The use of sugar beet pulp in pig diet to control skatole analysed by HPLC quantification method

This study aimed to determine the efficacy of a finishing diet added with sugar beet pulp to reduce backfat skatole of entire male pigs, using the optimised high-performance liquid chromatographic (HPLC) method. The study comprised 72 males Pietrain (Large White × Landrace), divided into two groups of 36 animals each. Pigs in group A (treatment) were fed a supplemented formula (addition of 10 % beet pulp). while animals in group B (control) received a commercial feed, both for a period of 14 days before slaughter. The isocratic HPLC method achieved the chromatographic separation of indolic compounds in approximately 3 min. Skatole was significantly lower ( p = 0.002) in group A, showing that beet root supplementation reduced skatole levels in pig fat. In addition, the optimised HPLC method was reliable, less time-consuming, and showed a resolution suitable for small amounts of skatole.(AU)

Quality of sweet corn seeds treated before and after storage / Qualidade de sementes de milho doce tratadas antes e após armazenamento

This work aims to evaluate the effect of industrial treatment with different chemicals and also seed sizes on the physiological behavior of sweet corn in addition to evaluating the content of active ingredients of insecticides before and three months after storage. Four lots of a single sweet corn cross hybrid (L1, L2, L3 and L4) and different sieves (S1, S2 and S3) were carried out in two experiments. Experiment 1: industrial seed treatment, T1 = untreated seeds (control), T2 = Maxim Advanced®, T3 = CruiserⓇ 350 FS and T4 = PonchoⓇ. Experiment 2: quantification of the content of active ingredients, commercial products Cruiser® 350 FS and Poncho and the distribution efficiency was measured by HPLC-UV. The results showed that industrial seed treatment with Maxim Advanced®, CruiserⓇ 350 FS and PonchoⓇ can be carried out three months before sowing without damaging sweet corn seeds. HPLC is efficient to quantify the content of active ingredients in sweet corn seeds treated with Cruiser 350 FS and PonchoⓇ. The industrial seed treatment was calibrated for each batch, which is justified by the different amounts of active ingredient between batches and seed sizes.

Este trabalho tem por objetivo avaliar efeito do tratamento industrial com diferentes produtos químicos e também tamanhos de sementes sobre o comportamento fisiológico do milho doce além de avaliar o teor de ingredientes ativos dos inseticidas antes e três meses após o armazenamento. Quatro lotes de um único híbrido cruzado de milho doce (L1, L2, L3 e L4) e diferentes peneiras (S1, S2 e $3) foram realizados dois experimentos. Experimento 1: tratamento industrial de sementes, T1 = sementes não tratadas (controle), T2 = Maxim Advanced®, T3 = Cruiser 350 FS e T4 = Poncho®. Experimento 2: quantificação do teor de princípios ativos, produtos comerciais CruiserⓇ 350 FS e Poncho e a eficiência de distribuição foi medida por HPLC-UV. Os resultados mostraram que o tratamento de sementes industriais com Maxim Advanced®, CruiserⓇ 350 FS e Poncho® pode ser realizado três meses antes da semeadura sem danificar as sementes de milho doce. A HPLC é eficiente para quantificar o conteúdo de ingredientes ativos em sementes de milho doce tratadas com CruiserⓇ 350 FS e Poncho®. O tratamento industrial de sementes foi calibrado para cada lote, o que se justifica pelas diferentes quantidades de ingrediente ativo entre os lotes e os tamanhos das sementes.

Phytochemical characterization, and antioxidant and antibacterial activities of the hydroethanolic extract of Anadenanthera peregrina stem bark / Caracterização fitoquímica, atividade antioxidante e antibacteriana do extrato hidroetanólico de cascas do caule de Anadenanthera peregrina

The Brazilian Cerrado biome consists of a great variety of endemic species with several bioactive compounds, and Anadenanthera peregrina (L.) Speg is a promising species. In this study, we aimed to perform phytochemical characterization and evaluate the antioxidant and antibacterial activities against Staphylococcus aureus and Escherichia coli of the hydroethanolic extract of A. peregrina stem bark. The barks were collected in the Botanical Garden of Goiânia, Brazil. The hydroethanolic extract was obtained by percolation and subjected to physicochemical screening, total phenolic content estimation, high-performance liquid chromatography (HPLC) fingerprinting, and antioxidant (IC50 values were calculated for the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl assay - DPPH) and antibacterial activity determination. The pH of the extract was 5.21 and density was 0.956 g/cm3. The phytochemical screening indicated the presence of cardiac glycosides, organic acids, reducing sugars, hemolytic saponins, phenols, coumarins, condensed tannins, flavonoids, catechins, depsides, and depsidones derived from benzoquinones. The extract showed intense hemolytic activity. The total phenolic content was 6.40 g GAE 100 g-¹. The HPLC fingerprinting analysis revealed the presence of gallic acid, catechin, and epicatechin. We confirmed the antioxidant activity of the extract. Furthermore, the extract did not inhibit the growth of E. coli colonies at any volume tested, but there were halos around S. aureus colonies at all three volumes tested. These results contribute to a better understanding of the chemical composition of A. peregrina stem bark and further support the medicinal applications of this species.

O bioma Cerrado brasileiro apresenta em uma grande variedade de espécies endêmicas com diversos compostos bioativos, e Anadenanthera peregrina (L.) Speg é uma espécie promissora. Neste estudo, objetivamos realizar a caracterização fitoquímica e avaliar as atividades antioxidantes e antibacterianas contra Staphylococcus aureus e Escherichia coli do extrato hidroetanólico de cascas do caule de A. peregrina. As cascas foram coletadas no Jardim Botânico de Goiânia, Brasil. O extrato hidroetanólico foi obtido por percolação e submetido a triagem físico química, estimativa de conteúdo fenólico total, impressão digital por cromatografia líquida de alta eficiência(HPLC) e determinação da atividade antioxidante (valores de IC50 foram calculados para o ensaio 2,2-difenil-1-picril-hidrazil) e antibacteriana. O pH do extrato foi de 5,21 e a densidade foi de 0,956 g/cm3. A triagem fitoquímica indicou a presença de glicosídeos cardíacos, ácidos orgânicos, açúcares redutores, saponinas hemolíticas, fenóis, cumarinas, taninos condensados, flavonóides, catequinas, depsídios e depsidonas derivados de benzoquinonas. O extrato mostrou intensa atividade hemolítica. O conteúdo fenólico total foi de 6,40 g de GAE 100 g-1. A análise por impressão digital por HPLC revelou a presença de ácido gálico, catequina e epicatequina. Confirmamos a atividade antioxidante do extrato. Além disso, o extrato não inibiu o crescimento de colônias de E. coli em nenhum volume testado, mas houve halos em torno das colônias de S. aureus nos três volumes testados. Estes resultados contribuem para uma melhor compreensão da composição química da casca de A. peregrina e apoia ainda mais as aplicações medicinais desta espécie.

Phytochemical characterization, and antioxidant and antibacterial activities of the hydroethanolic extract of Anadenanthera peregrina stem bark

Abstract The Brazilian Cerrado biome consists of a great variety of endemic species with several bioactive compounds, and Anadenanthera peregrina (L.) Speg is a promising species. In this study, we aimed to perform phytochemical characterization and evaluate the antioxidant and antibacterial activities against Staphylococcus aureus and Escherichia coli of the hydroethanolic extract of A. peregrina stem bark. The barks were collected in the Botanical Garden of Goiânia, Brazil. The hydroethanolic extract was obtained by percolation and subjected to physicochemical screening, total phenolic content estimation, high-performance liquid chromatography (HPLC) fingerprinting, and antioxidant (IC50 values were calculated for the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl assay - DPPH) and antibacterial activity determination. The pH of the extract was 5.21 and density was 0.956 g/cm3. The phytochemical screening indicated the presence of cardiac glycosides, organic acids, reducing sugars, hemolytic saponins, phenols, coumarins, condensed tannins, flavonoids, catechins, depsides, and depsidones derived from benzoquinones. The extract showed intense hemolytic activity. The total phenolic content was 6.40 g GAE 100 g-1. The HPLC fingerprinting analysis revealed the presence of gallic acid, catechin, and epicatechin. We confirmed the antioxidant activity of the extract. Furthermore, the extract did not inhibit the growth of E. coli colonies at any volume tested, but there were halos around S. aureus colonies at all three volumes tested. These results contribute to a better understanding of the chemical composition of A. peregrina stem bark and further support the medicinal applications of this species.

Resumo O bioma Cerrado brasileiro apresenta em uma grande variedade de espécies endêmicas com diversos compostos bioativos, e Anadenanthera peregrina (L.) Speg é uma espécie promissora. Neste estudo, objetivamos realizar a caracterização fitoquímica e avaliar as atividades antioxidantes e antibacterianas contra Staphylococcus aureus e Escherichia coli do extrato hidroetanólico de cascas do caule de A. peregrina. As cascas foram coletadas no Jardim Botânico de Goiânia, Brasil. O extrato hidroetanólico foi obtido por percolação e submetido a triagem físico-química, estimativa de conteúdo fenólico total, impressão digital por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e determinação da atividade antioxidante (valores de IC50 foram calculados para o ensaio 2,2-difenil-1-picril-hidrazil) e antibacteriana. O pH do extrato foi de 5,21 e a densidade foi de 0,956 g/cm3. A triagem fitoquímica indicou a presença de glicosídeos cardíacos, ácidos orgânicos, açúcares redutores, saponinas hemolíticas, fenóis, cumarinas, taninos condensados, flavonóides, catequinas, depsídios e depsidonas derivados de benzoquinonas. O extrato mostrou intensa atividade hemolítica. O conteúdo fenólico total foi de 6,40 g de GAE 100 g-1. A análise por impressão digital por HPLC revelou a presença de ácido gálico, catequina e epicatequina. Confirmamos a atividade antioxidante do extrato. Além disso, o extrato não inibiu o crescimento de colônias de E. coli em nenhum volume testado, mas houve halos em torno das colônias de S. aureus nos três volumes testados. Estes resultados contribuem para uma melhor compreensão da composição química da casca de A. peregrina e apoia ainda mais as aplicações medicinais desta espécie.

Phytochemical characterization, and antioxidant and antibacterial activities of the hydroethanolic extract of Anadenanthera peregrina stem bark / Caracterização fitoquímica, atividade antioxidante e antibacteriana do extrato hidroetanólico de cascas do caule de Anadenanthera peregrina

The Brazilian Cerrado biome consists of a great variety of endemic species with several bioactive compounds, and Anadenanthera peregrina (L.) Speg is a promising species. In this study, we aimed to perform phytochemical characterization and evaluate the antioxidant and antibacterial activities against Staphylococcus aureus and Escherichia coli of the hydroethanolic extract of A. peregrina stem bark. The barks were collected in the Botanical Garden of Goiânia, Brazil. The hydroethanolic extract was obtained by percolation and subjected to physicochemical screening, total phenolic content estimation, high-performance liquid chromatography (HPLC) fingerprinting, and antioxidant (IC50 values were calculated for the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl assay - DPPH) and antibacterial activity determination. The pH of the extract was 5.21 and density was 0.956 g/cm3. The phytochemical screening indicated the presence of cardiac glycosides, organic acids, reducing sugars, hemolytic saponins, phenols, coumarins, condensed tannins, flavonoids, catechins, depsides, and depsidones derived from benzoquinones. The extract showed intense hemolytic activity. The total phenolic content was 6.40 g GAE 100 g-1. The HPLC fingerprinting analysis revealed the presence of gallic acid, catechin, and epicatechin. We confirmed the antioxidant activity of the extract. Furthermore, the extract did not inhibit the growth of E. coli colonies at any volume tested, but there were halos around S. aureus colonies at all three volumes tested. These results contribute to a better understanding of the chemical composition of A. peregrina stem bark and further support the medicinal applications of this species.

O bioma Cerrado brasileiro apresenta em uma grande variedade de espécies endêmicas com diversos compostos bioativos, e Anadenanthera peregrina (L.) Speg é uma espécie promissora. Neste estudo, objetivamos realizar a caracterização fitoquímica e avaliar as atividades antioxidantes e antibacterianas contra Staphylococcus aureus e Escherichia coli do extrato hidroetanólico de cascas do caule de A. peregrina. As cascas foram coletadas no Jardim Botânico de Goiânia, Brasil. O extrato hidroetanólico foi obtido por percolação e submetido a triagem físicoquímica, estimativa de conteúdo fenólico total, impressão digital por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e determinação da atividade antioxidante (valores de IC50 foram calculados para o ensaio 2,2-difenil-1-picril-hidrazil) e antibacteriana. O pH do extrato foi de 5,21 e a densidade foi de 0,956 g/cm3. A triagem fitoquímica indicou a presença de glicosídeos cardíacos, ácidos orgânicos, açúcares redutores, saponinas hemolíticas, fenóis, cumarinas, taninos condensados, flavonóides, catequinas, depsídios e depsidonas derivados de benzoquinonas. O extrato mostrou intensa atividade hemolítica. O conteúdo fenólico total foi de 6,40 g de GAE 100 g-1. A análise por impressão digital por HPLC revelou a presença de ácido gálico, catequina e epicatequina. Confirmamos a atividade antioxidante do extrato. Além disso, o extrato não inibiu o crescimento de colônias de E. coli em nenhum volume testado, mas houve halos em torno das colônias de S. aureus nos três volumes testados. Estes resultados contribuem para uma melhor compreensão da composição química da casca de A. peregrina e apoia ainda mais as aplicações medicinais desta espécie.

Phytochemical characterization, and antioxidant and antibacterial activities of the hydroethanolic extract of Anadenanthera peregrina stem bark / Caracterização fitoquímica, atividade antioxidante e antibacteriana do extrato hidroetanólico de cascas do caule de Anadenanthera peregrina

The Brazilian Cerrado biome consists of a great variety of endemic species with several bioactive compounds, and Anadenanthera peregrina (L.) Speg is a promising species. In this study, we aimed to perform phytochemical characterization and evaluate the antioxidant and antibacterial activities against Staphylococcus aureus and Escherichia coli of the hydroethanolic extract of A. peregrina stem bark. The barks were collected in the Botanical Garden of Goiânia, Brazil. The hydroethanolic extract was obtained by percolation and subjected to physicochemical screening, total phenolic content estimation, high-performance liquid chromatography (HPLC) fingerprinting, and antioxidant (IC50 values were calculated for the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl assay - DPPH) and antibacterial activity determination. The pH of the extract was 5.21 and density was 0.956 g/cm3. The phytochemical screening indicated the presence of cardiac glycosides, organic acids, reducing sugars, hemolytic saponins, phenols, coumarins, condensed tannins, flavonoids, catechins, depsides, and depsidones derived from benzoquinones. The extract showed intense hemolytic activity. The total phenolic content was 6.40 g GAE 100 g-¹. The HPLC fingerprinting analysis revealed the presence of gallic acid, catechin, and epicatechin. We confirmed the antioxidant activity of the extract. Furthermore, the extract did not inhibit the growth of E. coli colonies at any volume tested, but there were halos around S. aureus colonies at all three volumes tested. These results contribute to a better understanding of the chemical composition of A. peregrina stem bark and further support the medicinal applications of this species.(AU)

O bioma Cerrado brasileiro apresenta em uma grande variedade de espécies endêmicas com diversos compostos bioativos, e Anadenanthera peregrina (L.) Speg é uma espécie promissora. Neste estudo, objetivamos realizar a caracterização fitoquímica e avaliar as atividades antioxidantes e antibacterianas contra Staphylococcus aureus e Escherichia coli do extrato hidroetanólico de cascas do caule de A. peregrina. As cascas foram coletadas no Jardim Botânico de Goiânia, Brasil. O extrato hidroetanólico foi obtido por percolação e submetido a triagem físico química, estimativa de conteúdo fenólico total, impressão digital por cromatografia líquida de alta eficiência(HPLC) e determinação da atividade antioxidante (valores de IC50 foram calculados para o ensaio 2,2-difenil-1-picril-hidrazil) e antibacteriana. O pH do extrato foi de 5,21 e a densidade foi de 0,956 g/cm3. A triagem fitoquímica indicou a presença de glicosídeos cardíacos, ácidos orgânicos, açúcares redutores, saponinas hemolíticas, fenóis, cumarinas, taninos condensados, flavonóides, catequinas, depsídios e depsidonas derivados de benzoquinonas. O extrato mostrou intensa atividade hemolítica. O conteúdo fenólico total foi de 6,40 g de GAE 100 g-1. A análise por impressão digital por HPLC revelou a presença de ácido gálico, catequina e epicatequina. Confirmamos a atividade antioxidante do extrato. Além disso, o extrato não inibiu o crescimento de colônias de E. coli em nenhum volume testado, mas houve halos em torno das colônias de S. aureus nos três volumes testados. Estes resultados contribuem para uma melhor compreensão da composição química da casca de A. peregrina e apoia ainda mais as aplicações medicinais desta espécie.(AU)

Cytotoxicity and antioxidant activity of goldenberry extracts obtained with high intensity ultrasound / Citotoxicidade e atividade antioxidante de extratos de goldenberry obtidos com ultrassom de alta intensidade

The high intensity ultrasound-assisted extraction (HIU) is one of the most simple, quick and efficient techniques for the extraction of phenolic and other antioxidant compounds from plants. This is the first application of HIU for the extraction of these compounds from goldenberry fruit. The HIU and conventional extraction techniques showed similar results regarding to phenolic compounds and antioxidant capacity. However, the time required for HIU extraction (5min) was 24 times lower than conventional extraction (120min). Phenolic compounds reported were chlorogenic acid, caffeic acid and rutin. In vitro cytotoxicity assays were used for evaluation of extracts and the results showed that in a wide range of concentration, the extract maintains cell viability, thus indicating the possibility to use it as food with safety.(AU)

A extração assistida com ultrassom de alta intensidade (HIU) é uma das técnicas mais simples, rápidas e eficientes na extração de compostos fenólicos e antioxidantes de plantas. Este trabalho foi o primeiro a utilizar HIU na extração destes compostos presentes na fruta goldenberry. As técnicas HIU e extração convencional apresentaram resultados semelhantes com relação aos compostos fenólicos e capacidade antioxidante. Entretanto, o tempo necessário na HIU (5min) foi 24 vezes menor que na extração convencional (120min). Os compostos fenólicos encontrados foram ácido clorogênico, ácido cafeico e rutina. Ensaios de citotoxicidade in vitro foram usados para avaliação dos extratos e os resultados demonstraram que, em ampla faixa de concentração, o extrato mantém a viabilidade celular, indicando assim possível segurança para utilização em alimentos.(AU)

Improved method for diagnosis of Nerium oleander poisoning in necropsy tissues / Método aprimorado para diagnóstico da intoxicação por Nerium oleander em tecidos de necropsia

Nerium oleander is an ornamental cardiotoxic plant found in tropical and subtropical areas of the World. Its toxicity is related to the content of cardioactive glycosides, mainly oleandrin, found throughout the plant. The present study aimed to describe a new and improved method for oleandrin detection in tissue samples. The determination of oleandrin was made after extraction with a modified QuEChERS technique and measurement by UFLC-MS/MS. A total of 36 guinea pigs (Cavia porcellus) were distributed into 3 groups (n=12): control group that received only water orally (CON), and two treated groups that received hydroalcoholic oleander extract at doses of 150mg.kg-1 (OLE 150) and 300mg.kg-1 (OLE 300) in single oral dose. After three hours, fragments of heart, kidneys, liver and brain were collected for determination of oleandrin levels. The extraction and chromatographic procedures were effective for oleandrin detection and quantification in tissues, with retention time of 1.2 min and detection limit of 0.001μg g-1. The chromatographic analysis of treated guinea pigs indicated that oleandrin is distributed equally among the analyzed tissues. The developed methodology is a reliable, effective and rapid form of diagnosis of N. oleander poisoning based on necropsy tissue samples.(AU)

Nerium oleander é uma planta cardiotóxica ornamental encontrada em áreas tropicais e subtropicais do mundo. Sua toxicidade é relacionada á presença de glicosídeos cardioativos, principalmente a oleandrina, encontrada em toda a planta. O presente estudo objetiva descrever um novo e aprimorado método para detecção da oleandrina em amostras de tecido. A determinação da oleandrina foi feita após extração utilizando técnica modificada de QuEChERS e mensuração por UFLC-MS/MS. Um total de 36 cobaios (Cavia porcellus) foi distribuído em três grupos (n=12): grupo controle que recebeu apenas água por via oral (CON), e dois grupos tratados que receberam extrato hidroalcóolico de oleander nas doses de 150mg.kg-1 (OLE 150) e 300mg.kg-1 (OLE 300) em uma única dose oral. Após três horas, fragmentos do coração, rins, fígado e cérebro foram coletados para determinação dos níveis de oleandrina. A extração e procedimentos cromatográficos foram eficientes na detecção e quantificação da oleandrina nos tecidos, com tempo de retenção de 1,2min e limite de detecção de 0,001μg g-1. A análise cromatográfica dos animais tratados indicou que a oleandrina é distribuída de forma equalizada pelos tecidos analisados. A metodologia desenvolvida representa uma forma de diagnóstica segura, efetiva e rápida da intoxicação por N. oleander a partir de amostras de tecidos de necropsia.(AU)

Improved method for diagnosis of Nerium oleander poisoning in necropsy tissues / Método aprimorado para diagnóstico da intoxicação por Nerium oleander em tecidos de necropsia

Nerium oleander is an ornamental cardiotoxic plant found in tropical and subtropical areas of the World. Its toxicity is related to the content of cardioactive glycosides, mainly oleandrin, found throughout the plant. The present study aimed to describe a new and improved method for oleandrin detection in tissue samples. The determination of oleandrin was made after extraction with a modified QuEChERS technique and measurement by UFLC-MS/MS. A total of 36 guinea pigs (Cavia porcellus) were distributed into 3 groups (n=12): control group that received only water orally (CON), and two treated groups that received hydroalcoholic oleander extract at doses of 150mg.kg-1 (OLE 150) and 300mg.kg-1 (OLE 300) in single oral dose. After three hours, fragments of heart, kidneys, liver and brain were collected for determination of oleandrin levels. The extraction and chromatographic procedures were effective for oleandrin detection and quantification in tissues, with retention time of 1.2 min and detection limit of 0.001μg g-1. The chromatographic analysis of treated guinea pigs indicated that oleandrin is distributed equally among the analyzed tissues. The developed methodology is a reliable, effective and rapid form of diagnosis of N. oleander poisoning based on necropsy tissue samples.(AU)

Nerium oleander é uma planta cardiotóxica ornamental encontrada em áreas tropicais e subtropicais do mundo. Sua toxicidade é relacionada á presença de glicosídeos cardioativos, principalmente a oleandrina, encontrada em toda a planta. O presente estudo objetiva descrever um novo e aprimorado método para detecção da oleandrina em amostras de tecido. A determinação da oleandrina foi feita após extração utilizando técnica modificada de QuEChERS e mensuração por UFLC-MS/MS. Um total de 36 cobaios (Cavia porcellus) foi distribuído em três grupos (n=12): grupo controle que recebeu apenas água por via oral (CON), e dois grupos tratados que receberam extrato hidroalcóolico de oleander nas doses de 150mg.kg-1 (OLE 150) e 300mg.kg-1 (OLE 300) em uma única dose oral. Após três horas, fragmentos do coração, rins, fígado e cérebro foram coletados para determinação dos níveis de oleandrina. A extração e procedimentos cromatográficos foram eficientes na detecção e quantificação da oleandrina nos tecidos, com tempo de retenção de 1,2min e limite de detecção de 0,001μg g-1. A análise cromatográfica dos animais tratados indicou que a oleandrina é distribuída de forma equalizada pelos tecidos analisados. A metodologia desenvolvida representa uma forma de diagnóstica segura, efetiva e rápida da intoxicação por N. oleander a partir de amostras de tecidos de necropsia.(AU)

Improved method for diagnosis of Nerium oleander poisoning in necropsy tissues

ABSTRACT: Nerium oleander is an ornamental cardiotoxic plant found in tropical and subtropical areas of the World. Its toxicity is related to the content of cardioactive glycosides, mainly oleandrin, found throughout the plant. The present study aimed to describe a new and improved method for oleandrin detection in tissue samples. The determination of oleandrin was made after extraction with a modified QuEChERS technique and measurement by UFLC-MS/MS. A total of 36 guinea pigs (Cavia porcellus) were distributed into 3 groups (n=12): control group that received only water orally (CON), and two treated groups that received hydroalcoholic oleander extract at doses of 150mg.kg-1 (OLE 150) and 300mg.kg-1 (OLE 300) in single oral dose. After three hours, fragments of heart, kidneys, liver and brain were collected for determination of oleandrin levels. The extraction and chromatographic procedures were effective for oleandrin detection and quantification in tissues, with retention time of 1.2 min and detection limit of 0.001g g-1. The chromatographic analysis of treated guinea pigs indicated that oleandrin is distributed equally among the analyzed tissues. The developed methodology is a reliable, effective and rapid form of diagnosis of N. oleander poisoning based on necropsy tissue samples.

RESUMO: Nerium oleander é uma planta cardiotóxica ornamental encontrada em áreas tropicais e subtropicais do mundo. Sua toxicidade é relacionada á presença de glicosídeos cardioativos, principalmente a oleandrina, encontrada em toda a planta. O presente estudo objetiva descrever um novo e aprimorado método para detecção da oleandrina em amostras de tecido. A determinação da oleandrina foi feita após extração utilizando técnica modificada de QuEChERS e mensuração por UFLC-MS/MS. Um total de 36 cobaios (Cavia porcellus) foi distribuído em três grupos (n=12): grupo controle que recebeu apenas água por via oral (CON), e dois grupos tratados que receberam extrato hidroalcóolico de oleander nas doses de 150mg.kg-1 (OLE 150) e 300mg.kg-1 (OLE 300) em uma única dose oral. Após três horas, fragmentos do coração, rins, fígado e cérebro foram coletados para determinação dos níveis de oleandrina. A extração e procedimentos cromatográficos foram eficientes na detecção e quantificação da oleandrina nos tecidos, com tempo de retenção de 1,2min e limite de detecção de 0,001g g-1. A análise cromatográfica dos animais tratados indicou que a oleandrina é distribuída de forma equalizada pelos tecidos analisados. A metodologia desenvolvida representa uma forma de diagnóstica segura, efetiva e rápida da intoxicação por N. oleander a partir de amostras de tecidos de necropsia.

In-house validation for multi-residue analysis of tetracycline in cow milk by HPLC with UV detection / Validação intralaboratorial para análise múltipla dos resíduos de tetraciclina em leite bovino por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção UV

The indiscriminate use of antibiotics in dairy cattle without complying with the waiting period results in residual contamination, whose effective control in produced milk requires validated methods toensure analytical results. The aim of this study was to optimize and validate the HPLC-UV/VIS method at 365 nm for analyzingthe tetracycline in pasteurized cow milk in accordance with the European Community (2002/657/EC). Spiked milk with analytes (oxytetracycline, tetracycline, doxycycline, and chlortetracycline) was submitted to deproteinization and cleaning by a C18 solid-phase column and analyzed by HPLC using a gradient system with 0.01 mol L?1 oxalic acid-acetonitrile-triethylamine (90:9.9:0.1) and acetonitrile on a reverse phase (C18) column. Accuracy and precision were assessed by adding analytes to levels of 0.5, 1, and 1.5 times the permissible maximum limit allowed in Brazil. The method presented selectivity with a decision limit (CC?) and detection capability (CC?) ranging from 114.2 to 143.7 and from 129.3 to 188.7 µg kg?1, respectively. The recovery of tetracyclines was higher than 82.5% with a precision of 7.1%, demonstrating theefficiency in determining tetracycline residues in cow milk.

O uso indiscriminado de antibiótico em gado leiteiro, sem cumprimento do período de carência, resulta em contaminação residual, cujo controle efetivo no leite produzido requer métodos validados que garantam os resultados analíticos. O estudo visou otimizar e validar o método de CLAE-UV/VIS a 365 nm para análise de tetraciclina em leite bovino pasteurizado em conformidade com a Comunidade Europeia (2002/657/EC). O leite fortificado com analitos (oxitetraciclina, tetraciclina, doxiciclina e clortetraciclina) foi submetido à extração por desproteinização e limpeza por coluna de fase sólida C18 e submetido à análise por CLAE empregando sistema gradiente com 0,01 mol L-1 de ácido oxálico-acetonitrila-trietilamina (90:9,9:0,1) e acetonitrila, em coluna de fase reversa (C18). A exatidão e precisão foram avaliadas adicionando o analitos em níveis de 0,5, 1 e 1,5 vezes o limite máximo permitido no Brasil. O método apresentou seletividade com limite de decisão (CC?) e capacidade de detecção (CC?) variando de 114,2 a 143,7 e 129,3 a 188,7 µg kg-1, respectivamente. A recuperação de tetraciclinas foi superior a 82,5% e a precisão de 7,1%, demonstrando eficiência para a determinação de resíduos de tetraciclina em leite bovino.

In-house validation for multi-residue analysis of tetracycline in cow milk by HPLC with UV detection / Validação intralaboratorial para análise múltipla dos resíduos de tetraciclina em leite bovino por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção UV

The indiscriminate use of antibiotics in dairy cattle without complying with the waiting period results in residual contamination, whose effective control in produced milk requires validated methods toensure analytical results. The aim of this study was to optimize and validate the HPLC-UV/VIS method at 365 nm for analyzingthe tetracycline in pasteurized cow milk in accordance with the European Community (2002/657/EC). Spiked milk with analytes (oxytetracycline, tetracycline, doxycycline, and chlortetracycline) was submitted to deproteinization and cleaning by a C18 solid-phase column and analyzed by HPLC using a gradient system with 0.01 mol L?1 oxalic acid-acetonitrile-triethylamine (90:9.9:0.1) and acetonitrile on a reverse phase (C18) column. Accuracy and precision were assessed by adding analytes to levels of 0.5, 1, and 1.5 times the permissible maximum limit allowed in Brazil. The method presented selectivity with a decision limit (CC?) and detection capability (CC?) ranging from 114.2 to 143.7 and from 129.3 to 188.7 µg kg?1, respectively. The recovery of tetracyclines was higher than 82.5% with a precision of 7.1%, demonstrating theefficiency in determining tetracycline residues in cow milk.(AU)

O uso indiscriminado de antibiótico em gado leiteiro, sem cumprimento do período de carência, resulta em contaminação residual, cujo controle efetivo no leite produzido requer métodos validados que garantam os resultados analíticos. O estudo visou otimizar e validar o método de CLAE-UV/VIS a 365 nm para análise de tetraciclina em leite bovino pasteurizado em conformidade com a Comunidade Europeia (2002/657/EC). O leite fortificado com analitos (oxitetraciclina, tetraciclina, doxiciclina e clortetraciclina) foi submetido à extração por desproteinização e limpeza por coluna de fase sólida C18 e submetido à análise por CLAE empregando sistema gradiente com 0,01 mol L-1 de ácido oxálico-acetonitrila-trietilamina (90:9,9:0,1) e acetonitrila, em coluna de fase reversa (C18). A exatidão e precisão foram avaliadas adicionando o analitos em níveis de 0,5, 1 e 1,5 vezes o limite máximo permitido no Brasil. O método apresentou seletividade com limite de decisão (CC?) e capacidade de detecção (CC?) variando de 114,2 a 143,7 e 129,3 a 188,7 µg kg-1, respectivamente. A recuperação de tetraciclinas foi superior a 82,5% e a precisão de 7,1%, demonstrando eficiência para a determinação de resíduos de tetraciclina em leite bovino.(AU)

ESPECTROSCOPIA FTIR, HPLC e REDES NEURAIS ARTIFICIAIS PARA DETERMINAÇÃO ANALÍTICA DA LACTOSE RESIDUAL E OUTROS AÇÚCARES NO LEITE

A lactose é o açúcar naturalmente presente no leite e possui grande importância nutricional, porém este sacarídeo não é bem absorvido pela maior parte da população mundial, em virtude da diminuição na produção da enzima lactase, que age no intestino delgado, hidrolisando a lactose ingerida em dois monossacarídeos, a glicose e a galactose. A hidrólise enzimática da lactose pelas indústrias oferece uma diversidade de produtos que contém baixa lactose. A metodologia utilizada para mensurar a concentração dos açúcares no leite após a hidrólise é, preferencialmente, a cromatografia líquida (HPLC) com detecção por índice de refração (RID), pela sua capacidade de distinguir os açúcares. A espectroscopia no infravermelho médio apresenta deficiência nesta distinção devido à absorção da luz pelos açúcares ocorrerem na mesma região do espectro. Neste trabalho foi proposta a associação da espectroscopia FTIR (Fourier Transform Infrared) às ferramentas da inteligência artificial por aprendizagem profunda para identificar e quantificar lactose residual e outros açúcares no leite. Foram construídas redes neurais convolucionais a partir dos espectros do infravermelho médio, sem pré-processamento dos dados, para resolver problemas de classificação de amostras de leite e predizer qual a classe do açúcar presente, e para a predição dos valores da concentração dos açúcares no leite, um modelo de regressão foi proposto. Leite cru, pasteurizado e UHT foram adicionados de lactose, glicose e galactose em seis concentrações (0.1, 0.5, 1.0, 3.0, 5.0 e 7.0%) e, ao todo, 342 amostras foram submetidas às redes neurais artificiais para identificar e quantificar os açúcares no leite. Além disso, a hidrólise enzimática da lactose pela -galactosidase foi realizada em 20 amostras de leite pasteurizado em quatro tratamentos diferentes (controle e três níveis de hidrólise) que resultou na presença simultânea dos três açúcares (lactose, glicose e galactose) para quantificação por HPLC-RID e comparação com os resultados previstos pelas redes neurais convolucionais. O resultado do desafio destas amostras aos algoritmos de classificação e regressão indicaram uma capacidade preditiva de 80% para classificação e 75% para quantificação dos açúcares nas amostras hidrolisadas. A associação dos espectros do FTIR às ferramentas de inteligência artificial mostrou ser uma metodologia promissora para o controle de qualidade do leite

Lactose is the sugar naturally present in milk and has great nutritional importance, but this saccharide is not well absorbed by most of the world population, due to the decrease in the production of the lactase enzyme, which acts in the small intestine, hydrolyzing the lactose ingested in two monosaccharides, glucose and galactose. The enzymatic hydrolysis of lactose by industries offers a variety of products with low lactose. The methodology used to measure the concentration of sugars in milk after hydrolysis is preferably liquid chromatography (HPLC) with refractive index detection (RID), due to its ability to distinguish sugars. Mid-infrared spectroscopy lacks this distinction due to the absorption of light by sugars occurring in the same region of the spectrum. In this work, the association of the FTIR (Fourier Transform Infrared) spectroscopy with the tools of artificial intelligence for deep learning was proposed to identify and quantify residual lactose and other sugars in milk. Convolutional neural networks were built from the mid-infrared spectra, without preprocessing the data, to solve problems in the classification of milk samples, and to predict which sugar class was present, and to predict the sugar concentration values in milk, a regression model was proposed. Raw, pasteurized and UHT milk were added with lactose, glucose and galactose at six concentrations (0.1, 0.5, 1.0, 3.0, 5.0 and 7.0%) and, in total, 342 samples were submitted to artificial neural networks to identify and quantify the sugars in milk. In addition, the enzymatic hydrolysis of lactose by -galactosidase was performed on 20 samples of pasteurized milk in four different treatments (control and three levels of hydrolysis) which resulted in the simultaneous presence of the three sugars (lactose, glucose and galactose) for quantification by HPLC-RID and comparison with results predicted by convolutional neural networks. The result of the challenge of these samples to classification and regression algorithms indicated a predictive capacity of 80% for classification and 75% for quantification of sugars in hydrolyzed samples. The association of FTIR spectra to artificial intelligence tools proved to be a promising methodology for milk quality control

Validation and application of chromatographic methods for determination of vitamins in supplements / Validação e aplicação de métodos cromatográficos para determinação de vitaminas em suplementos

Two methodologies were proposed for determining vitamins in supplements by means of high performance liquid chromatography (HPLC): one for simultaneous determination of fat soluble vitamins (retinyl acetate, retinyl palmitate, -tocopheryl acetate and -carotene), and the other for the simultaneous determination of water soluble vitamins (B1, C, nicotinamide, nicotinic acid, B6 and pantothenic acid). The methodologies were validated using certified reference material SRM 3280 from NIST and vitamins standards. The limits of detection (LODs) and the limits of quantification (LOQs) ranged from 0.3 to 4.3 µg/mL and from 0.5 to 14.0 µg/mL, respectively. The recoveries of spiked vitamin standards in supplements ranged from 92 % to 109 %, and from 86 % to 108 % in the reference material. The repeatability was calculated by the relative standard deviation (RSD), with values from 0.2 % to 9.6 %. The validated methods were applied for determining vitamins A, E, B1, C, niacin, B6 and pantothenic acid in 10 multivitamin supplements samples. Both methods are suitable for determining vitamins in multivitamin supplements, and their applications will be essential, considering the urgent need for monitoring and for surveying these products.

Foram propostas duas metodologias para realizar a determinação de vitaminas em suplementos por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE): uma para a determinação simultânea de vitaminas lipossolúveis (acetato de retinol, palmitato de retinol, acetato de -tocoferol e -caroteno) e outra para a determinação simultânea de vitaminas hidrossolúveis (B1, vitamina C, nicotinamida, ácido nicotínico, B6 e ácido pantotênico). A validação das metodologias foi realizada utilizando-se material de referência certificado SRM 3280 do NIST e padrões de vitaminas. Os limites de detecção (LDs) e de quantificação (LQs) variaram entre 0,3 e 4,3 µg/mL e entre 0,5 e 14,0 µg/mL, respectivamente. Os percentuais de recuperação dos padrões adicionados nas matrizes variaram entre 92 % e 109 % e entre 86 % e 108 % no material de referência. A repetitividade foi calculada utilizando-se o desvio padrão relativo (RSD); e foram detectados valores entre 0,2 % e 9,6 %. Os métodos validados foram aplicados para a determinação de vitaminas A, E, B1, C, niacina, B6 e ácido pantotênico em 10 amostras de suplementos vitamínicos. Ambos os métodos são adequados para a análise de vitaminas em suplementos e suas aplicações serão imprescindíveis, visto a necessidade urgente de efetuar monitoramento e fiscalização destes produtos.

Occurrence of aflatoxin M1 in bovine milk samples consumed in different regions of Brazil / Ocorrência de aflatoxina M1 em amostras de leite bovino consumido em diferentes regiões do Brasil

Two hundred and fifty-seven samples of milk proceeding from different geographical regions of Brazil were analyzed for determining the presence of aflatoxin M1 (AFM1). The AFM1 extraction was carried out using immunoaffinity column, separated by reversed-phase (C-18) high performance liquid chromatography (HPLC), and quantified by fluorescence detector. The Limits of Quantification (LOQ) were 0.008 µg/kg and 0.080 µg/kg to the fluid and the powder milk, respectively. AFM1 were detected in 209 (81.3 %) samples, being 26 (63.4 %), 105 (84.0 %) and 78 (85.7 %) of pasteurized, UHT (Ultra-high Temperature) and powder milk, respectively. The highest concentration of AFM1 in powder milk was found in one sample from Minas Gerais (1.210 µg/kg). In UHT and pasteurized milk, the highest levels were detected in one sample from Sergipe (0.120 µg/kg) and one sample from Goiás (0.050 µg/kg), respectively. None of the samples analyzed in this study exceeded the Brazilian legal limits for AFM1.

Duzentas e cinquenta e sete amostras de leite provenientes das diferentes regiões geográficas do Brasil foram analisadas para realizar a determinação de aflatoxina M1 (AFM1). As AFM1 foram extraídas por meio de colunas de imunoafinidade, separadas por cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (C-18) e quantificadas por detector de fluorescência (CLAE-FL). Os limites de quantificação (LQ) foram de 0,008 µg/kg e 0,080 µg/kg para o leite fluido e em pó, respectivamente. AFM1 foi detectada em 209 (81,3 %) amostras, sendo 26 (63,4 %), 105 (84,0 %) e 78 (85,7 %) para o leite pasteurizado, UHT (Ultra-high Temperature) e em pó, respectivamente. A maior concentração de AFM1 no leite em pó foi encontrada em uma amostra proveniente de Minas Gerais (1,210 µg/kg). No leite UHT e pasteurizado, os maiores níveis foram encontrados em uma amostra de Sergipe (0,120 µg/kg) e Goiás (0,050 µg/kg), respectivamente. Nenhuma amostra analisada ultrapassou os limites da legislação brasileira em vigor para AFM1.

Occurrence of aflatoxin M1 in bovine milk samples consumed in different regions of Brazil / Ocorrência de aflatoxina M1 em amostras de leite bovino consumido em diferentes regiões do Brasil

Two hundred and fifty-seven samples of milk proceeding from different geographical regions of Brazil were analyzed for determining the presence of aflatoxin M1 (AFM1). The AFM1 extraction was carried out using immunoaffinity column, separated by reversed-phase (C-18) high performance liquid chromatography (HPLC), and quantified by fluorescence detector. The Limits of Quantification (LOQ) were 0.008 µg/kg and 0.080 µg/kg to the fluid and the powder milk, respectively. AFM1 were detected in 209 (81.3 %) samples, being 26 (63.4 %), 105 (84.0 %) and 78 (85.7 %) of pasteurized, UHT (Ultra-high Temperature) and powder milk, respectively. The highest concentration of AFM1 in powder milk was found in one sample from Minas Gerais (1.210 µg/kg). In UHT and pasteurized milk, the highest levels were detected in one sample from Sergipe (0.120 µg/kg) and one sample from Goiás (0.050 µg/kg), respectively. None of the samples analyzed in this study exceeded the Brazilian legal limits for AFM1.(AU)

Duzentas e cinquenta e sete amostras de leite provenientes das diferentes regiões geográficas do Brasil foram analisadas para realizar a determinação de aflatoxina M1 (AFM1). As AFM1 foram extraídas por meio de colunas de imunoafinidade, separadas por cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (C-18) e quantificadas por detector de fluorescência (CLAE-FL). Os limites de quantificação (LQ) foram de 0,008 µg/kg e 0,080 µg/kg para o leite fluido e em pó, respectivamente. AFM1 foi detectada em 209 (81,3 %) amostras, sendo 26 (63,4 %), 105 (84,0 %) e 78 (85,7 %) para o leite pasteurizado, UHT (Ultra-high Temperature) e em pó, respectivamente. A maior concentração de AFM1 no leite em pó foi encontrada em uma amostra proveniente de Minas Gerais (1,210 µg/kg). No leite UHT e pasteurizado, os maiores níveis foram encontrados em uma amostra de Sergipe (0,120 µg/kg) e Goiás (0,050 µg/kg), respectivamente. Nenhuma amostra analisada ultrapassou os limites da legislação brasileira em vigor para AFM1.(AU)

Validation and application of chromatographic methods for determination of vitamins in supplements / Validação e aplicação de métodos cromatográficos para determinação de vitaminas em suplementos

Two methodologies were proposed for determining vitamins in supplements by means of high performance liquid chromatography (HPLC): one for simultaneous determination of fat soluble vitamins (retinyl acetate, retinyl palmitate, -tocopheryl acetate and -carotene), and the other for the simultaneous determination of water soluble vitamins (B1, C, nicotinamide, nicotinic acid, B6 and pantothenic acid). The methodologies were validated using certified reference material SRM 3280 from NIST and vitamins standards. The limits of detection (LODs) and the limits of quantification (LOQs) ranged from 0.3 to 4.3 µg/mL and from 0.5 to 14.0 µg/mL, respectively. The recoveries of spiked vitamin standards in supplements ranged from 92 % to 109 %, and from 86 % to 108 % in the reference material. The repeatability was calculated by the relative standard deviation (RSD), with values from 0.2 % to 9.6 %. The validated methods were applied for determining vitamins A, E, B1, C, niacin, B6 and pantothenic acid in 10 multivitamin supplements samples. Both methods are suitable for determining vitamins in multivitamin supplements, and their applications will be essential, considering the urgent need for monitoring and for surveying these products.(AU)

Foram propostas duas metodologias para realizar a determinação de vitaminas em suplementos por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE): uma para a determinação simultânea de vitaminas lipossolúveis (acetato de retinol, palmitato de retinol, acetato de -tocoferol e -caroteno) e outra para a determinação simultânea de vitaminas hidrossolúveis (B1, vitamina C, nicotinamida, ácido nicotínico, B6 e ácido pantotênico). A validação das metodologias foi realizada utilizando-se material de referência certificado SRM 3280 do NIST e padrões de vitaminas. Os limites de detecção (LDs) e de quantificação (LQs) variaram entre 0,3 e 4,3 µg/mL e entre 0,5 e 14,0 µg/mL, respectivamente. Os percentuais de recuperação dos padrões adicionados nas matrizes variaram entre 92 % e 109 % e entre 86 % e 108 % no material de referência. A repetitividade foi calculada utilizando-se o desvio padrão relativo (RSD); e foram detectados valores entre 0,2 % e 9,6 %. Os métodos validados foram aplicados para a determinação de vitaminas A, E, B1, C, niacina, B6 e ácido pantotênico em 10 amostras de suplementos vitamínicos. Ambos os métodos são adequados para a análise de vitaminas em suplementos e suas aplicações serão imprescindíveis, visto a necessidade urgente de efetuar monitoramento e fiscalização destes produtos.(AU)

Chromatographic detection of nitrofurans in foods of animal origin / Detecção cromatográfica de nitrofuranos em alimentos de origem animal

Nitrofurans are antibacterials banned in livestock by different countries due to its relationship with the production of carcinogenic metabolites. Several studies have been conducted to find the best methodology to identify these residues. Te objectives of this review work were to show the risk of nitrofuran metabolites (furazolidone; nitrofurazone; nitrofurantoin, furaltadone and nifursol); to explain the application of liquid chromatography and mass spectrometry to determine the presence of these residues in foods of animal origin; and, finally, to report some methodologies that were recently used in different foods of animal origin.(AU)

Nitrofuranos são antibacterianos proibidos na criação de animais por diferentes países devido a sua relação com a produção de metabolitos carcinogênicos. Vários trabalhos de pesquisa têm sido desenvolvidos para encontrar a melhor metodologia que possa identificar esses resíduos. O presente trabalho de revisão teve como objetivos mostrar o risco dos metabolitos dos nitrofuranos (furazolidona, nitrofurazona, nitrofurantoina, furaltadona e nifursol); explicar a aplicação da cromatografia líquida e da espectrometria de massas para determinar a presença desses resíduos em alimentos de origem animal; e, finalmente, relatar algumas metodologias usadas recentemente em alimentos de origem animal.(AU)

Chromatographic detection of nitrofurans in foods of animal origin / Detecção cromatográfica de nitrofuranos em alimentos de origem animal

Nitrofurans are antibacterials banned in livestock by different countries due to its relationship with the production of carcinogenic metabolites. Several studies have been conducted to find the best methodology to identify these residues. The objectives of this review work were to show the risk of nitrofuran metabolites (furazolidone; nitrofurazone; nitrofurantoin, furaltadone and nifursol); to explain the application of liquid chromatography and mass spectrometry to determine the presence of these residues in foods of animal origin; and, finally, to report some methodologies that were recently used in different foods of animal origin.(AU)

Nitrofuranos são antibacterianos proibidos na criação de animais por diferentes países devido a sua relação com a produ- ção de metabolitos carcinogênicos. Vários trabalhos de pesquisa têm sido desenvolvidos para encontrar a melhor metodologia que possa identificar esses resíduos. O presente trabalho de revisão teve como objetivos mostrar o risco dos metabolitos dos nitrofuranos (furazolidona, nitrofurazona, nitrofurantoina, furaltadona e nifursol); explicar a aplicação da cromatografia líquida e da espectrometria de massas para determinar a presença desses resíduos em alimentos de origem animal; e, finalmente, relatar algumas metodologias usadas recentemente em alimentos de origem animal.(AU)

TESTE DA CRISTALIZAÇÃO LACRIMAL (TCL) E AVALIAÇÃO PROTEÔMICA DA LÁGRIMA DE FELINOS DOMÉSTICOS HÍGIDOS

No presente trabalho foi realizado o teste da cristalização lacrimal (TCL) em amostras de sessenta felinos domésticos hígidos e análise proteômica do fluido lacrimal (FL) de doze felinos. O TCL é um teste oftálmico de caráter qualitativo, visando avaliar a osmolaridade indireta do FL. Ainda não havia sido realizado em amostras da espécie felina, mas, apesar de originalmente desenvolvido para a espécie humana, já foi adaptado para cães, cavalos, macacos e camelos. Como forma complementar, tem-se desenvolvido diferentes técnicas de análise proteômica para avaliação do FL, visando identificação de proteínas que possam ser utilizadas como biomarcadores para diagnóstico precoce, prognóstico, desenvolvimento de novos fármacos, bem como para elucidar a fisiologia de sistemas e fisiopatologia de alterações. Objetivou-se verificar o enquadramento de amostras de felino nas escalas propostas para classificação do TCL de humanos, e, descrever as proteínas encontradas no FL de indivíduos dessa espécie. Para tal, as amostras de FL para TCL foram coletadas através do Teste de Schirmer 1 (TLS-1), e, as tiras logo após o teste foram acondicionadas em microtubos e centrifugadas para obtenção da alíquota que era depositada em uma lâmina microscópica de vidro, analisada através do microscópio de luz polarizada, e registrada através de fotos. Enquanto as amostras para análise proteômica também foram obtidas por TLS-1, acondicionadas em microtubos que foram submetidos a centrifugação refrigerada a 4ºC, porém a alíquota era imediatamente congelada até posterior análise por espectrometria de massas (EM) com gel bidimensional de poliacrilamida (2D-SDS-PAGE) associada a cromatografia líquida de alta eficiência (ULPC). A cristalização de amostras de felinos apresentou alta densidade de cristais, poucas lacunas entre os ramos, e, grande quantidade de núcleos facilmente visíveis. Os ramos são finos e suas ramificações primárias e secundárias bem definidas. Os tipos I e II da escala de Rolando e os graus 1 e 2 da escala de Masmali foram os mais comumenteVII observados (50%, 46,6%, 56,6% e 28,4%, respectivamente) das escalas propostas. A distribuição normal não foi encontrada para as classificações obtidas (P<0,001) bem como não foi observada diferença entre classificações dos olhos direito e esquerdo (P0,102). Proteínas já descritas em estudos com amostras de FL de outras espécies foram descritas pela primeira vez em felinos, como: lactotransferrina, albumina sérica e lipocalinas alérgenas. Oito outras proteínas foram descritas nas amostras de felinos e podem ser consideradas inéditas em amostras de FL de todas as espécies, dentre elas estão: três proteínas quinase dependentes da ciclina, o receptor de apelina, proteína secretória relacionada ao C1q/TNF, aciltransferase, -1,4 glucano fosforilase e o domínio de repetição WD-1. O TCL pode ser considerado de boa aplicabilidade em felinos como uma avaliação complementar da superfície ocular, e, a técnica de proteômica escolhida superou as limitações relacionada ao pequeno volume de amostra e apresentou alta sensibilidade na identificação de proteínas. Mais estudos da aplicabilidade das escalas do TCL, bem como da expressão de proteínas do FL de felinos são necessários e podem trazer no futuro grande auxílio na prevenção, diagnóstico precoce, prognóstico, bem como tratamento de doenças oftálmicas e até mesmo sistêmicas.

In the present study Tear Ferning Test (TFT) was performed in samples of sixty healthy domestic cats, and proteomic analysis of the Tear Film (TF) in twelve cats. TFT is a qualitative ophthalmic test that evaluate the indirect osmolarity of TF. It had not yet been performed on feline specimens, and although it was originally developed for humans, it has been used on dogs, horses, capuchin monkeys and camels. As a complementary tool, different proteomic techniques have been developed for the evaluation of TF, aiming to identify proteins that can be used as biomarkers for early diagnosis, prognosis, development of new drugs, as well as to elucidate the systems physiology and pathophysiology of diseases. The aim of this study was to verify the classification of feline samples in the proposed scales for TFT of humans, and to describe the proteins found in the TF of this species. For that purpose, the TF samples for TFT were collected through Schirmer Tear Test 1 (STT-1), the strips were placed in microtubes immediately after, and centrifuged to obtain the aliquot that was deposited on a microscopic slide of glass, analyzed through the polarized light microscope and recorded through photograph. The samples for proteomic analysis were also obtained by STT-1, placed in microtubes, subjected to refrigerated centrifugation at 4ºC, and the aliquot was immediately frozen at 20 ºC until further analysis by mass spectrometry (MS) with two dimensional polyacrylamide electrophoresis (2DSDS-PAGE) associated with ultra-performance liquid chromatography (ULPC). Ferning patterns of cats TF samples showed full crystallization with high density, without gaps between the ferns and branches, forming several nuclei that were easily distinguished. The branches are thin and their primary and secondary branches well defined. Types I and II by Rolando scale and grades 1 and 2 by Masmali scale were the most observed (50%, 46.6%, 56.6% and 28.4%, respectively) of the proposed scales. Normal distribution was not found for the obtained classifications (P<0.001), as well as no difference was observedIX between classifications of the right and left eyes (P0.102). Proteins already described in studies with TF samples from other species have been described for the first time in felines, such as: lactotransferrin, serum albumin and lipocalin allergens. Eight other proteins that were found in feline samples can be considered new in TF samples of all species already reported so far, among them are: three cyclin-dependent protein kinase, the apelin receptor, secretory protein related to C1q/TNF, acyltransferase, -1,4 glucan phosphorylase and the WD-1 repeat domain. TFT can be feasible in cats as a complementary evaluation of the ocular surface, and, the chosen proteomics technique overcame the limitations related to the small sample volume and showed high sensitivity in the identification of proteins. Further studies on the use of TFT scales, as well as on the expression of feline TF proteins are needed and can bring in the future great help in prevention, early diagnosis, prognosis, as well as treatment of ophthalmic and systemic diseases.