A new role for reticulon-4B/NOGO-B in the intestinal epithelial barrier function and inflammatory bowel disease.

Inflammatory bowel disease (IBD) is characterized by an impaired intestinal barrier function. We aimed to investigate the role of reticulon-4B (RTN-4B/NOGO-B), a structural protein of the endoplasmic reticulum, in intestinal barrier function and IBD. We used immunohistochemistry, confocal microscopy, real-time PCR, and Western blotting to study tissue distribution and expression levels of RTN-4B/NOGO-B in control and IBD samples from mouse and humans. We also targeted RTN-4B/NOGO-B using siRNAs in cultured human intestinal epithelial cell (IECs). Epithelial barrier permeability was assessed by transepithelial electrical resistance (TEER) measurement. RTN-4B/NOGO-B is expressed in the intestine mainly by IECs. Confocal microscopy revealed a colocalization of RTN-4B, E-cadherin, and polymerized actin fibers in tissue and cultured IECs. RTN-4B mRNA and protein expression were lower in the colon of IL-10(-/-) compared with wild-type mice. Colocalization of RTN-4B/E-cadherin/actin was reduced in the colon of IL-10(-/-) mice. Analysis of endoscopic biopsies from IBD patients showed a significant reduction of RTN-4B/NOGO-B expression in inflamed mucosa compared with control. Treatment of IECs with H2O2 reduced TEER values and triggered phosphorylation of RTN-4B in serine 107 residues as well as downregulation of RTN-4B expression. Acute RTN-4B/NOGO-B knockdown by siRNAs resulted in a decreased TEER values and reduction of E-cadherin and α-catenin expression and in the amount of F-actin-rich filaments in IECs. Epithelial RTN-4B/NOGO-B was downregulated in human and experimental IBD. RTN-4B participates in the intestinal epithelial barrier function, most likely via its involvement in E-cadherin, α-catenin expression, and actin cytoskeleton organization at sites of cell-to-cell contacts.

Doxazosina y guanilato ciclasa soluble en un modelo de ratas hipertensas / Doxazosin and Soluble Guanylate Cyclase in a Rat Model of Hypertension

Introducción. Aunque existen diferentes estudios sobre la capacidad del endotelio de generar óxido nítrico en la disfunción endotelial asociada a la hipertensión, el sistema de la guanilato ciclasa soluble (GCs) ha sido menos estudiado. Objetivo. Analizar en ratas espontáneamente hipertensas que desarrollan accidentes cerebrovasculares (SHRSP) el nivel de expresión de la GCs en la pared vascular. También se estudió el efecto del tratamiento con doxazosina, antagonista 1-adrenérgico, sobre la expresión de la GCs en la pared vascular de estos animales. Métodos. Se utilizaron ratas SHRSP (edad, 20 semanas; n = 24). Un grupo de estas ratas fue tratado con doxazosina (10 mg/kg peso/día; n = 12) durante 2 semanas, y se comparó con ratas Wistar-Kyoto (WKY) normotensas (n = 12).Resultados. Segmentos aórticos aislados de ratas SHRSP presentaron una disminución de la respuesta vasodilatadora al nitroprusiato sódico. La respuesta al nitroprusiato sódico mejoró en las ratas SHRSP tratadas con doxazosina respecto de las SHRSP sin tratamiento. La expresión de la 1-GCs determinada por Western blot e inmunohistoquímica estaba disminuida en las ratas SHRSP respecto a las WKY. La administración de doxazosina aumentó la expresión de GCs, particularmente en la capa media cuando se comparara con ratas SHRSP no tratadas. Conclusiones. En las ratas SHRSP existe una disminución de la expresión de 1-GCs en la pared vascular y una reducción en la respuesta a nitroprusiato sódico que mejora tras la administración de doxazosina cuando se compara con SHRSP no tratadas. Estos resultados sugieren la importancia que también puede tener el sistema de la GCs en el tratamiento global de la disfunción endotelial (AU)