Aural hematomas in small ruminants - clinical features, surgical treatment and outcome

Background: Aural or auricular hematoma is an important and prevalent surgical condition in small animals practice, and commonly reported in companion pets. The condition is characterized by blood accumulation between the pinnae's dermal surface and the underlying perichondrium. In farm animals, most cases present surgical treatment with drainage of serosanguineous fluid from acute cases with clinical evolution ranging from 1 to 5 days. Therefore, the present work reports the clinical features, surgical treatment and outcome of aural hematomas in 3 small ruminants with a chronic evolution (7 to 20 days), detailing the post-surgical complications, such as wound infection and recurrence, and final cosmetic appearance of the pinnae. Cases: Upon physical examination, all animals were alert and presenting a good body condition score. Clinical alteration was restricted to a bilateral (Case 1) or unilateral (Cases 2 & 3) painless, and fluid-filled swelling, presenting doughy consistency masses within the fluid during pinna manipulation. The fluid-filled swellings were located on the concave (Case 1 - left ear & Case 2) and convex (Case 1 - right ear & Case 3) surface of the pinna. No primary pruritic disorders of the pinna were detected, and a diagnosis of traumatic aural hematoma was proposed. Due to the chronicity of the cases, surgical approach was advisable. The small ruminants underwent general anesthesia, and a linear incision over the skin overlying the hematoma was performed (Cases 1 & 2). After removal of blood and fibrin clots, the cavity was flushed and captonated size 0 nylon mattress sutures were performed on either side of the incision, in order to obliterate the dead space. Due to recurrence after 14 days, Case 2 was submitted to a modified surgical approach using a S-shaped incision combined to multiple drainage holes (MDH) using a disposable 6 mm biopsy punch. The same approach has performed in Case 3. Then, size 0 nylon mattress sutures followed by a tight protective pressure and absorbent bandage combined with an Elizabethan collar was applied. Postoperatively, Case 1 presented surgical site infection and the antibiotic was changed after bacterial culture and antibiogram results. Hospital discharge varied from 14 to 19 days' post-surgery. All animals presented some degree of ear retraction and a linear or S-shaped scar on the affected ear, but final cosmetic appearance was satisfactory to all owners. Discussion: Aural or auricular hematomas are a frequent disorder in dogs and cats clinical practice. In sheep, the few reported cases have been associated with pruritic disorders of the pinna, such as ticks infestation and sarcoptic mange. Whilst in goats, traumatic injuries, such as ear tagging and trauma from others goats, are considered the main cause, especially in breeds with pendulous ear. In our cases with chronic evolution (> 7 days), the most important clinical feature was the presence of doughy consistency masses within the fluid, suggesting matured blood and fibrin clots. A linear incision with captonated size 0 nylon mattress sutures was associated to post-surgical complications, such as wound infection and aural hematoma recurrence. Therefore, a S-shaped incision associated to creation of MDH, in order to achieve better drainage, was the chosen approach in the second surgery (Case 2) and on the subsequent patient (Case 3). To the best of our knowledge, this is the first report using the MDH approach in farm animals, that appears to be an effective treatment for chronic aural hematomas in small ruminants.

Isolation, culture and characterization of multipotent mesenchymal stem cells from goat umbilical cord blood

ABSTRACT: Mesenchymal stem cells (MSC) reside in small numbers in many adult tissues and organs, and play an active role in the homeostasis of these sites. Goat derived multipotent MSC have been established from bone marrow, adipose tissues and amniotic fluid. Umbilical cord blood (UCB) is considered an important source of these cells. However, the MSC isolation from the goat UCB has not been demonstrated. Therefore, the aim of the present study was to isolate, culture and characterize goat umbilical cord blood derived mesenchymal stem cells. MSC were isolated from UCB by Ficoll-Paque density centrifugation and cultured in DMEM supplemented with 10% or 20% FBS. FACS analysis was performed and induction lineage differentiation was made to characterize these cells. They exhibited two different populations in flow cytometry, and revealed the positive expression of CD90, CD44 and CD105, but negative staining for CD34 in larger cells, and positive stained for CD90 and CD105, but negative for CD44 and CD34 in the smaller cells. MSC from goat UCB showed capability to differentiate into chondrocytes and osteoblasts when incubated with specific differentiation medium. Present study established that goat mesenchymal stem cells can be derived successfully from umbilical cord blood.

RESUMO: As células tronco mesenquimais (MSC) residem em pequenas quantidades em muitos tecidos e órgãos adultos, desempenhando um papel ativo na homeostase destes locais. O isolamento de MSC já foi demonstrado em amostras de medula óssea, tecido adiposo e fluido amniótico de cabras. O sangue de cordão umbilical é considerado uma fonte importante desse tipo de células. No entanto, até o presente momento, não foi demonstrado o isolamento de MSC provenientes do sangue de cordão umbilical de cabras. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi isolar, cultivar e caracterizar células tronco mesenquimais provenientes do sangue do cordão umbilical caprino. As MSC foram isoladas utilizando o gradiente de densidade Ficoll-Paque e cultivadas em DMEM suplementado com 10% ou 20% de FBS. A caracterização desse tipo celular foi realizada através de análise por citometria de fluxo e diferenciação em linhagens celulares mesodermais. A analise no citômetro de fluxo demonstrou a presença de duas populações distintas, um grupo com células maiores e outro com células menores; observando expressão positiva de CD90, CD44 e CD105, e negativa para CD34 nas células maiores; enquanto que as menores foram positivas para CD90 e CD105, mas negativas para CD44 e CD34. As células isoladas demonstraram capacidade de se diferenciar em condrócitos e osteoblastos quando incubadas com meio de diferenciação específico. O presente estudo demonstrou que células tronco mesenquimais podem ser obtidas com sucesso do sangue do cordão umbilical caprino.

Isolation, culture and characterization of multipotent mesenchymal stem cells from goat umbilical cord blood / Isolamento, cultura e caracterização de células tronco mesenquimais multipotentes provenientes do sangue do cordão umbilical caprino

Mesenchymal stem cells (MSC) reside in small numbers in many adult tissues and organs, and play an active role in the homeostasis of these sites. Goat derived multipotent MSC have been established from bone marrow, adipose tissues and amniotic fluid. Umbilical cord blood (UCB) is considered an important source of these cells. However, the MSC isolation from the goat UCB has not been demonstrated. Therefore, the aim of the present study was to isolate, culture and characterize goat umbilical cord blood derived mesenchymal stem cells. MSC were isolated from UCB by Ficoll-Paque density centrifugation and cultured in DMEM supplemented with 10% or 20% FBS. FACS analysis was performed and induction lineage differentiation was made to characterize these cells. They exhibited two different populations in flow cytometry, and revealed the positive expression of CD90, CD44 and CD105, but negative staining for CD34 in larger cells, and positive stained for CD90 and CD105, but negative for CD44 and CD34 in the smaller cells. MSC from goat UCB showed capability to differentiate into chondrocytes and osteoblasts when incubated with specific differentiation medium. Present study established that goat mesenchymal stem cells can be derived successfully from umbilical cord blood.(AU)

As células tronco mesenquimais (MSC) residem em pequenas quantidades em muitos tecidos e órgãos adultos, desempenhando um papel ativo na homeostase destes locais. O isolamento de MSC já foi demonstrado em amostras de medula óssea, tecido adiposo e fluido amniótico de cabras. O sangue de cordão umbilical é considerado uma fonte importante desse tipo de células. No entanto, até o presente momento, não foi demonstrado o isolamento de MSC provenientes do sangue de cordão umbilical de cabras. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi isolar, cultivar e caracterizar células tronco mesenquimais provenientes do sangue do cordão umbilical caprino. As MSC foram isoladas utilizando o gradiente de densidade Ficoll-Paque e cultivadas em DMEM suplementado com 10% ou 20% de FBS. A caracterização desse tipo celular foi realizada através de análise por citometria de fluxo e diferenciação em linhagens celulares mesodermais. A analise no citômetro de fluxo demonstrou a presença de duas populações distintas, um grupo com células maiores e outro com células menores; observando expressão positiva de CD90, CD44 e CD105, e negativa para CD34 nas células maiores; enquanto que as menores foram positivas para CD90 e CD105, mas negativas para CD44 e CD34. As células isoladas demonstraram capacidade de se diferenciar em condrócitos e osteoblastos quando incubadas com meio de diferenciação específico. O presente estudo demonstrou que células tronco mesenquimais podem ser obtidas com sucesso do sangue do cordão umbilical caprino.(AU)

Isolation, culture and characterization of multipotent mesenchymal stem cells from goat umbilical cord blood / Isolamento, cultura e caracterização de células tronco mesenquimais multipotentes provenientes do sangue do cordão umbilical caprino

Mesenchymal stem cells (MSC) reside in small numbers in many adult tissues and organs, and play an active role in the homeostasis of these sites. Goat derived multipotent MSC have been established from bone marrow, adipose tissues and amniotic fluid. Umbilical cord blood (UCB) is considered an important source of these cells. However, the MSC isolation from the goat UCB has not been demonstrated. Therefore, the aim of the present study was to isolate, culture and characterize goat umbilical cord blood derived mesenchymal stem cells. MSC were isolated from UCB by Ficoll-Paque density centrifugation and cultured in DMEM supplemented with 10% or 20% FBS. FACS analysis was performed and induction lineage differentiation was made to characterize these cells. They exhibited two different populations in flow cytometry, and revealed the positive expression of CD90, CD44 and CD105, but negative staining for CD34 in larger cells, and positive stained for CD90 and CD105, but negative for CD44 and CD34 in the smaller cells. MSC from goat UCB showed capability to differentiate into chondrocytes and osteoblasts when incubated with specific differentiation medium. Present study established that goat mesenchymal stem cells can be derived successfully from umbilical cord blood.(AU)

As células tronco mesenquimais (MSC) residem em pequenas quantidades em muitos tecidos e órgãos adultos, desempenhando um papel ativo na homeostase destes locais. O isolamento de MSC já foi demonstrado em amostras de medula óssea, tecido adiposo e fluido amniótico de cabras. O sangue de cordão umbilical é considerado uma fonte importante desse tipo de células. No entanto, até o presente momento, não foi demonstrado o isolamento de MSC provenientes do sangue de cordão umbilical de cabras. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi isolar, cultivar e caracterizar células tronco mesenquimais provenientes do sangue do cordão umbilical caprino. As MSC foram isoladas utilizando o gradiente de densidade Ficoll-Paque e cultivadas em DMEM suplementado com 10% ou 20% de FBS. A caracterização desse tipo celular foi realizada através de análise por citometria de fluxo e diferenciação em linhagens celulares mesodermais. A analise no citômetro de fluxo demonstrou a presença de duas populações distintas, um grupo com células maiores e outro com células menores; observando expressão positiva de CD90, CD44 e CD105, e negativa para CD34 nas células maiores; enquanto que as menores foram positivas para CD90 e CD105, mas negativas para CD44 e CD34. As células isoladas demonstraram capacidade de se diferenciar em condrócitos e osteoblastos quando incubadas com meio de diferenciação específico. O presente estudo demonstrou que células tronco mesenquimais podem ser obtidas com sucesso do sangue do cordão umbilical caprino.(AU)

Indirect diagnostic tests for the detection of subclinical mastitis in dairy goats experimentally infected with Staphylococcus aureus / Testes diagnósticos indiretos na detecção da mastite subclínica em cabras leiteiras infectadas experimentalmente com Staphylococcus aureus

The aim of the present study was to assess two diagnostic techniques (California mastitis test (CMT) and the somatic cell count (SCC)) that can diagnose mastitis in dairy goats. Experimental infection was conducted using 20 mammary glands, a strain of Staphylococcus aureus , an infectious dose of 1.2x108CFU mL-1 and a volume of 1mL per mammary gland. The CMT and the SCC were used to detect subclinical mastitis. Bacterial culture (BC) was performed immediately after milk collection and was used as the gold standard. Four experimental time points were established (0, 24, 48 and 72 hours post-inoculation). Analysis of the ROC curve confirmed that the best combination of sensitivity and specificity were obtained with a cutoff point of 405.5, 6030.0 and 729.5x103 cells mL-1, respectively at M1, M2 and M3. Furthermore, considering the drop in sensitivity throughout the experimental time points, the use of serial bacterial cultures are recommended, particularly in herds with a high prevalence of S. aureus.(AU)

Neste trabalho, objetivou-se avaliar duas técnicas diagnósticas (California mastitis test (CMT) e a contagem de células somáticas (CCS)) disponíveis para o diagnóstico da mastite em cabras leiteiras. Realizou-se infecção experimental em 20 metades mamárias, utilizando-se cepa de S. aureus , em uma dose infectante de 1,2x108 UFC mL-1 e um volume de 1mL/metade mamária. Para detecção da mastite subclínica, foi utilizado o CMT e a CCS. A cultura bacteriológica (CB) foi empregada como padrão ouro, sendo realizada logo após a coleta do leite. Foram estabelecidos quatro momentos experimentais (0, 24, 48 e 72 horas pós-infecção). A análise da curva de ROC confirmou que a melhor combinação (sensibilidade e especificidade) foi obtida com ponto de corte de 405,5, 6030,0 e 729,5x103 cells mL-1, respectivamente, em M1, M2 and M3. Ademais, levando em consideração a queda da sensibilidade ao longo dos momentos experimentais, é relevante a realização da cultura bacteriológica seriada, principalmente em rebanhos com elevada prevalência de S. aureus.(AU)

IMPACTO DA ADIÇÃO DE ETANOL NO CULTIVO IN VITRO DE FOLÍCULOS PRÉ-ANTRAIS OVINOS ISOLADOS E AVALIAÇÃO DA EFICIÊNCIA DO EUGENOL DURANTE O CULTIVO IN VITRO DE FOLÍCULOS PRÉ-ANTRAIS CAPRINOS INCLUSOS NO TECIDO OVARIANO

Os objetivos do presente estudo foram: 1) avaliar os efeitos do etanol e do FSH sobre o desenvolvimento folicular, secreção de esteroides, expressão de mRNA (BAX, BCL2, AQP3, CX43, INHBA, HSD3B, KITLG, HSPA1A, CYP19A1 e FSHR), retomada da meiose e perfil metabólico de folículos secundários ovinos isolados cultivados in vitro por 18 dias (Fase 1); 2) investigar o efeito da adição de eugenol (10, 20 e 40 M), ácido ascórbico (50 g/mL) e anetol (300 g/mL) sobre a sobrevivência, ativação, diâmetro folicular e oocitário, produção de espécies reativas de oxigênio, capacidade antioxidante do meio após o cultivo in vitro por 7 dias de folículos pré-antrais caprinos inclusos no tecido ovariano (in situ) (Fase 2 - etapa 1); comparar a imunomarcação de calreticulina, trimetilação da histona (H3K4me3) e expressão de mRNA (CAT, KDM1AX1, KDM3A e ERP29) entre os tratamentos controle, Eugenol na concentração 40 M (melhor concentração de eugenol obtida na etapa anterior), ácido ascórbico e anetol (Fase 2 - etapa 2). Para o cultivo na forma isolada, os folículos ovarianos foram cultivados por 18 dias nos seguintes tratamentos: -MEM+ (controle cultivado), -MEM+ suplementado com 100 ng/mL de rbFSH (FSH recombinante bovino) ou 0.2%-v/v de Etanol (AL). Para o cultivo in situ, fragmentos ovarianos foram fixados imediatamente (tratamento controle não cultivado) ou distribuídos aleatoriamente e cultivados por 1 ou 7 dias nos seguintes tratamentos: -MEM+ (controle cultivado), -MEM+ suplementado com 50 g/mL de ácido ascórbico (AA), ou com 300 g/mL de anetol (ANE 300), ou diferentes concentrações de eugenol a 10 (EUG 10), 20 (EUG 20) ou 40 M (EUG 40). Os resultados da fase 1 demonstraram que o tratamento AL obteve uma maior produção de estradiol (P <0,05), maior percentagem de retomada da meiose (P = 0,057) e maiores níveis de RNAm para CYP19A1 e FSHR em relação ao controle. No tocante ao perfil metabólico, os níveis de alguns íons, que são provavelmente, aminoácidos, lipídios, um análogo do GMPc e um derivado do metabolismo do fosfoinositol, foram maiores (P<0,05) nos tratamentos AL e FSH do que no controle. Os resultados da fase 2-etapa 1 (cultivo in situ) demonstraram que, em geral, o EUG 40 melhorou a sobrevivência, ativação e crescimento folicular e oocitário em relação aos demais tratamentos testados (P<0,05). Já na fase 2-etapa 2, esse tratamento resultou em maiores taxas de viabilidade, reduziu a produção de ROS, aumentou a capacidade antioxidante do meio, reduziu a trimetilação da histona 3, aumentou a produção de calreticulina, a expressão de RNAm das KDMs e de ERP29 em relação ao meio controle. Em conclusão, o etanol aumentou a produção de estradiol e a retomada da meiose, bem como apresentou um perfil metabólico diferente do grupo controle após cultivo in vitro folículos pré-antrais ovinos isolados (fase 1). Além disso, a adição de eugenol na concentração de 40 M melhorou de forma eficiente a sobrevivência e o desenvolvimento de folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro e reduziu a produção de EROs (fase 2).

The objectives of the present study were: 1) to evaluate the effects of ethanol and FSH on follicular development, steroid secretion, mRNA expression (BAX, BCL2, AQP3, CX43, INHBA, HSD3B, KITLG, HSPA1A, CYP19A1, and FSHR), resumption of meiosis, and metabolic profile of isolated ovine secondary follicles in vitro cultured for 18 days (Phase 1); 2) to investigate the effect of addition eugenol (10, 20 and 40 M), ascorbic acid (50 g/mL) and anethole (300 g/mL) on survival, activation, follicular and oocyte diameter, production of reactive species of oxygen, the antioxidant capacity of the medium after in vitro culture for 7 days of goat preantral follicles enclosed in the ovarian tissue (in situ) (Phase 2 - step 1); to compare calreticulin, histone methylation (H3K4me3) immunostaining and mRNA expression for CAT, KDM1AX1, KDM3A, and ERP29 among control, 40 M Eugenol (best eugenol concentration obtained in the phase 2- step 1), ascorbic acid and anethole treatments (Phase 2 - step 2). With regard to the in vitro follicle culture in the isolated form (phase 1, ovarian follicles were cultured for 18 days in the following treatments: -MEM+ (cultured control), -MEM+ supplemented with 100 ng/mL of rbFSH (recombinant bovine FSH) or 0.2%-v/v of Ethanol (AL). In the phase 2, ovarian fragments were either fixed immediately (non-cultured control treatment) or randomly distributed and cultured for 1 or 7 days in the following treatments: -MEM+ (cultured control), -MEM+ supplemented with 50 g/mL acid ascorbic (AA), or with 300 g/mL of anethole (ANE 300), or different concentrations of eugenol at 10 (EUG 10), 20 (EUG 20) or 40 M (EUG 40). The results of phase 1 demonstrated that the AL treatment had higher estradiol production (P < 0.05), higher percentage of meiosis resumption (P = 0.057), and mRNA levels for CYP19A1 and FSHR compared to the control. Regarding the metabolic profile, the levels of some ions, which are probably amino acids, lipids, a cGMP analog, and a derivative of phosphoinositol metabolism, were higher (P<0.05) in AL and FSH treatments than in the control. The results of phase 2-step 1 (in situ culture) showed that, in general, EUG 40 improved the survival, activation, and follicular and oocyte growth compared to the other tested treatments (P<0.05). In the phase 2-step 2, EUG 40 treatment resulted in higher viability rate, reduced ROS production, increased the antioxidant capacity of the medium, reduced histone 3 methylation expression, increased calreticulin expression, the mRNA levels for KDM1AX1, KDM3A, and ERP29 when compared to control. In conclusion, ethanol increased estradiol production and meiosis resumption, as well as presented a different metabolic profile than the control group after in vitro culture of isolated ovine preantral follicles (phase 1). Furthermore,the addition of eugenol at 40 M improved significantly the survival and development of in vitro cultured goat preantral follicles and reduced the production of ROS (phase 2).

CAUSAS DE PROBLEMAS REPRODUTIVOS EM REBANHOS CAPRINOS E OVINOS NO SEMIÁRIDO NORDESTINO, BRASIL

Patógenos, como Leptospira sp. e Toxoplasma gondii, foram associados a falhas reprodutivas em rebanhos de pequenos ruminantes acarretando sérios prejuízos econômicos. Dessa forma, buscou-se investigar a participação da Leptospira sp. e T. gondii em distúrbios reprodutivos em caprinos e ovinos de propriedades situadas no município de Salgueiro, Pernambuco, Nordeste brasileiro. A dissertação foi elaborada em dois capítulos. No Capítulo I objetivou-se analisar a participação da Leptospira sp. em surto de abortos em pequenos ruminantes de oito propriedades situadas no município de Salgueiro, Sertão pernambucano, Brasil. O diagnóstico de leptospirose foi realizado baseado na sorologia (teste de soroaglutinação microscópica - SAM), cultura bacteriana e reação em cadeia da polimerase (PCR). De um total de 233 fêmeas em idade reprodutiva, sendo 171 caprinos e 62 ovinos, 12,3% (21/171) dos caprinos e 17,7% (11/62) dos ovinos, foram positivos na SAM. Os títulos de anticorpos variaram de 50 a 200 e os sorogrupos mais frequentes foram Castellonis (78,1%) e Grippotyphosa (15,6%). O DNA de Leptospira sp. foi identificado em 55,7% (44/79), das amostras de secreção vaginal testadas, sendo 58,5% (38/65) dos caprinos e 42,9% dos ovinos (6/14). O isolamento bacteriano foi obtido em 37,9% das 79 culturas de secreção vaginal, sendo 38,5% (25/65) dos caprinos e 35,7% (5/14) dos ovinos. Das 92 (39,5%) fêmeas relacionadas a abortos (76 caprinos e 16 ovinos), 12 (13%) apresentaram anticorpos anti- Leptospira sp., sendo 7 (9,2%) caprinos e 5 (31,3%) ovinos. Os achados sorológicos, moleculares, clínicos e isolamento sugerem a possível associação de abortos com a presença do agente nos rebanhos estudados. No Capítulo II foi estudada a participação do T. gondii em surto de abortos em caprinos e ovinos de oito propriedades localizadas no município de Salgueiro - PE, região do semiárido brasileiro. Um total de 233 fêmeas em idade reprodutiva, sendo 171 caprinos e 62 ovinos, foram processadas através da reação de imunofluorescência indireta (RIFI), buscando a detecção anticorpos IgG para o T. gondii. Foram positivos na RIFI 14% (24/171) dos caprinos e 40,3% (25/62) dos ovinos. Os títulos de anticorpos variaram de 64 a 8192. Das 92 (39,5%) fêmeas relacionadas a abortos, 19 (20,7%) apresentaram anticorpos anti- T. gondii, sendo 12 (15,8%) caprinos e 7 (43,8%) ovinos. Os resultados da sorologia com os achados clínicos revelaram a possível associação de abortos com a presença do agente nos rebanhos estudados. Conclui-se que a leptospirose e toxoplasmose podem ser as causas de distúrbios reprodutivos e abortos nos rebanhos caprinos e ovinos na região semiárida, sendo necessária a adoção de medidas de prevenção e controle destas infecções. Recomenda-se realizar a implantação de melhorias nas práticas sanitárias e de manejo, controle zootécnico, e o tratamento no caso da leptospirose como medidas de controle destas doenças.

Pathogens such as Leptospira sp. and Toxoplasma gondii were associated with reproductive failures in small ruminant herds causing serious economic losses. Thus, we sought to investigate the participation of Leptospira sp. and T. gondii in reproductive disorders in goats and sheep from properties located in the municipality of Salgueiro, Pernambuco, Northeastern Brazil. The dissertation was elaborated in two chapters. In Chapter I, the objective was to analyze the participation of Leptospira sp. in an abortion outbreak in small ruminants from eight farms located in the municipality of Salgueiro, Sertão Pernambuco, Brazil. The diagnosis of leptospirosis was performed based on serology (microscopic agglutination test - MAT), bacterial culture and polymerase chain reaction (PCR). From a total of 233 females in reproductive age, being 171 goats and 62 sheep, 12.3% (21/171) of the goats and 17.7% (11/62) of the sheep were positive in MAT. Antibody titers ranged from 50 to 200 and the most frequent serogroups were Castellonis (78.1%) and Grippotyphosa (15.6%). The DNA of Leptospira sp. was identified in 55.7% (44/79) of the vaginal secretion samples tested, 58.5% (38/65) of goats and 42.9% of sheep (6/14). Bacterial isolation was obtained in 37.9% of the 79 cultures of vaginal secretions, being 38.5% (25/65) from goats and 35.7% (5/14) from sheep. Of the 92 (39.5%) females related to abortions (76 goats and 16 sheep), 12 (13%) had anti- Leptospira sp. antibodies, 7 (9.2%) goats and 5 (31.3%) sheep. The serological, molecular, clinical and isolation findings suggest the possible association of abortions with the presence of the agent in the studied herds. In Chapter II, the participation of T. gondii in an abortion outbreak in goats and sheep from eight farms located in the municipality of Salgueiro - PE, in the Brazilian semiarid region, was studied. A total of 233 females of reproductive age, 171 goats and 62 sheep, were processed through indirect immunofluorescence reaction (IFAT), seeking the detection of IgG antibodies to T. gondii. 14% (24/171) of goats and 40.3% (25/62) of sheep were positive in the IFI. Antibody titers ranged from 64 to 8192. Of the 92 (39.5%) females related to abortions, 19 (20.7%) presented anti-T. gondii antibodies, being 12 (15.8%) goats and 7 (43.8%) sheep. The serology results with the clinical findings revealed the possible association of abortions with the presence of the agent in the studied herds. It is concluded that leptospirosis and toxoplasmosis can be the causes of reproductive disorders and abortions in goat and sheep herds in the semiarid region, requiring the adoption of prevention and control measures for these infections. It is recommended to implement improvements in sanitary and management practices, zootechnical control, and treatment in the case of leptospirosis as measures to control these diseases

SILAGENS DE RAÇÕES COMPLETAS A BASE DE PALMA FORRAGEIRA SOBRE O PERFIL FERMENTATIVO, DIVERSIDADE TAXONÔMICA, PRODUÇÃO, COMPOSIÇÃO DO LEITE E AVALIAÇÃO ECONÔMICA DE CABRAS EM LACTAÇÃO

Este estudo envolveu três ensaios experimentais. No primeiro, objetivou-se avaliar as características produtivas e morfometricas da palma forrageira e gliricidia consorciadas em diferentes espaçamentos. Para isso, foi adotado um delineamento experimental foi em blocos casualizados com 4 tratamentos e 6 repetições. Os tratamentos aplicados foram quatro espaçamentos na linha, para a Gliricídia: E1 (1,0 m), E2 (1,5 m), E3 (2,0 m) e E4 (3,0 m), com 2,30 m entre linhas. Na palma, analisou-se a altura (AP), a largura (LP), número total de cladódios da planta (NCP), comprimento de cladódios (CC), largura de cladódio (LC), área de cladódio total (ACT), produção de matéria verde (PMV) e seca PMS e eficiência do uso de chuva (EUC). Houve diferença significativa somente para AP e LP, apresentando efeito linear crescente (P<0,05), para palma forrageira durante dois ciclos de avaliação. Com relação as respostas da Gliricidia no primeiro ano de consórcio, as variáveis, LP, NF, PR, MVPlant e MSPlant apresentaram diferença (P<0,05) dentre os espaçamentos. A gliricidia pode ser utilizada em consorcio com a palma forrageira em um espaçamento de 1,0m visto que além de não comprometer o desempenho e produção de matéria verde das duas culturas, aumenta a eficiência do uso da área. No segundo estudo, o objetivo foi investigar os efeitos de níveis de palma forrageira em silagens de ração completa sobre o perfil fermentativo, populações microbianas, estabilidade aeróbia e diversidade taxonômica. O delineamento utilizado foi o inteiramente casualizado, em arranjo fatorial 4x4 com seis repetições, sendo quatro rações com diferentes níveis de palma forrageira (15; 30; 45 e 60% com base na matéria natural) e quatro períodos de abertura (0, 15, 30 e 60 dias de fermentação). Foi observado efeito de interação (P<0,05) entre as rações e tempo de abertura para população de mofos e leveduras. Foi observado diferença significativa para o índice de riqueza e diversidade (P<0,05) (Chao1 e Shannon). Os filos bacterianos, mais abundantes foram Proteobactéria e Firmicutes e os gêneros Lactobacillus e Weissella. A palma forrageira pode ser incluída em silagens de ração completa até ao nível de 60%, de forma que atuou positivamente nos indicadores qualitativos das silagens, modulando as comunidades taxonômicas e permitindo a predominância de grupos importantes para preservação da massa ensilada. O terceiro estudo, teve como objeto de estudo avaliar os efeitos da alimentação de cabras com silagens de ração total a base de palma forrageira e capim-buffel sobre a produção e composição do leite bem como sobre os indicadores econômicos da produção de leite. Para o ensaio experimental, foram utilizadas oito cabras leiteiras mestiças Pardas Alpinas e Sem raça definida (SRD), multíparas em lactação com 40 ± 2 kg de peso corporal. Distribuídos em quadrado latino duplo 4x4, balanceadas de acordo com o período de lactação. Foi observada diferença significativa (P>0,05) quanto a produção de leite e teores de gordura no leite. Os outros constituintes do leite não diferiram (P<0,05) entre as dietas estudadas. O índice de lucratividade se apresentou positivo apenas para a dieta com 30% de inclusão de feno de capim-buffel, apresentando um valor de 1,6 R$, enquanto a taxa de rentabilidade ficou em 60%. As dietas com 30% de feno de capim-buffel na dieta de cabras promoveram aumento na produção de leite e alterações nos teores de gordura, bem como aumentaram os indicadores de eficiência econômica.

This study involved three experiments. In the first, the objective was to evaluate the productive and morphometric characteristics of the forage palm and gliricidia intercropped in different spacing. To this it was adopted an experimental design was a randomized block with 4 treatments and 6 replicates. The treatments applied were four spacings in the line, for Gliricídia: E1 (1.0 m), E2 (1.5 m), E3 (2.0 m) and E4 (3.0 m), with 2.30 m between lines. In the palm, height (HP), width (W), total number of plant cladodes (NPC), cladodes length (CL), cladode width (CW), total cladode area (TCA) were analyzed, production of green matter (PGM) and dry (PDM) and efficiency of rain use (ERU). There was a significant difference only for HP and W, with increasing linear effect (P <0.05), for forage palm during two evaluation cycles. Regarding the responses of Gliricidia in the first year of consortium, the variables, HP, NF, PR, PGM and PDM showed a difference (P <0.05) between the spacing. Gliricidia can be used in conjunction with the forage palm at a spacing of 1.0m since, in addition to not compromising the performance and production of green matter of the two crops, it increases the efficiency of the use of the área. In the second study, the aim was to investigate the effects of forage cactus levels in complete feed silage on the fermentation characteristics, microbial populations, aerobic stability and taxonomic diversity. The design used was completely randomized, in a 4x4 factorial arrangement with six replications, four rations with different levels of forage palm (15; 30; 45 and 60% based on natural matter) and four opening periods (0, 15, 30 and 60 days of fermentation). An interaction effect (P <0.05) was observed between the rations and opening time for mold and yeast population. A significant difference was observed for the wealth and diversity index (P <0.05) (Chao1 and Shannon). The most abundant bacterial phyla were Proteobacteria and Firmicutes and the genera Lactobacillus and Weissella. The forage palm can be included in complete feed silages up to the level of 60%, so that it acted positively in the qualitative indicators of the silages, modulating the taxonomic communities and allowing the predominance of important groups for the preservation of ensiled mass. The third study aimed to evaluate the effects of feeding goats with total feed silages based on forage palm and buffel grass on milk production and composition, as well as on economic indicators of milk production. For the experimental test, eight crossbred Pardas Alpinas and No Breed dairy goats, lactating multiparous with 40 ± 2 kg of body weight were used. Distributed in a double Latin square 4x4, balanced according to the lactation period. A significant difference was observed (P> 0.05) in terms of milk production and fat content in milk. The other constituents of milk did not differ (P <0.05) between the diets studied. The profitability index was positive only for the diet with 30% inclusion of buffalo grass hay, presenting a value of 1.6 R $, while the profitability rate was 60%. Diets with 30% buffalo grass hay in the goat diet promoted an increase in milk production and changes in fat levels, as well as increased economic efficiency indicators.

Human follicle stimulating hormone (hFSH) and thyroxine (T4) in survival maintenance and in vitro growth promotion of caprine preantral follicles / Hormônio folículo estimulante humano (hFSH) e tiroxina (T4) na manutenção da sobrevivência e promoção do crescimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos

The aim of this study was to investigate the interaction of human FSH (10ng/ml) with T4 (20ng/mL) on survival, activation and growth of preantral follicles cultured in vitro for 28 days. Fragments of non-cultured and cultured ovarian tissue were processed for classic histology and transmission electron microscopy. The results showed a reduction in the survival rate in all the media tested (one to 28 days) when compared to the fresh control. However the treatment with T4/hFSH for seven days of culture maintained the rate similar to the control. The media tested by one and 28 days reduced the percentage of primordial follicles in all periods of culture. However, T4/hFSH on day one of culture remained similar to the fresh control. None of the media were able to keep the percentage of the developing follicles. It was observed that the follicular diameter in the medium with T4/hFSH remained similar to the fresh control. The ultrastructural analysis confirmed the integrity of follicles cultured for seven days in a medium supplemented with T4/hFSH. In conclusion, the medium with T4/hFSH is able to maintain the survival, promote the activation, and the ultrastructural integrity of caprine preantral follicles for until seven days.

O objetivo deste estudo foi investigar a interação do FSH humano (10 ng/mL) com T4 (20 ng/mL) na sobrevivência, ativação e crescimento de folículos pré-antrais cultivados in vitro, por um período de longa duração (28 dias). Fragmentos de tecido ovariano não cultivado e cultivados foram processados para histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados mostraram uma redução na taxa de sobrevivência em todos os meios testados (um a 28 dias) quando comparado ao controle fresco. Entretanto, o tratamento com T4/hFSH por sete dias de cultivo resultou em taxa semelhante ao controle. Os meios testados por 28 dias reduziram o percentual de folículos primordiais em todos os períodos de cultivo. Contudo, T4/hFSH no dia um de cultivo manteve-se semelhante ao controle fresco. Nenhum dos meios foi capaz de manter o percentual dos folículos em desenvolvimento. Observou-se que o diâmetro folicular cultivado no meio com T4/hFSH manteve-se semelhante ao controle fresco. As análises ultraestruturais confirmaram a integridade de folículos cultivados por sete dias em meio suplementado com T4/hFSH.  Em conclusão, o meio com T4/hFSH é capaz de manter a sobrevivência, promover a ativação e a integridade ultraestrutural de folículos pré-antrais caprinos, por até sete dias.

Human follicle stimulating hormone (hFSH) and thyroxine (T4) in survival maintenance and in vitro growth promotion of caprine preantral follicles / Hormônio folículo estimulante humano (hFSH) e tiroxina (T4) na manutenção da sobrevivência e promoção do crescimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos

The aim of this study was to investigate the interaction of human FSH (10ng/ml) with T4 (20ng/mL) on survival, activation and growth of preantral follicles cultured in vitro for 28 days. Fragments of non-cultured and cultured ovarian tissue were processed for classic histology and transmission electron microscopy. The results showed a reduction in the survival rate in all the media tested (one to 28 days) when compared to the fresh control. However the treatment with T4/hFSH for seven days of culture maintained the rate similar to the control. The media tested by one and 28 days reduced the percentage of primordial follicles in all periods of culture. However, T4/hFSH on day one of culture remained similar to the fresh control. None of the media were able to keep the percentage of the developing follicles. It was observed that the follicular diameter in the medium with T4/hFSH remained similar to the fresh control. The ultrastructural analysis confirmed the integrity of follicles cultured for seven days in a medium supplemented with T4/hFSH. In conclusion, the medium with T4/hFSH is able to maintain the survival, promote the activation, and the ultrastructural integrity of caprine preantral follicles for until seven days.(AU)

O objetivo deste estudo foi investigar a interação do FSH humano (10 ng/mL) com T4 (20 ng/mL) na sobrevivência, ativação e crescimento de folículos pré-antrais cultivados in vitro, por um período de longa duração (28 dias). Fragmentos de tecido ovariano não cultivado e cultivados foram processados para histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados mostraram uma redução na taxa de sobrevivência em todos os meios testados (um a 28 dias) quando comparado ao controle fresco. Entretanto, o tratamento com T4/hFSH por sete dias de cultivo resultou em taxa semelhante ao controle. Os meios testados por 28 dias reduziram o percentual de folículos primordiais em todos os períodos de cultivo. Contudo, T4/hFSH no dia um de cultivo manteve-se semelhante ao controle fresco. Nenhum dos meios foi capaz de manter o percentual dos folículos em desenvolvimento. Observou-se que o diâmetro folicular cultivado no meio com T4/hFSH manteve-se semelhante ao controle fresco. As análises ultraestruturais confirmaram a integridade de folículos cultivados por sete dias em meio suplementado com T4/hFSH.  Em conclusão, o meio com T4/hFSH é capaz de manter a sobrevivência, promover a ativação e a integridade ultraestrutural de folículos pré-antrais caprinos, por até sete dias.(AU)

Extrato bruto de inhame nas dietas para tambaqui (Colossoma macropomum)

Foram executados dois ensaios: in vitro e in vivo. No primeiro ensaio, objetivou-se avaliar o crescimento bacteriano in vitro com extrato bruto de inhame (EBI), em diferentes concentrações como potencial prebiótico. Dessa forma, utilizou-se o isolado de Lactobacillus spp., derivado de leite caprino e foi realizada a densidade óptica da suspensão celular, em seguida foram adicionadas diferentes concentrações (0, 2, 4, 6 e 8%), de EBI ao inóculo, incubou-se a 37 C por 48 horas. Após o crescimento, realizou-se diluições seriadas, utilizou-se aliquotas de 0,1 mL das diluições de 10-4 a 10-6, semeadas no meio de cultura MRS ágar pelo método de plaqueamento em superfície, incubadas a 37 C por 48 horas, posteriormente foram contadas as unidades formadoras de colônia. No segundo ensaio, avaliou-se in vivo o efeito das diferentes concentrações (0, 20, 40, 60 e 80 g.kg-¹) do EBI nas dietas para juvenis de tambaqui (Colossoma macropomum). Foram avaliados o desempenho produtivo, as respostas metabólicas, as atividades enzimáticas, produção de lactato no intestino e os índices hematológicos. A dieta foi ofertada duas vezes ao dia (8 e 16h) ad libitum, durante os 60 dias de experimento. Foram utilizados 70 animais em delineamento inteiramente casualizado (DIC), com cinco tratamentos e 14 repetições. Os tratamentos foram denominados como: I 0, I 20, I 40, I 60, I 80, correspondentes aos diferentes niveis de inclusão de EBI nas dietas experimentais. Os animais foram identificados com abraçadeira de nylon com cores diferentes e distribuídos em duas caixas dágua para cada tratamento (sete juvenis/caixa), com peso inicial de 55g±1,54g. Cada peixe correspondia a uma unidade experimental. As 10 caixas de polietileno possuíam capacidade de 500 litros, instaladas em um sistema de recirculação de água com uso de biofiltro e com aeração constante. No desempenho produtivo foram avaliados: Peso médio inicial (PI), Ganho de peso aos 30 dias (GP30), Ganho de peso final (GP60), Ganho de peso relativo (GPR), Comprimento Total (CT), Taxa de Crescimento Específico (TCE), Fator de Condição (FC), Consumo de ração aparente (CRA) e Conversão alimentar aparente (CAA). Os metabólitos analisados foram a Glicemia (GLI), Triglicerídeos (TRI), Proteínas totais (PROT), Colesterol (COLT), atividade da Lisozima (LISO), Glicogênio hepático (GLIH). Foram mensuradas as atividades da Amilase (AMI), Lipase (LIP), Protease alcalina inespecífica (PTAS) e aspartato aminotransferase (AST). Foram coletadas amostras dos intestinos para analisar o Lactato enzimático (LAC). Foram realizadas coletas de amostras sanguíneas para determinação hemoglobina, hematócrito, número de eritrócitos, volume corpuscular médio, hemoglobina corpuscular média, concentração de hemoglobina corpuscular média, trombóticos totais, leucócitos totais e proporções relativas de leucócitos entre os diferentes tratamentos. Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância em nível de 5% de probabilidade e regressão. No ensaio in vitro não foram observadas diferenças significativas (p>0,05) no crescimento bacteriano. No ensaio in vivo os diferentes níveis de inclusão do EBI nas dietas apresentaram efeito significativo (p<0,05), sobre as variáveis de desempenho: GP30, GP60, GPR, CT, TCE, FC. Para as respostas metabólicas verificou-se um efeito significativo (p<0,05), apenas para COLT, LISO e GLIH. Não houve efeito significativo para a AST (p>0,05). O LAC apresentou efeito significativo (p<0,05). Os parâmetros hematológicos não apresentaram efeito significativos (p>0,05). As atividades das enzimas digestivas, somente LIP e PTAS foram significativas (p<0,05). Portanto, pode se inferir que a suplementação do EBI em até 80 g.kg-¹ nas dietas pode ser utilizada e não ocasiona danos a espécie em estudo.

Two tests were performed: in vitro and in vivo. In the first trial, the objective was to evaluate bacterial growth in vitro with crude yam extract (CYE), in different concentrations as a prebiotic potential. Thus, used or isolated from Lactobacillus spp., Derived from goat's milk and an optical density of cell suspension was performed, then different variables (0, 2, 4, 6 and 8%), from CYE were added to the inoculum, incubate at 37 °C for 48 hours. After growth, performed if serial dilutions, use 0.1 mL aliquots of the 10-4 to 10-6 dilutions, sown in the MRS culture medium, according to the surface coating method, incubated at 37 °C for 48 hours later were counted as colony forming units. In the second trial, the effect of different concentrations (0, 20, 40, 60 and 80 g.kg-¹) of CYE in the diets for tambaqui juveniles (Colossoma macropomum) was evaluated in vivo. Productive performance, metabolic responses, enzyme activities, lactate production in the intestine and hematological indexes were evaluated. The diet was offered twice a day (8 am and 4 pm) ad libitum, during the 60 days of the experiment. 70 animals were used in a completely randomized design, with five treatments and 14 repetitions. The treatments were called: I 0, I 20, I 40, I 60, I 80, corresponding to the different levels of inclusion of CYE in the experimental diets. The animals were identified with nylon clamps with different colors and distributed in two water boxes for each treatment (seven juveniles / box), with an initial weight of 55g ± 1.54g. Each fish corresponded to an experimental unit. The 10 polyethylene boxes had a capacity of 500 liters, installed in a water recirculation system using biofilter and with constant aeration. In terms of productive performance, the following were evaluated: Initial average weight (IW), Weight gain at 30 days (WG30), Final weight gain (WG60), Relative weight gain (RWG), Total length (TL), Specific growth rate (SGR), Condition factor (CF), Apparent feed consumption (CRA) and Apparent Feed Conversion (AFC). The metabolites analyzed were Glycemia (GLY), Triglycerides (TRI), Total Proteins (PROT), Cholesterol (CHOL), Lysozyme activity (LYSO), Hepatic glycogen (HGLI). The activities of Amylase (AMY), Lipase (LIP), nonspecific alkaline protease (NAP) and aspartate aminotransferase (AST) were measured. Intestinal samples were collected to analyze enzymatic lactate (LAC). Blood samples were collected to determine hemoglobin, hematocrit, number of erythrocytes, average corpuscular volume, average corpuscular hemoglobin, average corpuscular hemoglobin concentration, total thrombotics, total leukocytes and relative leukocyte proportions between different treatments. The data obtained were subjected to analysis of variance at the level of 5% probability and regression. In the in vitro test, no significant differences (p>0.05) were observed in bacterial growth. In the in vivo test, the different levels of inclusion of CYE in the diets showed a significant effect (p<0.05), on the performance variables: WG30, WG60, RWG, TL, SGR, CF. For metabolic responses, there was a significant effect (p<0.05), only for CHOL, LYSO and HGLI. There was no significant effect for AST (p>0.05). LAC had a significant effect (p<0.05). The hematological parameters had no significant effect (p>0.05). Digestive enzyme activities, only LIP and NAS, were significant (p<0.05). Therefore, it can be inferred that the inclusion of CYE in up to 80 g.kg-¹ in the diets can be used and does not cause damage to the species under study.

CULTIVO IN VITRO DE OÓCITOS MAMÍFEROS: EFEITO DA TEMPERATURA DE TRANSPORTE DE OVÁRIO, DO SISTEMA DE CULTIVO FOLICULAR E DE INIBIDORES DA RETOMADA DA MEIOSE

Os objetivos da presente tese foram: 1) Determinar o efeito da temperatura de transporte (4 vs 33 ºC) sobre a morfologia, crescimento folicular, viabilidade, maturação oocitaria, e produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) de folículos pré-antrais e antrais iniciais caprinos isolados e cultivados por 18 dias (Fase I); 2) Avaliar as taxas de sobrevivência e ativação de folículos primordiais caprinos após 7 dias de cultivo in vitro em um sistema tridimensional na ausência (folículos primordiais isolados inclusos em Alginato - 0,8%) ou na presença de tecido ovariano (Fase II); 3) Avaliar as taxas de sobrevivência, ativação e crescimento folicular após 7 dias de cultivo in vitro de fragmentos ovarianos babuínos (Fase III) inclusos em diferentes matrizes (Alginato - 1% ou polyethyleneglycol-vinyl sulfone (PEG-VS) - 5%); 4) Investigar o efeito de diferentes concentrações de Cilostamida (10 e 20 M) e tempos de exposição (6 e 12 horas) durante a MIV de oócitos bovinos e caprinos (Fase IV). Na Fase I, os ovários caprinos foram transportados individualmente em MEM-HEPES a 4 ou 33 °C. Posteriormente, os folículos foram cultivados in vitro por 18 dias e os complexos cumulus-oócito (CCO) maturados por 32 horas. Na Fase II, os folículos primordiais caprinos inclusos em Alginato (10 folículos/gota), ou envoltos em tecido ovariano (in situ) encapsulado ou não em Alginato, foram cultivados por 7 dias. Na Fase III, os folículos babuínos previamente criopreservados foram cultivados por 10 dias incluso em tecido ovariano (in situ), na presença ou ausência de matrizes extracelulares (PEG-VS vs Alginato) e de FSH. Por fim, na Fase IV, CCOs caprinos e bovinos foram cultivados por 30 horas, iniciando com a adição da Cilostamida (10 ou 20 M) e/ou parede folicular por 6 ou 12 horas durante a pré-maturação in vitro (PMIV) antes da MIV (24 ou 18h). O melhor resultado para produção de oócitos totalmente crescidos e retomada meiótica foi obtido utilizando baixa (4 °C) para folículos pré-antrais e alta (33 °C) para folículos antrais iniciais (Fase I). Folículos primordiais caprinos isolados e encapsulados em Alginato apresentaram maiores percentuais de ativação folicular quando comparado aos demais tratamentos (Fase II). Na Fase III, a adição de FSH ao meio de cultivo no tratamento com matrizes (PEG-VS e Alginato) promoveu uma melhora na sobrevivência dos folículos pré-antrais babuínos inclusos em tecido ovariano após 10 dias cultivo in vitro. Na Fase IV, a combinação da concentração/tempo de exposição à Cilostamida durante a PMIV retardou a progressão meiótica apenas na espécie bovina após 6 e 12 horas de cultivo. Como conclusão, a temperatura de transporte afetou diferencialmente o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais e folículos antrais iniciais caprinos (Fase I); cultivo de folículos primordiais caprinos isolados e inclusos em Alginato permitiu uma melhor taxa de ativação folicular (Fase II). Em babuínos, utilização de matrizes extracelulares na presença de FSH melhorou a sobrevivência folicular após 10 dias de cultivo in vitro (Fase III). Por fim, na Fase IV, a Cilostamida retardou de forma concentração dependente a retomada da meiose somente na espécie bovina.

The objectives of this thesis were: 1) To determine the effect of transport temperature (4 vs 33ºC) on morphology, follicular growth, viability and oocyte maturation, and production of reactive oxygen species (ROS) of preantral and early antral follicles goats for 18 days in vitro culture (Phase I); 2) to evaluate follicular survival and activation rates after 7 days of in vitro culture in a three-dimensional system in the absence (isolated primordial follicles and included in Alginate - 0.8%) or in the presence of ovarian tissue (Phase II); 3) To investigate the survival, activation and follicular growth after 7 days of in vitro culture of ovarian fragments of baboons (Phase III) included in different matrices (Alginate - 1% or poly(ethylene glycol)-vinyl sulfone (PEG) - 5%); 4) Investigate the effect of different concentrations of Cilostamida (10 and 20 M) and exposure times (6 and 12 hours) during IVF of bovine and goat oocytes (Phase IV). In Phase I, goat ovaries were individually transported in MEM-HEPES at 4 or 33 ° C. Subsequently, the follicles were cultured in vitro for 18 days and cumulus-oocyte (CCO) complexes matured for 32 hours. In Phase II, the primordial goat follicles included in Alginate (10 follicles / drop), or wrapped in ovarian tissue (in situ) encapsulated or not in Alginate, were cultured for 7 days. In Phase III, pre-cryopreserved baboon follicles were cultured for 10 days in ovarian tissue (in situ), in the presence or absence of extracellular matrices (PEG-VS vs. Alginate) and FSH. Finally, in the Phase IV, the goat and cattle COCs were cultured for 30 hours, starting with in vitro pre-maturation (IVPM) for 6 or 12 hours before IVM (24 or 18h). The best result for the production of fully-grown oocytes and meiotic resumption was obtained using low (4 ° C) for preantral follicles and high (33 ° C) for initial antral follicles (Phase I). Phase II results showed that caprine primordial follicles isolated and encapsulated in Alginate presented satisfactory rates of survival and higher percentages of follicular activation when compared to the other treatments. In the Phase III, treatments containing medium supplemented with FSH associated and extracellular matrices (Alginate and PEG-VS) promoted an improvement in the survival of baboon preantral follicles included in the ovarian tissue after 10 days in vitro culture. In the Phase IV, the combination of concentration/exposure time to cilostamide during IVPM delayed the meiotic progression only in the bovine species after 6 and 12 hours of culture. In conclusion, the transport temperature differentially affected the in vitro development of preantral follicles and initial antral follicles (Phase I); the in vitro culture of isolated goat primordial follicles enclosed in Alginate allowed a better rate of follicular activation (Phase II); In baboons, the use of extracellular matrices in the presence of FSH improved follicular survival after 10 days of in vitro culture (Phase III). Finally, in the Phase IV, the cilostamide delayed in a concentration/dependent manner the meiotic resumption in bovine species only.

Association between insulin-like growth factor-I, thyroxine and follicle stimulating hormone on the survival and in vitro development of caprine preantral follicles / Associação entre fator de crescimento semelhante à insulina-I, tiroxina ehormônio folículo estimulante sobre a sobrevivência e o desenvolvimentoin vitro de folículos pré-antrais caprinos

O objetivo deste estudo foi investigar a influência da interação entre o Hormônio Folículo Estimulante obtido da pituitária Humana (hFSH; 10 ng/mL), Fator de Crescimento Semelhante a Insulina Tipo 1 (IGF-I; 100 ng/mL) e Tiroxina (T4 ; 10, 20 ng/mL) na sobrevivência, ativação e crescimento de folículos pré-antrais cultivados in vitro. Fragmentos do córtex ovariano coletados a partir de 17 cabras adultas não gestantes foram submetidos a diferentes tratamentos que incluíam meio α-MEM+, IGF-I, hFSH, T4 e em seguida foram processados para histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados demonstraram uma redução no percentual de folículos normais, após um e sete dias de cultivo nos meios α-MEM+ (controle cultivado), T4 (10)/IGF-I, T4 (20)/IGF-I/hFSH e nos meios α-MEM+, IGF-I/hFSH, T4 (20)/IGF-I/hFSH, T4 (20)/IGF-I/hFSH, quando comparados ao controle não cultivado. Entretanto, o meio contendo T4 (20)/hFSH apresentou taxa de sobrevivência folicular superior aos demais tratamentos, quando cultivado por sete dias. Observou-se, ainda, que o diâmetro folicular quando cultivado neste meio não se alterou, quando comparado ao controle (não cultivado). As análises ultraestruturais confirmaram a integridade de folículos cultivados em meio contendo T4 (20)/hFSH. Em conclusão, o meio com T4 (20)/hFSH apresentou os melhores resultados, quando se avaliou sobrevivência, crescimento e aspectos ultraestruturais de folículos pré-antrais de caprinos cultivados in vitro.(AU)

The aim of this study was to investigate the influence of the interaction between follicle stimulating hormone obtained from Human Pituitary (hFSH; 10 ng/mL), Insulin-like Growth Factor Type 1 (IGF-I; 100 ng/mL) and thyroxine (T4 ; 10, 20 ng/mL) on survival, activation and growth of preantral follicles (PAF) cultured in vitro. Fragments of ovarian cortex collected from 17 nonpregnant adult goats underwent different treatments that included α-MEM+ medium, IGF-I, hFSH, T4 and were processed for classic histology and transmission electron microscopy. The results showed a reduction in the percentage of normal follicles, after one and seven days of culture in media α-MEM+ (cultured control), T4 (10)/IGF-I, T4 (20)/IGF-I/hFSH and in media α-MEM+, IGF-I/hFSH, T4 (20)/IGF-I/hFSH, T4 (20)/IGF-I/hFSH, when compared to the non-cultured control. However, the medium containing T4 (20)/hFSH showed a follicular survival rate higher than the other treatments, when cultured for seven days. It was also observed that the follicular diameter did not change when cultured in this medium, when compared to the control (non-cultured). The ultrastructural analysis confirmed the integrity of follicles cultured in a medium containing T4 (20)/hFSH. In conclusion, the medium containing T4 (20)/hFSH showed the best results, when evaluating the survival, growth and ultrastructural aspects of caprine preantral follicles cultured in vitro.(AU)

Association between insulin-like growth factor-I, thyroxine and follicle stimulating hormone on the survival and in vitro development of caprine preantral follicles / Associação entre fator de crescimento semelhante à insulina-I, tiroxina ehormônio folículo estimulante sobre a sobrevivência e o desenvolvimentoin vitro de folículos pré-antrais caprinos

O objetivo deste estudo foi investigar a influência da interação entre o Hormônio Folículo Estimulante obtido da pituitária Humana (hFSH; 10 ng/mL), Fator de Crescimento Semelhante a Insulina Tipo 1 (IGF-I; 100 ng/mL) e Tiroxina (T4 ; 10, 20 ng/mL) na sobrevivência, ativação e crescimento de folículos pré-antrais cultivados in vitro. Fragmentos do córtex ovariano coletados a partir de 17 cabras adultas não gestantes foram submetidos a diferentes tratamentos que incluíam meio α-MEM+, IGF-I, hFSH, T4 e em seguida foram processados para histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados demonstraram uma redução no percentual de folículos normais, após um e sete dias de cultivo nos meios α-MEM+ (controle cultivado), T4 (10)/IGF-I, T4 (20)/IGF-I/hFSH e nos meios α-MEM+, IGF-I/hFSH, T4 (20)/IGF-I/hFSH, T4 (20)/IGF-I/hFSH, quando comparados ao controle não cultivado. Entretanto, o meio contendo T4 (20)/hFSH apresentou taxa de sobrevivência folicular superior aos demais tratamentos, quando cultivado por sete dias. Observou-se, ainda, que o diâmetro folicular quando cultivado neste meio não se alterou, quando comparado ao controle (não cultivado). As análises ultraestruturais confirmaram a integridade de folículos cultivados em meio contendo T4 (20)/hFSH. Em conclusão, o meio com T4 (20)/hFSH apresentou os melhores resultados, quando se avaliou sobrevivência, crescimento e aspectos ultraestruturais de folículos pré-antrais de caprinos cultivados in vitro.

The aim of this study was to investigate the influence of the interaction between follicle stimulating hormone obtained from Human Pituitary (hFSH; 10 ng/mL), Insulin-like Growth Factor Type 1 (IGF-I; 100 ng/mL) and thyroxine (T4 ; 10, 20 ng/mL) on survival, activation and growth of preantral follicles (PAF) cultured in vitro. Fragments of ovarian cortex collected from 17 nonpregnant adult goats underwent different treatments that included α-MEM+ medium, IGF-I, hFSH, T4 and were processed for classic histology and transmission electron microscopy. The results showed a reduction in the percentage of normal follicles, after one and seven days of culture in media α-MEM+ (cultured control), T4 (10)/IGF-I, T4 (20)/IGF-I/hFSH and in media α-MEM+, IGF-I/hFSH, T4 (20)/IGF-I/hFSH, T4 (20)/IGF-I/hFSH, when compared to the non-cultured control. However, the medium containing T4 (20)/hFSH showed a follicular survival rate higher than the other treatments, when cultured for seven days. It was also observed that the follicular diameter did not change when cultured in this medium, when compared to the control (non-cultured). The ultrastructural analysis confirmed the integrity of follicles cultured in a medium containing T4 (20)/hFSH. In conclusion, the medium containing T4 (20)/hFSH showed the best results, when evaluating the survival, growth and ultrastructural aspects of caprine preantral follicles cultured in vitro.

DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO DE Mycoplasmaagalactiae, CEPA AUTÓCTONE, EM CAPRINOS NO ESTADO DO RIO DE JANEIRO

A agalaxia contagiosa é uma doença que causa mastite, levando a perdas econômicas por reduzir ou interromper a produção de leite, além de causar ceratoconjuntivite, artrite e pneumonia. Este estudo teve como objetivo determinar, pelo ELISA indireto, a ocorrência de cabras reativas ao Mycoplasma agalactiae em rebanhos do Estado do Rio de Janeiro (RJ), Brasil. Para otimizar a técnica, o isolado de M. agalactiae de cabra nativa foi multiplicado por cultura, seguido da concentração de proteínas pelo método de Lowry. As microplacas foram sensibilizadas usando 2 µg / mL de antígeno. O conjugado de peroxidase anti-cabra foi utilizado na diluição 1: 10.000 e os soros controles e testes na diluição 1: 300. Os soros de cabras naturalmente infectadas foram utilizados como controle positivo e soros de cabras recém-nascidas como controle negativo. O ponto de corte foi calculado multiplicando 3 vezes a densidade óptica (DO) dos soros de controle negativo. Amostras de sangue de 305 cabras de duas fazendas em Nova Friburgo [n (A) = 29; n (B) = 8] e uma fazenda em Niterói [n (C) = 130], Sapucaia [n (D) = 63], Piraí [n (E) = 46], Cachoeiras de Macacu [n (F) = 20] e Rio de Janeiro [n (G) = 9] foram testados por ELISA. Das 305 cabras testadas, 45,6% (139/305) foram reativas ao ELISA. As frequências encontradas foram: 62,5% (5/8) na fazenda B; 39,2% (51/130) em C; 65,0% (41/63) em D; 80,4% (37/46) em E; 25,0% (5/20) em F, todos os animais leiteiros, exceto a fazenda F. Nas fazendas A, com aptidão para leite, e G, com aptidão para carne, não houve reatividade no ELISA. Espera-se que o uso da cepa autóctone no ELISA produza resultados mais confiáveis. Os kits comerciais ELISA não foram utilizados devido à sua ausência neste país. As altas soroprevalências encontradas em cabras leiteiras sugerem sua exposição a M.agalactiae, portanto medidas sanitárias devem ser tomadas para evitar a disseminação desse patógeno.

Contagious agalactia is a disease that causes mastitis, leading to economic losses by reducing or stopping milk production, besides it can cause keratoconjunctivitis, arthritis and pneumonia. This study aimed to determine, by indirect ELISA, the occurrence of Mycoplasma agalactiae reactive goats in herds from the State of Rio de Janeiro (RJ), Brazil. To optimize the technique, the M. agalactiae isolate from native goat was culture-multiplied followed by protein concentration by the Lowry method. The microplates were sensitized using 2µg/mL of antigen. Anti-goat peroxidase conjugate was used at 1: 10.000 dilution and control and tests sera at 1: 300 dilution. Sera from naturally infected goats were used as positive control and sera from newborn goats as negative control. The cut-off point was calculated by multiplying 3 times the optical density (OD) of the negative control sera. Blood samples from 305 goats from two farms in Nova Friburgo [n (A) = 29; n (B) = 8] and one farm in Niterói [n (C) = 130], Sapucaia [n (D) = 63], Piraí [n (E) = 46], Cachoeiras de Macacu [n(F) = 20] and Rio de Janeiro [n(G) = 9] were tested by ELISA. Of 305 goats tested, 45,6% (139/305) were reactive to ELISA. The herd frequencies found were: 62,5% (5/8) in farm B; 39,2% (51/130) in C; 65,0% (41/63) in D; 80,4% (37/46) in E; 25,0% (5/20) in F, all dairy animals except farm F. In farm A, with milk aptitude, and G, with meat aptitude, there was no reactivity in ELISA. The use of the autochthonous strain in ELISA is expected to produce more reliable results. Commercial ELISA kits were not used because of its absence in this country. The high seroprevalences found in dairy herds goats suggest their exposition to M.agalactiae, thus sanitary measures should be taken to prevent the spread of this pathogen.

Bacteriocinogenic Lactococcus lactis subsp. lactis DF04Mi isolated from goat milk: characterization of the bacteriocin

Lactic acid bacteria capable of producing bacteriocins and presenting probiotic potential open innovative technological applications in the dairy industry. In this study, a bacteriocinogenic strain (Lactococcus lactis subsp. lactis DF4Mi) was isolated from goat milk, and studied for its antimicrobial activity. The bacteriocin presented a broad spectrum of activity, was sensitive to proteolytic enzymes, resistant to heat and pH extremes, and not affected by the presence of SDS, Tween 20, Tween 80, EDTA or NaCl. Bacteriocin production was dependent on the components of the culture media, especially nitrogen source and salts. When tested by PCR, the bacteriocin gene presented 100% homology to nisin Z gene. These properties indicate that this L. lactis subsp. lactis DF4Mi can be used for enhancement of dairy foods safety and quality.

Survival, growth, and hormone production in vitro from preantral follicles of crossbred female goats (Saanen × Anglo-Nubian)

The present study aimed to evaluate the survival, growth, antrum formation, oocyte extrusion, and hormone production during in vitro culture of caprine preantral follicles isolated from pure-breed (Saanen) or crossbreed (F1 generation: ½ Saanen + ½ Anglo-Nubian) goats. Secondary follicles (diameter: 150-250 µm) from Saanen or crossbreed (Saanen × Anglo-Nubian) goats were isolated from the ovarian cortex by microdissection and cultured in vitro for 18 days in α-modified minimum essential medium (α-MEM+) supplemented with vascular endothelial growth factor and increasing concentrations of follicle-stimulating hormone. Every six days follicular morphology, growth, antrum formation, and follicular extrusion were evaluated. In addition, on days 2, 6, 12, and 18 of culture the medium samples were collected and stored at -20°C for further measurement of estradiol and progesterone. The follicular survival, antrum formation, and oocyte extrusion were analyzed by the Chi square test. Follicular diameter and hormone assays were compared using the Kruskal-Wallis test. Survival rates, growth, antral follicle formation, and oocyte extrusion of preantral follicles cultured in vitro were similar between the different genetic groups. The production of estradiol and progesterone indicated the maintenance of cell viability throughout the culture. In conclusion, preantral follicles from pure-breed or crossbreed goats can be used with the same efficiency for in vitro culture of isolated caprine preantral follicles.

Survival, growth, and hormone production in vitro from preantral follicles of crossbred female goats (Saanen × Anglo-Nubian)

The present study aimed to evaluate the survival, growth, antrum formation, oocyte extrusion, and hormone production during in vitro culture of caprine preantral follicles isolated from pure-breed (Saanen) or crossbreed (F1 generation: ½ Saanen + ½ Anglo-Nubian) goats. Secondary follicles (diameter: 150-250 µm) from Saanen or crossbreed (Saanen × Anglo-Nubian) goats were isolated from the ovarian cortex by microdissection and cultured in vitro for 18 days in α-modified minimum essential medium (α-MEM+) supplemented with vascular endothelial growth factor and increasing concentrations of follicle-stimulating hormone. Every six days follicular morphology, growth, antrum formation, and follicular extrusion were evaluated. In addition, on days 2, 6, 12, and 18 of culture the medium samples were collected and stored at -20°C for further measurement of estradiol and progesterone. The follicular survival, antrum formation, and oocyte extrusion were analyzed by the Chi square test. Follicular diameter and hormone assays were compared using the Kruskal-Wallis test. Survival rates, growth, antral follicle formation, and oocyte extrusion of preantral follicles cultured in vitro were similar between the different genetic groups. The production of estradiol and progesterone indicated the maintenance of cell viability throughout the culture. In conclusion, preantral follicles from pure-breed or crossbreed goats can be used with the same efficiency for in vitro culture of isolated caprine preantral follicles.(AU)

Tuberculosis in goats and sheep slaughtered in the semiarid of the Paraíba state, Northeast region of Brazil / Tuberculose em caprinos e ovinos abatidos no semiárido da Paraíba, Brasil

The aim of this work was to isolate and characterize microorganisms in hypertrophied lymph nodes or gross lesions suggestive of tuberculosis collected from 12 goats and 28 sheep slaughtered at the public slaughterhouse of Patos municipality, Paraíba State, in the Northeast region of Brazil. The identification of mycobacteria was performed by the PRA method (PCR-Restriction Enzyme Analysis). Histopathological examination of lesions was also performed. Organs affected were liver, lung, mammary gland, bladder and mediastinal, mesenteric, submandibular, parotid, popliteal, precrural, prescapular and superficial inguinal lymph nodes. Histopathological examination showed the presence of granulomas in 8 (20.00%) animals. Of the 12 goats, 1 (8.33%) was positive in the culture of mycobacteria, and by PRA method the isolate was classified as belonging to the M. tuberculosis complex. Two (7.14%) sheep were positive for the presence of environmental mycobacteria. There was isolation of Corynebacterium pseudotuberculosis in 8 (66.66%) goats and 17 (60.71%) sheep, and simultaneous isolation of mycobacteria and C. pseudotuberculosis in 1 (8.33%) goat and 1 (3.57%) sheep. The isolation of mycobacteria of the M. tuberculosis complex in goats in this study raises concerns of public health, as professionals involved in handling these animals and the meat and milk consumers are exposed to the risk [...]

O objetivo do presente trabalho foi isolar e tipificar micro-organismos presentes em linfonodos hipertrofiados ou lesões macroscópicas sugestivas de tuberculose colhidos de 12 caprinos e 28 ovinos abatidos no matadouro público do município de Patos, Paraíba. A identificação de micobactérias foi feita com o método PRA (PCR-Restriction Enzyme Analysis). Também foi realizado o exame histopatológico das lesões. Os órgãos afetados foram fígado, pulmão, glândula mamária, bexiga e linfonodos mediastínicos, mesentéricos, submandibulares, parotídeos, poplíteos, pré-crural, pré-escapular e inguinal superficial. O exame histopatológico apontou a presença de granulomas em 8 (20,00%) animais. Dos 12 caprinos, 1 (8,33%) foi positivo no cultivo de micobactérias, e pelo método PRA o isolado foi classificado como pertencente ao complexo M. tuberculosis. Dois (7,14%) ovinos foram positivos para a presença de micobactérias ambientais. Houve isolamento de Corynebacterium pseudotuberculosis em 8 (66,66%) caprinos e em 17 (60,71%) ovinos, e isolamento simultâneo de micobactérias e C. pseudotuberculosis em 1 (8,33%) caprino e 1 (3,57%) ovino. O isolamento de micobactéria do complexo M. tuberculosis em caprinos no presente trabalho levanta preocupações do ponto de vista de saúde pública, uma vez que profissionais envolvidos na manipulação destes animais, bem como a população consumidora de carne [...]

Tuberculosis in goats and sheep slaughtered in the semiarid of the Paraíba state, Northeast region of Brazil / Tuberculose em caprinos e ovinos abatidos no semiárido da Paraíba, Brasil

The aim of this work was to isolate and characterize microorganisms in hypertrophied lymph nodes or gross lesions suggestive of tuberculosis collected from 12 goats and 28 sheep slaughtered at the public slaughterhouse of Patos municipality, Paraíba State, in the Northeast region of Brazil. The identification of mycobacteria was performed by the PRA method (PCR-Restriction Enzyme Analysis). Histopathological examination of lesions was also performed. Organs affected were liver, lung, mammary gland, bladder and mediastinal, mesenteric, submandibular, parotid, popliteal, precrural, prescapular and superficial inguinal lymph nodes. Histopathological examination showed the presence of granulomas in 8 (20.00%) animals. Of the 12 goats, 1 (8.33%) was positive in the culture of mycobacteria, and by PRA method the isolate was classified as belonging to the M. tuberculosis complex. Two (7.14%) sheep were positive for the presence of environmental mycobacteria. There was isolation of Corynebacterium pseudotuberculosis in 8 (66.66%) goats and 17 (60.71%) sheep, and simultaneous isolation of mycobacteria and C. pseudotuberculosis in 1 (8.33%) goat and 1 (3.57%) sheep. The isolation of mycobacteria of the M. tuberculosis complex in goats in this study raises concerns of public health, as professionals involved in handling these animals and the meat and milk consumers are exposed to the risk [...](AU)

O objetivo do presente trabalho foi isolar e tipificar micro-organismos presentes em linfonodos hipertrofiados ou lesões macroscópicas sugestivas de tuberculose colhidos de 12 caprinos e 28 ovinos abatidos no matadouro público do município de Patos, Paraíba. A identificação de micobactérias foi feita com o método PRA (PCR-Restriction Enzyme Analysis). Também foi realizado o exame histopatológico das lesões. Os órgãos afetados foram fígado, pulmão, glândula mamária, bexiga e linfonodos mediastínicos, mesentéricos, submandibulares, parotídeos, poplíteos, pré-crural, pré-escapular e inguinal superficial. O exame histopatológico apontou a presença de granulomas em 8 (20,00%) animais. Dos 12 caprinos, 1 (8,33%) foi positivo no cultivo de micobactérias, e pelo método PRA o isolado foi classificado como pertencente ao complexo M. tuberculosis. Dois (7,14%) ovinos foram positivos para a presença de micobactérias ambientais. Houve isolamento de Corynebacterium pseudotuberculosis em 8 (66,66%) caprinos e em 17 (60,71%) ovinos, e isolamento simultâneo de micobactérias e C. pseudotuberculosis em 1 (8,33%) caprino e 1 (3,57%) ovino. O isolamento de micobactéria do complexo M. tuberculosis em caprinos no presente trabalho levanta preocupações do ponto de vista de saúde pública, uma vez que profissionais envolvidos na manipulação destes animais, bem como a população consumidora de carne [...](AU)