Resumo
Enterococci have been used as sentinel organisms for monitoring antimicrobial resistance in food, humans, and other animals. In this sense, the present study evaluated the antimicrobial susceptibility profile and the presence of genes associated with resistance to erythromycin (msrC and ermB) and tetracycline [tet(M) and/or tet(L)] in enterococci isolated from raw sheep's milk and cheeses (colonial, feta-, and pecorino-type) from South region of Brazil. A total of 156 enterococci were isolated from milk (n=80) and cheese (n=76) samples, identified by MALDI-TOF. Enterococcus faecalis (50.6%; n=79) was the most frequent species isolated from both samples. According to in vitro susceptibility tests, enterococci strains were not susceptible to the most commonly antimicrobial agents used in human and veterinary medicine. The frequency of MDR strains in enterococci isolated from milk (53.7%) was higher than those from cheese (24.2%). The tet(M) gene was the most commonly detected among tetracycline not-susceptible strains. The present study provided the first evidence of antimicrobial not-susceptible enterococci in raw sheep's milk and cheeses in South Brazil. Drug-resistant strains, particularly those that are MDR, constitute a One Health issue.
Os enterococos têm sido usados como organismos sentinela para monitorar o padrão de suscetibilidade a antimicrobianos em alimentos, humanos e outros animais. Neste sentido, o presente estudo objetivou avaliar o perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e os genes associados com a resistência a eritromicina (msrC and ermB) e à tetraciclina [tet(M) and/or tet(L)] em enterococos isolados de leite cru de ovelha e queijos (colonial, tipo-feta e tipo-pecorino) do Sul do Brasil. Um total de 156 enterococos foram isolados de leite (n=80) e queijo (n=76), identificados por MALDI-TOF. Enterococcus faecalis (50,6%; n=79) foi a espécie mais frequentemente isolada de ambas as amostras. De acordo com o teste de suscetibilidade in vitro, as cepas de enterococos não foram susceptíveis aos agentes antimicrobianos mais comumente utilizados na clínica humana e veterinária. A frequência de cepas de enterococos MDR isoladas do leite (53,7%) foi superior à do queijo (24,2%). O gene tet(M) foi o mais comumente detectado entre as cepas não susceptíveis à tetraciclina. O presente estudo fornece as primeiras evidências de enterococos não susceptíveis aos antimicrobianos em leite cru de ovelha e queijos no Sul do Brasil. Cepas resistentes a drogas, particularmente as que são MDR, representam uma preocupação de Saúde Única.
Assuntos
Ovinos , Queijo/parasitologia , Enterococcus , Laticínios/parasitologia , Abastecimento de AlimentosResumo
The aim of present study is to characterize the resistance and virulence profile of enterococci isolated from aquaculture excavated ponds and masonry tanks (6 samples) in southern Brazil. Samples were cultured in selective medium, 10 colonies were randomly selected from each sample, which were identified by MALDI-TOF and tested against 13 antimicrobials. The presence of resistance (tetL, tetM, tetS, ermB and msrC) and virulence (ace, esp, agg, cylA and gelE) genes were determined by PCR. A total of 79 enterococci were identified, and Entecococcus faecalis (44.3%) and E. casseliflavus (36.7%) were the most prevalent species isolated. Sixty-five strains (82.3%) were resistant to at least one of the antimicrobials tested, whereas 27 (34.2%) strains were multiresistant. The overall percentages of antimicrobial resistant isolates were: 58.2% to rifampicin, 40.5% to fluoroquinolones, 36.7% to erythromycin and 30.4% to tetracycline. The tetL and tetM genes were found in 57.7% of the tetracycline-resistant strains; and msrC in 31.01% of erythromycin-resistant strains. The most frequently detected virulence factors were ace and gelE genes. Although limited to a single farm, these data suggest that aquaculture may be a reservoir of resistant and virulent enterococci. This study is the first step towards enhancing our understandingof distribution, resistance and virulence profile in enterococci isolated from fish farming environments in the south Brazil.(AU)
O objetivo do estudo apresentado é caracterizar o perfil de resistência e virulência de enterococos isolados de viveiros escavados e tanques de alvenaria (6 amostras) de uma pisicultura no Sul do Brasil. As amostras foram cultivadas em meio seletivo, 10 colônias foram selecionadas aleatoriamente de cada amostra, que foram identificadas por MALDI-TOF e testadas contra 13 antimicrobianos. A presença de genes de resistência (tetL, tetM, tetS, ermB e msrC) e virulência (ace, esp, agg, cylA e gelE) foi determinada por PCR. Foram identificados 79 enterococos, sendo Entecococcus faecalis (44,3%) e E. casseliflavus (36,7%) as espécies mais frequentes isoladas. Sessenta e cinco cepas (82,3%) eram resistentes a pelo menos um dos antimicrobianos testados, enquanto 27 (34,2%) eram multirresistentes. As porcentagens gerais de isolados resistentes a antimicrobianos foram: 58,2% para rifampicina, 40,5% para fluoroquinolonas, 36,7% para eritromicina e 30,4% para tetraciclina. Os genes tetL e tetM foram encontrados em 57,7% das cepas resistentes à tetraciclina; e msrC em 31,01% das cepas resistentes à eritromicina. Os fatores de virulência mais comumente detectados foram ace e gelE. Embora limitados a uma única fazenda, esses dados indicam que a aquicultura pode ser uma fonte de enterococos resistentes e virulentos. Este estudo é o primeiro passo para melhorar nosso entendimento da distribuição, resistência e perfil de virulência em enterococos isolados de ambientes de piscicultura no sul do Brasil.(AU)
Assuntos
Animais , Enterococcus/isolamento & purificação , Pesqueiros , Fatores de Virulência , BrasilResumo
Abstract The aim of present study is to characterize the resistance and virulence profile of enterococci isolated from aquaculture excavated ponds and masonry tanks (6 samples) in southern Brazil. Samples were cultured in selective medium, 10 colonies were randomly selected from each sample, which were identified by MALDI-TOF and tested against 13 antimicrobials. The presence of resistance (tetL, tetM, tetS, ermB and msrC) and virulence (ace, esp, agg, cylA and gelE) genes were determined by PCR. A total of 79 enterococci were identified, and Entecococcus faecalis (44.3%) and E. casseliflavus (36.7%) were the most prevalent species isolated. Sixty-five strains (82.3%) were resistant to at least one of the antimicrobials tested, whereas 27 (34.2%) strains were multiresistant. The overall percentages of antimicrobial resistant isolates were: 58.2% to rifampicin, 40.5% to fluoroquinolones, 36.7% to erythromycin and 30.4% to tetracycline. The tetL and tetM genes were found in 57.7% of the tetracycline-resistant strains; and msrC in 31.01% of erythromycin-resistant strains. The most frequently detected virulence factors were ace and gelE genes. Although limited to a single farm, these data suggest that aquaculture may be a reservoir of resistant and virulent enterococci. This study is the first step towards enhancing our understandingof distribution, resistance and virulence profile in enterococci isolated from fish farming environments in the south Brazil.
Resumo O objetivo do estudo apresentado é caracterizar o perfil de resistência e virulência de enterococos isolados de viveiros escavados e tanques de alvenaria (6 amostras) de uma pisicultura no Sul do Brasil. As amostras foram cultivadas em meio seletivo, 10 colônias foram selecionadas aleatoriamente de cada amostra, que foram identificadas por MALDI-TOF e testadas contra 13 antimicrobianos. A presença de genes de resistência (tetL, tetM, tetS, ermB e msrC) e virulência (ace, esp, agg, cylA e gelE) foi determinada por PCR. Foram identificados 79 enterococos, sendo Entecococcus faecalis (44,3%) e E. casseliflavus (36,7%) as espécies mais frequentes isoladas. Sessenta e cinco cepas (82,3%) eram resistentes a pelo menos um dos antimicrobianos testados, enquanto 27 (34,2%) eram multirresistentes. As porcentagens gerais de isolados resistentes a antimicrobianos foram: 58,2% para rifampicina, 40,5% para fluoroquinolonas, 36,7% para eritromicina e 30,4% para tetraciclina. Os genes tetL e tetM foram encontrados em 57,7% das cepas resistentes à tetraciclina; e msrC em 31,01% das cepas resistentes à eritromicina. Os fatores de virulência mais comumente detectados foram ace e gelE. Embora limitados a uma única fazenda, esses dados indicam que a aquicultura pode ser uma fonte de enterococos resistentes e virulentos. Este estudo é o primeiro passo para melhorar nosso entendimento da distribuição, resistência e perfil de virulência em enterococos isolados de ambientes de piscicultura no sul do Brasil.
Resumo
The ubiquitous nature of enterococci and their ability to colonize different habitats account for their easy spread throughout the food chain. Here, we evaluated the distribution and antimicrobial susceptibility of Enterococcus isolates from meats obtained from different supermarkets. We acquired and cultured 100 products (raw chicken meat, raw pork, and boiled meats) to screen for the presence of Enterococcus spp. In total, 194 isolates were recovered from the samples, with contamination rates of 63.6% in the chicken samples, 31% in the raw pork meat, and 1.4% in the boiled meat samples. PCR amplification with specific primers was performed to screen the DNA of Enterococcus spp. (95/96), E. faecalis (66/96), E. faecium (30/96), and E. casseliflavus/E. flavescens (3/96). The antimicrobial susceptibility tests showed that all the isolates were resistant to at least one of the antibiotics. All E. faecium isolates were resistant to vancomycin, streptomycin, ciprofloxacin, norfloxacin, erythromycin, and tetracycline. The E. casseliflavus/E. flavescens isolates were resistant to gentamicin, streptomycin, ciprofloxacin, norfloxacin, erythromycin, and tetracycline. E. faecalis isolates were resistant to ciprofloxacin, tetracycline, and erythromycin (92%), norfloxacin (83%), vancomycin, and streptomycin (50%). The resistance genes tetL and vanB were detected by genotyping. The presence of these antimicrobial-resistant microorganisms in food might pose problems for public health.
A natureza ubíqua dos enterococos e sua capacidade de colonizar diferentes habitats são responsáveis pela sua fácil disseminação pela cadeia alimentar. No presente estudo, avaliamos a distribuição e a susceptibilidade antimicrobiana de isolados de Enterococcus provenientes de produtos cárneos. Cem produtos (carne de frango cru, carne de porco crua e carne cozida) foram adquiridos e cultivados para a presença de Enterococcus spp. No total, 194 amostras foram avaliadas, com taxas de contaminação de 63,6% nas amostras de frango, 31% na carne de porco crua e 1,4% nas amostras de carne cozida. A amplificação por PCR foi realizada para confirmar a presença de Enterococcus spp. (95/96), E. faecalis (66/96), E. faecium (30/96) E. casseliflavus/E. flavescens (3/96). Resultados de susceptibilidade mostraram que 100% dos isolados foram resistentes a pelo menos um antibiótico, sendo 100% de E. faecium resistentes a vancomicina, estreptomicina, ciprofloxacina, norfloxacina, eritromicina e tetraciclina. E. casseliflavus / E. flavescens resistentes a gentamicina, estreptomicina, ciprofloxacina, norfloxacina, eritromicina e tetraciclina. E. faecalis foram resistentes a ciprofloxacina, tetraciclina e eritromicina (92%), norfloxacina (83%), vancomicina e estreptomicina (50%). Na genotipagem, foram detectados os genes tetL e vanB. A presença desses microrganismos resistentes aos antimicrobianos nos alimentos pode causar problemas para a saúde pública.
Assuntos
Alimentos Crus/análise , Carne , Enterococos Resistentes à Vancomicina/genética , Resistência a Tetraciclina/genética , Bovinos , Galinhas , Reação em Cadeia da Polimerase , SuínosResumo
The ubiquitous nature of enterococci and their ability to colonize different habitats account for their easy spread throughout the food chain. Here, we evaluated the distribution and antimicrobial susceptibility of Enterococcus isolates from meats obtained from different supermarkets. We acquired and cultured 100 products (raw chicken meat, raw pork, and boiled meats) to screen for the presence of Enterococcus spp. In total, 194 isolates were recovered from the samples, with contamination rates of 63.6% in the chicken samples, 31% in the raw pork meat, and 1.4% in the boiled meat samples. PCR amplification with specific primers was performed to screen the DNA of Enterococcus spp. (95/96), E. faecalis (66/96), E. faecium (30/96), and E. casseliflavus/E. flavescens (3/96). The antimicrobial susceptibility tests showed that all the isolates were resistant to at least one of the antibiotics. All E. faecium isolates were resistant to vancomycin, streptomycin, ciprofloxacin, norfloxacin, erythromycin, and tetracycline. The E. casseliflavus/E. flavescens isolates were resistant to gentamicin, streptomycin, ciprofloxacin, norfloxacin, erythromycin, and tetracycline. E. faecalis isolates were resistant to ciprofloxacin, tetracycline, and erythromycin (92%), norfloxacin (83%), vancomycin, and streptomycin (50%). The resistance genes tetL and vanB were detected by genotyping. The presence of these antimicrobial-resistant microorganisms in food might pose problems for public health.(AU)
A natureza ubíqua dos enterococos e sua capacidade de colonizar diferentes habitats são responsáveis pela sua fácil disseminação pela cadeia alimentar. No presente estudo, avaliamos a distribuição e a susceptibilidade antimicrobiana de isolados de Enterococcus provenientes de produtos cárneos. Cem produtos (carne de frango cru, carne de porco crua e carne cozida) foram adquiridos e cultivados para a presença de Enterococcus spp. No total, 194 amostras foram avaliadas, com taxas de contaminação de 63,6% nas amostras de frango, 31% na carne de porco crua e 1,4% nas amostras de carne cozida. A amplificação por PCR foi realizada para confirmar a presença de Enterococcus spp. (95/96), E. faecalis (66/96), E. faecium (30/96) E. casseliflavus/E. flavescens (3/96). Resultados de susceptibilidade mostraram que 100% dos isolados foram resistentes a pelo menos um antibiótico, sendo 100% de E. faecium resistentes a vancomicina, estreptomicina, ciprofloxacina, norfloxacina, eritromicina e tetraciclina. E. casseliflavus / E. flavescens resistentes a gentamicina, estreptomicina, ciprofloxacina, norfloxacina, eritromicina e tetraciclina. E. faecalis foram resistentes a ciprofloxacina, tetraciclina e eritromicina (92%), norfloxacina (83%), vancomicina e estreptomicina (50%). Na genotipagem, foram detectados os genes tetL e vanB. A presença desses microrganismos resistentes aos antimicrobianos nos alimentos pode causar problemas para a saúde pública.(AU)
Assuntos
Enterococos Resistentes à Vancomicina/genética , Resistência a Tetraciclina/genética , Alimentos Crus/análise , Carne , Reação em Cadeia da Polimerase , Bovinos , Galinhas , SuínosResumo
The fidelity of the genomes is defended by mechanism known as Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) systems. Three Type II CRISPR systems (CRISPR1- cas, CRISPR2 and CRISPR3-cas) have been identified in enterococci isolates from clinical and environmental samples. The aim of this study was to observe the distribution of CRISPR1-cas, CRISPR2 and CRISPR3-cas in non-clinical strains of Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium isolates from food and fecal samples, including wild marine animals. The presence of CRISPRs was evaluated by PCR in 120 enterococci strains, 67 E. faecalis and 53 E. faecium. It is the first report of the presence of the CRISPRs system in E. faecalis and E. faecium strains isolated from wild marine animal fecal samples. The results showed that in non-clinical strains, the CRISPRs were more frequently detected in E. faecalis than in E. faecium. And the frequencies of CRISPR1-cas and CRISPR2 were higher (60%) in E. faecalis strains isolated from animal feces, compared to food samples. Both strains showed low frequencies of CRISPR3-cas (8.95% and 1.88%). In conclusion, the differences in the habitats of enterococcal species may be related with the results observe in distribution of CRISPRs systems.(AU)
A fidelidade dos genomas é defendida por mecanismos conhecidos como sistemas de repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente interespaçadas (CRISPRs). Três tipos de sistemas CRISPR II (CRISPR1-cas, CRISPR2 e CRISPR3-cas) têm sido identificados em cepas de enterococos isolados de amostras clínicas e ambientais. O objetivo deste estudo foi observar a distribuição dos CRISPR1-cas, CRISPR2 e CRISPR3-cas em cepas não-clínicas de Enterococcus faecalis e Enterococcus faecium isoladas de amostras alimentícias e fecais, incluindo animais marinhos selvagens. A presenca dos CRISPRs foi determinada por PCR em 120 cepas de enterococos, sendo 67 E. faecalis e 53 E. faecium. É o primeiro relato da presença do sistema CRISPRs nas estirpes E. faecalis e E. faecium isoladas de amostras fecais de animais marinhos selvagens. Os resultados mostraram que em cepas não-clínicas, os CRISPRs foram mais frequentemente detectados em E. faecalis do que em E. faecium. E as frequências de CRISPR1-cas e CRISPR2 foram maiores (60%) em cepas de E. faecalis isoladas de fezes de animais, quando comparadas à amostras de alimentos. Ambas as cepas apresentaram baixas freqüências de CRISPR3-cas (8,95% e 1,88%). Em conclusão, as diferenças nos habitats das espécies de enterococos podem estar relacionadas com os resultados observados na distribuição dos sistemas CRISPRs.(AU)
Resumo
Enterococos resist entes à vancomicina são frequentemente multirresistentes e tornaram-se uma das principais causas de infecções nosocomiais. Estão presentes causando mastites em rebanhos leiteiros e contaminando o leite de tanques de refrigeração. Porém, os dados são escassos em relação à sensibilidade das linhagens isoladas na produção leiteira. O objetivo do presente estudo foi determinar o perfil de resistência in vitro de Enterococcus spp. isolados de leite de tanques de refrigeração. Foram analisadas 194 amostras de 10 fazendas de Minas Gerais e São Paulo. Foi analisado o perfil de sensibilidade microbiana dessas linhagens frente a 14 antimicrobianos. Mais de 70% das amostras apresentaram resistência à cefalexina, cefoxitina, oxacilina e neomicina, 21,19% foram resistentes intermediárias a vancomicina.(AU)
Assuntos
Leite/microbiologia , Enterococcus/isolamento & purificação , Enterococcus/patogenicidade , Resistência Microbiana a Medicamentos , Técnicas In VitroResumo
Enterococos resist entes à vancomicina são frequentemente multirresistentes e tornaram-se uma das principais causas de infecções nosocomiais. Estão presentes causando mastites em rebanhos leiteiros e contaminando o leite de tanques de refrigeração. Porém, os dados são escassos em relação à sensibilidade das linhagens isoladas na produção leiteira. O objetivo do presente estudo foi determinar o perfil de resistência in vitro de Enterococcus spp. isolados de leite de tanques de refrigeração. Foram analisadas 194 amostras de 10 fazendas de Minas Gerais e São Paulo. Foi analisado o perfil de sensibilidade microbiana dessas linhagens frente a 14 antimicrobianos. Mais de 70% das amostras apresentaram resistência à cefalexina, cefoxitina, oxacilina e neomicina, 21,19% foram resistentes intermediárias a vancomicina.
Assuntos
Enterococcus/isolamento & purificação , Enterococcus/patogenicidade , Leite/microbiologia , Resistência Microbiana a Medicamentos , Técnicas In VitroResumo
Os derivados cárneos vêm, ao longo dos anos, se fazendo cada vez mais presentes no cardápio do brasileiro e, entre eles, a mortadela é de grande importância no setor de frios e embutidos e de maior aceite mundialmente. Foram adquiridos em estabelecimentos comerciais do bairro de Icaraí em Niterói/RJ 33 amostras de mortadela, sendo encaminhadas ao Laboratório de Controle Microbiológico de Produtos de Origem Animal da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal Fluminense, onde foram submetidas a pesquisa de enterococos. Das 33 amostras de mortadelas analisadas no presente trabalho, 11 delas apresentaram resultados negativos para a presença de Enterococcus spp.. Entretanto, foram encontrados E. casseliflavus, E. faecium e E. faecalis. A presença do Enterococcus como microbiota contaminante pode tornar o seu consumo perigoso para a saúde humana.(AU)
Assuntos
Microbiologia de Alimentos , Produtos da Carne/microbiologia , Enterococcus/isolamento & purificação , Enterococcus/patogenicidadeResumo
Os derivados cárneos vêm, ao longo dos anos, se fazendo cada vez mais presentes no cardápio do brasileiro e, entre eles, a mortadela é de grande importância no setor de frios e embutidos e de maior aceite mundialmente. Foram adquiridos em estabelecimentos comerciais do bairro de Icaraí em Niterói/RJ 33 amostras de mortadela, sendo encaminhadas ao Laboratório de Controle Microbiológico de Produtos de Origem Animal da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal Fluminense, onde foram submetidas a pesquisa de enterococos. Das 33 amostras de mortadelas analisadas no presente trabalho, 11 delas apresentaram resultados negativos para a presença de Enterococcus spp.. Entretanto, foram encontrados E. casseliflavus, E. faecium e E. faecalis. A presença do Enterococcus como microbiota contaminante pode tornar o seu consumo perigoso para a saúde humana.
Assuntos
Enterococcus/isolamento & purificação , Enterococcus/patogenicidade , Microbiologia de Alimentos , Produtos da Carne/microbiologiaResumo
Abstract The fidelity of the genomes is defended by mechanism known as Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) systems. Three Type II CRISPR systems (CRISPR1- cas, CRISPR2 and CRISPR3-cas) have been identified in enterococci isolates from clinical and environmental samples. The aim of this study was to observe the distribution of CRISPR1-cas, CRISPR2 and CRISPR3-cas in non-clinical strains of Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium isolates from food and fecal samples, including wild marine animals. The presence of CRISPRs was evaluated by PCR in 120 enterococci strains, 67 E. faecalis and 53 E. faecium. It is the first report of the presence of the CRISPRs system in E. faecalis and E. faecium strains isolated from wild marine animal fecal samples. The results showed that in non-clinical strains, the CRISPRs were more frequently detected in E. faecalis than in E. faecium. And the frequencies of CRISPR1-cas and CRISPR2 were higher (60%) in E. faecalis strains isolated from animal feces, compared to food samples. Both strains showed low frequencies of CRISPR3-cas (8.95% and 1.88%). In conclusion, the differences in the habitats of enterococcal species may be related with the results observe in distribution of CRISPRs systems.
Resumo A fidelidade dos genomas é defendida por mecanismos conhecidos como sistemas de repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente interespaçadas (CRISPRs). Três tipos de sistemas CRISPR II (CRISPR1-cas, CRISPR2 e CRISPR3-cas) têm sido identificados em cepas de enterococos isolados de amostras clínicas e ambientais. O objetivo deste estudo foi observar a distribuição dos CRISPR1-cas, CRISPR2 e CRISPR3-cas em cepas não-clínicas de Enterococcus faecalis e Enterococcus faecium isoladas de amostras alimentícias e fecais, incluindo animais marinhos selvagens. A presenca dos CRISPRs foi determinada por PCR em 120 cepas de enterococos, sendo 67 E. faecalis e 53 E. faecium. É o primeiro relato da presença do sistema CRISPRs nas estirpes E. faecalis e E. faecium isoladas de amostras fecais de animais marinhos selvagens. Os resultados mostraram que em cepas não-clínicas, os CRISPRs foram mais frequentemente detectados em E. faecalis do que em E. faecium. E as frequências de CRISPR1-cas e CRISPR2 foram maiores (60%) em cepas de E. faecalis isoladas de fezes de animais, quando comparadas à amostras de alimentos. Ambas as cepas apresentaram baixas freqüências de CRISPR3-cas (8,95% e 1,88%). Em conclusão, as diferenças nos habitats das espécies de enterococos podem estar relacionadas com os resultados observados na distribuição dos sistemas CRISPRs.
Resumo
ABSTRACT Rapid identification of vancomycin-resistant enterococci (VRE) can assist in choosing the appropriate treatment and preventing VRE spread. The performance of chromIDTM VRE agar was evaluated using 184 clinical isolates of Enterococcus spp. and reference strains. The test had a sensitivity of 95.52% but a low specificity of 30%.(AU)
Assuntos
Compostos Cromogênicos/análise , Compostos Cromogênicos/química , Enterococos Resistentes à Vancomicina/química , Enterococos Resistentes à Vancomicina/isolamento & purificaçãoResumo
Abstract The aim of present study is to characterize the resistance and virulence profile of enterococci isolated from aquaculture excavated ponds and masonry tanks (6 samples) in southern Brazil. Samples were cultured in selective medium, 10 colonies were randomly selected from each sample, which were identified by MALDI-TOF and tested against 13 antimicrobials. The presence of resistance (tetL, tetM, tetS, ermB and msrC) and virulence (ace, esp, agg, cylA and gelE) genes were determined by PCR. A total of 79 enterococci were identified, and Entecococcus faecalis (44.3%) and E. casseliflavus (36.7%) were the most prevalent species isolated. Sixty-five strains (82.3%) were resistant to at least one of the antimicrobials tested, whereas 27 (34.2%) strains were multiresistant. The overall percentages of antimicrobial resistant isolates were: 58.2% to rifampicin, 40.5% to fluoroquinolones, 36.7% to erythromycin and 30.4% to tetracycline. The tetL and tetM genes were found in 57.7% of the tetracycline-resistant strains; and msrC in 31.01% of erythromycin-resistant strains. The most frequently detected virulence factors were ace and gelE genes. Although limited to a single farm, these data suggest that aquaculture may be a reservoir of resistant and virulent enterococci. This study is the first step towards enhancing our understandingof distribution, resistance and virulence profile in enterococci isolated from fish farming environments in the south Brazil.
Resumo O objetivo do estudo apresentado é caracterizar o perfil de resistência e virulência de enterococos isolados de viveiros escavados e tanques de alvenaria (6 amostras) de uma pisicultura no Sul do Brasil. As amostras foram cultivadas em meio seletivo, 10 colônias foram selecionadas aleatoriamente de cada amostra, que foram identificadas por MALDI-TOF e testadas contra 13 antimicrobianos. A presença de genes de resistência (tetL, tetM, tetS, ermB e msrC) e virulência (ace, esp, agg, cylA e gelE) foi determinada por PCR. Foram identificados 79 enterococos, sendo Entecococcus faecalis (44,3%) e E. casseliflavus (36,7%) as espécies mais frequentes isoladas. Sessenta e cinco cepas (82,3%) eram resistentes a pelo menos um dos antimicrobianos testados, enquanto 27 (34,2%) eram multirresistentes. As porcentagens gerais de isolados resistentes a antimicrobianos foram: 58,2% para rifampicina, 40,5% para fluoroquinolonas, 36,7% para eritromicina e 30,4% para tetraciclina. Os genes tetL e tetM foram encontrados em 57,7% das cepas resistentes à tetraciclina; e msrC em 31,01% das cepas resistentes à eritromicina. Os fatores de virulência mais comumente detectados foram ace e gelE. Embora limitados a uma única fazenda, esses dados indicam que a aquicultura pode ser uma fonte de enterococos resistentes e virulentos. Este estudo é o primeiro passo para melhorar nosso entendimento da distribuição, resistência e perfil de virulência em enterococos isolados de ambientes de piscicultura no sul do Brasil.
Resumo
Abstract The fidelity of the genomes is defended by mechanism known as Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) systems. Three Type II CRISPR systems (CRISPR1- cas, CRISPR2 and CRISPR3-cas) have been identified in enterococci isolates from clinical and environmental samples. The aim of this study was to observe the distribution of CRISPR1-cas, CRISPR2 and CRISPR3-cas in non-clinical strains of Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium isolates from food and fecal samples, including wild marine animals. The presence of CRISPRs was evaluated by PCR in 120 enterococci strains, 67 E. faecalis and 53 E. faecium. It is the first report of the presence of the CRISPRs system in E. faecalis and E. faecium strains isolated from wild marine animal fecal samples. The results showed that in non-clinical strains, the CRISPRs were more frequently detected in E. faecalis than in E. faecium. And the frequencies of CRISPR1-cas and CRISPR2 were higher (60%) in E. faecalis strains isolated from animal feces, compared to food samples. Both strains showed low frequencies of CRISPR3-cas (8.95% and 1.88%). In conclusion, the differences in the habitats of enterococcal species may be related with the results observe in distribution of CRISPRs systems.
Resumo A fidelidade dos genomas é defendida por mecanismos conhecidos como sistemas de repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente interespaçadas (CRISPRs). Três tipos de sistemas CRISPR II (CRISPR1-cas, CRISPR2 e CRISPR3-cas) têm sido identificados em cepas de enterococos isolados de amostras clínicas e ambientais. O objetivo deste estudo foi observar a distribuição dos CRISPR1-cas, CRISPR2 e CRISPR3-cas em cepas não-clínicas de Enterococcus faecalis e Enterococcus faecium isoladas de amostras alimentícias e fecais, incluindo animais marinhos selvagens. A presenca dos CRISPRs foi determinada por PCR em 120 cepas de enterococos, sendo 67 E. faecalis e 53 E. faecium. É o primeiro relato da presença do sistema CRISPRs nas estirpes E. faecalis e E. faecium isoladas de amostras fecais de animais marinhos selvagens. Os resultados mostraram que em cepas não-clínicas, os CRISPRs foram mais frequentemente detectados em E. faecalis do que em E. faecium. E as frequências de CRISPR1-cas e CRISPR2 foram maiores (60%) em cepas de E. faecalis isoladas de fezes de animais, quando comparadas à amostras de alimentos. Ambas as cepas apresentaram baixas freqüências de CRISPR3-cas (8,95% e 1,88%). Em conclusão, as diferenças nos habitats das espécies de enterococos podem estar relacionadas com os resultados observados na distribuição dos sistemas CRISPRs.
Resumo
The aim of this study was to determine the association between Clostridium difficile (C. difficile) and vancomycin-resistant Enterococcus (VRE) and efficacy of screening stools submitted for C. difficile toxin assay for prevalence of VRE. Between April 2012 and February 2014, 158 stool samples submitted for C. difficile toxin to the Marmara University Microbiology Laboratory, were included in the study. Stool samples were analyzed by enzyme immuno assay test; VIDAS (bioMerieux, France) for Toxin A&B. Samples were inoculated on chromID VRE (bioMerieux, France) and incubated 24 h at 37 °C. Manuel tests and API20 STREP (bioMerieux, France) test were used to identify the Enterococci species. After the species identification, vancomycin and teicoplanin MIC's were performed by E test and molecular resistance genes for vanA vs vanB were detected by polymerase chain reaction (PCR). Of the 158 stool samples, 88 were toxin positive. The prevalence of VRE was 17%(n:19) in toxin positives however, 11.4% in toxin negatives(n:70). All VRE isolates were identified as Enterococcus faecium. These results were evaluated according to Fischer's exact chi-square test and p value between VRE colonization and C. difficile toxin positivity was detected 0.047 (p 0.05). PPV and NPV were 79% and 47% respectively. In our study, the presence of VRE in C. difficile toxin positives is statistically significant compared with toxin negatives (p 0.05). Screening for VRE is both additional cost and work load for the laboratories. Therefore VRE screening among C. difficile toxin positive samples, will be cost effective for determination of high risk patients in the hospitals especially for developing countries.(AU)
Assuntos
Clostridioides difficile , Enterococos Resistentes à Vancomicina , Técnicas Imunoenzimáticas , Infecção HospitalarResumo
O Semiárido brasileiro ocupa uma área de 969.589 km2 e inclui oito, dos nove estados do Nordeste, e parte do estado de Minas Gerais. Apesar do Brasil se colocar em posição privilegiada quando se trata de água doce disponível no mundo, a região Nordeste detém apenas 3,3% de toda água doce do País. A escassez hídrica há muito tempo vem sendo estudada, por ser um dos principais entraves da produção agropecuária na região, e na bacia leiteira do Agreste de Pernambuco a situação não é diferente. Neste sentido objetivou-se realizar avaliação físico-química e microbiológica da água de dessedentacão e dos parâmetros hematológicos e bioquímicos de bovinos leiteiros no Agreste de Pernambuco. Amostras de sangue, obtidas por punção venosa dos bovinos, bem como amostras de água de dessedentação animal, foram coletadas e encaminhadas ao Laboratório de Inspeção de Carne e Leite LICAL da Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), em caixas isotérmicas contendo gelo descartável. Para realização das análises físico-químicas da água, amostras de 500 mL foram encaminhadas ao AGROLAB Analises Ambientais, e amostras contendo 180 mL de água, foram utilizadas no LICAL para identificação de possíveis microrganismos. As amostras de sangue foram processadas pelo Laboratório de Animais de Produção do Departamento de Medicina Veterinária da UFRPE, onde realizou-se a hematologia e a bioquímica sérica. Para coleta de informações epidemiológicas do rebanho estudado, foi aplicado um questionário. Os resultados obtidos demonstraram alterações de alguns parâmetros físico-químicos da água e elevados níveis séricos de cloreto e sódio nos bovinos. Em 100% das amostras de água foram identificados microrganismos do grupo Coliformes, bem como Pseudomonas ssp. Listeria ssp. e Enterococos ssp., demonstrando assim que, a qualidade da água utilizada na dessedentação dos animais estudados estava em desacordo com o estabelecido pelo CONAMA do Ministério do Meio Ambiente. Os resultados obtidos deste estudo preliminar evidenciam que o uso contínuo da água de má qualidade na dessalinização dos bovinos leiteiros impacta na saúde desses animais, devendo as avaliações clínico-epidemiológicas, bioquímicas e hematológicas e microbiológicas (água) serem ampliadas e aprofundadas.
The Brazilian Semi-Arid covers an area of 969,589 km2 and includes eight, from the nine states in the Northeast, and part of the state of Minas Gerais. Despite Brazil placing itself in a privileged position when it comes to fresh water available in the world, the Northeast region holds only 3.3% of all fresh water in the country. Water scarcity has long been studied, as it is one of the main obstacles of agricultural production in the region, and in the dairy basin of Agreste de Pernambuco the situation is no different. In this sense, the objective was to carry out a physical-chemical and microbiological evaluation of the water for drinking water and the hematological and biochemical parameters of dairy cattle in the Agreste of Pernambuco. Blood samples, obtained by venipuncture of the cattle, as well as samples of animal drinking water, were collected and sent to the Meat and Milk Inspection Laboratory - LICAL of the Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), in isothermal boxes containing disposable ice. To carry out the physical-chemical analyzes of the water, 500 mL samples were sent to AGROLAB (Analises ambientais), and samples containing 180 mL of water were used in LICAL to identify possible microorganisms. The blood samples were processed by the Production Animal Laboratory of the Department of Veterinary Medicine at UFRPE, where hematology and serum biochemistry were performed. To collect epidemiological information from the studied herd, a questionnaire was applied. The results obtained showed changes in some physical-chemical parameters of the water and high serum levels of chloride and sodium in cattle. In 100% of the water samples, microorganisms of the Coliformes group were identified, as well as Pseudomonas ssp., Listeria ssp. and Enterococos ssp., thus demonstrating that the quality of the water used in the watering of the animals studied was at odds with what was established by CONAMA of the Ministry of the Environment. The results obtained from this preliminary study show that the continued use of poor quality water in the desalination of dairy cattle impacts the health of these animals, and clinical-epidemiological, biochemical, hematological and microbiological (water) research must be expanded and deepened.
Resumo
Twenty seven isolates of vancomycin resistant Enterococci based on the disk diffusion and E- test have been screened; being found eight (0.3%) clinical isolates of vanA & vanB through Taq Man Real Time PCR assay. This study shows the presence of both vanA & vanB genotypes in vanA phenotypes clinical isolates in the three hospitals in Iran.(AU)
Assuntos
Humanos , Proteínas de Bactérias/genética , Carbono-Oxigênio Ligases/genética , Enterococos Resistentes à Vancomicina , Enterococos Resistentes à Vancomicina/genética , Antibacterianos/farmacologia , Testes de Sensibilidade a Antimicrobianos por Disco-Difusão , Irã (Geográfico) , Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo RealResumo
Vancomycin resistant
Assuntos
Humanos , Antibacterianos/uso terapêutico , Infecção Hospitalar/epidemiologia , Infecções por Bactérias Gram-Positivas/epidemiologia , Resistência a Vancomicina/fisiologia , Enterococos Resistentes à Vancomicina/isolamento & purificação , Vancomicina/uso terapêutico , Cefalosporinas/uso terapêutico , Ciprofloxacina/uso terapêutico , Infecção Hospitalar/microbiologia , DNA Bacteriano/genética , Egito/epidemiologia , Enterococcus faecium/isolamento & purificação , Gentamicinas/uso terapêutico , Infecções por Bactérias Gram-Positivas/tratamento farmacológico , Infecções por Bactérias Gram-Positivas/microbiologia , Controle de Infecções/métodos , Unidades de Terapia Intensiva , Estudos Prospectivos , Insuficiência Renal , Fatores de Risco , Enterococos Resistentes à VancomicinaResumo
Enterococcus spp., principalmente E. faecalis e E. faecium, são importantes patógenos de 62 infecções associadas à assistência à saúde (IRAS) devido a sua capacidade de resistir à 63 terapia antimicrobiana. São amplamente distribuídos no ambiente e abundantes na 64 microbiota intestinal de humanos e de outros mamíferos. O leite bovino contaminado por 65 enterococos pode ter implicações na qualidade dos produtos lácteos e na saúde humana. 66 Deste modo, os objetivos deste estudo foram investigar os perfis fenotípicos e genotípicos 67 de resistência aos antimicrobianos e analisar a população clonal de Enterococcus spp. 68 isolados de fezes e leite de bovinos armazenado em latões ou tanques de refrigeração em 69 propriedades leiteiras. Foram coletados 126 swabs retais de vacas leiteiras e 16 amostras 70 de leite de 16 rebanhos do estado do Acre. Até três colônias foram selecionadas por 71 espécime para identificação bacteriana por técnica de espectrometria de massa (MALDI- 72 TOF). O teste de difusão em disco foi realizado para determinar os perfis fenotípicos de 73 resistência aos antimicrobianos. Genes de resistência à vancomicina, macrolídeos, 74 tetraciclina e alto nível de aminoglicosídeos foram investigados entre as amostras 75 resistentes. A população clonal de amostras de E. faecalis e E. faecium foi analisada por 76 eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE). Cento e sessenta e sete amostras (33,4%) 77 foram identificadas como espécies de Enterococcus, incluindo E. casseliflavus (27,0%), 78 E. gallinarum (17,5%), E. faecalis (13,5%), E. faecium (6,3%), E mundtii (1,4%) e E. 79 durans (1,4%). E. casseliflavus e E. faecalis foram as espécies mais frequentemente 80 isoladas de swab retal e leite, respectivamente. A maior frequência de resistência para E. 81 faecalis foi para ciprofloxacina (47,4%) enquanto para E. faecium foi para penicilina 82 (36,8%). Amostras resistentes à vancomicina não foram detectadas e resistentes à 83 ampicilina e a alto nível de aminoglicosídeos foram raramente. Cepas MDR 84 (multirresistentes) foram recuperadas de swab retal e leite de cinco rebanhos, sendo E. 85 faecium (32%), E. faecalis (2,6%) e E. casseliflavus (1,8%). Apenas os genes de 86 resistência à tetraciclina [tet(L) e tet(K)] foram detectados. Foi observada baixa 87 diversidade clonal tanto para E. faecalis quanto para E. faecium dentro de cada rebanho. 88 No entanto, a população bacteriana era diversa quando considerados os diferentes 89 rebanhos. Não foi observada associação entre perfil de resistência e genótipos de PFGE. 90 Os mesmos genótipos de E. faecalis foram detectadas nos swabs retais e no leite dos 91 animais em vários rebanhos, apontando a necessidade de usar boas práticas de higiene em 92 pequenas propriedades. Embora tenha sido observada baixa frequência de resistência a 93 importantes antimicrobianos prescritos para infecções enterocócicas entre as amostras de 94 origem bovina, programas para controlar a qualidade do leite são essenciais para 95 monitorar o surgimento de resistência aos antimicrobianos entre patógenos de origem 96 alimentar no Brasil.
Enterococcus spp., mainly E. faecalis and E. faecium, are important pathogens of 107 healthcare-associated infections (HAI) due their ability to resist antimicrobial therapy. 108 They are broadly distributed in environment and abundant in the intestinal microbiota of 109 humans and animals, including cows. Bovine milk contaminated by enterococci may have 110 implications for both dairy product quality and human health. Then, the objectives of this 111 study were survey the phenotypic and genotypic antimicrobial resistance profiles and 112 clonal populations of Enterococcus spp. recovered from bovine feces and milk stored in 113 cans or refrigeration tanks in dairy farms. A total of 126 rectal swabs and 16 milk samples 114 were collected from16 dairy herds in the Acre state. Until three colonies were selected 115 per sample to bacterial identification by MALDI-TOF. Disk diffusion test was performed 116 to determinate the phenotypic antimicrobial resistance profiles. Vancomycin, macrolide, 117 tetracycline, and high-level aminoglycoside resistance genes were investigated among 118 resistant isolates. The clonal population of E. faecalis and E. faecium isolates was 119 analyzed by PFGE. One hundred sixty-seven (33.4%) isolates were identified as 120 Enterococcus species, including E. casseliflavus (27.0%), E. gallinarum (17.5%), E. 121 faecalis (13.5%), E. faecium (6.3%), E. mundtii (1.4%), and E. durans (1.4%). E. 122 casseliflavus and E. faecalis were the species most frequently isolated from rectal swabs 123 and milk samples, respectively. E. faecalis and E. faecium isolates showed the highest 124 resistance frequency to ciprofloxacin (47.4%) and penicillin (36.8%), respectively. 125 Vancomycin-resistant isolates were not detected and ampicillin-, and high-level 126 aminoglycoside-resistant isolates were rarely detected. MDR (multidrug resistant) 127 isolates were recovered from rectal swabs and milk from five dairy farms: E. faecium 128 (32.0%), E. faecalis (2.6%), and E. casseliflavus (1.8%). Only tetracycline resistance 129 genes [tet(L) and tet(K)] were detected among the isolates investigated. Low clonal 130 diversity was observed among the E. faecalis and E. faecium isolates obtained within the 131 investigated herds. However, the bacterial population was diverse between different 132 herds. It was not observed an association between antimicrobial resistance profiles and 133 PFGE genotypes. The same E. faecalis genotypes were detected in rectal swabs and milk 134 in several herds, pointing out the need to use good hygiene practices in small farms. 135 Although low frequency of resistance to important antimicrobial prescribed to 136 enterococcal infections has been observed among isolates from bovine origin, programs 137 to control milk quality are essential to monitor the emergence of antimicrobial resistance 138 among foodborne pathogens in Brazil. 139
Resumo
Lactic acid bacteria species were molecularly identified in milk from Lacaune, Santa Inês and crossbred sheep breeds and their in vitro probiotic potential was evaluated. The species identified were Enterococcus faecium (56.25%), E. durans (31.25%) and E. casseliflavus (12.5%). No other lactic acid bacteria species, such as lactobacilli, was identified. Most of the isolated enterococci were resistant to gastric pH (2.0) and to 0.3% oxgall. All tested enterococci were resistant to ceftazidime, oxacillin and streptomycin and sensible to clindamycin, erythromycin and penicillin. The resistance to ciprofloxacin, gentamicin, tetracycline and vancomycin varied among tested species. All tested enterococci strongly inhibited (P<0.05) Escherichia coli and Listeria monocytogenes, moderately inhibited E. faecalis and Staphylococcus aureus and did not inhibit Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enterica var. Typhimurium and also one E. durans sample isolated from sheep milk. Four samples of E. faecium, one of E. durans and one of E. casseliflavus presented the best probiotic potential.(AU)
Espécies de bactérias ácido-lácticas foram identificadas em nível molecular em leite das raças ovinas Lacaune, Santa Inês e suas mestiças, e o seu potencial probiótico in vitro foi avaliado. As espécies identificadas foram Enterococcus faecium (56,25%), E. durans (31,25%) e E. casseliflavus (12,5%). Nenhuma outra espécie de bactéria ácido-láctica, como Lactobacillus sp., foi identificada. A maioria dos enterococos isolados foi resistente ao pH gástrico (2.0) e a 0,3% de oxgall. Todos os enterococos testados foram resistentes à ceftazidima, oxacilina e estreptomicina e sensíveis à clindamicina, eritromicina e penicilina. A resistência à ciprofloxacina, gentamicina, tetraciclina e vancomicina variou entre as amostras. Todos os enterococos testados inibiram fortemente (P<0,05) Escherichia coli e Listeria monocytogenes, inibiram moderadamente E. faecalis e Staphylococcus aureus e não inibiram Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enterica var. Typhimurium e uma amostra de E. durans isolada de leite de ovelha. Quatro amostras de E. faecium, uma de E. durans e uma de E. casseliflavus apresentaram o melhor potencial probiótico.(AU)