Resumo
The present paper aims to estimate the impact of the reduction of the generation interval, based on the model of fetal ovarian tissue xenotransplantation associated with in vitro embryo production to estimate the annual genetic gain of weight traits in a bovine herd. Weigh data and genealogy of Brahman animals were used to estimate the annual direct genetic gain for weight at birth, weight at 120 days, at 210 days, and at 550 days of age. The genetic parameters were obtained by animal model, via Bayesian inference, by Markov Chain Monte Carlo (MCMC) methods. For the estimates, different generation intervals were defined as the average value between the supposed maternal generation intervals and the average sire generation interval based on the analyzed data (9.6 years). The shortest generation interval considered was 5.1 years, outlined from the average of 0.66 year (corresponds to 8 fetal months, an assumption defined based on the use of fetal ovarian tissue xenotransplantation associated with in vitro embryo production) and 9.6 years (sire generation interval). The remaining intervals considered were 6.7, 8.7 and 10.2 years. The estimate of annual direct genetic gain for all the evaluated traits was higher when considering the generation interval outlined based on the model of fetal ovarian tissue xenotransplantation associated with in vitro embryo production. The estimates were lower as the generation interval increased. The use of fetal ovarian tissue xenotransplantation associated with in vitro embryo production, may favor the reduction of the generation interval and successively generate a positive impact on the annual direct genetic gain estimates.
O presente estudo teve como objetivo estimar o impacto da redução do intervalo de gerações, com base no modelo de xenotransplante de tecido ovariano fetal associado à produção in vitro de embriões, na estimativa do ganho genético anual direto de características de peso em um rebanho bovino. Dados de pesagens e genealogia de animais da raça Brahman foram utilizados para estimar o ganho genético direto anual para as características peso ao nascimento, peso aos 120 dias, aos 210 dias e aos 550 dias de idade. Os parâmetros genéticos foram obtidos por modelo animal, via inferência Bayesiana, por Métodos de Monte Carlo via Cadeias de Markov. Para as estimativas, foram delineados intervalos de gerações distintos, definidos como a média entre os supostos intervalos de gerações materno e o intervalo de gerações paterno médio do rebanho analisado (9,6 anos). O menor intervalo de gerações considerado foi 5,1 anos, resultante da média entre 0,66 ano (corresponde a 8 meses fetais, suposição definida com base na utilização da biotecnologia xenotransplante de tecido ovariano fetal associada à produção in vitro de embriões) e 9,6 anos. Os demais intervalos considerados foram 6,7, 8,7 e 10,2 anos. A estimativa do ganho genético anual para todas as características avaliadas foi superior quando se considerou o intervalo de gerações delineado com base no modelo de xenotransplante de tecido ovariano fetal associado à produção in vitro de embriões. As estimativas foram menores conforme aumento no intervalo de gerações. O uso da biotecnologia xenotransplante de tecido ovariano fetal, associada à produção in vitro de embriões poderá favorecer a redução do intervalo de gerações e sucessivamente gerar impacto positivo nas estimativas de ganho genético direto anual.
Assuntos
Animais , Bovinos , Biotecnologia , Transplante Heterólogo/veterinária , Transplante de Tecidos/veterinária , Técnicas In Vitro/veterinária , Técnicas de Cultura EmbrionáriaResumo
The present paper aims to estimate the impact of the reduction of the generation interval, based on the model of fetal ovarian tissue xenotransplantation associated with in vitro embryo production to estimate the annual genetic gain of weight traits in a bovine herd. Weigh data and genealogy of Brahman animals were used to estimate the annual direct genetic gain for weight at birth, weight at 120 days, at 210 days, and at 550 days of age. The genetic parameters were obtained by animal model, via Bayesian inference, by Markov Chain Monte Carlo (MCMC) methods. For the estimates, different generation intervals were defined as the average value between the supposed maternal generation intervals and the average sire generation interval based on the analyzed data (9.6 years). The shortest generation interval considered was 5.1 years, outlined from the average of 0.66 year (corresponds to 8 fetal months, an assumption defined based on the use of fetal ovarian tissue xenotransplantation associated with in vitro embryo production) and 9.6 years (sire generation interval). The remaining intervals considered were 6.7, 8.7 and 10.2 years. The estimate of annual direct genetic gain for all the evaluated traits was higher when considering the generation interval outlined based on the model of fetal ovarian tissue xenotransplantation associated with in vitro embryo production. The estimates were lower as the generation interval increased. The use of fetal ovarian tissue xenotransplantation associated with in vitro embryo production, may favor the reduction of the generation interval and successively generate a positive impact on the annual direct genetic gain estimates.(AU)
O presente estudo teve como objetivo estimar o impacto da redução do intervalo de gerações, com base no modelo de xenotransplante de tecido ovariano fetal associado à produção in vitro de embriões, na estimativa do ganho genético anual direto de características de peso em um rebanho bovino. Dados de pesagens e genealogia de animais da raça Brahman foram utilizados para estimar o ganho genético direto anual para as características peso ao nascimento, peso aos 120 dias, aos 210 dias e aos 550 dias de idade. Os parâmetros genéticos foram obtidos por modelo animal, via inferência Bayesiana, por Métodos de Monte Carlo via Cadeias de Markov. Para as estimativas, foram delineados intervalos de gerações distintos, definidos como a média entre os supostos intervalos de gerações materno e o intervalo de gerações paterno médio do rebanho analisado (9,6 anos). O menor intervalo de gerações considerado foi 5,1 anos, resultante da média entre 0,66 ano (corresponde a 8 meses fetais, suposição definida com base na utilização da biotecnologia xenotransplante de tecido ovariano fetal associada à produção in vitro de embriões) e 9,6 anos. Os demais intervalos considerados foram 6,7, 8,7 e 10,2 anos. A estimativa do ganho genético anual para todas as características avaliadas foi superior quando se considerou o intervalo de gerações delineado com base no modelo de xenotransplante de tecido ovariano fetal associado à produção in vitro de embriões. As estimativas foram menores conforme aumento no intervalo de gerações. O uso da biotecnologia xenotransplante de tecido ovariano fetal, associada à produção in vitro de embriões poderá favorecer a redução do intervalo de gerações e sucessivamente gerar impacto positivo nas estimativas de ganho genético direto anual.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Transplante Heterólogo/veterinária , Transplante de Tecidos/veterinária , Técnicas In Vitro/veterinária , Técnicas de Cultura Embrionária , BiotecnologiaResumo
Domestic and wild goats are very susceptible animals to predation, specially when pregnancy occurs. This study aimed to evaluate the use of goat fetal ovarian tissue for vitrification followed by xenotransplantation and fresh xenotransplantation in two immunosuppressed mice models (C57BL/6 SCID and Balb-C NUDE). Goat fetus ovaries were collected in slaughterhouses, divided into small cortical pieces and were destined for fresh xenotransplantation (FX) and cryopreservation followed by xenotransplantation (CX). Five recipients from each lineage were used for FX and 10 animals from each lineage for CX. The mice were euthanized after 65 postoperative days, and the transplants were collected for microscopic assessment. The blood plasma was collected for estradiol measurement. Independently of mice strain, all recipients presented complete estrus cycle in FX and 80% after CX groups. Follicles were observed at all development stages without morphological changes. The volume density and total vessel surface observed in the transplants were different (p <0.01) between groups. The estradiol levels in the recipients did not differ (p <0.05) among the treatments. Thus, it is possible to activate the preantral follicles in the ovaries of fetuses by optimizing germplasm utilization and conservation of domestic and endangered wild goats that are in predatory situations, undesirable drowning or accidental death, since provided conditions for xenotransplantation are performed.
Assuntos
Masculino , Feminino , Animais , Camundongos , Criopreservação , Fase Folicular , Ruminantes/anatomia & histologia , Ruminantes/fisiologia , Vitrificação , Transplante HeterólogoResumo
Domestic and wild goats are very susceptible animals to predation, specially when pregnancy occurs. This study aimed to evaluate the use of goat fetal ovarian tissue for vitrification followed by xenotransplantation and fresh xenotransplantation in two immunosuppressed mice models (C57BL/6 SCID and Balb-C NUDE). Goat fetus ovaries were collected in slaughterhouses, divided into small cortical pieces and were destined for fresh xenotransplantation (FX) and cryopreservation followed by xenotransplantation (CX). Five recipients from each lineage were used for FX and 10 animals from each lineage for CX. The mice were euthanized after 65 postoperative days, and the transplants were collected for microscopic assessment. The blood plasma was collected for estradiol measurement. Independently of mice strain, all recipients presented complete estrus cycle in FX and 80% after CX groups. Follicles were observed at all development stages without morphological changes. The volume density and total vessel surface observed in the transplants were different (p <0.01) between groups. The estradiol levels in the recipients did not differ (p <0.05) among the treatments. Thus, it is possible to activate the preantral follicles in the ovaries of fetuses by optimizing germplasm utilization and conservation of domestic and endangered wild goats that are in predatory situations, undesirable drowning or accidental death, since provided conditions for xenotransplantation are performed.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Feminino , Camundongos , Ruminantes/anatomia & histologia , Ruminantes/fisiologia , Vitrificação , Fase Folicular , Criopreservação , Transplante HeterólogoResumo
A redução da biodiversidade tem levado a uma preocupação emergencial frente a conservação do material biológico de animais geneticamente valiosos. Para tanto, a implantação de bancos de germoplasma, como embriões, gametas e tecido gonadal e somáticos, tem sido uma alternativa para auxiliar na manutenção da biodiversidade. No tocante ao material genético de fêmeas, a criopreservação de folículos pré-antrais isolados ou inclusos no tecido ovariano associada ao uso de tecnologias de reprodução assistida, como cultivo, fertilização in vitro e produção de embriões in vitro, poderá auxiliar na conservação da fertilidade de animais domésticos de interesse econômico com dificuldades reprodutivas ou animais ameaçados de extinção. Além disso, a criopreservação de tecido ovariano seguida de transplante pode ser uma alternativa promissora, uma vez que permite a restauração da função ovariana e reprodutiva. Estudos realizados em humanos relataram o nascimento de 130 indivíduos após o transplante de tecido ovariano previamente criopreservado. Apesar desse sucesso, a criopreservação de ovário ainda é considerada uma técnica experimental. Especialmente em caprinos e ovinos, a grande maioria dos estudos tem usado essas espécies como modelo experimental para a espécie humana. Nessas espécies, o sucesso da criopreservação de folículos ovarianos já foi evidenciado, o que nos dá esperança para o uso dessa tecnologia, vislumbrando, não somente a conservação do material genético, mas a obtenção de embriões e nascimento de crias mesmo após a morte de um animal geneticamente valioso. Assim, todos os esforços atuais estão voltados para a avaliação adequada da qualidade de protocolos de criopreservação que assegurem que esses recursos genéticos permaneçam como parte funcional dos sistemas de produção e conservação das espécies.(AU)
Reducing biodiversity has led to an emergency concern over the conservation of biological material from genetically valuable animals. Therefore, the establishment of gene banks, such as embryos, gametes and somatic and ovarian tissue has been an alternative to assist in maintaining biodiversity. Concerning the genetic material of females, the cryopreservation of preantral follicles isolated or included in the ovarian tissue associated with the use of assisted reproduction technologies, such as culture, in vitro fertilization and in vitro embryo production, may help to preserve the fertility of domestic animals of economic interest with reproductive difficulties or animals threatened with extinction. In addition, cryopreservation of ovarian tissue followed by transplantation may be a promising alternative, since it allows the restoration of ovarian and reproductive function. Studies in humans have reported the birth of 130 individuals after previously cryopreserved ovarian tissue transplantation. Despite this success, ovary cryopreservation is still considered an experimental technique. Especially in goats and sheep, the vast majority of studies have used these species as an experimental model for the human species. In these species, the success of cryopreservation of ovarian follicles has already been shown, which gives us hope for the use of this technology, noting not only the conservation of the genetic material, but the obtaining of embryos and the birth of youngsters even after the death of a genetically valuable animal. Thus, all current efforts are focused on the proper evaluation of the quality of cryopreservation protocols that ensure that these genetic resources remain as a functional part of the systems of production and conservation of the species.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Criopreservação/veterinária , Fertilidade , Ovinos/embriologia , Ovinos/genética , Cabras/embriologia , Cabras/genética , Folículo OvarianoResumo
A redução da biodiversidade tem levado a uma preocupação emergencial frente a conservação do material biológico de animais geneticamente valiosos. Para tanto, a implantação de bancos de germoplasma, como embriões, gametas e tecido gonadal e somáticos, tem sido uma alternativa para auxiliar na manutenção da biodiversidade. No tocante ao material genético de fêmeas, a criopreservação de folículos pré-antrais isolados ou inclusos no tecido ovariano associada ao uso de tecnologias de reprodução assistida, como cultivo, fertilização in vitro e produção de embriões in vitro, poderá auxiliar na conservação da fertilidade de animais domésticos de interesse econômico com dificuldades reprodutivas ou animais ameaçados de extinção. Além disso, a criopreservação de tecido ovariano seguida de transplante pode ser uma alternativa promissora, uma vez que permite a restauração da função ovariana e reprodutiva. Estudos realizados em humanos relataram o nascimento de 130 indivíduos após o transplante de tecido ovariano previamente criopreservado. Apesar desse sucesso, a criopreservação de ovário ainda é considerada uma técnica experimental. Especialmente em caprinos e ovinos, a grande maioria dos estudos tem usado essas espécies como modelo experimental para a espécie humana. Nessas espécies, o sucesso da criopreservação de folículos ovarianos já foi evidenciado, o que nos dá esperança para o uso dessa tecnologia, vislumbrando, não somente a conservação do material genético, mas a obtenção de embriões e nascimento de crias mesmo após a morte de um animal geneticamente valioso. Assim, todos os esforços atuais estão voltados para a avaliação adequada da qualidade de protocolos de criopreservação que assegurem que esses recursos genéticos permaneçam como parte funcional dos sistemas de produção e conservação das espécies.
Reducing biodiversity has led to an emergency concern over the conservation of biological material from genetically valuable animals. Therefore, the establishment of gene banks, such as embryos, gametes and somatic and ovarian tissue has been an alternative to assist in maintaining biodiversity. Concerning the genetic material of females, the cryopreservation of preantral follicles isolated or included in the ovarian tissue associated with the use of assisted reproduction technologies, such as culture, in vitro fertilization and in vitro embryo production, may help to preserve the fertility of domestic animals of economic interest with reproductive difficulties or animals threatened with extinction. In addition, cryopreservation of ovarian tissue followed by transplantation may be a promising alternative, since it allows the restoration of ovarian and reproductive function. Studies in humans have reported the birth of 130 individuals after previously cryopreserved ovarian tissue transplantation. Despite this success, ovary cryopreservation is still considered an experimental technique. Especially in goats and sheep, the vast majority of studies have used these species as an experimental model for the human species. In these species, the success of cryopreservation of ovarian follicles has already been shown, which gives us hope for the use of this technology, noting not only the conservation of the genetic material, but the obtaining of embryos and the birth of youngsters even after the death of a genetically valuable animal. Thus, all current efforts are focused on the proper evaluation of the quality of cryopreservation protocols that ensure that these genetic resources remain as a functional part of the systems of production and conservation of the species.
Assuntos
Feminino , Animais , Cabras/embriologia , Cabras/genética , Criopreservação/veterinária , Fertilidade , Ovinos/embriologia , Ovinos/genética , Folículo OvarianoResumo
Different bioengineering strategies can be presently adopted and have been shown to have great potential in the treatment of female infertility and ovarian dysfunction deriving from chemotherapy, congenital malformations, massive adhesions as well as aging and lifestyle. One option is transplantation of fresh or cryopreserved organs/fragments into the patient. A further possibility uses tissue engineering approaches that involve a combination of cells, biomaterials and factors that stimulate local ability to regenerate/ repair the reproductive organ. Organ transplant has shown promising results in large animal models. However, the source of the organ needs to be identified and the immunogenic effects of allografts remain still to be solved before the technology may enter the clinical practice. Decellularization/ repopulation of ovary with autologous cells or follicles could represent an interesting, still very experimental alternative. Here we summarize the recent advancements in the bioengineering strategies applied to the ovary, we present the principles for these systems and discuss the advantages of these emerging opportunities to preserve or improve female fertility.
Assuntos
Feminino , Animais , Bioengenharia/tendências , Criopreservação/veterinária , Fertilidade , OvárioResumo
Different bioengineering strategies can be presently adopted and have been shown to have great potential in the treatment of female infertility and ovarian dysfunction deriving from chemotherapy, congenital malformations, massive adhesions as well as aging and lifestyle. One option is transplantation of fresh or cryopreserved organs/fragments into the patient. A further possibility uses tissue engineering approaches that involve a combination of cells, biomaterials and factors that stimulate local ability to regenerate/ repair the reproductive organ. Organ transplant has shown promising results in large animal models. However, the source of the organ needs to be identified and the immunogenic effects of allografts remain still to be solved before the technology may enter the clinical practice. Decellularization/ repopulation of ovary with autologous cells or follicles could represent an interesting, still very experimental alternative. Here we summarize the recent advancements in the bioengineering strategies applied to the ovary, we present the principles for these systems and discuss the advantages of these emerging opportunities to preserve or improve female fertility.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Bioengenharia/tendências , Ovário , Fertilidade , Criopreservação/veterináriaResumo
This study aimed to evaluate the characteristics of two different murine models of hormone-treated renal-encapsulated bovine ovarian tissue xenotransplantation. Two immunodeficient mouse models (BALB/c Nude and C57BL6 SCID) were xenografted with ovarian pieces from heifers and each group was subjected to two hormonal treatments of eCG or a combination of FSH+LH. Donor ovaries and recipients were evaluated by histology and infrared thermography at different times. At the time of xenograft collection, animals were evaluated for alterations in hepatorenal biochemistry. The statistical test used in the study was ANOVA, followed by Tukey's test. Among the strains, 80% of C57BL6 SCID and 77% of BALB/c Nude mice showed development and vascularization of the transplanted tissue, which acquired cyclicity at 19 and 9 days post-transplant, respectively. Hemorrhagic follicles in xenografts induced with FSH+LH were found in the C57BL6 SCID strain. Infrared thermography was insufficient to distinguish the tissue donor recipient. In conclusion, the C57BL6 SCID strain appears to be the best host for ovarian xenografts, since the transplants in these mice were viable and showed robust follicular development. This work will aid future choices of immunodeficient strains for xenografting procedures.(AU)
Este estudo teve como objetivo avaliar as características dos dois diferentes modelos de murinas tratadas hormonalmente após xenotransplante de tecido ovariano bovino sob a cápsula renal. Dois modelos de camundongos imunodeficientes (BALB/c NUDE e C57BL6 SCID) receberam fragmentos de ovário de novilhas e cada grupo foi submetido a dois tratamentos hormonais de eCG ou uma combinação de FSH+LH. Ovários doadores e receptores foram avaliados por histologia e termografia infravermelha em diferentes momentos. No momento da retirada do xenotranplante, os animais foram avaliados quanto a alterações na bioquímica hepatorrenal. O teste estatístico utilizado no estudo foi ANOVA, seguido do teste de Tukey. Entre as linhagens, 80% de C57BL6 SCID e 77% das BALB/c NUDE mostraram desenvolvimento e vascularização do tecido transplantado, que adquiriu a ciclicidade 19 e 9 dias após o transplante, respectivamente. Corpos hemorrágicos foram encontrados após o xenotransplante induzidos com FSH+LH na linhagem C57BL6 SCID. A termografia infravermelha foi insuficiente para distinguir o tecido doador do receptor. Em conclusão, a linhagem C57BL6 SCID demonstrou ser o melhor hospedeiro para xenotransplante de ovário, uma vez que os transplantes nestes camundongos foram viáveis e mostraram desenvolvimento folicular. Este trabalho ajudará futuras escolhas de linhagens imunodeficientes para procedimentos de xenotranplante.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Bovinos , Camundongos , Ovário/transplante , Transplante Heterólogo/veterinária , Termografia/veterinária , Folículo Ovariano/transplante , Camundongos Endogâmicos BALB C , Modelos AnimaisResumo
This study aimed to evaluate the characteristics of two different murine models of hormone-treated renal-encapsulated bovine ovarian tissue xenotransplantation. Two immunodeficient mouse models (BALB/c Nude and C57BL6 SCID) were xenografted with ovarian pieces from heifers and each group was subjected to two hormonal treatments of eCG or a combination of FSH+LH. Donor ovaries and recipients were evaluated by histology and infrared thermography at different times. At the time of xenograft collection, animals were evaluated for alterations in hepatorenal biochemistry. The statistical test used in the study was ANOVA, followed by Tukeys test. Among the strains, 80% of C57BL6 SCID and 77% of BALB/c Nude mice showed development and vascularization of the transplanted tissue, which acquired cyclicity at 19 and 9 days post-transplant, respectively. Hemorrhagic follicles in xenografts induced with FSH+LH were found in the C57BL6 SCID strain. Infrared thermography was insufficient to distinguish the tissue donor recipient. In conclusion, the C57BL6 SCID strain appears to be the best host for ovarian xenografts, since the transplants in these mice were viable and showed robust follicular development. This work will aid future choices of immunodeficient strains for xenografting procedures.(AU)
Este estudo teve como objetivo avaliar as características dos dois diferentes modelos de murinas tratadas hormonalmente após xenotransplante de tecido ovariano bovino sob a cápsula renal. Dois modelos de camundongos imunodeficientes (BALB/c NUDE e C57BL6 SCID) receberam fragmentos de ovário de novilhas e cada grupo foi submetido a dois tratamentos hormonais de eCG ou uma combinação de FSH+LH. Ovários doadores e receptores foram avaliados por histologia e termografia infravermelha em diferentes momentos. No momento da retirada do xenotranplante, os animais foram avaliados quanto a alterações na bioquímica hepatorrenal. O teste estatístico utilizado no estudo foi ANOVA, seguido do teste de Tukey. Entre as linhagens, 80% de C57BL6 SCID e 77% das BALB/c NUDE mostraram desenvolvimento e vascularização do tecido transplantado, que adquiriu a ciclicidade 19 e 9 dias após o transplante, respectivamente. Corpos hemorrágicos foram encontrados após o xenotransplante induzidos com FSH+LH na linhagem C57BL6 SCID. A termografia infravermelha foi insuficiente para distinguir o tecido doador do receptor. Em conclusão, a linhagem C57BL6 SCID demonstrou ser o melhor hospedeiro para xenotransplante de ovário, uma vez que os transplantes nestes camundongos foram viáveis e mostraram desenvolvimento folicular. Este trabalho ajudará futuras escolhas de linhagens imunodeficientes para procedimentos de xenotranplante.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Camundongos , Transplante Heterólogo/veterinária , Ovário/anatomia & histologia , Ovário/transplante , Biomarcadores/análise , Termografia/métodos , Modelos AnimaisResumo
The aim of this study was to compare two receptor sites in ovarian autologous transplantation in mice. Twelve Balb-c mice were randomly divided into three groups of four animals each: G1 - non-transplanted animals, G2 - animals which received the ovarian fragment in the perimetrium, G3 - animals which had the abdominal subcutaneous tissue as a receptor site. For transplantation, mice were subjected to bilateral salpingectomia. The left ovary was submitted for histological processing. The right ovarian cortex was fragmented and reimplanted in the specified places according to the groups. Transplants were recovered in 3/4 of the mice in each treatment group. In vaginal washes, the return of the ovarian activity in half of the females of G3 and 3/4 females of G2 was observed. It was detected the presence of corpora lutea in 1/4 of G3 transplants and half in G2. In follicular population all stages of development were observed. Comparing the receptor sites, it was observed a higher percentage of return to cyclicity, as well as of follicles, in animals which had the perimetrium as the site of transplantation. In the subcutaneous, there was a lower follicular growth and lower quantity of corpus luteum. Thus, ovarian autologous transplantation allocated in the subcutaneous tissue and perimetrium allowed both tissue maintenance and follicular development; however, the site of choice will depend on the final goal one aims with the technique
Objetivou-se comparar dois sítios receptores no transplante autólogo ovariano em camundongas. Doze camundongas BALB/c foram divididas aleatoriamente em três grupos experimentais com quatro animais em cada. O G1 - animais não submetidos ao transplante, G2 - animais que receberam o fragmento ovariano no perimétrio, G3 - animais que tiveram o tecido subcutâneo abdominal como sítio receptor. Para o transplante, as fêmeas foram submetidas à ovariossalpingectomia bilateral. O ovário esquerdo foi encaminhado para processamento histológico. O córtex do ovário direito foi fragmentado e reimplantado nos locais especificados de acordo com os grupos. Os transplantes foram recuperados em 3/4 das camundongas em cada grupo tratado. No lavado vaginal, observou-se em metade das fêmeas do G3 e em 3/4 das fêmeas do G2 retorno da ciclicidade. Observou-se presença de corpos lúteos em 1/4 dos transplantes do G3 e metade nos do G2. Na população folicular, foram observados todos os estádios de desenvolvimento. Comparando os sítios receptores observou-se maior porcentagem de retorno à ciclicidade, bem como de folículos, nos animais que tiveram o perimétrio como local do transplante. Já no subcutâneo houve menor crescimento folicular e menor quantidade de corpos lúteos. Dessa forma, conclui-se que o transplante autólogo ovariano alocado no tecido subcutâneo e no perimétrio permitiu tanto a manutenção tecidual quanto o desenvolvimento folicular, porém, o sítio de escolha vai depender do objetivo final que se almeja com a técnica
Assuntos
Feminino , Animais , Camundongos , Membrana Serosa/transplante , Ovário/transplante , Tela Subcutânea/transplante , Ovariectomia/veterinária , Salpingectomia/veterináriaResumo
The aim of this study was to compare two receptor sites in ovarian autologous transplantation in mice. Twelve Balb-c mice were randomly divided into three groups of four animals each: G1 - non-transplanted animals, G2 - animals which received the ovarian fragment in the perimetrium, G3 - animals which had the abdominal subcutaneous tissue as a receptor site. For transplantation, mice were subjected to bilateral salpingectomia. The left ovary was submitted for histological processing. The right ovarian cortex was fragmented and reimplanted in the specified places according to the groups. Transplants were recovered in 3/4 of the mice in each treatment group. In vaginal washes, the return of the ovarian activity in half of the females of G3 and 3/4 females of G2 was observed. It was detected the presence of corpora lutea in 1/4 of G3 transplants and half in G2. In follicular population all stages of development were observed. Comparing the receptor sites, it was observed a higher percentage of return to cyclicity, as well as of follicles, in animals which had the perimetrium as the site of transplantation. In the subcutaneous, there was a lower follicular growth and lower quantity of corpus luteum. Thus, ovarian autologous transplantation allocated in the subcutaneous tissue and perimetrium allowed both tissue maintenance and follicular development; however, the site of choice will depend on the final goal one aims with the technique(AU)
Objetivou-se comparar dois sítios receptores no transplante autólogo ovariano em camundongas. Doze camundongas BALB/c foram divididas aleatoriamente em três grupos experimentais com quatro animais em cada. O G1 - animais não submetidos ao transplante, G2 - animais que receberam o fragmento ovariano no perimétrio, G3 - animais que tiveram o tecido subcutâneo abdominal como sítio receptor. Para o transplante, as fêmeas foram submetidas à ovariossalpingectomia bilateral. O ovário esquerdo foi encaminhado para processamento histológico. O córtex do ovário direito foi fragmentado e reimplantado nos locais especificados de acordo com os grupos. Os transplantes foram recuperados em 3/4 das camundongas em cada grupo tratado. No lavado vaginal, observou-se em metade das fêmeas do G3 e em 3/4 das fêmeas do G2 retorno da ciclicidade. Observou-se presença de corpos lúteos em 1/4 dos transplantes do G3 e metade nos do G2. Na população folicular, foram observados todos os estádios de desenvolvimento. Comparando os sítios receptores observou-se maior porcentagem de retorno à ciclicidade, bem como de folículos, nos animais que tiveram o perimétrio como local do transplante. Já no subcutâneo houve menor crescimento folicular e menor quantidade de corpos lúteos. Dessa forma, conclui-se que o transplante autólogo ovariano alocado no tecido subcutâneo e no perimétrio permitiu tanto a manutenção tecidual quanto o desenvolvimento folicular, porém, o sítio de escolha vai depender do objetivo final que se almeja com a técnica(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Camundongos , Ovário/transplante , Tela Subcutânea/transplante , Membrana Serosa/transplante , Salpingectomia/veterinária , Ovariectomia/veterináriaResumo
A vitrificação de folículos secundários isolados pode ser uma opção eficiente para a preservação da fertilidade de mulheres tratadas e curadas de certos tipos de câncer que oferecem o risco de reintrodução de células malignas após o transplante de tecido ovariano. O objetivo dessa dissertação foi avaliar a morfologia, viabilidade e desenvolvimento folicular (crescimento e formação de antro), bem como investigar as proteínas relacionadas com a função esteroidogênica (aromatase) e com o remodelamento da membrana basal [metaloproteinases 2 (MMP-2) e 9 (MMP-9)] em folículos secundários após vitrificação e cultivo in vitro (CIV). Para isso, o córtex ovariano foi fragmentado e folículos secundários foram mecanicamente isolados. Imediatamente após o isolamento, parte dos folículos frescos foram fixados em paraformaldeído a 4% e destinados à imunomarcação para a aromatase e às MMPs-2 e 9. Os demais folículos foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos: folículos secundários frescos (FSF) e folículos secundários vitrificados (VSF), ambos seguido do CIV por 6 ou 12 dias. Ao final do D6 e D12 de cultivo os FSF e VSF foram submetidos às análises de morfologia, viabilidade (azul de trypan), formação de antro, diâmetro folicular e oocitário. Além disso, a aromatase e as metaloproteinases também foram investigadas nos dois grupos de folículos (FSF e VSF). Nossos resultados mostraram que a vitrificação reduziu significativamente o percentual de folículos intactos após CIV, comparado aos FSF. O diâmetro folicular e oocitário dos VSF foi inferior (P < 0,05) ao dos FSF em ambos os dias de CIV. Os VSF apresentaram redução da viabilidade entre os dias 6 e 12 de cultivo, no entanto não foram observadas diferenças significativas em comparação aos FSF em ambos os dias. A formação de antro nos VSF foi inferior (P < 0,05) à dos FSF, no entanto, foi observado um aumento desse percentual de 6 para 12 dias em ambos os grupos de folículos. Além disso, os resultados mostraram que nos dias 6 e 12 a imunomarcação para a aromatase nas células da granulosa (GC) dos FSF foi forte e moderada, respectivamente, enquanto que nos VSF foi, respectivamente, moderada e forte. Quanto às MMPs, foi observada marcação moderada para as MMP-2 e MMP-9 nas GC dos FSF e VSF em ambos os dias de cultivo, exceto nos FSF no D6, que apresentaram marcação forte para MMP-9. Em conclusão, folículos secundários vitrificados são capazes de crescer e se desenvolver durante 12 dias de cultivo in vitro. Os folículos também mostraram evidências da sua capacidade esteroidogênica e de remodelamento da membrana basal, as quais são importantes para o desenvolvimento folicular.
The vitrification of secondary follicles can be an efficient option for preserving the fertility of women treated and cured of certain types of cancer that offer the risk of reintroduction of malignant cells after the transplantation of ovarian tissue. The objective of this dissertation was to evaluate the morphology, viability, and follicular development (growth and formation of antrum), as well as to investigate how proteins related to the steroidogenic function (aromatase) and the remodeling of the basement membrane [metalloproteinases 2 (MMP-2) and 9 (MMP-9)] in secondary follicles after vitrification and in vitro culture (IVC). For this, the ovarian cortex was fragmented and secondary follicles were mechanically isolated. Immediately after isolation, part of the fresh follicles were fixed in 4% paraformaldehyde and destined for immunostaining for aromatase and MMPs-2 and 9. The other follicles were randomly distributed in two groups: fresh secondary follicles (FSF) and vitrified secondary follicles (VSF), both followed by IVC for 6 or 12 days. At the end of D6 and D12 of culture, the FSF and VSF were submitted to morphology, viability (trypan blue), antrum formation, follicular, and oocyte diameter. In addition, aromatase and metalloproteinases were also investigated in the two groups of follicles (FSF and VSF). Our results showed that vitrification significantly reduced the percentage of intact follicles after IVC, compared to FSF. The follicular and oocyte diameter of the VSF was lower (P <0.05) than that of the FSF on both days of VSD. VSF showed a reduction in viability between days 6 and 12 of culture, however, no significant differences were observed in comparison to FSF on both days. Antrum formation in the VSF was lower (P <0.05) than in the FSF, however, an increase of this percentage was observed from 6 to 12 days in both groups of follicles. Furthermore, the results showed that on days 6 and 12 the immunostaining for aromatase in granulosa (GC) cells of the FSF was strong and moderate, respectively, whereas in the VSF it was, respectively, moderate and strong. As for MMPs, moderate marking was observed for MMP-2 and MMP-9 in the FSF and VSF GCs on both days of cultivation, except for the FSF in D6, which showed strong marking for MMP-9. In conclusion, vitrified secondary follicles can grow and develop during 12 days of in vitro culture. The follicles also showed evidence of their steroidogenic capacity and remodeling of the basement membrane, which is important for follicular development.
Resumo
Background: Ovarian transplantation in nonhuman primates (NHP) has been used as a strategy for the development of experimental models for biomedical research in the reproductive area. The prospects for application of this technique range from the restoration of female fertility to the conservation of endangered wild animals. However, studies with NHP were performed mostly focusing on the ovarian transplantation of cryopreserved tissue, in order to simulate the reality of human species, as well as aiming to obtain experimental models suitable for comparative studies. On the other hand, ovarian transplantation could be applied also in NHP species preservation.Review: According to the last census (2012-2014) of the International Union for Conservation of Nature (IUCN), currently, more than half of the 633 types of primates known around the world are in danger of disappearing forever due to the continued destruction of their natural habitat by human activities. Thus, there is an interest to expose the possible methods of ovarian preservation followed by transplantation that can be employed to promote the conservation of endangered NHP. Despite the positive results obtained with avascular autograft of fresh ovarian tissue in NHP, it is important to bring in mind the significant loss of follicles as a result of this procedure due to ischemia and reperfusion during the first days after grafting. This phenomenon leads to the production of reactive oxygen species (ROS) such as hydrogen peroxide, superoxide anion and hydroxyl radical, which are responsible by lipid peroxidation, cell membrane damage and subsequent follicular atresia. An alternative to counteract this oxidative stress consists in the application/administration of different sources of antioxidants previously or during grafting, in the grafted tissue or in the animal receiving the transplant. The most used compounds with a claimed radical scavenger activity are catalase, trolox and some vitamins.[...](AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Primatas , Ovário/transplante , Criopreservação/métodos , Criopreservação/veterinária , Modelos Animais , Espécies em Perigo de Extinção , Técnicas ReprodutivasResumo
Background: Ovarian transplantation in nonhuman primates (NHP) has been used as a strategy for the development of experimental models for biomedical research in the reproductive area. The prospects for application of this technique range from the restoration of female fertility to the conservation of endangered wild animals. However, studies with NHP were performed mostly focusing on the ovarian transplantation of cryopreserved tissue, in order to simulate the reality of human species, as well as aiming to obtain experimental models suitable for comparative studies. On the other hand, ovarian transplantation could be applied also in NHP species preservation.Review: According to the last census (2012-2014) of the International Union for Conservation of Nature (IUCN), currently, more than half of the 633 types of primates known around the world are in danger of disappearing forever due to the continued destruction of their natural habitat by human activities. Thus, there is an interest to expose the possible methods of ovarian preservation followed by transplantation that can be employed to promote the conservation of endangered NHP. Despite the positive results obtained with avascular autograft of fresh ovarian tissue in NHP, it is important to bring in mind the significant loss of follicles as a result of this procedure due to ischemia and reperfusion during the first days after grafting. This phenomenon leads to the production of reactive oxygen species (ROS) such as hydrogen peroxide, superoxide anion and hydroxyl radical, which are responsible by lipid peroxidation, cell membrane damage and subsequent follicular atresia. An alternative to counteract this oxidative stress consists in the application/administration of different sources of antioxidants previously or during grafting, in the grafted tissue or in the animal receiving the transplant. The most used compounds with a claimed radical scavenger activity are catalase, trolox and some vitamins.[...]
Assuntos
Feminino , Animais , Criopreservação/métodos , Criopreservação/veterinária , Ovário/transplante , Primatas , Espécies em Perigo de Extinção , Modelos Animais , Técnicas ReprodutivasResumo
O transplante de tecido ovariano é a principal alternativa para a retomada da função endócrina e reprodutiva em pacientes jovens candidatos ao tratamento quimioterápico. Resultados promissores e nascimentos até o momento foram alcançados. No entanto, um protocolo eficiente para transportar e enxertar o tecido ovariano ainda não está estabelecido. Portanto, o objetivo da presente tese foi investigar os principais fatores envolvidos nos procedimentos de conservação e enxerto, divididos em duas fases. A fase I teve como objetivo investigar o efeito dos sítios heterotópicos superficiais subcutâneo (SC) e intramuscular (IM) sobre a viabilidade tecidual, impacto sobre os folículos ovarianos e ao estroma, e favorecimento da revascularização após 7 ou 15 dias de transplante utilizando o modelo caprino. Uma porcentagem aumentada de folículos em desenvolvimento foi observada nos grupos enxertados (P< 0,05). Foi observada uma forte redução na densidade folicular e de células estromais, principalmente após 15 dias de transplante (P < 0,05). Proporções semelhantes de fibras colágenas tipo I foram observadas após 7 dias e de tipo III após 15 dias, independentemente do sítio. Além disso, a fragmentação do DNA tecidual foi semelhante após 15 dias de enxerto. Observaram-se associações positivas entre a densidade de células estromais e a deposição de fibras colágenas tipo I com a porcentagem de folículos normais nos grupos enxertados. Não foram encontradas diferenças entre a dinâmica vascular durante o período de enxertia. Concluiu-se que ambos os locais promovem taxa de desenvolvimento folicular semelhante, sugerindo que danos e alterações na composição do estroma são potenciais biomarcadores da viabilidade do enxerto. A fase II teve como objetivo avaliar o efeito da suplementação de VEGF ao meio de transporte de tecido ovariano bovino a 4º durante 24h. Para isso, tecidos ovarianos bovinos foram coletados e subdividos nos grupos (i) a fresco: controle fresco, transplante a fresco; (ii) resfriados: controle resfriado, resfriado e transplantado, e resfriado e cultivado; (iii) resfriados na presença de 50 ng/ml de VEGF: controle resfriado+, resfriado+ e transplantado, e resfriado+ e cultivado. Observou-se que o resfriamento com VEGF proporcionou maior porcentagem (P <0,05) de folículos morfológicos normais e o desenvolvimento de folículos após 7 dias de cultivo ou transplante em relação ao resfriamento sem suplementação. Além disso, tecidos ovarianos pré-incubados com VEGF após o transplante apresentaram maior sobrevivência folicular, desenvolvimento e densidade folicular e de células estromais quando comparados ao transplante fresco (P<0,05). Observou-se aumento da deposição de fibras de colágeno tipo I e redução de fibras de colágeno tipo III no tratamento resfriado com VEGF seguido de transplante em relação a todos os outros tratamentos (P< 0,05), exceto no transplante fresco. Além disso, uma imunoquantificação semelhante de PCNA foi encontrada entre tecidos ovarianos pré-incubados com VEGF após enxerto ou cultivo (P> 0,05) e menor que os outros tratamentos (P < 0,05). Concluiu-se que a presença de VEGF antes do transplante ou do cultivo in vitro pode favorecer a viabilidade das estruturas foliculares.
Ovarian tissue transplantation is the main alternative for the resumption of endocrine and reproductive function in young patients who are candidates for chemotherapy treatment. Promising results and births to date were achieved, however, an efficient protocol to transport and engraft the ovarian tissue still not stablished. Therefore, the aim of the present thesis was to investigate the main factors involved in conservation and engraftment procedures, divided in 2 phases. Phase I aimed to investigate the effect of subcutaneous (SC) and intramuscular (IM) superficial heterotopic sites on tissue viability, impact on ovarian follicles and stroma, and favoring revascularization after 7 or 15 days of transplantation using the model Goat model. An increased percentage of developing follicles was observed in grafted groups. A strong reduction in follicular and stromal cell density was observed, especially after 15 days of transplantation (P< 0.05). Similar proportions of collagen fibers type I was observed after 7 days and type III after 15 days, regardless of site. Also, DNA fragmentation was similar after 15 days of grafting. Positive associations were observed among stromal cell density and deposition of type I collagen fibers with the percentage of normal follicles in grafted groups. No differences were found among vascular dynamics during grafting period. It was concluded that both sites promote similar follicular development rate, suggesting that damage and changes in stromal composition are potential biomarkers of graft viability. Phase II aimed to evaluate the effect of supplementing VEGF to the transport medium of bovine ovarian tissue at 4º for 24h. For this, bovine ovarian tissues were collected and subdivided into groups (i) fresh: fresh control, fresh transplant; (ii) colds: control cold, cooled and transplanted, and cooled and cultivated; (iii) presence of 50 ng / ml of VEGF: control cooled +, cooled + and transplanted, and cooled + and cultured. It was observed that cooling with VEGF provided a higher percentage (P <0.05) of morphological normal follicles and the developmental rate after 7 days of in vitro culture or transplantation in relation to cooling without supplementation. In addition, ovarian tissues pre-incubated with VEGF after transplantation showed greater follicular survival, follicular and stromal cell development and density when compared to fresh transplantation (P <0.05). There was an increase in the deposition of type I collagen fibers and a reduction in type III collagen fibers in the cooled treatment+ VEGF followed by transplantation in relation to all other treatments (P <0.05), except for fresh transplantation. In addition, a similar immunoquantification of PCNA was found among ovarian tissues pre-incubated with VEGF after grafting or in vitro culture (P> 0.05) and lower than the other treatments (P <0.05). It was concluded that the presence of VEGF prior to transplantation or in vitro culture may favor the viability of follicular structures.
Resumo
O processo de restabelecimento da circulação sanguínea após o transplante, tem influência na sobrevivência do tecido e no desenvolvimento folicular. O resveratrol tem sido utilizado em inúmeros estudos, por apresentar efeitos antioxidantes e anti-inflamatórios. No entanto, não existe informação sobre possíveis ações benéficas do resveratrol nos tecidos ovarianos que serão destinados ao transplante. Objetivou-se, no primeiro experimento, realizar a vitrificação de tecido ovariano com e sem resveratrol, e após o cultivo in vitro e xenotransplante de tecido ovariano de fêmeas bovinas, avaliar a morfologia e a capacidade de desenvolvimento dos folículos pré- antrais, e ainda, o estresse oxidativo, os níveis de degeneração celular e a apoptose no tecido, e no segundo experimento, realizar a incubação do tecido ovariano por 24 horas em meio de cultivo acrescido ou não com resveratrol, seguido do cultivo in vivo (xenotransplante) e avaliar a morfologia e a capacidade de desenvolvimento dos folículos préantrais. Observou-se que no primeiro experimento, os tecidos que foram vitrificados com resveratrol, apresentaram menores taxas de degeneração celular (p<0,05) quando comparado aos tecidos vitrificados sem resveratrol. O xenotransplante fresco por 7 dias, apresentou viabilidade folicular semelhante ao controle cultivado in vitro por 7 dias. A vitrificação com resveratrol seguida do xenotransplante apresentou maior taxa de degeneração celular e apoptose, do que os tecidos vitrificados sem resveratrol e xenotransplantados. No segundo experimento, o grupo de tecidos ovarianos incubados com resveratrol e xenotransplantados por 14 e 28 dias apresentou menor (P < 0,05) viabilidade e ativação folicular que os tecidos incubados sem adição do antioxidante resveratrol. O grupo xenotransplante fresco e o grupo xenotransplantes incubado sem resveratrol por 14 e 28 dias, apresentaram viabilidade folicular semelhante (P > 0,05) ao grupo controle fresco. Frente aos resultados obtidos, podemos concluir que o uso de resveratrol em soluções de vitrificação reduz a viabilidade folicular de tecidos ovarianos de fêmeas bovinas após xenotransplante por 7 dias. A utilização do cultivo in vivo (xenotransplante) sem resveratrol, demonstrou bons resultados na manutenção da viabilidade de folículos pré-antrais inclusos em tecido ovariano bovino, levando a manutenção folicular pelo período de 28 dias de transplante.
The process of reestablishing blood circulation after transplantation has an influence on tissue survival and follicular development. Resveratrol has been used in numerous studies, presenting antioxidant and anti-inflammatory effects. However, the possible beneficial actions of resveratrol in the ovarian tissues that will be aimed for transplantation is still not established. The aim of the first study was to vitrify ovarian tissue with resveratrol, and to evaluate the morphology and the developmental capacity of the preantral follicles after in vitro and in vivo cultivation (xenotransplantation) of ovarian tissue of bovine females. We also evaluate oxidative stress, levels of cell degeneration, and apoptosis in the tissue. In the second study we evaluate the morphology and the developmental capacity of the preantral follicles in the ovarian tissue that was incubate for 24 hours in cultivation medium with addition of resveratrol and after in vivo cultivation (xenotransplantation). The tissues that were vitrified with resveratrol, presented lower rates of cell degeneration (p <0.05) when compared to the vitrified tissues without resveratrol. Fresh xenotransplantation for 7 days presented follicular viability similar to the cultured control in vitro for 7 days. Resveratrol vitrification followed by xenotransplantation presented a higher rate of cell degeneration and apoptosis than vitrified tissues without resveratrol and xenotransplantation. The group of ovarian tissues incubated with resveratrol and xenotransplantation for 14 and 28 days presented less viability (P <0.05) and follicular activation than the tissues incubated without the addition of the antioxidant resveratrol. The fresh xenotransplantation and xenotransplantation groups incubated without resveratrol for 14 and 28 days presented similar follicular viability (P> 0.05) to the fresh control group. The use of resveratrol in vitrification solutions reduces the follicular viability of ovarian tissues of bovine females after xenotransplantation for 7 days. The use of in vivo cultivation (xenotransplantation) without resveratrol, demonstrated good results in maintaining the viability of pre-antral follicles included in bovine ovarian tissue, leading to follicular maintenance for the period of 28 days of transplantation.
Resumo
Os objetivos deste estudo foram: 1) Avaliar a eficiência da técnica de autotransplante heterotópico de tecido ovariano equino, após exposição ou não dos fragmentos ovarianos ao processo de resfriamento e/ou VEGF antes do enxerto (Fase 1); 2) Avaliar o efeito da exposição prévia de tecidos ovarianos equinos ao resfriamento, criopreservação e VEGF no xenotransplante heterotópico. (Fase 2). Na fase 1, os fragmentos ovarianos foram coletados por biópsia in vivo e autoenxertados no sítio subcutâneo do pescoço da égua. Na fase 2, ovários equinos foram coletados por ovariectomia, em seguida fragmentados, vitrificados, expostos ao VEGF e xenoenxertados na parede intraperitoneal de camundongos BALB nude. Na fase 1, a exposição dos fragmentos ovarianos ao VEGF não foi benéfica para a qualidade do tecido; contudo, o processo de resfriamento dos fragmentos reduziu (P < 0,05) a hiperemia aguda pós-enxertia. Os enxertos resfriados comparados com enxertos não resfriados obtiveram valores semelhantes (P > 0.05) para folículos pré-antrais normais e em desenvolvimento, densidade vascular e apoptose das células estromais. Na fase 2, A exposição ao VEGF aumentou (P < 0,05) a densidade vascular (vasos novos e maduros) no tecido criopreservado transplantado. Um equilíbrio das fibras de colágeno dos tipos I e III no tecido transplantado e resfriado foi observado em tecido exposto ao VEGF. Em conclusão, a exposição ao VEGF antes do autotransplante não melhorou a qualidade dos tecidos enxertados. No entanto, resfriar o tecido ovariano por pelo menos 24 horas antes do enxerto pode ser benéfico, pois foram obtidas taxas satisfatórias de sobrevivência e ativação folicular e de sobrevivência e proliferação de células estromais, bem como aumento da densidade de vasos.
The objectives of this study were: 1) To evaluate the efficiency of the heterotopic autotransplantation technique of equine ovarian tissue, after exposure or not of the ovarian fragments to the cooling process and / or VEGF before the graft (Phase 1); 2) Evaluate the effect of previous exposure of equine ovarian tissues to cooling, cryopreservation and VEGF in heterotopic xenotransplantation. (Level 2). In phase 1, the ovarian fragments were collected by biopsy in vivo and autografted in the subcutaneous site of the mare's neck. In phase 2, equine ovaries were collected by ovariectomy, then fragmented, vitrified, exposed to VEGF and xenografted on the intraperitoneal wall of nude BALB mice. In phase 1, the exposure of ovarian fragments to VEGF was not beneficial for tissue quality; however, the cooling process of the fragments reduced (P <0.05) the acute post-grafting hyperemia. The cooled grafts compared with non-cooled grafts obtained similar values (P> 0.05) for normal and developing preantral follicles, vascular density and apoptosis of stromal cells. In phase 2, VEGF exposure increased (P <0.05) the vascular density (new and mature vessels) in the transplanted cryopreserved tissue. A balance of types I and III collagen fibers in the transplanted and cooled tissue was observed in tissue exposed to VEGF. In conclusion, exposure to VEGF before autotransplantation did not improve the quality of the grafted tissues. However, cooling ovarian tissue for at least 24 hours before the graft can be beneficial, as satisfactory rates of survival and follicular activation and stromal cell survival and proliferation have been achieved, as well as increased vessel density.
Resumo
Os folículos pré-antrais constituem a principal reserva reprodutiva em fêmeas e são classificados em primordiais, de transição, primários e secundários. A criopreservação tem sido uma ferramenta promissora para a preservação da fertilidade feminina, principalmente em mulheres submetidas a tratamentos contra o câncer ou com problemas reprodutivos. Nesse tipo de abordagem, é de extrema importância a preservação da reserva folicular assim como a funcionalidade tecidual, pois posteriormente a reserva folicular poderá ser submetida a biotécnicas de reprodução assistida como cultivo in vitro e transplante. Diversos protocolos e substâncias são rotineiramente avaliados para o desenvolvimento do processo de criopreservação para posterior transplante. Dentre eles, o resveratrol possui ação antioxidante minimizando a produção de espécies reativas de oxigênio (EROS) durante a vitrificação e cultivo in vitro. Os recentes avanços em nanotecnologia expandiram suas possíveis aplicações na biomedicina, assim as nanoparticulas vem sendo utilizadas em tratamentos oncológicos como um carreador de fármacos. Outros estudos reportaram o desenvolvimento de diversas formulações de nanopartículas com potencial antioxidante, anti-inflammatório e antibiótico. Dessa forma, as nanopartículas têm demonstrado resultados promissores na criopreservação de sêmen e cultivo de folículos pré-antrais.
The preantral follicles constitute the female reproductive reserve and are classified as primordial, transitional, primary, and secondary. Cryopreservation has been a promising tool for the preservation of female fertility, especially in women undergoing cancer treatment or with reproductive problems. In this type of approach, it is extremely important to preserve the follicular reserve, as well as the functionality of the tissue, since the follicular reserve will be subjected to assisted reproductive techniques such as in vitro culture and transplantation. Several protocols and substances are routinely evaluated for the development of the cryopreservation process. Among them, resveratrol has antioxidant action, minimizing the production of ROS during vitrification and in vitro culture. Recent advances in nanotechnology have expanded its possible applications in biomedicine, therefore nanoparticles have been used in cancer treatments as a drug carrier. Other studies have reported the development of several nanoparticle formulations with antioxidant, anti-inflammatory and antibiotic potential. Thus, nanoparticles have shown promising results in cryopreservation of semen and in vitro culture of preantral follicles.
Resumo
Objetivou-se neste estudo descrever a técnica de xenotransplante gonadal em camundongosimunossuprimidos por meio de ovariectomia unilateral total videolaparoscópica (OVL) em ovelhas. Foramutilizadas quatro ovelhas como doadoras do tecido reprodutivo e camundongos em fase reprodutiva (n = 12)como receptores. As coletas foram realizadas por videocirurgia, e foram avaliados o tempo de cirurgia, as respostascomportamentais antiálgicas, o apetite, o escore corporal e a locomoção durante 10 dias pós-operatórios. Osxenotransplantes foram realizados na cápsula renal dos camundongos, sendo avaliados histologicamente 60 diasapós o transplante. O tempo de cirurgia foi de 18 ± 3 min. A técnica OVL apresentou-se minimamente invasiva,sem complicações cirúrgicas, proporcionando mínimo desconforto e ótima recuperação dos animais, e pode serempregada em ovelhas adultas e pré-púberes para coleta de tecidos reprodutivos para conservação de gametas. Parahistologia dos tecidos xenotransplantados, verificou-se viabilidade tecidual, com neovascularização e ausência defocos necróticos, porém não se visualizaram folículos nas diferentes fases. Concluiu-se que a OVL pode ser atécnica empregada em ovelhas pré-púberes e adultas para recuperação de tecido reprodutivo paraxenotransplante. Para o xenotransplante, sugere-se que os fragmentos ovarianos selecionados contenham umnúmero suficiente de folículos primordiais para o possível sucesso da biotécnica.(AU)
The aim of this study was to describe the technique of gonadal xenotransplantation inimmunosuppressed mice from total unilateral laparoscopic ovariectomy (OVL) in sheep. Four sheep were usedas donors of reproductive tissue in mice in the reproductive phase (n = 12) as receivers. Samples were collectedby laparoscopic surgery, evaluating the time of surgery, observation of behavioral anti-painful responses,monitoring appetite, body condition score and locomotion for 10 days postoperatively. The xenografts wereperformed in the renal capsule of mice, as evaluated histologically 60 days after transplantation. The operationtime was 18 ± 3 min, the technique presented OVL minimally invasive surgical complications without providingminimum discomfort and optimum recovery of the animals and can be used in adult and prepubertal sheep forcollecting reproductive tissues for the conservation of gametes. Histology tissue xenotransplanteted was a viabletissue, with neovascularization and absence of necrotic foci, but follicles at different stages were not visualized.It was concluded that the OVL technique can be employed in sheep and adult prepubertal for recoveringreproductive tissue for xenotransplantation. For xenotransplantation, it is suggested that the ovarian fragmentsselected contain a sufficient number of primordial follicles for the possible success of biotech.(AU)