Comparative morphometric evaluation of hepatic hemosiderosis in wild Magellanic penguins (Spheniscus magellanicus) infected with different Plasmodium spp. subgenera / Avaliação morfométrica comparativa da hemossiderose hepática em pinguins-de-Magalhães (Spheniscus magellanicus) de vida livre infectados por diferentes subgêneros de Plasmodium spp

Avian malaria is one of the most important diseases of captive penguins. We employed morphometric techniques to evaluate hepatic hemosiderosis in rehabilitating wild Magellanic penguins (Spheniscus magellanicus) that were negative (n = 9) or naturally infected by different subgenera of Plasmodium spp. (n = 24), according with: Plasmodium subgenera (Haemamoeba, Huffia, Other lineages, and Unidentified lineages), severity of Plasmodium histopathological lesions, and concurrent diseases, age class (juvenile or adult plumage), sex (male, female or not determined), body score (emaciated, thin, good, excellent, not available), molt, presence or absence of oil contamination upon admission, iron supplementation, and rehabilitation center. The percentage of the area occupied by hemosiderin was called Index of Hepatic Hemosiderosis (IHH). Plasmodium-positive females presented significantly higher IHH values (17.53 ± 12.95%) than males (7.20 ± 4.25%; p = 0.041). We observed higher levels of congestion (p = 0.0182) and pneumonia (p = 0.0250) severity between Unidentified lineages vs. Huffia. We believe that the hepatic hemosiderosis observed in this study was multifactorial, the result of pathological processes caused by malaria, molting, hemoglobin and myoglobin catabolism during migration, anemia, concomitant diseases, and iron supplementation, all possibly potentiated by decreased liver mass. Further studies are needed to clarify the mechanisms of these hypotheses.(AU)

Malária aviária é uma das mais relevantes doenças em pinguins cativos. Foram aplicadas técnicas morfométricas para avaliar a hemossiderose hepática em pinguins-de-Magalhães (Spheniscus magellanicus ) de vida livre em reabilitação negativos (n = 9) e naturalmente infectados por diferentes subgêneros de Plasmodium spp. (n = 24), quanto a: subgênero de Plasmodium (Haemamoeba , Huffia, Outras Linhagens, e Linhagens não identificadas), severidade das lesões histopatológicas causadas por Plasmodium e doenças concomitantes, faixa etária (plumagem juvenil ou adulta), sexo (macho, fêmea, indeterminado), condição corporal (emaciado, magro, bom, excelente, indisponível), muda, presença/ausência de óleo a admissão, suplementação de ferro, e centro de reabilitação. A porcentagem da área ocupada por hemossiderina foi denominada Índice de Hemossiderose Hepática (IHH). Fêmeas Plasmodium -positivas apresentaram IHH significativamente mais elevado que machos, respectivamente, 17,53 ± 12,95% e 7,20 ± 4,25% (p = 0,041). Níveis mais elevados de congestão (p = 0,0182) e pneumonia (p = 0,0250) foram observados entre Linhagens não identificadas vs. Huffia. Possivelmente, a hemossiderose hepática observada nesse estudo seja multifatorial, resultado de processos patológicos causados por malária, muda, catabolismo de hemoglobina e mioglobina durante a migração, anemia, doenças concomitantes e suplementação de ferro, potencialmente intensificados por massa hepática reduzida. Estudos complementares são necessários para esclarecer os mecanismos de tais hipóteses.(AU)

Applicability of the Platelia EIA® Aspergillus test for the diagnosis of aspergilosis in penguins / Aplicabilidade do Platelia EIA® Aspergillus como teste diagnostico da aspergilose em pinguins

Even today, an effective diagnostic test for aspergillosis in penguins is unknown, being the gold standard post-mortem examinations. The fungal antigen galactomannan (GM) has been used as a biomarker of disease in humans and is detected by the Platelia Aspergillus EIA (BioRad)®, a commercial kit based on the sandwich ELISA technique. It is standardized for use in neutropenic patients, however studies have demonstrated its usefulness also possible for birds. The aim of our study was to evaluate the effectiveness of Platelia Aspergillus EIA® test (BioRad-US) in the diagnosis of aspergillosis in Magellanic penguins, determining sensitivity, specificity, and positive and negative predictive values for different cut-off points. Were included in the study, blood serum samples (n = 29) Magellanic penguins in captivity that died by aspergillosis. Detection of GM was performed following manufacturer's instructions and the GM index was obtained by dividing the average value of OD of the duplicate of the clinical sample by duplicate OD of the average value of the cut-off sample provided by the kit. Through information database results were obtained for the presence of anti-Aspergillus fumigatus antibodies detected by agar gel immunodiffusion (AGID) for all serum samples. Results were analyzed using chi-square test and Kruskal-Wallis from SPSS 20.0, IBM®. ROC curve was obtained and from this, rates of sensitivity, specificity, positive and negative predictive values were also calculated based on four different cutoff points (0.5, 1.0, 1.5 and 2.0). The serum GM index did not differ between animals of the case and control group (pkw =0.097). In determining the ROC curve for serum GM detection the value of area under the curve was 0.635. From the values determined by the coordinate of the curve, four different cut points (0.5, 1.0, 1.5 and 2.0) were analyzed, resulting in sensitivity rates ranging from 86.2 to 34.5% % and specificity between 87% and 26.1%. By comparing the serum GM index in group case as the presence or absence of antibodies detected by AGID was found p=0.503. The detection of GM the Platelia Aspergillus EIA® test seems is not be useful for the diagnosis of aspergillosis in naturally infected penguins.(AU)

Ainda hoje, um teste diagnóstico eficaz para aspergilose em pinguins não é conhecido, sendo o padrão-ouro os exames post-mortem. O antígeno fúngico galactomanana (GM) tem sido utilizado como biomarcador da doença em humanos, sendo detectado pelo Platelia Aspergillus EIA (BioRad)®, um kit comercial que se baseia na técnica ELISA sanduíche. É padronizado para utilização em pacientes neutropênicos, no entanto estudos tem demonstrado sua possível utilidade também para aves.O objetivo de nosso estudo foi avaliar a eficácia do teste Platelia Aspergillus EIA® (BioRad-US) no diagnóstico da aspergilose em pinguins-de-Magalhães, determinando sensibilidade, especificidade e valores preditivos positivos e negativos em diferentes pontos de corte. Foram incluídas no estudo, amostras de soro sanguíneo (n=29) de pinguins-de-Magalhães em cativeiro que vieram a óbito por aspergilose. A detecção de GM foi realizada seguindo instruções do fabricante e o índice de GM foi obtido dividindo o valor da média da DO da duplicata da amostra clínica pelo valor da média da DO da duplicata da amostra de cut-off fornecida pelo kit. Através de informações em banco de dados foram obtidos resultados sobre a presença de anticorpos anti-Aspergillus fumigatus, detectada por Imunodifusão em gel de ágar (IDGA) em todas as amostras séricas. Os resultados foram analisados utilizando-se teste de qui-quadrado e Kruskal-Wallis a partir do programa estatístico SPSS 20.0, IBM®. Curva ROC foi obtida e a partir desta, taxas de sensibilidade, especificidade, valores preditivo positivo e negativo foram igualmente calculados considerando quatro diferentes pontos de corte (0.5, 1.0, 1.5 e 2.0). O índice de GM sérica não diferiu entre os animais do grupo caso e controle (pKW = 0.097). Na determinação da curva ROC para detecção de GM sérica o valor da área sobre a curva foi de 0.635. A partir dos valores determinados pelas coordenadas da curva, quatro diferentes pontos de corte (0.5, 1.0, 1.5 e 2.0) foram analisados, resultando em taxas de sensibilidade variando de 86.2% a 34.5%, e de especificidade entre 87% e 26.1%. Ao comparar o índice de GM sérica nos animais do grupo caso quanto a presença ou não de anticorpos detectados pela IDGA foi encontrado p=0.503. A detecção de GM pelo teste Platelia Aspergillus EIA® não parece ser útil para o diagnóstico da aspergilose em pinguins naturalmente infectados.(AU)

Occurrence of gastrointestinal parasites in Spheniscus magellanicus (Foster, 1781) located in Pontal do Sul, PR, Brazil / Ocorrência de parasitas gastrintestinais em Spheniscus magellanicus (Foster, 1781) localizados em Pontal do Sul, PR, Brasil

Gastrointestinal parasitism is the main health problem faced by Spheniscus magellanicus, known as Magellanic penguins, in route on the Brazilian coast. The aim of this research was to report the occurrence and intensity of gastrointestinal parasites in S. magellanicus that reached Pontal do Sul, Paraná, South of Brazil. The study was performed at the Marine Study Center of the Federal University of Parana (CEM-UFPR) with 38 specimens, 31 were necropsied and seven were examined alive with coproparasitological exams. From the necropsied animals, 93.5% (29/31) were parasitized with at least one parasite species. Contracaecum pelagicum was the most prevalent 93,5% (29/31) parasite, followed by Cardiocephaloides physalis (64.5%) and Tetrabothrius lutzi (51.6%). Only one animal was free of parasites and the most infected bird had 1.076 parasites with an average of 194 worms. Willis-Mollay method revealed that 57.1% (4/7) had C. pelagicum eggs. In conclusion, the high rate of gastrointestinal parasites in S. magellanicus confirms the clinical exams, when animals had poor health conditions when they were found in the cost of Paraná. This study provides data to enrich the literature regarding the helminth fauna of the Magellanic penguins, assisting sanitary control programs in Rehabilitation Centers for Marine Animals.(AU)

As parasitoses gastrintestinais são o principal problema sanitário enfrentado pelo Spheniscus magellanicus, conhecido como pinguim-de-magalhães, que faz rota no litoral brasileiro. O objetivo desta pesquisa foi relatar a ocorrência e a intensidade de parasitas gastrintestinais em Spheniscus magellanicus encontrados em Pontal do Sul, Paraná, Sul do Brasil. O estudo foi realizado no Centro de Estudos Marinhos da Universidade Federal do Paraná, CEM-UFPR, com 38 espécimes; 31 dos quais foram necropsiados, e em sete aves vivas foram realizados exames coproparasitológicos. Do total analisado, 93,5% (29/31) aves estavam parasitadas com pelo menos uma espécie, sendo o Contracaecum pelagicum o mais prevalente, 93,5% (29/31), seguido de Cardiocephaloides physalis (64,5%) e de Tetrabothrius lutzi (51,6%). Somente um animal estava livre de parasitas e a ave mais infectada possuía 1.076 parasitas; a média foi em 194 vermes. No exame de Willis-Mollay, foi observada positividade em 57,1% (4/7) para C. pelagicum. Conclui-se que o alto índice de parasitas gastrintestinais em S. magellanicus confirma os exames clínicos que eles apresentaram, de baixa condição sanitária, quando foram encontrados no litoral do Paraná. Este estudo fornece dados que irão enriquecer a literatura sobre a helminto fauna do pinguim-de-magalhães, auxiliando programas de controle sanitário em Centros de Reabilitação de Animais Marinhos.(AU)

Occurrence of gastrointestinal parasites in Spheniscus magellanicus (Foster, 1781) located in Pontal do Sul, PR, Brazil / Ocorrência de parasitas gastrintestinais em Spheniscus magellanicus (Foster, 1781) localizados em Pontal do Sul, PR, Brasil

Gastrointestinal parasitism is the main health problem faced by Spheniscus magellanicus, known as Magellanic penguins, in route on the Brazilian coast. The aim of this research was to report the occurrence and intensity of gastrointestinal parasites in S. magellanicus that reached Pontal do Sul, Paraná, South of Brazil. The study was performed at the Marine Study Center of the Federal University of Parana (CEM-UFPR) with 38 specimens, 31 were necropsied and seven were examined alive with coproparasitological exams. From the necropsied animals, 93.5% (29/31) were parasitized with at least one parasite species. Contracaecum pelagicum was the most prevalent 93,5% (29/31) parasite, followed by Cardiocephaloides physalis (64.5%) and Tetrabothrius lutzi (51.6%). Only one animal was free of parasites and the most infected bird had 1.076 parasites with an average of 194 worms. Willis-Mollay method revealed that 57.1% (4/7) had C. pelagicum eggs. In conclusion, the high rate of gastrointestinal parasites in S. magellanicus confirms the clinical exams, when animals had poor health conditions when they were found in the cost of Paraná. This study provides data to enrich the literature regarding the helminth fauna of the Magellanic penguins, assisting sanitary control programs in Rehabilitation Centers for Marine Animals.(AU)

As parasitoses gastrintestinais são o principal problema sanitário enfrentado pelo Spheniscus magellanicus, conhecido como pinguim-de-magalhães, que faz rota no litoral brasileiro. O objetivo desta pesquisa foi relatar a ocorrência e a intensidade de parasitas gastrintestinais em Spheniscus magellanicus encontrados em Pontal do Sul, Paraná, Sul do Brasil. O estudo foi realizado no Centro de Estudos Marinhos da Universidade Federal do Paraná, CEM-UFPR, com 38 espécimes; 31 dos quais foram necropsiados, e em sete aves vivas foram realizados exames coproparasitológicos. Do total analisado, 93,5% (29/31) aves estavam parasitadas com pelo menos uma espécie, sendo o Contracaecum pelagicum o mais prevalente, 93,5% (29/31), seguido de Cardiocephaloides physalis (64,5%) e de Tetrabothrius lutzi (51,6%). Somente um animal estava livre de parasitas e a ave mais infectada possuía 1.076 parasitas; a média foi em 194 vermes. No exame de Willis-Mollay, foi observada positividade em 57,1% (4/7) para C. pelagicum. Conclui-se que o alto índice de parasitas gastrintestinais em S. magellanicus confirma os exames clínicos que eles apresentaram, de baixa condição sanitária, quando foram encontrados no litoral do Paraná. Este estudo fornece dados que irão enriquecer a literatura sobre a helminto fauna do pinguim-de-magalhães, auxiliando programas de controle sanitário em Centros de Reabilitação de Animais Marinhos.(AU)

Reducing bumblefoot lesions in a group of captive Magellanic penguins (Spheniscus magellanicus) with the use of environmental enrichment / A redução do bumblefoot com a utilização de enriquecimento ambiental para um grupo de pinguim-de-Magalhães (Spheniscus magellanicus) mantido em cativeiro

Captive penguins are prone to pododermatitis (bumblefoot) lesions due to sedentary habits, changes in normal activity patterns, prolonged time on hard and abrasive surfaces, and less time swimming in the water. Environmental enrichment allows the use of creative and ingenious techniques that aim to keep the captive animals occupied by increasing the range and the diversity of behavioral opportunities always respecting the ethological needs of the species. The main goal of this work was to use environmental enrichment techniques to reduce pododermatitis in a group of captive penguins. Five captive Magellanic penguins (Spheniscus magellanicus) that were showing bumblefoot lesions were followed during this project. To monitor the lesions, all animals were physically restraint 3 times a week over a period of 12 weeks. Environmental enrichment was introduced daily in the water with the goal of enhancing their time in the water for one extra hour daily. The results demonstrate that in a twelve weeks period, four animals showed significant reduction of the lesions in both feet and in two animals the lesions were completely healed. With these results we can conclude that aquatic environmental enrichment allowed this group of penguins to spend more time in the water, favoring the reduction of the bumblefoot lesions.(AU)

Os pinguins cativos estão predispostos a pododermatite (bumblefoot) devido ao sedentarismo, mudanças dos padrões normais de atividade, tempo prolongado de permanência em pisos duros e abrasivos, diminuição da natação e tempo na água. O enriquecimento ambiental permite a utilização de técnicas imaginativas e engenhosas que visam manter os animais cativos ocupados e com uma maior diversidade de oportunidades comportamentais, sempre respeitando as necessidades etológicas da espécie. O objetivo deste trabalho foi utilizar técnicas de enriquecimento ambiental para reduzir as lesões de pododermatite em um grupo de pingüins. Cinco indivíduos da espécie Pinguim-de-Magalhães (Spheniscus magellanicus) foram monitorados durante este projeto. Todos os animais foram contidos fisicamente 3 vezes por semana para a realização do acompanhamento do tamanho das lesões, durante 12 semanas. Enriquecimento ambiental foi introduzido diariamente na água, objetivando aumentar em uma hora o tempo em que os animais passavam na água. Os resultados mostraram que, ao longo das 12 semanas, 4 animais apresentaram redução significativa das lesões em ambas as patas, sendo que em dois animais as lesões desapareceram. Com isto, podemos concluir que o enriquecimento ambiental aquático para este grupo de pingüins permitiu um maior tempo de permanência dos animais na água favorecendo a redução das lesões de bumblefoot.(AU)

Study of bacteria isolated from the foot pad of Spheniscus magellanicus with and without bumblefoot / Estudo de bactérias isoladas de coxins plantares de Spheniscus magellanicus com e sem bumblefoot

The bumblefoot or pododermatitis is among the diseases with the highest morbidity in Magellanic penguins, sometimes evolving to septicemia and death. Therefore, this study aimed to relate the main species involved in the disorder, as well as the in vitro susceptibility profile of the microorganisms against routine antimicrobial usage in Veterinary Medicine. During two years in vivo material was harvested from 200 footpads (n=100 animals) for microbiological analysis and in vitro susceptibility tests against the Antibiotic enrofloxacin, streptomycin, penicillin and cephalosporin. Bacteria have been identified both as part of permanent and transient microbiota, also being associated to 100% of the pododermatitis cases. The most prevalent genus were Staphylococcus and Corynebacterium. The antibiograms of all the isolated bacteria resulted in greater susceptibility of the strains facing cephalosporin, followed by enrofloxacin, streptomycin and penicillin.(AU)

O bumblefoot ou pododermatite está entre as afecções de maior morbidade em pinguins-de-magalhães, podendo evoluir para septicemia e óbito. Portanto, o presente estudo objetivou relacionar as principais espécies bacterianas envolvidas na afecção, bem como o perfil de susceptibilidade in vitro destes microrganismos frente a antimicrobianos de uso rotineiro em medicina veterinária. Durante o período de dois anos, foi realizada colheita de material in vivo de 200 coxins plantares (n=100 animais) para análise microbiológica e testes de susceptibilidade in vitro frente aos antibióticos enrofloxacina, estreptomicina, penicilina e cefalosporina. Bactérias foram identificadas tanto como parte da microbiota permanente quanto da transitória, bem como estiveram associadas a 100% dos casos de pododermatite. Os gêneros mais prevalentes foram Staphylococcus e Corynebacterium. Os antibiogramas de todas as bactérias isoladas resultaram em maior sensibilidade das cepas frente à cefalosporina, seguida de enrofloxacina, estreptomicina e penicilina.(AU)

Malária aviária em Spheniscus magellanicus Forster, 1781, originários da patagônia recolhidos na costa brasileira

A malária aviária é uma importante doença em pinguins de cativeiro e em seu ambiente natural, e atualmente é considerada a principal causa de morte nesta espécie. A presente pesquisa teve como objetivo avaliar a presença de malária aviária em pinguins-de-magalhães (Spheniscus magellanicus) recém chegados à Fundação Zoológico do Rio de Janeiro (RIOZOO) após terem sido recolhidos nas praias do Rio de Janeiro e regiões limítrofes. Para o estudo, foram amostradas 44 aves mantidas na Fundação RIOZOO. As aves foram observadas quanto à presença de parasitos e de sinais clínicos relacionados a esses, além disso, analisou-se a prevalência, parasitemia, morfologia e morfometria dos parasitos encontrados. Para confirmar o diagnóstico, realizou-se a técnica molecular de reação em cadeia da polimerase (PCR) com o gene mitocondrial genérico para Plasmodium, Haemoproteus e Leucocytozoon para as cinco aves mais parasitadas; a diferenciação entre os gêneros foi realizada por meio da técnica de PCR-RFLP. Quatro amostras positivas foram enviadas para sequenciamento e o resultado obtido foi comparado com outras sequências do gene mitocondrial do GenBank, o que serviu para construção da árvore filogenética. O estado de saúde geral das aves era grave, apresentando-se prostradas, anêmicas e com fezes de coloração esverdeada. A análise dos esfregaços sanguíneos das aves amostradas revelou a presença de formas evolutivas parasitando eritrócitos, sugestivo de parasitos do gênero Plasmodium. Dos 44 pinguins-de-magalhães amostrados 21 estavam parasitados, apresentando prevalência de 47,73%. A parasitemia mais elevada foi de 6,1%. Foram encontrados todas as formas evolutivas de plasmódios:gametócitos, trofozoítos e esquizontes. Morfologicamente, os trofozoítos apresentaram-se ovais ou piriformes, os esquizontes irregularmente esféricos com cerca de 14 merozoítos por esquizontes, os macrogametócitos e microgametócitos apresentavam formato arredondado ou alongado, prevalecendo as formas alongadas. Morfométricamente, os macrogametócitos apresentaram comprimento médio de 10,16 ± 1,48 ?m e largura média de 2,40 ± 0,72 ?m; os microgametócitos apresentaram comprimento médio de 11 ± 1,03 ?m e largura média de 2,04 ± 0,27 ?m; os trofozoítos apresentaram 2,14?m para o diâmetro maior e 1,46?m para o diâmetro menor, e os esquizontes apresentaram como diâmetro maior 9,14?m e 8?m como diâmetro menor. Na PCR um fragmento de aproximadamente 160 pares de base foi amplicado, e a diferenciação entre os gêneros confirmou se tratar do gênero Plasmodium. O sequenciamento revelou que provavelmente ocorre uma co-infecção de parasitos do gênero Plasmodium e que uma das espécies envolvidas é Plasmodium relictum

Malária aviária em Spheniscus magellanicus Forster, 1781, originários da patagônia recolhidos na costa brasileira

A malária aviária é uma importante doença em pinguins de cativeiro e em seu ambiente natural, e atualmente é considerada a principal causa de morte nesta espécie. A presente pesquisa teve como objetivo avaliar a presença de malária aviária em pinguins-de-magalhães (Spheniscus magellanicus) recém chegados à Fundação Zoológico do Rio de Janeiro (RIOZOO) após terem sido recolhidos nas praias do Rio de Janeiro e regiões limítrofes. Para o estudo, foram amostradas 44 aves mantidas na Fundação RIOZOO. As aves foram observadas quanto à presença de parasitos e de sinais clínicos relacionados a esses, além disso, analisou-se a prevalência, parasitemia, morfologia e morfometria dos parasitos encontrados. Para confirmar o diagnóstico, realizou-se a técnica molecular de reação em cadeia da polimerase (PCR) com o gene mitocondrial genérico para Plasmodium, Haemoproteus e Leucocytozoon para as cinco aves mais parasitadas; a diferenciação entre os gêneros foi realizada por meio da técnica de PCR-RFLP. Quatro amostras positivas foram enviadas para sequenciamento e o resultado obtido foi comparado com outras sequências do gene mitocondrial do GenBank, o que serviu para construção da árvore filogenética. O estado de saúde geral das aves era grave, apresentando-se prostradas, anêmicas e com fezes de coloração esverdeada. A análise dos esfregaços sanguíneos das aves amostradas revelou a presença de formas evolutivas parasitando eritrócitos, sugestivo de parasitos do gênero Plasmodium. Dos 44 pinguins-de-magalhães amostrados 21 estavam parasitados, apresentando prevalência de 47,73%. A parasitemia mais elevada foi de 6,1%. Foram encontrados todas as formas evolutivas de plasmódios:gametócitos, trofozoítos e esquizontes. Morfologicamente, os trofozoítos apresentaram-se ovais ou piriformes, os esquizontes irregularmente esféricos com cerca de 14 merozoítos por esquizontes, os macrogametócitos e microgametócitos apresentavam formato arredondado ou alongado, prevalecendo as formas alongadas. Morfométricamente, os macrogametócitos apresentaram comprimento médio de 10,16 ± 1,48 ?m e largura média de 2,40 ± 0,72 ?m; os microgametócitos apresentaram comprimento médio de 11 ± 1,03 ?m e largura média de 2,04 ± 0,27 ?m; os trofozoítos apresentaram 2,14?m para o diâmetro maior e 1,46?m para o diâmetro menor, e os esquizontes apresentaram como diâmetro maior 9,14?m e 8?m como diâmetro menor. Na PCR um fragmento de aproximadamente 160 pares de base foi amplicado, e a diferenciação entre os gêneros confirmou se tratar do gênero Plasmodium. O sequenciamento revelou que provavelmente ocorre uma co-infecção de parasitos do gênero Plasmodium e que uma das espécies envolvidas é Plasmodium relictum(AU)