Antagonistic activity of lactic acid bacteria isolated from Minas artisanal cheeses against Brucella abortus / Atividade antagonista de bactérias lácticas isoladas de queijos Minas artesanais contra Brucella abortus

This study aimed to evaluate methods for studying the in vitro antimicrobial activity of lactic acid bacteria (LAB) against Brucella abortus and to evaluate the antagonistic effect of LAB on the viability of this pathogen. A total of 18 LAB strains (Lactobacillus plantarum, n = 11; Pediococcus acidilactici, n = 1; Lactobacillus rhamnosus, n = 4; and Lactobacillus brevis,n = 2), isolated from Minas artisanal cheeses produced in three regions (Canastra, Campos das Vertentes, and Araxá) of Minas Gerais State, Brazil, were tested for their antimicrobial activity against B. abortus using three methods: spot-on-lawn, agar well diffusion assay, and antagonistic activity of the culture supernatants. None of the tested LAB strains could inhibit B. abortus in the spot-on-lawn and agar-well diffusion assays. The supernatants produced by LAB had an acidic pH, with intensity depending on bacterial growth and strain, and could inhibit the growth of B. abortus. In contrast, pH-neutralized (pH 7.0) LAB supernatants did not suppress the growth of B. abortus. The results showed that the best technique to study the in vitro antagonism of LAB against B. abortus was the antagonistic activity of culture supernatants. The growth of B. abortus may have been inhibited by acid production.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar métodos de estudo in vitro da atividade antimicrobiana de bactérias lácticas contra Brucella abortus e avaliar o efeito antagônico das mesmas sobre a viabilidade deste patógeno. Um total de 18 amostras de bactérias lácteas (Lactobacillus plantarum, n = 11; Pediococcus acidilactici, n = 1; Lactobacillus rhamnosus, n = 4; e Lactobacillus brevis, n = 2), isoladas de exemplares de Queijo Minas Artesanal produzidos em três regiões (Canastra, Campos das Vertentes e Araxá) do estado de Minas Gerais, Brasil, foram testados quanto à sua atividade antimicrobiana contra B. abortus usando três métodos: spot-on-lawn, ensaio de difusão em poço e atividade antagonista de sobrenadante de cultura. Nenhuma das cepas testadas foi capaz de inibir B. abortus nos ensaios spot-on-lawm e de difusão em poço. Os sobrenadantes produzidos pelas bactérias lácteas apresentaram pH ácido, com intensidade dependente do crescimento bacteriano e da amostra, podendo inibir o crescimento de B. abortus. Em contraste, os sobrenadantes com pH neutralizado (pH 7,0) não inibiram o crescimento de B. abortus. Os resultados mostraram que a melhor técnica para estudar o antagonismo in vitro de bactérias lácteas contra B. abortus foi a atividade antagonista de sobrenadante de cultura. O crescimento de B. abortus pode ter sido inibido pela produção de ácido.(AU)

Lactobacillus spp. Strains Isolation, Identification, Preservation and Quantitative Determinations from Gut Content of 45-Day-Old Chickens Broilers

The objective of this study was to isolate, identify, preserve and determine the quantitative level of the Lactobacillus strains from the gut content of 45-day-old chickens broilers; to test the viability of these strains preserved at 4 ºC and room temperature (20 ± 2 ºC). Lactobacillus strains were isolated, phenotypically identified and preserved from the gut content of 17 chickens broilers. Identification was performed by morphological, cultural and biochemical characters examination, using apiwebTM and ABIS online software. The quantitative level of Lactobacillus strains in intestinal content (105 - 109 CFU/g) and the viability of strains preserved at 4 ºC and at room temperature (from 8 days to 9 months) was also determined. Twenty-three strains of L. acidophilus, L. brevis, L. plantarum, L. fermentum and L. salivarius from the gut content of chickens broilers were isolated, phenotypically identified, and preserved. Of these, L. plantarum, L. fermentum and L. acidophilus biotype 1 strains were technologically and ecologically suitable to continue the testing of probiotic traits.(AU)

Lactobacillus spp. Strains Isolation, Identification, Preservation and Quantitative Determinations from Gut Content of 45-Day-Old Chickens Broilers

The objective of this study was to isolate, identify, preserve and determine the quantitative level of the Lactobacillus strains from the gut content of 45-day-old chickens broilers; to test the viability of these strains preserved at 4 ºC and room temperature (20 ± 2 ºC). Lactobacillus strains were isolated, phenotypically identified and preserved from the gut content of 17 chickens broilers. Identification was performed by morphological, cultural and biochemical characters examination, using apiwebTM and ABIS online software. The quantitative level of Lactobacillus strains in intestinal content (105 - 109 CFU/g) and the viability of strains preserved at 4 ºC and at room temperature (from 8 days to 9 months) was also determined. Twenty-three strains of L. acidophilus, L. brevis, L. plantarum, L. fermentum and L. salivarius from the gut content of chickens broilers were isolated, phenotypically identified, and preserved. Of these, L. plantarum, L. fermentum and L. acidophilus biotype 1 strains were technologically and ecologically suitable to continue the testing of probiotic traits.

In vitro assessment of the probiotic potential of lactobacilli isolated from Minas artisanal cheese produced in the Araxá region, Minas Gerais state, Brazil / Avaliação in vitro do potencial probiótico de lactobacilos isolados de queijo minas artesanal produzido na região de Araxá, estado de Minas Gerais, Brasil

Minas artisanal cheese is made from endogenous starter cultures, including lactic acid bacteria (LAB). Some LAB may possess probiotic potential. Thus, this study aimed to evaluate the in vitro probiotic properties of lactobacilli isolated from Minas artisanal cheeses produced in Minas Gerais. Ten samples of lactobacilli, formerly isolated from those cheeses, were submitted to the following assays: antimicrobial susceptibility, tolerance to artificial gastric juice and biliary salts, production of hydrogen peroxide and antagonism against pathogenic and non-pathogenic micro-organisms. Only L. plantarum (C0) was sensitive to all tested antimicrobials, while the other LAB samples were resistant to at least one drug. Six samples were tolerant to artificial gastric juice, and L. brevis (A6) even grew in that medium. Three samples were tolerant to biliary salts. Only L. brevis (E35) produced hydrogen peroxide. Difference (P< 0.05) was observed among the means of inhibition haloes of lactobacilli against Enterococcus faecalis ATCC 19433 and Lactobacillus plantarum C24 in spot-on-the-lawn assay. All samples of lactobacilli inhibited Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enterica var. Typhimurium ATCC 14028 in co-culture antagonism test (P< 0.0001). Most lactobacilli samples showed in vitro probiotic potential. From the tested samples, L. brevis (A6) presented the best results considering all in vitro probiotic tests.(AU)

O queijo minas artesanal é produzido por culturas starters endógenas, incluindo bactérias ácido-láticas (BAL). Algumas BAL podem possuir potencial probiótico. Com isso, este estudo teve como objetivo avaliar as propriedades probióticas in vitro de lactobacilos isolados de queijo minas artesanal produzido no estado de Minas Gerais. Dez amostras de lactobacilos, previamente isoladas desses queijos, foram submetidas aos seguintes testes: susceptibilidade aos antimicrobianos, tolerância ao suco gástrico artificial e aos sais biliares, produção de peróxido de hidrogênio e antagonismo contra micro-organismos patogênicos e não patogênicos. Apenas L. plantarum (C0) foi sensível a todos os antimicrobianos testados, enquanto as outras amostras de BAL foram resistentes a, pelo menos, uma droga testada. Seis amostras foram tolerantes ao suco gástrico artificial, e L. brevis (A6) apresentou crescimento nesse meio. Três amostras foram tolerantes aos sais biliares. Apenas L. brevis (E35) produziu peróxido de hidrogênio. Diferença (P<0,05) foi observada entre as médias dos halos de inibição de lactobacilos contra Enterococcus faecalis ATCC 19433 e Lactobacillus plantarum C24 no teste do spot-on-the-lawn. Todas as amostras de lactobacilos inibiram Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enterica var. Typhimurium ATCC 14028 no teste de antagonismo em cocultura (P<0,0001). A maioria das amostras de lactobacilos apresentou potencial probiótico in vitro. Com base nas amostras testadas, L. brevis (A6) apresentou os melhores resultados, considerando-se todos os testes probióticos in vitro.(AU)

In vitro assessment of the probiotic potential of lactobacilli isolated from Minas artisanal cheese produced in the Araxá region, Minas Gerais state, Brazil / Avaliação in vitro do potencial probiótico de lactobacilos isolados de queijo minas artesanal produzido na região de Araxá, estado de Minas Gerais, Brasil

Minas artisanal cheese is made from endogenous starter cultures, including lactic acid bacteria (LAB). Some LAB may possess probiotic potential. Thus, this study aimed to evaluate the in vitro probiotic properties of lactobacilli isolated from Minas artisanal cheeses produced in Minas Gerais. Ten samples of lactobacilli, formerly isolated from those cheeses, were submitted to the following assays: antimicrobial susceptibility, tolerance to artificial gastric juice and biliary salts, production of hydrogen peroxide and antagonism against pathogenic and non-pathogenic micro-organisms. Only L. plantarum (C0) was sensitive to all tested antimicrobials, while the other LAB samples were resistant to at least one drug. Six samples were tolerant to artificial gastric juice, and L. brevis (A6) even grew in that medium. Three samples were tolerant to biliary salts. Only L. brevis (E35) produced hydrogen peroxide. Difference (P< 0.05) was observed among the means of inhibition haloes of lactobacilli against Enterococcus faecalis ATCC 19433 and Lactobacillus plantarum C24 in spot-on-the-lawn assay. All samples of lactobacilli inhibited Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enterica var. Typhimurium ATCC 14028 in co-culture antagonism test (P< 0.0001). Most lactobacilli samples showed in vitro probiotic potential. From the tested samples, L. brevis (A6) presented the best results considering all in vitro probiotic tests.(AU)

O queijo minas artesanal é produzido por culturas starters endógenas, incluindo bactérias ácido-láticas (BAL). Algumas BAL podem possuir potencial probiótico. Com isso, este estudo teve como objetivo avaliar as propriedades probióticas in vitro de lactobacilos isolados de queijo minas artesanal produzido no estado de Minas Gerais. Dez amostras de lactobacilos, previamente isoladas desses queijos, foram submetidas aos seguintes testes: susceptibilidade aos antimicrobianos, tolerância ao suco gástrico artificial e aos sais biliares, produção de peróxido de hidrogênio e antagonismo contra micro-organismos patogênicos e não patogênicos. Apenas L. plantarum (C0) foi sensível a todos os antimicrobianos testados, enquanto as outras amostras de BAL foram resistentes a, pelo menos, uma droga testada. Seis amostras foram tolerantes ao suco gástrico artificial, e L. brevis (A6) apresentou crescimento nesse meio. Três amostras foram tolerantes aos sais biliares. Apenas L. brevis (E35) produziu peróxido de hidrogênio. Diferença (P<0,05) foi observada entre as médias dos halos de inibição de lactobacilos contra Enterococcus faecalis ATCC 19433 e Lactobacillus plantarum C24 no teste do spot-on-the-lawn. Todas as amostras de lactobacilos inibiram Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enterica var. Typhimurium ATCC 14028 no teste de antagonismo em cocultura (P<0,0001). A maioria das amostras de lactobacilos apresentou potencial probiótico in vitro. Com base nas amostras testadas, L. brevis (A6) apresentou os melhores resultados, considerando-se todos os testes probióticos in vitro.(AU)

Selection of starter cultures for the production of sour cassava starch in a pilot-scale fermentation process

Sour cassava starch (Polvilho azedo) is obtained from a spontaneous fermentation conducted by microorganisms from raw materials and fermentation tanks. This product is traditionally used in the baking industry for the manufacture of biscuits and Brazilian cheese breads. However, the end of fermentation is evaluated empirically, and the process occurs without standardization, which results in products of inconsistent quality. Predominant microbiota from a cassava flour manufacturer was isolated in order to select starter cultures for the production of sour cassava starch in a pilot-scale fermentation process. Lactic acid bacteria and yeasts were isolated, enumerated and grouped by Restriction Fragment Length Polymorphism, and PCR fingerprinting, respectively. One isolate of each molecular profile was identified by sequencing of the rRNA gene. LAB were prevalent throughout the entire process. Lactobacillus brevis (21.5%), which produced the highest values of acidity, and Lactobacillus plantarum (13.9%) were among the most frequent species. Pichia scutulata (52.2%) was the prevalent yeast and showed amylolytic activity. The aforementioned species were tested as single and mixed starter cultures in a pilot-scale fermentation process for 28 days. L. plantarum exhibited better performance as a starter culture, which suggests its potential for the production of sour cassava starch.(AU)

Development of a propidium monoazide-polymerase chain reaction assay for detection of viable Lactobacillus brevis in beer

ABSTRACT The spoilage of beer by bacteria is of great concern to the brewer as this can lead to turbidity and abnormal flavors. The polymerase chain reaction (PCR) method for detection of beer-spoilage bacteria is highly specific and provides results much faster than traditional microbiology techniques. However, one of the drawbacks is the inability to differentiate between live and dead cells. In this paper, the combination of propidium monoazide (PMA) pretreatment and conventional PCR had been described. The established PMA-PCR identified beer spoilage Lactobacillus brevis based not on their identity, but on the presence of horA gene which we show to be highly correlated with the ability of beer spoilage LAB to grow in beer. The results suggested that the use of 30 µg/mL or less of PMA did not inhibit the PCR amplification of DNA derived from viable L. brevis cells. The minimum amount of PMA to completely inhibit the PCR amplification of DNA derived from dead L. brevis cells was 2.0 µg/mL. The detection limit of PMA-PCR assay described here was found to be 10 colony forming units (CFU)/reaction for the horA gene. Moreover, the horA-specific PMA-PCR assays were subjected to 18 reference isolates, representing 100% specificity with no false positive amplification observed. Overall the use of horA-specific PMA-PCR allows for a substantial reduction in the time required for detection of potential beer spoilage L. brevis and efficiently differentiates between viable and nonviable cells.(AU)

POTENCIAL ANTAGONISTA DE BACTÉRIAS DO ÁCIDO LÁTICO ISOLADAS DO LEITE CRU CONTRA Staphylococcus aureus e Listeria monocytogenes

Esta dissertação foi dividida em duas partes, sendo elas: capítulo 1, que é uma breve revisão bibliográfica abordando a microbiologia do leite cru e os microorganismos utilizados neste estudo (Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus e as bactérias do ácido lático - BAL); e capítulo 2, o qual descreve o estudo realizado com Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus e BALs isoladas do leite cru oriundos de propriedades leiteiras da Região Metropolitana de Curitiba, avaliando o potencial antagonista das BALs frente aos patógenos utilizando a metodologia de sobreposição dupla. As espécies láticas de Lactobacillus plantarum, Lactococcus lactis, Lactobacillus fermentum, Enterococcus faecalis e Lactobacillus brevis isoladas mostraram capacidade em inibir L. monocytogenes in vitro e L. plantarum demonstrou o melhor potencial inibitório; na análise envolvendo a habilidade de Staphylococcus aureus, cepas testadas de Lactobacillus fermentum, Enterococcus faecalis, Lactococcus lactis, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus brevis, Lactobacillus plantarum demonstraram capacidade de inibir a multiplicação do patógeno in vitro, sendo que L. paracasei alcançou os melhores resultados. Os dados encontrados neste estudo podem evidenciar sobre a influência das cepas de BAL nativas do leite cru no desenvolvimento dos patógenos estudados presentes no ambiente de ordenha e em leite e seus derivados.

This dissertation has two parts, the chapter 1 refers to a brief bibliographic review addressing the microorganisms studied (Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus and the lactic acid bacteria - LAB). The chapter 2 describes the study carried out with Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus and LABs isolated from raw milk from dairy farms from the Metropolitan Region of Curitiba, evaluating the potential antagonist of LAB against the pathogen using the plate overlay methodology. Lactic species of Lactobacillus plantarum, Lactococcus lactis, Lactobacillus fermentum, Enterococcus faecalis and Lactobacillus brevis isolated from raw milk showed the ability to inhibit L. monocytogenes in vitro and L. plantarum demonstrated the best inhibitory potential; in the analysis involving the ability of Staphylococcus aureus, tested with strains of Lactobacillus fermentum, Enterococcus faecalis, Lactococcus lactis, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus brevis, Lactobacillus plantarum demonstrated the ability to inhibit the multiplication of the pathogen in vitro, with the best results of L. paracasei. The results found in this study may show the influence of LAB strains native to raw milk in the development of the studied pathogens present in the milking environment and in milk and dairy products.

AVALIAÇÃO DA PRESENÇA DE OCRATOXINA A, ISOLAMENTO, IDENTIFICAÇÃO PROTEÔMICA E POTENCIAL PROBIÓTICO DE MICRO-ORGANISMOS PRESENTES NO SOCOL

O socol é um produto cárneo cru fermentado, elaborado a partir de carne suína, caracterizado pelo crescimento de fungos em sua superfície durante a maturação e é produzido na região serrana do estado do Espírito Santo por descendentes de imigrantes italianos. As bactérias ácido-láticas (BAL) são micro-organismos desejáveis presentes em alimentos fermentados, tais como produtos cárneos fermentados, e algumas têm sido classificadas como micro-organismos potencialmente probióticos. Fungos micotoxigênicos e a consequente produção de ocratoxina A (OTA) em produtos cárneos fermentados são um desafio para a segurança alimentar e, portanto, tema que requer esforços da academia e das autoridades sanitárias responsáveis. Os objetivos do trabalho foram isolar e identificar por espectrometria de massa por ionização e dessorção a lazer assistida por matriz - tempo de vôo (EM-MALDI-TOF) as BAL e leveduras e, por critérios morfológicos, os fungos filamentosos presentes no socol; avaliar o potencial probiótico in vitro das BAL e identificar e quantificar a OTA no socol e em cultivos a partir de fungos filamentosos potencialmente produtores isolados do produto. Para isso, 13 amostras de socol (10 inspecionadas e três não inspecionadas) foram analisadas com base nos parâmetros microbiológicos definidos pela legislação brasileira não tendo sido encontradas a presença de Salmonella spp. ou contagens de coliformes termotolerantes e Staphylococcus coagulase positivo acima dos limites estabelecidos. Foram identificadas seis espécies de BAL (Lactobacillus sakei, Lactobacillus brevis, Lactobacillus curvatus, Enterococcus faecalis, Pediococcus acidilactici e Pediococcus pentosaceus) em seis amostras de socol pela EMMALDI-TOF. Todas as BAL foram tolerantes aos sais biliares (com cinco ainda sendo capazes de crescer em sua presença) e cinco ao suco gástrico artificial (com duas sendo capazes de crescer na sua presença). Todas as BAL foram sensíveis à tetraciclina, ao cloranfenicol, à eritromicina, à ceftazidima (exceto L. sakei SFC2 que foi resistente), à penicilina (exceto L. brevis SFC1 e P. pentosaceus SFC11 que foram moderadamente sensíveis) e à clindamicina (exceto L. curvatus SFC6 que foi moderadamente sensível); e resistentes ao sulfazotrim, oxacilina, à amicacina (exceto o L. sakei SFC2 que foi moderadamente sensível) e à vancomicina (exceto o L. sakei SFC2 que foi sensível). Para a gentamicina, 50% das BAL foram resistentes e a outra metade sensível e para a ciprofloxacina, 50% foram resistentes, 33% sensíveis e 17% moderadamente sensíveis. A EM-MALDI-TOF permitiu identificar um único gênero de levedura (Candida spp.). Apenas duas amostras de BAL (L. brevis SFC1 e P. acidilactici SFC9) inibiram todas as bactérias reveladoras e Staphylococcus aureus ATCC 33591 foi a bactéria reveladora que menos sofreu inibição. As análises de OTA indicaram sua presença no socol de 53,8% dos produtores (30,76% inspecionados e 100% não inspecionados). A concentração média das amostras positivas foi de 99,3µg de OTA/kg de produto (54,1 µg kg-1 entre os inspecionados e 159,7 µg kg-1 entre os não inspecionados). Fungos filamentosos isolados do socol pertencentes ao complexo Aspergillus ochraceus produziram ocratoxina A in vitro. L. brevis SFC1 e, especialmente, P. acidilactici SFC9 demostraram atividade probiótica in vitro. As amostras de socol analisadas apresentam as características microbiológicas requeridas pela legislação brasileira, apesar das altas contagens de Staphylococcus spp. encontradas. A presença de microbiota toxigênica e as altas concentrações de OTA, amplamente distribuídas entre todas as agroindústrias não inspecionadas e parte das inspecionadas, indicam a necessidade de se estabelecerem medidas para garantir a inocuidade do produto e a segurança dos consumidores

The socol is a dry cured meat product made from pork meat, characterized by the growth of fungi on its surface during maturation phase and is produced in the mountain region of the state of Espirito Santo by descendants of Italian immigrants. Lactic acid bacteria (LAB) are desirable microorganisms present in fermented foods, such as dry-cured meat products, and some of them have been classified as potentially probiotic microorganisms. Mycotoxigenic fungi and the consequent production of ochratoxin A (OTA) in fermented meat products are a challenge for food security and, therefore, an issue that requires efforts by academy and official inspection service. The aim of this work were to isolate and identify LAB and yeasts by matrix assisted laser desorption ionization - time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) and, by morphological criteria, the socol filamentous fungi; to evaluate the in vitro probiotic potential of LAB; in addition to identify and quantify OTA in socol and in cultures from socol filamentous fungi potentially producers. Therefore, 13 socol samples (10 inspected and three not inspected) were analyzed based on Brazilian regulations and no presence of Salmonella spp. or counts of thermotolerant coliforms and positive coagulase Staphylococcus above the established limits were found. Six LAB species (Lactobacillus sakei, Lactobacillus brevis, Lactobacillus curvatus, Enterococcus faecalis, Pediococcus acidilactici and Pediococcus pentosaceus) were identified in six socol samples by MALDI-TOF MS. All LAB were tolerant to bile salts (with five still able to grow in their presence) and five to artificial gastric juice (with two being able to grow in their presence). All LAB were sensitive to tetracycline, chloramphenicol, erythromycin, ceftazidime (except L. sakei SFC2 which was resistant), penicillin (except L. brevis SFC1 and P. pentosaceus SFC11 which were moderately sensitive) and to clindamycin (except L. curvatus SFC6 which was moderately sensitive); and resistant to sulfazotrim, oxacillin, amikacin (except L. sakei SFC2 which was moderately sensitive) and vancomycin (except L. sakei SFC2 which was sensitive). For gentamicin, 50% of BAL were resistant, 50% sensitive; and for ciprofloxacin, 50% were resistant, 33% sensitive and 17% moderately sensitive. A single genus of yeast (Candida spp.) was identified by MALDI-TOF MS. Only two samples of LAB (L. brevis SFC1 and P. acidilactici SFC9) inhibited all the developer bacteria and Staphylococcus aureus ATCC 33591 was the developer bacteria that was least inhibited. OTA analysis indicated a 53.8% manufacturers contamination (30.76% for inspected plants and 100% for not inspected plants). The average concentration of the positive samples was 99,3 g OTA/kg of product (54 g kg-1 among those inspected and 159,7 g kg-1 among those not inspected). Filamentous fungi isolated from socol belonging to the Aspergillus ochraceus complex produced ochratoxin A in vitro. L. brevis SFC1 and, especially, P. acidilactici SFC9 demonstrated in vitro probiotic activity. Socol samples present the microbiological characteristics required by Brazilian regulation, despite the high counts of Staphylococcus spp. found. The presence of toxigenic microbiota and the high concentrations of OTA, widely distributed among all uninspected and part of the inspected plants, indicates the need to establish measures to ensure the safety of the product and of its consumers.

EFICÁCIA DO PROBIÓTICO DA ESPÉCIE LACTOBACILLUS E BIFOBACTERIUM NO CONTROLE DE PLACA BACTERIANA E GENGIVITE EM CACHORRO DO MATO (Cerdocyon thous) DE CATIVEIRO

A doença periodontal ocorre pelo acúmulo de placa bacteriana sobre os dentes e estruturas adjacentes e esta é uma das principais afecções que acomete o cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) em cativeiro. Na odontontologia veterinária, o probiótico é uma alternativa para animais selvagens de cativeiro, pois ele diminui o risco do tratamento cirúrgico, resistência a cepas bacterianas e efeitos colaterais da doença periodontal. O objetivo deste estudo foi avaliar a ação dos probióticos das espécies Lactobacillus reuterire, Lactobacillus salivarius Lactobacillus brevis e Bifidobacterium bifidium. Foram avaliados 132 dentes de 6 cachorros-do-mato (Cerdocyon thous), provenientes do Centro de Medicina e Pesquisa em Animais Selvagens (CEMPAS) da UNESP, com doença periodontal grau I e II. Os animais foram separados aleatoriamente após 60 dias de tratamento periodontal entre o grupo positivo e grupo negativo (sem aditivo de probiótico na comida). A medição da área bacteriana e do cálculo dentário ocorreu através da análise das imagens digitais que foram comparadas entre o grupo positivo e o grupo negativo após 60 dias do tratamento periodontal. Os probióticos dos gêneros Lactobacillus e Bifidobacterium, não apresentaram diferença estatisticamente significativa entre os grupos de estudo, mas foi possivel observar forte tendência de aderência e atuação do probiótico no terceiro incisivo, canino e quarto pré-molar superior. Vale a pena ressaltar que esse estudo é o primeiro relato de caso desta natureza no qual utiliza de probiótico para prevenção da doença periodontal em animais.

Periodontal disease occurs by the accumulation of plaque on the teeth and adjacent structures and this is one of the main conditions that affect the captive crab-eating fox (Cerdocyon thous). In veterinary dentistry, the probiotic is an alternative for captive wildlife, asit decreases the risk of surgical treatment, resistance to bacterial strains and side effects of periodontal disease. The aim of this study was to evaluate the action of probiotics of Lactobacillus reuterire, Lactobacillus salivarius Lactobacillus brevis and Bifidobacterium bifidium species. A total of 132 teeth of six crab-eating fox (Cerdocyon thous) from the UNESP Center for Medicine and Wildlife Research (CEMPAS) with grade I and II periodontal disease were evaluated. The animals were randomly separated after 60 days of periodontal treatment between the positive and negative group (no probiotic additive in the food). Measurement of bacterial area and dental calculus occurred through the analysis of digital images that were compared between the positive and negative groups after 60 days of periodontal treatment. The probiotics of the genera Lactobacillus and Bifidobacterium showed no statistically significant difference between the study groups, but it was possible to observe a strong tendency of adherence and performance of the probiotic in the third incisor, canine and fourth premolar. It is noteworthy that this study is the first case report of this nature in which it uses probiotics to prevent periodontal disease in animals.

Molecular identification of Lactobacillus spp. associated with puba, a Brazilian fermented cassava food

Puba or carimã is a Brazilian staple food obtained by spontaneous submerged fermentation of cassava roots. A total of 116 lactobacilli and three cocci isolates from 20 commercial puba samples were recovered on de Man, Rogosa and Sharpe agar (MRS); they were characterized for their antagonistic activity against foodborne pathogens and identified taxonomically by classical and molecular methods. In all samples, lactic acid bacteria were recovered as the dominant microbiota (7.86 ± 0.41 log10 CFU/g). 16S-23S rRNA ARDRA pattern assigned 116 isolates to the Lactobacillus genus, represented by the species Lactobacillus fermentum (59 isolates), Lactobacillus delbrueckii (18 isolates), Lactobacillus casei (9 isolates), Lactobacillus reuteri (6 isolates), Lactobacillus brevis (3 isolates), Lactobacillus gasseri (2 isolates), Lactobacillus nagelii (1 isolate), and Lactobacillus plantarum group (18 isolates). recA gene-multiplex PCR analysis revealed that L. plantarum group isolates belonged to Lactobacillus plantarum (15 isolates) and Lactobacillus paraplantarum (3 isolates). Genomic diversity was investigated by molecular typing with rep (repetitive sequence)-based PCR using the primer ERIC2 (enterobacterial repetitive intergenic consensus). The Lactobacillus isolates exhibited genetic heterogeneity and species-specific fingerprint patterns. All the isolates showed antagonistic activity against the foodborne pathogenic bacteria tested. This antibacterial effect was attributed to acid production, except in the cases of three isolates that apparently produced bacteriocin-like inhibitory substances. This study provides the first insight into the genetic diversity of Lactobacillus spp. of puba.(AU)

Additive containing homo and heterolactic bacteria on the fermentation quality of maize silage / Aditivo contendo bactérias homo e heteroláticas sobre a qualidade fermentativa da silagem de milho

This trial evaluated the addition of Lactobacillus plantarum, L. brevis and Enterococcus faecium combo additive against a control treatment. The silages were made in laboratory silos that were stored for 30, 60, 90 or 120 days before opening. We evaluated the chemical composition of the forage before and after ensiling and the fermentative losses of silages. The additive decreased (p < 0.01) effluent production (11.4 kg ton⁻¹) compared to control silage (14.0 kg ton⁻¹), but it increased (p < 0.01) the Neutral Detergent Fiber (NDF) and Acid Detergent Fiber (ADF) from 45.6% and 24.5% to 47.0 and 25.1% for control and additive silages, respectively. The storage periods affected (p < 0.01) effluent production, Dry Matter Losses (DML), NDF, ADF and pH variables. Fermentative losses were very low because of the adequate characteristics of maize for ensilage.

O presente ensaio experimental avaliou inoculação de aditivo composto por Lactobacillus plantarum, L. brevis e Enterococcus faecium em relação à silagem sem aditivo (Controle). As silagens foram confeccionadas em silos experimentais e armazenadas por 30, 60, 90 ou 120 dias antes da abertura dos silos. Foi avaliada a composição bromatológica da forragem antes e após a ensilagem, e as perdas fermentativas durante o processo. O aditivo avaliado reduziu (p <0,01) a produção de efluente (11,4 kg t⁻¹) em relação à silagem Controle (14,0 kg t⁻¹). A inoculação com aditivo elevou os teores de Fibra em Detergente Neutro (FDN) e Fibra em Detergente Ácido (FDA), de 45,6 e 24,5% para 47,0 e 25,1% para as silagens controle e com aditivo, respectivamente. Os tempos de armazenamento influenciaram (p < 0,01) a produção de efluente, a perda de matéria seca (PMS), os teores de FDN e FDA, e o pH das silagens. As silagens apresentaram bons parâmetros de qualidade e as perdas fermentativas observadas foram bastante reduzidas, dadas as adequadas características da cultura do milho para a ensilagem.

Additive containing homo and heterolactic bacteria on the fermentation quality of maize silage / Aditivo contendo bactérias homo e heteroláticas sobre a qualidade fermentativa da silagem de milho

This trial evaluated the addition of Lactobacillus plantarum, L. brevis and Enterococcus faecium combo additive against a control treatment. The silages were made in laboratory silos that were stored for 30, 60, 90 or 120 days before opening. We evaluated the chemical composition of the forage before and after ensiling and the fermentative losses of silages. The additive decreased (p < 0.01) effluent production (11.4 kg ton⁻¹) compared to control silage (14.0 kg ton⁻¹), but it increased (p < 0.01) the Neutral Detergent Fiber (NDF) and Acid Detergent Fiber (ADF) from 45.6% and 24.5% to 47.0 and 25.1% for control and additive silages, respectively. The storage periods affected (p < 0.01) effluent production, Dry Matter Losses (DML), NDF, ADF and pH variables. Fermentative losses were very low because of the adequate characteristics of maize for ensilage.(AU)

O presente ensaio experimental avaliou inoculação de aditivo composto por Lactobacillus plantarum, L. brevis e Enterococcus faecium em relação à silagem sem aditivo (Controle). As silagens foram confeccionadas em silos experimentais e armazenadas por 30, 60, 90 ou 120 dias antes da abertura dos silos. Foi avaliada a composição bromatológica da forragem antes e após a ensilagem, e as perdas fermentativas durante o processo. O aditivo avaliado reduziu (p <0,01) a produção de efluente (11,4 kg t⁻¹) em relação à silagem Controle (14,0 kg t⁻¹). A inoculação com aditivo elevou os teores de Fibra em Detergente Neutro (FDN) e Fibra em Detergente Ácido (FDA), de 45,6 e 24,5% para 47,0 e 25,1% para as silagens controle e com aditivo, respectivamente. Os tempos de armazenamento influenciaram (p < 0,01) a produção de efluente, a perda de matéria seca (PMS), os teores de FDN e FDA, e o pH das silagens. As silagens apresentaram bons parâmetros de qualidade e as perdas fermentativas observadas foram bastante reduzidas, dadas as adequadas características da cultura do milho para a ensilagem.(AU)

BACTÉRIAS LÁTICAS EM SILAGEM DE ALFAFA E DESEMPENHO DE BOVINOS DE CORTE ALIMENTADOS COM SILAGENS DE ESTILOSANTES OU MILHO, COM E SEM CONCENTRADO PROTEICO.

Objetivou-se com esse trabalho avaliar o perfil de fermentação e a utilização de silagens de leguminosas em dietas de bovinos de corte. Para isso, foram conduzidos três experimentos. O primeiro experimento (capítulo I) foi realizado para avaliar o perfil fermentativo, a composição química e as populações microbianas de silagens de alfafa tratadas com inoculantes microbianos (I) em dois cortes (C). Foi utilizado um esquema fatorial 4 × 2 (quatro inoculantes e dois cortes), em um delineamento inteiramente casualizado, com quatro repetições. Os inoculantes avaliados foram: 1. Sem inoculante (Controle); 2. Lactobacillus plantarum (AV 14.17); 3. Mistura de L. plantarum, L. brevis e P. acidilactici (Combo); e 4. Inoculante comercial (IC). Todos os inoculantes foram aplicados na taxa de 106 UFC/g MN de forragem. Os inoculantes usados nos tratamentos 2 e 3 foram selecionados de estudo prévio com silagens de alfafa. Os cortes foram realizados em janeiro (corte 1) e março (corte 2) de 2016. Foram usados os mesmos inoculantes e procedimentos para ensilagem em ambos os cortes. O menor pH foi encontrado para as silagens tratadas com a cepa AV 14.17, enquanto o teor de nitrogênio amoniacal foi maior para a silagem controle no corte 2. O pH e a concentração de nitrogênio amoniacal foram menores nas silagens do corte 2, com médias de 4,34 e 59,86 g/kg N total, respectivamente. No corte 2 a silagem tratada com a cepa AV 14.17 apresentou maior teor de carboidratos solúveis residual. Foi observada maior recuperação de matéria seca na silagem controle no corte 1 em relação ao corte 2 (974,4 vs. 950,4 g/kg MS). Na avaliação da composição química, o teor de matéria seca foi maior para as silagens tratadas com os inoculantes microbianos em relação à silagem controle e o teor de proteína bruta apenas diferiu entre os cortes, com maiores valores para o corte 2. Houve efeito de interação I × C sobre os teores de FDN e FDA. Silagens produzidas no corte 1 apresentaram menores valores de FDN e FDA quando tratadas com o inoculante comercial e o combo, respectivamente. O teor de NIDA não diferiu entre as silagens. Foi observado maior teor de ácido lático e menor teor de ácido acético nas silagens produzidas no corte 2. Houve efeito de interação I × C sobre a relação ácido lático: ácido acético, sendo registrado maior valor na silagem tratada com a cepa AV 14.17 no corte 2. Houve efeito de interação I × C na população de leveduras, com menor contagem para o inoculante comercial no corte 2. As contagens de bactérias láticas foram maiores e de fungos menores no corte 1. A cepa AV 14.17 reduz o pH e o teor de nitrogênio amoniacal e aumenta a relação ácido lático: ácido acético em silagens de alfafa produzidas em condições tropicais, apresentando potencial de uso como inoculante. Nos outros dois experimentos (capítulo II), foram avaliados a digestibilidade, fermentação ruminal, utilização do nitrogênio e o desempenho de bovinos de corte alimentados com dietas contendo silagem de Stylosanthes cv. Campo Grande (StS) ou de milho (SM) e dois concentrados, sem (C1) ou com farelo de soja (C2). Foi utilizada relação forragem: concentrado de 50:50, na base da matéria seca. No primeiro experimento, quatro bovinos com peso médio de 200 ± 15,7 kg, fistulados no rúmen e abomaso, foram distribuídos em delineamento em quadrado latino, em arranjo fatorial 2 × 2, sendo dois volumosos (StS ou SM) e dois concentrados (C1 ou C2). O experimento foi constituído de quatro períodos experimentais com duração de 16 dias cada. No segundo experimento, dietas semelhantes foram avaliadas em 48 bovinos da raça Nelore com peso médio de 358 ± 30 kg, distribuídos em arranjo fatorial 2 × 2, no delineamento inteiramente casualizado, com 12 repetições. O período experimental teve 99 dias de duração, dos quais 15 dias foram para a adaptação e 84 para a coleta de dados. No primeiro experimento, as digestibilidades ruminal, intestinal e total dos nutrientes não foram influenciadas pelas dietas (P > 0,05). Os consumos de CNF e NDT foram maiores (P < 0,05) para as dietas contendo SM. O consumo de FDNi foi maior para as dietas contendo StS (P < 0,05). Houve tendência (P < 0,10) de maior consumo de MS, PB, MO e FDN para as dietas contendo SM. O tipo de concentrado afetou o consumo de nitrogênio, sendo maior valor obtido para a dieta contendo C2 (P = 0,03). O balanço de nitrogênio foi maior para a dieta contendo SM (P = 0,047). Houve tendência (P < 0,10) de maior síntese de proteína microbiana para as dietas contendo SM e de interação para a eficiência microbiana, sendo maior para a SM com o C2. No segundo experimento, os consumos de MS, MO, PB e FDN foram afetados pelo concentrado, sendo maiores (P < 0,05) para o C2. Os consumos de FDNi e de EE foram maiores (P < 0,05) para as dietas com StS. As dietas contendo SM apresentaram maior consumo de CNF (P < 0,05) e tendência de maior consumo de FDN (P =0,06). A digestibilidade aparente total dos nutrientes não foi afetada (P > 0,05) pelas dietas. Os ganhos médios diários de peso e de carcaça foram maiores (P < 0,05) para as dietas contendo C2, com médias de 1,3 kg e 0,81 kg, respectivamente. No entanto, houve tendência (P = 0,07) de maior eficiência alimentar para as dietas contendo SM. O rendimento de carcaça não foi afetado (P > 0,05) pelas dietas. Desta forma, conclui-se que a StS não altera os GMD e GMDC em bovinos de corte na fase de terminação, podendo substituir a silagem de milho, sem alterar a amônia e o pH ruminal. No entanto, deve-se manejar a fonte de concentrado de forma a não prejudicar os parâmetros produtivos.

The objective of this work was to evaluate the fermentation profile and the use of legume silages in beef cattle diets. Three experiments were developed: The first experiment (chapter I) was carried out to evaluate the changes on the fermentation profile, chemical composition and microbial populations of alfalfa silages treated with microbial inoculants (I) in two cuts (C). The experiment was conducted according to the completely randomized design in a 4 × 2 factorial scheme (four microbial inoculants and two cuts), with four replicates. The inoculants evaluated were: 1. No inoculant (Control); 2. Lactobacillus plantarum (AV 14.17); 3. Mixture of L. plantarum, L. brevis and P. acidilactici (Combo); and 4. Commercial inoculant (CI). All inoculants were applied at the rate of 106 CFU/g fresh matter. The inoculants used in the treatments 2 and 3 were selected from a previous study with alfalfa silages. The cuts were performed in January (cut 1) and March (cut 2), 2016. The same inoculants and procedures were used for ensiling in both cuts. The silages treated with the strain AV 14.17 showed the lowest pH while ammonia nitrogen content was higher for the control silage in the cut 2. The pH and ammonia nitrogen concentration were lower in the silages produced in the cut 2, with averages of 4.34 and 59.86 g/kg total N, respectively. In the second cut, the strain AV 14.17 resulted in higher concentration of residual water-soluble carbohydrates in the silage. The dry matter recovery was higher in the control silage in the cut 1 compared to the cut 2 (974.4 vs. 950.4 g/kg DM). In the chemical composition evaluation, the dry matter content was higher for the silages treated with microbial inoculants compared to the control silage and the crude protein content was different only between cuts, where the cut 2 showed the highest value. The NDF and ADF contents were affected by the I × C interaction. The silages produced in the cut 1 showed lower values of NDF and ADF when treated with the commercial inoculant and the combo, respectively. The ADIN content did not differ between silages. It was observed higher lactic acid content and lower acetic acid content in the silages produced in the cut 2. There was an I × C interaction effect for the lactic acid to acetic acid ratio, with the highest value found for the silage treated with the strain AV 14.17 in the cut 2. There was an I × C interaction effect on the yeast population with the lower number for the commercial inoculant in the cut 2.The lactic acid bacteria number was higher and the mold number was lower for the silages in the cut 1. The strain AV 14.17 reduce the pH and ammonia nitrogen content and increase the lactic acid to acetic acid ratio in alfalfa silages produced in tropical regions, presenting potential of use as inoculant. In the other two experiments (chapter II) were evaluated the digestibility, ruminal fermentation, nitrogen utilization and performance of beef cattle fed diets containing Stylosanthes cv. Campo Grande silage (StS) or corn silage (CS) and two concentrates, without (C1) or with soybean meal (C2). A 50:50 forage: concentrate ratio was used, on a DM basis. In the first experiment, four bulls with an average initial body weight (BW) of 200 ± 15.7 kg, rumen and abomasum fistulated, were distributed to a latin square with a 2 × 2 factorial design, two silages (StS or CS) and two concentrates (C1 or C2). The experiment consisted of four experimental periods with a duration of 16 days each. In the second experiment, the same diets were evaluated and 48 Nellore bulls with an average initial BW of 358 ± 30 kg were distributed to a 2 × 2 factorial arrangement in a complete randomized design, with 12 replicates. The experimental period lasted 99 days: 15 days for adaptation and 84 days for data collection. In the first experiment, diets did not alter the ruminal, intestinal and total nutrient digestibility (P > 0.05). The NFC and TDN intake were higher (P < 0.05) for diets containing CS. The iNDF intake was higher for diets containing StS (P <0.05). There was a tendency (P <0.10) of higher intake of DM, CP, OM and NDF for diets containing CS. There was a concentrate effect on the nitrogen intake, and the diets containing C2 provided the highest value (P = 0.03). The nitrogen balance was higher for the CS-based diet (P = 0.047). There was a tendency (P < 0.10) of greater microbial protein synthesis for the CS-based diet and a S × C interaction for microbial efficiency, with higher value for the CS with the C2. In the second experiment, the C2 showed the highest values for DM, OM, CP and NDF intakes (P < 0.05). The iNDF and EE intakes were higher (P < 0.05) for the StS-based diet, while diets containing CS showed higher (P < 0.05) NFC intake and a tendency (P < 0.06) of higher NDF intake. The total apparent digestibility of the nutrients was not affected (P > 0.05) by diets. The ADG and CADG were higher (P < 0.05) for the diets containing the C2, with averages of 1.3 kg and 0.81 kg, respectively. The dressing was not affected (P > 0.05) by diets. The CS-based diet tended (P = 0.07) to improve feed efficiency. Thus, it is concluded that StS-based diet does not alter the ADG and CADG of beef cattle in the finishing phase, being able to replace corn silage diets without altering the ammonia and ruminal pH. However, the concentrate source must be handled in a way that does not affect production parameters.

Seleção de bactérias láticas do leite de transição bovino fermentado e efeito antagônico frente a Escherichia coli e Staphylococcus aureu

Bactérias ácido láticas (BAL) produzem substâncias que podem auxiliar no controle de doenças bacterianas e inibir o crescimento de microrganismos patogênicos e deteriorantes em alimentos. A atividade antibacteriana dessas bactérias é de grande interesse na saúde animal e humana e nas indústrias farmacêuticas e alimentícias, pois podem reduzir o uso de de antimicrobianos convencionais. O gênero Lactobacillus é um dos mais estudado por produzir bacteriocinas que inibem o crescimento de microrganismos patogênicos como Staphylococcus aureus e Escherichia coli. O objetivo neste estudo foi avaliar o potencial inibitório in vitro de bactérias ácido láticas provenientes do leite de transição fermentado de bovinos contra cepas de Escherichia coli e Sthaphylococcus aureus de origem bovina. Em um primeiro estudo, bactérias ácido láticas foram isoladas do leite de transição bovino fermentado durante 141 dias em garrafas vedadas. As amostras foram submetidas a análises físico-químicas de pH e acidez titulável e análises microbiológicas para quantificação de bactérias láticas (BAL), enterobactérias, fungos e leveduras. Bactérias isoladas foram identificadas presuntivamente em galeria API, avaliadas quanto a capacidade de fermentação do leite, tolerância ao pH gástrico e aos sais biliares, e antagonismo frente a Escherichia coli. As amostras do leite fermentado apresentaram elevada contagem de bactérias láticas e baixa contagem de S. aureus. Três estirpes foram identificadas como Lactobacillus brevis e resistiram ao pH ácido e a sais biliares. Entretanto apenas Lactobacillus brevis (A1) apresentou efeito antagônico. No segundo experimento, bactérias ácido láticas foram isoladas de leite do transição bovino fermentado durante 33 dias. As BALs isoladas foram identificadas por análise proteômica e avaliadas quanto à sensibilidade a antimicrobianos, antagonismo frente S. aureus e eficiência de inibição de biofilme aderido em superfície de aço inoxidável e borracha de teteira. Entre os isolados de BAL avaliados foram identificados Lactobacillus paracasei, Lactobacillus casei, Lactobacillus rhamnosus, e Enterococcus spp.. Essas bactérias foram sensíveis a cinco antimicrobianos utilizados no tratamento da mastite bovina e resistente??. Do total de 15 isolados de BAL, nove apresentaram zonas de inibição frente a duas amostras de S. aureus em teste de difusão em ágar por sobrecamada. As eficácias de redução desses biofilmes variaram entre 12 a 15% nas superfícies de aço e de borracha respectivamente. Os resultados indicam que BALs provenientes do leite de transição fermentado possuem efeitos inibitórios frente a E. coli e S. aureus apresentando potencial para produção de substâncias alternativas para redução de biofilme de S. aureus e para elaboração de probioticos para o controle de controle de diarreias em bezerros.

Lactic acid bacteria (BALs) produce substances that can aid in the control of bacterial diseases and inhibit the growth of pathogenic and deteriorating microorganisms in food. The antibacterial activity of these bacteria is of great interest in animal and human health in the pharmaceutical and food industries, as they may reduce the use of conventional antimicrobials. The genus Lactobacillus is one of the most studied for producing bacteriocins that inhibit the growth of pathogenic microorganisms like Staphylococcus aureus and Escherichia coli. The objective of this study was to evaluate the in vitro inhibitory potential of lactic acid bacteria from bovine fermented transition milk against strains of Escherichia coli and Sthaphylococcus aureus of bovine origin. For article I, lactic acid bacteria were isolated from fermented bovine transition milk anaerobically for 141 days. The samples were submitted to physical-chemical analysis of pH and titratable acidity and microbiological analyzes for quantification of lactic bacteria, enterobacteria, fungi and yeasts. Bacteria isolated were presumptively identified in the API gallery, evaluated for fermentation capacity, their probiotic potential in vitro by tolerance to gastric pH and bile salts, and antagonism to Escherichia coli. The samples had high lactic acid counts and low S. aureus counts. Three strains were identified as Lactobacillus brevis and resisted at acid pH and bile salts. However, only Lactobacillus brevis (A1) presented an antagonistic effect. For article II, lactic acid bacteria were isolated from fermented bovine transition milk anaerobically for 33 days. Bacteria isolated were identified by proteomic analysis and evaluated for antimicrobial susceptibility, S. aureus antagonism and biofilm inhibition efficiency adhered to stainless steel surface and teat rubber. Among the BAL isolates evaluated, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus casei, Lactobacillus rhamnosus, and Enterococcus spp. Were identified. These bacteria were sensitive to five antimicrobials used in the treatment of bovine mastitis. From the total of 15 isolates of BAL, nine showed zones of inhibition against two samples of S. aureus in diffusion test in agar by overlay. . The reduction efficiencies of these biofilms ranged from 12 to 15% on the steel and rubber surfaces respectively. The results indicate that BAL from fermented transition milk have inhibitory effects against E. coli and S. aureus and may represent an alternative source for the control of diarrhea in calves, biofilm reduction and prevention of mastitis control in cattle.

Identificação molecular de bactérias ácido-láticas e propriedades probióticas in vitro de Lactobacillus spp. isoladas de queijo Minas artesanal de Araxá, Minas Gerais

O queijo Minas artesanal é elaborado a partir de leite cru com a adição de culturas iniciadoras endógenas. Durante o processo de maturação há o crescimento de bactérias ácido láticas (BAL) que são essenciais para o sabor e contribuem beneficamente para a qualidade sanitária do produto. As BAL têm demonstrado propriedades probióticas, como antagonismo contra patógenos. Porém, há escassez de estudos que identifiquem a microbiota lática desse queijo ao nível molecular e avaliem suas propriedades probióticas. Esse estudo objetivou identificar molecularmente BAL isoladas de queijo Minas artesanal da região de Araxá, Minas Gerais, durante sua maturação por até sessenta dias durante estações seca e chuvosa e avaliar suas propriedades probióticas in vitro. Ao todo, 263 amostras de BAL foram isoladas, 50 delas foram identificadas por sequenciamento do gene 16S rRNA. Foram identificadas bactérias dos gêneros Lactobacillus (74%), Enterococcus (24%) e Bacillus (2%). Dessas, dez amostras de Lactobacillus spp. foram selecionadas para testes in vitro do seu potencial probiótico. Somente L. plantarum (C0) foi sensível a todos os antimicrobianos testados, as outras amostras foram resistentes a pelo menos um antimicrobiano. L. plantarum (E5) apresentou a mais elevada frequência de resistência a antimicrobianos (60%). Seis amostras foram tolerantes ao suco gástrico artificial, com destaque para L. brevis A6, que apresentou crescimento. Na avaliação de resistência aos sais biliares, L. brevis A6, L. casei B5 e L. plantarum E5 foram consideradas tolerantes, tendo a última apresentado o menor índice de inibição, com 20,69%. Apenas L. brevis (E35) produziu peróxido de hidrogênio. Foi observada diferença (p0,05) entre as médias dos halos de inibição de Lactobacillus spp. contra duas bactérias reveladoras: Enterococcus faecalis ATCC 19433 e Lactobacillus plantarum C24. Todas as amostras de Lactobacillus spp. inibiram Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enterica var. Typhimurium ATCC 14028 e Shigella flexneri ATCC 25875 no teste de co-cultivo (p0,0001), exceto L. plantarum (C0) que não inibiu S. flexneri ATCC 25875. Conclui-se que há elevada frequência de Lactobacillus spp. entre as BAL presentes no queijo Minas artesanal produzido na região de Araxá. A maioria delas demonstrou potencial probiótico in vitro. L. brevis (A6) foi selecionada para testes a fim de pesquisar seu potencial probiótico in vivo e utilização para a produção de queijos como micro-organismo benéfico e preservando a identidade do produto.

Minas artisanal cheese is made from raw milk added by endogenous starter cultures. During its ripening process, the growth and metabolic activities of lactic acid bacteria (LAB) are important to produce typical flavor and improve cheese safety. Probiotic properties of such LAB against pathogens have been demonstrated. However, few studies describe the microbiota and probiotic potential of LAB isolated from that cheese. This study aimed to molecularly identify LAB present in 84 samples of Minas artisanal cheese produced in Araxá region throughout ripening either at dry or at rainy seasons and evaluate their in vitro probiotic potential. A total of 263 samples of LAB were isolated and 50 of them were identified by the 16S rRNA gene sequencing. The following genus were identified: Lactobacillus (74%), Enterococcus (24%) e Bacillus (2%). From them, ten Lactobacillus samples were selected to be tested by in vitro probiotic potential. Only L. plantarum (C0) was sensitive to all tested antimicrobials. The other samples were resistant to at least one drug. L. plantarum (E5) showed the higher resistance index (60%). Six Lactobacillus samples were resistant to artificial gastric juice, especially L. brevis A6 which showed growth in that medium. L. brevis A6, L. casei B5 and L. plantarum E5 were resistant to bile salts, and the latter showed the lower index of inhibition (20.69%) Only L. brevis (E35) produced hydrogen peroxide. Mean inhibition haloes of Lactobacillus spp. against Enterococcus faecalis ATCC 19433 and L. plantarum C24 were considered different (p0.05). All Lactobacillus spp. samples were able to antagonize the revealed bacteria in the spot-on-the-lawn test. All Lactobacillus spp. samples inhibited pathogens (Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella Typhimurirum ATCC 14028 and Shigella flexneri ATCC25875) in co-culture test (p0.0001), except L. plantarum (C0) which did not inhibited S. flexneri. Indeed, there is a high frequency of Lactobacillus spp. among the LAB present in Minas artisanal produced in Araxá region. The majority of them showed in vitro probiotic potential. L. brevis (A6) would be selected to be tested for searching its in vivo probiotic potential and use for cheesemaking as a beneficial microorganism, preserving cheese identity.

Evaluation of silage crop and dietary crude protein levels for beef cattle and selection of Lactobacillus buchneri from corn silage for use as inoculant

Capítulo 1 - Foram conduzidos dois experimentos para avaliar os efeitos de tipo silagem e níveis de proteína bruta (PB) na dieta de bovinos Nelore. As dietas experimentais foram constituídas por silagem de Stylosanthes (SSt) ou silagem de milho (SM) com dois níveis de PB, 110 e 130 g PB/kg de dieta na matéria seca (MS). A relação volumoso: concentrado foi de 50:50 com base na MS. No Experimento 1, foram utilizados quatro bovinos com média de peso corporal inicial de 450 ± 37,9 kg, canulados no rúmen e abomaso. Os animais foram distribuídos em um quadrado latino 4 × 4, em esquema fatorial 2 × 2, com quatro períodos de 16 dias. Neste experimento, foram coletadas amostras de líquido ruminal, digesta abomasal, fezes, urina e sangue. Além disso, foram estimados os parâmetros cinéticos de degradação da MS, PB e fibra em detergente neutro (FDN). No Experimento 2, 40 bovinos com média de peso corporal inicial de 374 ± 16,5 kg, distribuídos em um delineamento inteiramente casualizado, em esquema fatorial 2 × 2, com dez repetições. O experimento teve duração de 99 dias, dividido em um período inicial de 15 dias de adaptação e um período de 84 dias de coleta de dados. No Experimento 2, foram avaliados o consumo, a digestibilidade dos nutrientes e o desempenho dos animais. As frações potencialmente degradáveis da MS, PB e FDN da SSt foram inferiores em relação a SM (P<0,004). As dietas contendo SSt apresentaram menor digestibilidade ruminal da matéria orgânica (MO) e menor digestibilidade total da MO, PB e FDN em comparação com as dietas contendo SM (P<0,050). As dietas contendo SSt apresentaram valores mais elevados de pH ruminal em comparação com dietas contendo SM (P=0,010). A concentração ruminal de N-NH3 foi mais elevada para o nível de 130 g PB/kg de dieta, em comparação com 110 g PB/ kg de dieta (P<0,001). Os níveis de PB das dietas afetaram o nitrogênio ureico no sangue (P<0,001) e na urina (P=0,017), e em ambas as dietas contendo SSt e SM foram superiores para o nível de 130 g de PB/kg de dieta. As dietas contendo SSt apresentaram maior consumo de MS, MO, PB, FDN e fibra em detergente neutro indigestível (FDNi) em comparação dietas contendo SM (P<0,008). No entanto, a quantidade de nutrientes digeridos (kg/dia) foi semelhante entre os tratamentos (P>0,050). O tipo de silagem e nível de PB na dieta não apresentaram efeito sobre o desempenho produtivo (P>0,050), porém as dietas contendo SSt tenderam a diminuir a eficiência alimentar (P=0,085). Contudo, a SSt e o nível de 110 g PB/kg de dieta podem ser utilizados para alimentação na terminação de bovinos confinados. Capítulo 2 - Foram isoladas cento e cinquenta e uma cepas de bactérias do acido lático (BAL) da silagem de planta inteira de milho. As identificações foram baseadas na análise da sequência de rDNA 16S. As espécies predominantes foram Lactobacillus plantarum 53,0%, Pediococcus pentosaceus 11,9%, Lactobacillus buchneri 9,9%, Lactobacillus pentosus 5,3%, Weissella cibaria 4,6%, e Lactobacillus brevis 4,0%. As estirpes de Lactobacillus buchneri foram predominantes no dia 56 de ensilagem. Oito estirpes de L. buchneri foram pré-selecionadas de um total de 15 estirpes com base na taxa de crescimento e na produção de metabólitos. As estirpes selecionadas foram avaliadas na fermentação e estabilidade aeróbia de silagens de milho e cana-de-açúcar. Não houve melhoria no teor de MS, população de mofo e leveduras, perdas de MS e estabilidade aeróbia da silagem de milho (P>0,050) inoculadas com as estirpes 56.22, 56.27, 56.28, e 56.29. Enquanto as estirpes 56.1, 56.4 e a comercial 40788, quando inoculadas em silagem de cana-de-açúcar, apresentaram os maiores teores de MS e menores de perda de MS em comparação com a silagem contole (P<0,050). A estirpe comercial apresentou a menor população de mofos e leveduras após 90 dias de ensilagem (P = 0,024). No entanto, a estabilidade aeróbia não foi afetada. Após a exposição ao ar, todas as silagens deterioram e apresentaram elevada população de mofos e leveduras. A pré-seleção de estirpes de L. buchneri com base na produção de ácido acético apresentou os melhores resultados no processo de ensilagem. Assim, as estirpes 56.1 e 56.4 são promissoras para utilização como inoculante para silagem de cana-de-açúcar.

Chapter 1 - Two trials were conducted to evaluate the effects of silage crop and levels of dietary crude protein (CP) in Nellore beef cattle. The experimental diets consisted of Stylosanthes (StS) or corn silage (CS) with two levels of dietary CP, 110 and 130 g CP/kg diet on dry matter (DM) basis. The forage to concentrate ratio was 50:50 on a DM basis. In Experiment 1, four bulls were used, with an average initial body weight (BW) of 450 ± 37.9 kg, surgically cannulated in the rumen and abomasum. The bulls were assigned to a 4 × 4 Latin square with a 2 × 2 factorial design of treatments, and four 16-day periods. In this experiment, we collected ruminal fluid, abomasal digesta, feces, urine, and blood. In addition, the kinetic parameters of DM, CP and neutral detergent fiber (NDF) degradation were estimated. In Experiment 2, 40 bulls with an average initial BW of 374 ± 16.5 kg were distributed into a 2 × 2 factorial in a randomized design with ten replicates. The trial lasted 99 days and was divided into a 15-day period for adaptation and an 84-day period for data collection. The intake and digestibility of nutrients, as well as animal performance were evaluated in Experiment 2. The potentially degradable fractions of DM, CP, and NDF of StS were lower than CS (P<0.004). The diets containing StS showed lower ruminal digestibility of organic matter (OM) and lower total digestibility of OM, CP, and NDF than diets containing CS (P<0.050). The StS-based diets showed higher values for ruminal pH in comparison with CS-based diets (P=0.010). The ruminal NH3-N concentration was higher for the level of 130 g CP/kg diet in comparison with 110 g CP/kg diet (P<0.001). The dietary CP level affected urea nitrogen in blood (P<0.001) and urine (P=0.017), which in the diets containing StS and CS were higher at the level of 130 g CP/kg diet. The diets containing StS showed higher intake of DM, OM, CP, NDF, and indigestible neutral detergent fiber (iNDF) than diets containing CS (P<0.008). However, the amount of digested nutrients (kg/d) was similar between treatments (P>0.050). The silage crop and dietary CP levels had no effect on productive performance (P>0.050), but the StS-based diet tended to decrease feed efficiency (P=0.085). Thus, StS, as well as the level of 110 g CP/kg diet, can be used to feed finishing beef cattle. Chapter 2 - One hundred and fifty-one LAB strains were isolated from whole-plant corn silage in tropical weather. Their identifications were based on sequence analysis of 16S rDNA. The predominant species were Lactobacillus plantarum 53.0%, Pediococcus pentosaceus 11.9%, Lactobacillus buchneri 9.9%, Lactobacillus pentosus 5.3%, Weissella cibaria 4.6%, and Lactobacillus brevis 4.0%. Lactobacillus buchneri strains were predominant at day 56 of ensiling. Eight L. buchneri strains from a total of 15 were preselected, based on growth rate and metabolites production. The strains selected were evaluated on fermentation and aerobic stability of corn and sugarcane silages, four strains in each crop. There was no improvement of the inoculation with the strains 56.22, 56.27, 56.28, and 56.29 on the DM content, yeast and molds population, DM losses, and aerobic stability of corn silage (P > 0.050). Inoculated silages had lower concentration of acetic acid and higher ethanol in comparison with the control silage (P < 0.050). While the strains 56.1, 56.4, and 40788 showed highest DM content, and lowest DM losses when applied in sugarcane silage. At day 90 of ensiling, the commercial strain showed lowest population of yeasts and molds in sugarcane silage. However, the aerobic stability was not affected. After air exposure, all silages deteriorate and had high population of yeast and molds. Preselection of L. buchneri strains based on acetic acid production showed the best results on silage fermentation. Thus, the strains 56.1 and 56.4 are promising for use as an inoculant in sugarcane silages.

Bactérias ácido-láticas de silagem, água, leite, soro - fermento endógeno e queijo minas artesanal da região de campo das vertentes: isolamento, identificação molecular e avaliações in vitro e in vivo do potencial probiótico

O estado de Minas Gerais é famoso pelo seu queijo artesanal (QMA) produzido a partir de leite cru e inoculado com soro fermento endógeno, também conhecido como pingo. Em virtude de sua produção artesanal, esse queijo é rico em bactérias do ácido lático (BAL), provenientes de diferentes origens como soro fermento, silagem, água e leite, podendo manifestar potencial probiótico. O objetivo desse presente trabalho foi identificar molecularmente Lactobacillus spp., e Pediococcus acidilactici isolados de silagem, água, leite, soro fermento e QMA fresco (0 dias) e maturado (7, 14,21,28 e 60 dias), de sete queijarias e verificar suas origens por meio de relações filogenéticas entre as amostras, bem como caracterizar seu potencial probiótico in vitro e in vivo. Noventa e quatro amostras Gram positivo e catalase negativo foram submetidas à reação de rDNA 16S-23S, sendo posteriormente selecionadas trinta e seis amostras como sendo pertencentes ao gênero Lactobacillus/Pediococcus. O sequenciamento do gene rRNA 16S identificou cinco espécies: Lactobacillus plantarum, L. paracasei, L. brevis, L. rhamnosus e Pediococcus acidilactici. A reação de fingerprinting via rep-PCR (GTG)5 permitiu a montagem de um dendrograma via UPGMA e mostrou predominância de Lactobacillus plantarum (75,7%)em todas as origens pesquisadas, seguido de L. brevis (9,1%), L. paracasei (6,1%), P. acidilactici (6,1%) e L. rhamnosus (3,0%). Essas amostras foram submetidas aos testes in vitro, sendo seleciondas quanto ao seu potencial probiótico com base na resistência aos sais biliares, resistência aos ácidos em pH 2.0 e pH 1.5. Um total de oito amostras foram selecionadas por meio destes testes, sendo posteriormente submetidas à avaliação de susceptibilidade aos antimicrobianos e antagonismo frente a microrganismos patogênicos. Duas amostras (Lactobacillus plantarum LP4 e Pediococcus acidilactici PA2) foram selecionadas para os testes in vivo por apresentarem bons percentuais de resistência aos sais biliares e ácidos, baixos percentuais de resistência aos antimicrobianos e antagonizar a ação de microrganismos patogênicos. Os resultados de mortalidade e desenvolvimento ponderal de camundongos desafiados com Salmonella enterica sorovar Typhimurium e associados ou não à administração oral de LP4 e PA2 exibiram baixo efeito protetor por parte das duas amostras, embora LP4 tenha apresentado desenvolvimento ponderal superior (p<0,05) aos controles negativo e positivo (uma amostra comercial de Lactobacillus casei). Esses resultados indicam que a amostra L. plantarum LP4 poderia ser mais explorada em futuras pesquisas referentes ao uso desse microrganismo quanto ao seu potencial probiótico.

Minas Gerais state is known for its famous artisanal cheese, made from raw milk and innoculated with endogenous starter culture named pingo. Due to its artisanal production, that cheese is rich in lactic acid bacteria (LAB), that may occur in different sources, such as environment, milk, starter cultures and also water. The aim of this study was to molecularly identify Lactobacillus spp. and Pediococcus spp. isolated from water, silage, milk, endogenous starter culture and Minas artisanal cheese fresh (0d) and rippened (7,14,21,28,and 60 days), from different dairy farms and identify its origin by stablishing phylogenetical relations between these samples, as well as evaluate its in vitro and in vivo probiotic potential. Ninety four Gram postive and catalase-negative samples were submitted to rRNA 16S-23S PCR reaction, and later thirty six being selected as belonging to Lactobacillus/Pediococcus group. The rRNA 16S sequencing showed five species: Lactobacillus plantarum, L. paracasei, L. brevis, L. rhamnosus and Pediococcus acidilactici. The rep-PCR (GTG)5 fingerprinting reaction allowed the montage of a dendrogram via UPGMA and showed Lactobacillus plantarum predominance amongst he other LAB (75,7%) from all the studies sources, followed by L. brevis (9,1%), L. paracasei (6,1%), P. acidilactici (6,1%) and L. rhamnosus (3,0%). These samples were then submitted to in vitro tests, being selected for its probiotic potential regarding biliar salts and acid (pH 2.0 and pH 1.5) resistance. A total of eight samples were selected by these tests, and then evaluated its antimicrobial susceptibility and pathogenic inhibition rate. Two samples (Lactobacillus plantarum LP4 and Pediococcus acidilactici PA2) showed best biliar salt and acid resistance, high pathogenic inhibition rate and low antibiotic resistance percentual and then were selected for in vivo evalution. The results of lethality and weight gain in mice orally infected with Salmonella entérica sorovar. Typhimurium and associated or not with oral administration of LP4 and PA2 showed low protective effect of bboth samples; although LP4 had showed hgher values of weight gain (p<0,05) in contrast of negative and positive (a comercial sample of L. casei) controls. These results indicates that L. plantarum LP4 sample showed satisactory in vitro values, as well as weight gain in orally infected S. Typhimurium mice, favoring future studies refering its use as a potential probiotic

Queijo minas artesanal fresco de produtores não cadastrados da mesorregião de Campos das Vertentes- MG: Qualidade microbiológica e físico-química em diferentes épocas do ano.

A produção de queijo Minas artesanal (QMA) é uma atividade tradicional em vários municípios de Minas Gerais. Preconiza-se a utilização de leite-cru e soro-fermento, popularmente conhecido como pingo, nas regiões produtoras. O queijo Minas artesanal apresenta uma microbiota diversificada influenciada pelas características históricas, agro- ecológicas e climáticas de cada região do estado onde é produzido. Após a identificação legal de Campo das Vertentes como produtora de queijo Minas artesanal, tem-se visto, na região, um número cada vez maior de produtores interessados em obter o cadastramento no Serviço de Inspeção Estadual. Nesse sentido, caracterizar o queijo Minas artesanal elaborado por produtores não cadastrados na região de Campo das Vertentes se faz necessário tanto para o conhecimento do queijo produzido quanto para a legalização destes produtores. O objetivo do trabalho foi comparar, dos pontos de vista microbiológico e físico-químico, queijos Minas artesanais frescos elaborados por produtores não cadastrados no Instituto Mineiro de Agropecuária nos períodos da seca e da chuva. Foram coletadas amostras de água, leite cru, soro-fermento e queijo com um dia de produção de propriedades rurais localizadas na região de Campo das Vertentes. Em relação as amostras de água, houve maior contagem de mesófilos aeróbios, menor pH e menor concentração de cloro residual no período da chuva (p<0,05). As médias de CCS e medianas de CBT das amostras de leite foram semelhantes (p>0,05), independentemente da época do ano. A gordura do leite cru foi superior (p<0,05) no período da chuva. As medianas de NMP de coliformes a 30°C e coliformes a 45°C das amostras de queijo e leite cru e, no caso do soro-fermento, apenas as medianas de NMP de coliformes a 30°C, foram superiores (p<0,05) no período da chuva. O queijo elaborado no período da seca apresentou maior contagem de bactérias ácido-láticas, no meio ágar M17, de bolores e leveduras e maior acidez titulável (p<0,05). Os queijos apresentaram altos teores de umidade sendo classificados como queijos de alta umidade e muito alta umidade, na chuva e seca, respectivamente. Staphylococcus spp. foi encontrado em contagens elevadas, sendo que queijo e soro-fermento coletados no período da chuva apresentaram maior contagem de Staphylococcus coagulase positivo (p<0,05). Do total de manipuladores de queijo Minas artesanal, 42,86% foram portadores de Staphylococcus coagulase positivo em suas mãos. Salmonella spp. não foi isolada nas amostras de leite cru, soro-fermento e queijo Minas artesanal fresco. Bactérias ácido-láticas foram encontradas em elevadas contagens nas amostras de leite cru, soro-fermento e queijo. Dentre as amostras identificadas por biologia molecular, Enterococcus faecalis apresentou frequência de isolamento (44%) mais elevada nas amostras de leite, soro-fermento e queijo, seguida por Lactococcus lactis (20%) e Lactobacillus plantarum (16%). Enterococcus durans, Enterococcus pseudoavium, Aerococcus viridans e Lactobacillus brevis foram isolados de soro-fermento utilizado na elaboração de queijo Minas artesanal fresco, sem haver descrições prévias na literatura pesquisada da presença desses micro-organismos neste tipo de produto. Os resultados deste trabalho indicaram, de forma geral, maior contaminação do queijo e de suas matérias-primas no período da chuva. A estação do ano também influenciou, em menor intensidade, nos parâmetros físico-químicos de água, leite cru e queijo. Adicionalmente, este estudo reforçou a necessidade de adequações na cadeia de produção do QMA, nas propriedades não cadastradas da região de Campo das Vertentes, para a garantia de um produto seguro, competitivo e valorizado por suas características tradicionais.

The production of artisanal Minas cheese is traditional in Minas Gerais. This cheese is made using raw cow' milk and endogenous culture. The artisanal Minas cheese presents a diverse microbiota influenced by region of the state where it is produced. There are few data about the microbiota present in this food. The aim of this study was to determine the microbiological and physical-chemical characteristics of artisanal Minas cheese produced by non-registered cheesemakers from Campos das Vertentes region, Minas Gerais, in two different seasons, rainy and dry seasons. Samples of water, raw milk, endogenous culture and cheese from rural properties were analyzed. In water, Aerobic Plate Count (APC) was higher (p <0.05) in the rainy season. However, the pH and residual chlorine was higher (p <0.05) in the dry season (p <0.05). There were not any differences on the Somatic Cell Counts (SCC) and Total Bacterial Count (TBC) in samples of milk when seasons were compared. The fat of the raw milk was higher (p <0.05) in the rainy season. The most probable number of total and thermotolerant coliforms was significant difference (p <0.05) in samples of raw milk and cheese. In endogenous culture, the most probable number of thermotolerant coliforms was higher (p<0.05) in the dry rainy season.The cheese exhibited higher counts of lactic acid bacteria, in M17 medium, molds and yeasts and higher acidity in the dry season (p <0.05). The cheeses exhibited high moisture regardless of the season. Staphylococcus spp. was found in high numbers in cheeses and Staphylococcus coagulase positive were higher (p <0.05) in cheese and endogenous culture during the rainy season. Fifty percent of artisanal Minas cheese handlers were carriers of Staphylococcus coagulase positive in their hands. Salmonella spp. were not detected in any sample inspected. High counts of lactic acid bacteria (LAB) were observed in all samples. Enterococcus faecalis was the most frequent (44%) species in milk, endogenous culture and cheese, followed by Lactococcus lactis (20%) and Lactobacillus plantarum (16%). Enterococcus durans, Enterococcus pseudoavium, Aerococcus viridans and Lactobacillus brevis were isolated from endogenous culture and it is probably the first description of these LAB in this product. These results indicated more contamination of samples in the rainy season. The seasons also influenced the physical and chemical parameters of water, raw milk and cheese. These results suggest the need of adjustments in the production of artisanal Minas cheese in order to guarantee a safe and competitive food, aside from being valorized for its traditional characteristics.

Atividade antimicrobiana de bactérias lácticas isoladas de queijo de baixa umidade frente a Staphylococcus aureus ATCC6538 e Listeria monocytogenes ATCC7644 / Antimicrobial activity of lactic acid bacteria isolated from cheese, low moisture against Staphylococcus aureus ATCC6538 and Listeria monocytogenes ATCC7644

Há uma crescente preocupação na indústria de alimentos com o desenvolvimento de métodos para o controle de microrganismos indesejáveis na tentativa de satisfazer os consumidores que estão mais exigentes e atentos aos conservadores contidos nos alimentos. As bactérias láticas (BAL) despertam interesse devido ao seu potencial de utilização no biocontrole em alimentos, pois podem exercer atividade inibitória frente a outras bactérias. No presente trabalho o isolamento de BAL foi realizado em 60 amostras de queijo de baixa umidade. Das 66 linhagens isoladas, 10 foram identificadas baseando-se na coloração de Gran, reação com KOH, teste de catalase e fermentação de 49 carboidratos (API 50 CH). Nove cepas tiveram atividade inibitória comprovada pela produção de bacteriocina e foram identificadas como Lactobacillus paracasei subsp. Paracasei PI, Lactobacillus plantarum PI, Lactobacillus brevis PICI, Lactobacillus brevis PIC2, Lactobacillus paracasei subsp. paracasei P2Cl, Lactobacillusparacasei subsp. paracasei P3C I, Lactobacillus paracasei subsp. Paracasei P3C2, Lactobacillus, plantarum P3Cl, Lactobacillus plantarum P3C2. Foi observado que as BAL isoladas e identificadas apresentaram significativa atividade inibitória frente a L. monocytogenes ATCC 7644 e a S. aureus ATCC 6538, conferindo-lhes vantagem competitiva de grande relevância para futuras aplicações em alimentos. (AU)

Food quality and safety raise increasing concerns among consumers, but the use of chemical preservatives to prevent spoilage and/or growth of microbial pathogens is also seen with preoccupation. Biopreservation approaches using lactic acid bacteria (BAL) and/or their metabolites is an importantalternative to improve food safety. BAL can synthesize and excrete antimicrobial peptides denominated bacteriocins. Current research on BAL are conducted aiming to broad their application as natural food preservatives. In this work the isolation of BAL was realized in 60 samples of cheese of low humidity. Of the 66 isolates, 10 were identified basing on the Gram staining, reaction with KOH, catalase test andfermentation of 49 carboidratos (API 50 CH). Nine strains had inhibitory activity proven for the bacteriocin production and they were identified as Lactobacillus paracasei subsp. Paracasei P1, Lactobacillus plantarum P1, Lactobacilius brevis P1C1, Lactobacillus brevis P1C2, Lactobacillus paracasei subsp. paracasei P2C1, Lactobacillus paracasei subsp. Paracasei P3C1, Lactobacillus paracasei subsp. paracasei P3C2, Lactobacillus, plantarum P3C1, Lactobacilius plantarum P3C2. Ali BAL that produced bacteriocin displayed significant inhibitory activity against L. monocytogenes ATCC 7644 and S. aureus ATCC 6538, and this property is of great interest for future applications in foods. (AU)