An outbreak of malignant catarrhal fever in Sambar deer (Rusa unicolor) / Surto de febre catarral maligna em cervos Sambar (Rusa Unicolor)

Malignant catarrhal fever (MCF) is an infectious, pansystemic and highly fatal disease with wide geographic distribution. The species that are clinically prone to it include cattle, deer and bison. In Brazil, the disease in ruminants and deer is associated with the contact with sheep, especially during labor, when the fetal remains that are eliminated contain the ovine herpesvirus 2 (OvHV-2). The outbreak took place in a conservationist property in the city of Casimiro de Abreu/RJ, which hosted 23 Sambar deer, and, of these, 19 died, showing neurological signs. The deer lived in a location together with 15 male and female meat sheep. A female specimen of the Sambar deer (Rusa unicolor), aged approximately three years, which had presented with neurological clinical signs was referred to necropsy in the Setor de Anatomia Patológica at Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (SAP/UFRRJ). During necropsy, cerebrospinal fluid was sampled for analysis; fragments of several organs were fixated in 10% buffered formalin and processed for histopathological analysis. Fragments of occipital lobe, cerebellum and bulb were collected to perform the polymerase chain reaction (PCR). The diagnosis of this outbreak was based on epidemiological, clinical and pathological findings, and on the amplification of the OvHV-2 DNA through PCR. The histological changes were the base to confirm the MCF case and were characterized by degeneration of vascular endothelial cells, fibrinoid vasculitis, hyperplasia and necrosis of lymphoid organs. However, PCR was an important tool to confirm the diagnosis. MCF as an important disease with nervous symptomatology in deer.(AU)

A febre catarral maligna (FCM) é uma doença infecciosa, com distribuição geográfica ampla, pansistêmica e altamente fatal. As espécies clinicamente suscetíveis incluem bovino, cervo e bisão. No Brasil, a doença em ruminantes e cervídeos está associada ao contato com ovinos, principalmente durante o parto, no qual os envoltórios fetais eliminados contém, em suas secreções, o Herpesvírus ovino-2 (OvHV-2). O surto ocorreu em uma propriedade conservacionista no município de Casimiro de Abreu/RJ, que abrigava 23 cervos exóticos, onde foram registradas a morte de 19 destes, com sinais neurológicos. Os cervos habitavam em um piquete com 15 ovinos de corte, machos e fêmeas. Um exemplar de cervo sambar (Rusa unicolor), fêmea, com aproximadamente três anos de idade, que havia apresentado sinais clínicos neurológicos foi encaminhado para necropsia no Setor de Anatomia Patológica da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (SAP/UFRRJ). Durante a necropsia foi realizada a coleta de líquido cefalorraquidiano e de fragmentos de lobo occipital, cerebelo e bulbo, para a realização de reação em cadeia da polimerase (PCR). Fragmentos de diversos órgãos foram fixados em formalina 10% tamponada e processados para a análise histopatológica. O diagnóstico do presente surto foi estabelecido com base nos achados epidemiológicos, clínicos, patológicos e na amplificação do DNA do OvHV-2 através da PCR. As alterações histológicas foram a base para confirmar o caso de FCM e caracterizaram-se por degeneração de células endoteliais vasculares, vasculite fibrinoide, hiperplasia dos órgãos linfoides. Contudo, a PCR foi uma ferramenta importante para a confirmação do diagnóstico. Ressalta-se a importância da FCM na lista dos diagnósticos diferenciais de doenças que cursam com sintomatologia nervosa em cervídeos.(AU)

An outbreak of malignant catarrhal fever in Sambar deer (Rusa unicolor) / Surto de febre catarral maligna em cervos Sambar (Rusa Unicolor)

Malignant catarrhal fever (MCF) is an infectious, pansystemic and highly fatal disease with wide geographic distribution. The species that are clinically prone to it include cattle, deer and bison. In Brazil, the disease in ruminants and deer is associated with the contact with sheep, especially during labor, when the fetal remains that are eliminated contain the ovine herpesvirus 2 (OvHV-2). The outbreak took place in a conservationist property in the city of Casimiro de Abreu/RJ, which hosted 23 Sambar deer, and, of these, 19 died, showing neurological signs. The deer lived in a location together with 15 male and female meat sheep. A female specimen of the Sambar deer (Rusa unicolor), aged approximately three years, which had presented with neurological clinical signs was referred to necropsy in the Setor de Anatomia Patológica at Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (SAP/UFRRJ). During necropsy, cerebrospinal fluid was sampled for analysis; fragments of several organs were fixated in 10% buffered formalin and processed for histopathological analysis. Fragments of occipital lobe, cerebellum and bulb were collected to perform the polymerase chain reaction (PCR). The diagnosis of this outbreak was based on epidemiological, clinical and pathological findings, and on the amplification of the OvHV-2 DNA through PCR. The histological changes were the base to confirm the MCF case and were characterized by degeneration of vascular endothelial cells, fibrinoid vasculitis, hyperplasia and necrosis of lymphoid organs. However, PCR was an important tool to confirm the diagnosis. MCF as an important disease with nervous symptomatology in deer.(AU)

A febre catarral maligna (FCM) é uma doença infecciosa, com distribuição geográfica ampla, pansistêmica e altamente fatal. As espécies clinicamente suscetíveis incluem bovino, cervo e bisão. No Brasil, a doença em ruminantes e cervídeos está associada ao contato com ovinos, principalmente durante o parto, no qual os envoltórios fetais eliminados contém, em suas secreções, o Herpesvírus ovino-2 (OvHV-2). O surto ocorreu em uma propriedade conservacionista no município de Casimiro de Abreu/RJ, que abrigava 23 cervos exóticos, onde foram registradas a morte de 19 destes, com sinais neurológicos. Os cervos habitavam em um piquete com 15 ovinos de corte, machos e fêmeas. Um exemplar de cervo sambar (Rusa unicolor), fêmea, com aproximadamente três anos de idade, que havia apresentado sinais clínicos neurológicos foi encaminhado para necropsia no Setor de Anatomia Patológica da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (SAP/UFRRJ). Durante a necropsia foi realizada a coleta de líquido cefalorraquidiano e de fragmentos de lobo occipital, cerebelo e bulbo, para a realização de reação em cadeia da polimerase (PCR). Fragmentos de diversos órgãos foram fixados em formalina 10% tamponada e processados para a análise histopatológica. O diagnóstico do presente surto foi estabelecido com base nos achados epidemiológicos, clínicos, patológicos e na amplificação do DNA do OvHV-2 através da PCR. As alterações histológicas foram a base para confirmar o caso de FCM e caracterizaram-se por degeneração de células endoteliais vasculares, vasculite fibrinoide, hiperplasia dos órgãos linfoides. Contudo, a PCR foi uma ferramenta importante para a confirmação do diagnóstico. Ressalta-se a importância da FCM na lista dos diagnósticos diferenciais de doenças que cursam com sintomatologia nervosa em cervídeos.(AU)

Taxa de infecção pelo Herpesvírus ovino tipo 2 (OvHV-2)em rebanhos de ovinos no Distrito Federal

ABSTRACT: Malignant catarrhal fever (MCF) is a disease caused by bovine infection with ovine herpesvirus type 2 (OvHV-2) and responsible for economic losses in different Brazilian regions. This paper describes the molecular detection of OvHV-2 by nested-PCR (nPCR) in nasal secretion/exfoliation samples and blood cell fraction (BCF) of sheep from 8 properties in the Federal District. Among the 188 nasal samples, 88 (41.5%) were positive to OvHV-2. Pregnant ewe presented no differences at the infection rate in comparison with parous females. Newly calved sheep showed higher OvHV-2 infection rate than female over 60 days of calving. Nasal samples allowed the detection of infected animals by nPCR with efficiency about twice than that in the blood cell fraction samples. In Brazil, epidemiological information about OvHV-2 infection in sheep flocks and factors involved in emergence of FCM outbreaks in cattle are still scarce. This study may provide support for elucidating some characteristics of the disease and for further epidemiological studies in the Federal District and other Brazilian States.

RESUMO: A febre catarral maligna (FCM) é uma doença causada pela infecção de bovinos pelo herpesvírus ovino tipo 2 (OvHV-2), responsável por perdas econômicas em diferentes regiões do Brasil. Neste trabalho descreve-se a detecção molecular por nested-PCR (nPCR) do OvHV-2 em amostras de secreção/esfoliação nasal e fração celular sanguínea (FCS) de ovinos provenientes de 8 propriedades do Distrito Federal. Das 188 amostras nasais analisadas, 88 (41,5%) foram positivas. Ovelhas prenhes não apresentaram diferenças na taxa de infecção em comparação com fêmeas paridas. Fêmeas recém-paridas apresentaram taxa de infecção pelo OvHV-2 maior que em animais que pariram há mais de 60 dias. Amostras de secreção/esfoliação nasal permitiram a detecção por nPCR de animais infectados com uma eficiência aproximadamente duas vezes maior que em amostras de fração celular sanguínea. No Brasil, informações epidemiológicas sobre a infecção pelo OvHV-2 nos rebanhos ovinos e fatores envolvidos no surgimento de surtos de FCM em bovinos são escassos. Este estudo pode servir de subsídio para elucidar as características da enfermidade e para novos estudos sobre a epidemiologia da doença no Distrito Federal e em outros Estados do Brasil.

Taxa de infecção pelo Herpesvírus ovino tipo 2 (OvHV-2) em rebanhos de ovinos no Distrito Federal / Ovine herpesvirus type 2 (OvHV-2) infection rate in sheep herds of the Federal District, Brazil

A febre catarral maligna (FCM) é uma doença causada pela infecção de bovinos pelo herpesvírus ovino tipo 2 (OvHV-2), responsável por perdas econômicas em diferentes regiões do Brasil. Neste trabalho descreve-se a detecção molecular por nested-PCR (nPCR) do OvHV-2 em amostras de secreção/esfoliação nasal e fração celular sanguínea (FCS) de ovinos provenientes de 8 propriedades do Distrito Federal. Das 188 amostras nasais analisadas, 88 (41,5%) foram positivas. Ovelhas prenhes não apresentaram diferenças na taxa de infecção em comparação com fêmeas paridas. Fêmeas recém-paridas apresentaram taxa de infecção pelo OvHV-2 maior que em animais que pariram há mais de 60 dias. Amostras de secreção/esfoliação nasal permitiram a detecção por nPCR de animais infectados com uma eficiência aproximadamente duas vezes maior que em amostras de fração celular sanguínea. No Brasil, informações epidemiológicas sobre a infecção pelo OvHV-2 nos rebanhos ovinos e fatores envolvidos no surgimento de surtos de FCM em bovinos são escassos. Este estudo pode servir de subsídio para elucidar as características da enfermidade e para novos estudos sobre a epidemiologia da doença no Distrito Federal e em outros Estados do Brasil.(AU)

Malignant catarrhal fever (MCF) is a disease caused by bovine infection with ovine herpesvirus type 2 (OvHV-2) and responsible for economic losses in different Brazilian regions. This paper describes the molecular detection of OvHV-2 by nested-PCR (nPCR) in nasal secretion/exfoliation samples and blood cell fraction (BCF) of sheep from 8 properties in the Federal District. Among the 188 nasal samples, 88 (41.5%) were positive to OvHV-2. Pregnant ewe presented no differences at the infection rate in comparison with parous females. Newly calved sheep showed higher OvHV-2 infection rate than female over 60 days of calving. Nasal samples allowed the detection of infected animals by nPCR with efficiency about twice than that in the blood cell fraction samples. In Brazil, epidemiological information about OvHV-2 infection in sheep flocks and factors involved in emergence of FCM outbreaks in cattle are still scarce. This study may provide support for elucidating some characteristics of the disease and for further epidemiological studies in the Federal District and other Brazilian States.(AU)

Taxa de infecção pelo Herpesvírus ovino tipo 2 (OvHV-2) em rebanhos de ovinos no Distrito Federal / Ovine herpesvirus type 2 (OvHV-2) infection rate in sheep herds of the Federal District, Brazil

A febre catarral maligna (FCM) é uma doença causada pela infecção de bovinos pelo herpesvírus ovino tipo 2 (OvHV-2), responsável por perdas econômicas em diferentes regiões do Brasil. Neste trabalho descreve-se a detecção molecular por nested-PCR (nPCR) do OvHV-2 em amostras de secreção/esfoliação nasal e fração celular sanguínea (FCS) de ovinos provenientes de 8 propriedades do Distrito Federal. Das 188 amostras nasais analisadas, 88 (41,5%) foram positivas. Ovelhas prenhes não apresentaram diferenças na taxa de infecção em comparação com fêmeas paridas. Fêmeas recém-paridas apresentaram taxa de infecção pelo OvHV-2 maior que em animais que pariram há mais de 60 dias. Amostras de secreção/esfoliação nasal permitiram a detecção por nPCR de animais infectados com uma eficiência aproximadamente duas vezes maior que em amostras de fração celular sanguínea. No Brasil, informações epidemiológicas sobre a infecção pelo OvHV-2 nos rebanhos ovinos e fatores envolvidos no surgimento de surtos de FCM em bovinos são escassos. Este estudo pode servir de subsídio para elucidar as características da enfermidade e para novos estudos sobre a epidemiologia da doença no Distrito Federal e em outros Estados do Brasil.(AU)

Malignant catarrhal fever (MCF) is a disease caused by bovine infection with ovine herpesvirus type 2 (OvHV-2) and responsible for economic losses in different Brazilian regions. This paper describes the molecular detection of OvHV-2 by nested-PCR (nPCR) in nasal secretion/exfoliation samples and blood cell fraction (BCF) of sheep from 8 properties in the Federal District. Among the 188 nasal samples, 88 (41.5%) were positive to OvHV-2. Pregnant ewe presented no differences at the infection rate in comparison with parous females. Newly calved sheep showed higher OvHV-2 infection rate than female over 60 days of calving. Nasal samples allowed the detection of infected animals by nPCR with efficiency about twice than that in the blood cell fraction samples. In Brazil, epidemiological information about OvHV-2 infection in sheep flocks and factors involved in emergence of FCM outbreaks in cattle are still scarce. This study may provide support for elucidating some characteristics of the disease and for further epidemiological studies in the Federal District and other Brazilian States.(AU)

Malignant Catarrhal Fever in Brazilian cattle presenting with neurological syndrome

Malignant Catarrhal Fever (MCF) was investigated in the central nervous system of cattle with neurological syndrome. Two-hundred-ninety samples were analyzed by histology, and molecular methods to detect ovine herpesvirus type 2 (OvHV-2) were optimized and validated. The qualitative polymerase chain reaction (qualitative PCR) analytical sensitivity was 101 DNA copies/µL and found 4.8% (14/290) positive for OvHV-2. The quantitative polymerase chain reaction (qPCR) analytical sensitivity was 100 DNA copy/µL and 5.9% (17/290) positivity, with 47.1% (8/17) of the positive samples presenting histological evidence of non-purulent meningo-encephalitis. The qualitative PCR products (422 bp of the ORF75 region) were sequenced and submitted to phylogenetic analysis. Identity matrices showed 100% similarity in OvHV-2 samples obtained in this study and those recovered from GenBank, corroborating other studies.(AU)

Obliterative vasculitis caused by ovine herpesvirus type 2 in cattle / Obliterative vasculitis caused by ovine herpesvirus type 2 in cattle

Background: Malignant catarrhal fever (MCF) is a frequently fatal viral infection that affects various wild and domestic ruminants and even pigs, as recently reported. It is a disease characterized by lymphoproliferation, vasculitis and erosiveulcerative lesions in mucosa and skin. In Brazil, the virus that circulates and causes the disease has been identifi ed as OvHV-2. The aim of this study is to describe the clinicopathological changes in a cow with obliterative vasculitis caused by OvHV-2.Case: A two-year-old Gir cow with a history of intermittent diarrhea and progressive weight loss for approximately a year, which had not improved with antibiotic therapy, was euthanized and subjected to necropsy. In the necropsy, the liver was enlarged, fi rm, and had a marbled aspect all over the capsular and cut surfaces (light striations intercalated with dark areas). Cut surfaces also revealed thickening of the vessel walls, which exhibited a branched pattern. There was marked thickening of the small and large intestinal walls. The hepatic, mediastinal and mesenteric lymph nodes were enlarged. The samples were fi xed in 10% phosphate-buffered formalin, routinely processed for histology, embedded in paraffi n, cut 5-µm sections, and stained stained with hematoxylin and eosin. Additionally, sections of the liver and ileum were subjected to Massons trichrome staining. The main microscop

Background: Malignant catarrhal fever (MCF) is a frequently fatal viral infection that affects various wild and domestic ruminants and even pigs, as recently reported. It is a disease characterized by lymphoproliferation, vasculitis and erosiveulcerative lesions in mucosa and skin. In Brazil, the virus that circulates and causes the disease has been identifi ed as OvHV-2. The aim of this study is to describe the clinicopathological changes in a cow with obliterative vasculitis caused by OvHV-2.Case: A two-year-old Gir cow with a history of intermittent diarrhea and progressive weight loss for approximately a year, which had not improved with antibiotic therapy, was euthanized and subjected to necropsy. In the necropsy, the liver was enlarged, fi rm, and had a marbled aspect all over the capsular and cut surfaces (light striations intercalated with dark areas). Cut surfaces also revealed thickening of the vessel walls, which exhibited a branched pattern. There was marked thickening of the small and large intestinal walls. The hepatic, mediastinal and mesenteric lymph nodes were enlarged. The samples were fi xed in 10% phosphate-buffered formalin, routinely processed for histology, embedded in paraffi n, cut 5-µm sections, and stained stained with hematoxylin and eosin. Additionally, sections of the liver and ileum were subjected to Massons trichrome staining. The main microscop

Obliterative vasculitis caused by ovine herpesvirus type 2 in cattle

Background: Malignant catarrhal fever (MCF) is a frequently fatal viral infection that affects various wild and domestic ruminants and even pigs, as recently reported. It is a disease characterized by lymphoproliferation, vasculitis and erosiveulcerative lesions in mucosa and skin. In Brazil, the virus that circulates and causes the disease has been identified as OvHV-2. The aim of this study is to describe the clinicopathological changes in a cow with obliterative vasculitis caused by OvHV-2. Case: A two-year-old Gir cow with a history of intermittent diarrhea and progressive weight loss for approximately a year, which had not improved with antibiotic therapy, was euthanized and subjected to necropsy. In the necropsy, the liver was enlarged, firm, and had a marbled aspect all over the capsular and cut surfaces (light striations intercalated with dark areas). Cut surfaces also revealed thickening of the vessel walls, which exhibited a branched pattern. There was marked thickening of the small and large intestinal walls. The hepatic, mediastinal and mesenteric lymph nodes were enlarged. The samples were fixed in 10% phosphate-buffered formalin, routinely processed for histology, embedded in paraffin, cut 5-µm sections, and stained with hematoxylin and eosin. Additionally, sections of the liver and ileum were subjected to Masson's trichrome staining. The main microscopic alterations were found in the vessels (arteries and veins) of the liver and intestine. Periportal fibrosis and marked pericholangitis which would sometimes form bridges were observed in the liver. Transmural and perivascular fibrosis; the muscular layer was ruptured and there was proliferation of the intima, which caused obliteration of the lumen were also present. The lymph nodes' medullae exhibited intense infiltration of macrophages and plasma cells with areas of fibrosis, capillary proliferation, and atrophy of medullary cords. Neovascularization and marked inflammatory infiltrates composed of lymphocytes, plasma cells, macrophages and eosinophils were also present. Masson's trichrome staining revealed areas of fibroplasia. The tissue samples of the carotid rete mirabile, brain and liver were submitted for identification of OvHV-2 by nested polymerase chain reaction (nPCR) tested was positive for ovine herpesvirus type 2. Discussion: The main histological findings (obliterative vasculitis observed in the small and large intestines, liver, and lymph nodes) plus the detection of viral DNA of OvHV-2 in fragments of the carotid rete mirabile, brain, and liver by nPCR confirmed the diagnosis of malignant catarrhal fever. Chronic cases of MCF in cattle are not often described. The disease is usually manifested in a hyperacute or acute form which culminates with death. The most frequent clinical presentation is the head and eye form, which is characterized by corneal opacity, and ocular, nasal, and oral serous discharge. Bovines with MCF usually exhibit macroscopic and microscopic changes in various organs due to the pansystemic characteristic of the virus, which causes vasculopathy and lymphadenopathy. In this report, the changes were restricted to the intestines, liver, and lymph nodes. The obliterative vasculitis seen in this case is similar to the changes described in cases of chronic. Other herpesviruses which cause lesions to the vascular wall can also cause hyperplasia of the muscular layer with progression to obliterative arteriopathy. This paper reports a presentation of MCR not previously described in Brazil. PCR was an important tool for the conclusion of this case.

Diagnóstico de febre catarral maligna em bovinos do Uruguai / Diagnosis of malignant catarrhal fever in cattle in Uruguay

Foi realizado um estudo retrospectivo de 14 focos de febre catarral maligna (FCM) em bovinos, detectados nos anos de 1999-2011, a partir dos arquivos da Seção Anatomia Patológica da Divisão de Laboratórios Veterinários (DILAVE) "Miguel C. Rubino" Montevideo. Foram analisados os dados epidemiológicos, apresentação clínica e lesões macroscópicas e histopatológicas. Para a detecção do herpesvírus ovino tipo 2 (OvHV-2) foi utilizada a técnica de PCR sobre as amostras do sistema nervoso central de bovinos de 12 focos. Os surtos ocorreram principalmente nos meses de primavera e verão, na região norte do país. Em 64% (9/14) dos focos ocorreram episódios individuais da enfermidade, enquanto que os casos coletivos foram 5, nos quais a morbidade e mortalidade oscilaram entre 2% e 5%, sendo a letalidade 100% em todos os relatos. Em 50% dos surtos foi confirmado o contato direto entre bovinos e ovinos, enquanto no restante não havia tal informação. Clinicamente predominaram os sinais de opacidade bilateral da córnea, conjuntivite, secreção nasal e ocular mucopurulenta, assim como a síndrome nervosa. Os achados de necropsia mais frequentes foram opacidade bilateral da córnea e lesões inflamatórias nas mucosas. Os achados histopatológicos caracterizaram-se por panvasculite necrótica sistêmica. Foi possível detectar o agente etiológico por PCR em 5 dos 12 casos analisados.(AU)

A retrospective study of 14 outbreaks of malignant catarrh fever (MCF) in cattle detected between 1999 and 2011 was performed based upon the files of the DILAVE "Miguel C. Rubino" Montevideo Pathology Laboratory. Epidemiological data, clinical presentation, gross and histopathological lesions were analyzed. PCR was used on central nervous system samples of 12 bovines for the detection of ovine herpesvirus type 2 (OvHV-2). The outbreaks occurred mainly in spring and summer in the northern region of the country. Sixty four percent (9/14) were individual episodes of the disease while five cases were collective, with morbidity and mortality rates were 2-5%, being the lethality 100% in all the reports. In 50% of the outbreaks the direct contact between cattle and sheep was confirmed, while there was not such information in the rest of the cases. Predominant clinical signs were bilateral corneal opacity, conjunctivitis, ocular and nasal mucopurulent discharge, and nervous syndrome. The most frequent necropsy findings were bilateral corneal opacity and inflammatory lesions in the mucosa. Histopathological findings were characterized by systemic necrotizing panvasculite. It was possible to detect the etiological agent by PCR in 5 out of 12 cases examined.(AU)

First confirmed diagnosis of Sheep-associated Malignant Catarrhal Fever in Bison in Argentina

In Argentina, cases of malignant catarrhal fever (MCF) are suspected to have occurred according to macro and microscopic lesions. However, none has been corroborated by molecular tests. We describe here the first laboratory confirmed case of MCF in Argentina occurring in American bison confined in the Buenos Aires Zoo.(AU)

Multiplex PCR for detection of Suid herpesvirus 1, Bovine herpesvirus 1, Bovine herpesvirus 5, Ovine herpesvirus 2 / PCR Multiplex para detecção dos principais herpesvírus neurológicos de ruminantes

Desenvolveu-se uma PCR multiplex (mPCR) para diagnóstico diferencial de encefalite bovina causada por herpesvírus suíno 1 (SuHV-1), herpesvírus bovino 1 (BoHV-1), herpesvírus bovino 5 (BoHV-5) e herpesvírus ovino 2 (OvHV-2). Os iniciadores foram projetados após alinhamento de sequências disponíveis no banco de genomas (GenBank) e a reação foi padronizada levando-se em consideração a concentração dos reagentes e os tipos diferentes de DNA polimerase. Após determinação da especificidade e sensibilidade, 65 amostras de encéfalo de bovinos com síndrome neurológica foram submetidas à análise. A sensibilidade analítica para detecção de BoHV-1, BoHV-5 e SuHV-1 foi, respectivamente, 10(1,2) TCID50/50µL, 10(1,0) TCID50/50µL, 10(1,3) TCID50/50µL na reação multiplex. Das 65 amostras analisadas, 10 foram positivas para BoHV-5, uma para BoHV-1 e cinco para OvHV-2. A mPCR descrita neste trabalho mostrou-se uma técnica útil para o diagnóstico diferencial de enfermidades relacionadas ao sistema nervoso central de bovinos.(AU)

The aim of this study was to develop a multiplex PCR (mPCR) for the differential diagnosis of bovine encephalitis caused by the suid herpesvirus 1 (SuHV-1), bovine herpesvirus 1 (BoHV-1), bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) and ovine herpesvirus 2 (OvHV -2). The primers were designed after alignment of sequences available in GenBank and the reaction was developed by taking into account the concentration of reagents and different types of DNA polymerase. After determining the specificity and sensitivity to PCR, 65 brain samples from cattle with neurological syndrome were submitted to the reaction. The analytical sensitivity for detection of BoHV-1, BoHV-5 and SuHV-1 was, respectively, 10(1,2) TCID50/50µL, 10(1,0) TCID50/50µL, 10(1,3) TCID50/50µL. Ten samples were positive for BoHV-5, one for BoHV-1, one for SuHV-1 and five for OvHV-2. The mPCR described here is a useful technique for the differential diagnosis of diseases related to the central nervous system of cattle.(AU)

DETECÇÃO MOLECULAR DOS PRINCIPAIS HERPESVIRUS DE BOVINOS COM DOENÇA NEUROLÓGICA EM AMOSTRAS DE ENCÉFALO PARAFINADAS

O presente estudo visou a utilização da PCR multiplex (mPCR) para diagnóstico dos principais herpesvírus que acometem o sistema nervoso de bovinos, herpesvírus bovino (BoHV) e herpesvírus ovino 2 (OvHV-2), em amostras parafinadas em uma única reação diminuindo o tempo e os custos da análise. Foram selecionados 33 bovinos, sendo analisadas quatro amostras de cada animal (preferencialmente: rede admirável, tálamo, mesencéfalo e cerebelo), recebidos pelo Laboratório de Patologia Animal (LPA) entre 2007 e 2014 independente da raça, sexo ou idade, que apresentaram a suspeita clínica inicial de Doença Nervosa, incluindo os casos confirmados de Raiva. As amostras foram divididas em dois grupos. O grupo 1 possuía 17 animais que apresentaram lesões histológicas e o grupo 2, 16 animais que não apresentaram lesões histológicas. O uso de amostras incluídas em parafina permite estudos retrospectivos em amostras arquivadas no LPA da Universidade Federal do Pará (UFPA) e estudos prospectivos em amostras fixadas enviadas pelos médicos veterinários da Agência de Defesa Agropecuária do Estado do Pará (ADEPARA) ou por médicos veterinários autônomos para diagnóstico histopatológico. As dificuldades encontradas no transporte das amostras refrigeradas até o laboratório pelas distâncias e ausência de energia em muitas regiões do estado do Pará levam a necessidade de se estabelecer ferramentas de diagnóstico para auxiliar no Sistema de Defesa Sanitária Animal do Estado, dentro do programa de vigilância para a Raiva e outras encefalopatias. A possibilidade de diagnóstico nos casos negativos para raiva com encefalite traz benefícios aos criadores da região, pois fornece bases para a implementação de medidas sanitárias pelos médicos veterinários da defesa ou autônomos reduzindo prejuízos econômicos. Dos 33 animais submetidos à mPCR, em cinco detectou-se a presença de DNA para Herpesvírus. Dois animais (035/07, 083/12) apresentaram bandas específicas para BoHV e OvHV-2 (6,06%), dois animais foram positivos para BoHV (119/07 e 393/12), e um animal foi positivo somente para OvHV-2 (053/07). Somente o animal 119/07 (3,03%) apresentou lesões compatíveis na microscopia com a doença causada pelo BoHV apesar de quatro (12,12%) serem positivos para a presença do DNA deste agente. Destes, três apresentaram o DNA para OvHV-2 sem que se observassem lesões compatíveis com a doença (9,09%).

The present study aimed at the use of the multiplex PCR (mPCR) for diagnosis of the main herpesvirus that affect the nervous system of cattle, bovine herpes virus (bovine herpesvirus type) and herpesviruses Sheep 2 (OvHV-2) in paraffin embedded samples in a single reaction decreasing the time and the cost of analysis. They selected 33 cattle being analyzed four samples from each animal (preferably: admirable network, thalamus, midbrain and cerebellum), received by the Animal Pathology Laboratory (APL) between 2007 and 2014 regardless of race, gender or age, which showed the suspect Initial clinical Nerve Disease, including confirmed cases of rabies. The samples were divided into two groups. Group 1 had 17 animals with histological lesions and group 2, 16 animals showed no histological lesions. The use of paraffin included samples allows retrospective studies on samples stored in the LPA of the Federal University of Pará (UFPA) and prospective studies in fixed samples submitted by veterinarians of the Defence Agency of Para State of Agriculture (ADEPARÁ) or by independent veterinarians for histopathological diagnosis. The difficulties encountered in the transportation of samples chilled to the laboratory by the distances and lack of power in many state of Para regions lead to a need to establish diagnostic tools to assist in the Health Protection System State Animal, within the monitoring program Rabies and other encephalopathies. The possibility of diagnosis in negative cases to anger with encephalitis brings benefits to farmers of the region, it provides bases for the implementation of health measures by veterinarians defense or autonomous reducing economic losses. Of the 33 animals that underwent mPCR in five detect the presence of herpesvirus DNA. Two animals (035/07, 083/12) had specific bands and OvHV to BoHV-2 (6.06%), two animals were positive for BoHV (119/07 and 393/12), and one animal was positive only for OvHV-2 (053/07). Only the animal 119/07 (3.03%) showed lesions compatible with the microscopic disease caused by bovine herpesvirus type although four (12.12%) are positive for the presence of DNA of this agent. Of these, three had the DNA to OvHV-2 with no noticeable lesions compatible with the disease (9.09%).

Malignant catarrhal fever-like lesions associated with ovine herpesvirus-2 infection in young calves (Bos indicus): a case report

Infection of susceptible ruminants, including domestic cattle (Bos taurus) and American bison (Bison bison), with ovine herpesvirus-2 (OvHV-2) may provoke the fatal vasculitis and lymphoproliferative syndrome, known as malignant catarrhal fever (MCF), reported worldwide. To the best of our knowledge, this is the first report of a clinical case of MCF-like lesions associated with ovine herpesvirus-2 (OvHV-2) infection in young calves (Bos indicus) including central nervous symptoms that occurred in Três Lagoas city, Mato Grosso do Sul state, a border town near São Paulo state, Brazil. The diagnosis was based on typical histological lesions characterized by systemic lymphohistiocytic and fibrinoid vasculitis, confirmed by polymerase chain reaction and subsequent phylogenetic analysis of detected OvHV-2 sequences. This finding indicates that MCF disease is spread among herds concentrated in border areas between Mato Grosso do Sul and São Paulo states.(AU)

Febre catarral maligna em bovinos no Rio Grande do Sul: transmissão experimental para bovinos e caracterização do agente etiológico / Malignant catarrhal fever in cattle in Rio Grande do Sul, Brazil: experimental transmission to cattle and characterization of the etiological agent

São relatados dois surtos de febre catarral maligna (FCM) em bovinos de duas propriedades rurais (A e B) do município de Santiago, Rio Grande do Sul (RS), a transmissão da doença a bovinos suscetíveis e a detecção de DNA viral de herpesvírus bovino-2 (OvHV-2) em tecidos de bovinos afetados. Os dois surtos ocorreram de novembro de 2001 a fevereiro de 2002 (Propriedade A) e de janeiro a fevereiro de 2003 (Propriedade B). O número de bovinos sob risco, as taxas de morbidade e de letalidade foram, respectivamente, 170, 10,59 por cento e 83,33 por cento na Propriedade A e 500, 2,4 por cento e 100 por cento na Propriedade B. Em ambas as propriedades havia contato de ovinos com os bovinos afetados, mas somente na Propriedade A havia ovelhas em parição. Nos bovinos afetados nas duas propriedades, a duração do curso clínico, os achados de necropsia e a histopatologia foram semelhantes. A maioria dos bovinos afetados morreu ou foi submetida à eutanásia in extremis após um curso clínico de 2 a 8 dias. Os sinais clínicos incluíam febre (40,5 e 41,5ºC), corrimento nasal e ocular, opacidade da córnea, conjuntivite, salivação, erosões e ulcerações em mucosas, diarréia, hematúria e distúrbios neurológicos. Foram realizadas onze necropsias...(AU)

Two oubreaks of malignant catarrhal fever (MCF) occurring in cattle on two farms (A and B) in the municipality of Santiago, state of Rio Grande do Sul (RS), Brazil, and the transmission of the disease to susceptible calves as well as the detection of ovine herpesvirus-2 (OvHV-2) in tissues of affected cattle are reported. The two epizootics occurred from November 2001 to February 2002 (Farm A) and in January-February 2003 (Farm B). Numbers of cattle at risk, morbidity and letality rates were respectively 170, 10.59% and 83.33% for Farm A and 500, 2.4% and 100% for Farm B. Contact between affected cattle and sheep was detected in both farms, but lambing ewes were present only in farm A. Duration of clinical courses, gross findings and histopathology were the same for the affected cattle in both farms. Most affected cattle died or were euthanatized in extremis after a clinical course of 2-8 days. Clinical signs included fever (40.5 and 41.5°C), nasal and ocular discharge, corneal opacity, conjunctivitis, drooling, erosions and ulcerations of the mucosae, diarrhea, hematuria, and neurological disturbances. Eleven necropsies (9 on Farm A, 2 on Farm B) were performed. Gross lesions included erosions and ulcers affecting the mucosae of nasal turbinates, oral cavity, gastrointestinal and urogenital tracts; hemorrhage and necrosis of the tip of the buccal papillae, lymph node enlargement, multifocal white foci in renal cortex, and hyperemia of leptomeninges. Microscopically, there were arteritis and fibrinoid degeneration in medium and small arteries and arterioles of multiple organs and tissues, necrosis and inflammation in several mucosal surfaces, keratitis, conjunctivitis, uveitis, intersticial nephritis, and encephalitis. Transmission experiments were attempted in five calves (E1-E5) by inocculating each of them intravenously with 500 ml of whole heparinized blood from a MCF affected cow. The transmission was suscessful in at least three (E1-E3) ... (AU)

Febre catarral maligna induzida por herpesvírus ovino tipo 2 em uma novilha / Ovine herpesvirus type 2-induced malignant catarrhal fever in a heifer

Os achados clínicos, patológicos e moleculares associadas às lesões da febre catarral maligna induzidas por herpesvírus ovino 2 (OvHV-2) são descritos em uma novilha, 12 meses de idade, raça mista, da Região Norte do Estado Paraná, Brasil. O animal demonstrou comportamento agressivo, nistagmo, incoordenação motora, decúbito, movimentos de pedalagem e morte dentro de 48 horas, após a qual foi submetido à necropsia de rotina. Fragmentos do cérebro foram utilizados em ensaios de PCR para a identificação de agentes infecciosos (OvHV-2; herpesvírusbovino-1 e -5 e Histophilus somni). A raiva foi descartada por exame realizado em laboratório oficial de diagnóstico do estado. Alterações patológicas significativas incluíram vasculite disseminada com infiltrado inflamatório linfoplasmocitário no cérebro, rins, fígado e miocárdio. A PCR amplificou o amplicon específico do gene da proteína do tegumento do OvHV-2 a partir de amostras do cérebro; todas as outras avaliações foram negativas. Estes resultados confirmam a participação de OvHV-2 na etiopatogenia da doença observada nesta novilha.

The clinical, pathological, and molecular findings due to malignant catarrhal fever lesions induced by ovine herpesvirus type 2 (OvHV-2) are described in a 12-month-old, mixed-breed, heifer from northern Paraná, Brazil. The animal demonstrated clinical signs including manifestations of aggressive behavior, nystagmus, incoordination, decumbency, paddling movements, and death within 48 hours, after which was submitted for routine necropsy. Brain fragments were used in PCR assays for identification of infectious agents (OvHV-2; bovine herpesvirus-1 and -5; and Histophilus somni). Rabies was discarded in test done at official state diagnostic laboratory. Significant pathological alterations include disseminated vasculitis with lymphoplasmacytic inflammatory infiltrate within the brain, kidneys, liver, and myocardium. PCR assay amplified the specific422base pair fragment of the OvHV-2 tegument protein gene from the brain; all other evaluations were negative. These findings confirm the participation of OvHV-2 in the etiopathogenesis of the disease observed in this mixed-breed heifer.

Febre catarral maligna induzida por herpesvírus ovino tipo 2 em uma novilha / Ovine herpesvirus type 2-induced malignant catarrhal fever in a heifer

Os achados clínicos, patológicos e moleculares associadas às lesões da febre catarral maligna induzidas por herpesvírus ovino 2 (OvHV-2) são descritos em uma novilha, 12 meses de idade, raça mista, da Região Norte do Estado Paraná, Brasil. O animal demonstrou comportamento agressivo, nistagmo, incoordenação motora, decúbito, movimentos de pedalagem e morte dentro de 48 horas, após a qual foi submetido à necropsia de rotina. Fragmentos do cérebro foram utilizados em ensaios de PCR para a identificação de agentes infecciosos (OvHV-2; herpesvírusbovino-1 e -5 e Histophilus somni). A raiva foi descartada por exame realizado em laboratório oficial de diagnóstico do estado. Alterações patológicas significativas incluíram vasculite disseminada com infiltrado inflamatório linfoplasmocitário no cérebro, rins, fígado e miocárdio. A PCR amplificou o amplicon específico do gene da proteína do tegumento do OvHV-2 a partir de amostras do cérebro; todas as outras avaliações foram negativas. Estes resultados confirmam a participação de OvHV-2 na etiopatogenia da doença observada nesta novilha.

The clinical, pathological, and molecular findings due to malignant catarrhal fever lesions induced by ovine herpesvirus type 2 (OvHV-2) are described in a 12-month-old, mixed-breed, heifer from northern Paraná, Brazil. The animal demonstrated clinical signs including manifestations of aggressive behavior, nystagmus, incoordination, decumbency, paddling movements, and death within 48 hours, after which was submitted for routine necropsy. Brain fragments were used in PCR assays for identification of infectious agents (OvHV-2; bovine herpesvirus-1 and -5; and Histophilus somni). Rabies was discarded in test done at official state diagnostic laboratory. Significant pathological alterations include disseminated vasculitis with lymphoplasmacytic inflammatory infiltrate within the brain, kidneys, liver, and myocardium. PCR assay amplified the specific422base pair fragment of the OvHV-2 tegument protein gene from the brain; all other evaluations were negative. These findings confirm the participation of OvHV-2 in the etiopathogenesis of the disease observed in this mixed-breed heifer.

First confirmed diagnosis of sheep-associated malignant catarrhal fever in bison in Argentina

In Argentina, cases of malignant catarrhal fever (MCF) are suspected to have occurred according to macro and microscopic lesions. However, none has been corroborated by molecular tests. We describe here the first laboratory confirmed case of MCF in Argentina occurring in American bison confined in the Buenos Aires Zoo.

Obliterative vasculitis caused by ovine herpesvirus type 2 in cattle / Obliterative vasculitis caused by ovine herpesvirus type 2 in cattle

Background: Malignant catarrhal fever (MCF) is a frequently fatal viral infection that affects various wild and domestic ruminants and even pigs, as recently reported. It is a disease characterized by lymphoproliferation, vasculitis and erosiveulcerative lesions in mucosa and skin. In Brazil, the virus that circulates and causes the disease has been identifi ed as OvHV-2. The aim of this study is to describe the clinicopathological changes in a cow with obliterative vasculitis caused by OvHV-2.Case: A two-year-old Gir cow with a history of intermittent diarrhea and progressive weight loss for approximately a year, which had not improved with antibiotic therapy, was euthanized and subjected to necropsy. In the necropsy, the liver was enlarged, fi rm, and had a marbled aspect all over the capsular and cut surfaces (light striations intercalated with dark areas). Cut surfaces also revealed thickening of the vessel walls, which exhibited a branched pattern. There was marked thickening of the small and large intestinal walls. The hepatic, mediastinal and mesenteric lymph nodes were enlarged. The samples were fi xed in 10% phosphate-buffered formalin, routinely processed for histology, embedded in paraffi n, cut 5-µm sections, and stained stained with hematoxylin and eosin. Additionally, sections of the liver and ileum were subjected to Massons trichrome staining. The main microscop

Background: Malignant catarrhal fever (MCF) is a frequently fatal viral infection that affects various wild and domestic ruminants and even pigs, as recently reported. It is a disease characterized by lymphoproliferation, vasculitis and erosiveulcerative lesions in mucosa and skin. In Brazil, the virus that circulates and causes the disease has been identifi ed as OvHV-2. The aim of this study is to describe the clinicopathological changes in a cow with obliterative vasculitis caused by OvHV-2.Case: A two-year-old Gir cow with a history of intermittent diarrhea and progressive weight loss for approximately a year, which had not improved with antibiotic therapy, was euthanized and subjected to necropsy. In the necropsy, the liver was enlarged, fi rm, and had a marbled aspect all over the capsular and cut surfaces (light striations intercalated with dark areas). Cut surfaces also revealed thickening of the vessel walls, which exhibited a branched pattern. There was marked thickening of the small and large intestinal walls. The hepatic, mediastinal and mesenteric lymph nodes were enlarged. The samples were fi xed in 10% phosphate-buffered formalin, routinely processed for histology, embedded in paraffi n, cut 5-µm sections, and stained stained with hematoxylin and eosin. Additionally, sections of the liver and ileum were subjected to Massons trichrome staining. The main microscop

Detecção de dna de herpesvírus em gânglios trigêmeos de bovinos e avaliação de um herpesvírus bovino tipo 5 recombinante como antígeno vacinal

Os herpesvírus bovinos tipos 1 (BoHV-1), 2 (BoHV-2), 4 (BoHV-4), 5 (BoHV-5) e o herpesvírus ovino tipo 2 (OvHV-2) apresentam como característica comum a indução de infecções latentes em seus hospedeiros. Estes agentes estão associados a diferentes enfermidades em bovinos, embora na maioria dos animais infectados a infecção primária ocorra com poucos ou sem sinais clínicos evidentes. Eventualmente, hospedeiros suscetíveis podem apresentar quedas na produtividade, perdas reprodutivas ou mesmo sofrer doença fatal. Esta tese compreende dois estudos independentes, que visam contribuir para um maior conhecimento sobre infecções por herpesvírus em bovinos. O primeiro capítulo reporta os achados de uma pesquisa sobre a presença do DNA de BoHV-2, BoHV-4 e OvHV-2 em gânglios trigêmeos (GT) de bovinos. Fragmentos de 200 GT (de 100 animais) foram coletados e submetidos à extração de DNA. Um conjunto de PCRs, duas das quais “semi-nested”, foi padronizado para amplificar parte do gene que codifica a glicoproteína B de BoHV-2 e BoHV-4. Outra PCR foi desenhada tendo como alvo o gene que codifica a proteína FGAM-sintase de OvHV-2. Controles internos foram construídos e utilizados para determinar a sensibilidade dos testes. Genomas de BoHV-2 foram encontrados em 2% (2/100) das amostras analisadas; genomas de BoHV-4 e OvHV-2 não foram detectados. No segundo capítulo desta tese, na busca de um imunógeno capaz de minimizar as perdas decorrentes de encefalites causadas por BoHV-5, o potencial imunogênico de uma amostra recombinante de BoHV-5, da qual os genes que codificam as glicoproteínas I, E e a proteína US9 foram deletados (BoHV5 gI/gE/US9-), em uma formulação vacinal inativada. Para a avaliação da vacina, oito terneiros (grupo vacinado; GV) foram vacinados com 3 ml da preparação por via subcutânea nos dias 0 e 28. Outros quatro terneiros foram vacinados com a preparação vacinal sem antígeno (grupo controle; GC). Após o desafio com o vírus parental selvagem (EVI 88/95), os animais do GV apresentaram sinais leves de infecção respiratória, enquanto que os animais do GC desenvolveram doença respiratória e encefalite grave, o que levou à eutanásia de dois dos quatro animais controle. A vacina conferiu proteção contra encefalite nos animais do GV após o desafio, porém não impediu a reativação do vírus selvagem. Os estudos aqui realizados permitiram demonstrar pela primeira vez a ocorrência de co-infecções com BoHV-1, BoHV-2 e BoHV-5, mas não com BoHV-4 e OvHV-2, em gânglios trigêmeos de bovinos. No segundo capítulo, foi demonstrada a eficácia do recombinante BoHV5 gI/gE/US9-, na proteção de bovinos contra encefalites causadas por BoHV-5 selvagem

Febre catarral maligna em bovinos no rio grande do sul

São relatadas duas epizootias recentes de febre catarral maligna (FCM) que ocorreram em bovinos de duas propriedades rurais (A e B) do município de Santiago, Rio Grande do Sul (RS) e a transmissão da doença a bovinos suscetíveis. Adicionalmente, foi realizada uma pesquisa nos arquivos de três laboratórios de diagnóstico veterinário (LDVs) em atuação no estado, para o levantamento de casos de FCM em bovinos no RS. As duas epizootias recentes ocorreram de novembro de 2001 a fevereiro de 2002 (Propriedade A) e em janeiro-fevereiro de 2003 (Propriedade B). O número de bovinos sob risco, as taxas de morbidade e de letalidade foram, respectivamente, 170, 10,59% e 83,33% na Propriedade A e 500, 2,4% e 100% na Propriedade B. Em ambas as propriedades havia contacto de ovinos com os bovinos afetados. Nos bovinos afetados nas duas propriedades, a duração do curso clínico, os achados de necropsia e a histopatologia foram semelhantes. A maioria dos bovinos afetados morreu ou foi submetida à eutanásia após um curso clínico de 2 a 8 dias. Os sinais clínicos incluíam febre (40.5 e 41.5°C), corrimento nasal e ocular, opacidade da córnea, conjuntivite, salivação, erosões e ulcerações em mucosas, diarréia, hematúria e distúrbios neurológicos. Foram realizadas onze necropsias (nove na propriedade A e duas na propriedade B). Lesões macroscópicas incluíam erosões e úlceras nas mucosas dos cornetos nasais, cavidade oral e tratos gastrintestinal e urogenital; hemorragia e necrose da ponta das papilas bucais, aumento de volume dos linfonodos, múltiplos focos brancos no córtex renal, acentuação do padrão lobular da superfície hepática e hiperemia das leptomeninges. Microscopicamente, havia arterite e degeneração fibrinóide em artérias de médio e pequeno calibre e em arteríolas de múltiplos órgãos e tecidos, necrose e inflamação em várias superfícies mucosas, ceratite, conjuntivite, uveíte, nefrite intersticial e encefalite. A transmissão experimental foi tentada em cinco terneiros (E1-E5) pela inoculação de cada um deles, por via intravenosa, com 500 ml de sangue total oriundo de bovino afetado por FCM. A transmissão foi conseguida em pelo menos três (E1-E3) dos terneiros experimentais que adoeceram após um período de incubação de 15 a 27 dias. Quatro dos terneiros do experimento morreram ou foram submetidos à eutanásia in extremis após um curso clínico que durou de três dias a oito semanas. O terneiro experimental remanescente (E5) recuperou-se após uma doença branda e foi submetido à eutanásia 14 semanas após a inoculação. Os cinco terneiros foram necropsiados. Sinais clínicos, achados de necropsia e histopatologia de três terneiros (E1-E3) eram característicos de FCM. O DNA viral de herpesvírus ovino-2 (OvHV-2) foi detectado pela técnica de reação em cadeia de polimerase (PCR) em tecidos emblocados em parafina de sete dos 11 bovinos espontaneamente afetados por FCM e que haviam sido diagnosticados com base nos achados clínicos e nas alterações patológicas. O DNA de OvHV-2 foi também detectado por PCR em tecidos emblocados em parafina de três terneiros experimentais (E1-E3). A técnica de PCR resultou negativa nos restantes quatro dos 11 bovinos testados nos casos espontâneos das epizootias recentes de FCM e em dois (E4-E5) dos cinco terneiros usados nos experimentos de transmissão. Testes de imunoistoquímica (streptavidina-biotina peroxidase) realizados em cortes de tecido linfóide do terneiro E4 para detecção de antígeno do vírus da diarréia viral bovina resu