Chemical composition and fatty acid profile of a seed-propagated elephant grass genotype, ensiled at different regrowth ages / Composição química e perfil de ácidos graxos de um genótipo de capim-elefante propagado por sementes, ensilado em diferentes idades de rebrota

This study aimed to evaluate the chemical composition and fatty acid (FA) profile of forage and silage of a seed-propagated elephant grass genotype called "PCEA" harvested at 75, 90, 105 and 120 days of regrowth. A randomized block design with five replications was used. The results were analyzed by mixed models (P < 0.05) that included treatment (regrowth age) as a fixed effect and block as a random effect. Linear and quadratic effects of the treatments were analyzed using orthogonal contrasts. There was linear increase on total dry matter (DM) forage production and linear decrease on leaf:stem ratio as a function of the increase in regrowth age (P < 0.05). In response to the advance of regrowth age, "PCEA" forage and silage showed linear decreases on crude protein (CP) content (g kg-1 DM) and in vitro DM digestibility (g kg-1); and linear increases on DM (g kg-1), lignin (g kg-1 DM), and acid detergent insoluble protein (%CP) contents (P < 0.05). All "PCEA" silages had DM content < 200 g kg-1, pH > 4.0, and ammonia N content > 10% total N. In response to the advance of regrowth age, linear decreases (P < 0.05) were observed on forage and silage linoleic, α-linolenic, and total FA contents (g kg-1 DM). From 75 to 120 days of regrowth, the seed-propagated elephant grass genotype "PCEA" presents forage and silage with low nutritional quality for feeding dairy cattle, moderate to high linoleic acid contents, and moderate to low α-linolenic acid contents. The "PCEA" forage and silage obtained from 75 to 120 days of regrowth presents low potential for production of milk naturally enriched with bioactive FAs beneficial to human health.(AU)

Objetivou-se por meio deste estudo avaliar a composição química e o perfil de ácidos graxos (AG) da forragem e da silagem de um genótipo de capim-elefante propagado por sementes denominado "PCEA", colhido aos 75, 90, 105 e 120 dias de rebrota. O delineamento experimental foi em blocos casualizados com cinco repetições, sendo os resultados analisados por modelos mistos (P<0,05), que incluíram tratamento (idade de rebrota) como efeito fixo, e bloco como efeito aleatório. Os efeitos lineares e quadráticos dos tratamentos foram analisados por contrastes ortogonais. Houve aumento linear na produção total de matéria seca (MS) de forragem e decréscimo linear na relação folha:colmo, em função do aumento na idade de rebrota do capim (P < 0,05). Em resposta ao avanço na idade de rebrota, houve redução linear no teor de proteína bruta (PB) (g kg-1 MS) e na digestibilidade in vitro da MS (g kg-1); e aumento linear nos teores de MS (g kg-1), lignina (g kg-1 MS) e proteína insolúvel em detergente ácido (% da PB) da forragem e da silagem de "PCEA" (P < 0,05). Todas as silagens produzidas apresentaram teor de MS < 200 g kg-1, pH > 4,0 e teor de N amoniacal > 10% do N total. Em resposta ao avanço da idade de rebrota, decréscimos lineares (P < 0,05) foram observados nos teores (g kg-1 MS) dos ácidos linoleico, α-linolênico e AG totais. De 75 a 120 dias de rebrota, o genótipo de capim-elefante propagado por sementes "PCEA" apresenta forragem e silagem com baixa qualidade nutricional para alimentação do gado leiteiro, com moderado a alto teor de ácido linoleico, e moderado a baixo teor de ácido α-linolênico. A forragem e a silagem do "PCEA" obtidas de 75 a 120 dias de rebrota apresentam baixo potencial para produção de leite naturalmente enriquecido com AG bioativos benéficos à saúde humana.(AU)

Anthelmintic activity of the ethanolic extract of Carapa guianensis (Meliaceae) on gastrointestinal nematodes of sheep in the Western Amazon / Atividade anti-helmíntica do extrato etanólico de Carapa guianensis (Meliaceae) em nematóides gastrointestinais de ovinos da Amazônia Ocidental

The present study aimed to evaluate the anthelmintic effect of Carapa guianensis (andiroba) on gastrointestinal nematodes in sheep naturally infected in the Western Amazon. Toxicity tests with Artemia salina identified that the ethanolic extracts of the root and stem of andiroba showed an LC50% equal to 530 µg ml-1 and 170 µg ml-1, respectively. As concentrations 1.06mg / ml (andiroba root) and 0.34mg ml-1 (andiroba stem) were tested in groups of crossbred sheep, eaten from four to six months and weighing approximately 19.9 kg naturally infected by gastrintestinal nematodes. In addition, there will be a total of two treated groups and two control groups (negative and positive - 7.5% closantel). Foram extracts applied orally in a single treatment days 1,2,3,4,15,16,17,18. Or treatment lasted 30 days. Samples of fezes and blood foram collected at intervals of seven and 15 days respectively to assess the parasitic and hematological profile. The results showed a reduction in parasitic load of 86% and 59%, respectively, for the root and stem of andiroba in egg count per gram of feces, while in the group treated with closantel 7.5% the reduction was 66%. Regarding the number of third stage larvae recovered from sheep after treatment, it was observed that the groups treated with andiroba root and stem differed (p < 0.05) from the control group, with a reduction in the percentage of larvae from 70 and 55%, respectively. The phytochemical tests in the present study revealed the presence of bioactive metabolites that may be responsible for the anthelmintic activity. As for the hematocrit, there was no statistical difference in its values in the groups treated with andiroba root and stem, that is, in some way there was interference on the adult forms of the nematodes that compromised the hematophagism. Therefore, the extract of Carapa guianensis has anthelmintic potential, being a good alternative in the control of sheep endoparasitosis.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito anti-helmíntico da Carapa guianensis (andiroba) sobre nematóides gastrointestinais em ovinos naturalmente infectados na Amazônia Ocidental. Ensaios de toxicidade com Artemia salina identificaram que os extratos etanólicos da raiz e caule da andiroba apresentaram uma CL50% igual a 530 µg ml-1 e 170 µg ml-1, respectivamente. As concentrações 1,06mg/ ml (raiz de andiroba) e 0,34mg ml-1(caule de andiroba) foram testadas em grupos de ovinos mestiços, com idade média de quatro a seis meses e peso de aproximadamente de 19,9 kg naturalmente infectados por nematódeos gastrintestinais. Assim totalizaram dois grupos tratados e dois grupos controles (negativo e positivo - closantel 7,5%). Os extratos foram aplicados oralmente em dose única nos dias 1,2,3,4, 15,16,17,18 de tratamento. O tratamento durou 30 dias. Amostras de fezes e sangue foram coletados nos intervalos de sete e 15 dias respectivamente para avaliar o perfil parasitário e hematológico. Os resultados demonstraram uma redução da carga parasitária de 86% e 59%, respectivamente, para a raiz e caule da andiroba na contagem de ovos por grama de fezes, enquanto no grupo tratado com closantel 7,5 % a redução foi de 66%. Com relação ao número de larvas de terceiro estágio recuperados de ovinos após o tratamento, observou-se que os grupos tratados com raiz e caule de andiroba diferiram (p < 0,05) do grupo controle, com uma redução na porcentagem de larvas de 70 e 55%, respectivamente. Os testes fitoquímicos deste estudo revelaram a presença de metabólitos bioativos que podem ser responsáveis pela atividade anti-helmíntica. Quanto ao hematócrito, não houve diferença estatística nos seus valores nos grupos tratados com raiz e caule de andiroba, ou seja, de alguma forma houve interferência sobre as formas adultas dos nematóides que comprometeu o hematofagismo. Portanto, o extrato da Carapa guianensis apresenta potencial anti-helmíntico, sendo uma boa alternativa no controle das endoparasitoses de ovinos.(AU)

Study of comparative proteome between normal and inverted karyotypes of human mesenchymal stem cells

Multipotent mesenchymal stem cells have been expanded in vitro for cellular therapy in numerous clinical settings without standardized culture conditions or quality-control schemes. The in vitro expansion is necessary to obtain sufficient cells for clinical applications. However, the expansion may induce genetic and functional abnormalities which may affect the safety and functionality of MSC, especially the chromosomal stability. This study aimed to investigate the protein profile of umbilical cord-derived MSC with normal and inverted karyotypes after expansion in the laboratory. Mass spectrometry analysis was performed and the Bradford method, Scaffold software, String and Cytoscape databases were employed to measure and characterize the protein content of umbilical cord-derived MSC. Networks of protein interactions, hub and bottleneck proteins were identified by proteomics and systems biology approaches. We found that proteins related to cellular stress were super expressed in inverted karyotype cells. Moreover, a high expression of Serpine 1, RHOA, and CTSB was found in these cells, which are proteins related to cancer. The albumin and ubiquitin proteins have been associated with a positive prognosis in cancer and cellular stress, and were up- and down-regulated in normal karyotype cells, respectively. The results suggests that the paracentric inversion inv(3)(p25p13) induced some type of cellular stress and genetic instability in human mesenchymal stem cells. These analyses showed the importance of carrying out studies related to the genetic instability of human mesenchymal stem cells using the protein expression profile as a parameter.

Study of comparative proteome between normal and inverted karyotypes of human mesenchymal stem cells

Multipotent mesenchymal stem cells have been expanded in vitro for cellular therapy in numerous clinical settings without standardized culture conditions or quality-control schemes. The in vitro expansion is necessary to obtain sufficient cells for clinical applications. However, the expansion may induce genetic and functional abnormalities which may affect the safety and functionality of MSC, especially the chromosomal stability. This study aimed to investigate the protein profile of umbilical cord-derived MSC with normal and inverted karyotypes after expansion in the laboratory. Mass spectrometry analysis was performed and the Bradford method, Scaffold software, String and Cytoscape databases were employed to measure and characterize the protein content of umbilical cord-derived MSC. Networks of protein interactions, hub and bottleneck proteins were identified by proteomics and systems biology approaches. We found that proteins related to cellular stress were super expressed in inverted karyotype cells. Moreover, a high expression of Serpine 1, RHOA, and CTSB was found in these cells, which are proteins related to cancer. The albumin and ubiquitin proteins have been associated with a positive prognosis in cancer and cellular stress, and were up- and down-regulated in normal karyotype cells, respectively. The results suggests that the paracentric inversion inv(3)(p25p13) induced some type of cellular stress and genetic instability in human mesenchymal stem cells. These analyses showed the importance of carrying out studies related to the genetic instability of human mesenchymal stem cells using the protein expression profile as a parameter.(AU)

Antimicrobial activity and chemical characterization of the bark decoction of cumaru stem / Atividade antimicrobiana e caracterização química do decocto da casca do caule de cumaru

The plant, Amburana cearensis A. C. Smith (Fabaceae), commonly called cumaru, is widespread in the Caatinga cearense, a less known ecosystem in Brazil. A. cearensis is rich in several compounds like protocatechuic acid, tannins, coumarin, flavonoids and phenolic heterosides, such as amburosides A and B, that have been isolated. The aim of this study was to determine the antimicrobial potential and draw the chemical profile of the distinct characteristics of A. cearensis stem bark decoction, for its possible potential as a food conservation agent. The chemical compounds were characterized by one- and two-dimensional 1H and 13C NMR analyses and Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LCMS). The compounds of coumarin, amburosides A and B, and glycosylated (Z)-o-coumaric acid. Using the plaque microdilution technique, the antimicrobial action was tested on Escherichia coli, Salmonella Enteritidis, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus and Listeria monocytogenes. The decoction demonstrated antimicrobial activity on Gram-positive bacteria. This was encouraging because natural antimicrobials are beneficial for food production, as they can inhibit the pathogenic microorganisms and boost the quality of hygiene and cleanliness.(AU)

Amburana cearensis A. C. Smith (Fabaceae) é uma planta comum na Caatinga cearense, onde é popularmente conhecida como cumaru. Vários compostos têm sido isolados de A. cearensis, incluindo ácido protocatecúico, taninos, cumarina, flavonóides e heterosídeos fenólicos, como por exemplo os amburosídeos A e B. O objetivo desse estudo foi avaliar o potencial antimicrobiano e caracterizar o perfil químico do decocto da casca do caule de A. cearensis, visando a sua possível utilização na conservação de alimentos. A caracterização dos compostos químicos foi realizada pelas análises de RMN uni e bidimensionais de 1H e 13C, e cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa. Foram identificados a cumarina, os amburosídeos A e B, e o ácido (Z)-o-cumárico glicosilado. A atividade antimicrobiana foi realizada pela metodologia de microdiluição em placa sobre Escherichia coli, Salmonella Enteritidis, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus e Listeria monocytogenes. O decocto mostrou atividade antimicrobiana sobre bactérias Gram-positivas. Antimicrobianos naturais podem oferecer vantagens para a produção de alimentos, inibindo microorganismos patogênicos e melhorando a qualidade higiênico-sanitária.(AU)

Hypsometric and volumetric equations and taper functions for Pinus spp / Equações hipsométricas, volumétricas e funções de afilamento para Pinus spp

The use of tools such as forest modeling becomes increasingly important in forest planning as they generate accurate estimates of the stands production. The aim of this study was to adjust the hypsometric, volumetric, and taper models for four Pinus species in the Mountain region of Santa Catarina in Brazil. The species Pinus taeda, Pinus elliottii, Pinus greggii, and Pinus patula were all planted and maintained under the same forest management plan. The 14-year-old stand is located in the municipality of Correia Pinto, Santa Catarina, Brazil. For the analyses, mathematical models were adjusted based on data from the forest census. The following statistical criteria were used to choose the most appropriate model: the adjusted coefficient of determination (R² adj), standard error (Sy.x%) and graphic residual analysis. The hypsometric equations presented relatively low values for the adjusted R², ranging from 0.14 to 0.35 for the species, while the values for Sy.x% ranged between 7.67% and 4.86%. As for the volumetric equations, the adjusted R² was above 0.91, and Sy.x% was under 10%. With regard to the taper functions, the Hradetzky model most appropriately described the stem profile of the species, with values above 0.96 for the adjusted R² and under 10% for Sy.x%. The Naslund, Spurr I and II, and modified Naslund models were selected to estimate the species volumetry.(AU)

O emprego de ferramentas como a modelagem florestal torna-se cada vez mais importantes no planejamento florestal pois geram estimativas acuradas da produção dos povoamentos. O objetivo do estudo foi realizar o ajuste de modelos hipsométricos, volumétricos e de afilamento para quatro espécies de Pinus na Região Serrana de Santa Catarina. As espécies utilizadas foram Pinus taeda, Pinus elliottii, Pinus greggii e Pinus patula todas implantadas e conduzidas sobre o mesmo plano de manejo florestal. O povoamento está localizado no município de Correia Pinto, Santa Catarina, com 14 anos de idade. Para as análises foram ajustados modelos matemáticos com base nos dados do censo florestal. Para a escolha do melhor modelo utilizaram-se os critérios estatísticos: o coeficiente de determinação ajustado (R²aj), erro padrão da estimativa (Syx%), análise gráfica dos resíduos. As equações hipsométricas apresentaram R² ajustado relativamente baixos, com valores variando entre 0,14 e 0,35 para as espécies e Syx% variando entre 7,67% a 4,86%. Em relação as equações volumétricas, o R² ajustado ficou acima de 0,91 e o Syx% foi inferior a 10%. No que diz respeito as funções de afilamento o melhor modelo para descrever o perfil do fuste das espécies foi Hradetzky, com R² ajustado acima de 0,96 e Syx% inferior a 10%. Os modelos de Naslund, Spurr I e II e Naslund modificado foram selecionados(AU)

Hypsometric and volumetric equations and taper functions for Pinus spp / Equações hipsométricas, volumétricas e funções de afilamento para Pinus spp

The use of tools such as forest modeling becomes increasingly important in forest planning as they generate accurate estimates of the stands production. The aim of this study was to adjust the hypsometric, volumetric, and taper models for four Pinus species in the Mountain region of Santa Catarina in Brazil. The species Pinus taeda, Pinus elliottii, Pinus greggii, and Pinus patula were all planted and maintained under the same forest management plan. The 14-year-old stand is located in the municipality of Correia Pinto, Santa Catarina, Brazil. For the analyses, mathematical models were adjusted based on data from the forest census. The following statistical criteria were used to choose the most appropriate model: the adjusted coefficient of determination (R² adj), standard error (Sy.x%) and graphic residual analysis. The hypsometric equations presented relatively low values for the adjusted R², ranging from 0.14 to 0.35 for the species, while the values for Sy.x% ranged between 7.67% and 4.86%. As for the volumetric equations, the adjusted R² was above 0.91, and Sy.x% was under 10%. With regard to the taper functions, the Hradetzky model most appropriately described the stem profile of the species, with values above 0.96 for the adjusted R² and under 10% for Sy.x%. The Naslund, Spurr I and II, and modified Naslund models were selected to estimate the species volumetry.

O emprego de ferramentas como a modelagem florestal torna-se cada vez mais importantes no planejamento florestal pois geram estimativas acuradas da produção dos povoamentos. O objetivo do estudo foi realizar o ajuste de modelos hipsométricos, volumétricos e de afilamento para quatro espécies de Pinus na Região Serrana de Santa Catarina. As espécies utilizadas foram Pinus taeda, Pinus elliottii, Pinus greggii e Pinus patula todas implantadas e conduzidas sobre o mesmo plano de manejo florestal. O povoamento está localizado no município de Correia Pinto, Santa Catarina, com 14 anos de idade. Para as análises foram ajustados modelos matemáticos com base nos dados do censo florestal. Para a escolha do melhor modelo utilizaram-se os critérios estatísticos: o coeficiente de determinação ajustado (R²aj), erro padrão da estimativa (Syx%), análise gráfica dos resíduos. As equações hipsométricas apresentaram R² ajustado relativamente baixos, com valores variando entre 0,14 e 0,35 para as espécies e Syx% variando entre 7,67% a 4,86%. Em relação as equações volumétricas, o R² ajustado ficou acima de 0,91 e o Syx% foi inferior a 10%. No que diz respeito as funções de afilamento o melhor modelo para descrever o perfil do fuste das espécies foi Hradetzky, com R² ajustado acima de 0,96 e Syx% inferior a 10%. Os modelos de Naslund, Spurr I e II e Naslund modificado foram selecionados

Isolamento e diferenciação das células-tronco da polpa dentária canina em células progenitoras neurais / Isolation and differentiation of canine dental pulp stem cells in neural progenitor cells

O objetivo deste estudo foi verificar a capacidade de diferenciação das células-tronco da polpa dentária canina em células progenitoras neurais bem como quantificar obtenção e viabilidade celular, durante três passagens em cultura. As células foram extraídas da polpa dentária de dois cadáveres caninos, com aproximadamente dez meses de idade, que foram a óbito em decorrência de traumatismo automotivo. Após três subculturas, realizou-se avaliação da viabilidade celular por quantificação em câmara de Neubauer. A partir disso, induziu-se diferenciação neural em meio de cultura neurobasal (Gibco™), com células aderidas ao plástico ou suspensas em placas tratadas com agarose. Após sete e 14 dias em cultivo indutor, observou-se morfologia e perfil imunofenotípico utilizando citometria de fluxo e imunocitoquímica fluorescente. Aos 14 dias as células apresentaram alto grau de expressão para marcadores anti-nestina e anti-glial fibrillary acidic protein (anti-GFAP). Anteriormente, obteve-se ao 25º dia, média de 18x106 células viáveis indiferenciadas oriundas do tecido pulpar. Sugere-se que as células-tronco indiferenciadas da polpa dentária canina apresentem índices satisfatórios de diferenciação em células progenitoras neurais, aderidas ou suspensas em cultura. A polpa dentária dos dentes decíduos caninos, fornece células indiferenciadas viáveis em quantidade adequada.(AU)

The objective of this study was to verify the differentiation capacity of canine tooth pulp stem cells in neural progenitor cells as well as to quantify the attainment and viability during three culture passages. The cells were extracted from the dental pulp of two canine cadavers, with approximately ten months of age, which died due to automotive trauma. After three subcultures, cell viability evaluation was performed by Neubauer chamber quantification. Neural differentiation was induced in neurobasal culture medium (Gibco ™), with cells adhered to the plastic or suspended in agarose-treated plates. After seven and 14 days in inducer culture, morphology and immunophenotypic profile were observed using flow cytometry and fluorescent immunocytochemistry. At 14 days the cells had a high degree of expression for anti-nestin and anti-glial fibrillary acidic (anti-GFAP) markers. Previously, an average of 18x106 undifferentiated viable cells from the pulp tissue were obtained on the 25th day. It is suggested that the undifferentiated canine pulp stem cells present satisfactory differentiation indices in neural progenitor cells, adhered or suspended in culture. The dental pulp of deciduous canine teeth provides viable undifferentiated cells in adequate quantity.(AU)

Isolamento e diferenciação das células-tronco da polpa dentária canina em células progenitoras neurais / Isolation and differentiation of canine dental pulp stem cells in neural progenitor cells

O objetivo deste estudo foi verificar a capacidade de diferenciação das células-tronco da polpa dentária canina em células progenitoras neurais bem como quantificar obtenção e viabilidade celular, durante três passagens em cultura. As células foram extraídas da polpa dentária de dois cadáveres caninos, com aproximadamente dez meses de idade, que foram a óbito em decorrência de traumatismo automotivo. Após três subculturas, realizou-se avaliação da viabilidade celular por quantificação em câmara de Neubauer. A partir disso, induziu-se diferenciação neural em meio de cultura neurobasal (Gibco™), com células aderidas ao plástico ou suspensas em placas tratadas com agarose. Após sete e 14 dias em cultivo indutor, observou-se morfologia e perfil imunofenotípico utilizando citometria de fluxo e imunocitoquímica fluorescente. Aos 14 dias as células apresentaram alto grau de expressão para marcadores anti-nestina e anti-glial fibrillary acidic protein (anti-GFAP). Anteriormente, obteve-se ao 25º dia, média de 18x106 células viáveis indiferenciadas oriundas do tecido pulpar. Sugere-se que as células-tronco indiferenciadas da polpa dentária canina apresentem índices satisfatórios de diferenciação em células progenitoras neurais, aderidas ou suspensas em cultura. A polpa dentária dos dentes decíduos caninos, fornece células indiferenciadas viáveis em quantidade adequada.(AU)

The objective of this study was to verify the differentiation capacity of canine tooth pulp stem cells in neural progenitor cells as well as to quantify the attainment and viability during three culture passages. The cells were extracted from the dental pulp of two canine cadavers, with approximately ten months of age, which died due to automotive trauma. After three subcultures, cell viability evaluation was performed by Neubauer chamber quantification. Neural differentiation was induced in neurobasal culture medium (Gibco ™), with cells adhered to the plastic or suspended in agarose-treated plates. After seven and 14 days in inducer culture, morphology and immunophenotypic profile were observed using flow cytometry and fluorescent immunocytochemistry. At 14 days the cells had a high degree of expression for anti-nestin and anti-glial fibrillary acidic (anti-GFAP) markers. Previously, an average of 18x106 undifferentiated viable cells from the pulp tissue were obtained on the 25th day. It is suggested that the undifferentiated canine pulp stem cells present satisfactory differentiation indices in neural progenitor cells, adhered or suspended in culture. The dental pulp of deciduous canine teeth provides viable undifferentiated cells in adequate quantity.(AU)

Células-tronco pluripotentes induzidas (células iPS) em animais domésticos e a possibilidade de geração in vitro de gametas / Induced pluripotent stem cells (iPS cells) in domestic animals and the possibility to generate gametes in vitro

Células-tronco são conhecidas pela característica de alto potencial de auto-renovação e podem ser classificadas segundo seu estágio de indiferenciação e perfil epigenético. Células-tronco embrionárias (CTEs) e células-tronco adultas são bastante estudadas e caracterizadas, principalmente nos modelos humano e em camundongos por apresentarem novas possibilidades tanto para a medicina regenerativa quanto para o entendimento do desenvolvimento inicial dos mamíferos. Contudo, a derivação e a manutenção de CTEs em espécies domésticas é desafiadora e apresenta resultados inconsistentes em relação à manutenção da pluripotência in vitro. Nesse contexto, a geração das células pluripotentes induzidas in vitro (células iPS ou iPSCs) é imprescindível para a geração de novas possibilidades na medicina veterinária regenerativa e reprodutiva devido à capacidade de diferenciação destas em uma variedade de outros tipos celulares, inclusive em animais. Assim, esta revisão apresenta a geração das células iPS em animais domésticos, e em especial, recentes estudos sobre as etapas necessárias para a possibilidade de geração de gametas funcionais in vitro, uma importante contribuição na correção de infertilidades, conservação de espécies ameaçadas de extinção e geração de indivíduos geneticamente superiores ou modificados para aplicações agropecuárias ou biomédicas.(AU)

Stem cells are widely known for their high potential for self-renewal, being classified according to their stage of undifferentiation and epigenetic profile. Embryonic stem cells (ES) and adult stem cells are already well studied and characterized, mainly in human and mouse models, once they present new possibilities both for regenerative medicine and for understanding the initial development of mammals. However, the derivation and maintenance of ES in domestic species is challenging and presents inconsistent results regarding maintenance of in vitro pluripotency. In this context, the derivation of in vitro induced pluripotent cells (iPS cells or iPSCs) enables new possibilities in regenerative and reproductive veterinary medicine due to their ability to differentiate into a variety of other cell types. Therefore, this review presents the generation of iPS cells in domestic animals, and focuses on recent studies on the steps necessary for the generation of functional gametes in vitro, an important contribution of stem cells aiming the correction of infertility, the conservation of species in risk of extinction and for the generation of genetically superior or modified organisms for agricultural and biomedical applications.(AU)

Células-tronco pluripotentes induzidas (células iPS) em animais domésticos e a possibilidade de geração in vitro de gametas / Induced pluripotent stem cells (iPS cells) in domestic animals and the possibility to generate gametes in vitro

Células-tronco são conhecidas pela característica de alto potencial de auto-renovação e podem ser classificadas segundo seu estágio de indiferenciação e perfil epigenético. Células-tronco embrionárias (CTEs) e células-tronco adultas são bastante estudadas e caracterizadas, principalmente nos modelos humano e em camundongos por apresentarem novas possibilidades tanto para a medicina regenerativa quanto para o entendimento do desenvolvimento inicial dos mamíferos. Contudo, a derivação e a manutenção de CTEs em espécies domésticas é desafiadora e apresenta resultados inconsistentes em relação à manutenção da pluripotência in vitro. Nesse contexto, a geração das células pluripotentes induzidas in vitro (células iPS ou iPSCs) é imprescindível para a geração de novas possibilidades na medicina veterinária regenerativa e reprodutiva devido à capacidade de diferenciação destas em uma variedade de outros tipos celulares, inclusive em animais. Assim, esta revisão apresenta a geração das células iPS em animais domésticos, e em especial, recentes estudos sobre as etapas necessárias para a possibilidade de geração de gametas funcionais in vitro, uma importante contribuição na correção de infertilidades, conservação de espécies ameaçadas de extinção e geração de indivíduos geneticamente superiores ou modificados para aplicações agropecuárias ou biomédicas.

Stem cells are widely known for their high potential for self-renewal, being classified according to their stage of undifferentiation and epigenetic profile. Embryonic stem cells (ES) and adult stem cells are already well studied and characterized, mainly in human and mouse models, once they present new possibilities both for regenerative medicine and for understanding the initial development of mammals. However, the derivation and maintenance of ES in domestic species is challenging and presents inconsistent results regarding maintenance of in vitro pluripotency. In this context, the derivation of in vitro induced pluripotent cells (iPS cells or iPSCs) enables new possibilities in regenerative and reproductive veterinary medicine due to their ability to differentiate into a variety of other cell types. Therefore, this review presents the generation of iPS cells in domestic animals, and focuses on recent studies on the steps necessary for the generation of functional gametes in vitro, an important contribution of stem cells aiming the correction of infertility, the conservation of species in risk of extinction and for the generation of genetically superior or modified organisms for agricultural and biomedical applications.

Transcriptome analysis for the restrained stem development of the wheat mutant dms / Desenvolvimento e análise de transcriptoma de uma haste de trigo mutante dms

Wheat (Triticum aestivum L.) stem development significantly affects grain yield. The dwarf plants (D) of wheat mutant dms was less than 30cm. Here, we were to explore the molecular basis for the restrained stem development of the dwarf plants. The results were reached by compare the young spikes and stems transcriptomes of the tall (T) and D plants of mutant dms. We identified 663 genes highly expressed in stem tips. We identified 997 differentially expressed genes (DEGs) in stem tips between T and D, 403 DEGs were significantly related with stem development. Most biological processes in stem tips on dwarf plants were significantly suppressed, such as phytohormone signaling etc. The sequencing analysis results were confirmed by quantitatively analysis the expression profiles of fourteen key DEGs via real-time QRT-PCR. We identified a group genes related to wheat stem development, identified a group DEGs related to the restrained stem development of D plants of dms. The suppressed phytohormone signaling, carbohydrate transport and metabolism were the major causal factors leading to dwarf plants of D. Our dataset provides a useful resource for investigating wheat stem development.

O desenvolvimento da haste do trigo (Triticum aestivum L.) afeta significativamente o rendimento dos grãos. A partir disso, empregou-se a base molecular para o desenvolvimento de uma haste de variedade de trigo. Os resultados foram alcançados ao conferir as hastes de um mutante de trigo DMS. Identificou-se 663 genes altamente expressos na haste; 997 genes (DEGs) diferentemente expressos em hastes entre T e D e; 403 DEGs foram significativamente diferentes. A maioria dos processos biológicos de caule tipo nمo plantas foram significativamente suprimidas, com o fito hormônio de sinalização. Os resultados da análise de sequencia foram confirmados pela expressão quantitativa de perfis de catorze chave DEGs através de qRT-PCR em tempo real. Nota-se um grupo de genes relacionados com a haste de trigo de desenvolvimento. Identificou-se um grupo DEGs relacionados com o desenvolvimento de um tronco D plantas de DMS. O fito hormônio de sinalização, transporte e metabolismo de hidratos de carbono foram os principais fatores suscetíveis das plantas anão de D. Nosso conjunto de dados fornece um recurso ْtil para investigar o desenvolvimento do caule de trigo.

Transcriptome analysis for the restrained stem development of the wheat mutant dms / Desenvolvimento e análise de transcriptoma de uma haste de trigo mutante dms

Wheat (Triticum aestivum L.) stem development significantly affects grain yield. The dwarf plants (D) of wheat mutant dms was less than 30cm. Here, we were to explore the molecular basis for the restrained stem development of the dwarf plants. The results were reached by compare the young spikes and stems transcriptomes of the tall (T) and D plants of mutant dms. We identified 663 genes highly expressed in stem tips. We identified 997 differentially expressed genes (DEGs) in stem tips between T and D, 403 DEGs were significantly related with stem development. Most biological processes in stem tips on dwarf plants were significantly suppressed, such as phytohormone signaling etc. The sequencing analysis results were confirmed by quantitatively analysis the expression profiles of fourteen key DEGs via real-time QRT-PCR. We identified a group genes related to wheat stem development, identified a group DEGs related to the restrained stem development of D plants of dms. The suppressed phytohormone signaling, carbohydrate transport and metabolism were the major causal factors leading to dwarf plants of D. Our dataset provides a useful resource for investigating wheat stem development.(AU)

O desenvolvimento da haste do trigo (Triticum aestivum L.) afeta significativamente o rendimento dos grãos. A partir disso, empregou-se a base molecular para o desenvolvimento de uma haste de variedade de trigo. Os resultados foram alcançados ao conferir as hastes de um mutante de trigo DMS. Identificou-se 663 genes altamente expressos na haste; 997 genes (DEGs) diferentemente expressos em hastes entre T e D e; 403 DEGs foram significativamente diferentes. A maioria dos processos biológicos de caule tipo nمo plantas foram significativamente suprimidas, com o fito hormônio de sinalização. Os resultados da análise de sequencia foram confirmados pela expressão quantitativa de perfis de catorze chave DEGs através de qRT-PCR em tempo real. Nota-se um grupo de genes relacionados com a haste de trigo de desenvolvimento. Identificou-se um grupo DEGs relacionados com o desenvolvimento de um tronco D plantas de DMS. O fito hormônio de sinalização, transporte e metabolismo de hidratos de carbono foram os principais fatores suscetíveis das plantas anão de D. Nosso conjunto de dados fornece um recurso ْtil para investigar o desenvolvimento do caule de trigo.(AU)

OTIMIZAÇÃO DE MEIO DE DIFERENCIAÇÃO PARA ORGANOIDES PANCREÁTICOS CANINOS

A diabetes mellitus é uma doença metabólica crônica de causa multifatorial onde a produção da insulina e/ou sua ação podem estar prejudicadas. A ocorrência natural de condição clínica em cães semelhante a Diabetes mellitus tipo 1 (DMT1) humana impulsionou o uso desta espécie em estudos de novas possibilidades terapêuticas. A DMT1 tem como base a destruição das células que produzem insulina e, por essa razão, a terapia celular com organoides diferenciados em células semelhantes à poderiam representar, finalmente, a cura da doença. Organoides são estruturas tridimensionais derivadas de células-tronco embrionárias ou tecidoespecíficas com habilidade de auto-organização, diferenciação celular e morfogênese semelhante ao órgão correspondente. Fragmentos de tecido pancreático fresco de três cães submetidos à eutanásia na Faculdade de Veterinária de Utrecht, Holanda, foram isolados, cultivados em meio de expansão e transferidos para meios de diferenciação em dois experimentos com objetivo de otimizar o meio para produção de células semelhantes à produtoras de insulina. Os organoides foram caracterizados pela expressão gênica através de reação em cadeia mediada pela polimerase quantitativa (qPCR). Os resultados demonstraram a presença de células-tronco adultas com perfil gênico de células ductais em meio de expansão e potencial de diferenciação in vitro. Observou-se o aumento gradual da expressão dos marcadores Pdx1 e Nkx6.1 (precursores endócrinos) proporcional à duração do protocolo. Entretanto, marcadores de células endócrinas maduras não foram detectados. A adição de novos componentes, a duração dos estágios de diferenciação e o uso de sistema de suspensão de cultura de células são alternativas que podem ser testadas em futuras abordagens visando a obtenção de células produtoras de insulina que possam ser usadas na terapia celular.

Diabetes mellitus is a chronic metabolic disease of multifactorial cause where insulin production and/or its action may be impaired. The natural occurence of a clinical condition in dogs similar to human Type 1 diabetes mellitus (T1DM) has boosted its use as an experimental model in studies of new therapeutic possibilities. The destruction of beta cells that produce insulin is the basis of T1DM and, for this reason, cell therapy with organoids differentiated into stem cell beta-like cells could ultimately represent the cure of the disease. Organoids are threedimensional structures derived from embryonic stem cells or tissue-specific stem cell with ability to self-organization, cell differentiation and morphogenesis similar to the corresponding organ. Fragments of fresh pancreatic tissue from three dogs submitted to euthanasia at Veterinary School of Utrecht, The Netherlands, were isolated, cultivated in expansion medium and transferred to differentiation media in two experiments aiming the optimization of the medium for production of functional beta-like cells. Organoids were characterized by gene expression through quantitative chain reaction mediated by polymerase (qPCR). The results demonstrated the presence of adult stem cell with ductal cell profile in expansion medium and in vitro differentiation potential. A gradual increase in Pdx1 and Nkx6.1 (endocrine precursors) markers expression was noted, proportional to the duration of the protocol. However, endocrine mature cell markers were not detected. The addition of new components, the duration of differentiation stages and the use of a suspension cellular culture system are alternatives that can be tested in future approaches in order to obtain insulin-producing cells that can be used in cell therapy.

PRODUÇÃO DE SILAGEM DE CAPIM-ELEFANTE BRS CAPIAÇU SOB DIFERENTES ESTRATÉGIAS DE MANEJO, TRATADAS COM INOCULANTES MICROBIANOS

Para a composição da tese foram preparados três capítulos que consistiram em estudos de diferentes estratégias de manejo e inoculantes microbianos sobre as características agronômicas, de valor nutritivo e de perfil fermentativo do capim-elefante BRS Capiaçu. Capítulo 1- objetivou-se definir a melhor combinação de manejo com base nas características agronômicas e de valor nutritivo do capim-elefante BRS Capiaçu, em quatro idades de rebrotaI (75, 90, 105, 120 dias) e em duas alturas de resíduo- A (10 e 50 cm), ao longo de quatro ciclos de produção- C. O delineamento experimental foi o de blocos completos casualizados, em esquema fatorial 4 x 2, com medidas repetidas no tempo (C). Houve efeito da interação C x I para as proporções dos componentes lâmina foliar, colmo, forragem senescente e para a relação lâmina foliar:colmo. Em geral, foi observado elevação das proporções de colmo e forragem senescente e redução da proporção de lâmina foliar e da relação lâmina foliar:colmo, com o aumento das idades de rebrota. Além disso, maior proporção de lâminas foliares e maior relação lâmina foliar:colmo, foram observadas com a maior altura de resíduo. A massa verde (MV) e a massa seca (MS) de forragem colhida, apresentaram efeito da interação C x I x A, sendo que, foi observado em geral, para as duas alturas de resíduo, aumentos nas massas em função da elevação das idades de rebrota, em todos os ciclos de produção. Houve efeito da interação C x I para os teores de MS, MM, PB, FDN, lignina e DIVFDN, sendo que, com a elevação das idades de rebrota, aumentos nos teores de MS, FDN e de lignina e reduções na MM, PB e na DIVFDN foram observados. Houve também efeito da interação C x A para os teores de MS, MM e lignina, sendo que, os maiores teores de MS e MM e o menor teor de lignina foram observados com a altura de resíduo de 50 cm. Os teores de FDN e CHOs solúveis foram superiores na gramínea com a menor altura de resíduo. Os teores de NIDA e a DIVMS apresentaram efeito da interação C x I x A. Em geral, nas duas alturas de resíduo e em todos os ciclos, observamos aumento nos teores de NIDA e redução na DIVMS com a elevação das idades de rebrota. Capítulo 2- objetivou-se definir a melhor combinação de manejo, representada por quatro idades de rebrota (75, 90, 105, 120 dias) e duas alturas de resíduo (10 e 50 cm) do capim-elefante BRS Capiaçu, com base na MV e MS de forragem colhida e em características de valor nutritivo e de perfil fermentativo de suas silagens. O delineamento experimental foi o de blocos completos casualizados, em esquema fatorial 4 x 2, com três repetições. A MV e MS de forragem colhida, apresentaram efeito quadrático em relação ao aumento das idades de rebrota, com valores mínimos estimados no intervalo das idades de 75 a 90 dias. A elevação das idades de rebrota da gramínea, impactou em aumentos lineares nos teores de MS e FDN na forragem e silagens, bem como no teor de lignina nas silagens. Reduções lineares foram observadas para a DIVMS, DIVFDN em função do aumento das idades de rebrota. Maiores teores de PB, DIVMS e DIVFDN foram observados na forragem e silagens para a altura de resíduo de 50 cm. No geral, reduções lineares nas frações solúveis e aumentos lineares das frações B2 e C da PB foram observadas com elevação das idades de rebrota, assim como, a menor altura de resíduo apresentou menor proporção das frações solúveis e maior da fração C. Em relação aos ácidos palmítico, esteárico, oleico, linoleico, linolênico e ácidos graxos totais avaliados, foi observado que as menores idades de rebrota, bem como o corte na maior altura de resíduo, proporcionaram os maiores teores. Todas as silagens apresentaram bom padrão fermentativo, com poucas diferenças entre si. Houve efeito da interação I x A para o ácido propiônico, que apresentou reduções lineares em função do aumento das idades de rebrota nas duas alturas de resíduo. Redução linear também foi observado no teor de nitrogênio amoniacal com o aumento das idades de rebrota. Em contrapartida, houve aumento linear na recuperação da MS em função da elevação das idades de rebrota. O manejo da cultivar BRS Capiaçu com idade de rebrota de 105 dias e com altura de resíduo de 10 cm, possibilitou maior equilíbrio entre a massa de forragem colhida e as características de valor nutritivo de suas silagens. Capítulo 3- objetivou-se avaliar o efeito da adição de inoculantes microbianos sobre o valor nutritivo e o perfil fermentativo de silagens de capim-elefante BRS Capiaçu aos 90 e 110 dias de rebrota. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado, em esquema fatorial 5 × 2 (5 inoculantes- In e 2 idades- Id), com três repetições. Os inoculantes avaliados foram: Controle; KeraSil; Sil-All®; SiloMax Centurium e Yakult®. Os inoculantes microbianos comerciais foram inoculados à forragem de acordo com as recomendações dos fabricantes. O Yakult foi diluído na dose de 8 ml L-1 de água e para aplicação seguiu a relação de 10L ton-1 de MN. Houve efeito de interação In × Id sobre os teores de MS, MM, FDN, DIVMS e DIVFDN. Maiores teores de MS e maiores DIVMS e DIVFDN foram observadas nas silagens tratadas com KeraSil e SiloMax para a idade de 90 dias. Maior DIVMS também foi observada na silagem tratada com Kerasil em comparação ao controle na idade de 105 dias. Houve efeito da interação In × Id sobre os valores de pH, ácido acético, relação ácido lático:ácido acético e CHOs solúveis residuais. As silagens tratadas com KeraSil apresentaram menor pH e ácido acético e maior relação ácido lático:ácido acético e CHOs solúveis residuais em comparação à silagem controle em ambas as idades de rebrota. O maior e menor teor de nitrogênio amoniacal foram observados nas silagens tratadas com Yakult e KeraSil, respectivamente. As respostas dos inoculantes microbianos comerciais não foram muito consistentes, mas, proporcionaram melhorias em alguns aspectos do valor nutritivo e do perfil fermentativo das silagens de capim-elefante BRS Capiaçu, com destaque para o inoculante Kerasil.

For the composition of the thesis, three chapters were prepared which consisted of studies of different management strategies and microbial inoculants on agronomic characteristics, nutritive value and fermentation profile of elephant grass cv Capiaçu. Chapter 1- The objective was to define the best combination of management based on the agronomic characteristics and nutritional value of the elephant grass cv Capiaçu, at four regrowth ages- A (75, 90, 105, 120 days) and at two heights of residue- H (10 and 50 cm), over four production cycles- C. The experimental design was a randomized complete block, in a 4 x 2 factorial scheme, with repeated measures over time (C). There was an effect of the C x A interaction for the proportions of the components leaf blade, stem, senescent forage and for the leaf blade:stem ratio. In general, an increase in the proportions of stem and senescent forage and a reduction in the proportion of leaf blade and in the leaf blade:stem ratio were observed, with the increase in regrowth ages. Furthermore, a higher proportion of leaf blades and a higher leaf blade:stem ratio were observed with the highest residue height. The green mass (GM) and the dry mass (DM) of harvested forage showed an effect of the interaction C x A x H, and it was observed, in general, for the two residue heights, increases in the masses as a function of the increase in age regrowth, in all production cycles. There was an effect of the C x A interaction for the contents of DM, MM, CP, NDF, lignin and IVNDFD, and with the increase in regrowth ages, increases in the contents of DM, NDF and lignin and reductions in MM, CP and in IVNDFD were observed. There was also an effect of the C x H interaction for the DM, MM and lignin contents, and the highest DM and MM contents and the lowest lignin content were observed with the residue height of 50 cm. The contents of NDF and WSC were higher in the grass with the lowest residue height. The ADIN and IVDMD contents showed an effect of the C x A x H interaction. In general, in the two residue heights and in all cycles, we observed an increase in the ADIN contents and a reduction in the IVDMD with the increase in the regrowth ages. Chapter 2- The objective was to define the best management combination, represented by four regrowth ages (75, 90, 105, 120 days) and two residue heights (10 and 50 cm) of the elephant grass cv Capiaçu, based on the GM and DM of harvested forage and characteristics of nutritive value and fermentation profile of their silages. The experimental design was a randomized complete block, in a 4 x 2 factorial scheme, with three replications. The GM and DM of harvested forage showed a quadratic effect in relation to the increase in regrowth ages, with minimum values estimated in the range of ages from 75 to 90 days. The increase in grass regrowth ages impacted linear increases in DM and NDF contents in forage and silages, as well as in lignin content in silages. Linear reductions were observed for IVDMD, IVNDFD as a function of increasing regrowth ages. Higher contents of CP, IVDMD and IVNDFD were observed in forage and silages to the residue height of 50 cm. In general, linear reductions in soluble fractions and linear increases in B2 and C fractions of CP were observed with increasing grass regrowth ages, as well as the lower residue height showed a lower proportion of soluble fractions and a higher proportion of fraction C. In relation to acids palmitic, stearic, oleic, linoleic, -linolenic and total fatty acids evaluated, it was observed that the lowest regrowth ages, as well as the cut at the highest residue height, provided the highest contents. All silages showed a good fermentation pattern, with few differences between them. There was an effect of the A x H interaction for propionic acid, which presented linear reductions as a function of the increase in regrowth ages in the two residue heights. Linear reduction was observed in the ammonia nitrogen content with increasing regrowth ages. On the other hand, there was a linear increase in DM recovery as a function of the increase in regrowth ages. The management of the cultivar BRS Capiaçu with regrowth age of 105 days and with a residue height of 10 cm, allowed a better balance between the harvested forage mass and the nutritive value characteristics of its silages. Chapter 3- The objective was to evaluate the effect of the addition of microbial inoculants on the nutritive value and fermentation profile of cv Capiaçu elephant grass silages at 90 and 110 days of regrowth. The experimental design was completely randomized, in a 5 × 2 factorial scheme (5 inoculants- In and 2 ages- Id), with three replications. The evaluated inoculants were: Control; KeraSil; Sil-All®; SiloMax Centurium and Yakult®. Commercial microbial inoculants were inoculated to forage according to the manufacturers' recommendations. Yakult was diluted at a dose of 8 ml L-1 of water and for application followed the ratio of 10L ton-1 of GM. There was an In × Id interaction effect on the DM, MM, NDF, IVDMD and IVNDFD contents. Higher DM contents and higher IVDMD and IVNDFD were observed in the silages treated with KeraSil and SiloMax for the age of 90 days. Higher IVDMD was also observed in Kerasil-treated silage compared to control at the age of 105 days. There was an effect of the In × Id interaction on pH, acetic acid, lactic acid:acetic acid and residual WSC. Silages treated with KeraSil had lower pH and acetic acid and higher lactic acid:acetic acid and residual WSC compared to control silages at both regrowth ages. The highest and lowest contents of ammonia nitrogen were observed in the silages treated with Yakult and KeraSil, respectively. The responses of commercial microbial inoculants were not very consistent, but they provided improvements in some aspects of the nutritive value and fermentation profile of the elephant grass cv Capiaçu silages, with emphasis on the inoculant Kerasil.

Imuno-expressão de Bcl-xl, Bax e Caspase-3 em 5 células tronco mesenquimais da medula óssea e do tecido adiposo de ratas 6 submetidas à diferenciacao condrogenica com e sem triiodotironina: estudo 7 comparativo

Objetivou-se avaliar e comparar a expressão de Bcl-xL, Bax e caspase-3 em células 12 tronco mesenquimais da medula óssea (CTM-MO) e do tecido adiposo (CTM-TA) de13 ratas submetidas à diferenciação condrogênica in vitro na ausência ou presença de 14 triiodotironina (T3). CTM foram submetidas à diferenciação condrogênica por 21 dias 15 sem T3 (grupo controle) e com diferentes concentrações de T3 (0,01; 1; 100 e 1000 16 nM). Ao final da diferenciação, foi realizada imunohistoquímica para marcação das 17 proteínas Bcl-xL, Bax e caspase-3. O software de análise de imagem digital IHC 18 profile foi utilizado para avaliação das imunomarcações. Realizou-se análise de 19 variância e os testes de Shapiro Wilk, Tukey e Teste t. T3 reduziu significativamente 20 a expressão de Bcl-xL nas concentrações de 0,01; 1 e 100 nM, nas CTM-MO, mas 21 aumentou sua expressão nas CTM-TA na concentração de 0,01 nM. T3 aumentou a22 expressão de Bax nas concentrações de 0,01 e 100 nM, nas CTM-MO e na 23 concentração de 1000 nM, nas CTM-TA. A T3 não alterou significativamente a 24 expressão de caspase 3 nas CTM-MO, mas a reduziu significativamente nas 25 concentrações de 1 e 1000 nM, nas CTM-TA. Comparando-se as duas fontes de 26 CTM, a expressão de Bax e de caspase-3 foi significativamente maior nas CTM-MO 27 tratadas com T3, quando comparadas às CTM-TA. Conclui-se que a T3 influencia de 28 forma distinta a imuno-expressão de marcadores anti- e pró-apoptóticos em CTM29 MO e CTM-TA submetidas à diferenciação condrogênica. A T3 reduz a expressão 30 de Bcl-xL, aumenta a expressão de Bax e não altera a expressão de caspase-3 nas 31 CTM-MO e aumenta a expressão de Bcl-xL e de Bax e reduz a expressão de 32 caspase 3 nas CTM-TA. Essa diferença de resposta pode ser um dos mecanismos 33 para explicar os efeitos diferentes da T3 durante a diferenciação condrogênica das 34 CTM da medula óssea e do tecido adiposo.

The aim of this study was to evaluate and compare the expression of Bcl-xL, Bax and 12 caspase-3 in mesenchymal stem cells from bone marrow (BMMSCs) and adipose 13 tissue (ADSCs) of female rats submitted to in vitro chondrogenic differentiation in the 14 absence or presence of triiodothyronine (T3). MSC were subjected to chondrogenic 15 differentiation for 21 days without T3 (control group) and with different concentrations 16 of T3 (0.01; 1; 100 and 1000 nM). At the end of differentiation, immunohistochemistry 17 was performed to label the Bcl-xL, Bax and caspase-3 proteins. The IHC profile 18 digital image analysis software was used to assess immunostaining. Analysis of 19 variance and Shapiro Wilk, Tukey and t-test were performed. T3 significantly reduced 20 Bcl-xL expression at concentrations of 0.01; 1 and 100 nM, in BMMSCs, but 21 increased its expression in ADSCs at a concentration of 0.01 nM. T3 increased Bax 22 expression at concentrations of 0.01 and 100 nM in BMMSCs and at a concentration 23 of 1000 nM in ADSCs. T3 did not significantly alter caspase 3 expression in 24 BMMSCs, but significantly reduced it at concentrations of 1 and 1000 nM in ADSCs. 25 Comparing the two MSC sources, the expression of Bax and caspase-3 was 26 significantly higher in BMMSCs treated with T3 when compared to ADSCs. It is 27 concluded that T3 distinctly influences the immunoexpression of anti- and pro28 apoptotic markers in BMMSCs and ADSCs submitted to chondrogenic differentiation. 29 T3 reduces the expression of Bcl-xL, increases the expression of Bax and does not 30 alter the expression of caspase-3 in the BMMSCs and increases the expression of 31 Bcl-xL and Bax and reduces the expression of caspase 3 in the ADSCs. This 32 difference in response may be one of the mechanisms to explain the different effects 33 of T3 during the chondrogenic differentiation of MSCs from bone marrow and 34 adipose tissue.

TRANSPLANTE DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS ALOGÊNICAS EM CÃES COM MENINGOENCEFALOMIELITE DE ORIGEM DESCONHECIDA

A meningoencefalomielite de origem desconhecida (MUO) canina é uma doença neuroinflamatória de provável origem imunomediada, altamente debilitante, que apresenta prognostico desfavorável e falha terapêutica com o uso de imunossupressores. As células-tronco mesenquimais (MSCs) são promissoras para o tratamento de doenças neuroimunes, porém, diferentes fontes podem apresentar variações no potencial imunomodulador e neuroprotetor. In vitro, avaliamos a expressão gênica de BDNF, GDNF, HGF, IDO, IL-10 e PTGES2 e o perfil secretório de IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, GM-CSF e MCP-1 de MSCs caninas derivadas do tecido adiposo (Ad-MSCs) e placenta (PMSCs) após estimulação única com INF- e combinada com INF- com TNF-. In vivo, avaliamos a resposta terapêutica ao transplante de Ad-MSCs alogênicas em cães com MUO que apresentaram falha terapêutica ao tratamento imunossupressor. Grupo PAC: 12 cães com MUO tratados com o protocolo imunossupressor de citarabina (ara-C) e prednisona. Grupo cMSC: Cinco cães que apresentaram falha terapêutica tratados com dois transplantes de 2,5x106 Ad-MSCs pela via intratecal (IT) (totalizando seis transplantes) ou intravenosa (IV) (totalizando três transplantes), com intervalo de 40 dias. Avaliamos a recuperação funcional, redução das lesões inflamatórias por ressonância magnética (RM) e líquido cefalorraquidiano (LCR). In vitro, observamos aumento significativo na expressão de BDNF, GDNF, HGF e IDO pelas Ad-MSCs após as estimulações, e na expressão de IDO pelas PMSCs após a estimulação combinada. Houve tendência a maior expressão de IL-10 nas células estimuladas de ambas fontes. Houve aumento significativo na secreção de IL-6 pelas Ad-MSCs e de IL-8 pelas PMSCs após estimulação. In vivo, houve tendência a melhora funcional e dos parâmetros inflamatórios no LCR em ambos grupos, indicando efeitos positivos. No grupo cMSC, a maioria dos cães teve remissão parcial e eventos adversos leves foram observados em 4/6 animais após transplantes IT, sendo ausentes pela via IV. Todos os cães do grupo PAC desenvolveram efeitos adversos. Não houve diferenças significativas nas variáveis de hemograma e bioquímica dentro e entre os grupos. O transplante de Ad-MSCs alogênicas em cães com MUO demonstrou efeitos benéficos

Canine meningoencephalomyelitis of unknown origin (MUO) is an immune-mediated neuroinflammatory disease, highly debilitating, with poor prognosis and therapeutic failure. Mesenchymal stem cells (MSCs) are promising for the treatment of neuroimmune diseases. Different sources may present differences in the immunomodulatory/neuroprotective potential. In vitro, we evaluated the gene expression of BDNF, GDNF, HGF, IDO, IL-10 and PTGES2 and the secretory profile of IL-2, IL-6, IL-18, IL-10, GM-CSF and MCP- 1 of canine MSCs derived from adipose tissue (Ad-MSCs) and placenta (PMSCs) after priming with the pro-inflammatory cytokines INF- alone and combined INF- and TNF-. In vivo, we evaluated the clinical response to allogeneic Ad-MSCs transplantation in dogs with MUO. PAC group: 12 dogs treated with immunosuppressant cytarabine (ara-C) and prednisone. cMSC group: 5 dogs of PAC group with therapeutic failure were treated with 2.5x106/kg Ad-MSCs by intrathecal (IT) (n = 6) or intravenous (IV) (n = 3) delivery routes (40 days of interval). Functional recovery and the reduction of inflammatory lesions by magnetic resonance imaging (MR) and cerebrospinal fluid (CSF) were evaluated. In vitro, there was significant increase of BDNF, GDNF, HGF and IDO expression by Ad-MSCs after priming and expression of IDO after combined priming by PMSCs. Ad-MSCs had a significant increase in the secretion of IL-6 and PMSCs of IL-8 after priming. In vivo, a trend towards functional improvement was observed in both groups after treatment. In the cMSC group, most dogs had partial remission and mild adverse events were observed in 4/6 animals after IT transplantations, being absent by IV. Clinical and laboratory variables showed no statistical differences. Allogeneic Ad-MSCs transplantation demonstrated beneficial effects in dogs with MUO.

Fontes de proteína e níveis de suplementação na recria intensiva de bovinos de corte em pastagens tropicais

Nosso objetivo foi avaliar produção de forragem, desempenho animal, parâmetros sanguíneos sobre a utilização de diferentes níveis e fontes de proteína na suplementação de bovinos de corte recriados a pasto. A área era subdividida em 16 piquetes de tamanho média de 2,5 ha com cocho e bebedouros individuais. O experimento foi conduzido em delineamento de inteiramente casualizado com arranjo fatorial 2 × 2. Os fatores incluíram duas fontes de proteína (FP) (farelo de soja e DDGS), e dois níveis de suplementos (NS) sendo na estação seca (10 e 16,7g.kg-1 de peso corporal) na estação das águas (7 e 10 g.kg-1 de peso corporal), utilizando 4 piquetes por tratamento. Foram utilizados bezerros da raça Nelore com peso inicial de 220 kg e idade média de 10 meses, a taxa de lotação inicial foi determinando para se atingir a oferta de forragem de 7 kg MS.100 kg de PC-1. A cada 28 dias era realizado coleta de forragem em área total de 0,68m2 para avaliação das características morfológicas da forragem, e amostra de forragem em pastejo simulado para avaliação da composição química. Para avaliação do desempenho animal, foi considerado o peso médio dos animais traçadores após jejum de sólidos e líquidos de 16h, coletando amostra de sangue de 3 animais testes por piquete para avaliação do perfil sérico. O menor NS no período das águas favoreceu o aumento na proporção de folha, relação folha:colmo e densidade volumétrica de folhas, havendo a redução da folha:colmo no período seco do ano no maior NS. A mudança da FP no suplemento não impactou as características do dossel forrageiro (P>0,05). Ao se avaliar as características morfológicas da forragem, somente a relação F:C diferiu entre os NS (P=0,033), sendo maior quando ao menor NS durante o período seco. A composição química da forragem, foi observado o maior teor PB (P=0,007) ao menor NS, já para FDNcp a maior concentração foi observada no maior NS (P=0,003) durante o período seco. Animais recebendo o maior NS apresentaram o maior consumo de suplemento (P<,001) e o menor consumo de pasto (P<,001). O GMD não diferiu para NS (P=0,112) e nem para FP (P=0,980), ficando na média de 0,970 kg PC.animal-1.dia.-1. No período seco a estratégia nutricional que utilizou o maior NS obtiveram maior ganho de peso por dia (P<,001), taxa de lotação (P=0,005) e produtividade (P<,001), contudo durante o período chuvoso não houve efeito do NS para essas variáveis. Para todos os compostos séricos avaliados em ambos os períodos se encontravam dentro do intervalo considerado como adequado para a categoria animal avaliada. A estratégia nutricional associando o maior NS com o DDGS como FP apresentou o maior lucro líquido, que foi de R$2.519,95.ha-1. Estratégias nutricionais que combinam um alto nível de suplementação com diferentes fontes de proteína, possibilitam a intensificação da recria, onde a utilização a associação do maior NS com o DDGS como FP pode ser utilizado como a estratégia afim de garantir o maior retorno econômico do sistema.

Our objective was to evaluate forage production, animal performance, blood parameters on the use of different levels and sources of protein in the supplementation of beef cattle reared on pasture. The area was subdivided into 16 paddocks with an average size of 2.5 ha with trough and individual drinking fountains. The experiment was conducted in a completely randomized design with a 2 × 2 factorial arrangement. Factors included two protein sources (FP) (soybean meal and DDGS), and two supplement levels (NS) in the dry season (10 and 16 ,7g.kg-1 of body weight) in the water station (7 and 10 g.kg-1 of body weight), using 4 paddocks per treatment. Nellore calves with initial weight of 220 kg and average age of 10 months were used, the initial stocking rate was determined to reach a forage offer of 7%. Forage collection was carried out every 28 days in a total area of 0.68 m2 to evaluate the morphological characteristics of the forage, and forage samples in simulated grazing to evaluate the chemical composition. To assess animal performance, the mean weight of the tracer animals after 16h fasting of solids and liquids was considered, collecting blood samples from 3 test animals per paddock to assess the serum profile. The lowest NS in the rainy season favored the increase in the proportion of leaves, leaf:stem ratio and leaf volumetric density, with a reduction in leaf:stem during the dry period of the year in the highest NS. The change in FP in the supplement did not impact forage canopy characteristics (P>0.05). When evaluating the morphological characteristics of the forage, only the F:C ratio differed between the NS (P=0.033), being higher when the smallest NS during the dry period. The chemical composition of the forage showed the highest CP content (P=0.007) at the lowest NS, while for NDFcp the highest concentration was observed at the highest NS (P=0.003) during the dry period. Animals receiving the highest NS had the highest supplement intake (P<.001) and the lowest pasture intake (P<.001). The GMD did not differ for NS (P=0.112) or for FP (P=0.980), with an average of 0.970 kg BW.animal-1.day.-1. In the dry period, the nutritional strategy that used the highest NS obtained greater weight gain per day (P<.001), stocking rate (P=0.005) and productivity (P<.001), but during the rainy period there was no effect. of the NS for these variables. All serum compounds evaluated in both periods were within the range considered to be adequate for the animal category evaluated. The nutritional strategy associating the highest NS with the DDGS as FP showed the highest net profit, which was R$ 2,519.95.ha-1. Nutritional strategies that combine a high level of supplementation with different sources of protein, enable the intensification of breeding, where the use of the association of the largest NS with the DDGS as FP can be used as a strategy in order to ensure the greatest economic return of the system.

Morpho-physiological profile of Marandu palisade grass managed under different forage allowance and grazed by dairy cows / Perfil morfofisiológico de capim-Marandu manejado sob diferentes ofertas de forragem e pastejado por vacas leiteiras

The study was conducted to evaluate the morphological composition of pastures, and the chemical composition of leaves and stems of Marandu grass managed under forage allowances of 4, 7, 10 and 13 kg per 100 kg of live weight (LW). Grazing was done by Holstein cows, and the method adopted was rotated stocking with variable stocking rate and rest period of 21 days. Collection of samples was conducted by double sampling. Stocking adjustment of each plot was made according to green dry forage mass, plot area, and the forage allowance desired. The percentage of leaves varies (P 0.05) between the forage allowances, however they varied during the experimental period, with lower (P <0.05) stem percentages and greater (P < 0.05) percentage of dead material in the third and fourth GC. There was an interaction (P < 0.05) between forage allowance and GC for crude protein (CP) content in the leaves. In the stems, CP content decreased with the increasing forage allowance. Cell wall components contents were similar among the forage allowances both in the leaves and in the stems, but there was variation in the levels of the different components over the GC. Thus, the definition of an adequate forage allowance must consider the climatic conditions of the region and the time of year.

O estudo foi conduzido com o objetivo de avaliar a composição morfológica dos pastos e a composição química das folhas e colmos de capim-Marandu manejados sob as ofertas de forragem de 4, 7, 10 e 13 kg por 100 kg de peso vivo (PV). O pastejo foi realizado por vacas da raça Holandesa e o método adotado foi rotacionado, com taxa de lotação variável e período de descanso de 21 dias. A coleta de amostras foi realizada por dupla amostragem. O ajuste da carga animal de cada parcela foi feito de acordo com a massa de forragem verde seca, a área da parcela e a oferta de forragem pretendida. A porcentagem de folhas variou (P < 0,05) em função da interação entre ofertas de forragem e ciclos de pastejo (CP), apresentando comportamento diferente para cada oferta. As porcentagens de colmos e material morto não diferiram entre as ofertas de forragem, porém variaram ao longo do período experimental com menores (P < 0,05) porcentagens de colmos e maiores (P < 0,05) de material morto no terceiro e quarto CP. Houve interação (P < 0,05) entre oferta de forragem e CP sobre o teor de proteína bruta (PB) nas folhas. Já nos colmos, os teores de PB diminuíram com o aumento das ofertas. Os teores de componentes da parede celular foram semelhantes entre as ofertas, tanto nas folhas quanto nos colmos, porém ocorreu variação nos teores dos diferentes componentes ao longo dos CP. Dessa forma,podemos inferir que a composição morfológica dos pastos de capim-Marandu é alterada tanto pelas ofertas de forragem quanto pelos CP. O mesmo acontece com os teores de PB. Por outro lado, os diferentes componentes da parede celular são modificados pelo decorrer do período experimental. Dessa forma, a definição de uma oferta de forragem adequada deve considerar as condições climáticas da região e a época do ano.

Morpho-physiological profile of Marandu palisade grass managed under different forage allowance and grazed by dairy cows / Perfil morfofisiológico de capim-Marandu manejado sob diferentes ofertas de forragem e pastejado por vacas leiteiras

The study was conducted to evaluate the morphological composition of pastures, and the chemical composition of leaves and stems of Marandu grass managed under forage allowances of 4, 7, 10 and 13 kg per 100 kg of live weight (LW). Grazing was done by Holstein cows, and the method adopted was rotated stocking with variable stocking rate and rest period of 21 days. Collection of samples was conducted by double sampling. Stocking adjustment of each plot was made according to green dry forage mass, plot area, and the forage allowance desired. The percentage of leaves varies (P < 0.05) due to the interaction between forage allowance and grazing cycles (GC) with different behavior for each forage allowance. The percentage of stems and dead material did not differ (P>0.05) between the forage allowances, however they varied during the experimental period, with lower (P <0.05) stem percentages and greater (P < 0.05) percentage of dead material in the third and fourth GC. There was an interaction (P < 0.05) between forage allowance and GC for crude protein (CP) content in the leaves. In the stems, CP content decreased with the increasing forage allowance. Cell wall components contents were similar among the forage allowances both in the leaves and in the stems, but there was variation in the levels of the different components over the GC. Thus, the definition of an adequate forage allowance must consider the climatic conditions of the region and the time of year.(AU)

O estudo foi conduzido com o objetivo de avaliar a composição morfológica dos pastos e a composição química das folhas e colmos de capim-Marandu manejados sob as ofertas de forragem de 4, 7, 10 e 13 kg por 100 kg de peso vivo (PV). O pastejo foi realizado por vacas da raça Holandesa e o método adotado foi rotacionado, com taxa de lotação variável e período de descanso de 21 dias. A coleta de amostras foi realizada por dupla amostragem. O ajuste da carga animal de cada parcela foi feito de acordo com a massa de forragem verde seca, a área da parcela e a oferta de forragem pretendida. A porcentagem de folhas variou (P < 0,05) em função da interação entre ofertas de forragem e ciclos de pastejo (CP), apresentando comportamento diferente para cada oferta. As porcentagens de colmos e material morto não diferiram entre as ofertas de forragem, porém variaram ao longo do período experimental com menores (P < 0,05) porcentagens de colmos e maiores (P < 0,05) de material morto no terceiro e quarto CP. Houve interação (P < 0,05) entre oferta de forragem e CP sobre o teor de proteína bruta (PB) nas folhas. Já nos colmos, os teores de PB diminuíram com o aumento das ofertas. Os teores de componentes da parede celular foram semelhantes entre as ofertas, tanto nas folhas quanto nos colmos, porém ocorreu variação nos teores dos diferentes componentes ao longo dos CP. Dessa forma,podemos inferir que a composição morfológica dos pastos de capim-Marandu é alterada tanto pelas ofertas de forragem quanto pelos CP. O mesmo acontece com os teores de PB. Por outro lado, os diferentes componentes da parede celular são modificados pelo decorrer do período experimental. Dessa forma, a definição de uma oferta de forragem adequada deve considerar as condições climáticas da região e a época do ano. (AU)