Occurrence of tick-borne pathogens in dogs in a coastal region of the state of Ceará, northeastern Brazil / Ocorrência de patógenos transmitidos por carrapatos em cães em uma região litorânea do estado do Ceará, nordeste do Brasil

Abstract The aim of this study was to determine the occurrence of tick-borne pathogens (Ehrlichia canis, Babesia vogeli, Hepatozoon spp. and Rickettsia spp.) in dogs in Vila de Jericoacoara, coastal region of Ceará, Brazil. Blood samples were collected from 153 animals and analyzed using molecular and serological methods. Sixty animals were found to be infected or exposed to at least one of the pathogens studied. Babesia vogeli was the most prevalent pathogen (15%), followed by E. canis (13.7%) and Hepatozoon spp. (11.8%), which was identified as Hepatozoon canis through sequencing. Twenty dogs (13%) were seroreactive to Rickettsia spp. Rhipicephalus sanguineus sensu lato was observed on 11.8% of the animals. There were associations between age (< 3 years old) and positivity for B. vogeli, and between habitation (stray dogs) and positivity for H. canis. There were also associations between anemia and infection with H. canis, and between leukopenia and exposure to Rickettsia spp. No association was detected between clinical alterations and infection with or exposure to the pathogens studied. The results confirmed that pathogens of veterinary importance are circulating in northeastern Brazil and showed that dogs are exposed to Rickettsia species with zoonotic potential, thus indicating a need for vector control measures.

Resumo O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de patógenos transmitidos por carrapatos (Ehrlichia canis, Babesia vogeli, Hepatozoon spp. e Rickettsia spp.) em cães na Vila de Jericoacoara, região costeira do Ceará, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 153 animais e analisadas por métodos moleculares e sorológicos. Sessenta animais foram encontrados infectados ou expostos a pelo menos a um dos patógenos estudados. Babesia vogeli foi o patógeno mais prevalente (15%), seguido por E. canis (13,7%) e Hepatozoon spp. (11,8%), que foi identificado como Hepatozoon canis por sequenciamento. Vinte cães (13%) foram sororreativos à Rickettsia spp. Rhipicephalus sanguineus sensu lato foi observado em 11,8% dos animais. Houve associações entre idade (<3 anos) e positividade para B. vogeli, e entre habitação (cães de rua) e positividade para H. canis. Também houve associações entre anemia e infecção por H. canis, e entre leucopenia e exposição a Rickettsia spp. Não foi detectada associação entre alterações clínicas e infecção ou exposição aos patógenos estudados. Os resultados confirmaram que patógenos de importância veterinária estão circulando no nordeste do Brasil e mostraram que cães estão expostos a espécies de Rickettsia com potencial zoonótico, indicando a necessidade de medidas de controle do vetor.

Post mortem protozoan hemoparasites detection in wild mammals from Mato Grosso state, Midwestern Brazil / Detecção post mortem de hemoparasitas protozoários em mamíferos selvagens do estado de Mato Grosso, Centro-Oeste do Brasil

Abstract To a better insight into the epidemiology and genetic diversity of protozoan hemoparasites infections in wild mammals, this study aimed to the post mortem detection of DNA from species of the order Piroplasmida (Babesia sp., Cytauxzoon sp., and Theileria sp.) and suborder Adelorina (Hepatozoon sp.) using polymerase chain reaction based on the 18S rRNA gene followed by genetic sequencing of blood and spleen samples collected from carcasses of 164 free-ranging and captive wild mammals from Mato Grosso state. Among them, one Leopardus pardalis, three Panthera onca, two Puma concolor were positive for Cytauxzoon sp., and six Tapirus terrestris tested positive for Piroplasmida, while one L. pardalis was positive for Hepatozoon sp. Furthermore, an uncharacterized piroplasmid genetically related to Theileria sp. previously detected in cats from Brazil was described in lowland tapirs. Despite the controversy regarding the epidemiological threat of these protozoa, the detection of these tick-borne agents in wild free-living and captive mammals, even when asymptomatic, demonstrates the importance of monitoring, particularly in hotspots such as the state of Mato Grosso, to verify the circulation and genetic diversity, to anticipate the possible emergence of diseases, and even their consequences to other animals as well as humans.

Resumo Para uma melhor compreensão da epidemiologia e diversidade genética das infecções por hemoprotozoários em mamíferos selvagens, este estudo teve como objetivo a detecção post mortem de DNA de espécies da ordem Piroplasmida (Babesia sp., Cytauxzoon sp. e Theileria sp.) e subordem Adelorina (Hepatozoon sp.), utilizando-se a reação em cadeia pela polimerase, baseada no gene 18S rRNA, seguido de sequenciamento genético de amostras de sangue e baço, coletadas de 164 carcaças de mamíferos selvagens de vida livre e cativos do estado de Mato Grosso. Entre eles, um Leopardus pardalis, três Panthera onca, dois Puma concolor foram positivos para Cytauxzoon sp., e seis Tapirus terrestris testaram positivos para Piroplasmida, enquanto um L. pardalis foi positivo para Hepatozoon sp. Além disso, foi descrito em antas, um piroplasmídeo não caracterizado geneticamente, relacionado à Theileria sp., previamente detectado em gatos do Brasil. Apesar da controvérsia quanto à ameaça epidemiológica desses protozoários, a detecção desses agentes em mamíferos silvestres e cativos, mesmo quando assintomáticos, demonstra a importância do monitoramento, principalmente em hotspots, como no estado de Mato Grosso, para verificar a circulação e a diversidade genética, a fim de antecipar o possível surgimento de doenças e, até mesmo, suas consequências para outros animais, bem como os humanos.

Molecular survey of Babesia vogeli and Hepatozoon species in dogs from urban area of Midwestern Brazil / Levantamento molecular de Babesia vogeli e Hepatozoon spp. em cães da área urbana do Centro-Oeste do Brasil

In Brazil, the most important tickborne pathogens affecting dogs include Babesia vogeli, Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Hepatozoon canis, and Mycoplasma haemocanis. Babesia spp. and Hepatozoon spp., transmitted by ixodid ticks, have been reported to naturally infect dogs and are widespread. The authors aimed to investigate the incidence of B. vogeli and Hepatozoon spp. infection using molecular methods to identify factors associated with the infection in dogs from urban areas of Cuiabá municipality, Midwestern Brazil. Polymerase chain reaction (PCR) assay revealed a prevalence of 9.36% (Confidence Interval-CI 95%; 2.72%; 6.79%) and 9.61% (CI 95%; 7.0%; 13.0%) among dogs for B. vogeli and Hepatozoon, respectively. DNA sequences obtained from 10 Hepatozoon PCR positive samples were sequenced and were identical to one another and, moreover, were 100% (541/541 base of pairs-bp) homologous to the corresponding 18S rDNA sequences of H. canis. Twenty-five dogs (6.02%) generated amplicons using PCR protocols for both organisms, indicating co-infection by these two protozoans. To the best of our knowledge, our study was the first molecular survey to consider the entire population of dogs from the study area. Moreover, young dogs (0-12 months of age), as well as animals living in walled houses―without access to the street―were more susceptible to infection with B. vogeli and H. canis, respectively.(AU)

No Brasil, os mais importantes patógenos transmitidos por carrapatos que acometem cães incluem Babesia vogeli, Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Hepatozoon canis e Mycoplasma haemocanis. Babesia spp. e Hepatozoon spp., transmitidas por carrapatos ixodídeos, têm sido relatadas como capazes de infectar naturalmente cães e são amplamente distribuídos. Os autores objetivaram investigar a incidência de B. vogeli e Hepatozoon spp. por métodos moleculares para identificar fatores associados à infecção em cães da área urbana do município de Cuiabá, centro-oeste do Brasil. A reação em cadeia da polimerase (PCR) revelou uma prevalência de 9,36% (Intervalo de Confiança-IC 95%; 2,72%; 6,79%) e 9,61% (IC 95%; 7,0%; 13,0%) entre os cães para B. vogeli e Hepatozoon, respectivamente. Sequências de DNA obtidas de 10 amostras positivas para PCR de Hepatozoon foram sequenciados e eram idênticos entre si e, além disso, foram 100% (541/541 pares de base-pb) homólogos com a correspondente sequência de 18S rDNA de H. canis. Vinte e cinco (6,02%) cães geraram amplificados usando protocolos de PCR para ambos os organismos, indicando coinfecção por esses dois protozoários. Até onde sabemos, nosso estudo foi o primeiro levantamento molecular a considerar toda a população de cães da área de estudo na amostragem. Além disso, cães jovens (0-12 meses de idade), bem como animais que viviam em casas muradas - sem acesso à rua foram mais suscetíveis à infecção por B. vogeli e H. canis, respectivamente.(AU)

Molecular survey of Babesia vogeli and Hepatozoon species in dogs from urban area of Midwestern Brazil / Levantamento molecular de Babesia vogeli e Hepatozoon spp. em cães da área urbana do Centro-Oeste do Brasil

In Brazil, the most important tickborne pathogens affecting dogs include Babesia vogeli, Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Hepatozoon canis, and Mycoplasma haemocanis. Babesia spp. and Hepatozoon spp., transmitted by ixodid ticks, have been reported to naturally infect dogs and are widespread. The authors aimed to investigate the incidence of B. vogeli and Hepatozoon spp. infection using molecular methods to identify factors associated with the infection in dogs from urban areas of Cuiabá municipality, Midwestern Brazil. Polymerase chain reaction (PCR) assay revealed a prevalence of 9.36% (Confidence Interval-CI 95%; 2.72%; 6.79%) and 9.61% (CI 95%; 7.0%; 13.0%) among dogs for B. vogeli and Hepatozoon, respectively. DNA sequences obtained from 10 Hepatozoon PCR positive samples were sequenced and were identical to one another and, moreover, were 100% (541/541 base of pairs-bp) homologous to the corresponding 18S rDNA sequences of H. canis. Twenty-five dogs (6.02%) generated amplicons using PCR protocols for both organisms, indicating co-infection by these two protozoans. To the best of our knowledge, our study was the first molecular survey to consider the entire population of dogs from the study area. Moreover, young dogs (0-12 months of age), as well as animals living in walled houses―without access to the street―were more susceptible to infection with B. vogeli and H. canis, respectively.

No Brasil, os mais importantes patógenos transmitidos por carrapatos que acometem cães incluem Babesia vogeli, Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Hepatozoon canis e Mycoplasma haemocanis. Babesia spp. e Hepatozoon spp., transmitidas por carrapatos ixodídeos, têm sido relatadas como capazes de infectar naturalmente cães e são amplamente distribuídos. Os autores objetivaram investigar a incidência de B. vogeli e Hepatozoon spp. por métodos moleculares para identificar fatores associados à infecção em cães da área urbana do município de Cuiabá, centro-oeste do Brasil. A reação em cadeia da polimerase (PCR) revelou uma prevalência de 9,36% (Intervalo de Confiança-IC 95%; 2,72%; 6,79%) e 9,61% (IC 95%; 7,0%; 13,0%) entre os cães para B. vogeli e Hepatozoon, respectivamente. Sequências de DNA obtidas de 10 amostras positivas para PCR de Hepatozoon foram sequenciados e eram idênticos entre si e, além disso, foram 100% (541/541 pares de base-pb) homólogos com a correspondente sequência de 18S rDNA de H. canis. Vinte e cinco (6,02%) cães geraram amplificados usando protocolos de PCR para ambos os organismos, indicando coinfecção por esses dois protozoários. Até onde sabemos, nosso estudo foi o primeiro levantamento molecular a considerar toda a população de cães da área de estudo na amostragem. Além disso, cães jovens (0-12 meses de idade), bem como animais que viviam em casas muradas - sem acesso à rua foram mais suscetíveis à infecção por B. vogeli e H. canis, respectivamente.

Molecular, serological, and parasitological detection of Babesia vogeli in dogs in the state of Piauí, Brazil / Detecção molecular, sorológica e parasitológica de Babesia vogeli em cães do estado do Piauí, Brasil

Studies on canine babesiosis in northeastern Brazil are scarce, although the weather conditions in this region are favorable for the development of the tick vector. This study determined the prevalence of Babesia vogeli in dogs sampled in Teresina, state of Piauí, northeast Brazil, using direct and indirect diagnostic methods and performed a phylogenetic analysis of 18S rRNA sequences. A total of 315 dogs were screened during routine care regardless of clinical suspicion. Blood was collected by jugular venipuncture to perform indirect immunofluorescence assay (IFA) and polymerase chain reaction (PCR) and for parasite screening in peripheral blood smears. Positivity was 2.2% (7/315) by microscopy, 4.8% (15/315) by PCR, and 48.6% (153/315) by IFA. PCR amplified a 602-bp fragment of the piroplasmid 18S rRNA gene, and sequence alignment and analysis revealed 99% homology with B. vogeli isolates from other regions of Brazil and other countries. In addition, there was high variability among sequences from other northeast states of Brazil. This study is the first to perform the molecular analysis of B. vogeli in Piauí. The results demonstrate that canine babesiosis is endemic in dogs sampled in Teresina and that PCR may be the method of choice to perform parasite screening in this region.

Estudos sobre a babesiose canina são escassos no Nordeste do Brasil, apesar das condições climáticas favoráveis ao desenvolvimento do carrapato vetor. Esta pesquisa objetivou determinar a ocorrência de Babesia vogeli em cães amostrados em Teresina, estado do Piauí, região Meio Norte do Brasil, através de métodos diretos e indiretos de diagnóstico, além de realizar análise filogenética das sequências 18S rRNA de piroplasmídeos obtidas no estudo. Foram avaliados 315 cães atendidos em clínicas veterinárias, sob qualquer suspeita clínica. Desses animais, foi colhido sangue por venopunção jugular para Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR). Além disso, esfregaços de sangue periférico foram realizados para pesquisa direta do parasita. A positividade dos animais foi de 2,2% (7/315) ao esfregaço sanguíneo, 4,8% (15/315) à PCR e 48,6% (153/315) à RIFI. O sequenciamento de amostras positivas à PCR resultou em um fragmento de 602 pb do gene 18S rRNA de piroplasmídeos, cujo alinhamento e análise da sequência revelaram 99% de homologia com isolados de B. vogeli de outras regiões do Brasil, além de outros países. É interessante ressaltar que, comparando isolados em diferentes estados do Nordeste, a homologia pode ser bastante variável. Esses são os primeiros resultados sobre a análise molecular de B. vogeli no Estado do Piauí. Além disso, este estudo demonstra que a babesiose canina é endêmica em cães de Teresina, Nordeste do Brasil, e que a PCR pode ser o método de escolha para diagnóstico da doença nessas áreas.

Molecular, serological, and parasitological detection of Babesia vogeli in dogs in the state of Piauí, Brazil / Detecção molecular, sorológica e parasitológica de Babesia vogeli em cães do estado do Piauí, Brasil

Studies on canine babesiosis in northeastern Brazil are scarce, although the weather conditions in this region are favorable for the development of the tick vector. This study determined the prevalence of Babesia vogeli in dogs sampled in Teresina, state of Piauí, northeast Brazil, using direct and indirect diagnostic methods and performed a phylogenetic analysis of 18S rRNA sequences. A total of 315 dogs were screened during routine care regardless of clinical suspicion. Blood was collected by jugular venipuncture to perform indirect immunofluorescence assay (IFA) and polymerase chain reaction (PCR) and for parasite screening in peripheral blood smears. Positivity was 2.2% (7/315) by microscopy, 4.8% (15/315) by PCR, and 48.6% (153/315) by IFA. PCR amplified a 602-bp fragment of the piroplasmid 18S rRNA gene, and sequence alignment and analysis revealed 99% homology with B. vogeli isolates from other regions of Brazil and other countries. In addition, there was high variability among sequences from other northeast states of Brazil. This study is the first to perform the molecular analysis of B. vogeli in Piauí. The results demonstrate that canine babesiosis is endemic in dogs sampled in Teresina and that PCR may be the method of choice to perform parasite screening in this region.(AU)

Estudos sobre a babesiose canina são escassos no Nordeste do Brasil, apesar das condições climáticas favoráveis ao desenvolvimento do carrapato vetor. Esta pesquisa objetivou determinar a ocorrência de Babesia vogeli em cães amostrados em Teresina, estado do Piauí, região Meio Norte do Brasil, através de métodos diretos e indiretos de diagnóstico, além de realizar análise filogenética das sequências 18S rRNA de piroplasmídeos obtidas no estudo. Foram avaliados 315 cães atendidos em clínicas veterinárias, sob qualquer suspeita clínica. Desses animais, foi colhido sangue por venopunção jugular para Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR). Além disso, esfregaços de sangue periférico foram realizados para pesquisa direta do parasita. A positividade dos animais foi de 2,2% (7/315) ao esfregaço sanguíneo, 4,8% (15/315) à PCR e 48,6% (153/315) à RIFI. O sequenciamento de amostras positivas à PCR resultou em um fragmento de 602 pb do gene 18S rRNA de piroplasmídeos, cujo alinhamento e análise da sequência revelaram 99% de homologia com isolados de B. vogeli de outras regiões do Brasil, além de outros países. É interessante ressaltar que, comparando isolados em diferentes estados do Nordeste, a homologia pode ser bastante variável. Esses são os primeiros resultados sobre a análise molecular de B. vogeli no Estado do Piauí. Além disso, este estudo demonstra que a babesiose canina é endêmica em cães de Teresina, Nordeste do Brasil, e que a PCR pode ser o método de escolha para diagnóstico da doença nessas áreas.(AU)

Parasitological and molecular detection of Babesia canis vogeli in dogs of Recife, Pernambuco and evaluation of risk factors associated / Detecção parasitológica e molecular da Babesia canis vogeli em cães de Recife, Pernambuco e avaliação de fatores de risco associados

This work aims to detect the presence of Babesia canis vogeli in dogs from Recife, Pernambuco via molecular and parasitological detection methods, and to assess the risk factors associated with this parasite. A total of 146 dogs (male and female) of varying breeds and ages that presented clinical symptoms of babesiosis were assessed at a clinical care center in the Veterinary School Hospital. Blood was obtained via venopuncture for hemoparasite detection and polymerase chain reaction (PCR). Using a commercial kit, DNA was extracted from blood samples. For the PCR reaction, an approximately 590 base pair long genetic sequence was used to detect the presence of B. canis vogeli. The forward primer, denoted as BAB1 (5-GTG AAC CTT ATC ACT TAA AGG-3), was specific for a conserved region on the 18S rRNA gene of Babesia spp., and the antisense primer was denoted as BAB4 (5-CAA CTC CTC CAC GCA ATC G-3). PCR results suggested that the percentage of Babesia canis vogeli infection was 4.8%. Through descriptive statistical analysis of the data, we observed that there was higher frequency of parasite infection associated with male dogs above two years of age, with a defined breed, from the countryside, are domiciled, and also suffer from tick infestation. We conclude that regardless of the type of risk factor, babesiosis can be found throughout Recife, Pernambuco, and its prevalence does not vary in most regions of Brazil. Our results indicate that PCR is a sensitive test for the detection of blood parasites, and should be performed as a clinical routine.(AU)

Objetivou-se determinar a ocorrência da Babesia canis vogeli através da detecção molecular e parasitológica em cães de Recife, Pernambuco e avaliar os fatores de risco associados. Foram atendidos 146 cães de ambos os sexos, variadas raças e idades que apresentaram sinais clínicos sugestivos de babesiose provenientes dos atendimentos clínicos de um Hospital Escola Veterinário. O sangue foi obtido através de venopunção para a realização da pesquisa de hemoparasitas e da reação em cadeia pela polimerase (PCR). O DNA foi extraído de cada amostra a partir de uma alíquota de 200?l de sangue com anticoagulante, utilizando-se o kit comercial. Para a reação da B. canis vogeli, foram utilizados oligonucleotídeos iniciadores que amplificam aproximadamente 590 pares de base. Os primers, BAB1 (5-GTG AAC CTT ATC ACT TAA AGG-3) são específicos para uma região conservada do gene 18S rRNA de Babesia spp., e o anti-senso BAB4 (5-CAA CTC CTC CAC GCA ATC G-3). O porcentual de infecção foi de 4,8% pela PCR. Na análise estatística descritiva dos dados verificou-se que houve uma maior frequência de cães positivos machos, acima de dois anos, com raça definida, provenientes de área rural, domiciliados e com a presença de carrapatos. Conclui-se que independente do tipo de fator de risco, a babesiose encontra-se disseminada em Recife, Pernambuco e sua prevalência não variou em relação à maioria das regiões do Brasil. A PCR demonstrou ser um exame sensível frente ao parasitológico sanguíneo, devendo ser introduzida na rotina clínica.(AU)

A serological and molecular survey of Babesia vogeli, Ehrlichia canis and Rickettsia spp. among dogs in the state of Maranhão, northeastern Brazil / Detecção sorológica e molecular de Babesia vogeli, Ehrlichia canis e Rickettsia spp. em cães do Estado do Maranhão, Nordeste do Brasil

This study evaluated exposure and infection by tick-borne agents (Babesia vogeli, Ehrlichia canis and Rickettsia spp.) in 172 dogs in rural areas and 150 dogs in urban areas of the municipality of Chapadinha, state of Maranhão, northeastern Brazil, using molecular and serological methods. Overall, 16.1% of the sampled dogs (52/322) were seroreactive to B. vogeli, with endpoint titers ranging from 40 to 640. For E. canis, 14.6% of the dogs (47/322) were seroreactive, with endpoint titers from 80 to 163,840. Antibodies reactive to at least one of the five species of Rickettsia were detected in 18.9% of the dogs (61/322), with endpoint titers ranging from 64 to 4,096. High endpoint titers were observed for Rickettsia amblyommii. Three (0.9%) and nine (2.8%) canine blood samples were PCR-positive for Babesia spp. and E. canis. The ticks collected from urban dogs were all Rhipicephalus sanguineus sensu lato, whereas the rural dogs were infested by R. sanguineus s.l, Amblyomma cajennense sensu lato and Amblyomma ovale. One A. ovale tick was found to be infected by Rickettsia bellii. This study provides an epidemiological background for controlling and preventing canine tick-borne diseases in a neglected region of Brazil.(AU)

Este estudo avaliou por métodos sorológicos e moleculares a exposição e infecção por agentes transmitidos por carrapatos (Babesia vogeli, Ehrlichia canis, and Rickettsia spp.) em 172 cães de áreas rurais e 150 cães de áreas urbanas do município de Chapadinha, Estado do Maranhão, Nordeste do Brasil. No geral, 16,1% dos cães amostrados (52/322) apresentaram soros reagentes para B. vogeli, com títulos finais variando de 40 a 640. Para E. canis, 14,6% cães (47/322) apresentaram soros reagentes com títulos finais de 80 a 163,840. Anticorpos reativos para pelo menos uma das cinco espécies de Rickettsia foram detectados em 18,9% dos cães (61/322), com os títulos que variam de 64 a 4096. Foram observados altos títulos para Rickettsia amblyommii. Três amostras de sangue canino (0,9%) e 9 (2,8%) foram PCR positivas para Babesia spp e E. canis. Os carrapatos coletados de cães urbanos eram todos Rhipicephalus sanguineus sensulato, e os cães rurais estavam infestados por R. sanguineus s.l , Amblyomma cajennense sensu lato e Amblyomma ovale. Um carrapato A. ovale foi encontrado infectado por Rickettsia bellii. Este estudo fornece um conhecimento epidemiológico para o controle e prevenção de doenças transmitidas por carrapatos de cães em uma região negligenciada do Brasil.(AU)

Optimization of a molecular method for the diagnosis of canine babesiosis / Otimização de método molecular para diagnóstico da babesiose canina

Babesiosis is a hemolytic disease caused by protozoans of the genus Babesia (Apicomplexa). This disease occurs worldwide and is transmitted by ticks to a variety of mammals, including humans. The objective of the present study was to optimize a molecular approach for the detection of a fragment of 18S rDNA of Babesia canis, Babesia vogeli, Babesia rossi or Babesia gibsoni based on a single semi-nested Polymerase Chain Reaction (PCR), and compare the efficiency of this approach with that of a simple PCR protocol. To this end, 100 blood samples collected from dogs with suspected hemoparasite infections were analyzed. A comparison of the results of simple PCR and semi-nested PCR indicated a highly significant difference (p value = 0.0000). While only five (5%) of the samples tested positive using the simple protocol, 22 (22%) were positive using the snPCR technique. The results of this study reinforce the findings of previous studies, which have demonstrated the greater sensitivity of tests based on nested or semi-nested PCR. Therefore, to avoid false-negative results due to low levels of parasitemia, we suggest the preferential use of this protocol in epidemiological studies of canine babesiosis, particularly those that require reliable estimates of the prevalence of infection.

A babesiose é uma doença hemolítica de ocorrência mundial, causada por protozoários do gênero Babesia (Apicomplexa), que são transmitidos por carrapatos a diversos mamíferos, incluindo o homem. O objetivo deste estudo foi otimizar um método molecular para a detecção de fragmento do 18S rDNA de Babesia canis, Babesia vogeli, Babesia rossi ou Babesia gibsoni com base em uma única semi-nested (snPCR), comparando sua eficiência com um protocolo de PCR simples. Para isso, 100 amostras de sangue de cães com suspeita de hemoparasitoses foram analisadas e, enquanto o protocolo de PCR simples indicou somente 5% (5/100) de amostras positivas, o protocolo de snPCR, com 22% (22/100) de amostras positivas, apresentou maior sensibilidade (p valor = 0,0000). Este resultado está de acordo com outros estudos que mostram a maior sensibilidade de detecção dos testes baseado em nested ou snPCR. Assim, como uma forma de prevenir resultados falso-negativos devido à baixa parasitemia, sugere-se que este protocolo seja preferencialmente usado nos estudos epidemiológicos de babesiose canina, em especial naqueles que tratam da sua prevalência.

Detection and molecular characterization of piroplasms species from naturally infected dogs in southeast Brazil / Detecção e caracterização molecular de piroplasmas em cães naturalmente infectados no Sudeste do Brasil

Rangelia vitalii is a protozoon described from dogs in the south and southeast regions of Brazil. It is phylogenetically related to Babesia spp. that infects dogs, but data on this enigmatic parasite is still limited. The aim of this work was to detect piroplasm species in dogs in the state of Rio de Janeiro, Brazil, by 18S rRNA gene-based PCR assay, restriction fragment length polymorphism (RFLP) and sequence analyses. Of 103 dogs examined, seven (6.8%) were positive for Babesia spp. by PCR. The amplified products were digested by restriction enzymes to differentiate the Babesia species, and one sample was identified as Babesia vogeli. The pattern observed for the other six amplification products did not match with pattern described for large Babesia infecting dogs. Sequencing analysis confirmed these six samples as R. vitalii, with high homologies (99-100%) with a sequence from south Brazil. This study confirms the presence of Babesia vogeli and Rangelia vitalii circulate in domestic dogs in Teresópolis, Rio de Janeiro, Brazil.(AU)

Rangelia vitalii é um protozoário que infecta cães e foi descrito nas regiões Sul e Sudeste do Brasil. R. vitalii é filogeneticamente próxima à Babesia spp., mas dados deste misterioso parasito ainda são escassos. O objetivo deste trabalho foi detectar a presença de piroplasmas em cães naturalmente infectados no estado do Rio de Janeiro, através da amplificação do gene 18S rRNA pela PCR, clivagem com enzimas de restrição (RFLP) e caracterização genética através do sequenciamento. De 103 cães, sete (6,8%) foram positivos para Babesia spp. pela PCR. Os produtos amplificados foram digeridos por enzimas de restrição para a diferenciação das espécies de Babesia e uma amostra foi identificada como Babesia vogeli. O padrão de amplificação observado nas outras seis amostras não correspondeu ao padrão descrito para babesias que infectam cães. O sequenciamento das seis amostras confirmou ser uma espécie geneticamente idêntica a R. vitalii apresentando grande homologia (99-100%) com a sequência do sul do Brasil. Este estudo confirma a presença de Babesia vogeli e Rangelia vitalii infectando cães em Teresópolis, Rio de Janeiro, Brasil.(AU)

Phylogenetic characterization of Babesia canis vogeli in dogs in the state of Goiás, Brazil / Caracterização filogenética de Babesia canis vogeli em cães do estado de Goiás, Brasil

The genus Babesia comprises protozoa that cause diseases known as babesiosis. Dogs are commonly affected by Babesia canis or Babesia gibsoni. Babesia canis is divided into the subspecies Babesia canis canis, Babesia canis vogeli and Babesia canis rossi. Among these, Babesia canis vogeli predominates in Brazil. The objective of this study was to conduct a phylogenetic analysis on Babesia isolates from dogs in Goiânia, Goiás. Blood samples were obtained from 890 dogs presenting clinical signs suggestive of canine babesiosis that were attended at a veterinary hospital of Goiás. Only samples presenting typical intraerythrocytic parasites were used in the study. These were subjected to DNA extraction and amplification of a fragment of the 18S rRNA, by means of PCR. The PCR products were purified and sequenced. Sequences were obtained from 35 samples but only 17 of these were kept after quality assessment. Similarity analysis using BLASTn demonstrated that all 17 sequences corresponded to B. canis vogeli. Analysis using the Mega4 software showed that the isolates of B. canis vogeli from dogs in Goiânia present a high degree of molecular similarity (99.2 to 100 percent) in comparison with other reference isolates from other regions of Brazil and worldwide, deposited in GenBank.(AU)

O gênero Babesia compreende protozoários causadores de enfermidades denominadas babesioses. Cães geralmente são acometidos por Babesia canis ou Babesia gibsoni, sendo a primeira classificada em subespécies Babesia canis canis, Babesia canis vogeli e Babesia canis rossi. Entre essas, Babesia canis vogeli predomina no Brasil. O objetivo desse trabalho foi realizar estudo filogenético de amostras de Babesia em cães, em Goiânia, Goiás. Amostras de sangue foram obtidas de 890 cães atendidos no Hospital Veterinário de Goiás, apresentando sinais clínicos de babesiose. Somente amostras com presença de parasitos intraeritrocitários típicos foram utilizadas. Estas foram submetidas a extração de DNA e amplificação de fragmento do gene 18S rRNA pela PCR. Os produtos de PCR foram purificados e sequenciados. Foram sequenciadas 35 amostras, das quais apenas 17 foram mantidas após avaliação de qualidade. A análise de similaridade fornecida pelo BLASTn demonstrou que as 17 sequências deste estudo eram correspondentes a Babesia canis vogeli. Pela utilização do programa Mega4, foi possível verificar que as amostras de Babesia canis vogeli, provenientes de cães da cidade de Goiânia, apresentam, alto grau de similaridade molecular (99,2 a 100 por cento) com isolados de referência de outras regiões do Brasil e do mundo, depositados em GenBank.(AU)

Parasitological and molecular detection of Babesia canis vogeli in dogs of Recife, Pernambuco and evaluation of risk factors associated / Detecção parasitológica e molecular da Babesia canis vogeli em cães de Recife, Pernambuco e avaliação de fatores de risco associados

This work aims to detect the presence of Babesia canis vogeli in dogs from Recife, Pernambuco via molecular and parasitological detection methods, and to assess the risk factors associated with this parasite. A total of 146 dogs (male and female) of varying breeds and ages that presented clinical symptoms of babesiosis were assessed at a clinical care center in the Veterinary School Hospital. Blood was obtained via venopuncture for hemoparasite detection and polymerase chain reaction (PCR). Using a commercial kit, DNA was extracted from blood samples. For the PCR reaction, an approximately 590 base pair long genetic sequence was used to detect the presence of B. canis vogeli. The forward primer, denoted as BAB1 (5-GTG AAC CTT ATC ACT TAA AGG-3), was specific for a conserved region on the 18S rRNA gene of Babesia spp., and the antisense primer was denoted as BAB4 (5-CAA CTC CTC CAC GCA ATC G-3). PCR results suggested that the percentage of Babesia canis vogeli infection was 4.8%. Through descriptive statistical analysis of the data, we observed that there was higher frequency of parasite infection associated with male dogs above two years of age, with a defined breed, from the countryside, are domiciled, and also suffer from tick infestation. We conclude that regardless of the type of risk factor, babesiosis can be found throughout Recife, Pernambuco, and its prevalence does not vary in most regions of Brazil. Our results indicate that PCR is a sensitive test for the detection of blood parasites, and should be performed as a clinical routine.

Objetivou-se determinar a ocorrência da Babesia canis vogeli através da detecção molecular e parasitológica em cães de Recife, Pernambuco e avaliar os fatores de risco associados. Foram atendidos 146 cães de ambos os sexos, variadas raças e idades que apresentaram sinais clínicos sugestivos de babesiose provenientes dos atendimentos clínicos de um Hospital Escola Veterinário. O sangue foi obtido através de venopunção para a realização da pesquisa de hemoparasitas e da reação em cadeia pela polimerase (PCR). O DNA foi extraído de cada amostra a partir de uma alíquota de 200?l de sangue com anticoagulante, utilizando-se o kit comercial. Para a reação da B. canis vogeli, foram utilizados oligonucleotídeos iniciadores que amplificam aproximadamente 590 pares de base. Os primers, BAB1 (5-GTG AAC CTT ATC ACT TAA AGG-3) são específicos para uma região conservada do gene 18S rRNA de Babesia spp., e o anti-senso BAB4 (5-CAA CTC CTC CAC GCA ATC G-3). O porcentual de infecção foi de 4,8% pela PCR. Na análise estatística descritiva dos dados verificou-se que houve uma maior frequência de cães positivos machos, acima de dois anos, com raça definida, provenientes de área rural, domiciliados e com a presença de carrapatos. Conclui-se que independente do tipo de fator de risco, a babesiose encontra-se disseminada em Recife, Pernambuco e sua prevalência não variou em relação à maioria das regiões do Brasil. A PCR demonstrou ser um exame sensível frente ao parasitológico sanguíneo, devendo ser introduzida na rotina clínica.