Infestation of rabbits with just-molted adults of the cattle tick Rhipicephalus microplus: biological parameters and efficiency / Infestação de coelhos com adultos recém-mudados do carrapato-do-boi Rhipicephalus microplus

In this study, we report for the first time the successful infestation of rabbits with just-molted, unfed adults of Rhipicephalus microplus. Six New Zealand White rabbits were experimentally infested with 20 female and 20 male unfed adult ticks released into plastic chambers fixed on the shaved backs of each host. The attachment and feeding processes were successful. The biological characteristics of the ticks and the occurrence of adverse events in the tick-attachment area were studied. The average engorgement period was 10.7 days, and 33.3% of the engorged females completed the parasitic phase. The average weight of the recovered engorged females was 149.8 mg, with an average egg mass weight of 70.9 mg, a conversion efficiency index of 47.3%, and a hatching percentage of 88.31%. The adverse reactions found in the tick-attachment area were the usual inflammatory responses of the organism to infestation by these ectoparasites; however, it did not prevent the ticks from feeding and completing their life cycle. These data indicate that the infestation of rabbits with just-molted, unfed adult ticks could be a valuable, alternative animal model for rapid and economical evaluation of vaccine candidates and new molecules with acaricidal activity against Rhipicephalus microplus.(AU)

Neste estudo, relata-se, pela primeira vez, o sucesso da infestação de coelhos por carrapatos adultos recém-mudados e não alimentados. Seis coelhos brancos da Nova Zelândia foram infestados artificialmente com 20 carrapatos adultos fêmeas e 20 machos adultos não alimentados no interior de câmaras de plástico fixadas no dorso de cada hospedeiro. Os processos de fixação e alimentação dos carrapatos foram bem sucedidos. Foram estudadas as características biológicas dos carrapatos e a ocorrência de eventos adversos na área de fixação do ectoparasito. O período médio de ingurgitamento foi de 10,7 dias, e 33,3% das fêmeas ingurgitadas completaram a fase parasitária. O peso médio das fêmeas ingurgitadas recuperadas foi de 149,8 mg, com peso médio da massa de ovos de 70,9 mg, índice de produção de ovos de 47,3% e porcentagem de incubação de 88,31%. Uma resposta inflamatória usual do organismo à infestação por esses ectoparasitas foi a única reação adversa encontrada na área de fixação dos carrapatos, o que não impediu que eles se alimentassem e completassem seu ciclo de vida. Esses dados apontam que a infestação de coelhos com carrapatos adultos recém-mudados e não alimentados pode ser um modelo animal alternativo e útil para a avaliação rápida e econômica de candidatos a vacinas e novas moléculas com atividade acaricida contra Rhipicephalus microplus.(AU)

Polymerase chain reaction using conjunctival swab samples for detecting Leishmania DNA in dogs / Reação em cadeia da polimerase usando amostras de Swab de conjuntiva para detecção de DNA de Leishmania em cães

The dog is the main domestic reservoir of Leishmania and font of infection for the vector, constituting an important host for the transmission of the parasite to humans. Non-invasive collection of swab samples for leishmaniasis diagnosis has been a promising alternative. This study analyzed the positivity of polymerase chain reaction (PCR) for the diagnosis of canine leishmaniasis in conjunctiva samples. DNA extraction was performed using SDS 20% and PCR was performed using 13A/13B primers that amplify 120-bp of Leishmania kDNA. Of the 77 dogs analyzed, 50 (64.93%) had ocular changes: 25 (32.47%) dogs had periocular lesion, 41 (53.25%) dogs had purulent eye discharge, and 17 (22.08%) dogs had both signals. PCR was positive in 35 dogs (45.45%), and there was no significant difference between dogs with and without ocular signals (p=0.4074). PCR positivity was significant higher in dogs without periocular injury (p=0.0018). Conjunctive PCR, a less invasive, fast, and painless collection technique, is indicated to complement the diagnosis, especially in dogs without periocular injury, independent of the presence of purulent eye discharge.(AU)

O cão é o principal reservatório doméstico de Leishmania e também fonte de infecção para o vetor, constituindo um importante hospedeiro para a transmissão do parasita ao homem. A coleta não invasiva de amostras em swab para diagnóstico das leishmanioses tem sido uma alternativa promissora. Este estudo analisou a positividade da reação em cadeia da polimerase (PCR) para o diagnóstico de leishmaniose canina em amostras de conjuntiva. A extração do DNA foi realizada com SDS 20%. A PCR foi realizada com primers 13A/13B que amplificam 120-pb do kDNA de Leishmania. Dos 77 cães analisados, 50 (64,93%) tiveram alterações oculares; 25 (32,47%) cães tiveram uma lesão periocular; 41 (53,25%) tiveram secreção ocular purulenta e 17 (22,08%) cães tiveram ambos os sinais. A PCR foi positiva em 35 cães (45,45%) e não houve diferença significativa em cães com e sem sinais oculares (p = 0,4074). A positividade da PCR foi significativamente maior em cães sem lesão periocular (p = 0,0018). PCR em conjuntiva, uma técnica de coleta menos invasiva, rápida e indolor, é indicada para complementar o diagnóstico, principalmente em cães sem lesão periocular, independentemente da presença de secreção ocular purulenta.(AU)

Polymerase chain reaction using conjunctival swab samples for detecting Leishmania DNA in dogs / Reação em cadeia da polimerase usando amostras de Swab de conjuntiva para detecção de DNA de Leishmania em cães

Abstract The dog is the main domestic reservoir of Leishmania and font of infection for the vector, constituting an important host for the transmission of the parasite to humans. Non-invasive collection of swab samples for leishmaniasis diagnosis has been a promising alternative. This study analyzed the positivity of polymerase chain reaction (PCR) for the diagnosis of canine leishmaniasis in conjunctiva samples. DNA extraction was performed using SDS 20% and PCR was performed using 13A/13B primers that amplify 120-bp of Leishmania kDNA. Of the 77 dogs analyzed, 50 (64.93%) had ocular changes: 25 (32.47%) dogs had periocular lesion, 41 (53.25%) dogs had purulent eye discharge, and 17 (22.08%) dogs had both signals. PCR was positive in 35 dogs (45.45%), and there was no significant difference between dogs with and without ocular signals (p=0.4074). PCR positivity was significant higher in dogs without periocular injury (p=0.0018). Conjunctive PCR, a less invasive, fast, and painless collection technique, is indicated to complement the diagnosis, especially in dogs without periocular injury, independent of the presence of purulent eye discharge.

Resumo O cão é o principal reservatório doméstico de Leishmania e também fonte de infecção para o vetor, constituindo um importante hospedeiro para a transmissão do parasita ao homem. A coleta não invasiva de amostras em swab para diagnóstico das leishmanioses tem sido uma alternativa promissora. Este estudo analisou a positividade da reação em cadeia da polimerase (PCR) para o diagnóstico de leishmaniose canina em amostras de conjuntiva. A extração do DNA foi realizada com SDS 20%. A PCR foi realizada com primers 13A/13B que amplificam 120-pb do kDNA de Leishmania. Dos 77 cães analisados, 50 (64,93%) tiveram alterações oculares; 25 (32,47%) cães tiveram uma lesão periocular; 41 (53,25%) tiveram secreção ocular purulenta e 17 (22,08%) cães tiveram ambos os sinais. A PCR foi positiva em 35 cães (45,45%) e não houve diferença significativa em cães com e sem sinais oculares (p = 0,4074). A positividade da PCR foi significativamente maior em cães sem lesão periocular (p = 0,0018). PCR em conjuntiva, uma técnica de coleta menos invasiva, rápida e indolor, é indicada para complementar o diagnóstico, principalmente em cães sem lesão periocular, independentemente da presença de secreção ocular purulenta.

Efeito dos óleos essenciais de Thymus vulgaris, Origanum vulgare e dos terpenos timol e carvacrol, sobre adultos e massas ovígeras de Pseudosuccinea columella

A fasciolose é uma doença de distribuição mundial que pode levar a grandes prejuízos econômicos na criação de ruminantes e possui como hospedeiro intermediário moluscos aquáticos, sendo Pseudossucinea columella uma das espécies mais frequentes. Os moluscicidas sintéticos são indicados para o controle dos moluscos, entretanto, são tóxicos para diversas espécies de plantas e animais, sendo prejudiciais ao meio ambiente. Devido a necessidade da busca de novas substâncias naturais, menos nocivas ao meio ambiente e que possam atuar no controle de moluscos, o objetivo do estudo foi avaliar o efeito dos óleos essenciais de Thymus vulgaris, Origanum vulgare edos terpenos timol e carvacrol, sobre adultos e massas ovígeras de P. columella. Os óleos de T. vulgaris, O. vulgare e os majoritários, timol e carvacrol, foram diluídos nas concentrações de 10, 20, 40, 60, 80 e 100 ppm, como controle positivo se utilizou o sulfato de cobre (CuSo4) e como controle negativo se utilizou a água potável (H2O) e o Dimetilsulfóxido (DMSO) 1% (diluente das soluções). Os moluscos foram divididos em grupos de 10 espécimes para cada solução, foram expostas as diferentes soluções teste pelo período de 24 horas e avaliados durante esse período nos tempos de 30 minutos, duas, seis, 12 e 24 horas. A mesma metodologia foi utilizada com as massas ovígeras, entretanto, as massas foram expostas as substâncias por 24 horas, passaram pelo processo de lavagem e foram avaliadas por 18 dias após exposição. Durante o estudo biológico dos moluscos adultos se observou que os óleos essenciais de orégano nas concentrações de 60, 80 e 100 ppm e tomilho na concentração de 100 ppm levaram a morte de 100% dos e se mostraram dentro das normas estabelecidas pela Organização Mundial da Saúde para uma mistura complexa de substâncias. Os óleos essenciais e componentes majoritários se mostraram efetivos na inibição do crescimento e da eclosão das massas. Somente as massas expostas ao majoritário timol, nas concentrações de 10, 20 e 40 ppm, eclodiram. Em relação a histologia, foi possível observar vacuolizações e fragmentação nos tecidos de glândula digestiva, ovotestis e manto nos moluscos tratados com os óleos essenciais e os componentes majoritários. Notou-se ainda na histologia, áreas de autólise em moluscos tratados com timol na concentração de 80 ppm. Na Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) encontraram-se alteraçõesteciduais em glândula digestiva e manto nas concentrações de 100 ppm dos óleos essenciais e seus componentes majoritários. Assim, pode-se concluir que os óleos essências de O. vulgare e T. vulgaris se comportaram como substâncias moluscicidas em P. columella. Além disso, notou-se efeitos inibitórios no crescimento e eclosão das massas ovígeras tratadas com os componentes majoritários e os óleos essenciais estudados.

Fasciolosis is a disease with worldwide distribution that can lead to great economic losses in ruminant breeding and has aquatic molluscs as an intermediate host, with Pseudosucinea columella being one of the most frequent species. Synthetic molluscicides are indicated for the control of molluscs, however, they are toxic to several species of plants and animals, being harmful to the environment. Due to the need to search for new natural substances, less harmful to the environment and that can act in the control of molluscs, the aim of the study was to evaluate the effect of essential oils from Thymus vulgaris, Origanum vulgare and terpenes thymol and carvacrol, on adults and ovigerous masses of P. columella. The oils of T. vulgaris, O. vulgare and the major ones, thymol and carvacrol, were diluted in concentrations of 10, 20, 40, 60, 80 and 100 ppm, as a positive control using copper sulfate (CuSo4) and as negative control, drinking water (H2O) and 1% Dimethylsulfoxide (DMSO) (solutions diluent) were used. The molluscs were divided into groups of 10 specimens for each solution, the different test solutions were exposed for a period of 24 hours and evaluated during this period at times of 30 minutes, two, six, 12 and 24 hours. The same methodology was used with the ovigerous masses, however, the masses were exposed to substances for 24 hours, went through the washing process and were evaluated for 18 days after exposure. During the biological study of adult molluscs, it was observed that essential oils of oregano at concentrations of 60, 80 and 100 ppm and thyme at a concentration of 100 ppm led to the death of 100% of them and were within the standards established by the World Health Organization for a complex mixture of substances. Essential oils and major components proved to be effective in inhibiting the growth and hatching of doughs. Only the masses exposed to the majority of thymol, at concentrations of 10, 20 and 40 ppm, hatched. Regarding histology, it was possible to observe vacuolization and fragmentation in the tissues of the digestive gland, ovotestis and mantle in molluscs treated with essential oils and major components. It was also noted in histology, areas of autolysis in molluscs treated with thymol at a concentration of 80 ppm. Scanning Electron Microscopy (SEM) showed tissue changes in the digestive gland and mantle at 100 ppm concentrations of essential oils and their major components. Thus, it can be concluded that the essential oils of O. vulgare and T. vulgaris behaved as molluscicide substances in P. columella. In addition, inhibitory effects were noted on the growth and hatching of ovigerous masses treated with the major components and essential oils studied.

Uso de Metarhizium anisopliae s.l. no controle de Biomphalaria glabrata hospedeira intermediária de Schistosoma mansoni

A esquistossomose é uma doença que afeta aproximadamente 200 milhões de pessoas em todo o mundo. É considerada uma das Doenças Tropicais Negligenciadas, está em segundo lugar dentre estas, perdendo apenas para a malária em morbidade. A esquistossomose mansônica é uma parasitose veiculada na água, ocasionada pelo trematódeo S. mansoni e tem como hospedeiro intermediário moluscos do gênero Biomphalaria. O controle dos caramujos tem sido proposto como uma medida para reduzir e interromper a transmissão da doença, complementar a outras estratégias, focalizadas principalmente no tratamento populacional em larga escala. Parte deste estudo focou em apresentar uma análise sistemática dos trabalhos científicos publicados sobre o controle biológico de Biomphalaria spp., hospedeiros intermediários da esquistossomose, apresentando desafios e perspectivas futuras. Quarenta e sete artigos no total foram analisados, no período de 1945 a 2021. Os países com destaque de publicação foram: França (08 artigos), Brasil (08 artigos), EUA (06 artigos), e Egito (06 artigos). Sendo a predação o principal tipo de controle biológico utilizado. A década com o maior número de estudos entre 2010-2019 com 14 artigos, enquanto que o período de 2010 a 2019, foi utilizada uma maior diversidade de agentes de controle biológico. Estes últimos, como mencionado acima, particularmente fungos e bactérias, têm atraído a atenção dos pesquisadores nos últimos dez anos. Estes agentes microbianos podem funcionar como agentes disruptores fisiológicos, reprodutivos e/ou epigenéticos que podem manipular e/ou influenciar a dinâmica da interação entre Biomphalaria e Schistosoma. Este estudo também deu ênfase a análise experimental de um agente de controle biológico, com objetivo de avaliar os efeitos de Metarhizium anisopliae s.l. CG 347 contra Biomphalaria glabrata. Os caramujos infectados pelo S. mansoni foram expostos por 24 horas ao fungo e analisados quanto aos seguintes aspectos: sobrevivência dos caracóis, impacto do tratamento de M. anisopliae na eliminação de cercárias, número de hemócitos circulantes na hemolinfa e histopatologia. Os caramujos não infectados e tratados com fungos foram analisados quanto a: sobrevivência, concentração total de proteínas na hemolinfa e na glândula digestiva, e número de hemócitos circulantes na hemolinfa. Não houve morte dos moluscos após o período de tratamento, mas foi observada uma redução de 20% do conteúdo total de proteínas na hemolinfa quando comparado ao controle da água. A eliminação de cercárias de S. mansoni foi um parâmetro impactado, com redução de 32,7% quando os moluscos foram tratados com M. anisopliae. O grupo infectado apresentou menor número de hemócitos e o grupo infectado e exposto a M. anisopliae. Em relação à histopatologia dos moluscos, os grupos UNI + MA e INF + MA, apresentaram o fungo no interior dos seguintes órgãos esôfago, estômago e intestino. Este estudo abordou o primeiro relato de redução da eliminação de cercárias de S. mansoni após tratamento de B. glabrata usando um fungo entomopatogênico, o M. anisopliae. Contudo, são recomendáveis novas análises com maior período de exposição e diferentes propágulos fúngicos. Contudo, contribuímos fornecendo informações que contribuem para fomentar o controle biológico, alternativo e sustentável da transmissão da esquistossomose. Sendo este fungo, um possível agente promissor de controle biológico que pode contribuir para limitar a transmissão da esquistossomose.

Schistosomiasis is a disease that affects approximately 200 million people worldwide. It is considered one of the Neglected Tropical Diseases, second only to malaria in morbidity. Schistosomiasis mansoni is a waterborne parasitic disease caused by the trematode S. mansoni and has as an intermediate host mollusks of the genus Biomphalaria. Snail control has been proposed as a measure to reduce and interrupt transmission of the disease, complementary to other strategies that focus mainly on large-scale population treatment. Part of this study focused on presenting a systematic review of published scientific papers on the biological control of Biomphalaria spp. intermediate hosts of schistosomiasis, presenting challenges and future perspectives. Forty-seven articles in total were analyzed, from 1945 to 2021. The countries with the most published papers were: France (08 papers), Brazil (08 papers), USA (06 papers), and Egypt (06 papers). Predation was the main type of biological control used. The decade with the highest number of studies between 2010-2019 with 14 articles, while the period from 2010 to 2019, a greater diversity of biological control agents was used. The latter, as mentioned above, particularly fungi and bacteria, have attracted the attention of researchers in the last ten years. These microbial agents may function as physiological, reproductive and/or epigenetic disruptors that can manipulate and/or influence the dynamics of the interaction between Biomphalaria and Schistosoma. This study also emphasized the experimental analysis of a biological control agent, aiming to evaluate the effects of Metarhizium anisopliae s.l. CG 347 against Biomphalaria glabrata. S. mansoni infected snails were exposed for 24 hours to the fungus and analyzed for the following aspects: snail survival, impact of M. anisopliae treatment on cercariae elimination, number of circulating hemocytes in the hemolymph, and histopathology. The uninfected and fungus-treated snails were analyzed for: survival, total protein concentration in the hemolymph and digestive gland, and number of circulating hemocytes in the hemolymph. There was no death of the mollusks after the treatment period, but a 20% reduction of the total protein content in the hemolymph was observed when compared to the water control. The shedding cercariae of S. mansoni was an impacted parameter, with a 32.7% reduction when the mollusks were treated with M. anisopliae. The infected group presented lower number of hemocytes and the group infected and exposed to M. anisopliae. Regarding the histopathology of the mollusks, the groups UNI + MA and INF + MA, presented the fungus inside the following organs esophagus, stomach and intestine. This study addressed the first report of reduced cercariae S. mansoni shedding after treatment of B. glabrata using an entomopathogenic fungus, M. anisopliae. However, further analyses with longer exposure times and different fungal propagules are recommended. However, we contribute by providing information that contributes to foster the biological, alternative, and sustainable control of schistosomiasis transmission. This fungus is a possible promising biological control agent that can contribute to limit the transmission of schistosomiasis.

Parasitismo e aspectos biológicos de Tetrastichus howardi (Hymenoptera: Eulophidae) em pupas de Erinnyis ello (Lepidoptera: Sphingidae) / Parasitism and biological aspects of Tetrastichus howardi (Hymenoptera: Eulophidae) on Erinnyis ello (Lepidoptera: Sphingidae) pupae

Erinnyis ello é uma das principais pragas da cultura da mandioca e seus inimigos naturais incluem parasitoides de ovos, lagartas e pupas. O objetivo deste estudo foi avaliar o parasitismo e alguns aspectos biológicos de Tetrastichus howardi, criados em pupa de E. ello. Em geral, o parasitismo e emergência de T. howardi em pupas de E. ello foram de 64%. Duração do ciclo (ovo-adulto) de T. howardi em pupas de E. ello foi de 20,12±0,15 dias a 25±2°C, 70±10% de umidade relativa e 14h de fotofase. A progênie de T. howardi por pupa de E. ello foi 466±0,44. A longevidade de T. howardi, fêmeas e machos, foram de 15±0,57 e 12±0,93 dias, respectivamente. A razão sexual foi de 0,95±0,06, e a proporção de fêmeas por fêmea foi de 44±0,45. T. howardi parasita e se desenvolve em pupas de E. ello.(AU)

Erinnyis ello is one of the main pests of the cassava crop, and its natural enemies including egg, caterpillar, and pupal parasitoids. The aim of this study was to evaluate parasitism and biological aspects of Tetrastichus howardi on E. ello pupae. In general, parasitism and emergence of T. howardi on E. ello pupae was 64%. Cycle duration (egg to adult) of T. howardi on E. ello pupae was of 20.12±0.15 days at 25±2°C, 70±10% relative humidity, and 14-h photophase. The progeny of T. howardi by E. ello pupae was of 466±0.44. Longevity of T. howardi females and males was of 15±0.57 and 12±0.93 days, respectively. The sex ratio was of 0.95±0.06, and the ratio of females per female was 44±0.45. T. howardi parasite and develops on E. ello pupae.(AU)

Parasitismo e aspectos biológicos de Tetrastichus howardi (Hymenoptera: Eulophidae) em pupas de Erinnyis ello (Lepidoptera: Sphingidae) / Parasitism and biological aspects of Tetrastichus howardi (Hymenoptera: Eulophidae) on Erinnyis ello (Lepidoptera: Sphingidae) pupae

Erinnyis ello é uma das principais pragas da cultura da mandioca e seus inimigos naturais incluem parasitoides de ovos, lagartas e pupas. O objetivo deste estudo foi avaliar o parasitismo e alguns aspectos biológicos de Tetrastichus howardi, criados em pupa de E. ello. Em geral, o parasitismo e emergência de T. howardi em pupas de E. ello foram de 64%. Duração do ciclo (ovo-adulto) de T. howardi em pupas de E. ello foi de 20,12±0,15 dias a 25±2°C, 70±10% de umidade relativa e 14h de fotofase. A progênie de T. howardi por pupa de E. ello foi 466±0,44. A longevidade de T. howardi, fêmeas e machos, foram de 15±0,57 e 12±0,93 dias, respectivamente. A razão sexual foi de 0,95±0,06, e a proporção de fêmeas por fêmea foi de 44±0,45. T. howardi parasita e se desenvolve em pupas de E. ello.

Erinnyis ello is one of the main pests of the cassava crop, and its natural enemies including egg, caterpillar, and pupal parasitoids. The aim of this study was to evaluate parasitism and biological aspects of Tetrastichus howardi on E. ello pupae. In general, parasitism and emergence of T. howardi on E. ello pupae was 64%. Cycle duration (egg to adult) of T. howardi on E. ello pupae was of 20.12±0.15 days at 25±2°C, 70±10% relative humidity, and 14-h photophase. The progeny of T. howardi by E. ello pupae was of 466±0.44. Longevity of T. howardi females and males was of 15±0.57 and 12±0.93 days, respectively. The sex ratio was of 0.95±0.06, and the ratio of females per female was 44±0.45. T. howardi parasite and develops on E. ello pupae.

Efeitos de imunossupressores sobre o sistema imunológico em transplantes de células germinativas em trutas arco-íris

Resumo YOSHINAGA, T.T. Efeitos de imunossupressores sobre o sistema imunológico em transplantes de células germinativas em trutas arco-íris Os transplantes de células germinativas e enxertos de testículo podem ser aplicados na reprodução de espécies comerciais e na conservação de espécies ameaçadas de extinção. No entanto, a maior limitação dos transplantes está na sua limitada eficiência, devido à baixa porcentagem de hospedeiros capazes de gerar gametas derivados do doador e da rejeição de enxertos de testículo alogênicos após poucas semanas de sua implantação. O sistema imunológico dos hospedeiros podem estar envolvidos na baixa de eficiência dos transplantes e na rejeição dos enxertos. Desta forma, este trabalho buscou verificar se a administração de drogas imunossupressoras como o tacrolimus e ciclosporina em emulsão poderiam ser utilizados para prolongar a viabilidade de enxertos de testículo em trutas arco-íris. Na primeira parte, experimentos in vitro com leucócitos do sangue periférico demonstraram que ambos o tacrolimus e a ciclosporina impedem a proliferação celular mesmo sob estímulo proliferativo da concanavalina. Nos ensaios in vivo, ambas as doses de tacrolimus (0,5 e 1,5 mg/kg) e a mais baixa de ciclosporina (20 mg/kg) inibiram significativamente a expressão de il2 no rim cefálico três dias após a injeção. Já a dose de 40 mg/kg de ciclosporina inibiu a expressão de il2 por até sete dias após a injeção. Na segunda parte, enxertos alogênicos de testículo foram realizados em animais tratados semanalmente com emulsões de tacrolimus. As análises histológicas (coloração H.E.) e as de RT-PCR (vasa e txdnc6) demonstraram a presença de espermatogônias na primeira semana e indicaram a presença de espermátides/espermatócitos na quinta semana, respectivamente, em alguns animais do grupo tratado com a dose de 0,5 mg/kg de tracrolimus. No grupo tratado com a dose mais alta de tacrolimus (1,5 mg/kg) e no grupo controle (sem imunossupressor), células germinativas ou marcadores destas não foram detectados. Estes resultados, portanto, fazem do tacrolimus um imunossupressor promissor para utilização em enxertos alogênicos e também em transplantes de células germinativas de truta arco-íris. A administração concomitante de um outro imunossupressor conjugado ao tacrolimus (na baixa dosagem) para inibir duas ou mais vias de ativação do sistema imunológico, conforme utilizado em transplantes de órgãos em humanos, pode ser uma alternativa para otimizar os efeitos imunossupressivos nos animais receptores. Palavras-Chave Reprodutores substitutos; imunossupressão;transplante de células germinativas;

Abstract YOSHINAGA, T.T Effects of immunosuppressants on immune system in germ cell transplantation in rainbow trout Germ cell transplantation and testis graft can be applied for the reproduction of commercial or endangered species. However, mechanisms of rejection from the host immune system might limit the production of surrogate gametes and progeny after transplantation and induce rejection of testis allografts within few weeks. In this work, we aimed to administer immunosuppressants-containing emulsions in order to verify whether they are capable to prevent immune rejection and promote testis allograft survival in rainbow trout. In the first part of this study, it was demonstrated in vitro that tacrolimus and cyclosporine were able to inhibit leucocyte proliferation even under concanavalin-induced mitotic stimulation. In in vivo experiments, both dosage of tacrolimus (0,5 and 1,5 mg/kg) and a lower of cyclosporine (20 mg/kg) inhibited significantly the expression of il2 in head kidney at three days post-injection. A higher dosage of cyclosporine (40 mg/kg) was able to inhibit il2 expression for up to seven days post-injection. In the second part, testis allografts were conducted in fish treated weekly with tacrolimus-containing emulsions. Histological (H.E. staining) and RT-PCR (vasa and txdnc6) analysis demonstrated the presence of spermatogonias in the first week and indicated the presence of spermatids/spermatocytes in the fifth week, respectively, in some animals treated with 0,5 mg/kg of tacrolimus. In the group treated with the highest tacrolimus dose (1,5 mg/kg) and in the control group (without immunosupressant), no germ cells or their respective markers were detected. These results suggest that tacrolimus comprise a promising immunosuppressant, with applications to testis allografts or germ cell transplantation in rainbow trout. Co-administration combining tacrolimus (at lower dose) with other immunosuppressive drugs for inhibiting more than two activation pathways of the immune system, as done in human organ transplantation, can be an alternative to optimize the immunossupressive effects in host organisms. Keywords Surrogate broodstock; immunosuppression; germ cell transplantation;

Densidade de fêmeas de Palmistichus elaeisis Delvare & LaSalle, 1993 (Hymenoptera: Eulophidae) para sua reprodução em pupas de Anticarsia gemmatalis Hübner, 1818 (Lepidoptera: Noctuidae) (AU) / Density of females of Palmistichus elaeisis Delvare & LaSalle, 1993 (Hymenoptera: Eulophidae) for reproduction in Anticarsia gemmatalis Hübner, 1818 (Lepidoptera: Noctuidae) pupae. (AU)

A densidade de parasitoides por hospedeiro influencia nas suas principais características biológicas. Assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar o desenvolvimento do parasitoide Palmistichus elaeisis Delvare & LaSalle, 1993 (Hymenoptera: Eulophidae) em pupas de Anticarsia gemmatalisHübner, 1818 (Lepidoptera: Noctuidae) expostas nas densidades de 1:1, 2:1, 4:1, 6:1, 8:1, 10:1 ou 12:1 parasitoides/hospedeiro, respectivamente. Os parasitoides permaneceram em contato com as pupas por 24 horas em tubos de vidro (14,0 x 2,2 cm), acondicionadas em câmara climatizada a 25 ± 1º C, 70 ± 10% de UR e fotofase de 14 horas. Observou-se 54,54 e 90,90% de pupas parasitadas nas densidades de 1:1 e 2:1, respectivamente, e 100,00% nas demais densidades com melhor índice de emergência (72,72%) na densidade 6:1. A duração do ciclo de vida (ovo-adulto) decresceu com o aumento da densidade de fêmeas e variou de 20 a 22 dias. A progênie variou de 16 a 225 descendentes por pupa, com melhor resultado na densidade 8:1. A razão sexual do parasitoide variou de 0,95 ± 0,00 a 0,97 ± 0,01, sem diferença significativa e o comprimento do corpo de fêmeas e de machos variou de 1,95 ± 0,02 a 2,22 ± 0,03 mm e de 1,49 ± 0,02 a 1,87 ± 0,01 mm, respectivamente. Seis a oito fêmeas de P. elaeisis por pupa de A. gemmatalis proporcionam maior emergência e progênie do parasitoide, viabilizando sua criação massal. (AU)

DENSITY OF FEMALES OF PALMISTICHUS ELAEISIS DELVARE & LASALLE, 1993 (HYMENOPTERA: EULOPHIDAE) FOR REPRODUCTION IN ANTICARSIA GEMMATALISHÜBNER, 1818 (LEPIDOPTERA: NOCTUIDAE) PUPAE. The density of parasitoids per host affects their biological characteristics. The present study aimed to evaluate the development of Palmistichus elaeisis Delvare & LaSalle, 1993 (Hymenoptera: Eulophidae) in Anticarsia gemmatalisHübner, 1818 (Lepidoptera: Noctuidae) pupae exposed to 1:1, 2:1, 4:1, 6:1, 8:1, 10:1 or 12:1 females/ host, respectively. The parasitoid remained in contact with pupae for 24 h in glass tubes (14.0 x 2.2 cm), packed in a climate controlled chamber regulated at 25 ± 1ºC, 70 ± 10% relative humidity and photophase of 14 hours. We observed 54.54 and 90.90% of pupae parasitized at densities of 1:1 and 2:1, respectively, and 100.00% in the other densities with a better emergence index (72.72%) at a density of 6:1. The duration of the (egg-adult) life cycle decreased with increasing density of females and varied from 20 to 22 days. The offspring varied from 16 to 225 descendants per A. gemmatalis pupae with best results at the density 8:1. The sex ratio of the parasitoid varied from 0.95 ± 0.00 to 0.97 ± 0.01 without significant differences, and the body length of females and of males varied from 1.95 ± 0.02 to 2.22 ± 0.03 mm and 1.49 ± 0.02 to 1.87 ± 0.01 mm, respectively. Six to eight of P. elaeisis females per A. gemmatalis pupae provide more emergence and offspring of the parasitoid, allowing for its mass rearing. (AU)

Densidade de fêmeas de Palmistichus elaeisis Delvare & LaSalle, 1993 (Hymenoptera: Eulophidae) para sua reprodução em pupas de Anticarsia gemmatalis Hübner, 1818 (Lepidoptera: Noctuidae) (AU) / Density of females of Palmistichus elaeisis Delvare & LaSalle, 1993 (Hymenoptera: Eulophidae) for reproduction in Anticarsia gemmatalis Hübner, 1818 (Lepidoptera: Noctuidae) pupae. (AU)

A densidade de parasitoides por hospedeiro influencia nas suas principais características biológicas. Assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar o desenvolvimento do parasitoide Palmistichus elaeisis Delvare & LaSalle, 1993 (Hymenoptera: Eulophidae) em pupas de Anticarsia gemmatalisHübner, 1818 (Lepidoptera: Noctuidae) expostas nas densidades de 1:1, 2:1, 4:1, 6:1, 8:1, 10:1 ou 12:1 parasitoides/hospedeiro, respectivamente. Os parasitoides permaneceram em contato com as pupas por 24 horas em tubos de vidro (14,0 x 2,2 cm), acondicionadas em câmara climatizada a 25 ± 1º C, 70 ± 10% de UR e fotofase de 14 horas. Observou-se 54,54 e 90,90% de pupas parasitadas nas densidades de 1:1 e 2:1, respectivamente, e 100,00% nas demais densidades com melhor índice de emergência (72,72%) na densidade 6:1. A duração do ciclo de vida (ovo-adulto) decresceu com o aumento da densidade de fêmeas e variou de 20 a 22 dias. A progênie variou de 16 a 225 descendentes por pupa, com melhor resultado na densidade 8:1. A razão sexual do parasitoide variou de 0,95 ± 0,00 a 0,97 ± 0,01, sem diferença significativa e o comprimento do corpo de fêmeas e de machos variou de 1,95 ± 0,02 a 2,22 ± 0,03 mm e de 1,49 ± 0,02 a 1,87 ± 0,01 mm, respectivamente. Seis a oito fêmeas de P. elaeisis por pupa de A. gemmatalis proporcionam maior emergência e progênie do parasitoide, viabilizando sua criação massal.

DENSITY OF FEMALES OF PALMISTICHUS ELAEISIS DELVARE & LASALLE, 1993 (HYMENOPTERA: EULOPHIDAE) FOR REPRODUCTION IN ANTICARSIA GEMMATALISHÜBNER, 1818 (LEPIDOPTERA: NOCTUIDAE) PUPAE. The density of parasitoids per host affects their biological characteristics. The present study aimed to evaluate the development of Palmistichus elaeisis Delvare & LaSalle, 1993 (Hymenoptera: Eulophidae) in Anticarsia gemmatalisHübner, 1818 (Lepidoptera: Noctuidae) pupae exposed to 1:1, 2:1, 4:1, 6:1, 8:1, 10:1 or 12:1 females/ host, respectively. The parasitoid remained in contact with pupae for 24 h in glass tubes (14.0 x 2.2 cm), packed in a climate controlled chamber regulated at 25 ± 1ºC, 70 ± 10% relative humidity and photophase of 14 hours. We observed 54.54 and 90.90% of pupae parasitized at densities of 1:1 and 2:1, respectively, and 100.00% in the other densities with a better emergence index (72.72%) at a density of 6:1. The duration of the (egg-adult) life cycle decreased with increasing density of females and varied from 20 to 22 days. The offspring varied from 16 to 225 descendants per A. gemmatalis pupae with best results at the density 8:1. The sex ratio of the parasitoid varied from 0.95 ± 0.00 to 0.97 ± 0.01 without significant differences, and the body length of females and of males varied from 1.95 ± 0.02 to 2.22 ± 0.03 mm and 1.49 ± 0.02 to 1.87 ± 0.01 mm, respectively. Six to eight of P. elaeisis females per A. gemmatalis pupae provide more emergence and offspring of the parasitoid, allowing for its mass rearing.

Densidade de fêmeas de Palmistichus elaeisis Delvare & LaSalle, 1993 (Hymenoptera: Eulophidae) para sua reprodução em pupas de Anticarsia gemmatalis Hübner, 1818 (Lepidoptera: Noctuidae)

The density of parasitoids per host affects their biological characteristics. The present study aimed to evaluate the development of Palmistichus elaeisis Delvare & LaSalle, 1993 (Hymenoptera: Eulophidae) in Anticarsia gemmatalis Hübner, 1818 (Lepidoptera: Noctuidae) pupae exposed to 1:1, 2:1, 4:1, 6:1, 8:1, 10:1 or 12:1 females/ host, respectively. The parasitoid remained in contact with pupae for 24 h in glass tubes (14.0 x 2.2 cm), packed in a climate controlled chamber regulated at 25 ± 1ºC, 70 ± 10% relative humidity and photophase of 14 hours. We observed 54.54 and 90.90% of pupae parasitized at densities of 1:1 and 2:1, respectively, and 100.00% in the other densities with a better emergence index (72.72%) at a density of 6:1. The duration of the (egg-adult) life cycle decreased with increasing density of females and varied from 20 to 22 days. The offspring varied from 16 to 225 descendants per A. gemmatalis pupae with best results at the density 8:1. The sex ratio of the parasitoid varied from 0.95 ± 0.00 to 0.97 ± 0.01 without significant differences, and the body length of females and of males varied from 1.95 ± 0.02 to 2.22 ± 0.03 mm and 1.49 ± 0.02 to 1.87 ± 0.01 mm, respectively. Six to eight of P. elaeisis females per A. gemmatalis pupae provide more emergence and offspring of the parasitoid, allowing for its mass rearing.

A densidade de parasitoides por hospedeiro influencia nas suas principais características biológicas. Assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar o desenvolvimento do parasitoide Palmistichus elaeisis Delvare & LaSalle, 1993 (Hymenoptera: Eulophidae) em pupas de Anticarsia gemmatalis Hübner, 1818 (Lepidoptera: Noctuidae) expostas nas densidades de 1:1, 2:1, 4:1, 6:1, 8:1, 10:1 ou 12:1 parasitoides/hospedeiro, respectivamente. Os parasitoides permaneceram em contato com as pupas por 24 horas em tubos de vidro (14,0 x 2,2 cm), acondicionadas em câmara climatizada a 25 ± 1º C, 70 ± 10% de UR e fotofase de 14 horas. Observou-se 54,54 e 90,90% de pupas parasitadas nas densidades de 1:1 e 2:1, respectivamente, e 100,00% nas demais densidades com melhor índice de emergência (72,72%) na densidade 6:1. A duração do ciclo de vida (ovo-adulto) decresceu com o aumento da densidade de fêmeas e variou de 20 a 22 dias. A progênie variou de 16 a 225 descendentes por pupa, com melhor resultado na densidade 8:1. A razão sexual do parasitoide variou de 0,95 ± 0,00 a 0,97 ± 0,01, sem diferença significativa e o comprimento do corpo de fêmeas e de machos variou de 1,95 ± 0,02 a 2,22 ± 0,03 mm e de 1,49 ± 0,02 a 1,87 ± 0,01 mm, respectivamente. Seis a oito fêmeas de P. elaeisis por pupa de A. gemmatalis proporcionam maior emergência e progênie do parasitoide, viabilizando sua criação massal.

ATIVIDADE ACARICIDA DO MONOTERPENO CARVACROL SOBRE FÊMEAS ADULTAS DE Rhipicephalus (Boophilus) microplus (ACARI: IXODIDAE) LAVRAS MG 2017

O desenvolvimento de resistência de cepas de Rhipicephalus (Boophilus) microplus a acaricidas sintéticos é crescente. A infestação dos rebanhos por esse carrapato é um problema no Brasil e em países de clima temperado. Este artrópode causa enormes perdas econômicas à pecuária em virtude de seu hábito alimentar que debilita a saúde e transmite doenças aos seus hospedeiros. Os fitoterápicos e, em especial o carvacrol, têm se revelado uma alternativa no controle desse carrapato, uma vez que apresentam efeitos acaricidas e repelentes, além de configurarem método parcialmente seguro, pela rápida degradação e baixa contaminação do ambiente, do consumidor de produtos de origem animal e do hospedeiro. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi determinar a eficácia do carvacrol sobre fêmeas adultas de R. microplus por meio da avaliação da mortalidade e de parâmetros reprodutivos. Foram realizados bioensaios para determinação da CL50 e avaliação dos parâmetros reprodutivos das fêmeas, ambos a partir do Teste de Imersão de Adultos (TIA). Para determinação da CL50 onze grupos (n = 360) foram separados em concentrações que variaram de 0,099 a 1,304% e dois grupos serviram de controle negativo, um a base de água destilada (100%) e outro de álcool etílico 50% (v/v). Para avaliação dos parâmetros reprodutivos, as fêmeas foram submetias ao TIA em tratamentos contendo 20% (n = 10), 40% (n = 10), 60% (n = 13), 80% (n = 16) e 100% da CL50 (n = 20), e em tratamentos controle de água destilada (100%) (n = 10) e outro de álcool etílico 50% (v/v) (n = 10). Os grupos foram mantidos a 27±1 °C e umidade>80±10 %. O peso da massa de ovos, o índice de produção de ovos, o período de pré-oviposição e a taxa de fecundidade dos grupos 80% e 100% da CL50 apresentaram diferença estatística (p<0,05) comparados aos 9 grupos controle. A CL50 encontrada foi de 20,11 mg/mL e a eficácia de controle desta concentração foi de 61,10% quando comparada ao controle de água destilada. Sendo assim, os resultados demonstram que o carvacrol possui atividade acaricida sobre R. microplus.

ABSTRACT Resistant strains of Rhipicephalus (Boophilus) microplus to synthetic acaricides is increasing. Herds infestation by this tick is a problem in Brazil and in temperate countries. These arthropods cause huge economic losses to livestock due to their feeding habits that weaken the health and transmit diseases to their hosts. The phytotherapics, and especially carvacrol, have been shown to be an alternative in the control of this tick, since they have acaricidal and repellent effects, besides setting up a partially safe method, due to the rapid degradation and low contamination of the environment, the consumer of animal products and the host. Therefore, the objective of the present study was to determine the efficacy of carvacrol on adult R. microplus females by evaluating mortality and reproductive parameters. Bioassays were performed to determine the LC50 and to evaluate the reproductive parameters of the females, both from the Adult Immersion Test (AIT). For the determination of the LC50, eleven groups (n = 360) were separated in concentrations ranging from 0.099 to 1.304% and two groups served as negative control, one distilled water (100%) and the other 50% (v/v). To evaluate the reproductive parameters, the females were submitted to AIT in treatments containing 20% (n = 10), 40% (n = 10), 60% (n = 13), 80% (N n = 20) and 100% of LC50 (n = 20), and in control treatments of distilled water (100%) (n = 10) and ethyl alcohol 50% (v/v) (n = 10). The groups were maintained at 27 ± 1 ° C and humidity> 80 ± 10%. Egg weight, egg production index, pre-oviposition period and fecundity rate of the 80% and 100% LC50 groups presented a statistical difference (p<0.05) in the control groups. The LC50 found was 20.11 mg / mL and the control efficacy of this concentration was 64.67% compared to the ethyl alcohol control 50% (v/v). Thus, the results demonstrate that carvacrol has a significant acaricidal potential, and can contribute as another alternative in the control of R. microplus. 11

Efeito da suplementação de Bacillus cereus var. Toyoi na resposta humoral de animais vacinados experimentalmente com antígeno particulado de Leishmania infantum chagasi

A imunização por meio da vacinação tem se mostrado uma alternativa eficiente no 9 controle sanitário. Porém apesar do grande avanço tecnológico, muitas vacinas são 10 pouco imunogênicas ou não oferecem uma resposta imune capaz de prevenir a 11 infecção, como no caso da Leishmaniose visceral canina. Uma alternativa para a 12 melhoria da eficiência destas vacinas seria a modulação do sistema imunológico pelo 13 uso dos probióticos, que são micro-organismos vivos que conferem benefícios a 14 saúde do hospedeiro. Esse trabalho teve como objetivo avaliar o efeito 15 imunomodulador do probiótico Bacillus cereus var. Toyoi em camundongos vacinados 16 experimentalmente contra Leishmania infantum chagasi, durante o período da 17 administração do probiótico e após a suspensão do mesmo. Foram utilizados 24 18 camundongos Balb/c, com 21 dias de idade, vacinados experimentalmente contra 19 Leishmania infantun chagasi, divididos em três grupos experimentais. Um grupo sem 20 suplementação (A) e os outros dois (B e C) suplementados por via oral com Bacillus 21 cereus var. Toyoi, na concentração de 106 UFC/g-1 incorporado na ração, em 22 diferentes períodos. Para a investigação da cinética da produção dos anticorpos foram 23 coletadas amostras de sangue e os soros foram submetidos ao Ensaio da 24 Imunoabsorbância Ligado a Enzima indireto, utilizando antígeno particulado. Os 25 animais de todos os grupos apresentaram soroconversão de IgG total contra o 26 antígeno utilizado, porém não foi identificado diferença estatística (nível de p> 0,05) 27 entre os grupos suplementados e o controle. Na análise de isotipagem, o grupo 28 suplementado com probiótico no período contínuo apresentou resultados de 29 soroconversão de IgG2a/IgG1 superior quando comparado ao grupo C (1,8 vezes no 30 dia 63), mantendo o seu título até o final do experimento (1,2 vezes no dia 84), 31 mostrando que a administração do probiótico por período contínuo modulou 32 positivamente a resposta imune humoral contra o antígeno vacinal utilizado no estudo. 33 Todos os procedimentos realizados estão de acordo com a Legislação Brasileira e as 34 normas do Conselho Nacional de Controle de Experimentação Animal (CONCEA) sob 35 aprovação pelo Comitê de Ética de Experimentação Animal da Universidade Federal 36 de Pelotas (UFPel), protocolo nº 5758.

Immunization through vaccination has been shown to be an efficient alternative in 10 sanitary control. But despite the great technological advance, many vaccines are 11 poorly immunogenic or do not offer an immune response capable of preventing 12 infection, as in the case of canine visceral leishmaniasis. An alternative to improving 13 the efficiency of these vaccines would be the modulation of the immune system using 14 probiotics, which are living microorganisms that confer benefits to host health. This 15 work aimed to evaluate the immunomodulatory effect of the probiotic Bacillus cereus 16 var. Toyoi in experimentally vaccinated mice against Leishmania infantum chagasi, 17 during the period of administration of the probiotic and after the suspension of the 18 probiotic. 24 Balb/c mice, 21 days old, experimentally vaccinated against Leishmania 19 infantun chagasi, were divided in three experimental groups. One group without 20 supplementation (A) and the other two (B and C) supplemented orally with Bacillus 21 cereus var. Toyoi, at the concentration of 106 CFU / g-1 incorporated in the diet, at 22 different periods. To investigate the kinetics of antibody production, blood samples 23 were collected and the sera were submitted to the indirect enzyme-linked 24 immunoabsorbance assay, using particulate antigen. Animals of all groups presented 25 total IgG seroconversion against the antigen used, but no statistical difference (p> 0.05 26 level) was found between the supplemented and control groups. In the isotype 27 analysis, the group supplemented with probiotic in the continuous period presented 28 higher IgG2a / IgG1 seroconversion results when compared to group C (1.8 times on 29 day 63), maintaining its titre until the end of the experiment (1,2 Times at day 84), thus 30 suggesting that administration of the probiotic for a continuous period positively 31 modulated the humoral immune response against the vaccine antigen used in the 32 study. All the procedures performed are in accordance with the Brazilian legislation 33 and the norms of the National Council of Control of Animal Experimentation 34 (CONCEA), approved by the Ethics Committee of Animal Experimentation of the 35 Federal University of Pelotas (UFPel), protocol no. 5758.

AVALIAÇÃO IN VITRO DO EFEITO DE RIZOBACTÉRIAS SOBRE MELOIDOGYNE INCOGNITA, M. JAVANICA E PRATYLENCHUS ZEAE

ABSTRACT Considering the losses caused by nematodes to different host plant, rhizobacteria are presented as an alternative to to control uch pathogens. So the goal of this study was to evaluate in vitro the action of 20 isolates of rhizobacteria on hatching and motility of second stage juveniles of the Meloidogyne incognita and M. javanica and on the motility of Pratylenchus zeae. The experiment was conducted under laboratory conditions and in a completely randomize design with four replications, and each experimental plot was represented by a hatching chamber. Measurements were spaced every 72 hours. After the evaluations showed that the isolates not influenced the emergence of M. incognita. M. javanica entertaining for isolates FCAV FCAV 8 and 10 showed pronounced ovicidal action. Among the isolates tested on the motility root-knot nematode, only isolates of Bacillus amyloliquefaciens and B. subtilis showed potential as an agent for control of second stage juveniles of M. javanica. When we assessed the motility of isolated active on specimens of .. zeae isolates the FCAV 5, 7 and FCAV B.amyloliquefaciens exhibited potential as agents of biological control of .. zeae. These results confirm that among the rhizobacteria may be found effective agents for the control of nematodes.

RESUMO Considerando as perdas causadas por nematoides às diversas culturas, as rizobactérias se apresentam como uma alternativa para manejar esse patógenos. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro a ação de 20 isolados de rizobactérias sobre a eclosão e a motilidade de juvenis de segundo estádio de Meloidogyne incognita e M. javanica e sobre a motilidade de Pratylenchus zeae. O experimento foi instalado em condições de laboratório e em delineamento inteiramente casuali-zado com quatro repetições, constituídas por uma câmara de eclosão cada. As avaliações foram realizadas a cada 72 horas. Após as avaliações observou-se que nenhum dos isolados avaliados influenciaram a eclosão de M. incognita, entretanto para M. javanica, os isolados FCAV 8 e FCAV 10 proporcionaram pronunciada ação ovicida. Entre os isolados testados sobre a motilidade dos nematoides-das-galha apenas os isolados de Bacillus amyloliquefaciens e B. subtillis evidenciaram potencial como agente do controle de juvenis de segundo estádio de M. javanica. Quando se avaliou a motilidade dos isolados sobre espécimes ativos de .. zeae, obsevou-se que os isolados FCAV 5, FCAV 7 e B. amyloliquefaciens exibiram potencial como agentes do controle biológico de .. zeae. Estes resultados confirmam que entre as rizobactérias podem ser encontrados agentes eficazes para o controle de nematoides.

Avaliação in vitro do efeito de rizobactérias sobre Meloidogyne incognita, M. javanica e Pratylenchus zeae / In vitro assessment of the effect of rhizobacteria on Meloidogyne incognita, M. javanica and Pratylenchus zeae

Considerando as perdas causadas por nematoides às diversas culturas, as rizobactérias se apresentam como uma alternativa para manejar esse patógenos. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro a ação de 20 isolados de rizobactérias sobre a eclosão e a motilidade de juvenis de segundo estádio de Meloidogyne incognita e M. javanica e sobre a motilidade de Pratylenchus zeae. O experimento foi instalado em condições de laboratório e em delineamento inteiramente casuali-zado com quatro repetições, constituídas por uma câmara de eclosão cada. As avaliações foram realizadas a cada 72 horas. Após as avaliações observou-se que nenhum dos isolados avaliados influenciaram a eclosão de M. incognita, entretanto para M. javanica, os isolados FCAV 8 e FCAV 10 proporcionaram pronunciada ação ovicida. Entre os isolados testados sobre a motilidade dos nematoides-das-galha apenas os isolados de Bacillus amyloliquefaciens e B. subtillis evidenciaram potencial como agente do controle de juvenis de segundo estádio de M. javanica. Quando se avaliou a motilidade dos isolados sobre espécimes ativos de .. zeae, obsevou-se que os isolados FCAV 5, FCAV 7 e B. amyloliquefaciens exibiram potencial como agentes do controle biológico de .. zeae. Estes resultados confirmam que entre as rizobactérias podem ser encontrados agentes eficazes para o controle de nematoides.

Considering the losses caused by nematodes to different host plant, rhizobacteria are presented as an alternative to to control uch pathogens. So the goal of this study was to evaluate in vitro the action of 20 isolates of rhizobacteria on hatching and motility of second stage juveniles of the Meloidogyne incognita and M. javanica and on the motility of Pratylenchus zeae. The experiment was conducted under laboratory conditions and in a completely randomize design with four replications, and each experimental plot was represented by a hatching chamber. Measurements were spaced every 72 hours. After the evaluations showed that the isolates not influenced the emergence of M. incognita. M. javanica entertaining for isolates FCAV FCAV 8 and 10 showed pronounced ovicidal action. Among the isolates tested on the motility root-knot nematode, only isolates of Bacillus amyloliquefaciens and B. subtilis showed potential as an agent for control of second stage juveniles of M. javanica. When we assessed the motility of isolated active on specimens of .. zeae isolates the FCAV 5, 7 and FCAV B.amyloliquefaciens exhibited potential as agents of biological control of .. zeae. These results confirm that among the rhizobacteria may be found effective agents for the control of nematodes.

Avaliação da ação de secreções e excreções larvais de Chrysomya megacephala (Fabricius) (Diptera: Calliphoridae) na recuperação de lesões tegumentares em ratos Wistar

A terapia larval (TL) consiste na aplicação de larvas estéreis de moscas necrófagas, criadas em condições de laboratório, sobre lesões tegumentares agudas, crônicas e/ou infectadas visando promover ou acelerar a cicatrização. Os métodos convencionais para o tratamento de lesões incluem, atual e comumente, o desbridamento mecânico e/ou uso de diversos curativos especiais. As larvas particularmente podem estimular o processo de cicatrização por dois caminhos: através da remoção do tecido necrosado (durante o ato de alimentação) e por desinfecção do leito da ferida (ao excretar substâncias bactericidas). A TL tem sido usada com sucesso em mais de 20 países e tem chamado a atenção, no Brasil, por representar uma alternativa viável e segura para o tratamento de lesões de difícil cicatrização. Este estudo objetivou avaliar a ação de secreções e excreções larvais de uma espécie de mosca, Chrysomya megacephala (Fabricius) (Diptera: Calliphoridae) sobre o processo de cicatrização de lesões tegumentares em ratos Wistar. Os animais (N= 16), machos com idade em torno de 48 semanas e peso entre 396 e 641 gramas, foram divididos em quatro grupos experimentais, cada qual constituído por quatro indivíduos, sendo assim denominados: grupo TLT (submetidos à terapia larval clássica, isto é, com uso de larvas vivas e íntegras sobre as lesões); grupo TLM (aplicação de larvas maceradas); grupo TLS (aplicação de secreções e excreções larvais); e grupo CONT (grupo controle, isto é, sem tratamento). Todas as larvas de C. megacephala usadas neste estudo foram obtidas a partir de colônias estabelecidas em laboratório, tendo sido os ovos previamente desinfectados, antes da aplicação terapêutica, para assegurar a assepsia da técnica. A cicatrização do tecido injuriado ocorreu em menor intervalo de dias, 24 e 25, nos animais submetidos aos tratamentos TLT e TLS, respectivamente, quando comparado ao controle. Adicionalmente, nos grupos TLT e TLS a neovascularização foi bastante evidente. Esses dados tornam evidente a importância de elucidar os mecanismos de ação das larvas nos processos de cicatrização de lesões e interação com a resposta imune do hospedeiro vertebrado visando, sobretudo, a redução no tempo de internação hospitalar e dos casos que resultam em agravamento ou morte por septicemia.

Larval therapy (LT) consists in applying sterile necrophagous fly larvae, reared under laboratory conditions, on acute, chronic and/or infected wounds in order to promote or accelerate wound healing. Conventional methods for the treatment of injuries include current and commonly, mechanical debridement and/or use of several special dressings. Larvae can particularly stimulate the healing process in two ways: by removing the necrotic tissue (during the act-feeding) and disinfecting the wound bed (to excrete bactericidal substances). LT has been used successfully in more than 20 countries and has drawn attention in Brazil to represent a viable and safe alternative for the treatment of difficult to heal injuries. This study aimed to evaluate the action of larval secretions and excretions of the species Chrysomya megacephala (Fabricius) (Diptera: Calliphoridae) on the healing process of tegumental injury in Wistar rats. The animals (N= 16), male aged approximately 48 weeks and weighing between 396 and 641 grams, were divided into four groups, each consisting of four individuals, named as follows: group TLT (submitted to classical maggot therapy, i.e., with the use of intact and living larvae on injuries); group LTM (with application of macerated larvae); group LTS (with application of larval secretions and excretions); and group CONT (control group, i.e., without treatment).All larvae of C. megacephala used in this study were obtained from the colonies established in laboratory, and the eggs were previously disinfected before application to ensure the asepsis of the therapeutic technique. The healing of the injured tissue occurred in a shorter interval of days, 24 and 25, in the animals submitted to the both TLT and LTS treatments, respectively, when compared to the control. Additionally, in TLT and LTS groups the neovascularization was very evident. These data clearly demonstrate the importance of elucidating the mechanisms of action of the larvae in the wound healing processes and interaction with the immune response of the vertebrate host, aiming mainly to a reduction in the time of hospitalization and the number of cases that result in aggravation or death from sepsis.

Imunização com Ichthyophthirius multifiliis (Fouquet, 1876) em jundiá Rhamdia quelen (Quoy & Gaimard, 1824): efeitos na sobrevivência, respostas hemato-imunológica, bioquímica e histopatológica

O jundiá (Rhamdia quelen) representa importante fonte de renda para os produtores de peixes no sul do Brasil. No entanto, uma das causas mais importantes de perdas econômicas é a ocorrência do parasito Icthyophthirius multifiliis na fase de alevinagem. Uma alternativa para o controle do parasito é a utilização de vacina, por meio de imunização, que pode ser feita por meio de injeção intraperitoneal (i.p.) com terontes vivos ou por banhos de imersão. Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito da imunização com terontes vivos e sua influência na sobrevivência, resposta hemato-imunológica e histopatológica em jundiá. Foram realizados dois ensaios, imunização via i.p. (ensaio I) e imunização via banho de imersão (ensaio II). Os peixes foram divididos em controle; não imunizado e desafiado com 12.000 terontes/peixe; não imunizado e desafiado com 22.000 terontes/peixe; imunizado e desafiado com 12.000 terontes/peixe; imunizado e desafiado com 22.000 terontes/peixe. Nos peixes do ensaio I o número de trombócitos, leucócitos, linfócitos, neutrófilos e monócitos foram maiores 20 dias após imunização e menores nos peixes após o desafio. Os valores de imunoglobulina total foram maiores nos peixes não imunizados. Os níveis de catalase no fígado dos peixes no ensaio II foram maiores (1.738,47 U/mgprt) após 14 dias do que após 21 dias (1.114,26 U/mgprt) de imunização. Os resultados mostraram que novos parâmetros como proteínas totais, imunoglobulinas e enzimas antioxidantes podem ser utilizados para avaliar a resposta do hospedeiro à infecção. As alterações histológicas nos peixes foram consideradas leves e de ocorrência eventual, com exceção do fígado que apresentou significativa atrofia e hipertrofia de hepatócitos após imunização via i.p. O desenvolvimento de uma vacina eficiente contra o protozoário desperta grande interesse e se constitui em importante ferramenta para piscicultura sustentável

Silver catfish (Rhamdia quelen) represents an important source of economic income for fish farmers in Southern Brazil. Nevertheless, one of the most important cause of economic losses is the ciliate protozoan Ichthyophthirius multifiliis in fingerlings. An alternative to control the parasite is the immunization with live theronts by intraperitoneal injection (i.p.) or immersion bath. The i.p. immunization is the most efficient method. On the other hand, the immersion bath is more feasible for fish farmers. In two assays, this study aimed to evaluate the effects of immunization with live theronts and its influence on the survival, hemato-immunological response and histopathological analysis in jundiá. Fish were divided in control (non immunized no challenged); non immunized and challenged with 12,000 theronts/fish; non immunized and challenged with 22,000 theronts/fish; immunized and challenged with 12,000 theronts/fish; immunized and challenged with 22,000 theronts/fish. In the assay I showed higher numbers of thrombocytes, leukocytes, lymphocytes, neutrophils and monocytes 20 days after injection and lower numbers after challenge. The immunoglobulin values were higher in fish non immunized. The levels of catalase in the liver in the assay II were greater (1,738.47 U/mgprt) after 14 days than that observed after 21 days (1,114.26 U/mgprt) of immunization. The results showed that new parameters like total protein, immunoglobulin and antioxidant enzymes could be considered in evaluating the host response to infection. Histological alterations in fish were considered light and of eventual occurrence, except for liver that presented significant atrophy and hypertrophy of hepatocytes after immunization via i.p. The development of an efficient vaccine against protozoan awakens great interest and constitutes an important tool for sustainable fish farming

Tomato yellow vein streak virus: relationship with Bemisia tabaci biotype B and host range

The Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV) is a putative species of begomovirus, which was prevalent on tomato crops in São Paulo State, Brazil, until 2005. The objectives of this study were to evaluate the interaction between ToYVSV and its vector Bemisia tabaci biotype B and to identify alternative hosts for the virus. The minimum acquisition and inoculation access periods of ToYVSV by B. tabaci were 30 min and 10 min, respectively. Seventy five percent of tomato-test plants were infected when the acquisition and inoculation access periods were 24 h. The latent period of the virus in the insect was 16 h. The ToYVSV was retained by B. tabaci until 20 days after acquisition. First generation of adult whiteflies obtained from viruliferous females were virus free as shown by PCR analysis and did not transmit the virus to tomato plants. Out of 34 species of test-plants inoculated with ToYVSV only Capsicum annuum, Chenopodium amaranticolor, C. quinoa, Datura stramonium, Gomphrena globosa, Nicotiana clevelandii and N. tabacum cv. TNN were susceptible to infection. B. tabaci biotype B was able to acquire the virus from all these susceptible species, transmitting it to tomato plants.

O Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV) é uma espécie putativa de begomovirus que infecta o tomateiro (Solanum lycopersicon) em diversas regiões do Brasil onde se cultiva essa solanácea, sendo a espécie prevalente no estado de São Paulo até 2005. Estudou-se a interação do ToYVSV com a Bemisia tabaci biótipo B e identificaram-se hospedeiras alternativas deste vírus. Os períodos de acesso mínimo de aquisição (PAA) e de inoculação (PAI) foram de 30 min e 10 min, respectivamente. A porcentagem de plantas infectadas chegou até cerca de 75% após um PAA e PAI de 24 h. O período de latência do vírus no vetor foi de 16 horas. O ToYVSV foi retido pela B. tabaci até 20 dias após a aquisição do vírus. Não foi detectada transmissão do vírus para progênie da B. tabaci biótipo B oriundas de insetos virulíferos. De 34 espécies de plantas testadas como hospedeiras somente Capsicum annuum, Chenopodium amaranticolor, C. quinoa, Datura stramonium, Gomphrena globosa, Nicotiana clevelandii e N. tabacum cv. TNN foram suscetíveis à infecção com o ToYVSV, por meio de inoculação com a B. tabaci. As espécies susceptíveis ao ToYVSV serviram de fonte de inóculo para a transmissão do vírus para tomateiros por meio de B. tabaci biótipo B.

Tomato yellow vein streak virus: relationship with Bemisia tabaci biotype B and host range

The Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV) is a putative species of begomovirus, which was prevalent on tomato crops in São Paulo State, Brazil, until 2005. The objectives of this study were to evaluate the interaction between ToYVSV and its vector Bemisia tabaci biotype B and to identify alternative hosts for the virus. The minimum acquisition and inoculation access periods of ToYVSV by B. tabaci were 30 min and 10 min, respectively. Seventy five percent of tomato-test plants were infected when the acquisition and inoculation access periods were 24 h. The latent period of the virus in the insect was 16 h. The ToYVSV was retained by B. tabaci until 20 days after acquisition. First generation of adult whiteflies obtained from viruliferous females were virus free as shown by PCR analysis and did not transmit the virus to tomato plants. Out of 34 species of test-plants inoculated with ToYVSV only Capsicum annuum, Chenopodium amaranticolor, C. quinoa, Datura stramonium, Gomphrena globosa, Nicotiana clevelandii and N. tabacum cv. TNN were susceptible to infection. B. tabaci biotype B was able to acquire the virus from all these susceptible species, transmitting it to tomato plants.

O Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV) é uma espécie putativa de begomovirus que infecta o tomateiro (Solanum lycopersicon) em diversas regiões do Brasil onde se cultiva essa solanácea, sendo a espécie prevalente no estado de São Paulo até 2005. Estudou-se a interação do ToYVSV com a Bemisia tabaci biótipo B e identificaram-se hospedeiras alternativas deste vírus. Os períodos de acesso mínimo de aquisição (PAA) e de inoculação (PAI) foram de 30 min e 10 min, respectivamente. A porcentagem de plantas infectadas chegou até cerca de 75% após um PAA e PAI de 24 h. O período de latência do vírus no vetor foi de 16 horas. O ToYVSV foi retido pela B. tabaci até 20 dias após a aquisição do vírus. Não foi detectada transmissão do vírus para progênie da B. tabaci biótipo B oriundas de insetos virulíferos. De 34 espécies de plantas testadas como hospedeiras somente Capsicum annuum, Chenopodium amaranticolor, C. quinoa, Datura stramonium, Gomphrena globosa, Nicotiana clevelandii e N. tabacum cv. TNN foram suscetíveis à infecção com o ToYVSV, por meio de inoculação com a B. tabaci. As espécies susceptíveis ao ToYVSV serviram de fonte de inóculo para a transmissão do vírus para tomateiros por meio de B. tabaci biótipo B.

Interação da proteína de superfície LcpA de Leptospira com Fator H, principal regulador solúvel da via alternativa do sistema complemento humano / Interaction of the surface protein LcpA from Leptospira with Factor H, the main soluble regulator of the alternative pathway of human complement system

A leptospirose é uma zoonose de distribuição mundial, com maior incidência nas regiões tropicais. As bactérias que causam a doença pertencem ao gênero Leptospira, família Leptospiracea e ordem Spirochaetales. A leptospirose é mantida na natureza pela colonização persistente dos túbulos renais proximais dos animais portadores. Uma estratégia adotada por estas espiroquetas para sobreviver à ação do sistema imune inato do hospedeiro é a capacidade que possuem de interagir com os reguladores do sistema complemento Fator H (FH) e proteína de ligação a C4b (C4BP). O sistema complemento é um componente vital da imunidade inata, uma vez que desempenha um papel crucial na defesa do hospedeiro, particularmente contra bactérias Gram-negativas. Dados recentes gerados por nosso grupo mostraram que C4BP interage com a proteína de superfície LcpA de Leptospira. Com cerca de 20 kDa, essa proteína é capaz de se ligar a C4BP purificado ou solúvel no soro de maneira dose-dependente. Uma vez ligado à proteína, C4BP permanece funcional agindo como cofator de Fator I na clivagem de C4b. O presente estudo teve como principal objetivo avaliar a interação da proteína LcpA com FH humano, principal regulador solúvel da via alternativa do sistema complemento. A proteína LcpA e suas porções N-Terminal, Intermediária e CTerminal recombinantes foram purificadas por cromatografia de afinidade a metal a partir da fração insolúvel. A interação dessas proteínas com FH foi avaliada por dois métodos distintos: ELISA e Western blot com overlay. Os resultados indicaram que a porção C-Terminal da proteína LcpA é responsável pela interação com FH. Curiosamente, C4BP também se liga a esse domínio da proteína. Uma vez que esses dois reguladores solúveis do sistema complemento interagem com o mesmo segmento da LcpA, realizaram-se, a seguir, ensaios de competição com o objetivo de avaliar se ambos compartilhariam os mesmos sítios de interação. Os dados mostraram que FH e C4BP devem se ligar a sequências distintas desta proteína. Com o objetivo de se avaliar a funcionalidade de FH ligado à LcpA, realizou-se um ensaio para investigar sua atividade de co-fator de Fator I na clivagem de C3b. Produtos de degradação de 46 kDa e 43 kDa da cadeia α' de C3b foram detectados, indicando que FH permanece funcional. Em se tratando de uma proteína com funções relacionadas ao processo de evasão ao sistema imune inato, decidiu-se realizar ensaios de desafio em modelo de hamster com a finalidade de se avaliar seu potencial imunoprotetor. Os três ensaios realizados indicaram que a proteína não é capaz de conferir proteção. Os ensaios de ELISA visando à avaliação dos títulos de anticorpos mostraram que LcpA não é imunogênica, fato que explica os resultados dos ensaios de desafio observados. Portanto, embora interaja com moléculas do hospedeiro e pareça contribuir para o processo de evasão ao sistema imune inato, essa proteína de membrana não se mostrou promissora como candidato vacinal contra leptospirose

Leptospirosis is a zoonosis of global distribution, with higher incidence in tropical areas. The bacteria that cause the disease belong to the genus Leptospira, family Leptospiracea and order Spirochaetales. Leptospirosis is maintained in nature by persistent colonization of proximal renal tubules of carrier animals. One strategy adopted by these spirochetes to escape from host´s innate immune system is the ability to interact with the complement regulators Factor H (FH) and C4b Binding Protein (C4BP). The complement system is a vital component of the innate immune system, being crucial for host´s defense, particularly against Gram-negative bacteria. According to our recent published data, C4BP interacts with the leptospiral surface protein LcpA. This 20 kDa outer membrane protein binds both purified and serum C4BP in a dose-dependent manner. Once bound, C4BP remains functional acting as a cofactor for Factor I in the cleavage of C4b. In the present study we evaluated the interaction of LcpA with human FH, the main soluble regulator of the alternative pathway of complement. The intact protein as well as its N-terminal, intermediate and C-terminal portions were purified by metal-affinity chromatography from the insoluble pellet. The interaction of these proteins with FH was evaluated by two distinct methods: ELISA and Western blot overlay. Our results indicate that the C-terminal domain of LcpA mediates interaction with FH, and also with C4BP. Since both complement regulators interact with the same fragment of LcpA, we next performed competition assays to assess if they would share binding sites. According to our data, FH and C4BP have distinct binding sites on LcpA. Cofactor activity of FH bound to immobilized LcpA was confirmed by detecting the C3b α' chain cleavage fragments of 46 and 43 kDa upon incubation with Factor I, thus indicating that it remains functionally active. Given the LcpA´s role in host´s innate immune evasion, we also evaluated its vaccine potential in a hamster model. Data from three challenge assays indicated that the protein can not afford protection. Low ELISA antibody titers of hamsters immunized with LcpA were observed, which strongly suggests that this protein is not immunogenic. In conclusion, LcpA interacts with host´s molecules and seems to contribute to the bacterial immune evasion. Nevertheless, this outer membrane protein is not a promising vaccine candidate against leptospirosis