Phytochemical and biological attributes of Bauhinia variegata L. (Caesalpiniaceae) / Atributos fitoquímicos e biológicos de Bauhinia variegata L. (Caesalpiniaceae)

Bauhinia variegata plant is a very popular and traditionally potent ethnomedicine. Therefore, it is need of hour to study ameliorative characteristics of B. variegata for novel secondary metabolites. The current study was designed to explore antiproliferative potential of B. variegata due to scant reports on this aspect. Extracts of various parts (flowers, leaves, bark, stem, and roots) were prepared by successive maceration using organic solvents in increasing order of polarity (n-hexane, ethyl acetate, methanol, and water). The determination of polyphenolic contents was done by using colorimetric methods while antioxidant potential was measured using reducing power assay. Brine shrimp lethality assay was performed for determining preliminary cytotoxicity and antiproliferative activity against breast cancer MCF-7 cell line using MTT protocols. Moreover, antimicrobial activities were detected by using disc diffusion assay. The alpha-amylase assay was performed to monitor the antidiabetic potential of the plant. In case of phytochemical analysis methanolic extract of leaves and bark showed highest phenolic and flavonoids contents. n-Hexane and ethyl acetate extracts of stem and roots exhibited more than 90% mortality with LD50 ranges between 1-25 µg/mL when studied by brine shrimp lethality assay. n-Hexane and ethyl acetate extracts of roots and stem also showed antiproliferative activity against human breast cancer MCF-7 cell line with IC50 values ranges between 12.10-14.20 µg/mL. Most of the extracts displayed moderately high antibacterial and antifungal activities. The n-hexane extract of roots showed antidiabetic activity with 60.80 ± 0.20% inhibition of alpha-amylase. In sum, these preliminary results will be useful for further compound isolation from selected plant parts for the discovery of antibacterial, antidiabetic, and anticancer lead candidates.

A planta Bauhinia variegata é uma etnomedicina muito popular e tradicionalmente potente. Portanto, as características de melhoria de B. variegata foram estudadas. Foi avaliada a determinação dos teores antioxidantes e polifenólicos. O ensaio de letalidade do camarão de salmoura foi realizado para determinar a citotoxicidade preliminar e a atividade antiproliferativa contra linhas de células de câncer de mama MCF-7 usando protocolos de MTT. Além disso, foram detectadas atividades antimicrobianas. O ensaio da alfa-amilase foi realizado para monitorar o potencial antidiabético da planta. Dentre vinte amostras diferentes, o extrato metanólico (EM) da casca apresentou os maiores teores fenólicos totais. A EM das folhas apresentou excelente conteúdo de flavonoides, atividade antioxidante significativa foi exibida pelo extrato hexânico do caule. O extrato do caule de hexano exibe 77,40% como citotóxico em DL50 10,50 µg/mL quando avaliado através do ensaio de letalidade de artêmia. Extratos de hexano e acetato de etila de raiz e caule mostraram atividade antiproliferativa contra a linhagem celular MCF7 de câncer de mama humano (IC50 12,10-14,20 µg/mL). Para potencial antimicrobiano importante, vários extratos exibiram excelentes atividades antibacteriana e antifúngica, enquanto o extrato de n-hexano da raiz mostrou atividade antidiabética (60,80 ± 0,20% na concentração de 200 µg/mL). Em suma, estes resultados preliminares serão úteis para isolamento adicional de compostos a partir de partes de plantas selecionadas para a descoberta de candidatos a antibacterianos, antidiabéticos e anticâncer.

Linfoma intraocular em cães - achados da ultrassonografia contrastada e elastografia ARFI / Intraocular lymphoma in dogs - findings of contrast enhanced ultrasound and ARFI elastography

Background: Ocular lymphoma can affect the iris, conjunctiva, choroid, and retina and is mostly associated with multicentric disease. Elastography is an ultrasound technique that provides noninvasive, pain-free assessment of tissue stiffness. It has the ability to assess subtle changes throughout the organ as well as focal lesions. Microbubble contrast ultrasound enables the detection of incipient vascular flows, which are difficult to detect using traditional ultrasound methods. This study aimed to describe acoustic radiation force impulse (ARFI) elastography and microbubble contrast ultrasound findings in the eyes of two dogs diagnosed with intraocular T-cell lymphoma. Cases: Case 1. Physical examination revealed an exophytic mass in the left eye. Schirmer test revealed a secretion of 22 mm/min. Negative threat reflex, glare, direct pupillary light reflex, and consensual response were also noted. Biomicroscopy revealed hyperplasia of the third eyelid, overlapping with the affected eye. When the membrane was removed, moderate conjunctival hyperemia, mucoid secretion, and buphthalmia were observed. In addition, significant corneal edema was present, making it impossible to visualize the anterior chamber and perform fundus examination. The intraocular pressure, as measured with a rebound tonometer, was 39 mmHg. B-mode ultrasonography identified amorphous, hyperechoic, and heterogeneous structures throughout the anterior chamber, iris, and ciliary body. The elastogram showed that the mass had greenish tones and intermediate stiffness, and the mean SWV of the ciliary body and iris was 2 m/s. Contrast-enhanced ultrasound (CEUS) revealed vascularization of the neoformation region, with wash-in, peak, and wash-out values of 9.89 s, 24.56 s, and 107.87 s, respectively. Case 2. On physical examination, a change in the shape of the right pupil was observed. Schirmer test revealed a secretion of 20 mm/min, with negative threat, glare, and pupillary reflexes to direct and consensual light. Biomicroscopy revealed neoformation from 7 am to 11 am in the sclera, retina, and choroid complex, concomitant with dyscoria and conjunctival hyperemia. The intraocular pressure, as measured by rebound tonometry, was 33 mmHg. Fundoscopy revealed a mass in the temporal region and focal retinal detachment. No changes were observed in the contralateral eye. B-mode ultrasound revealed an increase in volume in the temporal region of the iris, ciliary body, and choroid with diffuse heterogeneity and partial retinal detachment. Elastographic examination revealed shades of green and yellow compatible with increased tissue stiffness. On quantitative examination, the mean SWVs of the ciliary body and iris were 3.14 m/s. On CEUS, the neoformation region presented wash-in, peak, and wash-out values of 8.67 s, 22.33 s, and 80.20 s. Discussion: B-mode ultrasonography established the tumor extent and evaluated echogenicity, verifying the involved ocular structures. The examination played an important role in the diagnosis as well as clinical management. ARFI elastography can detect small tissue changes, helping to define nodules and masses more reliably, in addition to allowing the verification of tissue stiffness. In both dogs, it was possible to verify that the masses presented greater rigidity than the adjacent tissues both qualitatively and quantitatively. In previous studies, it was found that cutaneous and breast lymphomas in humans were more rigid than adjacent tissues on elastography. This increase in rigidity and heterogeneity observed on elastograms can be explained by the extramedullary interactions of the matrix in T-cell lymphomas. Tumor growth is dependent on the blood supply, which was evaluated using CEUS in these cases. Furthermore, the ciliary body contrast filling times were longer than those described in normal dogs.

Microvessel density assessment in canine mammary carcinomas as a predictive factor for metronomic chemotherapy / Mensuração da densidade microvascular em carcinomas mamários caninos como fator preditivo à quimioterapia metronômica

The canine mammary tumor is the neoplasia that most commonly affects intact female dogs (not spayed) in routine veterinary practice. Canine mammary tumor therapy is a challenge because only few effective treatments have been described for high-grade tumors in veterinary medicine. One such therapeutic option that slows down tumor growth is metronomic chemotherapy (MC), a therapeutic modality that acts by decreasing tumor angiogenesis. Quantification of intratumoral microvessel density (MVD) has been proposed as a means to evaluate the effectiveness of MC in human and canine tumors. In this study, MVD is proposed as a predictive factor for the effectiveness of MC in canine mammary tumors. Twenty female dogs with mammary carcinoma were equally distributed into a mastectomy group treated only with mastectomy, and a MC group treated with MC (cyclophosphamide and piroxicam) orally and daily for 28 days followed by mastectomy. Mammary tumors were classified and graded histologically. MVD was ascertained by CD31 immunostaining. The analysis showed statistically significant difference in MVD scores between groups, corroborating a quantitative reduction in tumor microvasculature in the group treated with MC. Our findings suggest that MVD may be an important predictive factor for the selection of female dogs with malignant mammary tumors that may benefit from MC.(AU)

O tumor mamário canino é a neoplasia que mais comumente acomete cadelas não castradas na rotina veterinária. A terapia para a neoplasia mamária canina é um desafio, com poucos tratamentos eficazes descritos em medicina veterinária, especialmente para as neoplasias de alto grau. Uma opção terapêutica que diminui o crescimento tumoral é a quimioterapia metronômica (QM). A QM é uma modalidade terapêutica que age pelo decréscimo da angiogênese tumoral. Para avaliação da eficácia da QM tem sido proposta a quantificação da densidade microvascular (DMV) em neoplasias caninas. Neste estudo foi proposta a mensuração da DMV como fator preditivo à utilização da QM em neoplasias mamárias caninas. Foram utilizadas 20 (vinte) cadelas com carcinomas mamários malignos sendo um grupo mastectomia, tratado somente por mastectomia, e um grupo QM, em que foi empregada a QM (ciclofosfamida e piroxicam) ambos oralmente e de uso diário por 28 dias seguida de mastectomia. As neoplasias mamárias foram histologicamente classificadas e graduadas. A DMV foi obtida por imunomarcação utilizando o anticorpo CD31. A análise estatística mostrou diferença na DMV entre os grupos, evidenciando redução quantitativa na microvasculatura tumoral no grupo tratado com quimioterapia metronômica. Com base neste resultado é possível afirmar que a DMV pode vir a ser um fator preditivo de importância para a seleção de cadelas portadoras de neoplasia mamária maligna que possam vir a se beneficiar da quimioterapia metronômica.(AU)

Microvessel density assessment in canine mammary carcinomas as a predictive factor for metronomic chemotherapy / Mensuração da densidade microvascular em carcinomas mamários caninos como fator preditivo à quimioterapia metronômica

The canine mammary tumor is the neoplasia that most commonly affects intact female dogs (not spayed) in routine veterinary practice. Canine mammary tumor therapy is a challenge because only few effective treatments have been described for high-grade tumors in veterinary medicine. One such therapeutic option that slows down tumor growth is metronomic chemotherapy (MC), a therapeutic modality that acts by decreasing tumor angiogenesis. Quantification of intratumoral microvessel density (MVD) has been proposed as a means to evaluate the effectiveness of MC in human and canine tumors. In this study, MVD is proposed as a predictive factor for the effectiveness of MC in canine mammary tumors. Twenty female dogs with mammary carcinoma were equally distributed into a mastectomy group treated only with mastectomy, and a MC group treated with MC (cyclophosphamide and piroxicam) orally and daily for 28 days followed by mastectomy. Mammary tumors were classified and graded histologically. MVD was ascertained by CD31 immunostaining. The analysis showed statistically significant difference in MVD scores between groups, corroborating a quantitative reduction in tumor microvasculature in the group treated with MC. Our findings suggest that MVD may be an important predictive factor for the selection of female dogs with malignant mammary tumors that may benefit from MC.

O tumor mamário canino é a neoplasia que mais comumente acomete cadelas não castradas na rotina veterinária. A terapia para a neoplasia mamária canina é um desafio, com poucos tratamentos eficazes descritos em medicina veterinária, especialmente para as neoplasias de alto grau. Uma opção terapêutica que diminui o crescimento tumoral é a quimioterapia metronômica (QM). A QM é uma modalidade terapêutica que age pelo decréscimo da angiogênese tumoral. Para avaliação da eficácia da QM tem sido proposta a quantificação da densidade microvascular (DMV) em neoplasias caninas. Neste estudo foi proposta a mensuração da DMV como fator preditivo à utilização da QM em neoplasias mamárias caninas. Foram utilizadas 20 (vinte) cadelas com carcinomas mamários malignos sendo um grupo mastectomia, tratado somente por mastectomia, e um grupo QM, em que foi empregada a QM (ciclofosfamida e piroxicam) ambos oralmente e de uso diário por 28 dias seguida de mastectomia. As neoplasias mamárias foram histologicamente classificadas e graduadas. A DMV foi obtida por imunomarcação utilizando o anticorpo CD31. A análise estatística mostrou diferença na DMV entre os grupos, evidenciando redução quantitativa na microvasculatura tumoral no grupo tratado com quimioterapia metronômica. Com base neste resultado é possível afirmar que a DMV pode vir a ser um fator preditivo de importância para a seleção de cadelas portadoras de neoplasia mamária maligna que possam vir a se beneficiar da quimioterapia metronômica.

Epidemiology of canine mammary gland tumours in Espírito Santo, Brazil

Background: Mammary tumours represent about 50 to 70% of all neoplasms in female dogs and their occurrence is directlyrelated to the reproductive status and patient´s age. The purpose of this research was to apply the Brazilian consensus ondiagnosis, prognosis and treatment of canine mammary tumours and to define the regional epidemiological aspects ofcanine mammary gland tumours in Vitoria metropolitan region (ES, Brazil) between 2012 and 2016 and to correlate themacroscopic characteristics such as lesion size and location of the neoplasm with histopathological diagnosis, tumoursgrade and lymph node metastasis.Materials, Methods & Results: Data were collected from the archives of the Laboratory of Animal Pathology of UVV andmedical records of patients attended at the Veterinary Hospital Prof. Ricardo Alexandre Hippler in 5 years (2012 to 2016). Theanimals were separated into groups by age to facilitate classification in the group with the highest occurrence of neoplasms. Theevaluation of the macroscopic characteristics was performed through the histopathological record described in the pathologylaboratory, for each patient, at the time of the initial evaluation. After descriptive analysis, data was correlated using Spearmanntest, and frequency dispersion was evaluated using chi-square test, both in the software Graph Pad Prism v. 6.01. This studyincluded 255 bitches and diagnosis of 486 lesions, once 48.6% of the dogs had more than one lesion, classified according tothe Brazilian Consensus for Canine Mammary Tumours and graded according to Elston and Ellis system. 86.8% of lesionswere consistent with actual mammary neoplasms, of which 67% were malignant and 20% were benign. Non-neoplastic lesionscorresponded to 7.2% of cases and 5.8% were extra-mammary neoplasms, with an increased incidence of lipomas (39.3%) andmast cell tumours (32.1%). Cross-breed dogs represented 26.7% of cases. Poodles (25.5%), Pinschers (9.8%) and Dachshund(4.7%)...(AU)

Epidemiology of canine mammary gland tumours in Espírito Santo, Brazil

Background: Mammary tumours represent about 50 to 70% of all neoplasms in female dogs and their occurrence is directlyrelated to the reproductive status and patient´s age. The purpose of this research was to apply the Brazilian consensus ondiagnosis, prognosis and treatment of canine mammary tumours and to define the regional epidemiological aspects ofcanine mammary gland tumours in Vitoria metropolitan region (ES, Brazil) between 2012 and 2016 and to correlate themacroscopic characteristics such as lesion size and location of the neoplasm with histopathological diagnosis, tumoursgrade and lymph node metastasis.Materials, Methods & Results: Data were collected from the archives of the Laboratory of Animal Pathology of UVV andmedical records of patients attended at the Veterinary Hospital Prof. Ricardo Alexandre Hippler in 5 years (2012 to 2016). Theanimals were separated into groups by age to facilitate classification in the group with the highest occurrence of neoplasms. Theevaluation of the macroscopic characteristics was performed through the histopathological record described in the pathologylaboratory, for each patient, at the time of the initial evaluation. After descriptive analysis, data was correlated using Spearmanntest, and frequency dispersion was evaluated using chi-square test, both in the software Graph Pad Prism v. 6.01. This studyincluded 255 bitches and diagnosis of 486 lesions, once 48.6% of the dogs had more than one lesion, classified according tothe Brazilian Consensus for Canine Mammary Tumours and graded according to Elston and Ellis system. 86.8% of lesionswere consistent with actual mammary neoplasms, of which 67% were malignant and 20% were benign. Non-neoplastic lesionscorresponded to 7.2% of cases and 5.8% were extra-mammary neoplasms, with an increased incidence of lipomas (39.3%) andmast cell tumours (32.1%). Cross-breed dogs represented 26.7% of cases. Poodles (25.5%), Pinschers (9.8%) and Dachshund(4.7%)...

Orthotopic tumorgrafts in nude mice as a model to evaluate calcitriol effects in breast cancer / Modelo de enxerto tumoral ortotópico em camundongos para avaliar os efeitos do calcitriol em câncer de mama

Calcitriol antiproliferative effects were observed in xenografts of breast cancer cell lines, however they were not yet investigated in tumorgrafts, consisting of freshly collected breast cancer samples xenografted into animals. Objectives To establish a tumorgraft model, from freshly collected breast cancer samples, which were directly implanted in nude mice, to study calcitriol effects. Methods Breast cancer samples collected from 12 patients were orthotopically implanted into nude mice. Animals were treated with weekly intratumoral injections of calcitriol 3 g/Kg, which was previously shown to induce peak serum calcitriol levels in the predicted therapeutic range. Results Success engraftment rate was 25%. Tumorgrafts were established from aggressive (HER2 positive or histological grade 3) highly proliferative samples and original tumor characteristics were preserved. Calcitriol highly induced its target gene, CYP24A1, indicating that the genomic vitamin D pathway is active in tumorgrafts. However, no differences in the expression of proliferation and apoptosis markers (BrdU incorporation, Ki67, CDKN1A, CDKN1B, BCL2 expression) were observed in these highly proliferative tumor samples.Conclusions Tumorgrafts seem a promising model to explore other calcitriol doses and regimens, considering the heterogeneity of the disease and microenvironment interactions.(AU)

Os efeitos antiproliferativos de calcitriol foram observados em xenotransplantes de linhagens celulares de câncer de mama, entretanto, não foram ainda investigados em enxertos tumorais, consistindo de implantes em animais de amostras de câncer de mama recém-coletadas.Objetivos Estabelecer modelo de enxerto tumoral, a partir de amostra de câncer de mama recém-coletada e diretamente implantada em camundongos nude, para estudar o efeito do calcitriol. Métodos Amostras de câncer de mama de 12 pacientes foram implantadas ortotopicamente em camundongos nude. Os animais foram tratados com injeção intratumoral semanal de calcitriol 3 g/Kg, a qual foi previamente associada com indução de pico sérico de calcitriol dentro do intervalo de nível terapêutico. Resultados A taxa de sucesso de pega do enxerto foi de 25%. Os enxertos tumorais foram estabelecidos de tumores agressivos com alta taxa de proliferação (HER2 positivo ou grau histológico 3) e as características do tumor original foram preservadas. O calcitriol induziu fortemente a expressão do gene alvo, CYP24A1, indicando que a via genômica da vitamina D está ativa nos enxertos tumorais, entretanto, não se observou diferenças na expressão de marcadores de proliferação e apoptose (incorporação de BrdU, expressão de Ki67, CDKN1A, CDKN1B e BCL2) nestas amostras altamente proliferativas.Conclusões Os enxertos tumorais parecem ser um modelo promissor para explorar outros esquemas e doses de calcitriol, considerando a heterogeneidade da doença e interações com o microambiente.(AU)

CD4+, CD8+, FoxP3+ and HSP60+ expressions in cellular infiltrate of canine mammary carcinoma in mixed tumor

Background: Cancer is a complex process that receive many influences of the tumor microenvironment. The participation of immune system cells and proteins in tumor microenvironment is not yet completely understood. Thus, the aim of this study was to evaluate the infiltrate cellular, subpopulations of T-lymphocytes and HSP60 of canine mammary carcinoma in mixed tumor (CMCMT).Materials, Methods & Results: Female dogs (n = 20) were selected after Canine mammary tumor (CMT) diagnosis and data were achieved throughout clinical-pathological information. Clinical staging was evaluated and tumor biopsies were processed by histology and cellular infiltrate was performed according criteria and grade. Survival curve were generated by Kaplan-Meier and the lymphocytic infiltrate were compared by Log-Rank followed Chi-Square χ². For immunolabeling it was used anti-CD4, anti-CD8, anti-FoxP3 and HSP60 monoclonal antibodies and were attributed scores from 0 to 3. Clinical-pathological relationship was analyzed using Spearman correlation. This study was approved by the Committee for Ethics in Research using Animals (CEUA-UECE), protocol 12247080-2. Our data showed a mean age of 9.3 years-old, the size of tumors presented more than 5 cm (50%), which were located in inguinal mammary glands (70%), and CMTs shows I (70%) and II (30%) grade. The cellular infiltrate was distributed both in peri and intratumoral regions, dispersed multifocally with moderate intensity and lymphocytes were the major populations found into tumors (n = 826 ± 220). In relationship to cellular infiltrate with CMT grade it was observed that lymphocytes (ρ = 0.28) and plasma cells (ρ = 0.22) showed a slight positive correlation, and an opposed negative correlation of neutrophils (ρ = -0.1) and macrophages (ρ = -0.38). CMT presents moderate lymphocytic infiltrate (< 800 lymphocytes), shows higher (P = 0.01) survival rates as compared to intense lymphocytic infiltrate (≥ 800 lymphocytes).[...]

CD4+, CD8+, FoxP3+ and HSP60+ expressions in cellular infiltrate of canine mammary carcinoma in mixed tumor

Background: Cancer is a complex process that receive many influences of the tumor microenvironment. The participation of immune system cells and proteins in tumor microenvironment is not yet completely understood. Thus, the aim of this study was to evaluate the infiltrate cellular, subpopulations of T-lymphocytes and HSP60 of canine mammary carcinoma in mixed tumor (CMCMT).Materials, Methods & Results: Female dogs (n = 20) were selected after Canine mammary tumor (CMT) diagnosis and data were achieved throughout clinical-pathological information. Clinical staging was evaluated and tumor biopsies were processed by histology and cellular infiltrate was performed according criteria and grade. Survival curve were generated by Kaplan-Meier and the lymphocytic infiltrate were compared by Log-Rank followed Chi-Square χ². For immunolabeling it was used anti-CD4, anti-CD8, anti-FoxP3 and HSP60 monoclonal antibodies and were attributed scores from 0 to 3. Clinical-pathological relationship was analyzed using Spearman correlation. This study was approved by the Committee for Ethics in Research using Animals (CEUA-UECE), protocol 12247080-2. Our data showed a mean age of 9.3 years-old, the size of tumors presented more than 5 cm (50%), which were located in inguinal mammary glands (70%), and CMTs shows I (70%) and II (30%) grade. The cellular infiltrate was distributed both in peri and intratumoral regions, dispersed multifocally with moderate intensity and lymphocytes were the major populations found into tumors (n = 826 ± 220). In relationship to cellular infiltrate with CMT grade it was observed that lymphocytes (ρ = 0.28) and plasma cells (ρ = 0.22) showed a slight positive correlation, and an opposed negative correlation of neutrophils (ρ = -0.1) and macrophages (ρ = -0.38). CMT presents moderate lymphocytic infiltrate (< 800 lymphocytes), shows higher (P = 0.01) survival rates as compared to intense lymphocytic infiltrate (≥ 800 lymphocytes).[...](AU)

ULTRASSONOGRAFIA EM MODO B DO FÍGADO E MODO DOPPLER DA VEIA PORTA DE CADELAS COM NEOPLASIA MAMÁRIA SUBMETIDAS A QUIMIOTERAPIA ADJUVANTE

As neoplasias mamárias em cadelas têm grande importância na rotina clínica de pequenos animais devido a sua elevada ocorrência. Em média 50% delas têm características de malignidade, o que faz com que a quimioterapia seja cada vez mais empregada. O uso da gencitabina associada a carboplatina é recomendado, mas apesar de auxiliarem na sobrevida do animal, também são agentes citotóxicos e podem ter efeitos secundários, como hepatotoxicidade. Detectar precocemente alterações morfológicas e hemodinâmicas hepáticas é fundamental para monitorar a resposta do paciente ao tratamento e para a manutenção do bem-estar dos animais. Desse modo, o objetivo deste estudo foi avaliar por meio da ultrassonografia em modo B e Doppler as alterações morfológicas e hemodinâmicas no fígado e na veia porta, respectivamente, de cadelas submetidas à quimioterapia adjuvante com gencitabina associada a carboplatina. Foram avaliadas 15 cadelas em três momentos (C0, C1 e C2), sendo o momento C0 o controle, realizado antes de iniciar a primeira sessão de quimioterapia; os momentos C1 e C2 foram realizados imediatamente antes da segunda e da terceira sessão de quimioterapia, respectivamente. Nos momentos preconizados (C0 a C2) foram feitos exames laboratoriais, como hemograma e bioquímica sérica. Os resultados mostraram que 33% (5/15) das cadelas apresentaram reações adversas aos fármacos, como diarreia, perda de apetite e vômitos. Apenas 20% (3/15) dos animais avaliados tiveram aumento gradual das enzimas hepáticas (ALT e FA), sem alterações significativas entre os ciclos (p>0,05). Na ultrassonografia em modo B foi encontrado aumento de ecogenicidade hepática em 27% (4/15) das cadelas no C1 e C2, ecotextura heterogênea em 13% (2/15) no C1 e C2 e dimensões hepáticas aumentadas em 20% (3/15) no C1 e C2. Não foram encontradas alterações na direção do fluxo ou nos parâmetros dopplervelocimétricos na veia porta das cadelas, nos ciclos avaliados, mesmo quando foram consideradas faixas de peso corpóreo. Concluiu-se que o protocolo com gencitabina e carboplatina não foi capaz de causar injúria hepática grave nos dois primeiros ciclos, no entanto, as alterações observadas no presente estudo sugerem que isto pode ocorrer nos tratamentos que adotem um número maior de ciclos. A ultrassonografia modo B e Doppler devem ser incluídas no monitoramento de animais submetidos ao protocolo com gencitabina e carboplatina por auxiliar na detecção precoce de alterações hepáticas.

Mammary neoplasms in bitches are of great importance in the clinical routine of small animals due to their high occurrence. On average 50% of them have malignant characteristics, which means that chemotherapy is increasingly used. The use of gemcitabine associated with carboplatin is recommended, but although they help the animal's survival, they are also cytotoxic agents and can have side effects, such as hepatotoxicity. Early detection of liver morphological and hemodynamic changes is essential to monitor the patient's response to treatment and to maintain the animals' well-being. Thus, the aim of this study was to evaluate, through B-mode and Doppler ultrasound, the morphological and hemodynamic changes in the liver and portal vein, respectively, of bitches undergoing adjuvant chemotherapy with gemcitabine associated with carboplatin. Fifteen bitches were evaluated in three moments (C0, C1 and C2), C0 was the control, performed before starting the first chemotherapy session; C1 and C2 were performed immediately before the second and third chemotherapy sessions, respectively. At the recommended moments (C0 to C2) laboratory tests were performed, such as blood count and serum biochemistry. The results showed that 33% (5/15) of the bitches had adverse drug reactions, such as diarrhea, loss of appetite and vomiting. Only 20% (3/15) of the animals evaluated had a gradual increase in liver enzymes (ALT and FA), with no significant changes between cycles (p>0.05). B-mode ultrasound showed an increase in liver echogenicity in 27% (4/15) of bitches in C1 and C2, heterogeneous echotexture in 13% (2/15) in C1 and C2 and increased liver dimensions in 20% (3/15) in C1 and C2. No changes were found in the flow direction or in the doppler velocimetric parameters in the portal vein of the bitches, in the evaluated cycles, even when body weight ranges were considered. In conclusion, the protocol with gemcitabine and carboplatin was not able to cause severe liver injury in the first two cycles, however, the changes observed in the present study suggest that this may occur in treatments that adopt a greater number of cycles. B-mode and Doppler ultrasonography should be included in the monitoring of animals submitted to the protocol with gemcitabine and carboplatin to aid in the early detection of liver alterations.

CARCINOMA MAMÁRIO EM CADELAS: ACHADOS CLÍNICOS, LABORATORIAIS E METASTÁTICOS

Muitos tumores em cães, incluindo tumores mamários, podem causar alterações que podem 4 levar a alterações sistêmicas, podendo está relacionadas as altas taxas de mortalidade. As 5 síndromes paraneoplásicas são classificadas de acordo com os sistemas envolvidos, por 6 exemplo. sistemas hematológico, cutâneo, sistema nervoso central, intestino, músculo, ossos e 7 sistemas endócrinos. O objetivo deste estudo foi descrever as principais alterações 8 hematológicas e bioquímicas em cadelas com tumores mamários. Análises hematológicas e 9 bioquímicas foram realizadas em 24 cães com diagnóstico de carcinoma mamário, antes e após 10 a cirurgia. As principais alterações observadas foram anemia, trombocitopenia, 11 hiperproteinemia, hipoalbuminemia, hiperalbuminemia, baixo nível de uréia e creatinina e 12 elevada fosfatase alcalina. Concluindo, cadelas com tumores mamários freqüentemente 13 apresentaram alterações hematológicas e bioquímicas, afetando principalmente parâmetros 14 indicativos de patologia hepática e renal. O carcinoma mamário adenoescamoso é considerado 15 um tumor raro e pode ser classificado como uma variante de neoplasia mamária metaplásica. 16 Dentre os diagnósticos diferenciais do carcinoma adenoescamoso deve incluir tumores 17 metastáticos e tumores com extensão secundária na pele. Esse padrão invasivo pode ser 18 explicado pela existência do componente escamoso do tumor, que quando presente em outras 19 localizações anatômicas é localmente invasivo. O presente resumo objetivou descrever o 20 quadro clínico, os achados histopatológicos e o tempo de sobrevida desta apresentação atípica 21 de carcinoma em uma cadela da raça Poodle, 11 anos, 4 kg, castrada. A paciente submetida a 22 mastectomia total devido a presença de nódulos nas mamas abdominais caudais e inguinais, 23 direita e esquerda, sugestivos de carcinoma pelo exame citológico. Decorridos 13 meses, a 24 paciente retornou com aumento de volume, rigidez e claudicação no membro pélvico esquerdo, 25 com evolução de seis meses. Ao exame clínico, o aumento de volume localizava-se uniforme 26 em toda a região proximal do membro pélvico esquerdo e apresentava consistência firme. Após 27 a realização do estadiamento o animal foi submetido a amputação do membro acometido. Na 28 análise histopatológica, a neoplasia foi classificada como carcinoma mamário adenoescamoso, 29 grau II. Foi realizado painel imuno-histoquímico, que confirmou o diagnóstico. Portanto, 30 mesmo não sendo comum, as metástases ósseas de tumores mamários, como o carcinoma 31 adenoescamoso, podem ser inseridas como diagnósticos diferenciais dentro das neoplasias que 32 atingem estruturas ósseas e que esse tipo de apresentação é agressiva e apresenta grande 33 potencial metastático.

Many tumors in dogs, including breast tumors, can cause systemic diseases and high mortality 5 rates. Paraneoplastic syndromes are classified according to the systems involved, for example. 6 hematological, skin, central nervous system, intestine, muscle, bone and endocrine systems. 7 The aim of this study was to describe the main hematological and biochemical changes in 8 bitches with breast tumors. Hematological and biochemical analyzes were performed in 24 dogs 9 diagnosed with breast cancer, before and after surgery. The main changes observed were 10 anemia, thrombocytopenia, hyperproteinemia, hypoalbuminemia, hyperalbuminemia, low level 11 of urea and creatinine and high alkaline phosphatase. In conclusion, bitches with breast tumors 12 frequently present hematological and biochemical alterations, mainly affecting parameters 13 indicative of hepatic and renal pathology. Adenosquamous breast carcinoma is considered a 14 rare tumor and can be classified as a variant of metaplastic breast cancer. Among the differential 15 diagnoses of adenosquamous carcinoma it should include metastatic tumors and tumors with 16 secondary skin extension. This invasive pattern can be explained by the existence of the scaly 17 component of the tumor, which when present in other anatomical locations is locally invasive. 18 The present summary aimed to describe the clinical picture, the histopathological findings and 19 the survival time of this atypical presentation of carcinoma in a Poodle dog, 11 years old, 4 kg, 20 neutered. The patient underwent total mastectomy due to the presence of nodules in the caudal 21 and inguinal abdominal breasts, right and left, suggestive of carcinoma by cytological 22 examination. After 13 months, the patient returned with increased volume, stiffness and 23 lameness in the left pelvic limb, with an evolution of six months. On clinical examination, the 24 increase in volume was uniform throughout the proximal region of the left pelvic limb and had 25 a firm consistency. After staging, the animal underwent amputation of the affected limb. In 26 histopathological analysis, the neoplasm was classified as adenosquamous breast carcinoma, 27 grade II. An immunohistochemical panel was performed, which confirmed the diagnosis. 28 Therefore, even though it is not common, bone metastases from breast tumors, such as 29 adenosquamous carcinoma, can be inserted as differential diagnoses within neoplasms that 30 reach bone structures and that this type of presentation is aggressive and has great metastatic 31 potential.

DETECÇÃO DE VARIANTES GERMINATIVAS NO PLASMA DE CADELAS COM NEOPLASIAS MAMÁRIAS POR SEQUENCIAMENTO DE NOVA GERAÇÃO

O câncer de mama é uma das neoplasias malignas mais incidentes em mulheres e cadelas. Em mulheres, sabe-se que mutações patogênicas herdadas nos genes de alta penetrância podem estar associadas ao risco elevado da doença, à resistência a terapias e ao prognóstico reservado ou ruim. Em cadelas, existem muitos dados divergentes sobre o envolvimento dos genes de alta penetrância (BRCA1 e BRCA2) com a carcinogênese mamária e sobre a verdadeira patogenicidade das variantes detectadas. Dessa forma, o objetivo principal deste estudo foi detectar variantes germinativas nos genes de alta e moderada penetrância associados ao câncer de mama em mulheres no plasma de cadelas por meio do sequenciamento de nova geração (NGS). Para tanto, foram coletadas vinte amostras de sangue provenientes de dez cadelas recém diagnosticadas com neoplasias de glândula mamária (RD), cinco cadelas mastectomizadas (MAST) e cinco cadelas sem neoplasia (CTR). Posteriormente, foram realizadas as etapas de extração do DNA livre circulante (plasmático), construção da biblioteca utilizando um painel de genes específicos associados ao câncer de mama em mulheres, incluindo os genes BRCA1, BRCA2, CDH1, STK11, TP53, PALB2 e ATM, e, por fim, análise bioinformática para detecção de variantes: polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs), deleções e inserções (indels). Foram detectadas 218 variantes no total, sendo 32,56% (n=71) em regiões codificantes e 13,76% (n=30) classificadas como de moderado impacto, a maioria do tipo missense. Dentre os genes de alta penetrância, o gene BRCA2 foi o que mais apresentou variantes, sendo identificados onze SNPs e dois indels, dessas, destacaram-se p.Thr1425Pro e p.Leu2307del, que foram classificadas como possivelmente patogênicas pelos programas de predição in silico. Em relação aos genes de moderada penetrância, foi identificado um quantitativo menor de variantes, quando comparados aos genes de alta penetrância e, dentre os genes avaliados, o PALB2 merece evidência, pois foram detectadas duas novas variantes possivelmente patogênicas: p.Ala949Val e p.Pro590_Val595delinsLeu. Assim, o sequenciamento de nova geração permitiu identificar grande quantidade de variantes, ainda de significado incerto, nos genes de predisposição ao câncer de mama, e essa condição parece ser semelhante em mulheres. São necessários estudos adicionais para validar as variantes identificadas em cadelas com câncer de mama para que, futuramente, seja possível proporcionar tratamento personalizado às pacientes.

Breast cancer is one of the most common malignant tumors in women and dogs. In women, pathogenic mutations inherited in high penetration genes are associated with increased risk of the disease, resistance to therapies and poorer prognosis. In dogs, there are many divergent data involving high penetration genes (BRCA1 and BRCA2) role in breast carcinogenesis and on true pathogenicity of the detected variants. Therefore, the main objective of this study was to detect germline variants in the genes of high and moderate penetrance associated with breast cancer in women in female dogs plasma using next generation sequencing (NGS). Blood from 20 female dogs were sampled: 10 newly diagnosed with mammary gland neoplasms (ND), 5 mastectomized (MAST) and 5 without neoplasm (CTR). Subsequently, the steps for extracting free circulating (plasmatic) DNA were performed, building the library using a panel of specific genes associated with breast cancer in women, including the genes BRCA1, BRCA2,CDH1, STK11, TP53, PALB2 and ATM, and, at last, bioinformatics analysis for variant detection: single nucleotide polymorphisms (SNPs), and deletions and insertions (indels). 218 variants were detected, 32.56% (n=71) in coding regions, and 13.76% (n = 30) classified as moderate impact, mostly the missense type. Among the high penetration genes, the BRCA2 gene was the one with the most variants 11 SNPs and 2 indels being identified and the variants p.Thr1425Pro and p. Leu2307del stand out, being classified as possibly pathogenic by in silico prediction programs. Regarding the genes of moderate penetrance, a smaller number of variants were identified when compared to the genes of high penetrance, and, among the evaluated genes, PALB2 deserves attention, as 2 new possibly pathogenic variants were detected: p.Ala949Val and p.Pro590_Val595delinsLeu. Thus, new generation sequencing allowed the identification of a large number of variants, still of uncertain significance, in the breast cancer predisposition genes and this condition appears to be similar in women. Additional studies are needed to validate the identified variants in female dogs patients with breast cancer in order to provide them with personalized treatment in the future.

SOBREVIDA DE CADELAS COM CARCINOMAS MAMÁRIO SUBMETIDAS À MASTECTOMIA ACOMPANHADA OU NÃO DA ADMINISTRAÇÃO DE CARPROFENO

Mecanismos associados à promoção tumoral, como aumento da angiogênese, inibição da apoptose, modulação da resposta imune, maior capacidade de invasão e ocorrência de metástases, têm sido propostos para explicar as consequências da super expressão de cicloxigenase-2 (COX-2) nas células neoplásicas. Em virtude da relação da COX-2 com o desenvolvimento do câncer, o objetivo deste trabalho foi avaliar a sobrevida de cadelas com carcinoma mamário, em estadiamento avançado (T3N0-1M0), submetidas à mastectomia acompanhada ou não da administração de carprofeno, bem como a tolerância ao tratamento. Para a realização deste estudo foram selecionadas 20 cadelas com carcinoma mamário, em estádio III e IV, provenientes da rotina do Hospital Veterinário Governador Laudo Natel da Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias da Universidade Estadual Paulista, Campus de Jaboticabal. Em 6 meses de acompanhamento, no grupo controle foram observados dois óbitos, os quais tiveram tempo de sobrevida de 110 e 178 dias, enquanto no grupo tratado, foram observados dois óbitos, os quais tiveram tempo de sobrevida de 87 e 133 dias. Em relação ao tempo livre de doença, observou-se surgimento de nódulos em outros órgãos, no grupo controle em cinco pacientes, sendo com 60 (na pele), 150 (no fígado e nos pulmões) e 180 dias (no baço, fígado e linfonodo esternal cranial), enquanto no grupo tratado em três pacientes, sendo com 60 (na pele), 90 (no pulmão), 120 (no baço), e 180 dias (no pulmão). As pacientes apresentaram 79 nódulos mamários, entre os quais foram observados 100 diagnósticos histopatológicos (variando de 1 a 11 por paciente). A expressão geral de COX-2 foi de 70% (grupo controle = 80% e grupo tratado = 60%; estadiamento IV = 100% e estadiamento III = 50%). Pela análise de correspondência múltipla, houve associação entre pacientes que apresentaram carcinoma grau I e ausência de expressão de COX-2 (p=1). Pacientes que apresentaram sobrevida entre 6 e 12 meses foram associadas àquelas com a apresentação de nódulo único e com tumores de índice mitótico intermediário (entre 9 e 16 figuras de mitose em 10 CGA) (p=1). Pelo teste qui-quadrado, observou-se que o parâmetro índice mitótico analisado no exame histopatológico pode ser capaz de segregar grupos de sobrevida (p=0,06). nenhuma paciente teve efeitos colaterais graves, os quais indicassem a interrupção do tratamento. A expressão de COX-2 identificada na maioria das pacientes (70%) suporta a indicação da terapia anti-inflamatória em neoplasmas mamários caninos. A incorporação de biomarcadores na tomada de decisão clínica é cada vez mais importante na oncologia veterinária, para praticar a terapia individualizada, e assim, predizer os pacientes que irão ou não responder ao tratamento. Além disso, o uso do carprofeno foi seguro para a utilização por períodos prolongados (90 dias) em cães.

Mechanisms associated with tumor promotion such as increased angiogenesis, inhibition of apoptosis, modulation of the immune response, increased invasiveness, and metastasis have been proposed to explain consequences of the overexpression of cyclooxygenase-2 (COX-2) in neoplastic cells. Due to the relationship between COX-2 and the development of cancer, the goal of this study was to evaluate survival of bitches with mammary carcinomas in advanced stage (T3N0-1M0) submitted to mastectomy with or without carprofen administration, as well the tolerance of the treatment. For this study, 20 female dogs with stage III and IV mammary carcinoma were selected from the routine of the Veterinary Hospital "Governador Laudo Natel" of the Faculty of Agrarian and Veterinary Sciences of the Universidade Estadual Paulista, Jaboticabal. In 6 months of follow-up, two deaths were observed in the control group, which had a survival time of 110 and 178 days, while in the treated group, two deaths were observed, which had a survival time of 87 and 133 days. Regarding disease-free time, nodules on organs were observed in the control group in five patients, with 60 (on the skin), 150 (in the liver and lungs), and 180 days (in the spleen, liver and cranial sternal lymph node), while in the group treated were observed in three patients, with 60 (on skin), 90 (in the lungs), 120 (in the spleen), and 180 days (in the lung). The patients had 79 nodules, among which 100 histopathological diagnoses (ranging from 1 to 11 per patient). The general expression of COX-2 was 70% (control group = 80% and treated group = 60%; stage IV = 100% and stage III = 50%). By the multiple correspondence analysis, there was an association between patients whose presented grade I carcinoma with absence of COX-2 expression (p = 1). Patients whose performed survival between 6 and 12 months were associated with those which presentation of a single nodule and those with tumors of intermediate mitotic index (among 9 and 16 mitosis figures in 10 CGA) (p = 1). By the chi-square test, it was observed that the mitotic index parameter analyzed in the histopathological exam may be able to segregate survival groups (p = 0.06). No patient had serious side effects, which indicated the interruption of treatment. COX-2 expression identified in most patients (70%) supports the indication of anti-inflammatory therapy in canine mammary carcinoma. The inclusion of biomarkers in clinical decision-making is increasingly important in veterinary oncology to practice individualized therapy, and thus, predict patients whose will respond to treatment or will not. In addition, the use of carprofen was safe for use for prolonged periods (90 days) in dogs.

Anestesia convencional e técnica de tumescência em cadelas submetidas à mastectomia. Avaliação da dor pós-operatória / Conventional anesthesia and tumescent technique in bitches which underwent mastectomy. Evaluation of postoperative pain

As neoplasias mamárias são as mais comuns em cadelas e geralmente acometem fêmeas de meia-idade a idosas, não castradas ou que foram submetidas ao procedimento de ovario-histerectomia tardiamente. A principal forma de tratamento é a excisão cirúrgica, sendo a ressecção unilateral das glândulas mamárias o procedimento mais realizado na prática veterinária. O objetivo do presente estudo foi comparar a dor pós-operatória em cadelas submetidas ao procedimento de mastectomia unilateral sob efeito das técnicas anestésicas de tumescência ou convencional. Foram utilizadas 20 cadelas, divididas em dois grupos: um grupo recebeu apenas a anestesia geral inalatória (grupo convencional), e o outro recebeu adicionalmente a anestesia infiltrativa por tumescência (grupo tumescência). Elas foram avaliadas nas primeiras 24 horas do período pós-operatório, e o processo álgico foi avaliado pela escala de dor da Universidade de Melbourne. As médias dos escores obtidos ao longo do tempo foram submetidas ao teste de Tukey a um nível de 5 por cento de significância (p<0,05). Não foram observadas diferenças significativas entre os grupos com relação à dor pós-operatória. A técnica anestésica infiltrativa por tumescência apresentou a vantagem da redução do sangramento transoperatório e mostrou-se exequível em pequenos animais, entretanto seu uso está relacionado à experiência e à preferência do cirurgião e do anestesista.(AU)

Mammary tumors are the most common neoplasm in bitches. Intact, mild to advanced aged female dogs are generally more affected. The main treatment is surgical excision and unilateral mastectomy is the most performed procedure in veterinary practice. The aim of this study was to compare the postoperative pain in dogs which underwent unilateral mastectomy and were anesthetized with tumescence and conventional anesthesia. Twenty bitches were randomly divided into two groups: Conventional Group (GC), which received only general inhalational anesthesia and Tumescence Group (GT), which also received tumescence anesthesia. All dogs were evaluated during the first 24 hours postoperatively. The scale of Pain from the University of Melbourne was used for the evaluation. The tukey test at a 5 percent level of significance (p <0.05) was used. There were no significant differences between groups related to postoperative pain. The technique of tumescent anesthesia reduced bleeding during surgery and is feasible in dogs. Its use is related to the surgeon and anesthesiologist's experience and preferences.(AU)

CARACTERIZAÇÃO EPIDEMIOLÓGICA E HISTOMORFOLÓGICA DE ALTERAÇÕES MAMÁRIAS CANINAS DO MUNICÍPIO DE GOIÂNIA-GO

As neoplasias mamárias são as doenças que mais acometem cadelas. A estimativa mundial dessas neoplasias em cadelas é de 1 milhão de novos casos por ano, no Brasil as neoplasias malignas correspondem até 90% das alterações mamárias diagnosticadas. Estudos epidemiológicos nesse cenário são escassos, em especial no estado de Goiás. Os resultados de estudos epidemiológicos de alterações mamárias em cães possuem variações, tanto no mundo quando nos estados brasileiros, o que pode ser influenciado por diversos fatores, dentre eles a peculiaridades dos animais inerentes a cada região geográfica estudada. Diante do exposto, o objetivo desse estudo foi determinar o perfil epidemiológico e histomorfológico de alterações mamárias neoplásicas e não neoplásicas de cães, no que diz respeito ao sexo, raça e idade no período de janeiro de 2011 a dezembro de 2018. Para atingir os objetivos propostos foram analisados 6.660 laudos de biopsias de animais, encaminhadas a um serviço de diagnóstico histopatológico de Goiânia no intervalo proposto. Os laudos foram separados de acordo com a espécie e diagnóstico, observando um predomínio de cães, o que pode ser justificado pelo fato do Brasil ser o segundo país no mundo com maior população canina, Centro-oeste a segunda região com maior número de residências com cães. Posteriormente, foram avaliados 1.515 laudos de alterações mamárias de cães, fêmeas e machos, com idade entre zero e 20 anos, um número considerável e que também e visto em outras regiões do país. O número de alterações mamárias aumentou ao longo dos anos analisados, acometendo principalmente fêmeas (99,41%). As neoplasias malignas representaram a maioria das alterações mamárias (70,17%), acometendo principalmente cães entre nove e 12 anos de idade (p <0,0001) e sem raça definida (p < 0,0001). A maioria das neoplasias eram de origem epitelial, tanto em neoplasias malignas quando benignas. Os diagnósticos mais frequentes de neoplasias, malignas e benignas, e lesões não neoplásicas foram de carcinoma túbulo-papilar (p 0,0385), adenoma complexo (p 0,0031) e hiperplasia lobular (p 0,0146), respectivamente. Em relação a graduação histopatológica, dos 675 diagnósticos de neoplasias malignas analisados (2015 a 2018), a maioria apresentava tinha grau I (p < 0,0001), característico de neoplasias malignas bem diferenciadas. Os resultados nessa região diferem de outras regiões brasileiras pelo elevado número de diagnósticos de neoplasias mamárias (33,16%) quando comparado as demais neoplasias e as neoplasias, na maioria dos casos, são malignas.

Breast neoplasms are the diseases that most affect bitches. The global estimate of these neoplasias in bitches is 1 million new cases per year; in Brazil malignant neoplasms correspond to up to 90% of the diagnosed breast changes. Epidemiological studies in this scenario are scarce, especially in the state of Goiás. The results of epidemiological studies of mammary alterations in dogs have variations, both in the world and in the Brazilian states, which can be influenced by several factors, among them the peculiarities of the animals inherent to each geographic region studied. In view of the above, the objective of this study was to determine the epidemiological profile of neoplastic and non-neoplastic mammary alterations of dogs, regarding the sex, breed and age of the dogs affected by these diseases, besides analyzing the histopathological and histopathological graduation of the neoplasias malignant lesions of the mammary gland from January 2011 to December 2018. In order to reach the proposed objectives, 6,660 animal biopsy reports were analyzed, sent to a histopathological diagnosis service in Goiânia at the proposed interval. The reports were separated according to the species and diagnosis, observing a predominance of dogs, which can be justified by the fact that Brazil is the second country in the world with the largest canine population, Central West, the second region with the highest number of residences with dogs. Subsequently, 1,515 reports of mammary alterations of dogs, females and males, with ages ranging from zero to 20 years were evaluated, a considerable number that is also seen in other regions of the country. The number of breast changes increased over the analyzed years, affecting mainly females (99.41%). Malignancies represented the majority of mammary alterations (70.17%), affecting mainly dogs between nine and 12 years of age (p <0.0001) and without a defined breed (p <0.0001). Most neoplasms were of epithelial origin, both in malignant and benign neoplasms. The most frequent diagnoses of neoplasms, malignant and benign, and non-neoplastic lesions were tubulo-papillary carcinoma (p 0.0385), complex adenoma (p 0.0031) and lobular hyperplasia (p 0.0146), respectively. Regarding the histopathological classification, of the 675 diagnoses of malignant neoplasias analyzed (2015 to 2018), the majority had grade I (p <0.0001), characteristic of well differentiated malignancies. The results in this region differ from other Brazilian regions due to the high number of diagnoses of breast neoplasms (33.16%) when compared to the other neoplasias, the neoplasias, in the majority of cases, are malignant.

Neoplasias diagnosticadas em caninos na região sul do Rio Grande do Sul entre 2000-2017: correlação histoquímica, imuno-histoquímica e variações genéticas

O aumento dos casos de neoplasias em animais domésticos é um problema crescente na prática veterinária e importante causa de morte em diversas espécies, principalmente caninos e felinos. Dentre estas neoplasias os tumores de mama e os tumores de células redondas como linfoma e tumor venéreo transmissível (TVT), são frequentemente diagnosticados na área de influência do Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal de Pelotas (LRD / UFPel). São, portanto, incluídos nesta tese três trabalhos científicos. No primeiro foi realizado um estudo retrospectivo de linfomas caninos diagnosticados no LRD / UFPel entre 2000 e 2017, para determinar sua epidemiologia e distribuição anatômica, e avaliar os aspectos histopatológicos e imuno-histoquímicos de cada caso, de acordo com a classificação de Kiel adaptada. Linfoma foi diagnosticado em 77 cães. Em relação à classificação anatômica, a forma multicêntrica foi a mais prevalente, representando 71,4% (55/77) dos diagnósticos. Nos 40 casos em que a imunofenotipagem foi realizada, os linfomas de células B representaram 62,5% dos diagnósticos (25/40), enquanto os linfomas de células T corresponderam a 37,5% dos diagnósticos (15/40). O grau de malignidade de acordo com a classificação de Kiel modificada foi baixo em 35% dos linfomas (14/40) e alto em 65% dos casos (26/40). A forma multicêntrica foi mais frequente na região de influência do LRD / UFPel. No segundo trabalho foi realizado um estudo molecular para identificação de mutações nos éxons 7 e 8 no gene TP53 em tumores de mama em 20 cães fêmea de diferentes raças ou misturados não foram encontradas alterações na sequência dos mesmos e suas regiões intrônicas limítrofes. O sequenciamento dos demais éxons e regiões intrônicas bem como a ampliação do número de cães analisados podem revelar alterações não detectadas aqui, demonstrando a importância de expandir o presente estudo. No terceiro artigo foi demonstrado que a IHQ é uma ferramenta importante para diferenciar o TVT canino de outros tumores de células redondas.

The increase in the incidence of tumors in domestic animals is a growing concern in veterinary practice and an important cause of death in several species, mainly dogs and cats. Among these neoplasms, breast cancer and round cell tumors such as lymphoma and transmissible venereal tumor (TVT) are frequently diagnosed in the area of influence of the Regional Diagnostic Laboratory of the Faculty of Veterinary Medicine of the Federal University of Pelotas (LRD / UFPel). Therefore, three scientific papers were included in this thesis. In the first, a retrospective study of canine lymphomas diagnosed in the LRD / UFPel between 2000 and 2017 was carried out to determine their epidemiology and anatomical distribution, and to evaluate the histopathological and immunohistochemical aspects of these lymphomas, according to the modified Kiel classification. Lymphoma was observed in 77 dogs. The multicentric form was the most prevalent, representing 71.4% (55/77) of the diagnoses. In 40 cases immunophenotyping was performed, and B-cell lymphomas accounted for 62.5% of the diagnoses (25/40), while T-cell lymphomas corresponded to 37.5% of the diagnoses (15/40). The degree of malignancy according to the modified Kiel classification was low in 35% of lymphomas (14/40) and high in 65% of cases (26/40). The multicentric form was more frequent in the region of influence of the LRD / UFPel. In a second paper, a molecular study was carried out to identify mutations in exons 7 and 8 in the TP53 gene in canine mammary tumors. Twenty mammary tumors of mixed breed female dogs were analyzed.The sequencing of the other exons and intron regions as well as the increase in the number of dogs analyzed may reveal alterations not detected here, demonstrating the importance of expanding the present study. IHQ is an important tool for differentiating canine TVT from other round cell tumors.

OSTEOSSARCOMA EM CÃES: CARACTERIZAÇÃO CLÍNICO-PATOLÓGICA E AVALIAÇÃO DE FATORES PROGNÓSTICOS HISTOPATOLÓGICOS E DE IMUNO-HISTOQUÍMICA

Neoplasias em animais domésticos são afecções crescentes em medicina veterinária, especialmente devido ao aumento da longevidade destes animais e aos melhores métodos de diagnóstico. Em cães, os tumores ósseos são relativamente comuns e o osteossarcoma, representa 85% das neoplasias ósseas diagnosticadas nesta espécie. Este trabalho teve como objetivo descrever os aspectos epidemiológicos, clínicos e patológicos do osteossarcoma canino de 2006 a 2018 e avaliar fatores prognósticos associados ao neoplasma. Os materiais e métodos aplicados e resultados obtidos foram apresentados em dois artigos científicos. O primeiro artigo descreve os aspectos epidemiológicos e patológicos de 36 casos de osteossarcoma extraesquelético em cães. No período analisado, 2006 a 2016, o osteossarcoma acometeu os tecidos moles em 16,7% dos casos. As fêmeas, com média de 10,4 anos de idade e peso médio de 19,5 kg foram mais acometidas. Não houve predisposição racial. Os principais locais foram: glândula mamária (80,6%), tecido subcutâneo (5,6%) e fígado (5,6%). Na histologia, os osteossarcomas osteoblásticos (61,1%) de grau II e III foram os mais frequentes. Metástases nodais ocorreram em 21,4% dos casos na mama. Metástases distantes ocorreram nos pulmões (57,1%), fígado (14,3%), baço (14,3%) e em múltiplos sítios (14,3%). Metástases pulmonares foram mais frequentes em cadelas com osteossarcoma de glândula mamária. O segundo artigo descreve os aspectos clínico-patológicos de 153 casos de ostessarcoma apendicular em cães, dos quais os dados de sobrevida de 22 caninos submetidos a intervenções cirúrgicas e à quimioterapia foram confrontados estatisticamente com os dados clínicos, histopatológicos e imunohistoquímicos para correlação prognóstica. No período analisado, 2008 a 2018, o osteossarcoma acometeu o tecido ósseo em 83% dos casos e deste, 82% envolviam o esqueleto apendicular. A média de idade foi de nove anos e o peso médio de 33,4 kg. Não houve predileção sexual. A raça pura mais acometida foi o Rottweiler (42%). Os principais locais acometidos foram: úmero proximal (95%), fêmur distal (70%), rádio distal (96%) e tíbia proximal (56%). Na histologia, o subtipo osteoblástico foi o mais frequente (57%). Metástases nodais ocorreram em 14% dos casos. Metástases distantes ocorreram em 75% dos casos, nos quais o pulmão (43%) foi o principal órgão acometido. Quanto à análise de fatores prognósticos, o peso, idade, sexo, membro e osso afetado, classificação histológica, contagem mitótica e grau histológico não influenciaram na sobrevida (p > 0,05). Neoplasmas na extremidade proximal dos membros tiverem uma tendência a um pior prognóstico (p=0,06). Para estes casos, a taxa de sobrevida em um ano foi de 14,3%, enquanto que na extremidade distal a taxa foi de 46,7%. Não houve diferença significativa em relação à sobrevida quando utilizadas as técnicas de amputação ou preservação do membro, desde que associadas à quimioterapia (p=0,20). A sobrevida para estes casos variou de 73 a 1185 dias e a média foi de 394 dias. Todos os casos apresentaram marcação citoplasmática para osteopontina, porém a intensidade e o percentual de células neoplásicas marcadas não influenciaram na sobrevida (p > 0,05). Em 80% dos casos com metástases deste estudo houve marcação acentuada para osteopontina.

Neoplasms in domestic animals are increasing in veterinary medicine, especially due to the increased longevity of these animals and the best diagnostic methods. In dogs, bone tumors are relatively common and osteosarcoma accounts for 85% of the bone neoplasms diagnosed in this species. The objective of this study was to describe the epidemiological, clinical and pathological aspects of canine osteosarcoma from 2006 to 2018 and to evaluate prognostic factors associated with neoplasm. The materials and methods applied and results obtained were presented in two scientific papers. The first article describes the epidemiological and pathological aspects of 36 cases of extra-skeletal osteosarcoma in dogs. In the analyzed period, from 2006 to 2016, osteosarcoma affected the soft tissues in 16.7% of cases. Females, with a mean age of 10.4 years, mean weight of 19.5 kg were the most affected. There was no racial predisposition. The main sites were: mammary gland (80.6%), followed by subcutaneous tissue (5.6%) and liver (5.6%). In histology, osteoblastic osteosarcomas (61.1%) of grade II and III were the most frequent. Nodal metastases were present in 21.4% of the cases that occurred in the breast. Distant metastases occurred in the lungs (57.1%), liver (14.3%), spleen (14.3%) and multiple sites (14.3%). Pulmonary metastases were more frequent in bitches with osteosarcoma of the mammary gland. The second article describes the clinical-pathological aspects of 153 cases of appendicular ostessarcoma in dogs, of which the survival data of 22 canine submitted to surgery and chemotherapy were statistically compared with the clinical, histopathological and immunohistochemical data for prognostic correlation. In the analyzed period, from 2008 to 2018, the osteosarcoma affected the bone tissue in 83% of the cases and of this, 82% involved the appendicular skeleton. The mean age was 9 years and the mean weight was 33.4 kg. There was no sexual predilection. The pure breed most affected was the Rottweiler (42%). The main sites were: proximal humerus (95%), distal femur (70%), distal radius (96%) and proximal tibia (56%). In histology, osteoblastic osteosarcomas were more frequent (57%). Nodal metastases occurred in 14% of cases. Distant metastases occurred in 75% of cases, in which the lung (43%) was the main organ affected. Regarding the analysis of prognostic factors, weight, age, sex, affected limb and bone, histological classification, mitotic count and histological grade did not influence survival (p> 0.05). Neoplasms located at the proximal extremities of the limbs tend to have a poor prognosis (p = 0.06). For these cases, the survival rate at one year was 14.3%, while at the distal end the rate was 46.7%. There was no significant difference in survival when using amputation or limb preservation techniques, since they were associated with chemotherapy (p = 0.20). The survival of these dogs ranged from 73 to 1185 days, with a mean of 394 days. All cases presented cytoplasmic marking for osteopontin, but the intensity and percentage of marked neoplastic cell did not influence the survival (p> 0.05). In 80% of the cases with metastases from this study there was marked marking for osteopontin.

Avaliação do mapeamento térmico de tumores mamários no transoperatório da mastectomia em cadelas

A identificação de micrometástases regionais, que fazem parte do processo de malignização, esta diretamente relacionada com as altas taxas de mortalidade ainda presentes no tratamento das neoplasias mamárias em cadelas. É preciso analisar abordagens que ajudem identificar estas alterações e aprimorar a escolha das margens cirúrgicas. O objetivo deste trabalho foi detectar presença de micrometástases mamárias em regiões com padrões térmicos presuntivos de alteração identificadas por videotermometria, em cadelas com nódulos palpáveis em mama, comparando-os através do exame histopatológico. As técnicas de identificação foram então por palpação (PP) e por videotermometria (VTM) no transoperatório da mastectomia em tempo real, para alcançar uma melhor definição da margem cirúrgica. Foram analisadas 31 alterações de tecido glandular retiradas em 12 cirurgias a partir de pacientes da rotina do Hospital Veterinário da UENF. Contou-se com um grupo controle de 6 cadelas sadias para a avaliação do padrão videotermométrico. O padrão térmico encontrado nas glândulas mamárias do grupo 2 foi homogêneo e simétrico. O número de casos de alterações nodulares identificadas por PP foi de 20, e mais 11 casos foram presuntivos por VTM (PVTM), sendo que em todos os casos foi evidenciada alteração do padrão térmico, assim, o número de casos identificados por VTM foi significativamente superior, indicando que independente do tipo de laudo histológico obtido, esta técnica foi mais eficiente. Apenas três das regiões detectadas com as técnicas expuseram ausência de alteração no estudo histopatológico. As frequências absolutas entre os diagnósticos histopatológicos identificados foram submetidas ao teste de Quí. Quadrado (², P 0,01), em que as proporções entre técnicas segundo o tipo de laudo de biopsia, apresentaram diferenças significativas (²= 6,6 tabelado, GL=1, P<0,01) permitindo detectar com maior precisão mediante a VTM alterações não-neoplásicas e carcinomas. Em conclusão a videotermometria permite identificar padrões anormais correspondentes a carcinomas mamários palpáveis, micro metastáticos, e alterações não neoplásicas. Contudo é preciso o estudo de um maior numero de casos para conseguir determinar o padrão térmico de todos os tipos de tumores mamários em cadelas assim como avaliar estratégias dinâmicas que permitam a melhor diferenciação dos tumores benignos.

he identification of regional micrometastases, which are part of the malignization process, is directly related to the high mortality rates still present in the treatment of breast neoplasms in bitches. It is necessary to analyze approaches that help to identify these changes and to improve the choice of surgical margins. The objective of this study was to detect presence of mammary micrometastases in regions with presumptive thermal patterns of alteration identified by videothermometry in bitches with palpable mammary nodules, comparing them through histopathological examination. The identification techniques were then by palpation (PP) and by videothermometry (VTM) at the trans operative period of the mastectomy in real time, to reach a better definition of the surgical margins. Thirty-one alterations in glandular tissue were analyzed between 12 surgeries. Were studied routine patients of the UENF Veterinary Hospital. It was adjusted a control group of 6 healthy bitches to evaluate the videothermometric standard patterns. The thermal pattern founded in the mammary glands of the control group was homogeneous and symmetrical. The number of cases of nodular alterations identified by PP was 20, and 11 more cases were presumptive by VTM (PVTM), and at all the 31 cases it was evidenced a change in the thermal pattern, thus, the number of cases identified by VTM was significantly superior, indicating that regardless of the type of histological report obtained, this technique was more efficient. Only three of the regions detected with the techniques showed no alteration in the histopathological study. The absolute frequencies among the identified histopathological diagnoses were submitted to the Chi test. (², P 0.01), in which the proportions between techniques according to the type of biopsy report showed significant differences (² = 6.6, GL = 1, P <0.01), allowing to detect with greater accuracy by VTM non-neoplastic changes and carcinomas. In conclusion, videothermometry allows the identification of abnormal patterns corresponding to palpable, micro metastatic mammary carcinomas, and non-neoplastic alterations. However, it is necessary to study a greater number of cases to determine the thermal pattern of all types of breast tumors in bitches as well as to evaluate dynamic strategies that allow better differentiation of benign tumors.

Doenças de felinos na região sul do Rio Grande do Sul

Esta dissertação trata-se de um estudo das enfermidades de felinos diagnosticadas nos municípios da área de influência do Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal de Pelotas, em um período de 36 anos. É apresentado um trabalho geral das doenças diagnosticadas em felinos na região sul do Rio Grande do Sul entre os anos de 1978 e 2014, neste mesmo trabalho são destacadas algumas enfermidades, pela sua maior ocorrência e potencial zoonótico. Este trabalho demonstrou que as neoplasias representam a maior parte de diagnósticos nesta espécie, totalizando 435 casos, sendo desses os mais prevalentes as neoplasias cutâneas e as neoplasias mamárias, dentre as neoplasias cutâneas, o carcinoma de células escamosas foi o mais prevalente. Entre as doenças fúngicas as que apresentaram maior ocorrência foram esporotricose com 37 casos e dermatofitose com 20 casos, parasitoses gastrointestinais representaram 22 diagnósticos, das doenças virais a raiva com 18 casos e peritonite infecciosa felina 18 casos, e quatro casos de tuberculose. É apresentado, também, um trabalho científico referente à Tuberculose felina, sendo uma importante doença que acomete os animais e o homem, abordando a possível origem da infecção. O diagnóstico foi confirmado através da coloração de Ziehl-Neelsen (ZN), apresentando tambémimunomarcação positiva para micobactéria pela técnica de imuno-histoquímica (IHQ) e em dois casos o diagnóstico foi confirmado pela amplificação da sequência genética específica para Mycobacterium tuberculosis pela técnica de Reação em cadeia da polimerase (PCR).

The diseases of cats diagnosed in the municipalities of the area of influence of the Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal de Pelotas, which based on a 36 years period. It is presented a general paper of the diseases diagnosed in cats in southern Rio Grande do Sul region between 1978 and 2014, this same work are highlighted some diseases, because of their increased occurrence and zoonotic potential. This paper demonstrated that neoplasms represent the majority of diagnoses in this species, totaling 435 cases, and of these the most prevalent of skin cancer and breast cancer, among skin cancer, squamous cell carcinoma was the most prevalent. Among the fungal diseases in higher numbers were sporotrichosis with 37 cases and 20 cases with dermatofitosis, gastrointestinal parasitic diseases accounted for 22 diagnoses of viral diseases rabies with 18 cases and feline infectious peritonitis 18 cases and four cases of tuberculosis. It appears, also, a scientific work related to the feline Tuberculosis(TB), is an important disease that affects animals and man, addressing the possible source of infection. The diagnosis was confirmed by Ziehl-Neelsen (ZN), also presenting a positive immunostaining for mycobacteria by the technique of immunohistochemistry (IHC) and in two cases the diagnosis was confirmed by amplification of the specific gene sequence for Mycobacterium tuberculosis by the technique of polymerase chain reaction (PCR)

COMPARAÇÕES DAS IMUNOMARCAÇÕES DE CÉLULAS-TRONCO TUMORAIS (CD44+/CD24-) EM TUMORES MAMÁRIOS TRIPLO NEGATIVOS EM CADELAS E MULHERES

As neoplasias em glândulas mamárias estão entre os tumores mais comuns nas cadelas. Tumores mamários que apresentam células-troncos tumorais, caracterizadas pela imunomarcação positiva de CD44 e negativa ou de baixa marcação de CD24 quando associadas com fenótipos triplo-negativos apresentam os piores prognósticos. O triplo-negativo, além de muito agressivo, está relacionado com a falta de responsividade às terapias habituais endócrinas, e sobrevida mais curta. O objetivo deste estudo foi comparar a imunomarcação de CD44+/CD24- em neoplasias mamárias em cadelas e mulheres que apresentassem o fenótipo triplo-negativo (ausência de marcação para receptores de estrógeno, progesterona e c-erbB-2). Foram utilizadas 71 neoplasias mamárias, sendo 22 neoplasias de cadelas e 49 neoplasias de mulheres já selecionadas para o fenótipo triplo-negativo por meio da técnica de imuno-histoquímica. As análises de CD44+/CD24- foram selecionadas avaliando a porcentagem de imunomarcação, e foram comparados o óbito e a presença de células-tronco tumorais de cadelas e mulheres triplo-negativas utilizando o programa computacional Graphpad Prisma (versão 4.0, 2003), teste Qui Quadrado, considerando o nível de significância 5%. O fenótipo triplo-negativo correspondeu a 55% e 20% das amostras analisadas em cadelas e mulheres, respectivamente. O tamanho dos nódulos que predominou nas cadelas foi T2 e nas mulheres T2 e T3, revelando que tumores acima de 2cm para as cadelas e 3 cm para as mulheres estão em neoplasias mais agressivas como o triplo-negativo. O tempo de sobrevida médio das cadelas que vieram a óbito foi de 9,25±5,67 meses e das mulheres 28,5±19,20 meses, sendo a metástase a possível causa de uma menor sobrevida tanto de cadelas e mulheres. O imunofenótipo CD44+/CD24- foi encontrado em 27% nas cadelas e em 45% nas mulheres. A incidência de óbito com o fenótipo triplo-negativo e a presença de células-tronco tumorais foi estatisticamente maiores nas mulheres em relação às cadelas, reforçando que o mau prognóstico do triplo-negativo está intimamente ligado à presença de células-tronco nas neoplasias mamárias. Pode-se concluir que o subtipo molecular triplo-negativo existe nas neoplasias mamárias da cadela e que a imunomarcação CD44+/CD24- é maior nas mulheres desencadeando um pior prognóstico que apresentou uma maior taxa de óbito em relação às cadelas.

The tumors in the mammary glands are among the most common tumors in female dogs. Breast tumors with tumor stem cell, characterized by positive immunostaining for CD44 and negative or low marking CD24 when associated with triple-negative phenotypes have the poor prognosis. The triple-negative as well as very aggressive, is related to the lack of responsiveness to endocrine therapies usual, and shorter survival. The objective of this study was to compare the immunostaining of CD44+/CD24- in mammary tumors in female dogs and women who presented the triple-negative phenotype (no marker for estrogen, progesterone, and c-erbB-2). There were used 71 breast tumors, 22 neoplasms of dogs and 49 women neoplasms already selected for the triple-negative phenotype by immunohistochemistry technique. The analysis of CD44+/CD24- are selected by evaluating the percentage of immunostaining. The analysis of CD44 + / CD24- are selected by evaluating the percentage of immunostaining, and compared the presence of death and stem-tumor cells of triple-negative women and bitches using the computer program Graphpad Prism (version 4.0, 2003), Chi Square, considering the significance level of 5%. The triple-negative phenotype corresponding to 55% and 20% of samples in dogs and females, respectively. The size of the nodules that prevailed in female dogs was T2 and women T2 and T3, revealing that tumors larger than 2cm in female dogs and 3 cm in women are more aggressive cancers such as triple negative. The average survival time of dogs that died was 9.25 ± 5.67 months and women 28.5 ± 19.20 months, with metastasis the possible cause of a lower survival of both dogs and women. The immunophenotype CD44+/CD24- was found in 27% in dogs and 45% in women. The incidence of death with triple-negative phenotype and the presence of cancer stem cells was significantly higher in women compared to female dogs. It is agree that the poor prognosis of triple negative is closely linked to the presence of stem cells in breast tumors. It can be concluded that the triple negative subtype exists in molecular mammary tumor female dog and that immunostaining CD44+/CD24- is higher in women triggering a worse prognosis that had a higher death rate compared to female dogs.