Heterozygosity as a factor of increasing the meat productivity of kalmyk steers / Heterozigosidade como fator de aumento da produtividade da carne de bois kalmyk

The present work carried out full-genome SNP genotyping of 16-month-old Kalmyk steers to study their productive characteristics and beef quality indicators in the leading farms of the Republic of Kalmykia (Group I was located at the Agrofirma Aduchi farm; Group II at the Kirovsky breeding plant, and Group III at the Plodovitoye agricultural cooperative). As a result of investigating the frequencies of some homozygous alleles, the study established that the heterozygous allele A/A varied considerably along the lines from 0.2785 to 0.3146, while B/B varied from 0.3697 to 0.4125. Meanwhile, the heterozygous allele A/B varied from 0.2986 to 0.3197. Estimated inbreeding coefficients were 1.35, 1.28 and 1.27%. The conducted studies established a higher natural resistance determined by lysozyme, bactericidal and phagocytic activities of steers raised at the Agrofirma Aduchi as farm than their counterparts at the other agricultural enterprises. Over the entire period of the experiment, the steers from 8 to 16 months of age in Group I exceeded the indices of their counterparts in Groups II and III by 30.46g, or 3.31% and 38.04g, or 4.16%, respectively. It is concluded that an increase in the heterozygosity of the studied Kalmyk steers not only results in higher meat productivity, but also improves the quality of carcass and beef quality, increases the yield of more valuable meat grades, and optimizes the fractional composition of proteins.

O presente trabalho realizou a genotipagem de bois Kalmyk de 16 meses de idade para estudar suas características produtivas e indicadores de qualidade da carne bovina nas principais fazendas da República de Kalmykia (o Grupo I estava localizado na fazenda Agrofirma Aduchi; Grupo II - na planta de criação Kirovsky; Grupo III - na cooperativa agrícola Plodovitoye). Como resultado da investigação das freqüências de alguns alelos homozigotos, o estudo estabeleceu que o alelo heterozigotos A/A variou consideravelmente de 0,2785 a 0,3146, enquanto o B/B variou de 0,3697 a 0,4125. Enquanto isso, o alelo heterozigoto A/B variou de 0,2986 a 0,3197. Os coeficientes estimados de consanguinidade foram de 1,35, 1,28 e 1,27%. Os estudos realizados estabeleceram uma maior resistência natural determinada pelas atividades lisozóides, bactericidas e fagocitárias dos bois criados na Agrofirma Aduchi como fazenda do que suas contrapartes nas outras empresas agrícolas. Durante todo o período do experimento, os bois de 8 a 16 meses de idade no Grupo I excederam os índices de suas contrapartes nos Grupos II e III em 30,46g, ou 3,31% e 38,04g, ou 4,16%, respectivamente. Conclui-se que um aumento na heterozigosidade dos bois Kalmyk estudados não só resulta em maior produtividade da carne, mas também melhora a qualidade da carcaça e da carne bovina, aumenta o rendimento das carnes de maior valor e otimiza a composição fracionária das proteínas.

Genetic diversity of Tambaqui (Teleostei - Characidae) broodstocks from Northern region of Brazil using microsatellite markers / Diversidade genética de estoque de Tambaqui (Teleostei - Characidae) da região Norte do Brasil usando marcadores microssatélites

The Amazonian fish Tambaqui (Colossoma macropomum) is the most common native species in Brazil. This species has the highest production rate in the Northern region, especially in the State of Rondônia. The genetic evaluation of Tambaqui is an extremely important to increase productivity in fish farms or improve the adaptability in restocking natural populations. The objective of this study was to evaluate the genetic diversity of three Tambaqui broodstocks in Rondônia, Brazil. Six microsatellite markers were used to analyze a total of 89 breeders collected from three fish farms located in Ji-Paraná (JP), Ouro Preto do Oeste (OP) and Presidente Médici (PM). A total of 37 alleles between 140 and 310 bp were found, including the presence of exclusive and low frequency alleles in the three broodstocks. The average values of observed heterozygosity ranged from 0.404 (PM) to 0.499 (JP). The FIS coefficient values were positive for the three broodstocks, demonstrating a deficit of heterozygotes. The Molecular Variance Analysis (AMOVA) showed greater variation within the stocks than between them. The genetic differentiation was moderate and significant between the stocks, with higher differentiation between JP x PM and lower between OP x PM. The Bayesian analysis designated an optimal value of K=3 groupings. Although there is moderate genetic diversity between broodstocks, the high FIS indicates a possible decline of diversity in the next generations, and therefore, the incorporation of new breeders is suggested to increase the genetic diversity in the three stocks.

O peixe amazônico Tambaqui (Colossoma macropomum) é a espécie nativa mais produzida no Brasil. Esta espécie é a mais criada na região Norte, principalmente no Estado de Rondônia. A avaliação genética de Tambaqui é extremamente importante para aumentar a produtividade nas pisciculturas ou melhorar a adaptabilidade no repovoamento de populações naturais. O objetivo deste estudo foi avaliar a diversidade genética de três estoques de Tambaqui em Rondônia, Brasil. Seis marcadores microssatélites foram utilizados para analisar um total de 89 reprodutores coletados em três pisciculturas localizadas em Ji-Paraná (JP), Ouro Preto do Oeste (OP) e Presidente Médici (PM). Foram encontrados 37 alelos entre 140 e 310 pb, incluindo a presença de alelos exclusivos e de baixa frequência nas três ninhadas. Os valores médios de heterozigosidade observada variaram de 0,404 (PM) a 0,499 (JP). Os valores do coeficiente de FIS foram positivos para as três ninhadas, demonstrando déficit de heterozigotos. A Análise de Variância Molecular (AMOVA) mostrou maior variação dentro dos estoques do que entre eles. A diferenciação genética foi moderada e significativa entre os estoques, com maior diferenciação entre JPxPM e menor entre OP x PM. A análise bayesiana designou um valor ótimo de K = 3 agrupamentos. Embora exista uma diversidade genética moderada entre os filhotes, o alto SIF indica um possível declínio da diversidade nas próximas gerações e, portanto, sugere-se a incorporação de novos criadores para aumentar a diversidade genética nos três estoques.

Genetic diversity of Tambaqui (Teleostei - Characidae) broodstocks from Northern region of Brazil using microsatellite markers / Diversidade genética de estoque de Tambaqui (Teleostei - Characidae) da região Norte do Brasil usando marcadores microssatélites

The Amazonian fish Tambaqui (Colossoma macropomum) is the most common native species in Brazil. This species has the highest production rate in the Northern region, especially in the State of Rondônia. The genetic evaluation of Tambaqui is an extremely important to increase productivity in fish farms or improve the adaptability in restocking natural populations. The objective of this study was to evaluate the genetic diversity of three Tambaqui broodstocks in Rondônia, Brazil. Six microsatellite markers were used to analyze a total of 89 breeders collected from three fish farms located in Ji-Paraná (JP), Ouro Preto do Oeste (OP) and Presidente Médici (PM). A total of 37 alleles between 140 and 310 bp were found, including the presence of exclusive and low frequency alleles in the three broodstocks. The average values of observed heterozygosity ranged from 0.404 (PM) to 0.499 (JP). The FIS coefficient values were positive for the three broodstocks, demonstrating a deficit of heterozygotes. The Molecular Variance Analysis (AMOVA) showed greater variation within the stocks than between them. The genetic differentiation was moderate and significant between the stocks, with higher differentiation between JP x PM and lower between OP x PM. The Bayesian analysis designated an optimal value of K=3 groupings. Although there is moderate genetic diversity between broodstocks, the high FIS indicates a possible decline of diversity in the next generations, and therefore, the incorporation of new breeders is suggested to increase the genetic diversity in the three stocks.(AU)

O peixe amazônico Tambaqui (Colossoma macropomum) é a espécie nativa mais produzida no Brasil. Esta espécie é a mais criada na região Norte, principalmente no Estado de Rondônia. A avaliação genética de Tambaqui é extremamente importante para aumentar a produtividade nas pisciculturas ou melhorar a adaptabilidade no repovoamento de populações naturais. O objetivo deste estudo foi avaliar a diversidade genética de três estoques de Tambaqui em Rondônia, Brasil. Seis marcadores microssatélites foram utilizados para analisar um total de 89 reprodutores coletados em três pisciculturas localizadas em Ji-Paraná (JP), Ouro Preto do Oeste (OP) e Presidente Médici (PM). Foram encontrados 37 alelos entre 140 e 310 pb, incluindo a presença de alelos exclusivos e de baixa frequência nas três ninhadas. Os valores médios de heterozigosidade observada variaram de 0,404 (PM) a 0,499 (JP). Os valores do coeficiente de FIS foram positivos para as três ninhadas, demonstrando déficit de heterozigotos. A Análise de Variância Molecular (AMOVA) mostrou maior variação dentro dos estoques do que entre eles. A diferenciação genética foi moderada e significativa entre os estoques, com maior diferenciação entre JPxPM e menor entre OP x PM. A análise bayesiana designou um valor ótimo de K = 3 agrupamentos. Embora exista uma diversidade genética moderada entre os filhotes, o alto SIF indica um possível declínio da diversidade nas próximas gerações e, portanto, sugere-se a incorporação de novos criadores para aumentar a diversidade genética nos três estoques.(AU)

Genetic diversity of migratory fish populations of the Rio Grande Reservoir (São Paulo, Brazil) / Diversidade genética de populações de peixes migratórios do reservatório do Rio Grande (São Paulo, Brasil)

In recent years, anthropogenic factors such as pollution, overfishing, and construction of hydroelectric plants have significantly impacted natural fish populations. Research focusing on genetically evaluation of these impacts is necessary to objectively target conservation programs. The aim of this study was to evaluate the genetic diversity of Curimba (Prochilodus lineatus), Pacu (Piaractus mesopotamicus), and Piracanjuba (Brycon orbignyanus) populations from the Água Vermelha Reservoir, Rio Grande-SP. Microsatellite loci were amplified, producing 56, 24, and 26 alleles for the populations of the three species, respectively. The number of alleles per locus ranged from three to ten for P. lineatus, two to five for P. mesopotamicus, and two to four for B. orbignyanus. The observed heterozygosity (Ho) was higher in the P. lineatus population (0.547), relative to the P. mesopotamicus and B. orbignyanus populations (0.473 and 0.527, respectively). The mean values of Ho were lower than the average expected heterozygosity (He) in the three species, being corroborated by the positive inbreeding coefficient (Fis). Deviations from the Hardy-Weinberg equilibrium (HWE) were found in five, three, and two loci for P. lineatus, P. mesopotamicus, and B. orbignyanus, respectively. Wilcoxon tests revealed recent bottlenecks in the three species, evidenced by a significant excess of heterozygotes (p < 0.05) detected only in the Infinite Allele Model (IAM). In conclusion, adequate genetic variability was observed in the three populations with the presence of heterozygous deficits.(AU)

Nos últimos anos, fatores antrópicos como poluição, sobrepesca e construção de hidrelétricas têm impactado significativamente as populações naturais de peixes. Pesquisas que permitam avaliar geneticamente esse impacto são necessárias para orientar objetivamente programas de conservação. O objetivo do presente estudo foi avaliar a diversidade genética de populações de Curimba (Prochilodus lineatus), Pacu (Piaractus mesopotamicus) e Piracanjuba (Brycon orbignyanus) provenientes do reservatório de Água Vermelha, Rio Grande-SP. Foram amplificados loci microssatélites que produziram 56, 24 e 26 alelos para as populações das três espécies, respectivamente. O número de alelos por locus variou de três a dez para P. lineatus, dois a cinco para P. mesopotamicus e dois a quatro para B. orbignianus. A heterozigosidade observada (Ho) foi mais elevada na população de P. lineatus (0,547) em relação às populações de P. mesopotamicus e B. orbignyanus (0,473 e 0,527, respectivamente). A média dos valores de Ho foram inferiores à média de He nas três espécies sendo corroborado pelo Fis positivo observado. Foi encontrado desvio do equilíbrio de Hardy-Weinberg (HWE) em cinco loci para P. lineatus, três loci para P. mesopotamicus e dois em B. orbignyanus. A análise de bottleneck revelou excesso de heterozigotos (p<0,05) pelo teste de Wilcoxon nas três espécies apenas no modelo Infinite Allele Model (IAM). Foi observada adequada variabilidade genética nas três populações com a presença de déficit de heterozigotos.(AU)

The liver injury following ischemia and reperfusion is worse in experimental knockout heterozygote mouse model for expression of connexin 43

Purpose:To evaluate that Connexin (Cx43) plays a role in lesions after hepatic ischemia/reperfusion (IR) injury.Methods:We use Cx43 deficient model (heterozygotes mice) and compared to a wild group. The groups underwent 1 hour ischemia and 24 hours reperfusion. The heterozygote genotype was confirmed by PCR. We analyzed the hepatic enzymes (AST, ALT, GGT) and histology.Results:The mice with Cx43 deficiency showed an ALT mean value of 4166 vs. 307 in the control group (p<0.001); AST mean value of 7231 vs. 471 in the control group (p<0.001); GGT mean value of 9.4 vs. 1.7 in the control group (p=0.001); histology showed necrosis and inflammation in the knockout group.Conclusions:This research demonstrated that the deficiency of Cx43 worses the prognosis for liver injury. The topic is a promising target for therapeutics advancements in liver diseases and procedures.(AU)

Genetic variability in a population of Astyanax scabripinnis: recent bottleneck and the possible influence of individuals with B chromosomes

Access the genetic variability of endangered and isolated populations has become an important conservation tool. Astyanax scabripinnis is a well-known fish model for genetic studies, forming very isolated populations in headwaters. Besides that, this species frequently presents supernumerary chromosomes, which elevates the interest on genetic studies. Genetic diversity of an Astyanax scabripinnispopulation from the Atlantic Forest (Serra da Mantiqueira region, Brazil) was assessed with microsatellite markers for the first time. Since microsatellite markers are not described for this species, we tested markers described for a related species for transferability to A. scabripinnis. Six polymorphic loci were sufficiently reliable for population genetic analysis. We found that this population passed through a recent bottleneck because of the presence of an excess of heterozygotes, low allelic diversity, heterozygosity excess, and small effective population size. Individuals with and without B chromosomes were previously identified in this population and our study found private alleles in the individuals without B chromosomes. Furthermore, when individuals without B chromosomes were removed from the analysis, the population did not present heterozygosity excess, suggesting that the bottleneck event was driven by individuals with B chromosomes. Our results provide an insight into the value of microsatellite markers as molecular tools and is the first genetic study using molecular data of A. scabripinnis from this area.

Variabilidade genética de larvas e alevinos de piracanjuba (Brycon orbignyanus) / Genetic variability of larvae and fingerlings of Piracanjuba (Brycon orbignyanus)

O objetivo do presente trabalho foi avaliar a variabilidade genética de larvas e alevinos de piracanjuba em programa de repovoamento. Foram coletadas 180 larvas de piracanjuba de três dias e 90 alevinos de três meses de idade. Foram avaliados cinco loci microssatélites, os quais produziram 19 alelos. Não houve presença de alelos raros nem perdas de alelos ao longo do período. A heterozigosidade observada foi superior nas larvas em relação aos alevinos. Houve desvio no equilíbrio de Hardy-Weinberg na maioria dos loci em ambos os grupos. O coeficiente de endogamia foi positivo em ambos os grupos, sendo a média dos alevinos superior em relação às larvas. O excesso de heterozigotos foi significativo no modelo Stepwise Mutation Model para os alevinos, indicando a possibilidade de efeito gargalo recente. Conclui-se que, apesar da adequada variabilidade genética encontrada, os valores do coeficiente de endogamia e a possibilidade de efeito gargalo nos alevinos atentam para a necessidade de constante monitoramento genético desses estoques antes da liberação no ambiente.(AU)

The objective of this study was to evaluate the genetic variability of Piracanjuba larvae and fingerlings in restocking program. A total of 180 three-day Piracanjuba larvae and 90 three-month-old fish were sampled. Five microsatellite loci were evaluated, which produced 19 alleles. There were no rare alleles or loss of alleles over the period. The observed heterozygosity was higher in larvae compared to fingerlings. There was a deviation in Hardy-Weinberg equilibrium in most loci in both groups. The inbreeding coefficient was positive in both groups, with the average of the fingerlings superior to the larvae. The excess heterozygotes were significant in the Stepwise Mutation Model for the fingerlings, indicating the possibility of a recent bottleneck effect. Despite the adequate genetic variability found, the values of the inbreeding coefficient and the possibility of bottleneck effect in the fingerlings show the need for constant genetic monitoring of these stocks prior to release into the environment.(AU)

Variabilidade genética de larvas e alevinos de piracanjuba (Brycon orbignyanus) / Genetic variability of larvae and fingerlings of Piracanjuba (Brycon orbignyanus)

O objetivo do presente trabalho foi avaliar a variabilidade genética de larvas e alevinos de piracanjuba em programa de repovoamento. Foram coletadas 180 larvas de piracanjuba de três dias e 90 alevinos de três meses de idade. Foram avaliados cinco loci microssatélites, os quais produziram 19 alelos. Não houve presença de alelos raros nem perdas de alelos ao longo do período. A heterozigosidade observada foi superior nas larvas em relação aos alevinos. Houve desvio no equilíbrio de Hardy-Weinberg na maioria dos loci em ambos os grupos. O coeficiente de endogamia foi positivo em ambos os grupos, sendo a média dos alevinos superior em relação às larvas. O excesso de heterozigotos foi significativo no modelo Stepwise Mutation Model para os alevinos, indicando a possibilidade de efeito gargalo recente. Conclui-se que, apesar da adequada variabilidade genética encontrada, os valores do coeficiente de endogamia e a possibilidade de efeito gargalo nos alevinos atentam para a necessidade de constante monitoramento genético desses estoques antes da liberação no ambiente.(AU)

The objective of this study was to evaluate the genetic variability of Piracanjuba larvae and fingerlings in restocking program. A total of 180 three-day Piracanjuba larvae and 90 three-month-old fish were sampled. Five microsatellite loci were evaluated, which produced 19 alleles. There were no rare alleles or loss of alleles over the period. The observed heterozygosity was higher in larvae compared to fingerlings. There was a deviation in Hardy-Weinberg equilibrium in most loci in both groups. The inbreeding coefficient was positive in both groups, with the average of the fingerlings superior to the larvae. The excess heterozygotes were significant in the Stepwise Mutation Model for the fingerlings, indicating the possibility of a recent bottleneck effect. Despite the adequate genetic variability found, the values of the inbreeding coefficient and the possibility of bottleneck effect in the fingerlings show the need for constant genetic monitoring of these stocks prior to release into the environment.(AU)

Mechanisms regulating follicle selection in ruminants: lessons learned from multiple ovulation models

Selection of a single dominant follicle from a cohort of growing follicles is a unique biological process, a key step in female reproductive function in monovular species, and lies at the core of reproductive technologies in cattle. Follicle growth and the number of follicles that ovulate are regulated by precise endocrine, paracrine, and autocrine mechanisms. Most of our current understanding about follicle selection focuses on the role of FSH, LH, and the IGF family in follicle growth and selection of the dominant follicle. However, more recently the role of members of the TGF-ß family has been highlighted, particularly in high fecundity genotypes in sheep. Intercellular signaling between the oocyte and granulosa cells (GC) regulates proliferation and differentiation due to actions of bone morphogenetic protein 15 (BMP15) and growth and differentiation factor 9 (GDF9) within the follicle. Mutations that either knockout or reduce the activity of BMP15 or GDF9 have been found to increase ovulation rate in heterozygotes and generally cause severe follicle abnormalities in homozygotes. A mutation in the intracellular kinase domain of the BMPR1B receptor (Booroola fecundity gene) increases ovulation rate in heterozygotes with further increases in ovulation in homozygotes. The physiological mechanisms linking these mutations to increased ovulation rates are still not well defined. A recently identified high fecundity bovine genotype, Trio, causes increased expression of SMAD6, an intracellular inhibitor of the BMP15/GDF9 signalling pathways. This bovine model has provided insights into the mechanisms associated with selection of multiple dominant follicles and multiple ovulations in carriers of fecundity alleles. The present review focuses on the mechanisms involved in follicle selection in ruminants with a special emphasis on the contribution made by multiple ovulation models in both cattle and sheep. The evaluation of multiple ovulation models in ruminants has allowed us to construct a new physiological model that relates changes in the BMP15/GDF9 signalling pathways to the physiological changes that result in selection of multiple dominant follicles. This model is characterized by acquisition of dominance at a smaller follicle size but at a similar time in the follicular wave with multiple follicles acquiring dominance in a hierarchal sequence, delaying FSH suppression and, thus allowing additional follicles to continue to grow and acquire dominance.(AU)

Mechanisms regulating follicle selection in ruminants: lessons learned from multiple ovulation models

Selection of a single dominant follicle from a cohort of growing follicles is a unique biological process, a key step in female reproductive function in monovular species, and lies at the core of reproductive technologies in cattle. Follicle growth and the number of follicles that ovulate are regulated by precise endocrine, paracrine, and autocrine mechanisms. Most of our current understanding about follicle selection focuses on the role of FSH, LH, and the IGF family in follicle growth and selection of the dominant follicle. However, more recently the role of members of the TGF-ß family has been highlighted, particularly in high fecundity genotypes in sheep. Intercellular signaling between the oocyte and granulosa cells (GC) regulates proliferation and differentiation due to actions of bone morphogenetic protein 15 (BMP15) and growth and differentiation factor 9 (GDF9) within the follicle. Mutations that either knockout or reduce the activity of BMP15 or GDF9 have been found to increase ovulation rate in heterozygotes and generally cause severe follicle abnormalities in homozygotes. A mutation in the intracellular kinase domain of the BMPR1B receptor (Booroola fecundity gene) increases ovulation rate in heterozygotes with further increases in ovulation in homozygotes. The physiological mechanisms linking these mutations to increased ovulation rates are still not well defined. A recently identified high fecundity bovine genotype, Trio, causes increased expression of SMAD6, an intracellular inhibitor of the BMP15/GDF9 signalling pathways. This bovine model has provided insights into the mechanisms associated with selection of multiple dominant follicles and multiple ovulations in carriers of fecundity alleles. The present review focuses on the mechanisms involved in follicle selection in ruminants with a special emphasis on the contribution made by multiple ovulation models in both cattle and sheep. The evaluation of multiple ovulation models in ruminants has allowed us to construct a new physiological model that relates changes in the BMP15/GDF9 signalling pathways to the physiological changes that result in selection of multiple dominant follicles. This model is characterized by acquisition of dominance at a smaller follicle size but at a similar time in the follicular wave with multiple follicles acquiring dominance in a hierarchal sequence, delaying FSH suppression and, thus allowing additional follicles to continue to grow and acquire dominance.

Genetic diversity of tambaqui broodstocks in stock enhancement programs / Diversidade genética de estoques de reprodutores de tambaqui utilizados em programas de repovoamento

Natural populations of tambaqui (Colossoma macropomum) have significantly decreased in recent decades especially due to human extraction activities. So that the environmental impact may be reduced, the restocking of fish and increase in fish production are enhanced. Genetic evaluations using molecular markers are essential for this purpose. Current study evaluates the genetic variability of two tambaqui broodstocks used in restocking programs. Sixty-five samples (33 samples from broodstock A and 32 samples from broodstock B) were collected. DNA was extracted from caudal fin samples, with the amplification of four microsatellite loci: Cm1A11 (EU685307) Cm1C8 (EU685308) Cm1F4 (EU685311) and Cm1H8 (EU685315). Fourteen alleles in the stock of broodstock A were produced, five alleles for Cm1A11 locus (230, 255, 260, 270 and 276 bp), three alleles Cm1C8 (239, 260, and 273 bp), two alleles Cm1F4 (211 and 245 bp), four alleles for Cm1H8 (275, 290, 320 and 331 bp) and two unique alleles were found for Cm1A11 loci (alleles 270 and 276 bp) and Cm1H8 (alleles 275 and 331 bp). In broodstock B, ten alleles were produced, the same alleles of the first stock except for alleles 270 and 276 bp in Cm1A11 locus and 275 and 331 bp in Cm1H8 locus. Broodstock A revealed low frequency alleles in Cm1A11 loci, Cm1C8, Cm1F4 and Cm1H8, whereas broodstock B had no locus with low allelic frequency. Loci Cm1A11, Cm1C8 and Cm1H8 exhibited significant deficit of heterozygotes in both broodstocks, revealing changes in Hardy-Weinberg equilibrium. Genetic diversity between stocks was 0.1120, whilst genetic similarity was 0.894, with FST rate = 0.05, and Nm = 3.93, indicating gene flow between the two broodstocks. Results show that broodstocks are genetically closely related, with no great genetic variability...(AU)

A população natural do tambaqui (Colossoma macropomum) está reduzindo significativamente nas últimas décadas devido às ações antrópicas, como o extrativismo. Para diminuir este impacto ambiental, o repovoamento de peixes e aumento da produção piscícola estão sendo realizados. Para tanto, avaliações genéticas por meio de marcadores moleculares são fundamentais. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a variabilidade genética de dois estoques de reprodutores de tambaqui utilizados em programas de repovoamento. Foram coletadas 65 amostras (33 amostras do estoque A e 32 amostras do estoque B). O DNA foi extraído de amostras da nadadeira caudal, com a amplificação de quatro loci microssatélite: Cm1A11 (EU685307), Cm1C8 (EU685308), Cm1F4 (EU685311) e Cm1H8 (EU685315). Foram produzidos 14 alelos no estoque de reprodutores A, cinco alelos para o locus Cm1A11 (230, 255, 260, 270 e 276 pb), três alelos para Cm1C8 (239, 260 e 273 pb), dois alelos para Cm1F4 (211 e 245 pb), quatro alelos para Cm1H8 (275, 290, 320 e 331 pb) e dois alelos exclusivos foram encontrados para os loci Cm1A11 (alelos 270 e 276 pb) e Cm1H8 (alelos 275 e 331 pb). Para o estoque de reprodutores B foram produzidos 10 alelos, os mesmos alelos do primeiro estoque, exceto para os alelos 270 e 276 pb no locus Cm1A11 e 275 e 331 pb no locus Cm1H8. No estoque de reprodutores A foi observado alelos de baixa frequência nos loci Cm1A11, Cm1C8, Cm1F4 e Cm1H8. Já o estoque de reprodutores B não apresentou locus com baixa frequência alélica. Os loci Cm1A11, Cm1C8 e Cm1H8 exibiram significativo défict de heterozigotos em ambos os estoques de reprodutores, indicando alteração no equilíbrio de Hardy-Weinberg. A divergência genética foi de 0,1120 entre os estoques, enquanto a similaridade genética foi de 0,894, com o valor de FST igual a 0,05, e o Nm igual a 3,93 indicando fluxo gênico entre os dois estoques de reprodutores...(AU)

Genetic diversity of tambaqui broodstocks in stock enhancement programs / Diversidade genética de estoques de reprodutores de tambaqui utilizados em programas de repovoamento

Natural populations of tambaqui (Colossoma macropomum) have significantly decreased in recent decades especially due to human extraction activities. So that the environmental impact may be reduced, the restocking of fish and increase in fish production are enhanced. Genetic evaluations using molecular markers are essential for this purpose. Current study evaluates the genetic variability of two tambaqui broodstocks used in restocking programs. Sixty-five samples (33 samples from broodstock A and 32 samples from broodstock B) were collected. DNA was extracted from caudal fin samples, with the amplification of four microsatellite loci: Cm1A11 (EU685307) Cm1C8 (EU685308) Cm1F4 (EU685311) and Cm1H8 (EU685315). Fourteen alleles in the stock of broodstock A were produced, five alleles for Cm1A11 locus (230, 255, 260, 270 and 276 bp), three alleles Cm1C8 (239, 260, and 273 bp), two alleles Cm1F4 (211 and 245 bp), four alleles for Cm1H8 (275, 290, 320 and 331 bp) and two unique alleles were found for Cm1A11 loci (alleles 270 and 276 bp) and Cm1H8 (alleles 275 and 331 bp). In broodstock B, ten alleles were produced, the same alleles of the first stock except for alleles 270 and 276 bp in Cm1A11 locus and 275 and 331 bp in Cm1H8 locus. Broodstock A revealed low frequency alleles in Cm1A11 loci, Cm1C8, Cm1F4 and Cm1H8, whereas broodstock B had no locus with low allelic frequency. Loci Cm1A11, Cm1C8 and Cm1H8 exhibited significant deficit of heterozygotes in both broodstocks, revealing changes in Hardy-Weinberg equilibrium. Genetic diversity between stocks was 0.1120, whilst genetic similarity was 0.894, with FST rate = 0.05, and Nm = 3.93, indicating gene flow between the two broodstocks. Results show that broodstocks are genetically closely related, with no great genetic variability...

A população natural do tambaqui (Colossoma macropomum) está reduzindo significativamente nas últimas décadas devido às ações antrópicas, como o extrativismo. Para diminuir este impacto ambiental, o repovoamento de peixes e aumento da produção piscícola estão sendo realizados. Para tanto, avaliações genéticas por meio de marcadores moleculares são fundamentais. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a variabilidade genética de dois estoques de reprodutores de tambaqui utilizados em programas de repovoamento. Foram coletadas 65 amostras (33 amostras do estoque A e 32 amostras do estoque B). O DNA foi extraído de amostras da nadadeira caudal, com a amplificação de quatro loci microssatélite: Cm1A11 (EU685307), Cm1C8 (EU685308), Cm1F4 (EU685311) e Cm1H8 (EU685315). Foram produzidos 14 alelos no estoque de reprodutores A, cinco alelos para o locus Cm1A11 (230, 255, 260, 270 e 276 pb), três alelos para Cm1C8 (239, 260 e 273 pb), dois alelos para Cm1F4 (211 e 245 pb), quatro alelos para Cm1H8 (275, 290, 320 e 331 pb) e dois alelos exclusivos foram encontrados para os loci Cm1A11 (alelos 270 e 276 pb) e Cm1H8 (alelos 275 e 331 pb). Para o estoque de reprodutores B foram produzidos 10 alelos, os mesmos alelos do primeiro estoque, exceto para os alelos 270 e 276 pb no locus Cm1A11 e 275 e 331 pb no locus Cm1H8. No estoque de reprodutores A foi observado alelos de baixa frequência nos loci Cm1A11, Cm1C8, Cm1F4 e Cm1H8. Já o estoque de reprodutores B não apresentou locus com baixa frequência alélica. Os loci Cm1A11, Cm1C8 e Cm1H8 exibiram significativo défict de heterozigotos em ambos os estoques de reprodutores, indicando alteração no equilíbrio de Hardy-Weinberg. A divergência genética foi de 0,1120 entre os estoques, enquanto a similaridade genética foi de 0,894, com o valor de FST igual a 0,05, e o Nm igual a 3,93 indicando fluxo gênico entre os dois estoques de reprodutores...

Acidúria L2-hidroxiglutárica: circulação do gene em cães da raça Staffordshire Bull Terrier no Brasil em 2008-2015 / L2-hydroxyglutaric aciduria: circulation of the gene in Staffordshire Bull Terrier dogs in Brazil (2008-2015)

O objetivo do trabalho foi identificar a presença no Brasil do gene mutante L2HGDH em cães da raça Staffordshire Bull Terrier (SBT). Para tanto foi feito o teste genético em 76 cães provenientes de diferentes regiões do Brasil, no período de 2008 a 2015, sendo encontrados 55 animais (72,37%) livres do gene mutante L2-HGDH ou homozigotos dominantes, e 21(27,63%) portadores do gene mutante ou heterozigotos. Não foi encontrado nenhum animal homozigoto recessivo (afetado), porém pode-se observar que o gene circula no Brasil e que cães afetados podem aparecer.(AU)

The aim of this study was to identify the presence of a mutation in the L2-hydroxyglutarate dehydrogenase (L2-HGDH) gene in Staffordshire bull terriers in Brazil. Genetic testing was done in 76 dogs from different regions of the country, from 2008 to 2015. Fifty-five dogs (72.37%) were free of the mutant gene L2HGDH or homozygous-dominant, and 21 (27.63%) were carriers for the mutant gene or heterozygous. No homozygous recessive dogs (affected) were found, however, it is worth noting that the gene circulates in Brazil and that affected dogs can appear.(AU)

Acidúria L2-hidroxiglutárica: circulação do gene em cães da raça Staffordshire Bull Terrier no Brasil em 2008-2015 / L2-hydroxyglutaric aciduria: circulation of the gene in Staffordshire Bull Terrier dogs in Brazil (2008-2015)

The aim of this study was to identify the presence of a mutation in the L2-hydroxyglutarate dehydrogenase (L2-HGDH) gene in Staffordshire bull terriers in Brazil. Genetic testing was done in 76 dogs from different regions of the country, from 2008 to 2015. Fifty-five dogs (72.37%) were free of the mutant gene L2HGDH or homozygous-dominant, and 21 (27.63%) were carriers for the mutant gene or heterozygous. No homozygous recessive dogs (affected) were found, however, it is worth noting that the gene circulates in Brazil and that affected dogs can appear.(AU)

O objetivo do trabalho foi identificar a presença no Brasil do gene mutante L2HGDH em cães da raça Staffordshire Bull Terrier (SBT). Para tanto foi feito o teste genético em 76 cães provenientes de diferentes regiões do Brasil, no período de 2008 a 2015, sendo encontrados 55 animais (72,37%) livres do gene mutante L2-HGDH ou homozigotos dominantes, e 21(27,63%) portadores do gene mutante ou heterozigotos. Não foi encontrado nenhum animal homozigoto recessivo (afetado), porém pode-se observar que o gene circula no Brasil e que cães afetados podem aparecer.(AU)

Evidence of heterozygosity and recombinant alleles in single cysts of Giardia duodenalis / Evidência de heterozigose e alelos recombinantes em cistos individualizados de Giardia duodenalis

Giardia duodenalis is divided into eight assemblages (named A to H). Isolates of assemblage A are divided into four sub-assemblages (AI, AII, AIII and AIV). While isolates of sub-assemblage AII are almost exclusively detected in human hosts, isolates of assemblage B are encountered in a multitude of animal hosts and humans. Here, we isolated single cysts of G. duodenalis from a human stool sample and found that one of them had overlaps of assemblage AII and B alleles and an unexpectedly high number of variants of the beta-giardin (Bg) and GLORF-C4 (OrfC4) alleles. In addition, one of the Bg alleles of that cyst had a fragment of sub-assemblage AII interspersed with fragments of assemblage B, thus indicating that this allele may be a recombinant between sequences A and B. Our results are unprecedented and put a check on the statement that different assemblages of G. duodenalis represent species with different host specificities.(AU)

A espécie Giardia duodenalis é dividida em oito grupos (nomeados de A a H). Isolados do grupo A são divididos em quatro subgrupos (AI, AII, AIII and AIV). Enquanto isolados do subgrupo AII são detectados quase exclusivamente em hospedeiros humanos, isolados do subgrupo B são encontrados em uma grande variedade de hospedeiros entre animais e humanos. Neste trabalho, foi constatado que, dentre diversos cistos individualizados de G. duodenalis provenientes de fezes de origem humana, um cisto continha os alelos AII e B e um número inesperado de variantes de alelos codificadores de beta giardina e GLORF-C4. Ainda, um dos alelos beta giardina desse cisto possuía fragmentos AII intercalando um fragmento B, indicando que esse alelo pode ser um recombinante entre alelos AII e B. Os resultados aqui apresentados são inéditos e colocam em dúvida o conceito atual de que os diferentes grupos de G. duodenalis representam espécies distintas com diferentes graus de especificidade por hospedeiros.(AU)

AVALIAÇÃO DO POTENCIAL CARCINOGÊNICO DA DORAMECTINA POR MEIO DO TESTE DE DETECÇÃO DE CLONES DE TUMORES EPITELIAIS EM Drosophila melanogaster

A doramectina (DORA) é um endectocida lactona macrocíclica de largo espectro do grupo das avermectinas, produzida por biossíntese mutacional da fermentação de Streptomyces avermectilis, diferindo da ivermectina pela substituição de um grupo ciclohexil na posição C25. Entre os diferentes modelos experimentais para estudo de toxicidade e carcinogênese de produtos químicos destaca-se Drosophila melanogaster. Considerando a dinâmica lipofílica da DORA e que o período de carência para consumo de produtos de origem animal nem sempre é respeitado, objetivou-se avaliar a toxicidade e atividade carcinogênica do medicamento de uso veterinário Dectomax® (doramectina 1%) por meio do teste de detecção de tumores epiteliais em células somáticas de Drosophila melanogaster. Para tanto, foram utilizadas larvas heterozigotas de 72 horas resultantes do cruzamento de fêmeas wts/TM3, Sb1 virgens e machos mwh/mwh, as quais foram alimentadas com meio de cultura contendo oito concentrações de DORA variando de 4,3x10-7 a 5,56x10-5 mM por 48 horas para obtenção da curva de toxicidade. Após a metamorfose determinou-se a curva de toxicidade e novas larvas heterozigotas foram expostas a cinco concentrações subletais cuja sobrevivência foi 70%. As concentrações variaram de 8,69x10-7 a 1,39x10-5 mM de DORA por 48 horas. Após, calculou-se a frequência de tumores em indivíduos heterozigotos marcados mwh/wts. Observamos que as duas maiores concentrações de DORA, 5,56x10-5 e 2,78x10-5 mM apresentaram toxicidade significativa (p<0,05) na sobrevivência das larvas Drosophila melanogaster. Pressupõem-se que as larvas foram acometidas por paralisia flácida e impedidas de se movimentarem para o repasto, culminando em morte por inanição, uma vez que a substância atua sobre os canais dependentes de Cl- controlados pelos neurotransmissores GABA e glutamato dos invertebrados, permitindo o influxo de Cl- e hiperpolarização da membrana pós-sináptica. As cinco concentrações subletais 8,69x10-7, 1,74x10-6, 3,47x10-6, 6,95x10-6, 1,39x10-5 mM induziram significativamente a formação de tumores epiteliais em D. melanogaster (p<0,05), quando comparadas com o controle negativo. A carcinogênese pode ser explicada pelo fato da DORA ter alterado o gene supressor de tumor wts proporcionando a falha no reconhecimento ou impossibilitando a correção do defeito no DNA, ou encaminhamento para a apoptose. Então, reforça-se a necessidade de respeitar o período de carência para o consumo de produtos de origem animal.

Doramectin (DORA) is a broad-spectrum macrocyclic lactone endectocide of the avermectin group, produced by mutational biosynthesis of Streptomyces avermectilis fermentation and differing of ivermectin by substitution of a cyclohexyl group at the C25 position. Among the different experimental models for the study of toxicity and carcinogenesis of chemicals products, draws attention Drosophila melanogaster. Considering the lipophilic dynamics of DORA and the grace period for consumption of animal products that is not always respected, the aim of the present study was to evaluate the toxicity and carcinogenic activity of the veterinary drug Dectomax® (doramectin 1%) by the test for detection of epithelial tumor in somatic cells of Drosophila melanogaster. For that, it was used heterozygous 72-hour larvae, resulting from the crossing between wts/TM3, Sb1 virgin females and mwh/mwh males, which were fed with culture medium containing eight different concentrations of DORA ranging from 4.3x10-7 to 5.56x10-5 mM for 48 hours to obtain the toxicity curve. After metamorphosis, the toxicity curve was determined and another heterozygous larvae were exposed to five sublethal concentrations whose survival was 70%. The concentrations varied from 8.69x10-7 to 1.39x10-5 of DORA for 48 hours. After that, the frequency of tumors in heterozygotes marked mwh/wts were calculated. We observed that the two highest concentrations of DORA, 5.56x10-5 and 2.78x10-5 mM, showed significant toxicity (P<0.05) on the survival of Drosophila melanogaster larvae. It is assumed that the larvae were affected by flaccid paralysis and were prevented from moving to the meal, culminating in death due to starvation, once the substance acts on the Cl- dependent channels controlled by GABA and glutamate neurotransmitters in invertebrate allowing the influx of Cl- and hyperpolarization of the post-synaptic membrane. The five sublethal concentrations 8.69x10-7, 1.74x10-6, 3.47x10-6, 6.95x10-6, 1.39x10-5 mM significantly induced epithelial tumor formation in D. melanogaster when compared to the negative control (p<0,05). Carcinogenesis can be explained by the fact that DORA has altered the wts tumor suppressor gene, causing a failure in recognition or preventing the correction of the DNA defect, or referral to apoptosis. Therefore, the need to respect the grace period for the consumption of products of animal origin is reinforced.

SEGREGAÇÃO GAMÉTICA DE CROMOSSOMOS ENVOLVIDOS EM TRANSLOCAÇÕES E SEU PAPEL NO ISOLAMENTO REPRODUTIVO DE ESPÉCIES DO GÊNERO Mazama (MAMMALIA; CERVIDAE)

A família Cervidae destaca-se por possuir uma das maiores taxas de evolução cariotípica dentre os mamíferos, reflexo de uma fragilidade cromossômica acentuada, que facilita a ocorrência de quebras e rearranjos cromossômicos. Estas, quando vinculadas ao isolamento geográfico em um curto período, poderiam levar as populações a um processo de especiação. Isso é evidenciado na ampla diversificação cariotípica da família, apresentando exemplos extremos de baixo e alto número diploide, como Muntiacus muntjak (2n = 6/7) e Capreolus pygargus (2n = 70 + 1 14 Bs), respectivamente. Muitas espécies crípticas estão escondidas pela grande similaridade morfológica, acompanhada de ampla variação cariotípica, intra e interespecífica. Animais portadores de rearranjos cromossômicos podem apresentar diferentes padrões na segregação meiótica durante a espermiogênese, dando passo à formação de gametas desbalanceados. Isso pode estar relacionado com desordens reprodutivas, como evidenciado em animais domésticos, onde é observada a queda da capacidade reprodutiva. A técnica de hibridização in situ fluorescente (FISH) permite a marcação, identificação e localização dos cromossomos envolvidos nas translocações a partir de sondas de DNA com marcadores fluorescentes. Dada a falta de sondas específicas para espécies de cervídeos, diversos estudos apontam para o uso de sondas bovinas devido ao conhecido mapa genético bovino e à proximidade filogenética entre as famílias Cervidae e Bovidae. Dessa forma, a aplicação da FISH em células espermáticas (também chamada de sperm-FISH) permite estimar a proporção de gametas normais/balanceados e desbalanceados (portadores de aneuploidias). Assim, o presente estudo teve como objetivo: a) Estimar a proporção dos produtos da segregação meiótica em indivíduos portadores de translocações cromossômicas dentro do gênero Mazama, b) Avaliar os potenciais efeitos dos rearranjos cromossômicos na aptidão reprodutiva dos portadores, e c) Avaliar o papel dos rearranjos cromossômicos nos processos de especiação dentro do gênero Mazama. Na espécie M. gouazoubira foi possível avaliar uma translocação Robertsoniana (TR) em quatro animais, sendo que dois incluíam a presença de uma inversão paracêntrica (IPA). O valor médio dos espermatozoides desbalanceados nos portadores da TR/IPA (6,68%) quase dobrou em relação àquele dos portadores de TR (3,76%), mas não houve diferença significativa. Na espécie M. americana, foram avaliadas TRs em diferentes citótipos e fusões em tandem (FT) heterozigotas em híbridos entre citótipos da mesma linhagem cromossômica. Os portadores de TR apresentaram valor médio para a taxa de segregação adjacente de 1,80% e os portadores da FT apresentaram valor médio de 29,07% para os produtos equivalentes a aqueles da segregação adjacente na TR. Nossos resultados indicam um impacto de baixo a moderado do rearranjo cromossômico na aptidão reprodutiva dos machos de M. gouazoubira heterozigotos para TR e TR/IPA e um impacto baixo no caso das TRs em M. americana. No caso dos híbridos de M. americana portadores de FT em heterozigose, os resultados sugerem a formação de uma barreira pós-zigótica eficiente representada pela redução severa da fertilidade dos indivíduos.

The family Cervidae stands out for showing one of the highest rates of karyotype evolution among mammals, reflecting a marked chromosomal fragility. Thus, the occurrence of chromosomal breaks and rearrangements is facilitated and lead populations to process of speciation when linked to geographic isolation in a short period. Besides, a wide karyotype diversification of the family has been observed in their extreme examples of low and high diploid numbers, such as Muntiacus muntjak (2n = 6/7) and Capreolus pygargus (2n = 70 + 1 14 Bs), respectively. Many cryptic species are hidden due to the great morphological similarity, accompanied by wide intra and interspecific karyotypic variation. Thus, animals with chromosomal rearrangements may present different patterns of meiotic segregation during spermiogenesis, giving way to the formation of unbalanced gametes. This can be related to reproductive disorders, as observed in domestic animals with reproductive fitness reduction. The fluorescent in situ hybridization (FISH) technique allows the marking, identification, and location of the chromosomes involved in translocations using DNA probes with fluorescent markers. Given the lack of specific probes for deer species, several studies point to the use of bovine probes due to the well-known bovine genetic map and the phylogenetic proximity between families Cervidae and Bovidae. Thus, the application of FISH in sperm cells (also called sperm-FISH) allows estimating the proportion of normal/balanced and unbalanced gametes (carriers of aneuploidies). The present study aimed to a) Estimate the mean rate of meiotic segregation products in carriers of chromosomal translocations within the genus Mazama, b) Assess the potential effects of chromosomal translocations on the reproductive fitness of carriers, and c) Assess the role of chromosomal polymorphisms in speciation processes within the genus Mazama. In the M. gouazoubira species, it was possible to evaluate a Robertsonian translocation (RT) in four animals, two of which included the presence of a paracentric inversion (PAI). The mean value of unbalanced gametes in carriers of the RT/PAI (6.68%) almost doubled in relation to that of carriers with the RT (3.76%); however, no significant difference was observed. Regarding M. americana, RTs were evaluated in different cytotypes and heterozygous tandem fusion (TF) was evaluated in hybrids from the same chromosomal lineage cytotypes. Carriers of RT showed a mean value for the adjacent segregation rate of 1.80% and carriers of TF showed a mean value of 29.07% for products equivalent to those of the adjacent segregation in RT. Our results indicate low to moderate impacts of chromosomal rearrangement on the reproductive fitness of M. gouazoubira heterozygotes for RT and RT/PAI and a low impact in the case of RTs in M. americana. In the case of M. americana hybrids with heterozygous TF, our results suggest an efficient postzygotic barrier represented by the severe reduction in the individuals' fertility.

PREVALÊNCIA DA MUTAÇÃO E321G NO GENE MYH1, ASSOCIADA A MIOSITE IMUNOMEDIADA, EM CAVALOS QUARTO DE MILHA NO BRASIL

A miosite imunomediada (IMM) causa atrofia muscular aguda e infiltração lin-focítica de miofibras. Em cavalos Quarto-de-milha (QM), uma mutação missen-se E321G em gene MYH1 está altamente associada à suscetibilidade ao de-senvolvimento de IMM. O objetivo deste estudo foi investigar a frequência alé-lica da variante E321G em gene MYH1 em QMs no Brasil. Dos 299 QMs geno-tipados, 44 animais (14,7%) foram identificados como heterozigotos (N/My) pa-ra a variante E321G em gene MYH1 e 255 (85,3%) foram homozigotos para o alelo wild type (N/N); portanto, a frequência do alelo foi de 0,074. Cavalos da linhagem de rédeas mostraram uma frequência de heterozigotos significativa-mente maior do que outras linhagens. Não houve associação entre miopatia de armazenamento de polissacarídeos tipo 1 ou hipertermia maligna e a vari-ante E321G em gene MYH1 nos animais avaliados. Além disso, aqui, descre-vemos aqui pela primeira vez no Brasil dois potros (N/My) com sinais clínicos de IMM. Este estudo destaca a importância de medidas de controle para evitar um aumento na incidência de IMM associado ao E321G em gene MYH1 em QMs no Brasil, principalmente em cavalos de rédeas.

In Quarter horses (QHs), myosin heavy chain myopathy (MYHM), characterized by nonexertional rhabdomyolysis or immune-mediated myositis (IMM) with acute mus-cle atrophy, is highly associated with a missense E321G MYH1 mu-tation. We identified two related QH foals in Brazil with the E321G MYH1 muta-tion that had clinical signs of MYHM, with the histological confirmation of IMM in one foal. This prompted an investigation into the allele frequency of the E321G MYH1 variant across performance QHs using a DNA archive in Brazil. Of 299 genotyped QHs, 44 animals (14.7%) were identified as heterozygous (My/N) for the E321G MYH1 variant, and 255 (85.3%) were homozygous for the wild-type allele (N/N), with an allele frequency of 0.074. Reining horses showed a significantly higher prevalence of heterozygosity than those in other disciplines (P=0.008). The prevalence of type 1 polysaccharide storage myopa-thy was 0.032, with only two E321G MYH1 heterozygotes possessing the GYS1 mutation. This study highlights the existence of MYHM and the high prevalence of the MYH1 mutation in QHs in Brazil, especially in reining QHs, underlining the importance of control measures to prevent an increase in the incidence of MYHM in QHs in Brazil.

MUTAÇÕES CAUSADORAS DO NANISMO DO TIPO CONDRODISPLÁSICO EM EQUINOS DA RAÇA MINI-HORSE NO BRASIL

Em equinos da raça Mini-Horse, o nanismo condrodisplásico possui padrão de herança autossômico recessivo e já foram descritas quatro variantes causais (D1, D2, D3* e D4) no gene aggrecan (ACAN). Animais homozigotos ou heterozigotos compostos para essas variantes apresentam a doença. Os objetivos gerais desse estudo foram verificar as mutações já descritas anteriormente e investigar outra(s) possível(is) mutação(ões) relacionada(s) com o nanismo do tipo condrodisplásico em equinos da raça Mini-Horse, além de estimar suas frequências alélicas. O RNAm do gene ACAN foi sequenciado e, após a comparação entre animais afetados e seus pais, sugeriu-se que o polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) c.6465A>T (g.95271115A>T; p.L2155F RefSeq XM_005602799.2; XP_005602856.2 EquCab3.0) fosse uma variante potencialmente associada ao nanismo condrodisplásico ainda não descrita na literatura consultada. Teste genético, baseado em reação em cadeia da polimerase (PCR) seguida de sequenciamento Sanger, para as cinco variantes em 347 equinos da raça Mini-Horse fenotipicamente normais, assim como o estudo in silico da estrutura proteica potencialmente associaram c.6465A>T com a enfermidade. Estudos em equinos de raças grandes demonstraram a presença do SNP c.6465A>T em heterozigose e dois cavalos Mangalarga Marchador fenotipicamente normais apresentaram-no em homozigose. Na população estudada de equinos da raça Mini-Horse fenotipicamente normais (n=347), a frequência alélica combinada de D1, D2, D3*, D4 e c.6465A>T foi de 0,392, o que sugere uma taxa de heterozigotos de 47,7%. Interações complexas no genoma de Mini-Horses possivelmente contribuem para a associação de c.6465A>T com o nanismo condrodisplásico ou este é um marcador em desequilíbrio ligado com uma variante causal ainda não identificada.

In Miniature horses, chondrodysplastic dwarfism has an autosomal recessive inheritance pattern and four causative variants (D1, D2, D3* and D4) in the aggrecan (ACAN) gene have been described previously. Homozygous or compound heterozygotes animals for these variants present the disorder. The general aims of this study were to verify the mutations already described and to investigate other possible variant(s) related to chondrodysplastic dwarfism in Miniature horses; in addition, to estimate the allelic frequency of the mutations. The mRNA of the ACAN gene was sequenced, and after comparing the affected animals and their parents, it was suggested that the single nucleotide polymorphism (SNP) c.6465A>T (g.95271115A>T; p.L2155F RefSeq XM_005602799.2; XP_005602856.2 EquCab3.0) could be potentially associated with dwarfism not yet described in the literature. Genetic test based in polymerase chain reaction (PCR) and Sanger sequencing for the five variants in 347 phenotypically normal Miniature horses, as well as the in silico protein structure study potentially associated c.6465A>T with dwarfism. Study in large sized horses showed the presence of the SNP in heterozygosis and two Mangalarga Marchador horses presented it in homozygosis. In the studied population of phenotypically normal Miniature horses (n=347), the combined frequency of D1, D2, D3*, D4 and c.6465A>T was 0.392, suggesting a heterozygous rate of 47.7%. Complex interactions in the Miniature horse genome could contribute to association of c.6465A>T with chondrodysplastic dwarfism or it could be a marker in linkage disequilibrium with a causative variant not yet identified.

ASSOCIAÇÕES DE POLIMORFISMOS DA REGIÃO PROMOTORA DO GENE FSH- DETECTADOS PELA TÉCNICA DE TETRA-PRIMER (AMRS-PCR) COM CARACTERÍSTICAS SEMINAIS E TESTICULAR EM BOVINOS DA RAÇA NELORE

O objetivo desse estudo foi associar polimorfismos detectados na região promotora do gene FSH- através da técnica de Tetra-primer (ARMS-PCR) com características seminais e testicular de bovinos da raça Nelore. Foram estudados 200 touros, procedendo a coleta de sêmen e a mensuração do perímetro escrotal de 200 touros. Em seguida, foram realizados os espermogramas e métodos laboratoriais de biologia molecular. A extração de DNA foi realizada pelo método salino, seguido da técnica de Tetra-primer PCR para genotipar dois polimorfismos (FSH-U1 e FSH-U2) em todos os animais. As análises de variabilidade genética foram avaliadas pelo programa Genepop e as associações dos polimorfismos com as características seminais e testicular pelo programa SAS (Versão Universitária). A técnica revelou três padrões de bandas para cada polimorfismo. Para o polimorfismo FSH-U1 foram observados os genótipos GG, GA e AA, nas proporções de 23%, 50% e 27%, respectivamente e o alelo A o mais frequente (52%). Para o polimorfismo FSH-U2 foram observados os genótipos TT, TA e AA, nas proporções 26%, 50% e 24%, respectivamente e o alelo T o mais frequente (51%). Os dois polimorfismos apresentaram desvios do Equilíbrio de Hardy-Weinberg (EHW) (P<0,05) e excesso de heterozigotos com FIS 0,3304 e 0,2511, respectivamente. Os polimorfismos estão em desequilíbrio de ligação (P<0,05) e observou-se forte associação do polimorfismo FSH-U1 com a característica testicular (perímetro escrotal), sendo o GG, o genótipo com maior medida de perímetro escrotal em relação aos demais genótipos (P<0,05).Considerando a formação de haplótipos, nenhuma associação (P<0,05) foi encontrada, sendo o haplótipo mais frequente o GATA.

The purpose of this study was to associate polymorphisms detected in the promoter region of the FSH- gene by tetra-primer (ARMS-PCR) with seminal and testicular characteristics of Nelore cattle. It was collected semen and measured scrotal circumference of 200 bulls. Then, spermograms and laboratory methods of molecular biology were performed. DNA extraction was performed by saline method, followed by Tetra-PCR PCR to genotype two polymorphisms (FSH-U1 and FSH-U2) in all animals. Genetic variability analyzes were evaluated by the Genepop program and the associations of polymorphisms with seminal and testicular characteristics by the SAS program (University Version). The technique revealed three band patterns for each polymorphism. For the FSH-U1 polymorphism, GG, GA and AA genotypes were observed in the proportions of 23%, 50% and 27%, respectively and the most frequent allele was A (52%). For the FSH-U2 polymorphism, TT, TA and AA genotypes were observed, in the proportions 26%, 50% and 24%, respectively and the most frequent allele was T (51%). Both polymorphisms showed deviations of Hardy-einberg Equilibrium (EHW) (P <0.05) and excess of heterozygotes with FIS 0.3304 and 0.2511, respectively. The polymorphisms are in linkage disequilibrium (P <0.05) and there was a strong association between FSH-U1 polymorphism and the testicular characteristic (scrotal perimeter), being GG the genotype with the largest scrotal perimeter measurement compared to the others. genotypes (P <0.05). Considering the formation of aplotypes, no association (P <0.05) was found, and the most frequent haplotype was GATA.