Serological occurrence for tick-borne agents in beef cattle in the Brazilian Pantanal / Ocorrência sorológica para agentes transmitidos por carrapatos em bovinos de corte no Pantanal Brasileiro

This study investigated the seropositivity for five different tick-borne agents, namely Anaplasma marginale, Babesia bovis, Babesia bigemina, Coxiella burnetii, Anaplasma phagocytophilum, and Trypanosoma vivax in beef cattle in the Brazilian Pantanal. The serum samples collected from animals (200 cows; 200 calves) were used in indirect enzyme-linked immunosorbent assays (iELISA) to detect IgG antibodies against A. marginale, B. bovis, B. bigemina, and T. vivax, and Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) for detecting IgG antibodies against C. burnetii and A. phagocytophilum. No correlation was observed between seropositivity for C. burnetii and A. phagocytophilum with other agents whereas moderate correlation was observed for A. marginalexB. bigemina x B. bovis. Cows were more seropositive for T. vivax whereas calves were more seropositive for B. bovis and B. bigemina. The highest number of seropositive animals by a single agent was observed for T. vivax (15.2%). Co-seropositivity for T. vivax + A. marginale was higher in cows (25.5%) and for T. vivax + B. bovis + B. bigemina + A. marginale was higher in calves (57.5%). The high seropositivity correlation for A. marginale x B. bovis x B. bigemina is probably due to the presence of the tick biological vector, Rhipicephalus microplus, in the studied farms. Common transmission pathways, mediated by hematophagous dipterans and fomites, may explain the high co-seropositivity of cows for A. marginale and T. vivax. Low seropositivity to C. burnetii is probably due to the type of breeding system employed (extensive). Seropositivity for A. phagocytophilum in only one animal suggests the occurrence of a cross-serological reaction with another agent of the genus Anaplasma.(AU)

Este estudo teve como objetivo determinar a co-soropositividade para agentes transmitidos por carrapatos, como Anaplasma marginale, Babesia bovis, Babesia bigemina, Coxiella burnetii, Anaplasma phagocytophilum, e Trypanosoma vivax em bovinos de corte do Pantanal Brasileiro. Amostras de soro foram colhidas de 400 animais (200 vacas; 200 bezerros) e submetidas a Ensaios Imunoenzimáticos Indiretos (iELISA) para detecção de anticorpos IgG anti- A. marginale, anti- B. bovis, anti- B. bigemina e anti- T. vivax, e à Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para detecção de anticorpos IgG anti -C. burnetii e anti- A. phagocytophilum. Ausência de correlação foi vista entre os animais soropositivos para C. burnetii e A. phagocytophilum com os outros agentes e correlação moderada ocorreu entre A. marginale x B. bigemina x B. bovis. Vacas foram mais soropositivas que bezerros para T. vivax e bezerros mais soropositivos que vacas para B. bovis e B. bigemina. Maior número de animais soropositivos para um único agente foi visto para T. vivax (15,2%). Vacas demonstraram maior co-soropositividade para T. vivax + A. marginale (25,5%) e bezerros para T. vivax + B. bovis + B. bigemina + A. marginale (57,5%). A alta correlação entre a soropositividade para A. marginale x B. bovis x B. bigemina é provavelmente devida à presença do vetor biológico, o carrapato Rhipicephalus microplus, nas fazendas estudadas. As vias de transmissão comuns, mediadas por dípteros hematófagos e fômites, podem explicar a alta co-soropositividade das vacas para A. marginale e T. vivax. A baixa soropositividade para C. burnetii é provavelmente devida ao tipo de sistema de criação empregado (extenso). A soropositividade para A. phagocytophilum em apenas um animal sugere a ocorrência de reação sorológica cruzada com outro agente do gênero Anaplasma.(AU)

Serological occurrence for tick-borne agents in beef cattle in the Brazilian Pantanal / Ocorrência sorológica para agentes transmitidos por carrapatos em bovinos de corte no Pantanal Brasileiro

This study investigated the seropositivity for five different tick-borne agents, namely Anaplasma marginale, Babesia bovis, Babesia bigemina, Coxiella burnetii, Anaplasma phagocytophilum, and Trypanosoma vivax in beef cattle in the Brazilian Pantanal. The serum samples collected from animals (200 cows; 200 calves) were used in indirect enzyme-linked immunosorbent assays (iELISA) to detect IgG antibodies against A. marginale, B. bovis, B. bigemina, and T. vivax, and Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) for detecting IgG antibodies against C. burnetii and A. phagocytophilum. No correlation was observed between seropositivity for C. burnetii and A. phagocytophilum with other agents whereas moderate correlation was observed for A. marginalexB. bigemina x B. bovis. Cows were more seropositive for T. vivax whereas calves were more seropositive for B. bovis and B. bigemina. The highest number of seropositive animals by a single agent was observed for T. vivax (15.2%). Co-seropositivity for T. vivax + A. marginale was higher in cows (25.5%) and for T. vivax + B. bovis + B. bigemina + A. marginale was higher in calves (57.5%). The high seropositivity correlation for A. marginale x B. bovis x B. bigemina is probably due to the presence of the tick biological vector, Rhipicephalus microplus, in the studied farms. Common transmission pathways, mediated by hematophagous dipterans and fomites, may explain the high co-seropositivity of cows for A. marginale and T. vivax. Low seropositivity to C. burnetii is probably due to the type of breeding system employed (extensive). Seropositivity for A. phagocytophilum in only one animal suggests the occurrence of a cross-serological reaction with another agent of the genus Anaplasma.(AU)

Este estudo teve como objetivo determinar a co-soropositividade para agentes transmitidos por carrapatos, como Anaplasma marginale, Babesia bovis, Babesia bigemina, Coxiella burnetii, Anaplasma phagocytophilum, e Trypanosoma vivax em bovinos de corte do Pantanal Brasileiro. Amostras de soro foram colhidas de 400 animais (200 vacas; 200 bezerros) e submetidas a Ensaios Imunoenzimáticos Indiretos (iELISA) para detecção de anticorpos IgG anti- A. marginale, anti- B. bovis, anti- B. bigemina e anti- T. vivax, e à Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para detecção de anticorpos IgG anti -C. burnetii e anti- A. phagocytophilum. Ausência de correlação foi vista entre os animais soropositivos para C. burnetii e A. phagocytophilum com os outros agentes e correlação moderada ocorreu entre A. marginale x B. bigemina x B. bovis. Vacas foram mais soropositivas que bezerros para T. vivax e bezerros mais soropositivos que vacas para B. bovis e B. bigemina. Maior número de animais soropositivos para um único agente foi visto para T. vivax (15,2%). Vacas demonstraram maior co-soropositividade para T. vivax + A. marginale (25,5%) e bezerros para T. vivax + B. bovis + B. bigemina + A. marginale (57,5%). A alta correlação entre a soropositividade para A. marginale x B. bovis x B. bigemina é provavelmente devida à presença do vetor biológico, o carrapato Rhipicephalus microplus, nas fazendas estudadas. As vias de transmissão comuns, mediadas por dípteros hematófagos e fômites, podem explicar a alta co-soropositividade das vacas para A. marginale e T. vivax. A baixa soropositividade para C. burnetii é provavelmente devida ao tipo de sistema de criação empregado (extenso). A soropositividade para A. phagocytophilum em apenas um animal sugere a ocorrência de reação sorológica cruzada com outro agente do gênero Anaplasma.(AU)

Comparison of conventional and molecular techniques for Trypanosoma vivax diagnosis in experimentally infected cattle / Comparação de técnicas convencionais e moleculares para diagnóstico em bovinos experimentalmente infectados por Trypanosoma vivax

Livestock infections by Trypanosoma vivax have been occurring with increasing frequency, mainly due to the presence of animals with subclinical infections and without apparent parasitaemia, making diagnosis challenging. The aim of the present study was to evaluate several techniques used for T. vivax diagnosis in order to assess the best way of using them during the course of the disease. Molecular methods demonstrated higher rates of detection than parasitological methods, detecting 33 of the 54 (61.1%) known positive samples, while the hematocrit centrifugation technique (best parasitological test) detected only 44.4%. The serological methods, IFAT and ELISA, detected seropositivity in 51 of the 54 (94.4%) and 49 of the 54 (90.7%) known positive samples, respectively. Despite being highly sensitive, the latter only demonstrates exposure to the infectious agent and does not indicate whether the infection is active. The present study was the first to use the qPCR for a South American isolate, improving disease detection and quantification. Furthermore, the analyses revealed that the patent phase of the disease may extend up to 42 days, longer than previously reported. The combination of several diagnostic techniques can lower the frequency of false negative results and contributes toward better disease control.(AU)

Infecções por Trypanosoma vivax têm ocorrido com frequência crescente em animais de produção, principalmente pela aquisição de animais com infecções subclínicas e sem aparente parasitemia, o que dificulta o diagnóstico. O objetivo do presente estudo foi avaliar várias técnicas empregadas para o diagnóstico de T. vivax, a fim de verificar a melhor maneira de utilizá-las durante o curso da doença. Os métodos moleculares demonstraram maiores taxas de detecção que os métodos parasitológicos, detectando 33 das 54 (61,1%) amostras sabidamente positivas, enquanto a técnica de hemoconcentração (melhor teste parasitológico) detectou apenas 44,4%. Os métodos sorológicos, RIFI e ELISA, detectaram soropositividade em 51 das 54 (94,4%) e 49 das 54 (90,7%) amostras sabidamente positivas, respectivamente. Apesar de serem altamente sensíveis, estes testes apenas demonstram a exposição ao agente infeccioso, e não indicam se a infecção permanece ativa. O presente estudo foi o primeiro a utilizar a qPCR para um isolado sul-americano, melhorando sua detecção e quantificação. Além disso, as análises revelaram que a fase patente da doença pode se estender por até 42 dias após a infecção, sendo maior que anteriormente relatado. A combinação de várias técnicas de diagnóstico pode evitar a frequência de resultados falso-negativos e contribuir para um melhor controle da doença.(AU)

Prevalence study on Trypanosoma vivax in dairy cattle in the Western region on the State of Paraná, Brazil / Estudo da prevalência de Trypanosoma vivax em bovinos leiteiros da região Oeste do Estado do Paraná, Brasil

In Brazil, Trypanosoma vivax is present in several states. The disease is endemic in Pantanal and Minas Gerais. In Paraná there is still no report of the parasite, but due to the state borders with Mato Grosso do Sul, São Paulo, Paraguay and Argentina, it is believed that the protozoan circulates in the region without diagnosis. The objective of this study was to investigate the prevalence of T. vivax in dairy cattle in the western region of Paraná. For this purpose, 600 blood samples and 400 serum samples were collected from dairy cattle, distributed in 60 and 40 properties, respectively. While buffy coat smears were performed on blood samples, serum samples were used in Indirect Immunofluorescence Reaction. All samples, in both techniques, presented negative results for T. vivax. These results indicate that the studied hemoprotozoan is not circulating among the cattle in the western region of Paraná. However, future work evolving beef cattle must be carried out and preventive measures should be adopted in order to avoid the entry of the parasite in the State of Paraná.

No Brasil o Trypanosoma vivax está presente em diversos Estados. No Pantanal e em Minas Gerais a doença é endêmica. No Paraná ainda não há relato do parasito, porém como o Estado possui fronteiras com Mato Grosso do Sul, São Paulo, Paraguai e Argentina acredita-se que o protozoário circula na região sem diagnóstico. O objetivo desse trabalho foi pesquisar a prevalência do T. vivax em bovinos leiteiros da região Oeste do Paraná, sendo esse o primeiro estudo com o protozoário no Estado. Para isso, foram coletadas 600 amostras de sangue total e 400 amostras de soro sanguíneo de bovinos leiteiros, distribuídos em 60 e 40 propriedades, respectivamente. Foi realizado esfregaço de papa leucocitária das amostras de sangue e Reação de Imunofluorescência Indireta das amostras de soro. Todas as amostras, em ambas as técnicas, apresentaram resultado negativo para o T. vivax. Esses resultados indicam que o hemoprotozoário pesquisado não está circulando entre os bovinos de leite da região Oeste do Paraná. Porém, novos trabalhos com bovinos de corte devem ser realizados e medidas preventivas devem ser adotadas para evitar a entrada do parasito no Estado do Paraná.

Aspectos clínicos, epidemiológicos e diagnóstico da infecção por Trypanosoma vivax em rebanho bovino no estado do Maranhão / Clinical and epidemiological aspects and diagnosis of Trypanosoma vivax infection in a cattle herd, state of Maranhão, Brazil

O objetivo desse estudo foi investigar a ocorrência de tripanossomose em uma propriedade leiteira no município de Timon no estado do Maranhão, Brasil. O proprietário relatava histórico de abortos, nascimentos de crias fracas e mortalidade de animais adultos com perda progressiva de peso. Foram realizadas visitas à propriedade para obtenção do histórico, exame dos animais e coleta de sangue para realização do teste de Woo, hemogramas, testes sorológicos para pesquisa de anticorpos contra tripanossomose, leptospirose, e neosporose e PCR para diagnóstico molecular de Trypanosoma vivax. A identificação de animais com baixos valores no hematócrito foi a principal alteração hematológica identificada no rebanho. Dois animais foram positivos no teste de Woo, sendo visualizados tripanossomas em esfregaços sanguíneos, confirmados por meio de diagnóstico molecular como sendo T. vivax. Identificou-se que 95,23% (40/42) dos animais com hematócrito baixo foram sorologicamente positivos para T. vivax. As condições identificadas na propriedade, como ambiente propício aos vetores mecânicos, a presença de animais silvestres e a introdução de animais de estados onde já haviam sido registrados surtos de tripanossomose provavelmente estiveram associadas à introdução e disseminação do agente no rebanho. O elevado número de animais sorologicamente positivos para tripanossomose 82,51% (151/183) demonstra que praticamente todo o rebanho teve contato com o agente. O rápido estabelecimento das medidas de controle, entre elas a utilização das drogas tripanocidas, contribuiu para o controle do surto. O estudo permitiu comprovar a ocorrência de mais um surto de tripanossomíase tripanossomose no Brasil. O diagnóstico clínico da enfermidade foi dificultado pela semelhança dos sinais clínicos com outras enfermidades e pela possibilidade da associação de duas ou mais doenças no mesmo paciente, o que ressalta a importância do estabelecimento de medidas diagnósticas adequadas como forma de evitar a disseminação da enfermidade e minimizar as perdas econômicas dos produtores.(AU)

The objective of this study was to investigate the occurrence of trypanosomiasis in a dairy farm in municipality of Timon, State of Maranhão, Brazil. The owner reported abortus, births of weak calves, and mortality of adult animals with progressive weight loss. Visits to the property were carried out to obtain the history, realize animal examination and blood collection for the Woo test, hemograms, serological tests for trypanosomiasis, leptospirosis, and neosporosis and PCR for molecular diagnosis of Trypanosoma vivax. The identification of animals with low values in the hematocrit was the main hematological alteration identified in the herd. Two animals were positive in the Woo test and trypanosomes were visualized in blood smears, confirmed by molecular diagnosis as T. vivax. It was identified that 95.23% (40/42) of the animals with low hematocrit were serologically positive for T. vivax. The conditions identified in the property as an environment propitious to mechanical vectors, the presence of wild animals and the introduction of animals from states where trypanosomiasis outbreaks had already been reported were probably associated with the introduction and dissemination of the agent in the herd. The high number of serologically positive animals for trypanosomiasis 82.51% (151/183) shows that almost all the herd had contact with the agent. The rapid establishment of control measures, including the use of trypanocidal drugs, contributed to the control of the outbreak. The study allowed confirming the occurrence of another outbreak of trypanosomiasis in Brazil. The clinical diagnosis of the disease was difficult by the similarity of the clinical signs of trypanosomiasis with other diseases and the possibility of association of two or more diseases in the same patient, which emphasizes the importance of establishing adequate diagnostic measures as a way to avoid the dissemination of the disease and to minimize the economic losses of the producers.(AU)

Aspectos clínicos, epidemiológicos e diagnóstico da infecção por Trypanosoma vivax em rebanho bovino no estado do Maranhão / Clinical and epidemiological aspects and diagnosis of Trypanosoma vivax infection in a cattle herd, state of Maranhão, Brazil

O objetivo desse estudo foi investigar a ocorrência de tripanossomose em uma propriedade leiteira no município de Timon no estado do Maranhão, Brasil. O proprietário relatava histórico de abortos, nascimentos de crias fracas e mortalidade de animais adultos com perda progressiva de peso. Foram realizadas visitas à propriedade para obtenção do histórico, exame dos animais e coleta de sangue para realização do teste de Woo, hemogramas, testes sorológicos para pesquisa de anticorpos contra tripanossomose, leptospirose, e neosporose e PCR para diagnóstico molecular de Trypanosoma vivax. A identificação de animais com baixos valores no hematócrito foi a principal alteração hematológica identificada no rebanho. Dois animais foram positivos no teste de Woo, sendo visualizados tripanossomas em esfregaços sanguíneos, confirmados por meio de diagnóstico molecular como sendo T. vivax. Identificou-se que 95,23% (40/42) dos animais com hematócrito baixo foram sorologicamente positivos para T. vivax. As condições identificadas na propriedade, como ambiente propício aos vetores mecânicos, a presença de animais silvestres e a introdução de animais de estados onde já haviam sido registrados surtos de tripanossomose provavelmente estiveram associadas à introdução e disseminação do agente no rebanho. O elevado número de animais sorologicamente positivos para tripanossomose 82,51% (151/183) demonstra que praticamente todo o rebanho teve contato com o agente. O rápido estabelecimento das medidas de controle, entre elas a utilização das drogas tripanocidas, contribuiu para o controle do surto. O estudo permitiu comprovar a ocorrência de mais um surto de tripanossomíase tripanossomose no Brasil. O diagnóstico clínico da enfermidade foi dificultado pela semelhança dos sinais clínicos com outras enfermidades e pela possibilidade da associação de duas ou mais doenças no mesmo paciente, o que ressalta a importância do estabelecimento de medidas diagnósticas...(AU)

The objective of this study was to investigate the occurrence of trypanosomiasis in a dairy farm in municipality of Timon, State of Maranhão, Brazil. The owner reported abortus, births of weak calves, and mortality of adult animals with progressive weight loss. Visits to the property were carried out to obtain the history, realize animal examination and blood collection for the Woo test, hemograms, serological tests for trypanosomiasis, leptospirosis, and neosporosis and PCR for molecular diagnosis of Trypanosoma vivax. The identification of animals with low values in the hematocrit was the main hematological alteration identified in the herd. Two animals were positive in the Woo test and trypanosomes were visualized in blood smears, confirmed by molecular diagnosis as T. vivax. It was identified that 95.23% (40/42) of the animals with low hematocrit were serologically positive for T. vivax. The conditions identified in the property as an environment propitious to mechanical vectors, the presence of wild animals and the introduction of animals from states where trypanosomiasis outbreaks had already been reported were probably associated with the introduction and dissemination of the agent in the herd. The high number of serologically positive animals for trypanosomiasis 82.51% (151/183) shows that almost all the herd had contact with the agent. The rapid establishment of control measures, including the use of trypanocidal drugs, contributed to the control of the outbreak. The study allowed confirming the occurrence of another outbreak of trypanosomiasis in Brazil. The clinical diagnosis of the disease was difficult by the similarity of the clinical signs of trypanosomiasis with other diseases and the possibility of association of two or more diseases in the same patient, which emphasizes the importance of establishing adequate diagnostic measures as a way to avoid the dissemination of the disease and to minimize the economic losses of the producers.(AU)

Prevalence study on Trypanosoma vivax in dairy cattle in the Western region on the State of Paraná, Brazil / Estudo da prevalência de Trypanosoma vivax em bovinos leiteiros da região Oeste do Estado do Paraná, Brasil

In Brazil, Trypanosoma vivax is present in several states. The disease is endemic in Pantanal and Minas Gerais. In Paraná there is still no report of the parasite, but due to the state borders with Mato Grosso do Sul, São Paulo, Paraguay and Argentina, it is believed that the protozoan circulates in the region without diagnosis. The objective of this study was to investigate the prevalence of T. vivax in dairy cattle in the western region of Paraná. For this purpose, 600 blood samples and 400 serum samples were collected from dairy cattle, distributed in 60 and 40 properties, respectively. While buffy coat smears were performed on blood samples, serum samples were used in Indirect Immunofluorescence Reaction. All samples, in both techniques, presented negative results for T. vivax. These results indicate that the studied hemoprotozoan is not circulating among the cattle in the western region of Paraná. However, future work evolving beef cattle must be carried out and preventive measures should be adopted in order to avoid the entry of the parasite in the State of Paraná.(AU)

No Brasil o Trypanosoma vivax está presente em diversos Estados. No Pantanal e em Minas Gerais a doença é endêmica. No Paraná ainda não há relato do parasito, porém como o Estado possui fronteiras com Mato Grosso do Sul, São Paulo, Paraguai e Argentina acredita-se que o protozoário circula na região sem diagnóstico. O objetivo desse trabalho foi pesquisar a prevalência do T. vivax em bovinos leiteiros da região Oeste do Paraná, sendo esse o primeiro estudo com o protozoário no Estado. Para isso, foram coletadas 600 amostras de sangue total e 400 amostras de soro sanguíneo de bovinos leiteiros, distribuídos em 60 e 40 propriedades, respectivamente. Foi realizado esfregaço de papa leucocitária das amostras de sangue e Reação de Imunofluorescência Indireta das amostras de soro. Todas as amostras, em ambas as técnicas, apresentaram resultado negativo para o T. vivax. Esses resultados indicam que o hemoprotozoário pesquisado não está circulando entre os bovinos de leite da região Oeste do Paraná. Porém, novos trabalhos com bovinos de corte devem ser realizados e medidas preventivas devem ser adotadas para evitar a entrada do parasito no Estado do Paraná.(AU)

Aspectos clínicos, epidemiológicos e diagnóstico da infecção por Trypanosoma vivax em rebanho bovino no estado do Maranhão

ABSTRACT: The objective of this study was to investigate the occurrence of trypanosomiasis in a dairy farm in municipality of Timon, State of Maranhão, Brazil. The owner reported abortus, births of weak calves, and mortality of adult animals with progressive weight loss. Visits to the property were carried out to obtain the history, realize animal examination and blood collection for the Woo test, hemograms, serological tests for trypanosomiasis, leptospirosis, and neosporosis and PCR for molecular diagnosis of Trypanosoma vivax. The identification of animals with low values in the hematocrit was the main hematological alteration identified in the herd. Two animals were positive in the Woo test and trypanosomes were visualized in blood smears, confirmed by molecular diagnosis as T. vivax. It was identified that 95.23% (40/42) of the animals with low hematocrit were serologically positive for T. vivax. The conditions identified in the property as an environment propitious to mechanical vectors, the presence of wild animals and the introduction of animals from states where trypanosomiasis outbreaks had already been reported were probably associated with the introduction and dissemination of the agent in the herd. The high number of serologically positive animals for trypanosomiasis 82.51% (151/183) shows that almost all the herd had contact with the agent. The rapid establishment of control measures, including the use of trypanocidal drugs, contributed to the control of the outbreak. The study allowed confirming the occurrence of another outbreak of trypanosomiasis in Brazil. The clinical diagnosis of the disease was difficult by the similarity of the clinical signs of trypanosomiasis with other diseases and the possibility of association of two or more diseases in the same patient, which emphasizes the importance of establishing adequate diagnostic measures as a way to avoid the dissemination of the disease and to minimize the economic losses of the producers.

RESUMO: O objetivo desse estudo foi investigar a ocorrência de tripanossomose em uma propriedade leiteira no município de Timon no estado do Maranhão, Brasil. O proprietário relatava histórico de abortos, nascimentos de crias fracas e mortalidade de animais adultos com perda progressiva de peso. Foram realizadas visitas à propriedade para obtenção do histórico, exame dos animais e coleta de sangue para realização do teste de Woo, hemogramas, testes sorológicos para pesquisa de anticorpos contra tripanossomose, leptospirose, e neosporose e PCR para diagnóstico molecular de Trypanosoma vivax. A identificação de animais com baixos valores no hematócrito foi a principal alteração hematológica identificada no rebanho. Dois animais foram positivos no teste de Woo, sendo visualizados tripanossomas em esfregaços sanguíneos, confirmados por meio de diagnóstico molecular como sendo T. vivax. Identificou-se que 95,23% (40/42) dos animais com hematócrito baixo foram sorologicamente positivos para T. vivax. As condições identificadas na propriedade, como ambiente propício aos vetores mecânicos, a presença de animais silvestres e a introdução de animais de estados onde já haviam sido registrados surtos de tripanossomose provavelmente estiveram associadas à introdução e disseminação do agente no rebanho. O elevado número de animais sorologicamente positivos para tripanossomose 82,51% (151/183) demonstra que praticamente todo o rebanho teve contato com o agente. O rápido estabelecimento das medidas de controle, entre elas a utilização das drogas tripanocidas, contribuiu para o controle do surto. O estudo permitiu comprovar a ocorrência de mais um surto de tripanossomíase tripanossomose no Brasil. O diagnóstico clínico da enfermidade foi dificultado pela semelhança dos sinais clínicos com outras enfermidades e pela possibilidade da associação de duas ou mais doenças no mesmo paciente, o que ressalta a importância do estabelecimento de medidas diagnósticas adequadas como forma de evitar a disseminação da enfermidade e minimizar as perdas econômicas dos produtores.

Risk factors for trypanosomiasis by Trypanosoma vivax in cattle raised in Rio Grande do Norte state / Fatores de risco para tripanossomose por Trypanosoma vivax em bovinos criados no estado do Rio Grande do Norte

The objective of this study was to determine the prevalence of anti Trypanosoma vivax antibodies and the possible risk factors associated with the infection in cattle in Rio Grande do Norte, Northeastern Brazil, through a cross-sectional epidemiological study, with non-probabilistic convenience sampling. A total of 467 cattle's serum samples were analyzed by indirect immunofluorescence. Forty-two samples tested positive for Trypanosoma vivax IgG antibodies, corresponding to the prevalence of 9%. Risk factors influencing the occurrence of trypanosomiasis were milk exploration, raising of European breeds, productivity category: lactation cow, purchase of new cattle, foraging habits near ponds and rivers, and the presence of mechanical vectors. So, high prevalence in beef animals (59.5%), females (95.2%), European breed (88.1%), lactating cows (85.7%), pasture at banks of dams and rivers (95.2%), in addition to the presence of mechanical vectors (81%) and acquisition of animals (88.1%), indicates the expansion of trypanosomiasis in Northeastern semi-arid region, and the information obtained may explain the epidemiological factors that determine the occurrence of trypanosomiasis by T. vivax in this region.(AU)

Objetivando determinar a prevalência de anticorpos anti-Trypanosoma vivax e os possíveis fatores de risco associados à infecção em bovinos no estado do Rio Grande do Norte, nordeste do Brasil, o trabalho consistiu em um estudo epidemiológico transversal, com amostragem não probabilística por conveniência, no qual foram analisadas, por meio da reação de imunofluorescência indireta, 467 amostras de soro sanguíneo de bovinos. Das amostras testadas, 42 foram reagentes para anticorpos IgG anti-Trypanosoma vivax, o que correspondeu à prevalência de 9,0%. Os fatores de risco que influenciaram a ocorrência da tripanossomose foram: exploração com finalidade do tipo leite, criação de bovinos de raça europeia, categoria animal vaca em lactação, aquisição de animais, forrageamento das margens de açudes e rios, além da presença de vetores mecânicos. A alta prevalência encontrada em animais de corte (59,5%), fêmeas (95,2%), raça europeia (88,1%), vacas em lactação (85,7%), pastagem a margens de açudes e rios (95,2%), além da presença de vetores mecânicos (81%) e aquisição de animais (88,1%), indica a expansão da tripanossomose no semiárido do Nordeste, e as informações obtidas poderão esclarecer os fatores epidemiológicos que determinam a ocorrência da tripanossomose por T. vivax na região.(AU)

Risk factors for trypanosomiasis by Trypanosoma vivax in cattle raised in Rio Grande do Norte state / Fatores de risco para tripanossomose por Trypanosoma vivax em bovinos criados no estado do Rio Grande do Norte

The objective of this study was to determine the prevalence of anti Trypanosoma vivax antibodies and the possible risk factors associated with the infection in cattle in Rio Grande do Norte, Northeastern Brazil, through a cross-sectional epidemiological study, with non-probabilistic convenience sampling. A total of 467 cattle's serum samples were analyzed by indirect immunofluorescence. Forty-two samples tested positive for Trypanosoma vivax IgG antibodies, corresponding to the prevalence of 9%. Risk factors influencing the occurrence of trypanosomiasis were milk exploration, raising of European breeds, productivity category: lactation cow, purchase of new cattle, foraging habits near ponds and rivers, and the presence of mechanical vectors. So, high prevalence in beef animals (59.5%), females (95.2%), European breed (88.1%), lactating cows (85.7%), pasture at banks of dams and rivers (95.2%), in addition to the presence of mechanical vectors (81%) and acquisition of animals (88.1%), indicates the expansion of trypanosomiasis in Northeastern semi-arid region, and the information obtained may explain the epidemiological factors that determine the occurrence of trypanosomiasis by T. vivax in this region.(AU)

Objetivando determinar a prevalência de anticorpos anti-Trypanosoma vivax e os possíveis fatores de risco associados à infecção em bovinos no estado do Rio Grande do Norte, nordeste do Brasil, o trabalho consistiu em um estudo epidemiológico transversal, com amostragem não probabilística por conveniência, no qual foram analisadas, por meio da reação de imunofluorescência indireta, 467 amostras de soro sanguíneo de bovinos. Das amostras testadas, 42 foram reagentes para anticorpos IgG anti-Trypanosoma vivax, o que correspondeu à prevalência de 9,0%. Os fatores de risco que influenciaram a ocorrência da tripanossomose foram: exploração com finalidade do tipo leite, criação de bovinos de raça europeia, categoria animal vaca em lactação, aquisição de animais, forrageamento das margens de açudes e rios, além da presença de vetores mecânicos. A alta prevalência encontrada em animais de corte (59,5%), fêmeas (95,2%), raça europeia (88,1%), vacas em lactação (85,7%), pastagem a margens de açudes e rios (95,2%), além da presença de vetores mecânicos (81%) e aquisição de animais (88,1%), indica a expansão da tripanossomose no semiárido do Nordeste, e as informações obtidas poderão esclarecer os fatores epidemiológicos que determinam a ocorrência da tripanossomose por T. vivax na região.(AU)

Clinical evaluation and reproductive indices of dairy cows naturally infected with Trypanosoma vivax / Avaliação clínica e índices reprodutivos em vacas leiteiras naturalmente infectadas por Trypanossoma vivax

The present study was aimed to assess the clinical changes and reproductive indices of dairy cows naturally infected with Trypanosoma vivax in a herd located in the Central Sertão of Ceará, Brazil. For the study, 40 animals were selected from a herd consisting of 210 dairy cows, and subdivided into two groups: group I, consisting of 20 cows naturally infected with T. vivax, and group II, consisting of 20 uninfected cows. Data on the parameters of reproductive efficiency were evaluated using a farm database (Propad Profissional GP®), in which the individual reproductive characteristics of the animals were stored. Data collected both before and after the outbreak were compared. The cows from group I showed a sudden drop in milk production, mucosal pallor, depression, anorexia, and a significant increase in rectal temperature and decreased hematocrit during the parasitemia outbreak. These clinical signs of the disease disappeared over time. However, T. vivax was detected by polymerase chain reaction (PCR) in animals with a negative parasitological test one year after the occurrence. Comparison of the reproductive index data for cows from groups I and II before and after the outbreak showed significant differences in first postpartum estrus, service period, and intervals between deliveries. In addition, repetition of estrus and abortion were significantly associated with T. vivax infection. Analysisof the reproductive indices of cows in groups I and II suggests that T. vivax infection decreased thereproductive efficiency of the study cows.(AU)

O presente estudo teve como objetivos avaliar as alterações clínicas e os índices reprodutivos de vacas leiteiras infectadas naturalmente por Trypanosoma vivax em um rebanho localizado no sertão central do Ceará, Brasil. No rebanho, constituído por 210 vacas leiteiras, foram selecionados 40 animais, subdivididos em dois grupos: Grupo I, composto por 20 vacas infectadas naturalmente por T. vivax e o grupo II, composto por 20 vacas não infectadas. Os dados relativos aos parâmetros, que indicam eficiência reprodutiva dos dois grupos de animais, foram avaliados através de um banco de dados disponível na propriedade, por meio dos quais as características reprodutivas individuais dos animais eram armazenadas em software Propad Profissional GP®, sendo as informações obtidas, comparadas tanto no período em que antecedeu o surto, quanto no que ocorreu após ele. As vacas do grupo I apresentaram durante o surto alta parasitemia, queda brusca da produção de leite, palidez de mucosas, depressão, anorexia, aumento significativo da temperatura retal e redução do hematócrito. Observou-se o desaparecimento dos sinais clínicos da enfermidade ao longo do tempo, no entanto, houve a confirmação do diagnóstico de T. vivax, através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em animais com exame parasitológico negativo um ano após a ocorrência. Quando comparados os dados dos índices reprodutivos das vacas dos grupos I e II sugere que T. vivax diminuiu a eficiênciareprodutiva dos animais avaliados.(AU)

EPIDEMIOLOGICAL STUDY OF TRYPANOSOME SPECIES IN CAMELS AND RUMINANTS IN MOGADISHU, JOWHAR AND AFGOYE DISTRICTS OF SOMALIA

Tripanossomose Africana Animal e Humana (TAA e TAH, respectivamente) continua sendo uma preocupação econômica e de saúde significativa na África. Na Somália, a guerra civil da década de 1990 resultou na destruição de estruturas educacionais, de pesquisa, econômicas e sociais, tornando as pontuações do país muito baixas para a maioria dos indicadores humanitários. Estudos anteriores sobre a detecção de espécies de Trypanosoma em animais domésticos da Somália só foram realizados durante a década de 1990, usando métodos padrão de detecção de tripanossomas (MPDT), esfregaço de sangue e técnica Woo. Existem poucas informações sobre o status da Tripanossomose na Somália, especialmente em relação à epidemiologia molecular. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência e a caracterização molecular de tripanossomas em animais domésticos da Somália. Esta tese de doutorado apresenta dois manuscritos e revisão de literatura sobre Tsé-tsé e Tripanossomose. O primeiro manuscrito é um levantamento parasitológico, sorológico e molecular de Trypanosoma spp. em camelos (Camelus dromedarius) da Somália. Um total de 182 amostras de sangue de Camelus dromedarius de nômades e de fazendas leiteiras foram avaliadas usando os métodos MPDT, sorológico (CATT/T. evansi) e molecular (ITS1-PCR). Todas as amostras de camelos foram negativas para Trypanosoma spp. por STDM. Um total de 125/182 (68,7%, 95% CI: 61,4-75,3%) camelos foram soropositivos para T. evansi por CATT / T. evansi. Os camelos criados no sistema nômade apresentaram mais chance de serem soropositivos para T. evansi do que aqueles sob sistema de produção leiteira (OR: 5,6, IC 95%: 2,115,2, P = 0,0001). Cinco dos 182 (2,7%, IC 95%: 0,9-6,3%) camelos apresentaram resultado positivo para Trypanosoma sp. por ITS1-PCR. O sequenciamento da região ITS1 da espécie Trypanosoma detectada revelou que os camelos estavam infectados com T. evansi e T. simiae. O segundo manuscrito versa a respeito da detecção parasitológica e molecular de Trypanosoma spp. em bovinos, caprinos e ovinos da Somália. Um total de 614 amostras de sangue de bovinos (n = 202), caprinos (n = 206) e ovinos (n = 206) foram avaliadas usando a técnica de papa leucocitária (TPL) e ensaios moleculares incluindo SRA-PCR para detectção de T. brucei rhodesiense, agente causador da TAH. Um total de 21/614 (3,4%; IC95%: 2,1- 5,2%) e 101/614 (16,4%; IC95%: 13,6-19,6%) ruminantes foram positivos para Trypanosoma spp. por BCT e PCR, respectivamente. Por PCR, a maior prevalência de espécies de Trypanosoma foi observada em bovinos (23,8%; IC: 18,4-30,1%), seguidos por caprinos (17,5%; IC: 12,9-23,3%) e ovinos (8,3%; 95% IC: 5,1-12,9%). Um total de 74/101 (73,3%; 95% IC: 63,5-81,6%) ruminantes mostraram coinfecção com pelo menos duas espécies de Trypanosoma. Trypanosoma evansi, T. godfreyi, T. vivax, T. brucei, T. simiae e T. congolense foram as espécies de Trypanosoma encontradas no presente estudo. Todas as amostras positivas para T. brucei pelo TBR-PCR foram negativas para T. b. rhodesiense, pelo ensaio SRA-PCR. Este é o primeiro estudo sobre a detecção molecular de Trypanosoma spp. em animais domésticos na Somália. Mais investigações epidemiológicas e medidas de controle sustentável são necessárias para gerenciar infecções por Trypanosoma spp. e sua propagação no país. Além disso, os estudos também devem se concentrar na detecção de T. b. rhodesiense, agente causador do TAH, no país.

Animal and Human African trypanosomiasis (AAT and HAT, respectively) remain significant health and economic concern in Africa. In Somalia, the civil war of the 1990s resulted in the destruction of educational, research, economic and social structures, making the country scores very low for most humanitarian indicators. Previous studies on the detection of Trypanosoma species in Somali domestic animals have only been performed during the 1990s using standard trypanosome detection methods (STDM), blood smear and Woo techniques. Scanty information exists about the trypanosomiasis status in Somalia, especially regarding molecular epidemiology. Accordingly, the aim of this thesis was to evaluate the prevalence and molecular characterization of trypanosomes in domestic animals from Somalia. This doctoral thesis presents two manuscripts and a general literature review on Tsetse and Trypanosomiasis. The first manuscript is a parasitological, serological and molecular survey of Trypanosoma spp. in camels (Camelus dromedarius) in Somalia. A total of 182 blood samples from Camelus dromedarius from nomadic and dairy farms were evaluated using STDM, serological (CATT/T. evansi) and molecular (ITS1-PCR) methods. All camel samples were negative for Trypanosoma spp. by STDM. A total of 125/182 (68.7%, 95% CI: 61.475.3%) camels were seropositive for T. evansi by CATT/T. evansi. Camels reared in the nomadic system were more likely to be seropositive for T. evansi than those under dairy production system (OR: 5.6, 95% CI: 2.115.2, P = 0.0001). Five out of 182 (2.7%, 95% CI: 0.96.3%) camels tested positive for Trypanosoma sp. by ITS1-PCR. Sequencing of the ITS1 region of the Trypanosoma species detected herein revealed that camels were infected with T. evansi and T. simiae. The second manuscript deals with the parasitological and molecular detection of Trypanosoma spp. in cattle, goats and sheep from Somalia. A total of 614 blood samples from cattle (n = 202), goats (n = 206) and sheep (n = 206) were evaluated using the buffy coat technique (BCT) and molecular assays including SRA-PCR performed for T. b. rhodesiense, HAT causative agent. Twenty-one out of 614 (3.4%; 95% CI: 2.1-5.2%) and 101/614 (16.4%; 95% CI: 13.6-19.6%) ruminants were positive for Trypanosoma spp. by BCT and PCR, respectively. Using PCR, the highest Trypanosoma species prevalence was observed in cattle (23.8%; 95% CI: 18.4-30.1%) followed by goats (17.5%; 95% CI: 12.9-23.3%) and sheep (8.3%; 95% CI: 5.1-12.9%). A total of 74/101 (73.3%; 95% CI: 63.5-81.6%) ruminants were shown coinfection with at least two Trypanosome species. Trypanosoma evansi, T. godfreyi, T. vivax, T. brucei, T. simiae and T. congolense were the Trypanosoma species found in the present study. All T. brucei-positive samples by the TBR-PCR have tested negative for T. b. rhodesiense, by the SRA-PCR assay. This is the first study on the molecular detection of Trypanosoma sp. in domestic animals in Somalia. Further epidemiological investigations and sustainable control measures are needed to manage infections of Trypanosoma spp. and its spreading in the country. In addition, studies should also focus on the detection of HAT causative agents in the country.

ASPECTOS CLÍNICO-EPIDEMIOLÓGICOS E TRATAMENTO DA TRIPANOSOMOSE BOVINA POR Trypanosoma vivax NO ESTADO DE GOIÁS

Trypanosoma (Duttonella) vivax é o protozoário causador da tripanosomose bovina. Uma hemoparasitose de ruminantes que vem assumindo grande importância econômica no Brasil. Sua transmissão pode ocorrer por vetores e também pela via iatrogênica. Animais infectados apresentam sinais clínicos comuns a diversas outras doenças, o que dificulta o diagnóstico e tratamento precoce em rebanhos infectados. Nos últimos 10 anos, a doença vem constantemente se expandindo para novos territórios brasileiro. Este estudo relata o primeiro caso de tripanosomose bovina causada por Trypanosoma vivax no estado de Goiás, bem como outros casos que ocorreram dentro de um período de 24 meses, demonstrando aspectos epidemiológicos, como o compartilhamento de agulhas e a comercialização de vacas infectadas, que influenciaram na dispersão da doença. Ainda, observou-se que T. vivax foi capaz de infectar e desenvolver a doença em bezerros, independente se inoculados pela via intradérmica, subcutânea, intramuscular ou endovenosa. A presença de Anaplasma marginale latente nos bezerros com tripanosomose interferiu diretamente no percentual de mortalidade dos animais. Por fim, com relação à eficácia, apenas animais que receberam isometamidium foram capazes de permanecer sem nova parasitemia durante os 180 dias de estudo. Animais que receberam diminazene apresentaram nova parasitemia quando reinfectados 50 dias após o tratamento e, por ultimo, imidocarb não foi eficaz no tratamento da tripanosomose bovina. Este é o primeiro trabalho que descreve a presença de T. vivax, bem como sua epidemiologia no estado de Goiás, avaliou-se a capacidade de infecção deste parasito por diferentes vias, os sinais clínicos, métodos de diagnóstico e, também, avaliou-se a eficácia do tratamento com imidocarb, diminazene e isometamidium em bovinos experimentalmente infectados com T. vivax no Brasil.

Trypanosoma (Duttonella) vivax is the protozoan that causes bovine trypanosomiasis. A hemoparasitosis of ruminants that has been assuming great economic importance in Brazil. Its transmission can occur by vectors and also by the iatrogenic way. Infected animals show clinical signs common to several other diseases, which makes it difficult to diagnose and treat early in infected herds. In the last 10 years, the disease has been constantly expanding to new Brazilian territories. This study reports the first case of bovine trypanosomiasis caused by Trypanosoma vivax in Goiás, Brazil, as well as other cases that occurred within a period of 24 months, demonstrating epidemiological aspects such as needle sharing and commercialization of infected cows influencing the spread of this disease. Furthermore, it was observed that T. vivax was able to infect and develop the disease in calves when they were inoculated by intradermal, subcutaneous, intramuscular or intravenous way. The presence of Anaplasma marginale latent, in calves with trypanosomiasis, interfer directly in the percentage of mortality of the animals. Finally, with regard to efficacy, only animals that received isometamidium were able to remain without new parasitaemia after 180 days of study. Treatment with diminazene allowed new parasitemia when reinfected 50 days after treatment and, finally, imidocarb was not effective in the treatment of bovine trypanosomosis. This is the first study that describes the presence of T. vivax, as well as its epidemiology in the State of Goiás, evaluated the infection capacity of this parasite by different pathways, clinical signs, and diagnostic methods and also evaluated the efficacy of the treatment with imidocarb, diminazene and isometamidium in cattle experimentally infected with T. vivax in Brazil.

AVALIAÇÃO in vitro E in vivo DA EFICÁCIA DE DESINFETANTES CONTRA Trypanosoma vivax

Trypanosoma vivax é um hematozoário que habita o plasma de ruminantes, é responsável pela tripanossomose bovina, sendo geradora de grandes prejuízos na pecuária brasileira. Destaca-se entre os sinais clínicos da doença a anemia, hipertermia, letargia, diminuição da produção leiteira e distúrbios reprodutivos. Diagnosticado pela primeira vez no Brasil na década de 1970, o parasito se difundiu em rebanhos de todo país, sendo identificado pela primeira vez no estado de Goiás em 2016 em propriedades produtoras de leite. Com sua chegada em rebanhos leiteiros, o parasito adaptou-se a transmissão através de fômites contaminados, principalmente em locais que faziam o uso de agulhas e seringas compartilhadas. A utilização de material compartilhado, ainda que improprio é uma prática comum em locais que realizam a aplicação de ocitocina, o produto apresenta capacidade de manter a viabilidade do parasito, permitindo sua a sobrevivência por mais de 30 minutos, sendo uma forme extremamente eficaz de se transmitir o T. vivax. Com essa premissa é importante que se estabeleçam protocolos para interromper a transmissão do parasito dentro dos rebanhos, buscando diminuir os prejuízos causados pelos mesmos.

Trypanosoma vivax is a hematozoan that inhabits ruminant plasma, is responsible for bovine trypanosomiasis, being this cause of great losses in Brazilian livestocks. Among the clinical signs of the disease, there is anemia, hyperthermia, lethargy, decreased milk production and reproductive disorders. Diagnosed for the first time in Brazil in the 1970s, the parasite spread to herds across the country, being first identified in the state of Goiás in 2016 on dairy farms. With its arrival in dairy herds, the parasite adapted to the transmission through contaminated fomites, mainly in places that used shared needles and syringes. The use of shared material, even if knowingly improper, is a common practice in places that apply oxytocin, the product has the capacity to maintain the viability of the parasite, allowing its survival for more than 30 minutes, being an extremely effective form transmission of T. vivax. With this premise it is important to establish protocols to stop the transmission of the parasite within the herds, seeking to reduce the losses caused by them.

TRIAGEM E IDENTIFICAÇÃO DE COMPOSTOS PRESENTES NO PATHOGEN BOX® COM ATIVIDADE ANTI-Trypanosoma evansi

CANEVER, M. F. Triagem e Identificação de Compostos Presentes no Pathogen Box® com Atividade Anti-Trypanosoma evansi. 2018. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal) - Universidade do Estado de Santa Catarina, Lages, 2018. O parasita Trypanosoma evansi, agente etiológico da surra, possui distribuição cosmopolita e apesar de ser descrito inicialmente como causador da doença em equinos, já existem relatos da infecção em inúmeras espécies domésticas e selvagens (cães, camelos, bovinos, caprinos, capivara, morcegos hematófagos, entre outros). Atualmente o tratamento e profilaxia da doença causada por T. evansi são baseados na administração de fármacos como suramina, aceturato de diminazeno, melarsomina e isometamidium. As principais limitações encontradas no uso desses fármacos estão associadas à toxicidade em algumas espécies, e relatos de cepas resistentes ao tratamento. Com o intuito de encontrar novas alternativas para tratamento de doenças negligenciadas, a Medicines for Malaria Venture desenvolveu o Pathogen Box® - um conjunto de placas contendo quatrocentos compostos distribuídos individualmente em poços. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade anti-T. evansi de compostos presentes no Pathogen Box® e identificar moléculas que poderão ser utilizadas futuramente no desenvolvimento de novos fármacos para tratamento e profilaxia da surra. Dentre os quatrocentos compostos analisados, sete (pentamidina, MMV688410, MMV687273, MMV022478, MMV688763, MMV676602 e auranofina) apresentaram atividade potencial contra T. evansi reduzindo o número de células em cultivo, sendo que dois desses (pentamidina e MMV688410) também induziram potencialmente a ocorrência de morte por necrose celular. Outros vinte e quadro compostos apresentaram ação intermediária contra T. evansi, dentre os quais, cinco são fármacos já disponíveis no mercado para tratamento de outras afecções. Utilizando dados de citoxicidade celular disponíveis na literatura e no material de apoio do Pathogen Box®, foi possível indicar o composto MMV688410 como o mais promissor para posteriores estudos de novas drogas tripanocidas. O composto MMV688410 provavelmente inibe a triapanotiona redutase, fato que explica sua baixa citotoxidade, uma vez que esse alvo é exclusivo de tripanossomatídeos, além disso induziu tanto a redução do número de parasitas em cultivo como a morte dos parasitas por necrose celular. Os resultados obtidos neste trabalho fornecem dados promissores para o estudo de novas drogas tripanocidas. Mais pesquisas são necessárias para melhor determinar a ação dos compostos encontrados contra T. evansi.

CANEVER, M. F. Screening and Identification of Compounds Present in Pathogen Box® with anti-Trypanosoma evansi Activity. 2018. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal) - Universidade do Estado de Santa Catarina, Lages, 2018. The parasite Trypanosoma evansi, an etiological agent of surra, has a cosmopolitan distribution and although it is initially described as causing the disease in horses, there are reports of infection in innumerable domestic and wild species (dogs, camels, cattle, caprines, capybara, bats, among others). Currently the treatment and prophylaxis of the disease caused by T. evansi are based on the administration of drugs such as suramin, diminazene aceturate, melarsomine and isometamidium. The main limitations in the use of these drugs are associated with toxicity in some species, and reports of treatment resistant strains. In order to find new alternatives for treatment of neglected diseases, Medicines for Malaria Venture developed the Pathogen Box® - a set of plates containing four hundred compounds distributed individually in wells. The objective of this work was to evaluate the anti-T. evansi activity of compounds present in the Pathogen Box® and to identify molecules that could be used in the future in the development of new drugs for treatment and prophylaxis of surra. Among the four hundred compounds analyzed, seven (pentamidine, MMV688410, MMV687273, MMV022478, MMV688763, MMV676602 and auranofin) showed potential activity against T. evansi, reducing the number of cells in culture, two of which (pentamidine and MMV688410) also potentially induced occurrence of death by cellular necrosis. Twenty other compounds showed intermediate action against T. evansi, of which five are drugs already available in the market for treatment of other conditions. Using cell cytotoxicity data available in the literature and in Pathogen Box® support material, it was possible to indicate compound MMV688410 as the most promising for further studies of novel trypanocidal drugs. The compound MMV688410 probably inhibits triapanoethione reductase, which explains its low cytotoxicity, since this target is unique to trypanosomatids, in addition it induced both the reduction of the number of parasites in culture and the death of the parasites by cellular necrosis. The results obtained in this work provide promising data for the development of new trypanocidal drugs, but more studies are needed to better determine the action of the compounds found against T. evansi.

Novo antígeno recombinante para diagnóstico sorológico da tripanossomose bovina.

As tripanossomoses são infecções parasitárias de homens e animais, causadas por protozoários do gênero Trypanosoma. A tripanossomose bovina (TB) é causada pelos protozoários T. vivax, T. congolense e T. brucei. Quadros agudos dessa doença são caracterizados inicialmente por hipertermia, seguida de anemia moderada a intensa, edema subcutâneo, letargia, redução na produção de leite, perda de peso progressiva, aumento de volume de linfonodos e distúrbios reprodutivos. A fase crônica ocorre quando os animais sobrevivem à fase aguda, começam a recuperar-se e tornam-se assintomáticos. O exame parasitológico direto (técnica de Woo ou esfregaços sanguíneos) é o método de diagnóstico utilizado na rotina por médicos veterinários, pois é rápido e apresenta baixo custo. Apesar disso, ambos apresentam baixa sensibilidade, impossibilitando estudos epidemiológicos eficazes, principalmente quando aplicado em animais cronicamente infectados, uma vez que apresentam baixa parasitemia e são os principais reservatórios desses protozoários. As técnicas sorológicas utilizando antígeno bruto têm sido frequentemente empregadas em estudos epidemiológicos da TB, e com base no estado imunológico dos animais é possível definir a situação epidemiológica das diferentes regiões de ocorrência dessas parasitoses. O objetivo deste trabalho foi desenvolver ferramentas de diagnósticos sorológicos mais específicos e sensíveis para a TB. Para isso, um gene conservado entre os tripanossomatídeos (MyxoTLm) foi expresso em sistema heterólogo, utilizando como vetor o plasmídeo pET28a-TEV e como sistema de expressão Escherichia coli cepa BL21 Star. A proteína heteróloga foi purificada por cromatografia de afinidade e aplicada como antígeno no teste sorológico por ELISA. Os ELISAs indiretos anti-IgM e anti-IgG, padronizados a partir do antígeno recombinante, apresentaram alto poder discriminatório quando testou-se soros de animais saudáveis (controle negativo) e com TB, atingindo especificidade de 91,30% e 95,65% e sensibilidade de 82,35% e 88,23%, respectivamente. Além disso, o antígeno demonstrou um bom desempenho para ELISA indireto anti-IgM, com área sob a curva ROC de 0,8568, e um excelente desempenho para ELISA indireto anti-IgG, com área sob a curva ROC de 0,9565. Por sua vez, o antígeno bruto usado no ELISA indireto anti-IgM atingiu sensibilidade de 70,58% e especificidade de 78,26%, e apresentou baixo desempenho no teste, com área sob a curva ROC de 0,7363. Por sua vez, para ELISA indireto com anti-IgG, o antígeno bruto atingiu sensibilidade de 82,35% e especificidade de 69,56%, e também apresentou baixo desempenho no teste, com área sob a curva ROC de 0,7570. Assim, conclui-se que a proteína recombinante 9 desenvolvida nesse estudo é promissora se aplicada ao imunodiagnóstico e demonstrou potencial para ser utilizada no diagnóstico sorológico da TB.

Trypanosomes are parasitic infections of humans and animals, caused by protozoa of the genus Trypanosoma. Bovine trypanosomiasis (BT) is caused by the protozoa T. vivax, T. congolense and T. brucei. BT acute infections are characterized initially by hyperthermia, followed by moderate to severe anemia, subcutaneous edema, lethargy, reduced milk production, progressive weight loss, enlarged lymph nodes and reproductive disorders. The chronic phase occurs in those animals that survive the acute phase and begin to recover of infection becoming asymptomatic. Direct parasitological examination (Woo technique or blood smears) is the diagnostic method used routinely by veterinarians as it is a quick and inexpensive method. However, the low sensitivity of this technique limits its use in epidemiological studies, since chronically infected animals present low parasitemia and are considered the main reservoirs of these protozoa. Serological techniques using crude antigen have often been used in epidemiological studies of BT, and based on the immunological status of the animals it is possible to determine the epidemiological situation in different regions in which such parasitoses take place. The objective of this study was to develop more specific and sensitive serological diagnostic tools for the diagnosis of bovine trypanosomiasis. For this, a gene conserved among trypanosomatids (MyxoTLm) was expressed in a heterologous system by using pET28a-TEV plasmid as vector and Escherichia coli BL21 Star strain as expression system. The expressed protein was purified by affinity chromatography and used as antigen in an ELISA test. Indirect anti-IgM and anti-IgG ELISAs assembled with the recombinant antigen showed high discriminatory power when sera from healthy (negative control) and diseased (BT) animals were tested as they reached 91.30% and 95.65% specificity, and 82.35% and 88.23% sensitivity, respectively. In addition, recombinant protein demonstrated a good performance to detect IgM, with the area under the ROC curve of 0.8568, and excellent performance to detect IgG, with area under the ROC curve of 0.9565. The crude antigen used in the indirect anti-IgM ELISA reached 70.58% sensitivity and 78.26% specificity, and presented low test performance, with area under the ROC curve of 0.7363. When applied to the anti-IgG indirect ELISA, the crude antigen reached 82.35% sensitivity and 69.56% specificity, also presenting a low performance with area under the ROC curve of 0.7570. Therefore, the recombinant protein used in this study is promissory to be applied in the immunodiagnosis and demonstrated great potential to be utilized in BT serological diagnosis.

PADRONIZAÇÃO DE UM ANTÍGENO TAMPONADO PARA PESQUISA DE ANTICORPOS ANTI -Trypanosoma evansi EM EQUINOS

Surra, também conhecida como Mal das Cadeiras na América Latina, é uma doença infecciosa causada pelo Trypanosoma evansi (T. evansi). Descrita primariamente nas regiões tropicais e subtropicais da África, Ásia, América Central, acomete grande número de espécies de animais domésticos e selvagens (equinos, camelídeos bovinos, búfalos, ovinos, caprinos, suínos, felinos, cães, capivaras e morcegos hematófagos), causando morte de animais, diminuição da produção e elevados e gastos com tratamentos. No Brasil não existem dados oficiais acerca da circulação do agente, apenas estudos regionalizados. Santa Catarina é considerada zona livre da doença. O controle da infecção está baseado no diagnóstico rápido seguido do tratamento dos animais doentes. O exame microscópico direto, é o teste mais utilizado para o diagnóstico da infecção no Brasil, entretanto, apresenta baixa especificidade e sensibilidade, levando possivelmente ao sub - diagnóstico da infecção, principalmente na fase crônica. Assim, o objetivo deste trabalho é avaliar um ensaio de soroaglutinação rápida (SAR/Te) para sorodiagnóstico de triagem da infecção por T. evansi em equinos. Além disso, este estudo descreve as características clínicas, parasitológicas e hematobioquímicas no primeiro caso autóctone de surra em equinos no Estado de Santa Catarina, Brasil. Deste modo, esta proposta visa contribuir com as estratégias de vigilância e controle da surra no país.

Trypanosoma evansi is the causative agent of surra or Mal das Caderas (in Brazil). The disease is present in Africa, Asia and Latin America. It can affect a very large range of domestic and wild hosts ( equines, camelids, cattle, buffaloes, sheep, goats, pigs, dogs, capybaras and vampire bats) causing high mortality, decrease of production and expenses with treatments. In Brazil, there are no epizootiological data on the circulation of the agent, only regionalized studies. Santa Catarina State is considered a free zone of trypanosomiasis. The disease control, is based on rapid diagnosis of infection followed by treatment of animals. Direct microscopic examination is the primary test for the diagnosis of infection in Brazil, however, it presents low specificity and sensitivity, possibly leading to underdiagnosis of infection, mainly in the chronic stage. Thus, the main aim of this study is to evaluate a rapid test of serum agglutination for diagnosis of T. evansi infection in horses. In addition, this work describes the clinical, parasitological and haemato biochemical parameters in the first autochthonous outbreak of Surra in horses in the State of Santa Catarina, Brazil.

AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE DE TRÊS COMPOSTOS DO ÓLEO DE MELALEUCA SOBRE O Trypanosoma evansi

O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade tripanocida do terpinen-4-ol, gama-()-terpinen e alfa-()-terpinen contra o Trypanosoma evansi in vitro e in vivo. Os testes in vitro foram realizados em meio de cultura contendo T. evansi, utilizando-se três concentrações de cada composto (0.5, 1.0 e 2.0%) de forma individual e em associação. A contagem de tripomastigotas vivas foi realizada em câmara de Neubauer após 1, 3, 6 e 9 horas pós-incubação. A partir dos testes in vitro, foi possível observar a morte dos parasitos de forma concentração-dependente, exceto o composto -terpinen que foi capaz de eliminar todos os parasitos 1 h pós-incubação em todas as concentrações testadas. Para realização dos ensaios in vivo, primeiramente foram utilizados 70 camundongos divididos em 10 grupos (A ao J), com sete animais cada grupo. O grupo A serviu como controle negativo (animais sadios); grupos de B a J foram infectados com 0,1 mL de sangue contendo 105 tripomastigotas com T. evansi. O grupo B serviu como controle positivo; grupos C, D e E receberam terpinen-4-ol, -terpinen e -terpinen via oral na dose de 1.0 mL kg-1, respectivamente. O grupo F recebeu a associação dos compostos terpinen-4-ol + -terpinen, grupo G recebeu a associação dos compostos terpinen-4-ol + -terpinen; grupo H recebeu a associação do -terpinen + -terpinen via oral na dose de 1.0 mL kg-1 (0.5 mL kg-1 de cada composto). O grupo I recebeu a associação dos compostos terpinen-4-ol + -terpinen + -terpinen via oral na dose de 1.0 mL kg-1 (0.335 mL kg-1 de cada composto). O grupo J foi tratado com aceturato de diminazeno na dose terapêutica (dose única de 3.5 mg kg-1, via intramuscular) para validação do teste. Foi possível verificar que os animais do grupo E (tratados com -terpinen) apresentaram um aumento da longevidade quando comparados ao grupo B, porém sem eficácia curativa, pois todos os animais deste grupo morreram durante o período de observação da parasitemia. A partir disto, um segundo experimento foi realizado testando a associação entre o -terpinen e o aceturato de diminazeno. Foram utilizados 28 camundongos divididos em 4 grupos (A, B, C e D; n=7). O grupo A foi formado por animais não infectados (controle negativo), o grupo B foi formado por animais infectados (controle positivo), o grupo C foi formado por animais infectados e tratados com aceturato de diminazeno (dose única de 3.5 mg kg-1, via intramuscular), e o grupo D foi formado por animais infectados e tratados com associação de aceturato de diminazeno (dose única de 3.5 mg kg-1, via intramuscular) mais -terpinen (1.0 mL kg-1 via oral durante 10 dias). A partir deste resultado, foi possível observar um aumento da eficácia curativa (57.14 %) no grupo D quando comparado ao grupo C, que obteve apenas 14.28 % de eficácia curativa. Baseado nestes resultados, o -terpinen foi o composto presente no óleo essencial de M. alternifolia que apresentou atividade tripanocida.

This study aimed the evaluation of the trypanocidal activity of terpinen-4-ol, -terpinene and -terpinene against Trypanosoma evansi in vivo and in vitro. The in vitro assay was performed in culture medium of T. evansi, using three different concentrations of each compound (0.5, 1.0 and 2.0%), individually and in synergism. Motile (live) trypomastigotes were counted using a Neubauer chamber after 1, 3, 6 and 9 hours of incubation. Death of parasites occurred in a concentration-dependent manner, except for -terpinene that was able to eliminate all parasites after 1 hour of incubation at all concentrations tested. Seventy mice were equally assigned into 10 groups (A to J) for the in vivo tests. Group A served as a negative control (healthy animals); groups B - J were infected with 0.1 mL of blood containing 105 T. evansi trypomastigotes. Group B served as a positive control; groups C, D and E received oral doses of 1.0 mL kg-1 of terpinen-4-ol, -terpinene and -terpinene, respectively. Associations of the three compounds were orally administered to groups F I: terpinen-4-ol + -terpinene to group F, terpinen-4-ol + -terpinene to group G, -terpinene + -terpinene at 1.0 mL kg-1 (0.5 mL kg-1 for each compound) to group H, terpinen-4-ol + -terpinene + -terpinene at 1.0 mL kg-1 (0.335 mL kg-1 of each compound) to group I. A therapeutic dose of diminazene aceturate (single dose of 3.5 mg kg-1, intraperitoneally) was administered to Group J aiming test validation. Animals in group E (treated with -terpinene) showed an increase of longevity when compared to animals in group B. However, no curative effectiveness was observed, since all animals in this group died during the observation period. In order to evaluate the association between -terpinene and diminazene aceturate, twenty-eight mice were assigned into 4 groups (A, B, C and D, n = 7). Group A included animals uninfected (negative control); group B was composed by infected animals (positive control); group C consisted of infected animals treated with diminazene aceturate (single dose of 3.5 mg kg-1, im); and group D consisted of infected animals treated with an association of diminazene aceturate (single dose of 3.5 mg kg-1, im) and -terpinene (1.0 ml kg-1, orally administered for 10 days). It was observed, as a result of this experiment, an increase in the curative effectiveness (57.14%) in group D when compared to group C, which showed only 14.28% of curative effectiveness. Based on these results, -terpinene was the compound present in M. alternifolia essential oil that showed trypanocidal activity.

Primeiro registro de Trypanosoma vivax em bovinos no Estado do Rio Grande do Sul, Brasil

This study aimed at reporting the occurrence of Trypanosoma vivax in southern Brazil. The protozoan was diagnosed through peripheral blood smear evaluation of a bovine and confirmed by the evaluation of the trypomastigote forms morphology and by the Polimerase Chain Reaction (PCR). The animal showed clinical signs similar to the nervous form of the infection by T. vivax. Negative results for T. vivax were found in other bovines grazing in the same paddock. This is the first report of T. vivax in the state of Rio Grande do Sul and in the southern region of Brazil.

Este estudo teve o objetivo de relatar a ocorrência de Trypanosoma vivax no Sul do Brasil. O protozoário foi diagnosticado em esfregaço sanguíneo de um bovino e a identificação baseada na morfologia das formas tripomastigotas e confirmada pela técnica de reação em cadeia de polimerases (PCR). O animal infectado apresentou sintomatologia compatível com a forma nervosa da infecção por T. vivax. Outros bovinos que compartilhavam o mesmo ambiente apresentaram resultados negativos para T. vivax por PCR. Este é o primeiro registro de T. vivax no Estado do Rio Grande do Sul e na região Sul do Brasil.

Suscetibilidade de Trypanosoma evansi à anfotericina B

The aim of this study was to evaluate the Trypanosoma evansi susceptibility to amphotericin B in vitro and in vivo. Four concentrations (0.06, 0.25, 1.0, and 4.0µg mL-1) of amphotericin B were tested against a suspension containing T. evansi and phosphate buffer solution with glucose in the in vitro assay. Fifteen rats infected with T. evansi were used for the in vivo assay. Groups A (n=5) and B (n=5) received daily doses of 1 and 3mg kg-1 during 10 days and the parasitemia was estimated daily by microscopic examination of smears. The rats from group C (n=5) were the positive control and were infected but not treated. Rats from group D (n=5) were used as negative control. in vitro assays showed a 100% of susceptibility of T. evansi to amphotericin B after 7 hours, at all concentrations tested. The higher dose tested did not cure the rats, although treated rats had a longer life span in comparison to the non-treated group. Adverse effects on renal and hepatic hemodynamics were also researched. Biochemical parameters obtained were within the normal ranges. It was concluded that T. evansi is susceptible to amphotericin B in vitro. The dose of 3 mg kg-1 tested in rats increased life span, but did not cure the animals.

O objetivo deste estudo foi avaliar a suscetibilidade do Trypanosoma evansi in vitro e in vivo à anfotericina B. Nos testes in vitro, foram utilizadas quatro concentrações (0,06; 0,25; 1,0; 4,0µg mL-1) de anfotecicina B frente a uma suspensão de T. evansi em solução tampão fosfato rico em glicose (PBS - glicose). Para avaliar a eficácia in vivo, foram utilizados 15 ratos parasitados com T. evansi. Em dois grupos de cinco ratos infectados, doses únicas diárias de 1 (grupo A) e de 3mg kg-1 (grupo B) foram administradas via intraperitonial durante 10 dias, e a parasitemia foi avaliada por meio de esfregaço sanguíneo. Grupo C (n=5) foi utilizado como grupo controle positivo, infectados com T. evansi e não tratados, e o grupo D (n=5), como controle negativo. Os ensaios in vitro evidenciaram suscetibilidade de 100% do T. evansi à anfotericina B após 7h, em todas as concentrações avaliadas. Nos ratos, nem a maior dose testada curou os roedores, apesar de ter prolongado a vida destes em comparação à vida dos animais infectados, mas não tratados. Foi também investigada a função hepática e renal dos ratos após a terapia, e os parâmetros bioquímicos analisados mantiveram-se dentro da normalidade. Conclui-se que o T. evansi in vitro é suscetível à anfotericina B. A dose 3mg kg-1 testada aumentou a expectativa de vida de ratos infectados, porém não teve efeito curativo.