Proliferative enteropathy caused by Lawsonia intracellularis in rabbits in Southern Brazil / Enteropatia proliferativa por Lawsonia intracellularis em coelhos no Sul do Brasil

Proliferative enteropathy (PE), also known as ileitis, is a disease caused by the bacterium Lawsonia intracellularis. This disease is characterized by diarrhea and ill-thrift. The aim of this study is to describe a PE outbreak in rabbits that occurred in Southern Brazil. The farm had 700 rabbits at the time the outbreak occurred. The clinical signs were severe diarrhea, dehydration, and apathy. Necropsy was performed in 33 rabbits, and the most evident macroscopic findings were thickening of the intestinal wall, intestinal loops distended by large amounts of gas, and liquid feces. Histopathological examination demonstrated a marked proliferation of enterocytes in intestinal crypts, decrease number of goblet cells, and crypts microabscesses. Silver impregnation technique (Warthin-Starry) demonstrated in intestinal crypts inside of enterocytes cytoplasm, curved vibrioid bacteria compatible with L. intracellularis. Immunohistochemical staining with anti-L. intracellularis confirmed the agent presence. PCR was performed and L. intracellularis was confirmed as the etiological agent.

A enteropatia proliferativa (EP), também conhecida como ileíte, é uma doença causada pela bactéria Lawsonia intracellularis, que é caracterizada por diarreia com redução do ganho de peso. O objetivo deste trabalho é descrever um surto de EP em coelhos na região sul do Brasil. A propriedade possuía 700 coelhos, durante o período do surto. O quadro clínico caracterizava-se por diarreia severa, desidratação e apatia. Realizou-se o exame de necropsia em 33 coelhos, e as alterações macroscópicas mais evidentes eram: alças intestinais acentuadamente distendidas por gás e fezes líquidas, além de serosa rugosa e parede intestinal moderadamente espessada. Na análise histopatológica do intestino delgado visualizou se marcada hiperplasia de enterócitos de criptas, moderada diminuição do número de células caliciformes e microabscessos de criptas. A etiologia das lesões foi confirmada pela técnica de impregnação pela prata (Warthin-Starry), evidenciando bactérias vibrioides compatíveis com L. intracellularis no ápicede enterócitos das criptas intestinais. Ainda, foi obtida imunomarcação positiva de enterócitos de criptas na imuno-histoquímica com anticorpo anti-L. intracellularis e a PCR positiva em amostras de intestino.

Proliferative enteropathy caused by Lawsonia intracellularis in rabbits in Southern Brazil / Enteropatia proliferativa por Lawsonia intracellularis em coelhos no Sul do Brasil

Proliferative enteropathy (PE), also known as ileitis, is a disease caused by the bacterium Lawsonia intracellularis. This disease is characterized by diarrhea and ill-thrift. The aim of this study is to describe a PE outbreak in rabbits that occurred in Southern Brazil. The farm had 700 rabbits at the time the outbreak occurred. The clinical signs were severe diarrhea, dehydration, and apathy. Necropsy was performed in 33 rabbits, and the most evident macroscopic findings were thickening of the intestinal wall, intestinal loops distended by large amounts of gas, and liquid feces. Histopathological examination demonstrated a marked proliferation of enterocytes in intestinal crypts, decrease number of goblet cells, and crypts microabscesses. Silver impregnation technique (Warthin-Starry) demonstrated in intestinal crypts inside of enterocytes cytoplasm, curved vibrioid bacteria compatible with L. intracellularis. Immunohistochemical staining with anti-L. intracellularis confirmed the agent presence. PCR was performed and L. intracellularis was confirmed as the etiological agent.(AU)

A enteropatia proliferativa (EP), também conhecida como ileíte, é uma doença causada pela bactéria Lawsonia intracellularis, que é caracterizada por diarreia com redução do ganho de peso. O objetivo deste trabalho é descrever um surto de EP em coelhos na região sul do Brasil. A propriedade possuía 700 coelhos, durante o período do surto. O quadro clínico caracterizava-se por diarreia severa, desidratação e apatia. Realizou-se o exame de necropsia em 33 coelhos, e as alterações macroscópicas mais evidentes eram: alças intestinais acentuadamente distendidas por gás e fezes líquidas, além de serosa rugosa e parede intestinal moderadamente espessada. Na análise histopatológica do intestino delgado visualizou se marcada hiperplasia de enterócitos de criptas, moderada diminuição do número de células caliciformes e microabscessos de criptas. A etiologia das lesões foi confirmada pela técnica de impregnação pela prata (Warthin-Starry), evidenciando bactérias vibrioides compatíveis com L. intracellularis no ápicede enterócitos das criptas intestinais. Ainda, foi obtida imunomarcação positiva de enterócitos de criptas na imuno-histoquímica com anticorpo anti-L. intracellularis e a PCR positiva em amostras de intestino.(AU)

Intestinal intussusception secondary to enteritis caused by Pythium insidiosum in a bitch: case report / Intussuscepção intestinal secundária à enterite causada por Pythium insidiosum em uma cadela: relato de caso

We report a case of intestinal intussusception secondary to enteritis caused by Pythium insidiosum infection in a 1-year-old mixed breed bitch that died after a 30-day history of bloody diarrhea, anorexia, weight loss, listlessness, dehydration, and pale mucous membranes. Necropsy revealed two areas of intussusception, one jejunum-jejunal and one ileum-cecum-colic. The first intussusception showed slight congestion of the intestinal loop, which was resolved by manual traction, while the second intussusception exhibited thickening, irregular yellow spots, and transmural congestion. Histologically, the jejunum-jejunal segment had ischemic lesions secondary and ileum-cecum-colic intussusception there was also necrotizing, pyogranulomatous enteritis associated with negative images of intralesional fungal hyphae that were well visualized by silver impregnation. Immunohistochemistry identified the hyphae as Pythium insidiosum. The diagnosis was made based on the histological changes and confirmed by immunohistochemistry. We can conclude that enteritis by P. insidiosum in dogs can occasionally cause intestinal intussusception and result in acute death.(AU)

Relata-se um caso de intussuscepção intestinal secundária à enterite causada por Pythium insidiosusm em uma cadela, sem raça definida, com um ano de idade, que morreu após apresentar 30 dias de diarreia sanguinolenta, anorexia, perda de peso, apatia, desidratação e mucosas pálidas. Na necropsia verificaram-se duas áreas de intussuscepções, sendo uma jejuno-jejunal e outra íleo-ceco-cólica. Na primeira havia discreta congestão, que foi desfeita pela tração manual, e na segunda observou-se espessamento segmentar, focos amarelados irregulares e congestão transmural do intestino. Microscopicamente, no segmento jejuno-jejunal observaram-se moderadas lesões isquêmicas secundárias à intussuscepção, e no segmento íleo-ceco-cólica verificou-se enterite piogranulomatosa e necrosante, segmentar, associada a imagens negativas de hifas intralesionais, impregnadas pela prata. Pela imuno-histoquímica, as hifas foram imunomarcadas para Pythium insidiosum. O diagnóstico foi realizado com base nas características microscópicas das lesões e morfotintoriais das hifas e foi confirmado pela imuno-histoquímica. De acordo com esses dados, é possível concluir que a infecção intestinal por P. insidiosum em cães pode causar intussuscepção e morte.(AU)

Intestinal intussusception secondary to enteritis caused by Pythium insidiosum in a bitch: case report / Intussuscepção intestinal secundária à enterite causada por Pythium insidiosum em uma cadela: relato de caso

We report a case of intestinal intussusception secondary to enteritis caused by Pythium insidiosum infection in a 1-year-old mixed breed bitch that died after a 30-day history of bloody diarrhea, anorexia, weight loss, listlessness, dehydration, and pale mucous membranes. Necropsy revealed two areas of intussusception, one jejunum-jejunal and one ileum-cecum-colic. The first intussusception showed slight congestion of the intestinal loop, which was resolved by manual traction, while the second intussusception exhibited thickening, irregular yellow spots, and transmural congestion. Histologically, the jejunum-jejunal segment had ischemic lesions secondary and ileum-cecum-colic intussusception there was also necrotizing, pyogranulomatous enteritis associated with negative images of intralesional fungal hyphae that were well visualized by silver impregnation. Immunohistochemistry identified the hyphae as Pythium insidiosum. The diagnosis was made based on the histological changes and confirmed by immunohistochemistry. We can conclude that enteritis by P. insidiosum in dogs can occasionally cause intestinal intussusception and result in acute death.(AU)

Relata-se um caso de intussuscepção intestinal secundária à enterite causada por Pythium insidiosusm em uma cadela, sem raça definida, com um ano de idade, que morreu após apresentar 30 dias de diarreia sanguinolenta, anorexia, perda de peso, apatia, desidratação e mucosas pálidas. Na necropsia verificaram-se duas áreas de intussuscepções, sendo uma jejuno-jejunal e outra íleo-ceco-cólica. Na primeira havia discreta congestão, que foi desfeita pela tração manual, e na segunda observou-se espessamento segmentar, focos amarelados irregulares e congestão transmural do intestino. Microscopicamente, no segmento jejuno-jejunal observaram-se moderadas lesões isquêmicas secundárias à intussuscepção, e no segmento íleo-ceco-cólica verificou-se enterite piogranulomatosa e necrosante, segmentar, associada a imagens negativas de hifas intralesionais, impregnadas pela prata. Pela imuno-histoquímica, as hifas foram imunomarcadas para Pythium insidiosum. O diagnóstico foi realizado com base nas características microscópicas das lesões e morfotintoriais das hifas e foi confirmado pela imuno-histoquímica. De acordo com esses dados, é possível concluir que a infecção intestinal por P. insidiosum em cães pode causar intussuscepção e morte.(AU)

IDENTIFICAÇÃO DE Helicobacter spp. EM MUCOSAS GÁSTRICA E DUODENAL DE CÃES (Canis familiaris) UTILIZANDO A TÉCNICA DE WARTHIN-STARRY

Abstract Bacteria of the genus Helicobacter spp. have been identified on the gastric mucosa of different species of mammals, including canines. Infected patients have histological gastritis; however, not all the animals that carry the bacteria show clinical signs. The objective of this work was to identify the bacteria suggestive of Helicobacter spp. by impregnation by silver and to characterize the histopathological lesions observed. Qualitative evaluation was performed for histological analysis, in which scores from absent (-) to severe (+++) were attributed, considering the density of spiral bacteria per field (400x), presence of inflammatory cells, and number of lymphoid aggregates. Of the 26 animals evaluated, 34.6% presented positivity for helicobacteriosis. Gastritis was observed in 15.38% of the animals and a higher occurrence of bacteria of the genus Helicobacter spp. was observed in the gastric body/fundus region (23%). In nine samples, six from gastric body/fundus and three from antrum pylorus, lymphoid clusters associated with Helicobacter spp. were observed. Fisher's Test revealed a positive association between the presence of Helicobacter spp. and lymphoid aggregates (p 0.001). Infection by Helicobacter spp. is associated with the presence of lymphoid aggregates in canines.

Resumo Bactérias do gênero Helicobacter spp. têm sido identificadas na mucosa gástrica de diferentes espécies de mamíferos, inclusive em caninos. Pacientes infectados têm gastrite histológica; no entanto, não são todos os portadores que apresentam sinais clínicos. O objetivo deste trabalho foi identificar as bactérias sugestivas de Helicobacter spp. pela impregnação pela prata e caracterizar as lesões histopatológicas observadas. Foram analisadas amostras de mucosas gástrica e entérica de 26 caninos. Para avaliação histopatológica, foi realizada avaliação qualitativa, na qual foram atribuídos escores de ausente (-) a acentuada (+++), considerando a densidade de bactérias espiraladas por campo (400x), presença de células inflamatórias e aglomerados linfoides. Dos 26 animais avaliados, 34,6% apresentaram positividade para helicobacteriose. A gastrite foi observada em 15,38% dos animais e a maior ocorrência de bactérias do gênero Helicobacter spp. foi observada em região de corpo/fundo gástrico (23%). Em nove amostras, seis de corpo/fundo gástrico e três de antro pilórico, foram observados aglomerados linfóides associados a Helicobacter spp. Por meio de Teste de Fisher, verificou-se associação positiva entre a presença de Helicobacter spp. e agregados linfoides (p 0,001). A infecção por Helicobacter spp. está associada com a presença de aglomerados linfóides em caninos.

Tratamento de feridas excisionais de coelhos com extrato de barbatimão associado a células mononucleares autólogas da medula óssea / Treatment of excisional wound in rabbits with barbatiman extracts associated with autologous bone marrow mononuclear cells

Objetivou-se com este estudo avaliar o processo de cicatrização de feridas de coelhos tratadas com extrato de barbatimão (S. adstringens) associado a células mononucleares autólogas da medula óssea (CMMO). Utilizaram-se 20 coelhos, distribuídos em quatro grupos: B, extrato de barbatimão; CB, CMMO com extrato de barbatimão; CS, CMMO com solução fisiológica; S, solução fisiológica. Foi avaliada a presença de crosta, hiperemia, secreção, hemorragia, reepitelização, área da ferida e tempo de cicatrização. No terceiro, sétimo, 14º e 21º dias pós-operatório, realizou-se a biópsia das feridas e avaliaram-se os indicadores dos processos de inflamação e de reparo, com destaque para o colágeno, na coloração picrosírius, bem como de proliferação celular, na coloração AgNOR. Houve maior deposição de fibras colágenas nos grupos B e CB (P=0,00003) e formação de crostas mais espessas no sétimo dia, com fibras colágenas mais organizadas no 21º dia. Conclui-se que o barbatimão estimula a produção de fibras colágenas e promove a formação de crostas mais espessas sobre a ferida na fase inicial da cicatrização e, na fase de remodelação, favorece a orientação das fibras colágenas. Além disso, a associação desse fitoterápico com CMMO não estimula a cicatrização de feridas.(AU)

This study aimed to evaluate the healing process of wounds of rabbits in response to treatment with barbatiman extract (S. adstringens) associated with autologous mononuclear bone marrow cells (BM-MNC). We used 20 rabbits, divided into four groups: B, 10% barbatiman extract with 9.48% of total tannins; CB, BM-MNC with barbatiman extract; CS, BM-MNC with NaCl 0.9% solution; S, NaCl 0.9% solution. Clinical evaluation was performed by observing the presence of crust, redness, discharge, bleeding, re-epithelialization, the wound area and healing time in days. In the third, seventh, 14th and 21st postoperative days wounds were biopsied for microscopic evaluation of inflammation and repair process indicators, especially collagen, in picrosirius staining, and cell proliferation, in AgNOR staining. There was a greater deposition of collagen fibers in groups B and CB (p=0.00003) on the seventh day and formation of thicker crusts, and more organized collagen fibers on the 21st day in these groups. In conclusion, in the initial phase of healing, barbatiman extract stimulates the production of collagen fibers and promotes the formation of more exuberant crusts on the wounds and remodeling phase favors the orientation of collagen fibers, but when combined with BMMC does not stimulate wound healing in rabbits.(AU)

Tratamento de feridas excisionais de coelhos com extrato de barbatimão associado a células mononucleares autólogas da medula óssea / Treatment of excisional wound in rabbits with barbatiman extracts associated with autologous bone marrow mononuclear cells

Objetivou-se com este estudo avaliar o processo de cicatrização de feridas de coelhos tratadas com extrato de barbatimão (S. adstringens) associado a células mononucleares autólogas da medula óssea (CMMO). Utilizaram-se 20 coelhos, distribuídos em quatro grupos: B, extrato de barbatimão; CB, CMMO com extrato de barbatimão; CS, CMMO com solução fisiológica; S, solução fisiológica. Foi avaliada a presença de crosta, hiperemia, secreção, hemorragia, reepitelização, área da ferida e tempo de cicatrização. No terceiro, sétimo, 14º e 21º dias pós-operatório, realizou-se a biópsia das feridas e avaliaram-se os indicadores dos processos de inflamação e de reparo, com destaque para o colágeno, na coloração picrosírius, bem como de proliferação celular, na coloração AgNOR. Houve maior deposição de fibras colágenas nos grupos B e CB (P=0,00003) e formação de crostas mais espessas no sétimo dia, com fibras colágenas mais organizadas no 21º dia. Conclui-se que o barbatimão estimula a produção de fibras colágenas e promove a formação de crostas mais espessas sobre a ferida na fase inicial da cicatrização e, na fase de remodelação, favorece a orientação das fibras colágenas. Além disso, a associação desse fitoterápico com CMMO não estimula a cicatrização de feridas.(AU)

This study aimed to evaluate the healing process of wounds of rabbits in response to treatment with barbatiman extract (S. adstringens) associated with autologous mononuclear bone marrow cells (BM-MNC). We used 20 rabbits, divided into four groups: B, 10% barbatiman extract with 9.48% of total tannins; CB, BM-MNC with barbatiman extract; CS, BM-MNC with NaCl 0.9% solution; S, NaCl 0.9% solution. Clinical evaluation was performed by observing the presence of crust, redness, discharge, bleeding, re-epithelialization, the wound area and healing time in days. In the third, seventh, 14th and 21st postoperative days wounds were biopsied for microscopic evaluation of inflammation and repair process indicators, especially collagen, in picrosirius staining, and cell proliferation, in AgNOR staining. There was a greater deposition of collagen fibers in groups B and CB (p=0.00003) on the seventh day and formation of thicker crusts, and more organized collagen fibers on the 21st day in these groups. In conclusion, in the initial phase of healing, barbatiman extract stimulates the production of collagen fibers and promotes the formation of more exuberant crusts on the wounds and remodeling phase favors the orientation of collagen fibers, but when combined with BMMC does not stimulate wound healing in rabbits.(AU)

Identificação de Helicobacter spp. em mucosas gástrica e duodenal de cães (Canis familiaris) utilizando a técnica de Warthin-Starry / Identification of Helicobacterspp. on gastric and duodenal mucosa of dogs (Canis familiaris) by Warthin-Starry technique

Bactérias do gênero Helicobacter spp. têm sido identificadas na mucosa gástrica de diferentes espécies de mamíferos, inclusive em caninos. Pacientes infectados têm gastrite histológica; no entanto, não são todos os portadores que apresentam sinais clínicos. O objetivo deste trabalho foi identificar as bactérias sugestivas de Helicobacter spp. pela impregnação pela prata e caracterizar as lesões histopatológicas observadas. Foram analisadas amostras de mucosas gástrica e entérica de 26 caninos. Para avaliação histopatológica, foi realizada avaliação qualitativa, na qual foram atribuídos escores de ausente (-) a acentuada (+++), considerando a densidade de bactérias espiraladas por campo (400x), presença de células inflamatórias e aglomerados linfoides. Dos 26 animais avaliados, 34,6% apresentaram positividade para helicobacteriose. A gastrite foi observada em 15,38% dos animais e a maior ocorrência de bactérias do gênero Helicobacter spp. foi observada em região de corpo/fundo gástrico (23%). Em nove amostras, seis de corpo/fundo gástrico e três de antro pilórico, foram observados aglomerados linfóides associados a Helicobacter spp. Por meio de Teste de Fisher, verificou-se associação positiva entre a presença de Helicobacter spp. e agregados linfoides (p<0,001). A infecção por Helicobacter spp. está associada com a presença de aglomerados linfóides em caninos.(AU)

Bacteria of the genus Helicobacterspp. have been identified on the gastric mucosa of different species of mammals, including canines. Infected patients have histological gastritis; however, not all the animals that carry the bacteria show clinical signs. The objective of this work was to identify the bacteria suggestive of Helicobacterspp. by impregnation by silver and to characterize the histopathological lesions observed. Qualitative evaluation was performed for histological analysis, in which scores from absent (-) to severe (+++) were attributed, considering the density of spiral bacteria per field (400x), presence of inflammatory cells, and number of lymphoid aggregates. Of the 26 animals evaluated, 34.6% presented positivity for helicobacteriosis. Gastritis was observed in 15.38% of the animals and a higher occurrence of bacteria of the genus Helicobacterspp. was observed in the gastric body/fundus region (23%). In nine samples, six from gastric body/fundus and three from antrum pylorus, lymphoid clusters associated with Helicobacterspp. were observed. Fisher's Test revealed a positive association between the presence of Helicobacterspp. and lymphoid aggregates (p<0.001). Infection by Helicobacterspp. is associated with the presence of lymphoid aggregates in canines.(AU)

Identificação de Helicobacter spp. em mucosas gástrica e duodenal de cães (Canis familiaris) utilizando a técnica de Warthin-Starry / Identification of Helicobacterspp. on gastric and duodenal mucosa of dogs (Canis familiaris) by Warthin-Starry technique

Bactérias do gênero Helicobacter spp. têm sido identificadas na mucosa gástrica de diferentes espécies de mamíferos, inclusive em caninos. Pacientes infectados têm gastrite histológica; no entanto, não são todos os portadores que apresentam sinais clínicos. O objetivo deste trabalho foi identificar as bactérias sugestivas de Helicobacter spp. pela impregnação pela prata e caracterizar as lesões histopatológicas observadas. Foram analisadas amostras de mucosas gástrica e entérica de 26 caninos. Para avaliação histopatológica, foi realizada avaliação qualitativa, na qual foram atribuídos escores de ausente (-) a acentuada (+++), considerando a densidade de bactérias espiraladas por campo (400x), presença de células inflamatórias e aglomerados linfoides. Dos 26 animais avaliados, 34,6% apresentaram positividade para helicobacteriose. A gastrite foi observada em 15,38% dos animais e a maior ocorrência de bactérias do gênero Helicobacter spp. foi observada em região de corpo/fundo gástrico (23%). Em nove amostras, seis de corpo/fundo gástrico e três de antro pilórico, foram observados aglomerados linfóides associados a Helicobacter spp. Por meio de Teste de Fisher, verificou-se associação positiva entre a presença de Helicobacter spp. e agregados linfoides (p<0,001). A infecção por Helicobacter spp. está associada com a presença de aglomerados linfóides em caninos.

Bacteria of the genus Helicobacterspp. have been identified on the gastric mucosa of different species of mammals, including canines. Infected patients have histological gastritis; however, not all the animals that carry the bacteria show clinical signs. The objective of this work was to identify the bacteria suggestive of Helicobacterspp. by impregnation by silver and to characterize the histopathological lesions observed. Qualitative evaluation was performed for histological analysis, in which scores from absent (-) to severe (+++) were attributed, considering the density of spiral bacteria per field (400x), presence of inflammatory cells, and number of lymphoid aggregates. Of the 26 animals evaluated, 34.6% presented positivity for helicobacteriosis. Gastritis was observed in 15.38% of the animals and a higher occurrence of bacteria of the genus Helicobacterspp. was observed in the gastric body/fundus region (23%). In nine samples, six from gastric body/fundus and three from antrum pylorus, lymphoid clusters associated with Helicobacterspp. were observed. Fisher's Test revealed a positive association between the presence of Helicobacterspp. and lymphoid aggregates (p<0.001). Infection by Helicobacterspp. is associated with the presence of lymphoid aggregates in canines.

Improved silver carbonate impregnation method for rumen ciliate protozoa

This study proposes improvements to the pyridinated silver carbonate impregnation technique in rumen ciliate protozoa in order to provide a standardized impregnation protocol for usable for the largest possible number of species in domestic ruminants. The proposed improvements are based on results obtained from impregnation of oral infraciliature and nuclear apparatus of 36 rumen ciliate species, which are symbionts of domestic ruminants. Compared to established protocols for morphology of rumen ciliates, impregnation of a wider range of genera and species was observed with the proposed protocol. The impregnation time varied according to size, ciliate taxon, or both, varying from shorter (5 minutes) for small entodiniomorphid ciliates ( 80 m) and the genus Dasytricha, to longer (30 minutes) for large entodiniomorphid ciliates (>80 m) and the genus Isotricha. The proposed protocol is simple and easily reproducible. It is also advantageous for taxonomic, animal science, and ecological studies that aim to inventory the ruminal biota as well as understand the population structure of rumen ciliates and their relationship with the host.

Improved silver carbonate impregnation method for rumen ciliate protozoa

This study proposes improvements to the pyridinated silver carbonate impregnation technique in rumen ciliate protozoa in order to provide a standardized impregnation protocol for usable for the largest possible number of species in domestic ruminants. The proposed improvements are based on results obtained from impregnation of oral infraciliature and nuclear apparatus of 36 rumen ciliate species, which are symbionts of domestic ruminants. Compared to established protocols for morphology of rumen ciliates, impregnation of a wider range of genera and species was observed with the proposed protocol. The impregnation time varied according to size, ciliate taxon, or both, varying from shorter (5 minutes) for small entodiniomorphid ciliates ( 80 m) and the genus Dasytricha, to longer (30 minutes) for large entodiniomorphid ciliates (>80 m) and the genus Isotricha. The proposed protocol is simple and easily reproducible. It is also advantageous for taxonomic, animal science, and ecological studies that aim to inventory the ruminal biota as well as understand the population structure of rumen ciliates and their relationship with the host.(AU)

PERIODONTITE EM OVINOS: PESQUISA HISTOLÓGICA E MOLECULAR

A periodontite é um processo inflamatório de origem infecciosa que afeta os dentes e suas estruturas de suporte. Em ruminantes a periodontite causa prejuízos econômicos significativos devido à baixa produtividade dos animais acometidos. A presença de bactérias no epitélio gengival é um dos principais fatores envolvidos no início das lesões inflamatórias. Elas agem diretamente nos tecidos ou de forma indireta através de substâncias que danificam os tecidos causando a destruição dos mesmos. O objetivo desse estudo foi caracterizar histologicamente as lesões de periodontite em ovinos e identificar por meio da Reação em Cadeia da Polimerase as bactérias presentes na bolsa periodontal e sulco gengival de dois ovinos. Foram avaliados tecidos provenientes da bolsa periodontal, sulco gengival e osso alveolar de 10 ovinos pelas colorações de Hematoxilina e Eosina, Gram Histológico e Warthin-Starry (impregnação pela prata). Observou-se alterações, como bolsa periodontal contendo tecido vegetal e bactérias, pústulas superficiais, infiltrado inflamatório predominantemente linfoplasmocitário, degeneração hidrópica e acantose do epitélio. Na submucosa havia formação de tecido de granulação, edema, tumefação das células endoteliais, bactérias e infiltrado inflamatório com predominância de linfócitos e plasmócitos na região perivascular. No osso alveolar foi observada reabsorção osteoclástica e aposição óssea. No Gram Histológico foram visualizadas bactérias com morfologia predominante dos cocos em relação aos bastonetes, sendo os primeiros frequentemente Gram-negativos. A presença desses microrganismos foi visualizada com maior frequência na região do infiltrado perivascular. Na impregnação pela prata de Warthin-Starry foram observados bastonetes na lâmina própria. Em apenas um ovino havia espiroquetas em meio ao infiltrado. Pela PCR foram identificadas as bactérias Porphyromonas gingivalis, P. endodontalis, Compylobacter rectus, Tannerella forsythia, Prevotella intermédia, P. buccae, P. melanogenica, P. nigrescens, P. loescheii, Actinomices israelii, Eikenella corrodens, Treponema denticola, T. amylovorum, Fusobacterium nucleatum e F. necrophorum. Os resultados deste estudo sugerem a presença de inflamação crônica, reabsorção do osso alveolar e aposição óssea cortical na periodontite ovina. Além disso, os microbiomas dos dois ovinos utilizados na pesquisa molecular mostraram-se ser compostos basicamente pelas mesmas espécies bacterianas, as quais já estão bem estabelecidas como periodontopatógenos presentes no biofilme gengival no homem e nos animais com doença periodontal inflamatória. Nesse contexto reforça-se a importância dessas espécies na patogênese da doença.

Periodontitis is an inflammatory process of infectious origin that affects the teeth and their supporting structures causing significant economic losses due to the low productivity of the affected animals. The presence of bacteria in the gingival epithelium is one of the main factors involved in the onset of inflammatory lesions. They act directly on tissues or indirectly through substances that damage tissues. The objective of this study was to characterize histologically the lesions of periodontitis in sheep and to identify, through the Polymerase Chain Reaction, the bacteria present in the periodontal pocket and gingival sulcus of two sheep. Tissues from the periodontal pouch, gingival sulcus and alveolar bone of 10 sheep were evaluated using Hematoxylin and Eosin, Gram Histological and Warthin-Starry stains (silver impregnation). Changes were observed, such as periodontal pocket containing plant tissue and bacteria, superficial pustules, predominantly perivascular lymphoplasmacytic inflammatory infiltrate, hydropic degeneration and acanthosis of the epithelium. In the submucosa there was formation of granulation tissue, edema, swelling of the endothelial cells, bacteria and inflammatory infiltrate with predominance of lymphocytes and plasma cells in the perivascular region. In the alveolar bone, osteoclastic resorption and bone apposition were observed. In the Histological Gram, bacteria were seen with a predominant cocci morphology in relation to the rods, the first being frequently Gram-negative. The presence of these microorganisms was seen more frequently in the region of the perivascular infiltrate. When impregnated with Warthin-Starry silver, rods were observed on the lamina propria. In only one sheep had spirochetes in the middle of the identified leucocytes. We have identified by PCR the bacteria Porphyromonas gingivalis, P. endodontalis, Compylobacter rectus, Tannerella forsythia, Prevotella intermedia, P. buccae, P. melanogenica, P. nigrescens, P. loescheii, Actinomices israelii, Eikenella corrodens, Treponema denticola, T. amylovorum, Fusobacterium nucleatum e F. necrophorum. The results of this study suggest the presence of chronic inflammation, alveolar bone resorption and cortical bone apposition in ovine periodontitis. In addition, the microbiomes of the two sheep used in molecular research proved to be composed basically of the same bacterial species, which are already well established as periodontopathogens present in the gingival biofilm in man and animals with inflammatory periodontal disease. In this context, the importance of these species in the pathogenesis of the disease is reinforced.

Avaliação da técnica de coloração AgNOR em testículos de ovinos / Evaluation of the AgNOR staining method in ovine testicles

A coloração pela prata das regiões organizadoras de nucléolos (NORs) é caracterizada por marcar proteínas ligadas ao ácido ribonucleico ribossômico, avaliando a proliferação em células normais ou neoplásicas. Objetivou-se estudar, em testículos de ovinos obtidos em matadouro, a validade do uso da técnica de coloração pela prata (AgNOR) na identificação das regiões organizadoras de nucléolo (NORs) em células saudáveis da linhagem espermatogênica. Utilizaram-se 43 pares de testículos de ovinos mestiços entre seis e 10 meses de idade. Testes de Wilcoxon e Spearman foram empregados, com nível de 5%. As médias das NORs nas células das gônadas direita e esquerda foram, respectivamente: espermatogônia (8,77±1,14 e 9,04±0,96), espermatócitos (4,99±2,00 e 6,20±2,07; P<0,05), Leydig (8,05±2,82 e 7,89±2,29) e Sertoli (8,07±1,88 e 7,61±2,16; P<0,05). Houve correlação (P<0,05) entre os lados para o número de NORs: espermatócitos x Leydig (0,49); espermatócitos x Sertoli (0,49) e Leydig x Sertoli (0,96). Conclui-se ser válido o emprego da técnica AgNOR para avaliar o potencial proliferativo das células saudáveis em testículos de ovinos com prática execução e baixo custo.(AU)

The silver staining technique for AgNOR nucleolar organizer regions (NORs) is characterized by marking proteins linked to the ribosomal ribonucleic acid, evaluating cell proliferation. The aim was to study the validity of the AgNOR staining technique in the testicular cell proliferation in crossbred ovine. Forty-three pairs of ovine testicles between 6 and 10 months old were collected. Wilcoxon and Spearman tests were used with a significance level of 5%. The mean NORs count in cells of the right and left gonads were respectively: spermatogonia (8.77±1.14 and 9.04±0.96), spermatocytes (4.99±2.00 and 6.20±2.07, P<0.05), Leydig (8.05±2.82 and 7.89±2.29) and Sertoli cells (8.07±1.88 and 7.61±2.16; P<0.05). There was a correlation between the mean values for the right and left sides for the number of NORs (P<0.05) between Leydig x spermatocytes (0.49); spermatocytes x Sertoli (0.49) and Sertoli x Leydig (0.96). The study demonstrates that the AgNOR staining technique is indicated to evaluate the cell proliferative potential in ovine testis with practical implementation and low cost.(AU)

Karyotypic variation of Glanidium ribeiroi Haseman, 1911 (Siluriformes, Auchenipteridae) along the Iguazu river basin

Abstract The Iguazu river is a tributary of the left margin of the Paraná river, isolated from this basin about 22 million years ago with the appearance of the Iguazu Falls. The Iguazu river is characterized by high endemism due to two factors: its rugged topography and the old isolation caused by formation of the Iguazu Falls. This study analyzed cytogenetically a population of Glanidium ribeiroi collected in a region at the final stretch of this basin, by Giemsa staining, C-banding, impregnation by silver nitrate, and FISH with probes of 5S rDNA, 18S rDNA, telomeric sequence [TTAGGG]n, and [GATA]n repeats. The diploid number was equal to 58 chromosomes. The heterochromatin was present in the terminal region of almost all chromosomes. The Ag-NORs were simple and presented interstitially on the short arm of the submetacentric pair 14, which was confirmed by FISH with 18S rDNA probe. The 5S rDNA-FISH marked only the submetacentric pair 16 on the long arm in interstitial position. The FISH with [TTAGGG]n probe presented all telomeres labeled as expected, with an absence of Interstitial Telomeric Sequence (ITS). The repetitive [GATA]n sequence was dispersed throughout the genome, with preferential location in the terminal region of all chromosomes. The data obtained are discussed herein with other species of Auchenipteridae, and other previously analyzed populations of G. ribeiroi from the Iguazu river, verifying differences among these populations, which should be mainly related to the rugged topography of this basin.

Resumo O rio Iguaçu é um afluente da margem esquerda do rio Paraná, que foi separado desta bacia a aproximadamente 22 milhões de anos com o surgimento das Cataratas do Iguaçu. Esse rio é caracterizado por elevado endemismo, o que se deve a dois fatores: sua acidentada topografia e ao antigo isolamento proporcionado pela formação das cataratas. No presente trabalho foi analisado cromossomicamente uma população de Glanidium ribeiroi coletada em uma região que corresponde ao trecho final desse rio, através de coloração com Giemsa, bandamento-C, impregnação pelo nitrato de prata e FISH com sondas de rDNA 5S, rDNA 18S, sequência telomérica [TTAGGG]n e repetições [GATA]n. O número diploide encontrado foi igual a 58 cromossomos. A heterocromatina se mostrou dispersa na região terminal de quase todos os cromossomos. As Ag-RONs são simples e presentes no braço curto em posição intersticial do par submetacêntrico 14, o que foi confirmado pela FISH com rDNA 18S. O rDNA 5S marcou apenas o par submetacêntrico 16 no braço longo em posição intersticial. A hibridização com sonda [TTAGGG]n revelou todos os telômeros marcados conforme esperado e ausência de Sequência Telomérica Intersticial (ITS). As repetições [GATA]n se apresentaram dispersas no genoma da espécie, com preferencial localização na região terminal de todos os cromossomos. Os dados aqui obtidos são discutidos com os de outras espécies de Auchenipteridae, especialmente de G. ribeiroi anteriormente analisados do rio Iguaçu. Diferenças populacionais são constatadas em decorrência do isolamento geográfico ocasionado pelas inúmeras cachoeiras existentes no curso do rio Iguaçu.

Karyotypic variation of Glanidium ribeiroi Haseman, 1911 (Siluriformes, Auchenipteridae) along the Iguazu river basin / Variação cariotípica de Glanidium ribeiroi Haseman, 1911 (Siluriformes, Auchenipteridae) ao longo da bacia do rio Iguaçu

The Iguazu river is a tributary of the left margin of the Paraná river, isolated from this basin about 22 million years ago with the appearance of the Iguazu Falls. The Iguazu river is characterized by high endemism due to two factors: its rugged topography and the old isolation caused by formation of the Iguazu Falls. This study analyzed cytogenetically a population of Glanidium ribeiroi collected in a region at the final stretch of this basin, by Giemsa staining, C-banding, impregnation by silver nitrate, and FISH with probes of 5S rDNA, 18S rDNA, telomeric sequence [TTAGGG]n, and [GATA]n repeats. The diploid number was equal to 58 chromosomes. The heterochromatin was present in the terminal region of almost all chromosomes. The Ag-NORs were simple and presented interstitially on the short arm of the submetacentric pair 14, which was confirmed by FISH with 18S rDNA probe. The 5S rDNA-FISH marked only the submetacentric pair 16 on the long arm in interstitial position. The FISH with [TTAGGG]n probe presented all telomeres labeled as expected, with an absence of Interstitial Telomeric Sequence (ITS). The repetitive [GATA]n sequence was dispersed throughout the genome, with preferential location in the terminal region of all chromosomes. The data obtained are discussed herein with other species of Auchenipteridae, and other previously analyzed populations of G. ribeiroi from the Iguazu river, verifying differences among these populations, which should be mainly related to the rugged topography of this basin.(AU)

O rio Iguaçu é um afluente da margem esquerda do rio Paraná, que foi separado desta bacia a aproximadamente 22 milhões de anos com o surgimento das Cataratas do Iguaçu. Esse rio é caracterizado por elevado endemismo, o que se deve a dois fatores: sua acidentada topografia e ao antigo isolamento proporcionado pela formação das cataratas. No presente trabalho foi analisado cromossomicamente uma população de Glanidium ribeiroi coletada em uma região que corresponde ao trecho final desse rio, através de coloração com Giemsa, bandamento-C, impregnação pelo nitrato de prata e FISH com sondas de rDNA 5S, rDNA 18S, sequência telomérica [TTAGGG]n e repetições [GATA]n. O número diploide encontrado foi igual a 58 cromossomos. A heterocromatina se mostrou dispersa na região terminal de quase todos os cromossomos. As Ag-RONs são simples e presentes no braço curto em posição intersticial do par submetacêntrico 14, o que foi confirmado pela FISH com rDNA 18S. O rDNA 5S marcou apenas o par submetacêntrico 16 no braço longo em posição intersticial. A hibridização com sonda [TTAGGG]n revelou todos os telômeros marcados conforme esperado e ausência de Sequência Telomérica Intersticial (ITS). As repetições [GATA]n se apresentaram dispersas no genoma da espécie, com preferencial localização na região terminal de todos os cromossomos. Os dados aqui obtidos são discutidos com os de outras espécies de Auchenipteridae, especialmente de G. ribeiroi anteriormente analisados do rio Iguaçu. Diferenças populacionais são constatadas em decorrência do isolamento geográfico ocasionado pelas inúmeras cachoeiras existentes no curso do rio Iguaçu.(AU)

Cytochemical study of Rhodnius neglectus and Rhodnius prolixus salivary gland cells (Hemiptera, Triatominae) / Estudo citoquímico de células da glândula salivar de Rhodnius neglectus e Rhodnius prolixus (Hemiptera, Triatominae)

Triatomines are hematophagous bugs of medical interest in South and Central America, where they may act as invertebrate hosts of the hemoflagellate protozoa Trypanosoma cruzi (the causative of Chagas disease) and Trypanosoma rangeli (Tejera, 1920). Triatomines of Rhodnius genus have salivary gland formed by two close and independent units: the principal and the accessory. This gland secretes saliva that abounds in substances that facilitate and permit feeding. Despite this importance, there are few reports on its cytochemistry. In purpose of amplifying this understanding, in this work it was investigated the nuclear structures (chromatin and nucleolar corpuscles) of salivary gland cells of Rhodnius neglectus (Lent, 1954) and Rhodnius prolixus (Stål, 1859). The salivary glands were removed from adult insects, fixed and submitted to different cytochemical methods: lacto-acetic orcein, silver ion impregnation, Feulgen reaction, Toluidine Blue, Variant method of critical electrolyte concentration and C-banding. The results evidenced predominance of binucleated cells, with bulky and polyploid nucleus, decondensed chromatin and a large nucleolar area. In addition, cytoplasmic metachromasy and a clear association between nucleolar and heterochromatic corpuscles were observed. Such characteristics were associated with intense synthesis activity to produce saliva. Besides, the heterochromatic corpuscles observed with C Banding permitted the differentiation of sexes and species.(AU)

Os triatomíneos são insetos hematófagos que apresentam interesse médico nas América do Sul e Central por serem hospedeiros invertebrados dos protozoários hemoflagelados Trypanosoma cruzi (agente etiológico da doença de Chagas) e Trypanosoma rangeli (Tejera, 1920). Os triatomíneos do gênero Rhodnius possuem glândula salivar formada por duas unidades próximas e independentes: a principal e a acessória. Esta glândula secreta uma saliva que contém substâncias que facilitam e permitem a hematofagia. Entretanto, apesar da sua importância, poucos estudos realizaram sua análise citoquímica. No propósito de ampliar esse entendimento, neste trabalho foram investigadas as estruturas nucleares (cromatina e corpúsculos nucleolares) das células da glândula salivar de Rhodnius neglectus (Lent, 1954) e Rhodnius prolixus (Stål, 1859). As glândulas foram removidas de insetos adultos, fixadas e submetidas a diferentes métodos citoquímicos: Orceína Lacto-Acética, Impregnação por Íons de Prata, Reação de Feulgen, Azul de Toluidina, Variante da Concentração Eletrolítica Crítica e Bandamento C. Os resultados evidenciaram predomínio de células binucleadas, com núcleos volumosos e poliplóides, cromatina descondensada e uma grande área nucleolar. Além disso, foi observada metacromasia citoplasmática e uma clara associação entre os corpúsculos nucleolares e heterocromáticos. Tais características foram associadas às atividades de intensa síntese proteica para a produção de saliva. Além disso, os corpúsculos heterocromáticos observados no Bandamento C permitiram a diferenciação dos sexos e das espécies.(AU)

Helicobacter spp. em Tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla) e Tamanduá-mirim (Tamandua tetradactyla): avaliação anatomopatológica

Os tamanduás são mamíferos da América central e América do Sul, pertencentes à ordem Pilosa. O tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla) e o tamanduá-mirim (Tamandua tetradactyla) são os representantes desta ordem no Brasil. A descrição anátomo-morfológica das lesões de gastrite e úlceras em estômago de tamanduá até o presente momento não foi relacionada à presença de Helicobacter spp, porém relatada em mamíferos domésticos como o cão e o gato, e em seres humanos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ocorrência de Helicobacter spp. na presença e ausência de gastrite e úlceras e alterações anatomopatológicas do estômago de tamanduás no estado do Mato Grosso do Sul, pela avaliação anatomopatológica. Foi realizada a necropsia de 22 tamanduás sendo 14 da espécie Tamanduá-bandeira (M. tridactyla) e nove da espécie tamanduá-mirim (T. tetradactyla). Estes animais foram encontrados atropelados na estrada da região do cerrado e pantanal mato-grossense e recolhidos pela equipe do projeto Bandeiras e Rodovias localizado em Campo Grande, Mato Grosso do Sul no período de agosto de 2017 e agosto de 2019. As alterações observadas nas porções do estômago (cárdia, fundo e piloro) foram mensuradas e descritas, morfologicamente, em ficha individual, além de registro fotográfico. Os fragmentos de cada região foram seccionados e foram fixados em formol tamponado, processados e corados pelas técnicas histológicas de rotina e pela coloração de Prata (Warthin Starry). Na avaliação anatomopatológica foram observadas a presença helmintos do gênero Physaloptera na região de cárdia em cinco dos 22 animais avaliados, não havendo, porém, associação destes com a presença de úlcera. A coloração especial por impregnação de prata (Warthin-Starry) revelou a presença de bactérias helicoidais semelhantes à Helicobacter spp, infectando principalmente a região de cárdia e piloro. Foi comprovado que há presença de bactérias semelhantes à Helicobacter spp. em todas as porções dos estômagos tanto de tamanduás-bandeira como de tamanduás-mirim, porém não sendo estas diretamente associadas às lesões gástricas observadas.

Anteaters are mammals from Central and South America, belonging to the order Pilosa. The anteater (Myrmecophaga tridactyla) and the anteater (Tamandua tetradactyla) are the representatives of this order in Brazil. An abnormal morphological description of gastritis and ulcer lesions in the anteater's stomach has not been evaluated so far in the presence of Helicobacter spp, but reported in domestic mammals such as dogs and cats, and in humans. The objective of this work was to evaluate the occurrence of Helicobacter spp. in the presence and absence of gastritis and stomach ulcers and anatomopathological alterations of anteaters in the state of Mato Grosso do Sul, by pathological evaluation. A 22 necropsy was performed, 14 of which were anteater (M. tridactyla) and nine of anteater (T. tetradactyla) species. These animals were found run over on the road of the Cerrado and Pantanal region of Mato Grosso and collected by the project team Flags and highways located in Campo Grande, Mato Grosso do Sul. measured and described, morphologically, in an individual form, in addition to the photographic record. The fragments were fixed, processed and stained by routine histological techniques. Pathological evaluation was observed with the presence of helminths of the genus Cardiology Region in five of the 22 animals that had no association with the presence of ulcers. A special silver impregnation (WarthinStarry) stain revealed the presence of Helicobacter spp-related helical bacteria, mainly infecting the cardia and pylorus region. Similar bacteria have been shown to be present in Helicobactes spp. in all portions of the giant anteater stocks such as baby anteaters, but these are not directly associated with the gastric lesions observed.

Alterações anatomo-histopatológica do trato gastrointestinal de tartarugas marinhas de vida livre e investigação da relação com detritos inorgânicos, parasitas e Helicobacter spp.

Tartarugas marinhas de vida livre são constantemente expostas à fatores estressores e agressões fisiológicas. O objetivo desta tese foi relatar e quantificar a ocorrência e associações entre Helicobacter spp., parasitas e lesão em esôfago e estômago de Tartarugas marinha de vida livre encontradas mortas nas praias da Microrregião dos Lagos, Rio de Janeiro (RJ), por meio das análises bacterioscópica, anatomopatológica e imuno-histoquímica. Neste estudo foram submetidas à necropsia e análise 25 tartarugas marinhas de vida livres e realizado um estudo retrospectivo dos arquivos de necropsia de tartarugas marinhas arquivadas em Iguaba Grande. Amostras estomacais e esofágicas foram coletadas e submetidas ao teste bacterioscópico, de urease, histológica, impregnação por prata (métodos de Whatin-Starry) e à técnica de imuno-histoquímica (IHQ). Com base nos dados foram produzidos, e ou estão em fase de produção, artigos científicos que serão aqui transcritos em forma de capítulos. O primeiro capítulo aborda o estudo retrospectivo de 186 fichas de necropsia de tartarugas marinhas e teve como objetivo descrever as características observadas entre as tartarugas marinhas de vida livre que ingeriram detritos inorgânicos de origem antropogênica em comparação com as que não ingeriram. O estudo revelou que quase metade das mortes destes quelônios no estado do RJ resultou da ingestão de lixo. Demonstrou que a ingestão se repete ao longo da vida e o intestino grosso era o local com maior acúmulo. No segundo capítulo foram descritos as lesões gástricas de 22 tartarugas marinhas, sendo observado gastrites em 86.4% destes animais, parasitismo em 81.3% e alterações morfológicas celulares adaptativas em 59,1%. No terceiro capítulo foi descrito 15 casos de esofagite caseosa em Chelonia mydas, todos em região de esfíncter gastroesofágico. Estas esofagites apresentaram diferentes graus de intensidade, podendo evoluir para obstruição esofágica. No quarto capítulo, foi descrito a identificação de bactérias do gênero Helicobacter no estômago de 20 tartarugas marinhas de vida livre através das análises bacterioscópicas, anatomo-patológicas e imuno-histoquímica. Este estudo demonstrou enfermidades sofridas por tartarugas marinhas de vida livre oriundas da Microrregião do Lagos, RJ. Estes quêlonios estavam diretamente expostos à agressões do ambiente, como ingestão do lixo disperso na água e de parasitos que residem o ambiente onde vivem. A identificação de Helicobacter sp. nestas tartarugas forneceu novos parâmetros para a identificação da causa de agressão à estes animais.

Free-living sea turtles are constantly exposed to stressors and physiological aggressions. The purpouse of this thesis was to report and quantify the occurrence and associations between Helicobacter spp., Parasites and esophageal and stomach lesions of free-living marine turtles found dead in the beaches of the microregion of Lagos, Rio de Janeiro, through bacterioscopic analysis. anatomopathological and immunohistochemical. In this study, 25 free-living sea turtles were necropsied and analyzed and a retrospective study of archival sea turtle necropsy archives in Iguaba Grande was performed. Stomach and esophageal samples were collected and submitted to bacterioscopic, urease, histological, silver impregnation (Whatin-Starry methods) and immunohistochemistry (IHQ). Based on the data, scientific articles have been produced, or are being produced, which will be transcribed here as chapters. The first chapter deals with the retrospective study of 186 sea turtle necropsy records and aimed to describe the characteristics observed among freeliving sea turtles that ingested inorganic debris of anthropogenic origin compared with those that did not ingest. The study revealed that almost half of the deaths of these turtles in the state of RJ resulted from the ingestion of garbage. It showed that ingestion is repeated throughout life and the large intestine was the site with the highest accumulation. In the second chapter, gastric lesions of 22 sea turtles were described, with gastritis being observed in 86.4% of these animals, parasitism in 81.3% and adaptive cellular morphological changes in 59.1%. In the third chapter 15 cases of caseous esophagitis in Chelonia mydas were described, all in the gastroesophageal sphincter region. These esophagitis presented different degrees of intensity and may progress to esophageal obstruction. In the fourth chapter, the identification of bacteria of the genus Helicobacter in the stomach of 20 free-living sea turtles was described through bacterioscopic, pathological and immunohistochemical analyzes. These chelonios were directly exposed to environmental aggressions, such as ingestion of waterborne waste and parasites residing in the environment where they live. The identification of Helicobacter sp. These turtles provided new parameters for identifying the cause of aggression to these animals.

Cytochemical study of Rhodnius neglectus and Rhodnius prolixus salivary gland cells (Hemiptera, Triatominae) / Estudo citoquímico de células da glândula salivar de Rhodnius neglectus e Rhodnius prolixus (Hemiptera, Triatominae)

Triatomines are hematophagous bugs of medical interest in South and Central America, where they may act as invertebrate hosts of the hemoflagellate protozoa Trypanosoma cruzi (the causative of Chagas’ disease) and Trypanosoma rangeli (Tejera, 1920). Triatomines of Rhodnius genus have salivary gland formed by two close and independent units: the principal and the accessory. This gland secretes saliva that abounds in substances that facilitate and permit feeding. Despite this importance, there are few reports on its cytochemistry. In purpose of amplifying this understanding, in this work it was investigated the nuclear structures (chromatin and nucleolar corpuscles) of salivary gland cells of Rhodnius neglectus (Lent, 1954) and Rhodnius prolixus (Stål, 1859). The salivary glands were removed from adult insects, fixed and submitted to different cytochemical methods: lacto-acetic orcein, silver ion impregnation, Feulgen reaction, Toluidine Blue, Variant method of critical electrolyte concentration and C-banding. The results evidenced predominance of binucleated cells, with bulky and polyploid nucleus, decondensed chromatin and a large nucleolar area. In addition, cytoplasmic metachromasy and a clear association between nucleolar and heterochromatic corpuscles were observed. Such characteristics were associated with intense synthesis activity to produce saliva. Besides, the heterochromatic corpuscles observed with C Banding permitted the differentiation of sexes and species.

Os triatomíneos são insetos hematófagos que apresentam interesse médico nas América do Sul e Central por serem hospedeiros invertebrados dos protozoários hemoflagelados Trypanosoma cruzi (agente etiológico da doença de Chagas) e Trypanosoma rangeli (Tejera, 1920). Os triatomíneos do gênero Rhodnius possuem glândula salivar formada por duas unidades próximas e independentes: a principal e a acessória. Esta glândula secreta uma saliva que contém substâncias que facilitam e permitem a hematofagia. Entretanto, apesar da sua importância, poucos estudos realizaram sua análise citoquímica. No propósito de ampliar esse entendimento, neste trabalho foram investigadas as estruturas nucleares (cromatina e corpúsculos nucleolares) das células da glândula salivar de Rhodnius neglectus (Lent, 1954) e Rhodnius prolixus (Stål, 1859). As glândulas foram removidas de insetos adultos, fixadas e submetidas a diferentes métodos citoquímicos: Orceína Lacto-Acética, Impregnação por Íons de Prata, Reação de Feulgen, Azul de Toluidina, Variante da Concentração Eletrolítica Crítica e Bandamento C. Os resultados evidenciaram predomínio de células binucleadas, com núcleos volumosos e poliplóides, cromatina descondensada e uma grande área nucleolar. Além disso, foi observada metacromasia citoplasmática e uma clara associação entre os corpúsculos nucleolares e heterocromáticos. Tais características foram associadas às atividades de intensa síntese proteica para a produção de saliva. Além disso, os corpúsculos heterocromáticos observados no Bandamento C permitiram a diferenciação dos sexos e das espécies.

Transferibilidade de primers heterólogos para Brycon falcatus e análise citogenética em Oreochromis niloticus

O aumento da população humana mundial reflete diretamente na demanda por alimentos, com destaque a produção e o consumo de peixe, importante fonte de proteína de alto valor nutricional e excelente quantidade e qualidade de vitaminas e minerais. O Brasil é o maior mercado da América Latina com grande e importante potencial de exploração econômica devido a grande variedade de peixes nativos e não nativos. Por isso, potencializar a produção de peixes através de ferramentas que gerem informações relevantes deve ser buscado. Marcadores moleculares microssatélites são importantes ferramentas para a obtenção de informações genéticas, que visam analisar a variabilidade genética de populações e estoques de peixes. Marcadores citogenéticos auxiliam na identificação de espécies e melhor conhecimento cariotípico, facilitando o aprimoramento de cultivo de espécies. Brycon falcatus tem grande importância socioeconômica e biológica no Brasil, porém, o conhecimento genético da espécie ainda é escasso. Oreochromis niloticus é destaque na produção aquícola mundial e brasileira, principalmente devido ao emprego e desenvolvimento de programas de melhoramento genético. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a transferibilidade de primers heterólogos para Brycon falcatus, e analisar citogeneticamente Oreochromis niloticus variedade Tilamax. Foram avaliados 28 primers heterólogos aplicados em 22 indivíduos de Brycon falcatus amostrados ao longo do Rio Araguaia no Estado do Mato Grosso, a partir de fragmentos de nadadeira caudal (0,5 cm2 aproximadamente). Análise de amostras de sangue de 40 indivíduos de Oreochromis niloticus (16 indivíduos da geração de reprodutores (G7), 10 indivíduos da geração subsequente (G8) e 14 indivíduos comerciais (plantel comercial PC)), provenientes da Estação de Piscicultura Codapar/UEM, no estado do Paraná, também foram analisadas. Primers heterólogos de sete espécies diferentes apresentaram resultados satisfatórios de amplificação cruzada com B. falcatus BoM5 (B. opalinus); Bh8, Bh13 e Bh16 (B. hilarii); Borg59 (Brycon orbignyanus); Par80 (Prochilodus argenteus) e Cm1A8 (Colossoma macropomum). Primers com ausência de amplificação, inespecificidade ou monomorfismo, foram excluídos das análises. Os parâmetros genéticos e o PIC (Conteúdo de informação polimórfica) demonstraram a viabilidade na utilização dos primers para análises genéticas populacionais. Os resultados validaram a utilização de primers de diferentes espécies e gêneros em B. falcatus, o que viabilizará a realização de futuros estudos genéticos nessa espécie, colaborando para melhor entendimento de amplificação cruzada ou até o desenvolvimento de futura amplificação específica. Em Oreochromis niloticus os resultados revelaram que as gerações (G7 e G8) e o plantel comercial (PC) apresentaram número diplóide (2n) igual 44, as regiões organizadoras de nucléolos pela impregnação de nitrato de prata (AgRONs) foram evidenciadas em até quatro cromossomos e a hibridização fluorescente in situ, com sonda de DNAr 18S, detectou sinais em 5 cromossomos, localizados em posição terminal do braço curto. A heterocromatina, pela técnica de banda C, teve ampla distribuição em regiões centroméricas, ricas em pares de base CG (citosina e guanina). Os resultados do presente estudo coincidem com os dados disponíveis na literatura e não apresentaram diferenças quanto às avaliações citogenéticas. Não foram observadas alterações nas características cromossômicas das gerações e o plantel comercial analisados de Oreochromis niloticus (variedade Tilamax).

The increase in the world's human population directly reflects the demand for food, especially fish production and consumption, an important source of protein with high nutritional value and excellent quantity and quality of vitamins and minerals. Brazil is the largest market in Latin America with great and important potential for economic exploitation due to the wide variety of native and non-native fish. Therefore, enhancing fish production through tools that generate relevant information should be sought. Microsatellite molecular markers are important tools for obtaining genetic information to analyze the genetic variability of fish populations and stocks. Cytogenetic markers assist in the identification of species and better karyotypic knowledge, facilitating the enhancement of species cultivation. Brycon falcatus has great socioeconomic and biological importance in Brazil, however, the genetic knowledge of the species is still scarce. Oreochromis niloticus is prominent in world and Brazilian aquaculture production, mainly due to the use and development of breeding programs. The present work aimed to evaluate the transferability of heterologous primers to Brycon falcatus, and to cytogenetically analyze Oreochromis niloticus variety Tilamax. Twenty-eight heterologous primers applied to 22 Brycon falcatus individuals sampled along the Araguaia River in Mato Grosso State were evaluated from caudal fin fragments (approximately 0.5 cm2). Analysis of blood samples from 40 individuals of Oreochromis niloticus (16 individuals from breeding generation (G7), 10 individuals from subsequent generation (G8) and 14 commercial individuals (commercial squad - PC)) from Codapar / UEM Fish Farming Station, in the state of Paraná, were also analyzed. Heterologous primers of seven different species showed satisfactory results of B. falcatus BoM5 (B. opalinus) cross amplification; Bh8, Bh13 and Bh16 (B. hilarii); Borg59 (Brycon orbignyanus); Par80 (Prochilodus argenteus) and Cm1A8 (Colossoma macropomum). Primers with no amplification, nonspecificity or monomorphism were excluded from the analysis. Genetic parameters and PIC (Polymorphic Information Content) demonstrated the feasibility of using primers for population genetic analysis. The results validated the use of primers of different species and genera in B. falcatus, which will enable future genetic studies in this species, contributing to a better understanding of cross amplification or even the development of future specific amplification. In Oreochromis niloticus the results revealed that the generations (G7 and G8) and the commercial squad (PC) presented diploid number (2n) equal to 44, the nucleolus organizing regions by silver nitrate impregnation (AgRONs) were evidenced in up to four chromosomes. and in situ fluorescent hybridization with 18S rDNA probe detected signals on 5 chromosomes, located in the terminal position of the short arm. Heterochromatin, by C band technique, was widely distributed in centromeric regions, rich in CG base pairs (cytosine and guanine). The results of the present study coincide with the data available in the literature and showed no differences regarding cytogenetic evaluations. No changes were observed in the chromosomal characteristics of the generations and the commercial squad of Oreochromis niloticus (Tilamax variety).