Células-tronco localizadas na cinta placentária de carnívoros domésticos (Canis familiaris e Felis domesticus)

As células-tronco podem ser isoladas tanto de tecidos embrionários quanto de tecidos provenientes de um organismo adulto. Este projeto teve por objetivo caracterizar, descrever as células derivadas da região uterina e da cinta placentária - junção materno/fetal da placenta de carnívoros domésticos (cães e gatos), e verificar a sua capacidade de pluripotência. Os úteros gestantes e não gestantes foram obtidos em campanhas de castrações e de controle populacional de cães e gatos, na cidade de Pirassununga/SP. Foram coletados 24 úteros gravídicos de animais hígidos, em diferentes idades gestacionais. O material foi dividido em três fases distintas da gestação, ou seja inicio que compreende de 8 a 20 dias de gestação; meio de 21 a 30 dias de gestação e final de 31 a 60 dias de gestação. O material foi coletado de fêmeas caninas e felinas, quatro úteros de cada fase, totalizando 12 úteros de cães e 12 de felinos. Coletamos também 8 úteros de fêmeas nulíparas (4 de cadelas e 4 de gatas) e 8 úteros com um mês pós parto (4 de cadelas e 4 de gatas). As amostras foram fixadas em paraformoldeido tamponado a 4% para a análise histológica e de imunohistoquimica. Para a padronização da imunohistoquimica inúmeros testes de marcação e diluição dos anticorpos utilizados nesta pesquisa foram realizados, todo protocolo aqui descrito foi padronizado pela primeira vez. Nas análises de imunohistoquimica avaliamos a expressão de marcadores associados a células-tronco pluripotentes Nanog, Oct4 e Sox2. Nas cadelas, as marcações foram positivas em todas as fases, gestacionais e não gestacionais. A detecção dessas proteínas nesta espécie ficaram padronizadas, destacando algumas diferenças quantitativas durante alguns períodos da gestação. Foi observado que o Oct4 na cadela, mostra uma diferença significativa (p=0,0064), entre as fases de início e meio da gestação e entra o início e a fase de termo. Quando comparados os resultados das análises imunohistoquimicas utilizando os três anticorpos entre si, nos três períodos gestacionais ficou evidente uma diferença (p=0,0005) somente relativa a proteína Nanog com Oct4. Nas gatas apenas foi possível padronizar o protocolo do Nanog e do Sox2, sendo a marcação feita com Oct4 negativa. Nesta espécie foi possível observar uma diferença da proteína Nanog (p=0,0006) quando comparada na fase inicial para a fase do meio e início da gestação para a fase termo. No que se refere as fêmeas nulíparas e fêmeas pós-parto destaca-se a ausência de diferenças quando comparados os anticorpos na fase pós parto tanto em cadelas quanto em gatas. Na fase nulípara foram observadas diferenças somente na cadela (p=0,0018) para os três anticorpos. Desta forma, a caracterização de células de origem placentária com característica de células-tronco pode abrir um leque de possibilidades para obtenção destas células de forma mais ética, uma vez que este material é descartado na castrações. Foi possível a identificação das células que expressão proteinas pluripotentes em diferentes idades gestacionais, tanto na região de cinta placentária como no útero. Apesar de semelhantes, as espécies aqui estudadas apresentaram diferenças na realização do protocolo da imunihistoquímica.Pesquisas relacionadas com as células-tronco do endométrio vêm crescendo, principalmente porque estas células podem ser facilmente obtidas, a partir de fontes descartadas, sem entraves éticos. Desta forma tem o potencial de serem uma nova fonte para o desenvolvimento na terapêutica como terapia celular.

The stem cells can be isolated both embryonic tissues as much tissues from an adult organism. This project had from objective characterize and describe cells derived from uterine region and placental girdle - maternal junction / fetal placenta of domestics carnivores (dogs and cats), and check their capacity of pluripotency. The uterus pregnant and non-pregnants were obtained in castrations campaigns and population control of dogs and cats in the city of Pirassununga/SP. Were collected 24 uterus gravidic of healthy animals at different gestational ages. The material was split into three separate stages of pregnancy,that is, the Startconsist of 8 to 20 days of gestation;between21-30 days of gestation and end 31-60 days of gestation. The material was colleted from canine and feline females, four uterus each phase 12 uterus of dogs and 12 uterus of cats. We also collect 8 nulliparous female uterus (4 of dogs and 4 of cats) and 8 uterus with a postpartum month (4 of dogs and 4 of cats). The samples were fixed in paraformoldeido at 4% for histological analysis and immunohistochemical. For the standardization of immunohistochemical, were made numerous tests of marking and dilution of antibodies all the protocol described here has been standardized for the first time. In immunohistochemical analysis, we evaluated the expression of markers associated with pluripotent stem cells Nanog, Oct4 and Sox2. In cats, it was only possible to standardize the protocol of the Nanog and of the Sox2, and marking made with negative Oct4. This species was possible was possible to observe a difference in the Nanog protein (p = 0.0006) compared with the initial phase to the medium and early pregnancy to the term phase. As regards the nulliparous females and postpartum females there is the absence of differences when compared to the antibodies in postpartum stage, both in dogs and in cats. In nulliparous phase differences were only observed in dogs (p = 0.0018) for the three antibodies. Thus, the characterization of placental origin cells with stem cell characteristic can open up a range of possibilities for obtaining such cells more ethical, since this material is discarded in castration. The identification of pluripotent cells expressing proteins at different gestational ages was possible in both placental belt region as in utero. Although similar, the species studied here showed differences in the realization of immunohistochemical protocol. Searches related to the endometrial stem cells are growing, mainly because these cells can be easily obtained from sources discarded without ethical barriers. This way has the potential to be a new source for development in the therapeutic cell therapy.

AGENTES DE DOENÇAS TRANSMITIDAS POR VETORES EM CÃES E GATOS DOMÉSTICOS

O presente trabalho relata a ocorrência dos agentes de doenças transmitidas por vetores (VBD) Rangelia vitalii, Babesia vogeli, Hepatozoon spp., Bartonella spp., Anaplasma spp. em cães e gatos domésticos. A presença destes vetores, carrapatos e pulgas, confere a distribuição em larga escala das doenças vetoriais no mundo, que por sua vez, ganharam destaque no ano de 2014 pela Organização Mundial de Saúde (OMS). As doenças transmitidas por vetores podem ser consideradas emergentes ou re-emergentes e, em certas regiões, sua epidemiologia ainda não está definida. Portanto, este estudo objetivou identificar agentes de doenças transmitidas por vetores causadores de hemoparasitoses em cães e gatos domésticos. Amostras de sangue periférico e de ponta de orelha foram colhidas de 110 animais, compreendendo 80 cães e 30 gatos. Os animais eram provenientes dos atendimentos de rotina e de cirurgias de esterilização do Hospital Veterinário da Universidade de Passo Fundo (HV-UPF), cidade de Passo Fundo, região Noroeste do RS. As amostras dos cães foram submetidas a esfregaço sanguíneo coradas com Giemsa e Panótico, detecção de anticorpos anti-Babesia vogeli e anti-Ehrlichia canis através do método de ELISA e PCR para Babesia spp. (gene 18S rRNA), Hepatozoon spp. (gene 18S rRNA), Anaplasma spp. (gene 16S rRNA) e Ehrlichia spp. (gene dsb). As amostras de gatos foram submetidas apenas a esfregaço sanguíneo e PCR para Babesia spp., Hepatozoon spp., Bartonella spp (gene nuoG), Anaplasma spp. e Ehrlichia spp. (gene 16S rRNA). Os esfregaços sanguíneos revelaram um total de 20% (22/110) de amostras positivas, sendo 63,63% (14/22) e 9,09% (2/22) apresentando estruturas semelhantes a mórulas em plaquetas e monócitos, respectivamente. Estruturas compatíveis com piroplasmas foram encontradas em 27,27% (6/22). Os demais agentes não foram identificados por estes métodos. Somente os animais infectados com R. vitalii apresentaram alterações clínicas e hematológicas compatíveis com rangeliose, cujas alterações mais frequentes foram anemia (100%), trombocitopenia (66,7%), icterícia, hemorragias externas e anorexia (50%). Os demais animais positivos identificados com os demais agentes não apresentaram sinais clínicos e/ou alterações hematológicas compatíveis com a infecção causada pelos mesmos. A pesquisa de anticorpos contra B. vogeli mostrou soropositividade de 91% (73/80), enquanto que para B. vogeli e E. canis, apenas 8.75% (7/80). Dezenove (17,27%) dos 110 animais amostrados foram positivos para algum tipo de hemoparasita na PCR. Onze (10%) foram positivos para o gene 18S rRNA de Babesia spp., e após sequenciamento genético identificou-se o agente R. vitalii em 6 (5,5%) dos cães e B. vogeli em 3 cães (2,72%) e 2 gatos (1,81%). Para o gene 18S rRNA de Hepatozoon spp. apenas um cão (0,9%) foi positivo, assim como também apenas um cão (0,9%) foi positivo para o gene 16S rRNA de Anaplasma spp. Para o gene nuoG de Bartonella spp., 6 gatos (20%) foram positivos. Nenhuma amostra foi positiva para os genes dsb e 16S rRNA de Ehrlichia spp. Neste estudo reportamos pela primeira vez no Estado do RS a confirmação molecular de B. vogeli em cães e gatos domésticos. Ademais, os agentes Hepatozoon spp., Anaplasma spp. e Bartonella spp. ainda não haviam sido descritos na região do presente estudo. E, além disso, nós sugerimos que R. vitalii é um dos agentes transmitidos por vetores mais frequentes no Estado do RS.

This study reports the occurrence of vector-borne diseases (VBD) agents Rangelia vitalii, Babesia vogeli, Hepatozoon spp., Anaplasma spp. e Bartonella spp. in domestics dogs and cats. The presence of these vectors, ticks and fleas, gives large-scale distribution of vector-borne diseases in the world, which in turn, have gained prominence in 2014 by the World Health Organization (WHO). The vector-borne diseases can be considered emerging or re-emerging and, in certain regions, its epidemiology is not yet defined. Therefore, this study aimed to identify vector-borne diseases agents by causing hemoparasitosis in domestic dogs and cats. Peripheral blood samples and ear tip were harvested from 110 animals, comprising 80 dogs and 30 cats. The animals were from the routine care and sterilization surgeries Veterinary Hospital of the University of Passo Fundo (HV-UPF), the city of Passo Fundo, Northwest, RS. The samples of dogs underwent blood smear by Giemsa and the Panotic staining, detection of anti-Babesia vogeli antibodies and anti-Ehrlichia canis by ELISA and PCR method for Babesia spp. (18S rRNA gene), Hepatozoon spp. (18S rRNA gene), Anaplasma spp. (16S rRNA) and Ehrlichia spp. (dsb gene). Blood smears revealed a total of 20% (22/110) of positive samples, and 63.63% (14/22) and 9.09% (2/22) having structures similar to morulae platelet and monocytes, respectively. Structures compatible with piroplasms were found in 27.27% (6/22). The other agents were not identified by these methods. Only animals infected with R. vitalii presented clinical and hematological alterations compatible with rangeliose, whose most common were anemia (100%), thrombocytopenia (66.7%), jaundice, external bleeding and anorexia (50%). The other positive animals identified with the other agents did not show clinical signs and/or hematological alterations compatible with infection caused by them. The detection of antibodies against B. vogeli showed seropositivity of 91% (73/80), while for B. vogeli and E. canis, only 8.75% (7/80). Nineteen (17.27%) of the 110 animals sampled were positive for some kind of hemoparasite in PCR. Eleven (10%) were positive for the 18S rRNA gene of Babesia spp., and after genetic sequencing identified the agent R. vitalii in 6 (5.5%) of dogs and B. vogeli in 3 dogs (2.72%) and 2 cats (1.81%). For the 18S rRNA gene Hepatozoon spp. only one dog was positive, as well as only one dogs (0.9%) were positive for 16S rRNA gene of Anaplasma spp. For nuoG gene Bartonella spp., 6 cats (20%) were positive. No sample was positive for dsb and 16S rRNA genes of Ehrlichia spp. In this study we report for the first time in the state of RS the molecular confirmation of B. vogeli in domestic dogs and cats. In addition, agents Hepatozoon spp., Anaplasma spp. and Bartonella spp. had not yet been described in the present study area. Furthermore, we suggest that R. vitalii is one of the most common vector-borne agents in RS.

Serum survey for antibodies to coronavirus, herpesvirus, calicivirus, and parvovirus in domestics cats from Rio Grande do Sul, Brazil / Inquérito sorológico para anticorpos contra coronavírus, herpesvírus, calicivírus e parvovírus em gatos domésticos do Rio Grande do Sul, Brasil

A ocorrência da infecção por coronavírus felino (FCoV), herpesvírus felino tipo 1 (FHV-1), calicivírus felino (FCV) e parvovírus felino (FPV) foi investigada mediante a detecção de anticorpos no soro de 97 gatos domésticos de Pelotas, RS, pelo teste de soro-neutralização. Entre os animais estudados, 51 não eram vacinados, 11 haviam sido vacinados contra FHV-1, FCV e FPV com pelo menos uma dose, e 35 tinham histórico de vacinação desconhecido. Foram detectados anticorpos para o FCoV em 75,2% (73/97) dos gatos. Anticorpos contra o FHV-1 estavam presentes em 38,1% (37/97): 73% (8/11) dos gatos vacinados, 39,2% (20/51) dos não vacinados e 25,7% (9/35) dos gatos com histórico de vacinação desconhecido. Anticorpos para o FCV estavam presentes em 56,7% (55/97): 81,8% (9/11) dos gatos vacinados, 52,9% (27/51) dos não vacinados, e 54,3% (19/35) dos gatos com histórico de vacinação desconhecido. Para o FPV, havia anticorpos em 69,1% (67/97): 100% (11/11) dos vacinados, 66,6% (34/51) dos não vacinados e 62,8% (22/35) dos gatos com histórico de vacinação desconhecido. Os resultados sugerem alta exposição ao FCoV, FHV-1, FCV e FPV na população de gatos na área estudada.(AU)

Tuberculose bovina em animais de abate: um estudo com bovinos abatidos em Uberlândia, MG no período de 1984 a 2004 / Tuberculosis bovine in animals for slaughter: a study of bovine slaughtered in Uberlândia, MG in the period 1984 to 2004

A tuberculose é uma doença infecciosa crônica que ocorre no homem, nas aves, mamíferos domésticos e na maioria dos animais selvagens. É uma das zoonoses de maior impacto para a Saúde Pública e Animal, cujo aumento no número de casos em animais, principalmente bovinos, coloca em maior risco, profissionais cujas atividades estão em constante contato com essa espécie animal. Neste sentido, a melhor maneira de prevenção dessa zoonose é conhecer e monitorar sua ocorrência em pontos considerados de maior relevância, como é o caso de frigoríficos que abatem bovinos sob inspeção. Com base nestes pressupostos é que se realizou a presente pesquisa, com bovinos abatidos em um frigorífico sob Inspeção Federal em Uberlândia, Minas Gerais, durante o período de 1984 a 2004. O objetivo foi estimar a freqüência de ocorrência de tuberculose nestes animais e a distribuição dessa freqüência segundo meses, estações do ano e período de safra e entressafra. A partir de dados fornecidos pelo Serviço de Inspeção Federal foi possível estudar a freqüência e distribuição de tuberculose em 382.945 bovinos abatidos no período de estudo, estimando- se uma freqüência geral de tuberculose igual a 0,20%, sendo o mês de outubro, primavera e entressafra as variáveis que apresentaram maiores freqüências, com 0,26%, 0,24% e 0,22% respectivamente. Estesresultados confirmam a importância da tuberculose em frigorífico de abate de bovinos e aponta paravariáveis de maior risco e, portanto, merecem ser levados em consideração em programas preventivosvoltados a profissionais com atividades semelhantes. (AU)

Tuberculosis is a cronic infection disease that happen in the human being in poultry, domestics mammiferous and in the majority of savage animals, caused by Mycobacterium tuberculosis. The objectives of the present study are to determine the tuberculosis prevalence in slaughtered bovines in a slaughterhouse under Federal Inspection in Uberlandia MC, during the from 1984 until 2004; to verify the month that the disease shows major prevalence; to determine the distribution of bovine tuberculosis during the period of crop and intercrop. Datas were utilized furnished by Federal Inspection Service of the slaughterhouse of Uberlandia, MG. The slaughtered animals come from of the municipal districts of South Goias and Triangulo Mineiro. It was found a prevalence of 0,20% in the analised time. The month of the year with major prevalence was October. The station of the year with a tuberculosis percentage more elevated was sprim with 0,24%. In the period of intercrop, the tuberculosis showed more elevated distribution of 0,22%. (AU)

Organização social e comportamento reprodutivo de uma população de pôneis da raça brasileira / Social organization and reproductive behavior of the population from Brazilian pony breed

Aspectos relacionados com a organização social e seus reflexos no comportamento reprodutivo de garanhões submetidos a coberturas em sistemas de manadas, não têm sido estudados nas populações domesticadas. Este estudo foi conduzido com os seguintes objetivos: identificar as unidades sociais estabelecidas num grupo de garanhões e de éguas; verificar os fatores envolvidos na estabilidade, na repetibilidade e na composição dos haréns; verificar o efeito do garanhão na atividade de cobertura; estabelecer relações entre os níveis plasmáticos de testosterona e a condição sócio-sexual dos reprodutores; verificar a existência de atividade sexual noturna. Foi realizado em duas estações de monta (Ano I ¿ 2001/02; Ano II ¿ 2002/2003). No primeiro ano, os animais foram acompanhados diariamente durante um período de 12 dias, totalizando 117,02 horas de observação. A duração média dos períodos diários de observação diurna foi de 8,1horas. No segundo ano, os animais foram acompanhados em três períodos de observação (1, 2 e 3) com intervalos de 21 dias entre eles. A duração média dos períodos de observação diários foi de 9,6h e o tempo total foi igual a 203,51h. No Ano I, foram utilizados quatro garanhões com idades iguais a 3, 5 e mais de 12 anos e um grupo de 46 éguas solteiras, com idades entre 3 e 20 anos. No segundo, observaram-se quatro garanhões com 3, 6 e com mais de 12 anos e um grupo de 40 éguas solteiras, com idades entre 3 e mais de 12 anos. As unidades sociais identificadas foram do tipo harém e grupo de solteiros. Os reprodutores com três anos de idade não formaram haréns. Estabeleceram-se relações hierárquicas entre os garanhões e dentro dos haréns. A dominância, a capacidade de luta, os níveis de testosterona e a idade dos garanhões parecem ter influenciado no tamanho e na manutenção dos haréns. Foi constatada estabilidade em sua composição e esta dependeu do status reprodutivo das fêmeas, da dominância do garanhão no grupo e do tamanho do potreiro de observação. Não foi verificada repetibilidade na composição dos haréns. Todos os garanhões tiveram os seus níveis plasmáticos médios de testosterona aumentados, em média, 77,6%, quando foram expostos às éguas e quando formaram haréns (85,6%), embora os do grupo de solteiros tivessem os níveis mais baixos. O total de coberturas observadas no Ano I foi 28. As éguas foram cobertas em média, 1,86 vez, e o número médio de coberturas diárias foi 1,17. O número médio de éguas cobertas /dia foi igual a 1,08. O número médio de éguas receptivas, diariamente, foi igual a 8,5. O tempo médio de duração das coberturas foi igual a 38,4 segundos e o intervalo médio diário entre as mesmas foi de 79,75 minutos. No Ano II, os garanhões realizaram um total de 134 coberturas. As éguas foram cobertas, em média, 2,21 vezes. O número médio de coberturas diário foi 2,1. O número médio de éguas receptivas, diariamente, foi 20,7. O número médio de éguas cobertas/ dia foi 1,78. O tempo médio de duração das coberturas foi igual a 37 segundos e o intervalo médio diário entre as mesmas foi de 104,1minutos. Nos dois anos de estudo foi verificada atividade sexual noturna. O índice geral de prenhez no Ano I foi 79,4% e, no segundo, foi 72,25%

Aspects related of social organization and its effects on the reproductive behavior of domestics stallions breeding under free range management systems, not have been studied. This study was carried out with the following objectives: to identify the social unities established between stallions and mares; to verify the factors involved in the stability, repeatability and in the composition of harems; to verify the effect of the stallion in the mating activity; to establish the relationship between the plasmatic levels of testosterone and the social-sexual condition of the stallion; to verify the existence of night sexual activity. This study was carried out in two mating seasons (Year I ¿ 2001/02; Year II ¿ 2002/03). In the first year, the animals were accompanied daily during a period of 12 days, totalizing 117.02 hours. The average duration of daily periods of day observation was 8.1 hours. In the second year, the animals were accompanied in three periods of observation (1, 2 and 3) with intervals of 21 days between them. The average duration of daily periods of observation was 9.6h and the total observation time was equal to 203.51h. In each interval of periods of observation, the social unities were disrupted and the mares were separated. In Year I four stallions were used, with ages of 3, 5 and more than 12 years and a group of 46 no lactates mares from the same breed, with ages varying from 3 to 20 years. In the second year, four stallions were observed, with 3, 6 and more than 12 years of age, and a group of 40 no lactates mares, with ages varying from 3 to more than 12 years of age. The social unities identified in the two years of observation were of the harem and the bachelor group type. The stallions with three years of age did not form harem. Hierarchic relationships among stallions and within harems were established. The dominance, the fight capacity, the aggressive behavior, the testosterone levels and the age of the stallions seem to influence the size and the maintenance of the harems. The stability in the composition of harems was observed, and the factors identified in this process were the reproductive status of females, the dominance of the stallions over the group and the size of the observation field. Repeatability in the composition of the harems was not verified. All stallions had their mean testosterone plasmatic levels increased, in average 77.6%, when were exposed to the mares, and when they formed harems (average of 85.6%). The mating activity of the stallions varied individually. The total mating observed in the 12 days from Year I was 28. The mares were mated in average 1.86 times, and the mean number of daily mating was 1.17. The mean number of mares mated per day was 1.08. The mean number of receptive mares, daily, was 8.5. The average of time during the matings was of 38.4 seconds and mean daily interval between matings was 79.75 minutes. In the second year of observation, the stallions performed a total of 134 matings. Considering the three periods of observation, the mares were mated, in average, 2.21 times. The mean number of daily matings was 2.1. The average number of receptive mares, daily, was 20.7. The average number of mated mares per day was 1.78. The average duration time of the matings was 37.0 seconds and the mean daily interval between matings was 104.1 minutes. In the two years of the study, the existence of sexual activity at night was verified. In the first year, the general pregnancy index was 79.4%. In the second year, the general index was 72.25%