Producción de proteína unicelular de levaduras crecidas en desechos de harina de maíz precocida (Zea mays) / Unicell protein of production of grown yeasts in waste of precooked corn flour (zea mays)

En el presente trabajo se utilizaron desechos generados durante el empacado de harina de maíz precocida, para enriquecerlos en proteínas microbianas por procesos de fermentación líquida, los cuales poseen 78,55 por ciento de almidón y 7,8 por ciento de proteína cruda con el objeto de enriquecerlos en proteínas microbianas por procesos de fermentación líquida. El desecho fue sometido a hidrólisis por tratamientos químicos y enzimáticos. En la hidrólisis química, se utilizaron valores de 1:10 (p/v) para la relación desecho/ ácido sulfúrico al 2 por ciento, en la hidrólisis enzimática, se realizó con una levadura productora de &-amilasas y con una enzima comercial. Se determinaron, a nivel de fiolas y de fermentadores de 2.5 litros, las condiciones óptimas de crecimiento de Candida utilis, Saccharomyces cerevisiae y Schwannmyces. castelli. Las condiciones experimentales: pH 4;5 30°C. 1 vvm; 20 g/L del desecho, 1,25 g/L de (urea, sulfato de amonio, extracto de levadura y extracto de malta diastásico líquido). La fermentación de 250 litros se realizó en una fermentador PROYETSAN, la hidrólisis enzimática se realizó con Sch. castelli, y el consumo de azúcares con S. cerevisiae, obteniéndose 9 g de biomasa de peso seco/litro, y un incremento proteico de 7.8 a 41.13 por ciento. Se puede concluir que los desechos de harina de maíz precocida constituyen un substrato adecuado para obtener biomasa o proteína unicelular, que podría ser destinada como suplemento en formulaciones para alimentación animal

[Production of Kluyveromices fragilis biomass in deproteinized milk whey]. / Produccion de biomasa de Kluyveromices fragilis en suero de leche desproteinizado.

The milk whey from a mature cheese factory deproteinised by acid thermic coagulation (pH 4.5 and 90 degrees C), provides a good culture media for the production of Kluyveromices fragilis biomass. The optimal experimental conditions for the maximal production of biomass were established by using fermenters with different capacity and design. For lactose concentration of 15 g/l, pH 4.5, 30 degrees C and aireation between 0.25 and 1 VVM, the duplication time was below two hours and 98% of the lactose was consumed. The obtained yield in dried weight was between 36 and 49% (g biomass/g lactose). The biomass (without broken cell) contain 46% protein on dry base and showed an "in vitro" digestibility of 65%. The organic mass decreased 80% after 12 hour of fermentation. This process eliminates a polluting agent and simultaneously, produces a biomass that could have industrial use as a protein complement in feeds.

[Production of an acid extract of rice straw]. / Producción de un extracto ácido de paja de arroz.

The chemical composition of rice straw was determined by means of standard analytical procedures. The material showed an adequate content of potentially assimilable carbohydrates for the growth of microorganisms. The optimum result of the rice straw treatment corresponds to a particle size of 60 mesh mixed with 5% H2SO4 in a weight: volume relation of 1:10 and submitted to a temperature of 121 degrees C. Under these conditions a rice straw's acid extract was obtained, containing 20 g/lt of total sugars and 15 g/lt of reducing sugars. This content of sugars is enough to support the growth of microorganisms in aerobic conditions.

[Biomass production enriched in intracellular methionine by a mutant of Saccharomyces cerevisiae]. / Producción de biomasa enriquecida en metionina intracelular por un mutante de Saccharomyces cerevisiae.

According with FAO reported data the methionine intracellular content in Saccharomyces cerevisiae is higher than another yeast. For increasing the yeast methionine internal concentration three S. cerevisiae mutant strains were chosen (M2, M4 y M9), obtained by ethionine (0.1 mg/ml) and norleucine (0.33 mg/ml) resistance by González Miliani (personal communication). The resistance levels in culture were modified until selection of a mutant LF-M9 etr norr, which shows resistance to ethionine (6 mg/ml). Optimal conditions for growth were fixed on shaked flasks and later mutationaly experiments were conducted with nitrosoguanidine (0.5 mg/ml) and U.V. light (240 nm in 9 minutes d = 32 cm). Mutants obtained were selected on plate replicates and microbiological test, using Escherichia coli 303 (Wollman, met- b1- strr) as the indicating strain. The mutant LF-M9 treo- etr norr, shows an intracellular methionine content 3 times higher than the control strain DSM D273-10B and 1.8 times higher than parental strain M9. The mutant was cultivated on different agroindustrial wastes and the optimal growth was reached in acid hydrolysates of cassava foliage. Fermentations in 1 litre stirred fermentor were accomplished using these medium and the biomass obtained was 6.3 g of the yeast (dry weight) enriched in methionine per litre of extract.

Producción de biomasa enriquecida en metionina intracelular / Biomass production enriched in intracellular methionine by a mutant of Saccharomyces cerevisiae

Según los datos reportados por la FAO, el contenido intracelular de metionina en Saccharomyces cerevisiae, es más elevado que el de otras levaduras. Con el fín de incrementar en esta levadura la concentración interna de metionina se eligieron 3 cepas mutantes de S. cerevisiae, M2, M4 y M9, obtenidas por González Miliani (comunicación personal) por resistencia a etionina (0,1 mg/ml) y norleucina (0,33 mg/ml). Los niveles de resistencia de estas cepas a la etionina fueron incrementados hasta que se seleccionó un mutante LF-M9 et nor resistente a concentraciones de 6 mg del análogo por ml. Establecidas las condiciones óptimas de crecimiento en medio 200, este mutante fué mutagenizado con nitrosoguanidina (0,5 mg/ml) y luz ultravioleta (240 nm durante 9 minutos a d=32 cm). Los mutantes obtenidos se seleccionaron mediante réplicas en placas y ensayos microbiológicos sobre Escherichia coli 303 (Wollman, met-b1-strr).El mutante LF-M9 treo-etrnorr de S. cerevisae contiene 3 veces más metionina que la cepa S. cerevisae DSM D273-10B utilizada como control y 1.8 veces más que la cepa M9 parental. Al ser cultivado en distintos desechos agroindustriales mostró un crecimiento óptimo en un hidrolizado ácido de hojas y tallos de yuca. A nivel de fermentador de 1 litro la biomasa obtenida en ese medio fué 6.3 g de levadura (peso seco) enriquecida en metionina, por litro de extracto

Tetrathionate reductase of Salmonella thyphimurium: a molybdenum containing enzyme.

Use of radioactive molybdenum demonstrates that the tetrathionate reductase of Salmonella typhimurium is a molydenum containing enzyme. It is proposed that this enzyme shares with other molybdo-proteins, such as nitrate reductase, a common molybdenum containing cofactor the defect of which leads to the loss of the tetrathionate reductase and nitrate reductase activities.

Reconstitution "in vitro" of a formate or NADH dependent nitrite reductase activity starting from cytochrome C552 and membrane vesicles from Escherichia coli K-12.

El aislamiento en Escherichia coli K-12 de un cytocromo C552, libre de contaminantes particulados, permitio la reconstitucion "in vitro" de una actividad nitrito reductasa que requiere vesiculas de membrana, cytocromo C552 y formiato (o NADH) como donadores de electrones. La via de transferencia de electrones desde el formiato o el NADH incluye un segmento de las cadenas respiratorias membranales del nitrato y el oxigeno que carece de cytocromos de tipo b. Este segmento contiene NADH y formiato deshidrogenasas, y un transportador redox sensible al 2-heptil-4hidroxiquinolina-N-oxido (HQNO). Evidencias indirectas sugieren que este transportador es probablemente una quinona que reaccionaria directamente, o indirectamente por medio de un transportador desconocido, con el cytocromo C552 periplasmico soluble. En este sistema el citocromo C552 parece actuar directamente sobre el nitrito como una nitrito reductasa terminal

Aislamiento y caracterizacion del segmento de cadena respiratoria especifico del sistema nitrato reductasa de Escherichia coli K-12. / Isolation and characterization of a respiratory chain segment specific of nitrate reductase system of Escherichia coli K-12

Vesiculas de membrana provenientes de celulas de Escherichia coli K-12, crecidas en anaerobiosis con nitrato, fueron solubilizadas mediante una metodologia que combina tratamiento con calor a pH neutro y deoxicolato y disociacion con Triton X100. Se separaron tres fracciones diferentes mediante filtracion de los extractos por columnas de Sephadex G-200 y Biogel-A 1.5. Todas las fracciones mostraron actividad benzil viologeno-nitrato reductasa (BV-NR) no obstante su diferente volumen de elucion. Dos fracciones carecieron de citrocromo de tipo b y de actividad nitrato-reductasa dependiente del complejo donador de electrones ascorbato-fenacina metasulfato (AFM-NR). La actividad BV-NR de estas dos fracciones no fue afectada por luz ultravioleta de 360 mm. La tercera fraccion, de mayor tamano que las anteriores, contenia citocromo de tipo b y actividades AFM-NR y BV-NR. Ambas fueron inhibidas por irradiacion con luz ultravioleta de 360 nm. A partir de esta ultima fraccion se logro aislar un compuesto soluble en n-pentano. Sus propiedades espectrofotometricas fueron similares a las de las ubiquinonas. Se discute el posible papel de este compuesto en el segmento de cadena respiratoria especifico del sistema nitrato reductasa del E. coli K-12

Chlorate metabolism by whole cells and membrane vesicles of Escherichia coli K-2.

Se siguio la reduccion del clorato por Escherichia coli K-12 mediante la utilizacion de clorato marcado 36 C1-, preparado por oxidacion anodica del ion cloruro. Las celulas redujeron el nitrato y el clorato a velocidades similares. Las vesiculas de membrana y las celulas no acumularon clorato ni sus productos de reduccion (C102-, C10-, C1). El bajo nivel de radioactividad enlazado a celulas o vesiculas puede ser atribuido principalmente a absorcion inespecifica. Estos resultados son discutidos en relacion con la localizacion del sitio enlazante del clorato (y el nitrato) sobre la nitrato reductasa membranal de E. coli

Localization and characterization of cytochromes from membrane vesicles of Escherichia coli K-12 grown in anaerobiosis with nitrate.

Cytochromes b of anaerobically nitrate-grown Escherichia coli cells are analysed. Ascorbate phenazine methosulfate distinguishes low and high potential cytochromes b. Reduction kinetics performed at 559 nm presents a very complex pattern which can be analysed assuming that at least four b-type cytochromes are present. The electron transport chain from formate to oxygen would contain a low potential cytochrome b-556, a cytochrome b-558 associated to the oxidase, and a cytochrome d as the principle oxidase. Cytochrome o is also present, but seems to be functional only at low oxygen concentrations. A cytochrome b-556 associated to nitrate reductase is shown to belong to a branch of the formate-oxidase chain. 2-N-Heptyl-4-hydroxyquinoline-N-oxide affects the reduction kinetics in a very complex way. One inhibition site is in evidence between cytochrome b-558 and cytochrome d; another between the cytochrome associated to nitrate reductase and the nitrate reductase. A third inhibition site is located in the common part of the formate-nitrate and the formate-oxidase systems. Ascorbate phenazine methosulfate is shown to donate electrons near cytochrome b-558.