Preclinical Evaluation of Ropivacaine in 2 Liposomal Modified Systems.

BACKGROUND: Our research group has recently developed liposomes with ionic gradient and in a combined manner as donor and acceptor vesicles containing ropivacaine (RVC; at 2% or 0.75%). Looking for applications of such novel formulations for postoperative pain control, we evaluated the duration of anesthesia, pharmacokinetics, and tissue reaction evoked by these new RVC formulations. METHODS: The formulations used in this study were large multivesicular vesicle (LMVV) containing sodium acetate buffer at pH 5.5 or in a combined manner with LMVV as donor and large unilamellar vesicles (LUVs) as acceptor vesicles with an external pH of 7.4. Wistar rats were divided into 6 groups (n = 6) and received sciatic nerve block (0.4 mL) with 6 formulations of RVC (LMVVRVC0.75%, LMVV/LUVRVC0.75%, LMVVRVC2%, LMVV/LUVRVC2%, RVC 0.75%, and RVC 2%). To verify the anesthetic effect, the animals were submitted to the pain pressure test and the motor block was also monitored. Histopathology of the tissues surrounding the sciatic nerve region was also assessed 2 and 7 days after treatment. Rats (n = 6) were submitted to a hind paw incision, and mechanical hypersensitivity was measured via the withdrawal response using von Frey filaments after injection of the 6 formulations. Finally, New Zealand white rabbits (n = 6) received sciatic nerve block (3 mL) with 1 of the 6 formulations of RVC. Blood samples were collected predose (0 minutes) and at 15, 30, 45, 60, 90, 120, 180, 240, 300, 360, 420, 480, and 540 minutes after injection. RVC plasma levels were determined using a triple-stage quadrupole mass spectrometer. RESULTS: Duration and intensity of the sensory block were longer with all liposomal formulations, when compared to the plain RVC solution (P < .05). Histopathological evaluation showed greater toxicity for the positive control (lidocaine 10%), when compared to all formulations (P < .05). After the hind paw incision, all animals presented postincisional hypersensitivity and liposomal formulations showed longer analgesia (P < .05). LMVVRVC0.75% presented higher time to reach maximum concentration and mean residence time than the remaining formulations with RVC 0.75% (P < .05), so LMVV was able to reduce systemic exposure of RVC due to slow release from this liposomal system. CONCLUSIONS: All new liposomal formulations containing 0.75% RVC were able to change the pharmacokinetics and enhance anesthesia duration due to slow release of RVC from liposomes without inducing significant toxic effects to local tissues.

IVTH BRAZILIAN CONSENSUS CONFERENCE ON HELICOBACTER PYLORI INFECTION.

Significant progress has been obtained since the III Brazilian Consensus Conference on H. pylori infection held in 2012, in Bento Gonçalves, Brazil, and justify a fourth meeting to establish updated guidelines on the current management of H. pylori infection. Therefore, the Núcleo Brasileiro para Estudo do Helicobacter pylori e Microbiota (NBEHPM), association linked to Brazilian Federation of Gastroenterology (FBG) held its fourth meeting again in Bento Gonçalves, RS, Brazil, on August 25-27, 2017. Twenty-six delegates, including gastroenterologists, endoscopists, and pathologists from the five regions of Brazil as well as one international guest from the United States, participated in the meeting. The participants were invited based on their knowledge and contribution to the study of H. pylori infection. The meeting sought to review different aspects of treatment for infection; establish a correlation between infection, dyspepsia, intestinal microbiota changes, and other disorders with a special emphasis on gastric cancer; and reassess the epidemiological and diagnostic aspects of H. pylori infection. Participants were allocated into four groups as follows: 1) Epidemiology and Diagnosis, 2) Dyspepsia, intestinal microbiota and other afections, 3) Gastric Cancer, and, 4) Treatment. Before the consensus meeting, participants received a topic to be discussed and prepared a document containing a recent literature review and statements that should be discussed and eventually modified during the face-to-face meeting. All statements were evaluated in two rounds of voting. Initially, each participant discussed the document and statements with his group for possible modifications and voting. Subsequently, during a second voting in a plenary session in the presence of all participants, the statements were voted upon and eventually modified. The participants could vote using five alternatives: 1) strongly agree; 2) partially agree; 3) undecided; 4) disagree; and 5) strongly disagree. The adopted consensus index was that 80% of the participants responded that they strongly or partially agreed with each statement. The recommendations reported are intended to provide the most current and relevant evidences to management of H. pylori infection in adult population in Brazil.

Bupivacaine in alginate and chitosan nanoparticles: an in vivo evaluation of efficacy, pharmacokinetics, and local toxicity.

OBJECTIVE: This study reports a preclinical evaluation of an alginate/chitosan nanoparticle formulation containing NovaBupi®, a racemic bupivacaine (BVC) containing 25% dextrobupivacaine and 75% levobupivacaine. METHODS: New Zealand White rabbits (n=6) received intraoral or intrathecal injections of BVC 0.5% or BVC 0.5%-loaded alginate-chitosan nanoparticles (BVCALG). BVC plasma levels and pharmacokinetic parameters were determined in blood samples of these rabbits. An infraorbital nerve blockade was performed in male Wistar rats (n=7) with the same formulations and the vehicle (NPALG). Histological evaluation of local toxicity after 6 hours and 24 hours of the treatments was performed in rats' (n=6) oral tissues. RESULTS: No statistically significant difference was observed between plasma concentrations and pharmacokinetic parameters (p>0.05) after intraoral injections. However, after intrathecal injection BVCALG changed approximately three times the values of volume of distribution and area under the curve (AUC0-t; p<0.05). The total analgesic effect of BVC after infraorbital nerve blockade was improved by 1.4-fold (p<0.001) with BVCALG. BVC and BVCALG did not induce significant local inflammatory reaction. CONCLUSION: The encapsulation of BVC prolongs the local anesthetic effect after infraorbital nerve blockade and altered the pharmacokinetics after intrathecal injection.

Pharmacokinetics and Pharmacodynamics Evaluation of Tramadol in Thermoreversible Gels.

We evaluated pharmacokinetics (PK) and pharmacodynamics (PD) induced by new formulations of tramadol (TR) in thermoreversible gels. The poloxamer- (PL-) tramadol systems were prepared by direct dispersion of the drug in solutions with PL 407 and PL 188. The evaluated formulations were as follows: F1: TR 2% in aqueous solution and F2: PL 407 (20%) + PL 188 (10%) + TR 2%; F3: PL 407 (25%) + PL 188 (5%) + TR 2%; F4: PL 407 (20%) + TR 2%. New Zealand White rabbits were divided into four groups (n = 6) and treated by subcutaneous route with F1, F2, F3, or F4 (10 µg·kg-1). PK evaluation used TR and M1 plasma levels. PD evaluation was performed with the measurement of both pupils' diameters. F2 showed higher TR plasma concentration after 180 minutes and presented lower M1 concentrations at almost all evaluated periods. Areas under the curve (ASC0-480 and ASC0-∞ ) and clearance of F2 presented differences compared to F1. F2 presented significant correlation (Pearson correlation) between the enhancement of TR and M1 concentrations and the decrease of pupil size (miosis). Thus, F2 was effective in altering pharmacokinetics and pharmacodynamics effects of TR.

Estudo de bioequivalência entre duas formulações de topiramato comprimidos revestidos de 100 mg, em voluntários sadios após administração de dose única / Study of bioequivalence between two formulations of topiramate 100 mg coated tablets, in healthy volunteers after a single dose administration

O estudo foi realizado para comparar a biodisponibilidade/bioequivalência de duas formulações de topiramato 100 mg comprimidos revestidos (Aché Laboratórios Farmacêuticos S/A - formulação teste e Topamax® por Janssen Cilag Farmacêutica Ltda.) em 28 voluntários de ambos os sexos. O estudo foi realizado através de um desenho aberto, randomizado, cruzado em dois períodos com tempo de washout de 14 dias. As amostras de plasma de 23 dos 28 voluntários inicialmente incluídos foram obtidas ao longo de um intervalo de 120 horas. As concentrações de topiramato foram determinadas através de um equipamento LC-MS-MS, utilizando prednisona como padrão interno. A partir dos dados obtidos se calcularam os seguintes parâmetros farmacocinéticos: ASC0-t, ASC0-¥ e Cmax. A razão das médias geométricas de Topiramato/Topamax® 100 mg foi de 100,97% para ASC0-t, 101,38% para ASC0-¥ e 96,94% para Cmax; os intervalos de confiança de 90% foram de 107,02% - 107,40%, 104,45% - 110,42% e 90,98% - 103,29%, respectivamente. Uma vez que os intervalos de confiança de 90% para Cmax e ASC0-t estiveram dentro da faixa de 80% a 125% proposta pelo FDA e pela ANVISA (Agência Nacional de Vigilância Sanitária do Brasil), conclui-se que comprimido revestido de topiramato 100 mg foi bioequivalente ao comprimido de Topamax® de 100 mg e, desta forma, o produto teste pode ser considerado intercambiável na prática médica...

Estudo de biodisponibilidade relativa entre duas formulações orais de cloridrato de ranitidina, em voluntários sadios após administração de dose única / Relative bioavailability study of two oral ranitidine hydrochloride formulations in healthy volunteers after a single dose administration

O estudo foi realizado para comparar a biodisponibilidade relativa de duas formulações orais de cloridrato de ranitidina, sendo a formulação teste cloridrato de ranitidina suspensão oral de 40 mg/ml (Aché Laboratórios Farmacêuticos S/A) e a formulação referência Antak® xarope de 150 mg/10 ml produzida por Glaxo Smith Kline Brasil Ltda. em 36 voluntários de ambos os sexos. O estudo foi realizado através de um desenho aberto, randomizado, cruzado em dois períodos com tempo de washout de quatro dias. As amostras de plasma de 34 dos 36 voluntários inicialmente incluídos foram obtidas ao longo de um intervalo de 12 horas. As concentrações de ranitidina foram determinadas através de um equipamento LC-MS-MS, utilizando cimetidina como padrão interno. A partir dos dados obtidos, calcularam-se os seguintes parâmetros farmacocinéticos: ASC0-t , ASC0-¥ e Cmax. A razão das médias geométricas de Ranitidina/Antak® foi de 99,75% para ASC0-t, 100,24% para ASC0-¥ e 98,87% para Cmax; os intervalos de confiança de 90% foram de 93,91%-105,95%, 94,47%-106,37% e 88,79%-110,09%, respectivamente. Uma vez que os intervalos de confiança de 90% para Cmax, e ASC0-t estiveram dentro da faixa de 80% a 125% proposta pelo FDA e pela ANVISA (Agência Nacional de Vigilância Sanitária do Brasil), conclui-se que a solução oral de cloridrato de ranitidina 40 mg/ml foi bioequivalente a de Antak® 150 mg/10 ml e, dessa forma, o produto teste pode ser considerado intercambiável na prática médica...

Estudo de bioequivalência entre duas formulações de rivastigmina cápsulas de 6 mg, em voluntários sadios após administração de dose única / Study of bioequivalence between two formulations of rivastigmine 6 mg capsules, in healthy volunteers after a single dose administration

O estudo foi realizado para comparar a biodisponibilidade/bioequivalência de duas formulações de rivastigmina 6 mg cápsulas (Aché Laboratórios Farmacêuticos S/A, formulação teste, e Exelon® por Novartis Biociências S/A - formulação referência, Brasil) em 56 voluntários de ambos os sexos. O estudo foi realizado através de um desenho aberto, randomizado, cruzado em dois períodos com tempo de washout de 7 dias. As amostras de plasma de 46 dos 56 voluntários inicialmente incluídos foram obtidas ao longo de um intervalo de 12 horas. As concentrações de rivastigmina foram determinadas através de um equipamento LC-MS-MS, utilizando zolpidem como padrão interno. A partir dos dados obtidos calcularam-se os seguintes parâmetros farmacocinéticos: ASC0-t , ASC0-¥ e Cmax. A razão das médias geométricas de Rivastigmina/Exelon® 6 mg foi de 100,97% para ASC0-t, 101,38% para ASC0-¥ e 89,01% para Cmax; os intervalos de confiança de 90% foram de 93,20% - 109,39%, 93,65% - 109,75% e 81,10% - 97,70%, respectivamente. Uma vez que os intervalos de confiança de 90% para Cmax e ASC0-t estiveram dentro da faixa de 80% - 125% proposta pelo FDA e pela ANVISA (Agência Nacional de Vigilância Sanitária do Brasil), conclui-se que a cápsula de rivastigmina 6 mg foi bioequivalente ao comprimido de Exelon® de 6 mg e, dessa forma, o produto teste pode ser considerado intercambiável na prática médica.

Expression of Toll-like receptors in enterocromaffin-like cells and their function in histamine release.

INTRODUCTION: Enterocromaffin-like cells (ECL) are specialized endocrine gastric cells able to release histamine, which in turn controls gastric acid production by parietal cells. Helicobacter pylori infection and other conditions signal in the gastrointestinal tract via Toll-like receptors (TLRs) and modify gastric acid production, but there is no evidence of expression and function of TLRs in ECL cells. In this work, we analyzed gene and protein expression of TLR-2, 4, 5, and 9, and other molecules involved in TLR signaling in ECL cells. MATERIAL AND METHODS: ECL cells were isolated from Sprague-Dawley rats. The histamine-releasing ability of TLR ligands was also evaluated after culture of the ECL cells for a short time. RESULTS: With ECL cells that expressed the TLR-2, TLR-4, TLR-5, and TLR-9 genes we were able to confirm protein expression for TLR-2, TLR-5, and TLR-9. Functionally, ECL cells were able to release histamine in response to TLR-2 stimulation by peptidoglycan (PGN), a TLR-2 ligand. After PGN stimulus, IRAK and p38 phosphorylation could be observed. SB 203580, a p38 inhibitor, reversed PGN-induced histamine release. Lipopolysaccharide (LPS), a TLR-4 ligand, was also able to induce histamine release in ECL cells, but by a mechanism independent of TLRs. CONCLUSIONS: We have demonstrated for the first time that ECL cells express TLRs and respond to TLR-2 ligand by increasing histamine release. This response could be involved in host defense against gastrointestinal bacterial pathogens but could also contribute to control of gastric acid secretion in the absence of pathogens.

Pharmacokinetic study of liposome-encapsulated and plain mepivacaine formulations injected intra-orally in volunteers.

OBJECTIVES: The pharmacokinetics of commercial and liposome-encapsulated mepivacaine (MVC) injected intra-orally in healthy volunteers was studied. METHODS: In this double blind, randomized cross-over study, 15 volunteers received, at four different sessions, 1.8 ml of the following formulations: 2% MVC with 1 : 100 000 epinephrine (MVC(2%EPI) ), 3% MVC (MVC(3%) ), 2% and 3% liposome-encapsulated MVC (MVC(2%LUV) and MVC(3%LUV) ). Blood samples were collected pre dose (0 min) and at 15, 30, 45, 60, 90, 120, 180, 240, 300, 360 min after injections. Liquid chromatography-tandem mass spectrometry was used to quantify plasma MVC concentrations. RESULTS: Pharmacokinetic analysis showed that the maximum plasma concentration (Cmax) and the areas under the curves (AUC(0-360) and AUC(0-∞)) after MVC(2%LUV) and MVC(2%EPI) injections were smaller (P < 0.05) than the equivalent figures for MVC(3%) and MVC(3%LUV). The time to maximum plasma concentration (Tmax) and the half-life of elimination (t½beta) obtained after the treatment with MVC(2%LUV), MVC(2%EPI), MVC(3%) and MVC(3%LUV) presented no statistically significant differences (P > 0.05). Cmax, AUC(0-360) and AUC(0-∞) after injection of the 2% formulations (MVC(2%LUV) and MVC(2%EPI) ) did not exhibit statistically significant differences (P > 0.05). The pharmacokinetics of MVC(2%LUV) were comparable to the pharmacokinetics of MVC(2%EPI). CONCLUSION: The liposomal formulation of 2% MVC exhibits similar systemic absorption to the local anesthetic with vasoconstrictor.

Estudo de bioequivalência entre duas formulações de bissulfato de clopidogrel comprimido revestido de 75 mg, em voluntários sadios após administração de dose única / Study of bioequivalence between two formulations of clopidrogel tablets (75mg) in healthy volunteers

O estudo foi realizado para comparar a biodisponibilidade/bioequivalência de duas formulações de clopidogrel 75 mg comprimidos revestidos (Aché Laboratórios Farmacêuticos S/A - formulação teste e (Plavix®) por Sanofi-Aventis Farmacêutica Ltda. - formulação referência, Brasil) em 48 voluntários de ambos os sexos. O estudo foi realizado através de um desenho aberto, randomizado, cruzado em dois períodos com tempo de washout de uma semana. As amostras de plasma foram obtidas ao longo de um intervalo de 48 horas. As concentrações do metabólito ativo do clopidogrel, ácido carboxílico SR26334 foram determinadas através de um equipamento LC-MS-MS, utilizando enalapril como padrão interno. A partir dos dados obtidos se calcularam os seguintes parâmetros farmacocinéticos: ASC0-t, ASC0-¥ e Cmax. A média geométrica de clopidogrel/Plavix® 75 mg foi de 96,71% para ASC0-t, 96.64% para ASC0-¥ e 98,29% para Cmax; os intervalos de confiança de 90% foram de 93,42 - 100,12%, 93,48% - 99,90% e 91,02 - 106,15%, respectivamente. Uma vez que os intervalos de confiança de 90% para Cmax e ASC0-t estiveram dentro da faixa de 80%-125% proposta pelo FDA e pela ANVISA (Agência Nacional de Vigilância Sanitária do Brasil), conclui-se que o comprimido de clopidogrel de 75 mg foi bioequivalente ao comprimido de Plavix® de 75 mg e, dessa forma, o produto teste pode ser considerado intercambiável na prática médica.

Helicobacter pylori antibiotic resistance in Brazil: clarithromycin is still a good option / Resistência do Helicobacter pylori aos antibióticos no Brasil: a claritromicina ainda é uma boa opção

CONTEXT: The antibiotic susceptibility is the cornerstone for the eradication therapies of Helicobacter pylori. OBJECTIVES: To evaluate the prevalence of primary resistance of H. pylori was evaluated in an urban Brazilian population. METHODS:H. pylori isolates were obtained from patients submitted to an upper gastrointestinal endoscopy for the evaluation of dyspeptic symptoms. Biopsies from antrum, corpus and fundus were taken to determine the antibiotic susceptibility of H. pylori isolates. The minimal inhibitory concentration of furazolidone and bismuth were routinely determined by agar dilution method and the minimal inhibitory for amoxicillin, clarithromycin, tetracycline, levofloxacin, and metronidazole were routinely determined with the E-test. RESULTS: Fifty-four patients were included. In vitro antimicrobial susceptibility of H. pylori strains were obtained from 39 patients. Resistance to metronidazole was detected in 20 patients (51 percent), to clarithromycin in 3 patients (8 percent), to levofloxacin in 9 patients (23 percent) and to bismuth in 2 patients (5 percent). There was no observed resistance to amoxicillin, tetracycline or furazolidone. CONCLUSION: Due to the low amoxicillin and clarithromycin resistance observed in this study, therapies using these antimicrobials remain appropriated first-line H. pylori therapy.

CONTEXTO: A susceptibilidade aos antibióticos é a pedra fundamental dos tratamentos de erradicação do Helicobacter pylori. OBJETIVO: Avaliar a prevalência da resistência primária do H. pylori aos antibióticos em uma população urbana do Brasil. MÉTODOS: As cepas do H. pylori foram obtidas de pacientes submetidos a endoscopia digestiva para avaliação de sintomas dispépticos. Biopsias do antro, corpo e fundo gástrico foram realizadas para determinar a susceptibilidade das cepas do H. pylori aos antibióticos. A concentração inibitória mínima da furazolidona e do bismuto foram determinadas rotineiramente pelo método da diluição em Agar e a concentração inibitória mínima da amoxicilina, claritromicina, tetraciclina, levofloxacina e do metronidazol foram determinadas pelo E-test. RESULTADOS: Cinquenta e quarto pacientes foram incluídos no estudo. Destes, a susceptibilidade das cepas do H. pylori in vitro foi determinada em 39 pacientes. Resistência ao metronidazol foi detectada em 20 pacientes (51 por cento), à claritromicina em 3 pacientes (8 por cento), à levofloxacina in 9 pacientes (23 por cento) e ao bismuto em 2 pacientes (5 por cento). não foi observada resistência à amoxicilina, tetraciclina e à furazolidona. CONCLUSÃO: Devido à baixa resistência, observada neste estudo para a amoxicilina e a claritromicina, os tratamentos que usam estes antibióticos permanecem apropriados como esquemas de primeira linha para a erradicação do H. pylori.

Determination of nimodipine in plasma by HPLC-MS/MS and pharmacokinetic application

To develop and validate a rapid, specific and highly sensitive method to quantify nimodipine in human plasma using dibucaine as the internal standard (IS). The analyte and IS were extracted from plasma samples by liquid-liquid extraction using hexane-ethyl acetate (1:1 v/v). The chromatographic separation was performed on a Varian® Polaris C18 analytical column (3 μm, 50 x 2.0 mm) and pre-column SecurityguardTM C18 (4.0 x 3.0 mm) with a mobile phase of Acetonitrile-Ammonium acetate 0.02 ml/L (80:20v/v). The method had a chromatographic run time of 4.5 min and linear calibration curve over the range of 0.1- 40 ng/mL (r > 0.9938). The limit of quantification was 100 pg/mL. Acceptable precision and accuracy were obtained for concentrations over the standard curve ranges. This validated method was successfully applied in determining the pharmacokinetic profile of nimodipine tablets of 30 mg administered to 24 healthy volunteers. The proposed method of analysis provided a sensitive and specific assay for nimodipine determination in human plasma. The time for the determination of one plasma sample was 4.5 min. This method is suitable for the analysis of nimodipine in human plasma samples collected for pharmacokinetic, bioavailability or bioequivalence studies in humans.

Um método rápido, específico e sensível para quantificar nimodipino em plasma humano usando dibucaína como padrão interno (IS) é descrito. O analito e o IS foram extraídos das amostras de plasma por extração líquido-líquido usando hexano-acetato de etila (1:1 v/v). A separação cromatográfica foi realizada utilizando-se uma coluna analítica C18 Varian® Polaris (3 μm, 50 x 2,0 mm) e uma pré-coluna SecurityguardTM C18 (4,0 x 3,0 mm) e acetonitrila-acetato de amônia 0,02 mol/L (80:20 v/v) como fase móvel. O método apresentou tempo total de corrida de 4,5 min e curva de calibração linear com concentrações entre 0,1-40 ng/mL (r > 0,9938). O limite de quantificação foi de 100 pg/mL. Os valores de precisão e exatidão foram obtidos por meio da análise das amostras de controle de qualidade. A análise de uma única amostra de plasma foi realizada em 4,5 minutos. A metodologia validada foi aplicada na determinação do perfil farmacocinético do nimodipino, comprimido de 30 mg administrado em 24 voluntários saudáveis. O método para quantificar nimodipino em plasma é adequado para aplicação em estudos farmacocinéticos, biodisponibilidade e bioequivalência em humanos.

Avaliação do dano oxidativo ao DNA de células normais e neoplásicas da mucosa cólica de doentes com câncer colorretal / Evaluation of DNA oxidative damage in normal and neoplastic cells of colonic mucosa in patients with colorectal cancer

O estresse oxidativo ao DNA de células da mucosa cólica decorrente de radicais livres de oxigênio presentes na luz intestinal, induz mutações de genes relacionados ao controle do ciclo celular, representando um dos fenômenos iniciais da carcinogênese colorretal. A quantificação do dano oxidativo ao DNA em portadores de câncer colorretal foi pouco estudada até o momento. OBJETIVO: O objetivo do presente estudo foi mensurar os níveis de dano oxidativo ao DNA de células isoladas da mucosa cólica de doentes com câncer colorretal comparando o tecido normal e o neoplásico e correlacionando-os a variáveis anatomopatológicas. MÉTODO: Estudou-se 32 enfermos (19 mulheres) com média de idade de 60,6 ± 15,5 anos, portadores de adenocarcinoma colorretal operados consecutivamente, entre 2005 e 2006. A avaliação do dano oxidativo ao DNA foi realizada pela da versão alcalina do ensaio cometa (eletroforese e gel de célula única), a partir de fragmentos de tecido cólico normal e neoplásico obtidos imediatamente após a extirpação do espécime cirúrgico. Avaliou-se a extensão das rupturas das hélices do DNA com método de intensificação de imagem, em 200 células escolhidas aleatoriamente (100 de cada amostra de tecido) com o programa Komet 5.5. A mensuração da cauda obtida de cada célula (Tail Moment) representava, quantitativamente, a extensão do dano oxidativo ao DNA. A análise estatística das variáveis consideradas foi realizada pelos testes t de Student, qui-quadrado e Kruskal-Wallis, adotando-se nível de significância de 5 por cento (p<0,05). RESULTADOS: Verificou-se em todos os doentes que as células obtidas do tecido neoplásico apresentavam maior intensidade de dano oxidativo ao DNA do que as células oriundas do tecido normal. As células isoladas da mucosa cólica neoplásica apresentavam, em média, extensão de ruptura das hélices do DNA (T.M. = 2,532 ± 0,945) significativamente maior quando comparadas às células isoladas do tecido normal...

Oxidative stress on mucosal cells of the colon, resulting from the action of free radicals present in the intestinal lumen, represents one of the initial phenomena in colorectal carcinogenesis, because it may induce gene mutations relating to cell cycle control. Quantification of the oxidative damage to the DNA in colorectal cancer patients has been little studied so far. OBJECTIVE: To measure the levels of oxidative damage to the DNA in cells isolated from the colon mucosa in colorectal patients, and to compare normal and neoplastic tissues and make correlations with anatomopathological variables. METHOD: Thirty colorectal adenocarcinoma patients (eighteen women) of mean age 60.6 ± 15.5 years who consecutively underwent operations performed by the same surgical team between 2005 and 2006 were studied. The oxidative damage to the DNA was evaluated by means of the alkaline version of the comet assay (single-cell gel electrophoresis), from fragments of normal and neoplastic colon tissue that were obtained immediately after removal of the surgical specimen. The extent of breakages of the DNA helices was assessed using an image intensification method, on 200 randomly chosen cells (100 from each tissue sample), by means of the Komet 5.5 program. The Tail Moment (T.M) measured in each cell quantitatively represented the extent of the oxidative damage to the DNA. The statistical analysis on the variables considered was performed by means of the Student t, chi-squared and Kruskal-Wallis tests, with a significance level of 5 percent (p<0.05). RESULTS: It was found that, for all the patients studied, the cells obtained from the neoplastic tissue presented oxidative damage to the DNA that was greater than in the cells from normal tissue. The cells isolated from the neoplastic mucosal tissue of the colon presented extension of DNA strand breakage significantly greater (T.M. = 2.532 ± 0.945) than did the cells isolated from normal tissue...

Análise das impressões digitais de DNA e de fatores de virulência de linhagens de Helicobacter pylori / Analysis of molecular fingerprint and virulence factors of Helicobacter pylori strains

RACIONAL: Helicobacter pylori é hoje aceito como o principal agente etiológico de gastrite em seres humanos e fator de risco para úlcera péptica e câncer gástrico. A evolução da infecção está relacionada a diversos fatores, inclusive bacterianos, como presença do gene cagA e o genótipo vacA s1m1, associados ao desenvolvimento de úlcera e adenocarcinoma gástrico. A técnica de RAPD ("random amplified polimorphic") tem sido amplamente utilizada para obtenção de impressões digitais de DNA para examinar a similaridade entre linhagens. OBJETIVOS: Avaliar a presença de cagA e alelos do vacA em amostras de H. pylori e associar os achados com a doença apresentada e também investigar possível clonicidade entre os fatores de virulência e as doenças com a impressão digital de DNA gerada pelo RAPD-PCR. MÉTODOS: Foram incluídas 112 amostras provenientes de pacientes com diferentes laudos endoscópicos: gastrite (n = 41), esofagite de refluxo (n = 14), úlcera gástrica (n = 19) e úlcera duodenal (n = 38). A análise dos fatores de virulência da bactéria foi feita por PCR e as impressões digitais de DNA foram estabelecidas pelo método de RAPD-PCR. RESULTADOS: Os resultados obtidos indicam que houve uma associação significativa entre úlcera duodenal e o mosaico vacA s1m1. Analisando-se os padrões de bandas geradas pelo RAPD-PCR, sete diferentes dendogramas foram construídos e não foi possível detectar associação significativa entre os agrupamentos, sugerindo que as amostras não possuem perfil clonal. CONCLUSÃO: Os resultados reforçam a importância do gene vacA como um marcador de virulência do H. pylori. O RAPD da impressão digital de DNA realizado foi incapaz de associar o padrão de bandas com as enfermidades e os genótipos de vacA e cagA.

BACKGROUND: Helicobacter pylori is now accepted as the most important agent of gastritis in humans, as well as a risk factor for peptic ulcer disease and gastric carcinoma. The outcome of the infection is related to several factors, among them bacterial ones such as cagA and vacA s1m1 genotype. Random amplified polymorphic DNA (RAPD)-PCR, has been used to generate DNA fingerprints to evaluate similarity among strains within a bacterial species. AIM: To assess the association between RAPD fingerprinting, virulence factors and the disease. METHODS: H. pylori was isolated from 112 patients (41 with gastritis; 19 with gastric ulcers; 38 with duodenal ulcer disease; and 14 with gastroesophageal reflux disease). Allelic variants of cagA and vacA were identified using the polymerase chain reaction (PCR) and the fingerprints were generated by RAPD-PCR. RESULTS: There was a strong association between the genotype vacA s1m1 and duodenal ulcers. Although RADP-PCR is a very useful tool in genotyping H. pylori, no significant correlation between the diseases studied and DNA fingerprint was detected neither with fingerprint and different vacA and, cagA genotypes. CONCLUSIONS: The extension of our analysis to patients with well-characterized gastric diseases may provide significant information on the relationship between vacA genotypes and clinical outcomes of H. pylori infection.

Quantitative real-time PCR for the clinical detection of Helicobacter pylori

Accurate diagnosis of Helicobacter pylori infection is very important in both clinical practice and research. We evaluated the sensitivity of real-time PCR (RT-PCR) for the detection and quantification of Helicobacter pylori using DNA from 91 human gastric biopsy samples divided into three groups: 46 biopsies from untreated patients who according to the references methods were considered H. pylori-negative (group A); 35 biopsies from patients previously treated against H. pylori and considered to be cured by "gold standard" tests (group B); and 10 biopsies from patients H. pylori-positive by all available methods (group C). The sensitivity of the RT-PCR assay was higher than that of standard methods. Of the 81 patients considered to be uninfected according to the references methods, 16 were H. pylori-positive by PCR, 10 of which were patients who had received H. pylori eradication therapy and 6 were untreated patients. Based on these findings we recommend that RT-PCR should be use in addition to standard methods in clinical studies to monitor the results of H. pylori eradication therapy.

The influence of endoscopic procedures upon the contamination of Helicobacter pylori cultures

RACIONAL E OBJETIVOS: Dentre os vários métodos diagnósticos empregados na detecção da infecção por Helicobacter pylori, o diagnóstico histológico e a análise microbiológica de biopsia gástrica são consideradas as técnicas mais sensíveis. Entretanto, a sensibilidade da cultura de H. pylori pode ser reduzida pela presença de outras bactérias. Desse modo, avaliou-se a eficácia da desinfecção do endoscópio e a influência dos procedimentos endoscópicos na contaminação da cultura bacteriana. Para tal, as duas primeiras endoscopias durante 28 dias consecutivos foram estudadas. A sala de endoscopia, o fórceps e o canal do endoscópio foram analisados antes e depois do início dos procedimentos endoscópicos rotineiros. Depois da desinfecção, uma simulação de coleta de biopsia foi realizada para verificar a presença das bactérias gástricas. RESULTADOS: A desinfecção do endoscópio foi capaz de remover todos os organismos do fórceps e do canal do endoscópio. As bactérias não-H. pylori mais freqüentemente detectadas foram Streptococcus bovis, Enterobacter hormaechei e Staphylococcus aureus. Em alguns casos a sensibilidade da cultura do H. pylori foi reduzida pela presença de bactérias contaminantes. CONCLUSAO: Não houve risco de transmissão de microorganismos quando fórceps esterilizados e desinfecção adequada foram empregadas. A presença de S. bovis e E. hormaechei parece ser comum na microflora gástrica; por outro lado, a detecção de P. aeruginosa e S. aureus indica que a manipulação de biopsias pode ser responsável pela contaminação da cultura por essas bactérias.

Gastroesophageal reflux and oral lesions: is the acid that bad?

O objetivo deste estudo é avaliar a cavidade bucal de pacientes com refluxo gastroesofágico para encontrar lesões nos dentes e nos tecidos lisos e comparar a prevalência dessa lesões com as observadas em pacientes que não apresentaram o refluxo. O estudo incluiu cinquenta e seis pacietes (26 do sexo masculino e 30 do feminino) com média de idade de 40 anos ( faixa de 29 a 60 anos), que foram submetidos a endoscopia superior para avaliar sintomas dispépticos. Trinta pacientes apresentavam esofagite péptica erosiva e foram colocados no grupo I. Verificou-se que vinte e seis pacientes apresentavam dispepsia funcional e estes foram colocados no grupo II. Os dois grupos de pacientes foram submetidos a avaliações bucais por um dentista. Os pacientes com refluxo gastroesofágico tinham maior prevalência de erosões, abrasão e atrito, porém uma prevalência significante mais baixa de cáries e gengivite. A presença de esofagite erosiva não teve impacto sobre a prevalência de periodontite. Ainda será preciso determinar se essa interferência está relacionada com uma maior exposição da placa dentária ao ácido e `a pepsina, devido a uma interferência da função salivária.