no sêmen de ambos os animais não diferiu (P>0.05) entre os tratamentos, mas a atividade no sêmen do R1 foi superior (P<0.05) a do R2 em todas as avaliações no TTR. Imediatamente após o descongelamento e após 90 minutos do TTR, a atividade dessa enzima (%) no sêmen do grupo Controle foi, respectivamente, de 89.6±1.6 vs 81.4±1.8 (R1) e de 86.6±1.9 vs 73.8±3.5 (R2), no acrescido da Solução Ringer foi de 89.1±1.6 vs 81.4±1.3 (R1) e de 87.0±1.5 vs 74.2± (R2) e no acrescido do Diluente Merk foi de 89.2±1.3 vs 81.8±1.0 (R1) e de 86.9±1.6 vs 74.6±3.3 (R2). A prenhez (%) com o sêmen do grupo Controle foi de 50.0 (R1) e 20.0 (R2), com o acrescido da Solução Ringer foi de 50.0 (R1) e 30.0 (R2) e com o acrescido do Diluente Merk foi de 60.0 (R1) e 30.0 (R2) não havendo diferença (P>0.05) entre os tratamentos e entre os animais. No segundo experimento adicionou-se ao sêmen de 10 reprodutores, as soluções Fisiológica, Tyrode ou o Diluente de Congelamento sem conter glicerol. A motilidade progressiva decresceu (P<0.05) a partir de 30 minutos no sêmen descongelado (44.3±7.7 vs viii 33.6±11.6) e no da Solução Fisiológica (44.3±7.9 vs 35.4±11.5) e somente a partir de 60 minutos no sêmen contendo solução tyrode (44.4±8.1 vs 28.6±12.2) ou Diluente de Congelamento (44.4±8.1 vs 28.7±13.2). A motilidade total decresceu (P<0.05) a partir de 60 minutos no sêmen descongelado (53.1±6.1 vs 37.5±13.4) e no da Solução Fisiológica (53.2±6.0 vs 40.1±11.4) e somente a partir de 90 minutos no sêmen contendo Solução Tyrode (53.5±6.3 vs 36.8±12.5) ou Diluente de Congelamento (53.6±5.9 vs 37.9±14.3). A atividade da acrosina quantificada no início do TTR (92.5±6.2) somente decresceu (P<0.05) a partir de 60 minutos sem diferir (P>0.05) entre os tratamentos. Ao término do TTR, sua atividade no sêmen descongelado (71.8±9.9) também não diferiu (P>0.05) daquelas do sêmen diluído com Solução Fisiológica (70.2±9.2), Solução Tyrode (70.2±10.2) e Diluente de Congelamento (69.0±9.7). Os resultados de prenhez obtidos com a inseminação artificial utilizando o sêmen descongelado (37.8%) não diferiu (P<0.05) daqueles com o sêmen diluído em Solução Fisiológica (40.0%), Solução Tyrode (38.5%) ou Diluente de Congelamento (34.7%). Os resultados permitem concluir que a precisão diagnóstica da motilidade espermática é igualmente eficiente aquela da atividade da acrosina e que ambas podem ser utilizadas para predizer a capacidade fecundante dos espermatozóides. Ainda permitem concluir que a adição de pós-diluentes ao sêmen descongelado não contribui para aumentar fertilidade de éguas artificialmente inseminadas.

In this thesis, consisting of two experiments, aimed to test, in vitro and in vivo, the addition of different post-diluents to thawed equine semen and their effects on sperm motility and acrosine activity immediately after thawing and during the test. Resistance Resistance (TTR). In vivo evaluation was performed considering the fertility of artificially inseminated mares. Semen was packaged in 4 mL straws, thawed at 50 ° C for 40 seconds and incubated at 37 ° C in TTR for 90 and 120 minutes, respectively, in the first and second experiments. In the first, Ringer's Solution and Merk Diluent were added to the semen of two breeders (R1 and R2). Only the progressive motility in R2 semen decreased (P <0.05), respectively, at 60 and 90 minutes in the Control group semen (14.3 ± 7.7; 3.3 ± 2.7) in relation to the Merk Diluent plus (23.0 ± 2.7; 10.0 ± 0.0), not differing from that added with the Riger Solution (20.0 ± 5.0; 8.0 ± 4.4). The total semen motility of both animals decreased (P <0.05), respectively, at 60 and 90 minutes in the Control group semen (R1 = 26.0 ± 4.1 vs 7.0 ± 2.7; R2 = 20.0 ± 3.5 vs 6.0 ± 2.2) in increase of Ringer's Solution (R1 = 35.0 ± 5.0 vs 19.0 ± 6.5; R2 = 32.0 ± 3.7 vs 13.0 ± 2.7) and Merk Diluent (R1 = 40.0 ± 5.0 vs 23.0 ± 6.7; R2 = 38.0 ± 5.7 vs 22.0 ± 2.7). The acrosine activity in semen of both animals did not differ (P> 0.05) between treatments, but the activity in semen of R1 was higher (P <0.05) than of R2 in all TTR evaluations. Immediately after thawing and after 90 minutes of TTR, the activity of this enzyme (%) in the Control group semen was, respectively, 89.6 ± 1.6 vs 81.4 ± 1.8 (R1) and 86.6 ± 1.9 vs 73.8 ± 3.5 (R2). , plus Ringer's Solution was 89.1 ± 1.6 vs 81.4 ± 1.3 (R1) and 87.0 ± 1.5 vs 74.2 ± (R2) and plus Merk Diluent was 89.2 ± 1.3 vs 81.8 ± 1.0 (R1) and 86.9 ± 1.6 vs 74.6 ± 3.3 (R2). Pregnancy (%) with Control group semen was 50.0 (R1) and 20.0 (R2), with Ringer's Solution plus 50.0 (R1) and 30.0 (R2) and with Merk Diluent plus 60.0. (R1) and 30.0 (R2) with no difference (P> 0.05) between treatments and between animals. In the second experiment was added to the semen of 10 breeders, Physiological solutions, Tyrode or Freezing Diluent without glycerol. Progressive motility decreased (P <0.05) from 30 minutes in thawed semen (44.3 ± 7.7 vs 33.6 ± 11.6) and in Physiological Solution (44.3 ± 7.9 vs 35.4 ± 11.5) and only from 60 minutes in semen containing tyrode solution (44.4 ± 8.1 vs 28.6 ± 12.2) or Freezing Diluent (44.4 ± 8.1 vs 28.7 ± x 13.2). Total motility decreased (P <0.05) from 60 minutes in thawed semen (53.1 ± 6.1 vs 37.5 ± 13.4) and in Physiological Solution (53.2 ± 6.0 vs 40.1 ± 11.4) and only from 90 minutes in semen containing Tyrode Solution (53.5 ± 6.3 vs 36.8 ± 12.5) or Freezing Diluent (53.6 ± 5.9 vs 37.9 ± 14.3). Acrosine activity quantified at the onset of TTR (92.5 ± 6.2) only decreased (P <0.05) from 60 minutes without differing (P> 0.05) between treatments. At the end of TTR, its activity in thawed semen (71.8 ± 9.9) also did not differ (P> 0.05) from those of semen diluted with Physiological Solution (70.2 ± 9.2), Tyrode Solution (70.2 ± 10.2) and Freezing Diluent (69.0 ± 9.7). Pregnancy results obtained with artificial insemination using thawed semen (37.8%) did not differ (P <0.05) from those with semen diluted in Physiological Solution (40.0%), Tyrode Solution (38.5%) or Freezing Diluent (34.7%). ). The results allow us to conclude that the diagnostic accuracy of sperm motility is equally efficient as that of acrosine activity and that both can be used to predict sperm fertilization capacity. It is also concluded that the addition of post-diluents to thawed semen does not contribute to increase fertility of artificially inseminated mares.

EFEITO DA ASSOCIAÇÃO DIMETILDIOCTADECILAMÔNIO E HIDRÓXIDO DE ALUMÍNIO COMO ADJUVANTES INJETÁVEIS NA IMUNIZAÇÃO DA VACINA B19 EM BEZERRAS

O dimetildioctadecilamônio e o hidróxido de alumínio são potentes adjuvantes usados na imunização de animais e humanos que possibilitam aumentar a reposta imune do antígeno vacinal. O objetivo da pesquisa foi avaliar os efeitos da associação dimetildioctadecilamônio 5 (DDA) e hidróxido de alumínio como adjuvantes na resposta imune humoral em bezerras 6 vacinadas com B19. Foram vacinadas 89 bezerras bovinas, com idade entre três a oito meses, 7 que no grupo controle receberam a vacina B19 contendo a diluente água e o outro grupo 8 recebeu a vacina B19 com o adjuvante DDA e hidróxido de alumínio. Para analisar o perfil 9 sorológico das bezerras de ambos os grupos foram realizados os testes antígeno acidificado 10 tamponado corado com rosa bengala (AAT), 2-mercaptoetanol (2-ME) e soro aglutinação 11 lenta em tubos (SAT). As colheitas foram realizadas no dia zero (vacinação), D.30, D.60 e 12 D.90 subsequentemente a vacinação, nesses períodos as bezerras também foram pesadas e 13 observado se não houve alterações no local da vacinação. Nenhum animal foi reagente no dia 14 zero ao AAT. Com 30 dias pós-vacinal, 79% (34/45)das bezerras que receberam a vacina B19 15 contendo o DDA e hidróxido de alumínio estavam imune a Brucelose, enquanto que no grupo 16 controle 76,6% (34/49) das bezerras estavam imunes, pelo teste do AAT. Nos exames de 2-17 mercapto etanol e soro aglutinação lenta em tubos, os maiores títulos que ocorrerão foram em 18 1/100, no período de 60 dias após a vacinação para o grupo vacinado com o adjuvante DDA e 19 hidróxido de alumínio com a 37% (14/38). O peso das fêmeas não obteve correlação com a 20 vacina e as reações vacinais locais ocorreram com os dois adjuvantes. Conclui-se que o DDA 21 e o hidróxido de alumínio podem ser usados como adjuvantes na vacina B19, potencializando 22 a resposta imune humoral.

Dimethyldioctadecylammonium and aluminum hydroxide are potent adjuvants used in the immunization of animals and humans that make it possible to increase the immune response of the vaccine antigen. The objective of the research was to evaluate the effects of the association dimethyldioctadecylammonium (DDA) and aluminum hydroxide as adjuvants in the humoral immune response in B19 vaccinated calves. 89 bovine calves, aged between three and eight months, were vaccinated, which in the control group received the B19 vaccine containing water diluent and the other group received the B19 vaccine with the adjuvant DDA and aluminum hydroxide. To analyze the serological profile of the calves of both groups, the acidified antigen tests stained with cane rose (AAT), 2-mercaptoethanol (2-ME) and slow agglutination serum in tubes (SAT) were performed. The harvests were carried out on day zero (vaccination), D.30, D.60 and D.90 subsequent to vaccination, in these periods the calves were also weighed and observed if there were no changes at the vaccination site. No animals were reactive on day zero to AAT. At 30 days post-vaccination, 79% (34/45) of the calves that received the B19 vaccine containing DDA and aluminum hydroxide were immune to Brucellosis, whereas in the control group 76.6% (34/49) of the calves were immune by the AAT test. In the tests of 2-mercapto ethanol and serum slow agglutination in tubes, the highest titers that will occur were in 1/100, in the period of 60 days after vaccination for the group vaccinated with the adjuvant DDA and aluminum hydroxide with 37% ( 14/38). The weight of the females was not correlated with the vaccine and local vaccine reactions occurred with the two adjuvants. It is concluded that DDA and aluminum hydroxide can be used as adjuvants in the B19 vaccine, enhancing the humoral immune response.

Utilização do caseinato de sódio na congelação de sêmen ovino

A congelação de sêmen é uma ferramenta de grande importância na reprodução de animais domésticos, auxiliando na difusão do do material genético, preservando-o por tempo indeterminado, além do maior aproveitamento do uso de reprodutores com genética superior comprovada. Para que a congelação de sêmen seja eficiente e alcance resultados satisfatórios com a inseminação, utiliza-se no processo o emprego de diluentes, que tem como função proteger a célula contra o choque térmico e manter o espermatozoide viável até o momento da inseminação. O uso de frações de leite como meio diluidor tem se tornado muito conhecida e de grande importância no processo, usando, por exemplo, as micelas de caseína que conferem função de proteção da membrana plasmática e manutenção da viabilidade espermática. Levando em conta essas informações, este trabalho teve como objetivo avaliar a ação do caseinato de sódio nas características seminais pós descongelação do sêmen utilizando diluentes a base de gema de ovo (BB) e o mesmo diluente acrescido de caseinato de sódio 2% (BC).No experimento I, foram colhidos 3 ejaculados de 8 animais (n=24) por eletroejaculação, este sêmen foi divido em duas alíquotas, uma era diluída em meio comercial a base de gema de ovo e a outra alíquota diluída no mesmo meio mas acrescido de 2% de caseinato de sódio, em seguida foram envasadas em palhetas francesas com volume de 0,25 ml e refrigerado 4 horas á 5 °C em seguida congelado em nitrogênio líquido. Após a congelação as amostras foram avaliadas por analise computadorizada do movimento espermático (CASA), integridade de membranas plasmática e acrossomal e geração de anion superoxido e potencial mitocondrial por citometria de fluxo. Então submetidas a estresse termico por 90min e novamente avaliadas Para o experimento II foi realizado teste de fertilidade in vivo utilizando a técnica de inseminação artificial por laparoscopia em 100 fêmeas da raça Dorper e Sufolk, usando o sêmen congelado com os respectivos meios diluentes, de dois animais dentre os oito colhidos no experimento I, um com boa qualidade seminal pós-congelação e o outro com baixa qualidade seminal. Foi realizada estatística descritiva dos resultados e apresentado em média e erro padrão da média, para as avaliações da qualidade seminal utilizou-se o teste t seguido de Tukey quando apresentaram distribuição normal pelo Kolmogorov-Smirnoff, e quando não utilizou-se o teste de Friedman seguido de Dunn. Para a Fertilidade utilizou-se modelo de regressão logistica multivariada. Os resultados de cinética espermática apresentaram diferença estatística para os parâmetros de velocidade média de trajeto e velocidade curvilinear no grupo congelado com BotuBov e velocidade em linha reta e linearidade, o grupo acrescido de caseinato. Após o estresse térmico (T90) o BB manteve-se superior para os valores de VAP e VCL (P<0.05) e foi maior numericamente no VSL (P=0.06), enquanto o BC se manteve-se superior apenas no LIN (P<0.05).Nas avaliações por citometria de fluxo, foi observado logo após a descongelação que o BC foi superior nas células com membrana plasmática estabilizadas (P<0.05), apresentou maiores valores na porcentagem de células com alto potencial mitocondrial (P=0.08) e células com membrana plasmática e acrossomal integras (P=0.09), enquanto que na porcentagem de células com alta geração de anion superoxido, apresentou menores valores do que BB (P=0.07). Após o estresse térmico, o BC foi numericamente maior na porcentagem de células com alto potencial e mitocondrial e células com membrana plasmática e acrossomal integras (P=0.06). No teste de fertilidade não houve diferença estatística.Concluiu-se que apesar de apresentarem apenas algumas diferenças estatísticas, os parâmetros de cinética espermática mostraram-se favoráveis ao grupo contendo caseínato de sódio em sua composição, assim como no teste de fertilidade, demonstrando que o uso do caseinato de sódio no meio diluente pode ser uma alternativa favorável para a criopreservação do sêmen na espécie ovina.

The reproduction of domestic animals, helping in the diffusion of the genetic material, preserving it indefinitely, in addition to the greater use of reproducers with proven superior genetics. In order for semen freezing to be efficient and achieve satisfactory results with insemination, the use of diluents is used in the process, which has the function of protecting the cell against thermal shock and keeping the sperm viable until the time of insemination. The use of milk fractions as a diluting medium has become very well known and of great importance in the process, using, for example, the casein micelles that provide a protective function of the plasma membrane and maintenance of sperm viability. Taking this information into account, this study aimed to evaluate the action of sodium caseinate on semen characteristics after semen thawed using egg yolk (BB) diluents and the same diluent plus 2% sodium caseinate (BC) In experiment I, 3 ejaculates were collected from 8 animals (n = 24) by electroejaculation, this semen was divided into two aliquots, one was diluted in commercial medium based on egg yolk and the other diluted in the same medium but added of 2% sodium caseinate, then they were packaged in French straws with a volume of 0.25 ml and refrigerated 4 hours at 5 ° C then frozen in liquid nitrogen. After freezing, the samples were evaluated by computerized analysis of sperm movement (CASA), integrity of plasma and acrosomal membranes and generation of superoxide anion and mitochondrial potential by flow cytometry. Then subjected to heat stress for 90 minutes and again evaluated. For experiment II, an in vivo fertility test was performed using the artificial insemination technique by laparoscopy on 100 Dorper and Sufolk females, using frozen semen with the respective diluents, of two animals among the eight harvested in experiment I, one with good seminal quality after freezing and the other with low seminal quality. Descriptive statistics of the results were performed and presented as mean and standard error of the mean. For the evaluations of seminal quality, the t test was used followed by Tukey when they presented normal distribution by the Kolmogorov-Smirnoff, and when the Friedman test was not used. followed by Dunn. For fertility, a multivariate logistic regression model was used. The results of sperm kinetics showed statistical difference for the parameters of mean path speed and curvilinear speed in the group frozen with BotuBov and speed in a straight line and linearity, the group plus caseinate. After thermal stress (T90), BB remained higher for VAP and VCL values (P <0.05) and was higher numerically in VSL (P = 0.06), while BC remained higher only in LIN (P <0.05). In evaluations by flow cytometry, it was observed right after thawing that BC was superior in cells with stabilized plasma membrane (P <0.05), presented higher values in the percentage of cells with high mitochondrial potential (P = 0.08) and cells with integral plasma and acrosomal membrane (P = 0.09), while in the percentage of cells with high generation of superoxide anion, it presented lower values than BB (P = 0.07). After thermal stress, BC was numerically higher in the percentage of cells with high potential and mitochondrial and cells with integral plasma and acrosomal membrane (P = 0.06). In the fertility test, there was no statistical difference. It was concluded that despite having only a few statistical differences, the parameters of sperm kinetics were favorable to the group containing sodium caseinate in their composition, as well as in the fertility test, demonstrating that the use of sodium caseinate in diluent medium may be a favorable alternative for cryopreservation of semen in sheep.

CRIOPRESERVAÇÃO DE SÊMEN CAPRINO EM MEIO À BASE DE ÁGUA DE COCO EM PÓ ADICIONADO DE DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE ACETATO DE ALFA TOCOFEROL

O processo de criopreservação causa danos aos espermatozoides, tais como o estresse oxidativo, com a formação de espécies reativas de oxigênio. O trabalho teve como objetivo avaliar a adição de diferentes concentrações de acetato de alfa tocoferol (vit. E) ao meio à base de água de coco em pó (ACP-101c). Foram realizadas oito coletas de sêmen de cinco bodes, com auxílio de vagina artificial; em seguida foram reunidos em um pool, dividido em quatro alíquotas iguais, e diluídas em um passo nos diluentes: T1 controle (ACP-101c); T2 (ACP-101c+0,5% vit.E ); T3 (ACP-101c+1% vit. E); e T4 (ACP-101c+1,5% vit. E). As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5ml e submetidas a uma curva de refrigeração de -1,07°C/min., estabilizadas a 4°C por 1h, congeladas em vapor de nitrogênio (-60°C) e armazenadas em nitrogênio líquido (-196°C). Após a descongelação, as amostras foram avaliadas quanto aos seguintes parâmetros: motilidade total (MT), motilidade progressiva (MP), viabilidade, hiposmótico (HOST), fragmentação do DNA, e atividade mitocondrial (p<0,05). Nas amostras descongeladas, a MT no T3 (65%) foi superior ao T1 (54,5%) e T4 (55,8%), e semelhante a T2 (59,9%). A MP no T3 foi superior aos demais tratamentos, com taxa 47,3%. Na viabilidade, T3 (96,3%) foi superior ao T1 (84,6%) e semelhante aos demais tratamentos. Quanto aos parâmetros HOST e atividade mitocondrial, não houve diferença entre os tratamentos. Pode-se concluir que a criopreservação do sêmen caprino em diluente ACP-101c adicionado de 1% de acetato de alfa tocoferol (vit. E) melhora a qualidade espermática pós-descongelação, com melhores percentuais espermáticos de motilidade total, motilidade progressiva, viabilidade e integridade de DNA.

The cryopreservation process causes damage to the sperm, such as oxidative stress, with the formation of reactive oxygen species. The objective of this work was to evaluate the addition of different concentrations of vitamin E to the powdered coconut water-based medium (ACP-101c). Eight collections of five goats were performed, with the aid of an artificial vagina; then assembled in a pool, divided into four equal aliquots, and diluted in one step in the extenders: T1-control (ACP-101c); T2 (ACP-101c + 0,5% vit. E); T3 (ACP-101c + 1% vit. E); and T4 (ACP-101c + 1.5% vit. E). The samples were packed in 0.5 ml straws and subjected to a refrigeration curve of -1.07 °C/min, stabilized at 4 °C for 1 hour, frozen in nitrogen vapor (-60 °C) and stored in liquid nitrogen (-196 °C). After thawing, the samples were evaluated for the following parameters: total motility (MT), progressive motility (MP), viability, hyposmotic (HOST), DNA fragmentation, and mitochondrial activity (p < 0.05). In thawed samples, MT in T3 (65%) was superior to T1 (54.5%) and T4 (55.8%), and similar to T2 (59.9%). MP in T3 was higher than the other treatments, with rate 47.3%. In viability, T3 (96.3%) was superior to T1 (84.6%) and similar to other treatments. Regarding HOST parameters and mitochondrial activity, there was no difference between treatments. It can be concluded that cryopreservation of goat semen in ACP-101c diluent added with 1% alpha tocopherol acetate (vit E) improves post-thawing sperm quality, with better sperm motility, progressive motility, viability and integrity of DNA.