Cambios histopatológicos en arterias humanas sometidas a procesos de isquemia fría y criopreservación / Histopathological changes in human arteries following cold ischemia and cryo preservation processes

Introducción. La creciente demanda de injertos vasculares ha provocado una búsqueda continua del método `ideal' para minimizar los daños vasculares durante el proceso de conservación. Objetivo. Estudiar la repercusión sobre la histología arterial del proceso de preservación del tejido en sus distintas fases. Pacientes y métodos. Hemos analizado 86 segmentos arteriales (ilíaca y femoral superficial) procedentes de 50 donantes. De cada segmento se obtuvieron tres muestras en distintas fases del proceso, y se establecieron otros tantos grupos de estudio: arterias frescas; postisquemia fría y poscriopreservación. El tiempo máximo de isquemia fria fue de 20 horas y las muestras se mantuvieron en solución antibiótica a 4 °C. La criopreservación se realizó en una solución con dimetil sufóxido (DMSO) con descenso térmico programado de 1 ºC / min con almacenamiento en fase gas (-150 °C a -190 °C). Se valoraron parámetros como la preservación del endotelio, la intensidad de cambios degenerativos (degeneración mixoide, apoptosis) en la pared arterial y la presencia de fracturas, comparando los resultados entre los distintos grupos. Se estudiaron igualmente las causas que llevaron al fracaso de algunos injertos. Resultados. El 81,4 por ciento de las arterias criopreservadas mostró una pérdida prácticamente total del endotelio (3,5 por ciento en los otros dos grupos) y más del 50 por ciento, importantes cambios degenerativos en su pared frente al 3,5 y 8,1 por ciento de los grupos 1 y 2. Conclusiones. El proceso de criopreservación provoca una importante pérdida endotelial y cambios degenerativos en la pared arterial. El tiempo de isquemia fría que se empleó en nuestro estudio no tiene repercusión en la estructura arterial (AU)

Efecto del almacenamiento en fase gaseosa sobre la viabilidad celular, la apoptosis y la actividad funcional en aortas de cerdo criopreservadas. Estudio preliminar / The effect of gas phase storage on cell viability, apoptosis and functional activity in cryopreserved aortas from pigs a preliminary study

Objetivos. Analizar las consecuencias del protocolo de congelación y del método de almacenamiento utilizado sobre la actividad funcional, la estructura anatomopatológica y el grado de apoptosis de las aortas abdominales de cerdo criopreservadas durante seis meses, tras la descongelación. Materiales y métodos. Se obtuvieron injertos arteriales de cerdos y cada aorta se dividió en dos fragmentos. Grupo 1: segmentos en fresco o bien fijados en formaldehído tras la toma de la muestra (grupo control). Grupo 2: segmentos fijados tras incubación antibiótica y criopreservación durante seis meses para un estudio anatomopatológico y de apoptosis, o bien utilizados directamente tras su descongelación para un estudio funcional. La incubación antibiótica se realizó en medio de un cultivo RPMI suplementado con antibióticos. Después de la incubación antibiótica, la criopreservación se llevó a cabo en medio RPMI con 10 por ciento de dimetilsulfóxido (DMSO). La tasa de enfriamiento fue de 1 °C/min, y el posterior almacenamiento se realizó en fase gaseosa. Resultados. No hay diferencia en cuanto al grado de apoptosis en los dos grupos, ni diferencias significativas en el grado de fragmentación de las elásticas (algo mayor en el grupo 2). Se observa un aumento tanto del grado de despegamiento como del desprendimiento endotelial en el grupo congelado con respecto al grupo control. Después de la descongelación, las máximas respuestas a los vasoconstrictores probados (KCl y noradrenalina) fueron del 13 y el 24 por ciento de las respuestas de las aortas que se obtuvieron en fresco. Las respuestas relajantes independientes del endotelio al nitroprusiato sódico estaban reducidas y se produjo una importante reducción de las respuestas de relajación dependientes del endotelio a la acetilcolina. Conclusiones. El método de criopreservación que se empleó disminuyó las respuestas de contracción y relajación a los seis meses y produjo cambios morfológicos importantes en cuanto a la conservación del endotelio y de las elásticas, pero no alteró el grado de apoptosis (AU)

Effect of cryopreservation on human articular chondrocyte viability, proliferation, and collagen expression.

Autotransplantation of human chondrocytes is an alternative therapeutic treatment for focal lesions of cartilage. During the process of isolation and culture of chondrocytes some problems that render the implantation of the cells unsuitable can occur. For security, some cells must be stored using cryopreservation. The objective of this study was to analyze the effect of cryopreservation on cellular viability, proliferation, and collagen expression of human chondrocytes. Human osteoarthritic cartilage (n = 23) was obtained and transferred to a sterile flask containing Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) and antibiotics. Chondrocytes were isolated, cultured for 3-4 weeks, and frozen in DMEM containing 10% human serum and 10% dimethyl sulfoxide by use of three different protocols. A cellular fraction was frozen directly to -80 degrees C (Protocol I). Another fraction was directly frozen to -80 degrees C and 24 h later introduced into liquid nitrogen (Protocol II). The last aliquot was frozen with controlled freezing using a freezing rate of -1 degrees C/min to a temperature of -40 degrees C, 2 degrees C/min to -60 degrees C, and 5 degrees C/min to -150 degrees C (Protocol III). Cells were cryopreserved for 2 weeks. Cells from each cryopreservation method were then cultured for 7 days and cellular proliferation was evaluated by the counting of the total cells in each flask. Cryopreservation had a negative effect on chondrocyte survival and proliferation. The survival after cryopreservation with the three protocols was 70-75%. There was no significative difference between the methods used to cryopreserve (P = 0.4117). However, there was a significant difference among the donors (P = 0.0111). Cellular proliferation of chondrocytes was reduced by cryopreservation (P = 0.024). The rate of proliferation of different groups was control samples 6.56, Protocol I 4.66, Protocol II 4.69, and Protocol III 5.58. Statistical analysis showed that the programmed protocol was the best method to preserve cellular functions. Chondrocytes were able to express collagen type II 1 week after cryopreservation. Cryopreservation modifies the survival and proliferation of chondrocytes. Of all protocols used to cryopreserve, the programmed protocol seems to be the best technique. Cryopreservation does not alter the collagen type II expression.

Fluorescence In Situ Hybridization: Trisomy 12 Follow-up In Hairy Cell Leukemia.

Peripheral white blood cells from five patients with hairy cell leukemia (HCL) were studied applying fluorescence in situ hybridization (FISH) using heparinized peripheral blood, biotin-labeled chromosome 12-specific α satellite DNA probe and biotin fluorescein-labeled avidin to detect hybridization. This methodology is ideal to investigate the incidence of numerical chromosomal abnormalities of both interphase and metaphase cells. Blood samples from 28 normal subjects were included as control samples. Trisomy 12 was considered to be present when ≥4% of cells had three hybridization spots. Trisomy 12 was detected in three of the five patients at different stages of their evolution. Trisomy 12 was also evident in two patients upon relapse of the HCL. When treatment with interferon alfa (IFN) and steroids was started, clinical and analytical remission were achieved and trisomy 12 disappeared. In one patient trisomy 12 persisted regardless of treatment with IFN and a good clinical evolution. Our results show that trisomy 12 was detected in HCL with FISH at a higher frequency than that previously reported by cytogenetic analysis in either peripheral blood or in cultivated cell lines. These results indicate that the presence of trisomy 12 may be a useful marker for the presence of HCL cells, to check the percentage of trisomic cells and that trisomy 12 is also a useful marker to indicate the activity of the disease.