Agave angustifolia bulbil growth in different substrates, with doses of fertigation and inoculation with Azospirillum brasilense / Crescimento de bulbos de Agave angustifolia em diferentes substratos, com doses de fertirrigação e inoculação com Azospirillum brasilense

ABSTRACT: There is little information about the production of agave plants in the nursery, so this research assessed the growth in the nursery of Agave angustifolia plants originating from inflorescence bulbils, subjected to different substrates, fertigation doses, and inoculation with Azospirillum brasilense. The bulbils were established for two months in a 50% peat-50% perlite substrate. One hundred and eighty plants were individually transferred to 3.8 dm3 pots for evaluation in an experiment with three factors: 1) type of irrigation: 1.1) water, or 1.2) fertigation with Steiner's nutrient solution (NS), NS-50%, or 1.3) NS-100%; 2) inoculation with Azospirillum brasilense, 2.1) inoculated plants, 2.2) non-inoculated plants; 3) substrate, mixtures of bovine manure (BM) + sand (S) in different proportions, Mix1: 75% BM + 25% S; Mix2: 25% BM + 75% S; Mix3: 50% BM + 50% S. Morphological characteristics were quantified for one year. The largest plants were those that were in substrates with 50% BM, and were fertirrigated with NS-100% and inoculated with Azospirillum brasiliense. The smallest plants were those established a in a substrate with the lowest manure content, irrigated with only water and without inoculation, which was respectively 71.6 and 54.10 cm high, 21 and 15.6 leaves, 76.6 and 62.2 mm in stem diameter, 84.4 and 59.8 cm in rosette diameter.

RESUMO: Existem poucas informações sobre a produção de agave em viveiro, portanto o objetivo deste trabalho foi avaliar o crescimento em viveiro de Agave angustifolia provenientes de bulbilhos de inflorescência, submetidos a diferentes substratos, doses de fertirrigação e inoculação com Azospirillum brasilense. Os bulbilhos foram estabelecidos por dois meses em substrato 50% turfa-50% perlita. Cento e oitenta plantas foram transferidas individualmente para vasos de 3,8 dm3 para avaliação em um experimento com três fatores: 1) tipo de irrigação: 1.1) água ou 1.2) fertirrigação com solução nutritiva de Steiner (NS), NS-50% ou 1.3 ) NS-100%; 2) inoculação com Azospirillum brasilense, 2.1) plantas inoculadas, 2.2) plantas não inoculadas; 3) substrato, misturas de esterco bovino (BM) + areia (S) em diferentes proporções, Mix1: 75% BM + 25% S; Mix2: 25% BM + 75% S; Mix3: 50% BM + 50% S. As características morfológicas foram quantificadas por um ano. As maiores plantas foram aquelas que estavam em substrato com 50% de BM, foram fertirrigadas com NS-100% e inoculadas com Azospirillum brasiliense, enquanto as menores foram aquelas estabelecidas em substrato com menor quantidade de esterco, irrigado apenas com água e sem inoculação, que tinham respectivamente, 71,6 e 54,10 cm de altura, 21 e 15,6 folhas, 76,6 e 62,2 mm de diâmetro do caule, 84,4 e 59,8 cm de diâmetro de roseta.

Agave angustifolia bulbil growth in different substrates, with doses of fertigation and inoculation with Azospirillum brasilense / Crescimento de bulbos de Agave angustifolia em diferentes substratos, com doses de fertirrigação e inoculação com Azospirillum brasilense

There is little information about the production of agave plants in the nursery, so this research assessed the growth in the nursery of Agave angustifolia plants originating from inflorescence bulbils, subjected to different substrates, fertigation doses, and inoculation with Azospirillum brasilense. The bulbils were established for two months in a 50% peat-50% perlite substrate. One hundred and eighty plants were individually transferred to 3.8 dm3 pots for evaluation in an experiment with three factors: 1) type of irrigation: 1.1) water, or 1.2) fertigation with Steiner's nutrient solution (NS), NS-50%, or 1.3) NS-100%; 2) inoculation with Azospirillum brasilense, 2.1) inoculated plants, 2.2) non-inoculated plants; 3) substrate, mixtures of bovine manure (BM) + sand (S) in different proportions, Mix1: 75% BM + 25% S; Mix2: 25% BM + 75% S; Mix3: 50% BM + 50% S. Morphological characteristics were quantified for one year. The largest plants were those that were in substrates with 50% BM, and were fertirrigated with NS-100% and inoculated with Azospirillum brasiliense. The smallest plants were those established a in a substrate with the lowest manure content, irrigated with only water and without inoculation, which was respectively 71.6 and 54.10 cm high, 21 and 15.6 leaves, 76.6 and 62.2 mm in stem diameter, 84.4 and 59.8 cm in rosette diameter.

Existem poucas informações sobre a produção de agave em viveiro, portanto o objetivo deste trabalho foi avaliar o crescimento em viveiro de Agave angustifolia provenientes de bulbilhos de inflorescência, submetidos a diferentes substratos, doses de fertirrigação e inoculação com Azospirillum brasilense. Os bulbilhos foram estabelecidos por dois meses em substrato 50% turfa-50% perlita. Cento e oitenta plantas foram transferidas individualmente para vasos de 3,8 dm3 para avaliação em um experimento com três fatores: 1) tipo de irrigação: 1.1) água ou 1.2) fertirrigação com solução nutritiva de Steiner (NS), NS-50% ou 1.3 ) NS-100%; 2) inoculação com Azospirillum brasilense, 2.1) plantas inoculadas, 2.2) plantas não inoculadas; 3) substrato, misturas de esterco bovino (BM) + areia (S) em diferentes proporções, Mix1: 75% BM + 25% S; Mix2: 25% BM + 75% S; Mix3: 50% BM + 50% S. As características morfológicas foram quantificadas por um ano. As maiores plantas foram aquelas que estavam em substrato com 50% de BM, foram fertirrigadas com NS-100% e inoculadas com Azospirillum brasiliense, enquanto as menores foram aquelas estabelecidas em substrato com menor quantidade de esterco, irrigado apenas com água e sem inoculação, que tinham respectivamente, 71,6 e 54,10 cm de altura, 21 e 15,6 folhas, 76,6 e 62,2 mm de diâmetro do caule, 84,4 e 59,8 cm de diâmetro de roseta.

The effect of Cissus quadrangularis Salisb. extract on maturation of rat mesenchymal stem cells / O efeito do extrato de Cissus quadrangularis Salisb. na proliferação e diferenciação de células-tronco mesenquimais de rato

Degenerative diseases, such as osteoporosis, could be treated by stem cells. The aim of this study was to identify the gene expression of bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC) derived from Sprague Dawley rats and to assess the effect of Cissus quadrangularis Salisb. extract on their maturation into bone cells. The BM-MSC were divided into three groups: (a) BM-MSCs + osteoblast cell growth basal medium as the positive control; (b) BM-MSCs + Dulbecco's modified eagle's medium (DMEM) + 0.3 mg/mL methanol extract of C. quadrangularis as methanol group; and (c) BM-MSC + DMEM + 0.3 mg/mL ethyl acetate extract of C. quadrangularis as ethyl acetate group. A relative quantification approach using was used to analyze the expression of the alp (alkaline phosphatase) gene, with the beta-actin gene was used to normalize the expression of the alp gene. The intra-assay variation was calculated to validate the RT-qPCR data. Our study found that the intra-assay variation value was acceptable, with most of the coefficients of variability (CV) value <5. Ethyl acetate solvent outperformed methanol solvent in extracting the active compound C. quadrangularis. In the ethyl acetate extract group, the expression of the alp gene increased three times compared to the positive control. In methanol extract group, the expression of alp gene was lower six times compared to positive control. This study suggests that C. quadrangularis extracts using ethyl acetate could induce the maturation of BM-MSCs. However, further studies are warrant to confirm this effect using different indicators.

Doenças degenerativas, como a osteoporose, podem ser tratadas por células-tronco. O objetivo deste estudo foi identificar a expressão gênica de células-tronco mesenquimais da medula óssea (BM-MSCs) derivadas de ratos Sprague Dawley, bem como sua proliferação e diferenciação em células ósseas afetadas pelo extrato de Cissus quadrangularis Salisb. As BM-MSCs foram divididas em três grupos: (1) BM-MSCs + meio basal de crescimento de osteoblastos como controle positivo; (2) BM-MSCs + meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) + extrato de metanol; e (3) BM-MSCs + DMEM + extrato de acetato de etila de C. quadrangularis. Uma abordagem de quantificação relativa foi usada para analisar a expressão do gene alp (fosfatase alcalina), com o gene da beta-actina sendo usado para normalizar a expressão do gene alp em cada tratamento. A variação intraensaio foi calculada para validar os dados de RT-qPCR. Os resultados mostraram que o valor da variação intraensaio é aceitável, com a maioria dos valores dos coeficientes de variabilidade (CV) < 5. Além disso, no tratamento T2, a expressão do gene alp aumentou três vezes em relação ao controle positivo. No tratamento T1, o gene alp apresentou nível de expressão seis vezes menor em comparação com o controle positivo. Além disso, o solvente acetato de etila superou o solvente metanol na extração do composto ativo C. quadrangularis Salisb. Este estudo demonstra que extratos de C. quadrangularis Salisb., particularmente com acetato de etila como solvente, podem induzir a proliferação e diferenciação de BM-MSCs. Com base na expressão do gene alp, C. quadrangularis tem o potencial de corrigir a perda óssea.

Crises epilépticas reativas por hiperlipidemia em cão Maltês / Reactive seizures due to hyperlipidemia in a maltese dog

Background: Primary hyperlipidemia is a condition that affects some specific breeds. It has been previously describedin Miniature Shnauzer, Beagles, Shetland Shepdog and West Highland White Terrier. There are no reports of primaryhyperlipidemia in Maltese dogs. It is a hereditary disorder of lipoprotein metabolism. The etiology is unknown and maybe related to a genetic problem in lipoprotein lipase or to the absence of apaprotein CII. Clinical signs include spontaneousarterosclerosis, retinal lipemia, cutaneous xanthomas, abdominal pain, lethargy, vomiting and / or diarrhea. Neurologicalmanifestations such as seizures and behavioral changes may also occur. The aim of this report is to describe a case ofreactive seizures due to hyperlipidemia in a dog.Case: A 5-year-old male Maltese dog was admitted with a history of seizures. Hypertension and abdominal distensionwith large amounts of intestinal gases were found in general physical examination. Neurological examination revealedimpaired nasal septum sensory perception, which was slightly bilaterally reduced, and pain on cervical palpation and inthe brachial plexus region. Based on history and clinical examination, it was possible to locate the lesion in the thalamocortical region and to suspect idiopathic epilepsy, reactive seizures, and symptomatic epilepsy due to meningoencephalitisof unknown origin. The diagnosis of primary hyperlipidemia was made by exclusion with the aid of laboratory tests andultrasound. After the establishment of a fat restriction diet, bezafibrate, phenobarbital, and omega-3 supplementation, theanimal improved significantly with the reduction of epileptic seizures.Discussion: The initial clinical suspicion was hyperadrenocorticism as the primary cause of hyperlipidemia. This suspicion was based on the presence of polyphagia, polydipsia, polyuria and abdominal distension, together with laboratory...

Crises epilépticas reativas por hiperlipidemia em cão Maltês / Reactive seizures due to hyperlipidemia in a maltese dog

Background: Primary hyperlipidemia is a condition that affects some specific breeds. It has been previously describedin Miniature Shnauzer, Beagles, Shetland Shepdog and West Highland White Terrier. There are no reports of primaryhyperlipidemia in Maltese dogs. It is a hereditary disorder of lipoprotein metabolism. The etiology is unknown and maybe related to a genetic problem in lipoprotein lipase or to the absence of apaprotein CII. Clinical signs include spontaneousarterosclerosis, retinal lipemia, cutaneous xanthomas, abdominal pain, lethargy, vomiting and / or diarrhea. Neurologicalmanifestations such as seizures and behavioral changes may also occur. The aim of this report is to describe a case ofreactive seizures due to hyperlipidemia in a dog.Case: A 5-year-old male Maltese dog was admitted with a history of seizures. Hypertension and abdominal distensionwith large amounts of intestinal gases were found in general physical examination. Neurological examination revealedimpaired nasal septum sensory perception, which was slightly bilaterally reduced, and pain on cervical palpation and inthe brachial plexus region. Based on history and clinical examination, it was possible to locate the lesion in the thalamocortical region and to suspect idiopathic epilepsy, reactive seizures, and symptomatic epilepsy due to meningoencephalitisof unknown origin. The diagnosis of primary hyperlipidemia was made by exclusion with the aid of laboratory tests andultrasound. After the establishment of a fat restriction diet, bezafibrate, phenobarbital, and omega-3 supplementation, theanimal improved significantly with the reduction of epileptic seizures.Discussion: The initial clinical suspicion was hyperadrenocorticism as the primary cause of hyperlipidemia. This suspicion was based on the presence of polyphagia, polydipsia, polyuria and abdominal distension, together with laboratory...(AU)

Use of sulfonamides for the treatment of bovine neonatal diarrhea: clinical and performance parameters / Utilização de sulfonamidas para o tratamento de diarreia neonatal bovina: parâmetros clínicos e zootécnicos

This study was developed to evaluate the clinical, hematological, and performance parameters of calves affected by diarrhea caused by the bacterial enteric pathogen Escherichia coli, treated with three different protocols containing sulfonamides. Fourteen Holstein calves were monitored from birth to 60 days of age, and divided into 3 groups. Group 1 (n=5) animals were treated with 80 g of Kaopek®, Ibasa, Brazil, administered orally (BM), dissolved in 160 ml of water every 24 h; Group 2 (n=4) received IM sulfadiazine and trimethoprim (Ibatrim®, Ibasa, Brazil), and Group 3 (n=5) animals were treated with 80 g of Kaopek®, Ibasa, Brazil, which is made up of 16 g of phthalylsulfathiazole, associated with 2.28 g neomycin sulfate, 1.6 g of pectin, and 80 g of kaolin, dissolved in 160 ml of water and administered every 24 h by mouth, in addition to sulfadiazine and trimethoprim (Ibatrim®, Ibasa, Brazil), at a daily dose of 16 mg/kg live weight, through IM injection. During the study, the animals were clinically evaluated, and once they were diagnosed with diarrhea, feces samples were collected to identify the bacterial enteric pathogen, antibiogram, polymerase chain reaction (PCR), and coproparasitological exams. Blood samples were collected to evaluate the hematological profile, and the performance profile was monitored weekly. In the clinical examination, all calves presented a reduction in body temperature (<39.2°C) and some improvement in hydration after treatment (p=0,31). However, group 2 had a better concentration of lymphocytes and TP concerning the other animals, as well as better performance. Besides, E.coli was detected in 100% of feces samples. Thus, the therapeutic protocols with sulfonamides used to treat bovine neonatal diarrhea were effective in the clinical improvement of the animals. Nonetheless, the protocol with systemic therapy using sulfadiazine and trimethoprim (Ibatrim®, Ibasa, Brazil) intramuscularly, provided better performance, with better weight gain, and body development of the animals.(AU)

Este estudo foi desenvolvido com o objetivo de avaliar parâmetros clínicos, hematológicos e zootécnicos de bezerras acometidas por diarreia provocada pelo agente bacteriano Escherichia coli, tratadas com três diferentes protocolos contendo sulfonamidas. Quatorze bezerras da raça Holandês foram monitoradas do nascimento até os 60 dias de vida e divididas em 3 grupos: Grupo 1 (n=5), animais tratados com a dose de 80g de Kaopek®, Ibasa, Brasil, por via oral (VO), dissolvido em 160ml de água a cada 24 horas; Grupo 2 (n=4) receberam sulfadiazina e trimetropim (Ibatrim®, Ibasa, Brasil), na dose de 16mg/Kg de peso vivo, por dia, por via intramuscular (IM); Grupo 3 (n=5) 80g de Kaopek®, Ibasa, Brasil, por VO dissolvido em 160ml de água, a cada 24 horas e com 16mg/Kg de peso vivo, por dia, de sulfadiazina e trimetoprim (Ibatrim®, Ibasa, Brasil), por via IM. Durante o estudo, os animais foram avaliados clinicamente e a partir do diagnóstico de diarreia foram coletadas amostras de fezes para a identificação do agente bacteriano, antibiograma, reação em cadeia da polimerase (PCR) e exames coproparasitológicos. Amostras de sangue foram coletadas para avaliação do perfil hematológico e o perfil zootécnico foi acompanhado semanalmente. No exame clínico, todas as bezerras apresentaram redução na temperatura corporal (<39,2°C) e melhora na hidratação após o período de tratamento (p=0,31), porém o grupo 2 obteve maior concentração de linfócitos e PPT em relação aos demais, assim como melhor desempenho zootécnico, além disso em 100% das amostras de fezes foi detectado E. coli. Sendo assim, os protocolos terapêuticos com sulfonamidas utilizados para o tratamento da diarreia neonatal bovina foram eficazes na melhora clínica dos animais. Porém, o protocolo com terapia sistêmica com sulfadiazina e trimetoprim (Ibatrim®, Ibasa, Brasil) por via intramuscular proporcionou um melhor desempenho zootécnico, com melhor ganho de peso e desenvolvimento corporal dos animais.(AU)

Use of sulfonamides for the treatment of bovine neonatal diarrhea: clinical and performance parameters / Utilização de sulfonamidas para o tratamento de diarreia neonatal bovina: parâmetros clínicos e zootécnicos

This study was developed to evaluate the clinical, hematological, and performance parameters of calves affected by diarrhea caused by the bacterial enteric pathogen Escherichia coli, treated with three different protocols containing sulfonamides. Fourteen Holstein calves were monitored from birth to 60 days of age, and divided into 3 groups. Group 1 (n=5) animals were treated with 80 g of Kaopek®, Ibasa, Brazil, administered orally (BM), dissolved in 160 ml of water every 24 h; Group 2 (n=4) received IM sulfadiazine and trimethoprim (Ibatrim®, Ibasa, Brazil), and Group 3 (n=5) animals were treated with 80 g of Kaopek®, Ibasa, Brazil, which is made up of 16 g of phthalylsulfathiazole, associated with 2.28 g neomycin sulfate, 1.6 g of pectin, and 80 g of kaolin, dissolved in 160 ml of water and administered every 24 h by mouth, in addition to sulfadiazine and trimethoprim (Ibatrim®, Ibasa, Brazil), at a daily dose of 16 mg/kg live weight, through IM injection. During the study, the animals were clinically evaluated, and once they were diagnosed with diarrhea, feces samples were collected to identify the bacterial enteric pathogen, antibiogram, polymerase chain reaction (PCR), and coproparasitological exams. Blood samples were collected to evaluate the hematological profile, and the performance profile was monitored weekly. In the clinical examination, all calves presented a reduction in body temperature (<39.2°C) and some improvement in hydration after treatment (p=0,31). However, group 2 had a better concentration of lymphocytes and TP concerning the other animals, as well as better performance. Besides, E.coli was detected in 100% of feces samples. Thus, the therapeutic protocols with sulfonamides used to treat bovine neonatal diarrhea were effective in the clinical improvement of the animals. Nonetheless, the protocol with systemic therapy using sulfadiazine and trimethoprim (Ibatrim®, Ibasa, Brazil) intramuscularly, provided better performance, with better weight gain, and body development of the animals.(AU)

Este estudo foi desenvolvido com o objetivo de avaliar parâmetros clínicos, hematológicos e zootécnicos de bezerras acometidas por diarreia provocada pelo agente bacteriano Escherichia coli, tratadas com três diferentes protocolos contendo sulfonamidas. Quatorze bezerras da raça Holandês foram monitoradas do nascimento até os 60 dias de vida e divididas em 3 grupos: Grupo 1 (n=5), animais tratados com a dose de 80g de Kaopek®, Ibasa, Brasil, por via oral (VO), dissolvido em 160ml de água a cada 24 horas; Grupo 2 (n=4) receberam sulfadiazina e trimetropim (Ibatrim®, Ibasa, Brasil), na dose de 16mg/Kg de peso vivo, por dia, por via intramuscular (IM); Grupo 3 (n=5) 80g de Kaopek®, Ibasa, Brasil, por VO dissolvido em 160ml de água, a cada 24 horas e com 16mg/Kg de peso vivo, por dia, de sulfadiazina e trimetoprim (Ibatrim®, Ibasa, Brasil), por via IM. Durante o estudo, os animais foram avaliados clinicamente e a partir do diagnóstico de diarreia foram coletadas amostras de fezes para a identificação do agente bacteriano, antibiograma, reação em cadeia da polimerase (PCR) e exames coproparasitológicos. Amostras de sangue foram coletadas para avaliação do perfil hematológico e o perfil zootécnico foi acompanhado semanalmente. No exame clínico, todas as bezerras apresentaram redução na temperatura corporal (<39,2°C) e melhora na hidratação após o período de tratamento (p=0,31), porém o grupo 2 obteve maior concentração de linfócitos e PPT em relação aos demais, assim como melhor desempenho zootécnico, além disso em 100% das amostras de fezes foi detectado E. coli. Sendo assim, os protocolos terapêuticos com sulfonamidas utilizados para o tratamento da diarreia neonatal bovina foram eficazes na melhora clínica dos animais. Porém, o protocolo com terapia sistêmica com sulfadiazina e trimetoprim (Ibatrim®, Ibasa, Brasil) por via intramuscular proporcionou um melhor desempenho zootécnico, com melhor ganho de peso e desenvolvimento corporal dos animais.(AU)

The effect of graft application and allopurinol treatment on calvarial bone defect in rats

Purpose:To investigate the effects of allopurinol administration on osteoinductive reaction and bone development with graft material.Methods:Thirty-six Wistar albino rats were divided into 3 groups. In the control group, calvarial bone defect was only created without any treatment. In the Defect + Graft group, allograft treatment was performed by forming 8 mm calvarial bone defect. In the Defect + Graft + Allopurinol group, alloplastic bone graft was placed in the calvarial bone defect and then, allopurinol (50 mg/kg/day) treatment was intraperitoneally applied for 28 days.Results:Histopathological examination revealed inflammation, congestion in the vessels, and an increase in osteoclast cells in the defect area. We also observed that new osteocyte cells, increase in connective tissue fibers, and new bone trabeculae. Osteopontin expression was positive in osteoblast cells and lacunated osteocyte cells were located in the periphery of the new bone trabeculae. Osteopontin expression was also positive in osteoblasts and osteocytes cells of new bone trabeculae in the graft site.Conclusion:It has been shown that allopurinol treatment in rat calvaria defects may induce osteoblastic activity, matrix development, mature bone cell formation and new bone formation when used with autogenous grafts.(AU)

Assessment of the nitrification process in a culture of pacific white shrimp, using artificial substrate and bacterial inoculum in a biofloc technology system (BFT) / Avaliação do processo de nitrificação no cultivo do camarão branco do pacífico Litopenaeus vannamei com uso de substrato artificial e inóculo de bactérias em sistema de bioflocos (BFT)

Litopenaeus vannamei is the most cultured marine shrimp in all types of systems including the Bioflocs Technology System (BFT). Bioflocs are formed by microorganisms, among these, autotrophic bacteria are responsible for the nitrification process. This study aimed to identify and promote the development of nitrifying bacteria by adding artificial substrates and biofloc inoculum in L. vannamei culture in a BFT system. The experiment consisted of four treatments with three replics (4x3) as follows: (1) Control: clear water in which bioflocs were formed; (2) IN (10%): clear water with biofloc inoculum (10%); (3) IB: clear water with substrate (immature bioballs); and (4) MB: clear water with mature bioballs inoculum from a recirculation system. Treatments were stocked with shrimp juveniles (4.92±0.45 g) in 12 tanks with 200 L working volume at a stocking density of 200 shrimp/m³. Shrimps were fed twice a day with a commercial feed (38% CP) following a feeding table, and daily observations intake were made over the four weeks of the experiment. Biofloc and bioballs samples were collected to detect the growth of the population of nitrifying and heterotrophic bacteria by FISH. There was no significant difference between treatments (P>0.05) for survival, obtaining mean values greater than 88%. The IN (10%) treatment had lower concentrations of ammonia and nitrite, and nitrate concentration increased, while MB had a higher weight and biomass final, productivity, weekly weight gain and lower conversion of apparent feed for production performance results.(AU)

Litopenaeus vannamei é o camarão marinho mais cultivado em todos os tipos de sistemas, incluindo o Sistema de Tecnologia de Bioflocos (BFT). Os bioflocos são formados por microorganismos, entre estes, bactérias autotróficas que são responsáveis pelo processo de nitrificação. Este estudo teve como objetivo identificar e promover o desenvolvimento de bactérias nitrificantes pela adição de substratos artificiais e inóculo de bioflocos no cultivo de L. vannamei em sistema BFT. O experimento consistiu de quatro tratamentos com três repetições (4x3), sendo: (1) Controle: água limpa, na qual foram formados os bioflocos; (2) IN (10%): água limpa com inóculo de bioflocos (10%); (3) BI: água limpa com substrato (bioballs imaturos); e (4) BM: água limpa com inóculo de bioballs maduros de um sistema de recirculação. Para tanto, os tratamentos foram estocados com juvenis de camarão (4,92±0,45 g) em 12 tanques com 200 L de volume útil com densidade de 200 camarões/m³. Os camarões foram alimentados duas vezes ao dia com ração comercial (38% PB) seguindo uma tabela de alimentação, e observações diárias foram feitas ao longo das quatro semanas de experimento. Amostras de bioflocos e bioballs foram coletadas para detectar o crescimento da população de bactérias nitrificantes e heterotróficas por FISH. Não houve diferença significativa entre os tratamentos (P>0,05) para sobrevivência, obtendo-se valores médios superiores a 88%. O tratamento com IN (10%) apresentou menores concentrações de amônia e nitrito, e a concentração de nitrato aumentou, enquanto o BM apresentou maior peso e biomassa final, produtividade, ganho de peso semanal e menor conversão alimentar aparente para resultados de desempenho zootécnico.(AU)

The effect of graft application and simvastatin treatment on tibial bone defect in rats. A histological and immunohistochemical study

Purpose: To evaluate histologically and immunohistochemically the bone regeneration after application of simvastatin on tibial bone defects in rats. Methods: Sixty Wistar albino rats were divided into 3 groups as control (6 mm tibial bone defect), defect + graft (allograft treatment), and defect + graft + simvastatin (10 mg/kg/day) for 28 days. Results: Histopathological examination revealed inflammation in control group (defect group), congestion in blood vessels, and an increase in osteoclast cells. In defect + graft group, osteoclastic activity was observed and osteocyte cells were continued to develop. In defect + graft + simvastatin group, osteocytes and matrix formation were increased in the new bone trabeculae. Osteopontin and osteonectin expression were positive in the osteclast cells in the control group. Osteoblasts and some osteocytes showed a positive reaction of osteopontin and osteopontin. In defect + graft + simvastatin group, osteonectin and osteopontin expression were positive in osteoblast and osteocyte cells, and a positive expression in osteon formation was also seen in new bone trabeculae. Conclusion: The simvastatin application was thought to increase bone turnover by increasing the osteoinductive effect with graft and significantly affect the formation of new bone.(AU)

Estudo comparativo da diferenciação osteogênica das células tronco mesenquimais da medula óssea e do tecido adiposo de cães adultos / Comparative study of the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells from bone marrow and adipose tissue of adult dogs

O objetivo deste estudo foi comparar o potencial osteogênico das células tronco mesenquimais extraídas da medula óssea (CTM-MO) com as do tecido adiposo (CTM-AD) de cães adultos. As células foram caracterizadas fenotipicamente quanto à expressão de CD29, CD90, CD34 e CD45 e submetidas à diferenciação adipogênica e condrogênica por 21 dias e osteogênica por 7, 14 e 21 dias. Foram constituídos quatro grupos: 1) CTM-MO em meio osteogênico, 2) CTM-MO em meio basal, 3) CTM-AD em meio osteogênico e 4) CTM-AD em meio basal. Aos 7, 14 e 21 dias de diferenciação osteogênica as culturas foram submetidas às avaliações da conversão de MTT em formazan, da atividade da fosfatase alcalina (FA), da síntese de colágeno e de matriz mineralizada, avaliação do número de células por campo e foram quantificados os transcritos gênicos para osterix, sialoproteina óssea (BSP), osteonectina (ON) e osteocalcina (OC). Tanto as células extraídas da medula óssea quanto do tecido adiposo mostraram elevada expressão de marcadores para células tronco e baixa expressão de marcadores de células hematopoiéticas (menor que 2%). Além disso, foram capazes de se diferenciar em osteoblastos, condrócitos e adipócitos. As CTM-AD submetidas à diferenciação osteogênica mostraram maior conversão do MTT em formazan que as CTM-MO, sob mesmas condições aos 7 e 21 dias. O número de células por campo, a atividade da FA, a síntese de colágeno e de matriz mineralizada foram superior nas CTM-AD em diferenciação, em relação às CTM-MO sob as mesmas condições, em todos os tempos estudados. As expressões de osterix, BSP e OC foram predominantemente superiores nas CTM-MO diferenciadas, mas a expressão de ON foi superior nas CTM-AD diferenciadas aos 7, 14 e 21 dias. Conclui-se que as CTM-AD apresentam maior potencial osteogênico que as CTM-MO quando extraídas de cães adultos.(AU)

The aim of this study was to compare the osteogenic potential of mesenchymal stem cells obtained from bone marrow (BM-MSC) with those extracted from adipose tissue (AT-MSC) of adult dogs. The cells were phenotypically categorized according to the expression of CD29, CD90, CD34 and CD45, and submitted to adipogenic and chondrogenic differentiation for 21 days and osteogenic differentiation for 7, 14 and 21 days. Four groups were formed: BM-MSC in osteogenic medium (1), BM-MSC in basal medium (2), AT-MSC in osteogenic medium (3) and ATMSC in basal medium (4). On days 7, 14 and 21 of osteogenic differentiation, the cultures were submitted to evaluations of MTT conversion in formazan, of alkaline phosphatase activity (AP), of collagen and mineralized matrix synthesis, evaluation of the number of cells per field and there was quantification of the gene transcripts for osterix, bone sialoprotein (BSP), osteonectin (ON) and osteocalcin (OC). Both the cells obtained from bone marrow and those from adipose tissue showed high expression of stem cells markers and low expression of hematopoietic cells markers (lower than 2%). Besides, they were able to differentiate into osteoblasts, chondrocytes and adipocytes. AT-MSC submitted to osteogenic differentiation showed higher MTT conversion in formazan than BM-MSC, under the same conditions on days 7 and 21. The number of cells per field, the AP activity, the collagen and mineralized matrix synthesis were higher in AT-MSC en differentiation, in relation to BM-MSC under the same conditions in all evaluated times. Expressions of osterix, BSP and OC were predominantly higher in differentiated BMMSC, however the expression of ON was higher AT-MSC differentiated on days 7, 14 and 21. In conclusion, AT-MSC present higher osteogenic potential than BM-MSC when extracted from adult dogs.(AU)

Estudo comparativo da diferenciação osteogênica das células tronco mesenquimais da medula óssea e do tecido adiposo de cães adultos / Comparative study of the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells from bone marrow and adipose tissue of adult dogs

O objetivo deste estudo foi comparar o potencial osteogênico das células tronco mesenquimais extraídas da medula óssea (CTM-MO) com as do tecido adiposo (CTM-AD) de cães adultos. As células foram caracterizadas fenotipicamente quanto à expressão de CD29, CD90, CD34 e CD45 e submetidas à diferenciação adipogênica e condrogênica por 21 dias e osteogênica por 7, 14 e 21 dias. Foram constituídos quatro grupos: 1) CTM-MO em meio osteogênico, 2) CTM-MO em meio basal, 3) CTM-AD em meio osteogênico e 4) CTM-AD em meio basal. Aos 7, 14 e 21 dias de diferenciação osteogênica as culturas foram submetidas às avaliações da conversão de MTT em formazan, da atividade da fosfatase alcalina (FA), da síntese de colágeno e de matriz mineralizada, avaliação do número de células por campo e foram quantificados os transcritos gênicos para osterix, sialoproteina óssea (BSP), osteonectina (ON) e osteocalcina (OC). Tanto as células extraídas da medula óssea quanto do tecido adiposo mostraram elevada expressão de marcadores para células tronco e baixa expressão de marcadores de células hematopoiéticas (menor que 2%). Além disso, foram capazes de se diferenciar em osteoblastos, condrócitos e adipócitos. As CTM-AD submetidas à diferenciação osteogênica mostraram maior conversão do MTT em formazan que as CTM-MO, sob mesmas condições aos 7 e 21 dias. O número de células por campo, a atividade da FA, a síntese de colágeno e de matriz mineralizada foram superior nas CTM-AD em diferenciação, em relação às CTM-MO sob as mesmas condições, em todos os tempos estudados. As expressões de osterix, BSP e OC foram predominantemente superiores nas CTM-MO diferenciadas, mas a expressão de ON foi superior nas CTM-AD diferenciadas aos 7, 14 e 21 dias. Conclui-se que as CTM-AD apresentam maior potencial osteogênico que as CTM-MO quando extraídas de cães adultos.(AU)

The aim of this study was to compare the osteogenic potential of mesenchymal stem cells obtained from bone marrow (BM-MSC) with those extracted from adipose tissue (AT-MSC) of adult dogs. The cells were phenotypically categorized according to the expression of CD29, CD90, CD34 and CD45, and submitted to adipogenic and chondrogenic differentiation for 21 days and osteogenic differentiation for 7, 14 and 21 days. Four groups were formed: BM-MSC in osteogenic medium (1), BM-MSC in basal medium (2), AT-MSC in osteogenic medium (3) and ATMSC in basal medium (4). On days 7, 14 and 21 of osteogenic differentiation, the cultures were submitted to evaluations of MTT conversion in formazan, of alkaline phosphatase activity (AP), of collagen and mineralized matrix synthesis, evaluation of the number of cells per field and there was quantification of the gene transcripts for osterix, bone sialoprotein (BSP), osteonectin (ON) and osteocalcin (OC). Both the cells obtained from bone marrow and those from adipose tissue showed high expression of stem cells markers and low expression of hematopoietic cells markers (lower than 2%). Besides, they were able to differentiate into osteoblasts, chondrocytes and adipocytes. AT-MSC submitted to osteogenic differentiation showed higher MTT conversion in formazan than BM-MSC, under the same conditions on days 7 and 21. The number of cells per field, the AP activity, the collagen and mineralized matrix synthesis were higher in AT-MSC en differentiation, in relation to BM-MSC under the same conditions in all evaluated times. Expressions of osterix, BSP and OC were predominantly higher in differentiated BMMSC, however the expression of ON was higher AT-MSC differentiated on days 7, 14 and 21. In conclusion, AT-MSC present higher osteogenic potential than BM-MSC when extracted from adult dogs.(AU)

RESPOSTAS DE MARCADORES MUSCULARES, COMPORTAMENTO E TRANSPORTADORES DE MONOCABOXILATOS DE RATOS SOB CONDIÇÃO DE OVERREACHING

Incrementos na carga de treino são realizados com intuito de melhorar o desempenho esportivo, sendo que, frequentemente, as prescrições crônicas de sessões de treino podem exceder a capacidade física do atleta. A síndrome do overtraining (SOT), induzida pelo desequilíbrio no ciclo estímulo-recuperação, é importante causa da redução do desempenho esportivo dos atletas. Protocolos de indução overtraining em modelos experimentais para investigação de alterações comportamentais bem como alterações em marcadores musculares associados a alterações nos transportadores de monocarboxilatos 1 e 4 (MCT1 e MCT4) no músculo esquelético, são escassos. O propósito da presente Tese foi auxiliar a compreender as possíveis alterações comportamentais, bioquímicas, marcadores musculares e transportadores de monocarboxilatos que podem contribuir efetivamente para o desencadeamento da condição NFOR/SOT induzido pelo desequilíbrio entre carga externa e períodos de recuperação. Utilizaram-se ratos machos, jovens, como massa corporal inicial entre 150 e 200g, distribuídos nos grupos: ativo (AT, n = 16); treinados (TR, n = 33). Os ratos deste último grupo manifestaram as condições overreaching funcional (FOR, n = 19) e overreaching não funcional (NFOR, n = 14). O grupo AT foi submetido a um programa de condicionamento leve. O grupo TR realizou o protocolo de overtraining (PO), que consistiu em 12 semanas de treinamento em esteira, dividido em 5 fases (F1-F5). A F1 foi elaborada por 4 semanas de aumento progressivo de velocidade e duração das sessões de treino; a F2 durou 4 semanas, sendo mantidas a velocidade e a duração atingidas no final da F1. Nas fases 3, 4 e 5 foram aumentadas a frequência das sessões diárias (2, 3, 4/dia), reduzindo-se o período de recuperação entre estas (4, 3 e 2 horas, respectivamente), levando ao desequilíbrio entre esforço físico e recuperação. Para avaliação da aptidão física, os ratos foram submetidos a nove testes máximos de performance (TMP). Logo após os TMP-7, oito ratos de cada grupo experimental foram submetidos à eutanásia para coleta de amostras de sangue para análise de corticosterona e lactato, bem como coletas musculares e hepáticas para análises de glicogênio, citrato sintase e expressão dos MCTs. Ao final do PO, todos os grupos foram submetidos a análises comportamentais. Aplicou-se General Linear Model (GLM) para as variáveis endócrinas, desempenho, massa corporal, lactato e glicose. Para as variáveis glicogênio e corticosterona entre TMP-7 e TMP-9 aplicou se ANOVA-two way. As análises de componentes principais (ACP) foram baseadas na matriz de correlação entre as variáveis. Após as três semanas adaptativas, foi obtido percentual de ratos corredores de 75%. Com relação aos resultados, constataram-se valores inferiores de massa corporal (MC) para os grupos FOR e NFOR em relação ao grupo AT (P < 0,001), sendo que em TMP-8 houve redução notória do grupo NFOR em relação ao grupo AT (P < 0,01). No que se refere ao desempenho, os grupos FOR e NFOR aumentaram a sua aptidão física a partir do TMP-2 (P < 0,001). FOR e NFOR começaram a se diferenciar a partir do TMP-5 (P < 0,001), sendo que este comportamento permaneceu até o TMP-7 (P < 0,001). NFOR teve redução notória de desempenho no TMP-7 (P = 0,001). Não houve diferença significativa na atividade bem como na quantificação proteica da citrato sintase pela técnica de western blotting entre os grupos AT, FOR e NFOR. Com relação ao glicogênio, houve redução dos estoques no músculo sóleo dos grupos FOR e NFOR e redução no músculo gastrocnêmio medial para o NFOR em relação ao AT. O grupo NFOR apresentou uma redução do glicogênio no músculo gastrocnêmio lateral de TMP-7 para TMP-9. Todos os grupos apresentaram significante depleção de glicogênio no músculo semimembranáceo em TMP-9. Redução do glicogênio hepático para os grupos FOR e NFOR de TMP-7 para TMP-9 também foram observadas. Houve aumento nas concentrações de corticosterona para todos os grupos em TMP-9 quando comparado ao TMP-7. A análise de componentes principais (ACP) revelou que o comportamento foi responsável por 63,48% da variância observada para o teste de campo aberto. Para o teste de labirinto em cruz elevado, os dois componentes principais foram responsáveis por 94,1% da variância observada. Houve redução nas concentrações de lactato e da glicose para os grupos FOR e NFOR em TMP-6. Pode-se observar redução da expressão da isoforma MCT4 para grupo NFOR. Para os índices somáticos, em uma análise ACP em TMP-7, os dois componentes principais foram responsáveis por 72,22% da variação sendo que a disposição gráfica das variáveis para os grupos evidenciou separação dos grupos AT, FOR e NFOR. Em conclusão, nosso estudo demonstrou que o protocolo de overtraining utilizado induziu reduções nas concentrações de MCT4 no grupo NFOR. Nos testes máximos e submáximos, obtivemos reduções nas concentrações de lactato e redução nas concentrações glicose em TMP-6. Ademais, observou-se depleção de glicogênio em uma análise geral. A análise de ACPs tanto comportamentais quanto de índice somáticos se mostraram eficazes e promissoras na identificação e separação dos grupos FOR e NFOR.

Increments in the training load are carried out in order to improve sports performance, and the chronic prescriptions of training sessions can often exceed the athlete's physical capacity. The overtraining syndrome (SOT), induced by the imbalance in the stimulus-recovery cycle, is an important cause of reduced athletes' sporting performance. Overtraining induction protocols in experimental models for investigating behavioral changes as well as changes in muscle markers associated with changes in monocarboxylate transporters 1 and 4 (MCT1 and MCT4) in skeletal muscle are scarce. The purpose of this Thesis was to help understand the possible behavioral, biochemical, muscle markers and monocarboxylate transporters that can effectively contribute to the triggering of the NFOR / SOT condition induced by the imbalance between external load and recovery periods. Young male rats were used as initial body mass between 150 and 200g, distributed in the groups: active (AT, n = 16); trained (TR, n = 33). The rats in the latter group showed the conditions of functional overreaching (FOR, n = 19) and non-functional overreaching (NFOR, n = 14). The AT group was submitted to a light conditioning program. The TR group performed the overtraining protocol (PO), which consisted of 12 weeks of treadmill training, divided into 5 phases (F1-F5). F1 was designed for 4 weeks of progressive increase in speed and duration of training sessions; F2 lasted 4 weeks, maintaining the speed and duration reached at the end of F1. In phases 3, 4 and 5 the frequency of daily sessions was increased (2, 3, 4 / day), reducing the recovery period between these (4, 3 and 2 hours, respectively), leading to an imbalance between physical effort and recovery. To assess physical fitness, the rats were subjected to nine maximum performance tests (TMP). Right after TMP-7, eight rats from each experimental group were euthanized to collect blood samples for analysis of corticosterone and lactate, as well as muscle and liver collections for analyzes of glycogen, citrate synthase and expression of MCTs. At the end of the PO, all groups were subjected to behavioral analysis. General Linear Model (GLM) was applied for the endocrine variables, performance, body mass, lactate and glucose. For the variables glycogen and corticosterone between TMP-7 and TMP 9, ANOVA-two way was applied. Principal component analyzes (PCA) were based on the correlation matrix between variables. After the three adaptive weeks, a percentage of runner rats of 75% was obtained. Regarding the results, lower values of body mass (BM) were found for the FOR and NFOR groups in relation to the AT group (P <0.001), whereas in TMP-8 there was a notable reduction in the NFOR group in relation to the AT group (P <0.01). Regarding performance, the FOR and NFOR groups increased their physical fitness from TMP-2 (P <0.001). FOR and NFOR started to differentiate from TMP-5 (P <0.001), and this behavior remained until TMP-7 (P <0.001). NFOR had a noticeable reduction in performance in TMP-7 (P = 0.001). There was no significant difference in activity as well as in protein quantification of citrate synthase using the western blotting technique between groups AT, FOR and NFOR. Regarding glycogen, there was a reduction in stocks in the soleus muscle of the FOR and NFOR groups and a reduction in the medial gastrocnemius muscle for the NFOR in relation to the AT. The NFOR group showed a reduction in glycogen in the lateral gastrocnemius muscle from TMP-7 to TMP-9. All groups showed significant glycogen depletion in the semimembrane muscle in TMP-9. Reduction of hepatic glycogen for the FOR and NFOR groups from TMP-7 to TMP-9 was also observed. There was an increase in corticosterone concentrations for all groups in TMP-9 when compared to TMP-7. Principal component analysis (PCA) revealed that the behavior was responsible for 63.48% of the variance observed for the open field test. For the elevated plus-maze test, the two main components were responsible for 94.1% of the observed variance. There was a reduction in lactate and glucose concentrations for the FOR and NFOR groups in TMP-6. A reduction in the expression of the MCT4 isoform can be observed for the NFOR group. For somatic indices, in an ACP analysis on TMP-7, the two main components were responsible for 72.22% of the variation, with the graphic layout of the variables for the groups showing separation of the AT, FOR and NFOR groups. In conclusion, our study demonstrated that the overtraining protocol used induced reductions in MCT4 concentrations in the NFOR group. In the maximum and submaximal tests, we obtained reductions in lactate concentrations and reduction in glucose concentrations in TMP-6. In addition, glycogen depletion was observed in a general analysis. The analysis of both behavioral and somatic index ACPs proved to be effective and promising in the identification and separation of the FOR and NFOR groups.

CRIOTOLERÂNCIA DE OÓCITOS E EMBRIÕES BOVINOS MATURADOS COM LÍQUIDO FOLICULAR E/OU -MERCAPTOETANOL

Cryotolerance of bovine oocytes and embryos maturated with addition of follicular fluid (LF) and -mercaptoethanol (BM) was evaluated. After vitrification, oocytes were maturated in: TCM-199 (control); BM (24h TCM-199+100µM BM); LF (6h in LF+18h TCM-199), and LF+BM (6h LF+18h TCM-199+100µM BM). There was not difference (p>0.05) in blastocysts rate in TCM (6.4%), BM (4.0%) and LF (3.4%) treatments. The hatching rates and cell density of hatched embryos did not differ (p>0.05) among treatments. In Experiment 2, hatched blastocysts (Bx) obtained in D7 or D8 were vitrified and evaluated according to its expanding and hatching rates. The expanding rate was similar (p>0.05), being observed a distinct pathway in hatching rate in D7 and D8 Bx. Higher hatching rate was observed in D7 Bx from control (TCM-54.2%) compared to BM (40.32%) and LF+BM (33.89%) treatments. The D8 Bx showed lower hatching rate in control (TCM-199) compared with D7 Bx. In BM, LF and LF+BM treatments, the hatching rate was similar for D7 or D8 embryos. Maturation with addition of LF and/or BM does not increase the oocyte or IVP embryo cryotolerance. Expanded blastocysts (D7) have higher cryotolerance and show a distinct pathway when added with LF or BM, in comparison with D8 embryos.

Foi avaliada a criotolerância de oócitos e embriões bovinos maturados com adição de líquido folicular (LF) e/ou -mercaptoetanol (BM). Após vitrificação, os oócitos foram maturados em: TCM-199 (controle); BM (24h TCM-199+100µM BM); LF (6h em LF+18h TCM-199) e LF+BM (6h LF+18h TCM-199+100µM BM). Não houve diferença (p>0,05) nas taxas de blastocistos dos tratamentos TCM (6,4%), BM (4,0%) e LF (3,4%). A eclosão e densidade celular dos embriões eclodidos não diferiram (p>0,05) nos tratamentos. No Experimento 2 blastocistos expandidos (Bx) obtidos em D7 ou D8 foram vitrificados, avaliando-se sua reexpansão e eclosão. A reexpansão foi semelhante (p>0,05), sendo observado comportamento distinto na eclosão entre Bx D7 e D8. Nos Bx D7 houve maior eclosão no controle (TCM54,2%) em relação ao BM (40,32%) e LF+BM (33,89%). Os Bx D8 apresentaram menor eclosão no controle (TCM) em relação aos Bx D7. Nos tratamentos BM, LF e LF+BM a eclosão foi semelhante para Bx D7 ou D8. A maturação com adição de LF e/ou BM não melhora a criotolerância de oócitos imaturos e embriões PIV. Blastocistos expandidos precoces (D7) são mais criotolerantes e apresentam um comportamento distinto à adição de LF e BM, em relação aos tardios (D8).

Criotolerância de oócitos e embriões bovinos maturados com líquido folicular e/ou -mercaptoetanol / Cryotolerance of bovine oocytes and embryos maturated with follicular fluid and/or -mercaptoethanol

Cryotolerance of bovine oocytes and embryos maturated with addition of follicular fluid (LF) and ?-mercaptoethanol (BM) was evaluated. After vitrification, oocytes were maturated in: TCM-199 (control); BM (24h TCM-199+100µM BM); LF (6h in LF+18h TCM-199), and LF+BM (6h LF+18h TCM-199+100µM BM). There was not difference (p>0.05) in blastocysts rate in TCM (6.4%), BM (4.0%) and LF (3.4%) treatments. The hatching rates and cell density of hatched embryos did not differ (p>0.05) among treatments. In Experiment 2, hatched blastocysts (Bx) obtained in D7 or D8 were vitrified and evaluated according to its expanding and hatching rates. The expanding rate was similar (p>0.05), being observed a distinct pathway in hatching rate in D7 and D8 Bx. Higher hatching rate was observed in D7 Bx from control (TCM-54.2%) compared to BM (40.32%) and LF+BM (33.89%) treatments. The D8 Bx showed lower hatching rate in control (TCM-199) compared with D7 Bx. In BM, LF and LF+BM treatments, the hatching rate was similar for D7 or D8 embryos. Maturation with addition of LF and/or BM does not increase the oocyte or IVP embryo cryotolerance. Expanded blastocysts (D7) have higher cryotolerance and show a distinct pathway when added with LF or BM, in comparison with D8 embryos.

Foi avaliada a criotolerância de oócitos e embriões bovinos maturados com adição de líquido folicular (LF) e/ou ?-mercaptoetanol (BM). Após vitrificação, os oócitos foram maturados em: TCM-199 (controle); BM (24h TCM-199+100µM BM); LF (6h em LF+18h TCM-199) e LF+BM (6h LF+18h TCM-199+100µM BM). Não houve diferença (p>0,05) nas taxas de blastocistos dos tratamentos TCM (6,4%), BM (4,0%) e LF (3,4%). A eclosão e densidade celular dos embriões eclodidos não diferiram (p>0,05) nos tratamentos. No Experimento 2 blastocistos expandidos (Bx) obtidos em D7 ou D8 foram vitrificados, avaliando-se sua reexpansão e eclosão. A reexpansão foi semelhante (p>0,05), sendo observado comportamento distinto na eclosão entre Bx D7 e D8. Nos Bx D7 houve maior eclosão no controle (TCM54,2%) em relação ao BM (40,32%) e LF+BM (33,89%). Os Bx D8 apresentaram menor eclosão no controle (TCM) em relação aos Bx D7. Nos tratamentos BM, LF e LF+BM a eclosão foi semelhante para Bx D7 ou D8. A maturação com adição de LF e/ou BM não melhora a criotolerância de oócitos imaturos e embriões PIV. Blastocistos expandidos precoces (D7) são mais criotolerantes e apresentam um comportamento distinto à adição de LF e BM, em relação aos tardios (D8).

Criotolerância de oócitos e embriões bovinos maturados com líquido folicular e/ou -mercaptoetanol / Cryotolerance of bovine oocytes and embryos maturated with follicular fluid and/or -mercaptoethanol

Cryotolerance of bovine oocytes and embryos maturated with addition of follicular fluid (LF) and ?-mercaptoethanol (BM) was evaluated. After vitrification, oocytes were maturated in: TCM-199 (control); BM (24h TCM-199+100µM BM); LF (6h in LF+18h TCM-199), and LF+BM (6h LF+18h TCM-199+100µM BM). There was not difference (p>0.05) in blastocysts rate in TCM (6.4%), BM (4.0%) and LF (3.4%) treatments. The hatching rates and cell density of hatched embryos did not differ (p>0.05) among treatments. In Experiment 2, hatched blastocysts (Bx) obtained in D7 or D8 were vitrified and evaluated according to its expanding and hatching rates. The expanding rate was similar (p>0.05), being observed a distinct pathway in hatching rate in D7 and D8 Bx. Higher hatching rate was observed in D7 Bx from control (TCM-54.2%) compared to BM (40.32%) and LF+BM (33.89%) treatments. The D8 Bx showed lower hatching rate in control (TCM-199) compared with D7 Bx. In BM, LF and LF+BM treatments, the hatching rate was similar for D7 or D8 embryos. Maturation with addition of LF and/or BM does not increase the oocyte or IVP embryo cryotolerance. Expanded blastocysts (D7) have higher cryotolerance and show a distinct pathway when added with LF or BM, in comparison with D8 embryos.(AU)

Foi avaliada a criotolerância de oócitos e embriões bovinos maturados com adição de líquido folicular (LF) e/ou ?-mercaptoetanol (BM). Após vitrificação, os oócitos foram maturados em: TCM-199 (controle); BM (24h TCM-199+100µM BM); LF (6h em LF+18h TCM-199) e LF+BM (6h LF+18h TCM-199+100µM BM). Não houve diferença (p>0,05) nas taxas de blastocistos dos tratamentos TCM (6,4%), BM (4,0%) e LF (3,4%). A eclosão e densidade celular dos embriões eclodidos não diferiram (p>0,05) nos tratamentos. No Experimento 2 blastocistos expandidos (Bx) obtidos em D7 ou D8 foram vitrificados, avaliando-se sua reexpansão e eclosão. A reexpansão foi semelhante (p>0,05), sendo observado comportamento distinto na eclosão entre Bx D7 e D8. Nos Bx D7 houve maior eclosão no controle (TCM54,2%) em relação ao BM (40,32%) e LF+BM (33,89%). Os Bx D8 apresentaram menor eclosão no controle (TCM) em relação aos Bx D7. Nos tratamentos BM, LF e LF+BM a eclosão foi semelhante para Bx D7 ou D8. A maturação com adição de LF e/ou BM não melhora a criotolerância de oócitos imaturos e embriões PIV. Blastocistos expandidos precoces (D7) são mais criotolerantes e apresentam um comportamento distinto à adição de LF e BM, em relação aos tardios (D8).(AU)

Perfil proteômico do líquido cefalorraquidiano após transplantes intratecal de células estromais mesenquimais multipotentes em equinos

Estudos com células estromais mesenquimais multipotentes (MSCs) estão em crescente progresso devido às suas propriedades imunomoduladoras, antiinflamatórias, antiapoptóticas e de regeneração tecidual, tornando essa modalidade de terapia celular promissora no tratamento de diversas doenças. Devido à limitada capacidade regenerativa do sistema nervoso central (CNS), causando sequelas funcionais, as MSCs estão sendo investigadas como uma alternativa terapêutica para condições neurológicas inflamatórias, vasculares, traumáticas e degenerativas em diversas espécies animais. A Mieloencefalite protozoária equina (EPM) causada por ambos os protozoários do filo Apicomplexa, Sarcocystis neurona e Neospora hughesi, permanece como uma importante doença neurológica dos equinos nas Américas, embora a maioria dos casos seja devida à infecção por S. neurona. A aplicação da proteômica com sua gama de ferramentas na clínica de equinos pode contribuir significativamente para o entendimento de processos patológicos e facilitar a descoberta de novos alvos terapêuticos ou marcadores diagnósticos. Neste contexto, os objetivos deste estudo foram avaliar o perfil proteômico do líquido cefalorraquidiano (CSF) antes e após múltiplos transplantes intratecal de MSCs em equinos hígidos e o perfil proteômico do CSF de equinos cronicamente afetados pela EPM. Doze cavalos adultos clinicamente saudáveis foram divididos aleatoriamente em três grupos experimentais: grupo DPBS (DPBS ou control; n = 4) onde a solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco's (DPBS) foi administrada pela via intratecal; grupo AD-G (AD-G; n = 4), no qual foram realizados transplantes intratecal com MSCs alogênicas de tecido adiposo; e grupo BM-G (BM-G; n = 4), no qual foram realizados transplantes intratecal com MSCs alogênicas de medula óssea. Todos os grupos experimentais receberam três tratamentos seriados (DPBS ou MSCs) com intervalo de 30 dias entre eles. As amostras de CSF foram coletadas dos grupos experimentais imediatamente antes do primeiro tratamento (denominado momento M0 ou Before) e 30 dias após o terceiro tratamento (denominado momento M90 ou After). Ao mesmo tempo, os CSF de 16 equinos clinicamente saudáveis e de 9 equinos cronicamente afetados por EPM foram coletados da subaracnóide, denominados grupo Control (Control; n = 16) e grupo EPM (EPM; n = 9) respectivamente. Cada uma das amostras de CSF do grupo Control e do grupo EPM foram individualmente ressuspendidas e agrupadas em pool, totalizando dois pool representativos de cada um dos grupos experimentais e denominados igualmente (Control e EPM) para avaliar o perfil proteômico dos mesmos. De modo similar, os três grupos que receberam transplantes e coletas de CSF nos dois distintos momentos, foram agrupados em seis pool representativos para cada grupo e momento. Considerando a plataforma proteômica utilizada, os três grupos foram pareadamente comparados: DPBS After vs. Before, AD-G After vs. Before e BM-G After vs. Before, sendo encontradas 208, 211 e 131 proteínas em cada comparação, respectivamente. Do mesmo modo, na comparação pareada do CSF dos grupos EPM e Control, EPM vs. Control, 201 proteínas foram identificadas e 33 proteínas observadas exclusivamente no CSF do grupo EPM. Ademais, também foi observada na comparação pareada dos grupos DPBS, BM-G e EPM, a presença dos três tipos de enolases interagindo entre si (ENO 1, ENO 2 e ENO 3), sendo em DPBS e BM-G como exclusivas do momento After e no grupo EPM como exclusivas dele. Neste contexto, este estudo ao avaliar os perfis proteômico do CSF antes e após múltiplos transplantes intratecal de MSCs em equinos hígidos e do CSF de equinos cronicamente afetados pela EPM permitiu identificar as enolases como potenciais marcadores de lesão neural e/ou de EPM. Novos estudos devem ser realizados para confirmar estes achados e avançar no conhecimento dos efeitos da terapia celular com MSCs pela via intratecal, para o tratamento de lesões neurológicas em equinos.

Multipotent mesenchymal stromal cell (MSCs) studies are under increasing progress because of their immunomodulatory, anti-inflammatory, antiapoptotic and tissue regeneration properties, making this modality of cell therapy promising in the treatment of various diseases. Due to the limited regenerative capacity of the central nervous system (CNS), causing functional sequelae, MSCs are being investigated as a therapeutic alternative for inflammatory, vascular, traumatic and degenerative neurological conditions in various animal species. Equine protozoal myeloencephalitis (EPM) caused by both protozoa of the Apicomplexa phylum, Sarcocystis neurona and Neospora hughesi, remains an important neurological disease in horses in the Americas, although most cases are due to S. neurona infection. The application of proteomics with its range of tools in the equine clinic can contribute significantly to the understanding of pathological processes and facilitate the discovery of new therapeutic targets or diagnostic markers. In this context, the objectives of this study were to evaluate the proteomic profiling of cerebrospinal fluid (CSF) before and after multiple intrathecal transplantations of MSCs in healthy horses and the CSF proteomic profiling of horses chronically affected by EPM. Twelve clinically healthy adult horses were randomly divided into three experimental groups: DPBS (DPBS or control; n = 4), in which intrathecal "transplants" with Dulbecco's phosphate buffered saline (DPBS) were performed; group AD-G (AD-Gs; n = 4), in which intrathecal transplants were performed with allogeneic adipose tissue MSCs; and BM-G group (BM-G; n = 4), in which intrathecal transplants were performed with allogeneic bone marrow MSCs. All experimental groups received three serial treatments (DPBS or MSCs) with a 30-day interval between them. CSF samples were collected from the experimental groups immediately before the first treatment (called the M0 or Before) and 30 days after the third treatment (called the M90 or After). At the same time, CSF of 16 healthy horses and 9 horses chronically affected by EPM were collected from the subarachnoid, Control group (Control; n = 16) and EPM group (EPM; n = 9) respectively. Each of the CSF samples from the Control group and from the EPM group were individually resuspended and pooled, totalizing two representative pools of each one the experimental groups and also named (Control and EPM) to evaluate their proteomic profilings. Similarly, the three groups that received transplants and CSF collections at two different times were grouped into six representative pools for each group and time. Considering the proteomic platform used, the three groups were similarly compared: DPBS After vs. Before, AD-G After vs. Before and BM-G After vs. Before, being found 208, 211 and 131 proteins in each comparison, respectively. Likewise, in the paired comparison of the CSF of the EPM and Control groups, EPM vs. Control, 201 proteins were identified, and 33 proteins were observed exclusively in the CSF of the EPM group. In addition, the presence of the three types of enolases interacting with each other (ENO 1, ENO 2 and ENO 3) was also observed in the comparison of the DPBS, BM-G and EPM groups, being exclusives in DPBS and BM-G at time After and in the EPM group as its exclusively. In this context, this study, when evaluating the proteomic profilings of CSF before and after multiple intrathecal transplantations of MSCs in healthy horses and CSF of horses chronically affected by EPM, allowed the identification of enolases as potential markers of neural and / or EPM injury. Further studies should be performed to confirm these findings and to advance the knowledge of the effects of intrathecal cell therapy with MSCs for the treatment of neurological lesions in horses.

Taxas de alimentação para juvenis de tilápia-do-nilo (Oreochromis niloticus) cultivados em sistema de bioflocos

O manejo alimentar inadequado resulta em prejuízo ao desempenho zootécnico, lucratividade e sustentabilidade ambiental dos empreendimentos aquícolas. Uma alternativa de produção interessante consiste no sistema de bioflocos (BFT), pois a biomassa microbiana disponibilizada como alimento natural pode contribuir com a alimentação dos peixes, além de colaborar na manutenção da qualidade de água. No entanto, a real contribuição dos flocos microbianos na redução de alimento exógeno na produção de peixes necessita ser determinada. O presente estudo objetivou determinar a taxa de alimentação que proporcione o melhor desempenho de juvenis de tilápia-do-nilo cultivadas em BFT. Foram avaliadas cinco taxas de alimentação (0; 2,5; 5,0; 7,5 e 10% da biomassa/dia - BM/d), em um sistema de recirculação com bioflocos (SRB) composto por 20 tanques de 50L. Adicionalmente foi avaliado um cultivo de tilápias alimentadas com 10% da BM/d em sistema de recirculação com água clara (SRA), constituído por um filtro biológico e quatro tanques de 50L. Em cada unidade experimental foram estocados 15 indivíduos (peso inicial de 3,01±0,1 g), equivalente a uma densidade de 300 peixes/m³. Ao final de 70 dias os peixes permaneceram em restrição total de alimento exógeno por 24 horas, foram pesados e posteriormente coletadas amostras para análises hematológicas, composição química corporal e determinação dos índices somáticos. O crescimento, a eficiência alimentar e os parâmetros de eficiência nutricional foram influenciados (P<0,05) pelas taxas de alimentação. Os índices somáticos, a composição corporal, e as variáveis hematológicas foram influenciados pelo incremento na oferta de alimento exógeno (P<0,05).  A análise de regressão dos resultados de ganho de peso, coeficiente térmico de crescimento e eficiência alimentar demonstraram que a taxa de alimentação ideal para tilápias-do-nilo cultivadas em BFT está entre 6% e 8% da BM/d. Além disso, os peixes mantidos em BFT sem fornecimento de alimento exógenos (0% da BM/d) cresceram 327% em relação ao seu peso inicial, o que demonstra que os bioflocos proporcionar um crescimento limitado dos peixes ao final de 70 dias. Entretanto, pode ser usado de maneira estratégica na manutenção dos animais durante ausência de alimento exógeno. Portanto, juvenis de tilápia-do-nilo cultivados em BFT devem ser alimentados com no mínimo 6% da BM/d.

Unsuitable food management results in low zootechnical performance, as well as to the economic and environmental aspects of aquaculture enterprises. An interesting alternative is the cultivation in biofloc technology (BFT) systems of the microbial biomass, made available as a natural food through this system and that can contribute to the optimization of fish feed, besides collaborating to maintain water quality. However, the contribution of microbial flocs in reducing the supply of exogenous food needs to be explored. The aim of this research was to determine a feed rate that provided the best performance of Nile tilapia juveniles reared in BFT. Five feed rates (0, 2.5, 5.0, 7.5 and 10% body weight per day - BW/d) were evaluated in a biofloc recirculation system (SRB) comprised of 20 tanks of 50L. In addition, a tilapia culture fed with 10% BW/d was evaluated in a clear water recirculation system (RAS), consisting of a biological filter and four tanks (50L). In each experimental unit, 15 individuals (initial weight of 3.01±0.1g) were stocked at a density of 300 fishes/m³. At the end of 70 days the fish in total restriction of exogenous food for 24 hours, were weighed and subsequently collected samples for hematological analysis, body chemical composition and determination of somatic indices. Growth, feed efficiency and nutritional parameters were influenced (P<0.05) by feed rates. Somatic indices, body composition, and hematological variables were influenced (P<0.05). Regression analysis of the results of weight gain, thermal growth coefficient and feed efficiency have shown that the ideal feed rate for Nile tilapia juveniles grown in BFT is between 6% and 8% of BW/d. In addition, fish kept in BFT without exogenous feed (0% BW/d) grew 327% over their initial weight, which shows that the biofloks provide limited growth of the fish at the end of 70 days. However, it can be used strategically in the maintenance of animals during absence of exogenous food. Therefore, juveniles of Nile tilapia cultured in BFT should be fed with at least 6% of BM/d.

Composição bromatológica e cinética da fermentação ruminal de resíduos fibrosos de babaçu e dietas contendo-as / Ruminal kinetics and chemical composition of babassu endocarp fibrous flour and total ration mixed containing them

This study aimed to evaluate the in vitro ruminal kinetics and degradability using  the Hohenheim Gas Test technique, babassu epicarp flour I® and II® (BEEFI and BEEFII) and babassu meal (BM) and also the inclusion of this by-product on the total mixed ration (TMR) in different levels. Two trails were conducted, the first including only pure by-products (BEEFI, BEEFII and BM) and the others tested different diets including (BEEFI, BEEFII and BM) in the following levels: 0%, 7,5%, 15,0%, 22,5% of TMR (dry matter basis). A randomized blocks design was applied, six blocks in the first trail and five in the others. The gas data were adjusted to the France et al. (1993) model and analyzed through regression approach (GaussNewton procedure). The regression equations were compared by parallelism test. The BEEFI, BEEFII and BM presented different chemical compositions, mainly on NDF, ADF and Lignin concentration. The kinetics of ruminal fermentation of BEEFI and BEEFII flours are below to the BM. The increasing of BEEFI, BEEFII and BM concentration in the diet reduced the gases production during the incubation time. The results of this study demonstrated that the fibrous flours I and II presented low ruminal fermentation, what commits your use in the animal feeding. However, in spite of BM to reduce the ruminal fermentation, this makes it in smaller proportion that the flours BEEFI and BEEFII.

Objetivou-se no experimento avaliar a cinética de fermentação e degradabilidade ruminal efetiva in vitro, através da técnica Hohenheim Gas Test, da farinha do endocarpo e epicarpo do babaçu (FEEBI e FEEBII) e da torta de babaçu (TB), além de dietas com diferentes níveis inclusão das mesmas. Foram conduzidos dois ensaios um com os subprodutos puros e outro com dietas com inclusões da FEEBI, FEEBII, TB nas seguintes proporções: 0,0; 7,5; 15,0 e 22,5% da matéria seca total. O delineamento foi o de blocos casualizados sendo seis blocos no primeiro e cinco na avaliação das dietas contendo os subprodutos. Os tempos de mensuração dos gases produzidos foram 3, 6, 9, 12, 24, 48, 72 e 96 horas. O modelo de France et al. (1993) foi ajustado aos dados e as equações de regressão obtidas foram comparadas por meio de teste de paralelismo e identidade de curvas. As farinhas FEEBI, FEEBII e a TB apresentaram composições bromatológicas diferentes, em relação aos constituintes da fibra (FDN, FDA e Lignina). As farinhas FEEBI e FEEBII apresentaram curvas de cinética de fermentação inferiores aos padrões de fermentação da TB. Com o aumento da proporção de FEEBI, FEEBII e da TB na dieta, reduz-se a produção de gases por tempo de incubação.Em virtude doexposto, pode-se afirmar que as farinhasdo endocarpo e epicarpo apresentarambaixa fermentação ruminal, o quecompromete seu uso em dietas de animais, já a TB apesar de reduzir afermentação ruminal o faz em menorproporção que as farinhas o endocarpo.

Composição bromatológica e cinética da fermentação ruminal de resíduos fibrosos de babaçu e dietas contendo-as / Ruminal kinetics and chemical composition of babassu endocarp fibrous flour and total ration mixed containing them

This study aimed to evaluate the in vitro ruminal kinetics and degradability using  the Hohenheim Gas Test technique, babassu epicarp flour I® and II® (BEEFI and BEEFII) and babassu meal (BM) and also the inclusion of this by-product on the total mixed ration (TMR) in different levels. Two trails were conducted, the first including only pure by-products (BEEFI, BEEFII and BM) and the others tested different diets including (BEEFI, BEEFII and BM) in the following levels: 0%, 7,5%, 15,0%, 22,5% of TMR (dry matter basis). A randomized blocks design was applied, six blocks in the first trail and five in the others. The gas data were adjusted to the France et al. (1993) model and analyzed through regression approach (GaussNewton procedure). The regression equations were compared by parallelism test. The BEEFI, BEEFII and BM presented different chemical compositions, mainly on NDF, ADF and Lignin concentration. The kinetics of ruminal fermentation of BEEFI and BEEFII flours are below to the BM. The increasing of BEEFI, BEEFII and BM concentration in the diet reduced the gases production during the incubation time. The results of this study demonstrated that the fibrous flours I and II presented low ruminal fermentation, what commits your use in the animal feeding. However, in spite of BM to reduce the ruminal fermentation, this makes it in smaller proportion that the flours BEEFI and BEEFII. (AU)

Objetivou-se no experimento avaliar a cinética de fermentação e degradabilidade ruminal efetiva in vitro, através da técnica Hohenheim Gas Test, da farinha do endocarpo e epicarpo do babaçu (FEEBI e FEEBII) e da torta de babaçu (TB), além de dietas com diferentes níveis inclusão das mesmas. Foram conduzidos dois ensaios um com os subprodutos puros e outro com dietas com inclusões da FEEBI, FEEBII, TB nas seguintes proporções: 0,0; 7,5; 15,0 e 22,5% da matéria seca total. O delineamento foi o de blocos casualizados sendo seis blocos no primeiro e cinco na avaliação das dietas contendo os subprodutos. Os tempos de mensuração dos gases produzidos foram 3, 6, 9, 12, 24, 48, 72 e 96 horas. O modelo de France et al. (1993) foi ajustado aos dados e as equações de regressão obtidas foram comparadas por meio de teste de paralelismo e identidade de curvas. As farinhas FEEBI, FEEBII e a TB apresentaram composições bromatológicas diferentes, em relação aos constituintes da fibra (FDN, FDA e Lignina). As farinhas FEEBI e FEEBII apresentaram curvas de cinética de fermentação inferiores aos padrões de fermentação da TB. Com o aumento da proporção de FEEBI, FEEBII e da TB na dieta, reduz-se a produção de gases por tempo de incubação.Em virtude doexposto, pode-se afirmar que as farinhasdo endocarpo e epicarpo apresentarambaixa fermentação ruminal, o quecompromete seu uso em dietas de animais, já a TB apesar de reduzir afermentação ruminal o faz em menorproporção que as farinhas o endocarpo. (AU)