Atividade in vitro do extrato etanólico de própolis e do digluconato de clorexidina sobre as espécies de Candida isoladas da mucosa bucal de pacientes internados em Unidade de Terapia Intensiva (UTI) / In vitro activity of ethanolic extract of propolis and chlorhexidine digluconate on Candida species isolated from the oral mucosa of patients hospitalized in the Intensive Care Unit (ICU)

Avaliou-se a atividade dos extratos de própolis e digluconato de clorexidina em Candida sp isoladas da mucosa bucal de pacientes em UTI. Foram determinadas as concentrações fungicidas mínimas (CFM) e comparadas, nas doses sub-inibitórias, à produção de exoenzimas proteinase e fosfolipase e formação de franjas. Em 72 isolados foram avaliadas a atividade antifúngica pela técnica de microdiluição em série, na “base 2”, a produção das exoenzimas proteinase e fosfolipase, e a formação de franjas, antes e após a exposição às própolis e clorexidina. Dos 72 isolados, 53 eram C. albicans, 11 C. tropicalis, quatro C. guilhermondii e quatro sugestivas de C. dubliniensis. CFM 90% do extrato de própolis foi de 5% para C. albicans, 20% C. tropicalis, 0,625% C. guilhermondii e 0,312% sugestivas de C. dubliniensis. CFM 90% da clorexidina foi de 0,0018% para C. albicans, 0,012% C. tropicalis, de 0,0018% C. guilhermondii e de 0,00375% sugestivas de C. dubliniensis. Ocorreu inibição das exoenzimas e franjas, em ambos os produtos. Apesar da inibição da clorexidina ser menor que a da própolis, seu uso diário não causa efeitos colaterais indesejáveis como manchas nos dentes e na língua, perda do paladar e sensação de queimação na mucosa bucal.

The activity of propolis extract and chlorhexidine digluconate on Candida sp isolated from oral mucosa of patients in ICU was evaluated. The minimum fungicidal concentrations (MFC) were determined, and also the production of proteinase and phospholipase exoenzymes and the fringe formation. Seventy-two isolates were used and identified by the API 20C AUX® System. The antifungal activity was evaluated by “at base 2” serial microdilution technique. Also the exoenzymes production (proteinase and phospholipase), the fringes formation, before and after being exposed to propolis and chlorhexidine, were analysed. Of 72 isolates, 53 were C. albicans, 11 C. tropicalis, four C. guilhermondii and four suggestive C. dubliniensis. The MFC 90% of propolis extract was 5% C. albicans, 20% C. tropicalis, 0.625% C. guilhermondii; and 0.312% suggestive of C. dubliniensis. MFC 90% of chlorhexidine was 0.0018% C. albicans, 0.012% C. tropicalis, 0.0018% C. guilhermondii and 0.00375% suggestive of C. dubliniensis. The inhibition of exoenzymes and fringes occurred in the both products. Although the inhibition of chlorhexidine is lower than that showed by propolis, its daily use neither cause undesirable side effects as blemishes on the teeth and tongue, nor the loss of the taste and the burning sensation in the oral mucosa.

Atividade in vitro do extrato etanólico de própolis e do digluconato de clorexidina sobre as espécies de Candida isoladas da mucosa bucal de pacientes internados em Unidade de Terapia Intensiva (UTI) / In vitro activity of ethanolic extract of propolis and chlorhexidine digluconate on Candida species isolated from the oral mucosa of patients hospitalized in the Intensive Care Unit (ICU)

Avaliou-se a atividade dos extratos de própolis e digluconato de clorexidina em Candida sp isoladas da mucosa bucal de pacientes em UTI. Foram determinadas as concentrações fungicidas mínimas (CFM) e comparadas, nas doses sub-inibitórias, à produção de exoenzimas proteinase e fosfolipase e formação de franjas. Em 72 isolados foram avaliadas a atividade antifúngica pela técnica de microdiluição em série, na “base 2”, a produção das exoenzimas proteinase e fosfolipase, e a formação de franjas, antes e após a exposição às própolis e clorexidina. Dos 72 isolados, 53 eram C. albicans, 11 C. tropicalis, quatro C. guilhermondii e quatro sugestivas de C. dubliniensis. CFM 90% do extrato de própolis foi de 5% para C. albicans, 20% C. tropicalis, 0,625% C. guilhermondii e 0,312% sugestivas de C. dubliniensis. CFM 90% da clorexidina foi de 0,0018% para C. albicans, 0,012% C. tropicalis, de 0,0018% C. guilhermondii e de 0,00375% sugestivas de C. dubliniensis. Ocorreu inibição das exoenzimas e franjas, em ambos os produtos. Apesar da inibição da clorexidina ser menor que a da própolis, seu uso diário não causa efeitos colaterais indesejáveis como manchas nos dentes e na língua, perda do paladar e sensação de queimação na mucosa bucal.(AU)

The activity of propolis extract and chlorhexidine digluconate on Candida sp isolated from oral mucosa of patients in ICU was evaluated. The minimum fungicidal concentrations (MFC) were determined, and also the production of proteinase and phospholipase exoenzymes and the fringe formation. Seventy-two isolates were used and identified by the API 20C AUX® System. The antifungal activity was evaluated by “at base 2” serial microdilution technique. Also the exoenzymes production (proteinase and phospholipase), the fringes formation, before and after being exposed to propolis and chlorhexidine, were analysed. Of 72 isolates, 53 were C. albicans, 11 C. tropicalis, four C. guilhermondii and four suggestive C. dubliniensis. The MFC 90% of propolis extract was 5% C. albicans, 20% C. tropicalis, 0.625% C. guilhermondii; and 0.312% suggestive of C. dubliniensis. MFC 90% of chlorhexidine was 0.0018% C. albicans, 0.012% C. tropicalis, 0.0018% C. guilhermondii and 0.00375% suggestive of C. dubliniensis. The inhibition of exoenzymes and fringes occurred in the both products. Although the inhibition of chlorhexidine is lower than that showed by propolis, its daily use neither cause undesirable side effects as blemishes on the teeth and tongue, nor the loss of the taste and the burning sensation in the oral mucosa.(AU)

GENÔMICA COMPARATIVA DE STAPHYLOCOCCUS SPP. ASSOCIADOS À MASTITE SUBCLÍNICA CAPRINA NA PARAÍBA

Infecções intramamárias acometem frequentemente os animais leiteiros, gerando danos tanto na saúde dos animais e perdas significativas na quantidade e qualidade do leite produzido, como riscos para a saúde dos consumidores tendo em vista que as glândulas mamárias infectadas podem abrigar micro-organismos potencialmente zoonóticos. Os Staphylococcus frequentemente são detectados em exame microbiológico no leite de animais acometidos por infecção mamária. Sendo assim, faz-se necessário estudos mais aprofundados relacionados à resistência antimicrobiana e os fatores de virulência, além de elementos genéticos móveis, afim de minimizar as perdas para a cadeia produtiva e para a saúde pública. O sequenciamento do genoma completo é uma ferramenta desenvolvida para auxiliar com maior facilidade, rapidez e menores custos toda a epidemiologia genômica dos micro-organismos, e, através da anotação funcional, realizar comparações entre micro-organismos e identificar diferenças e similaridades entre elas. O capítulo I, é um referencial teórico, que demonstra aspectos da qualidade do leite de cabras, tanto nos aspectos físico-químicos como microbiológicos, com base na legislação nacional vigente e suas implicações na produção e saúde dos animais e seres humanos. Os capítulos II, III e IV avaliam através do sequenciamento dos genomas, genes de resistência, detecção de plasmídeos, e fatores de virulência de três espécies de Staphylococcus (S.) (S. caprae, S. epidermidis e S. aureus) originários de leite de cabras. As amostras foram submetidas ao teste fenotípico de difusão em discos. Após extração do DNA genômico total e posterior avaliação quali-quantitativa do DNA, foram sequenciadas em tecnologia Illumina Miseq. A montagem de todos os genomas foi executada em Unicycler. A anotação das amostras de S. caprae foi avaliada por meio de análise do pan-genoma. Foi verificada a presença de genes de resistência a tetraciclina, -lactâmicos, fosfomicina, macrolídeos, fenicóis e quinolonas. Já para os fatores de virulência, foram observados aderência, exoenzimas, evasão imune, absorção e metabolism do ferro e toxinas. Os capítulos III e IV, analisam respectivamente as amostras de S. epidermidis e S. aureus a despeito do tipo de sequência multilocus (ST), predição de genes de virulência, plasmídeos rep, tipo de cassete cromossomal e fatores de virulência. Uma amostra de cada uma dessas espécies, detectou o gene mec e tipo de SCCmecIV. S epidermidis exibiu três tipos de sequência multilocus diferentes, resistência genotípica as classes dos macrolídeos, -lactâmicos, tetraciclinas, aminoglicosídeos e fosfomicina e seis diferentes plasmídeos, além de fatores de virulência a aderência, enzimas, evasão imune, toxinas e sistema de secreção. Nas cepas de S. aureus, adicionalmente, foram realizadas análises da proteína A e filogenia. As amostras pertenciam a quatro STs e cinco proteínas A (spa) diferentes. Houve maior prevalência de resistência para os genes de tetraciclina e beta-lactâmicos, entretanto, uma cepa ainda apresentou genes de resistência a trimetropim, macrolídeos, aminogligosídeo e fenicol. Os genes de virulência foram classificados em exoenzimas, toxigênicos e resposta imune. Em resumo, a ocorrência de genes de resistência e plasmídeos portadores de genes de resistência, inclusive, para antimicrobianos de último recurso em infecções humanas mais graves, além de grande frequência de genes de virulência em isolados de Staphylococcus spp. de originários de leite de cabras reforça a preocupação frente à qualidade do leite produzido como alimento seguro.

Intramammary infections often affect dairy animals, causing damage to the health of animals and significant losses in the quantity and quality of milk produced, as well as risks to the health of consumers, given that infected mammary glands can harbor potentially zoonotic microorganisms. Staphylococcus are frequently detected in microbiological examination in the milk of animals affected by mammary infection. Therefore, further studies related to antimicrobial resistance and virulence factors, in addition to mobile genetic elements, are necessary in order to minimize losses to the production chain and public health. The whole genome sequencing is a tool developed to assist with greater ease, speed and lower costs the entire genomic epidemiology of microorganisms, and, through functional annotation, perform comparisons between microorganisms and identify differences and similarities between them. Chapter I is a theoretical framework that demonstrates aspects of goat milk quality, both in physical-chemical and microbiological aspects, based on current national legislation and its implications for the production and health of animals and human beings. Chapters II, III and IV evaluate through genome sequencing, resistance genes, plasmid detection, and virulence factors of three species of Staphylococcus (S.) (S. caprae, S. epidermidis and S. aureus) originating from goats milk. The samples were submitted to the disc diffusion phenotypic test. After extraction of the total genomic DNA and subsequent quali-quantitative evaluation of the DNA, they were sequenced using Illumina Miseq technology. Assembly of all genomes was performed in Unicycler. The annotation of S. caprae samples was evaluated by pan-genome analysis. The presence of resistance genes to tetracycline, -lactams, fosfomycin, macrolides, phenicols and quinolones was verified. As for virulence factors, adherence, exoenzymes, immune evasion, absorption and metabolism of iron and toxins were observed. Chapters III and IV, respectively, analyze S. epidermidis and S. aureus samples regardless of the multilocus sequence type (ST), virulence gene prediction, rep plasmids, chromosomal cassette type and virulence factors. A sample of each of these species detected the mec gene and type of SCCmecIV. S. epidermidis exhibited three different multilocus sequence types, genotypic resistance to macrolides, -lactams, tetracyclines, minoglycosides and fosfomycin and six different plasmids, in addition to adherence virulence factors, enzymes, immune evasion, toxins and secretion system. In the S. aureus strains, additionally, analyzes of protein A and phylogeny were performed. The samples belonged to four different ST's and five different A (spa) proteins. There was a higher prevalence of resistance for the tetracycline and beta-lactam genes, however, one strain still showed resistance genes to trimethoprim, macrolides, aminoglycoside and phenicol. Virulence genes were classified into exoenzymes, toxigenics and immune response. In summary, the occurrence of resistance genes and plasmids carrying resistance genes, including for antimicrobials of last resort in more severe human infections, in addition to the high frequency of virulence genes in Staphylococcus spp. from goats' milk reinforces the concern about the quality of the milk produced as a safe food.

Energetic values and performace of broilers feeding sorghum and soybean meal based diets supplemented with B-glucanase and B-xylanase / Valores energéticos e desempenho de frangos de corte alimentados com dietas a base de sorgo e farelo de soja suplementadas com B-glucanase and B-xylanase

Grains, brans, and vegetable meals may contain non-starch polysaccharides (NSP), which increases viscosity in the gastrointestinal tract (GIT) and interfere with the digestion and absorption of nutrients. This study aimed to evaluate the performance and determine the metabolizable energy of a sorghum-based broiler diet with and without the supplementation of an enzymatic complex. The experiments were conducted in a completely randomized design with 1200 chickens, using sorghum-based feed with and without the addition of 50 g of enzyme-CCE complex (β-glucanase and β-xylanase), and with two levels of metabolizable energy (ME kg-1): ME; ME + CCE; reduced ME (-50 kcal kg-1); and reduced ME + CCE. The data were subjected to an analysis of variance and the means were compared using a Tukeys test at the 5% significance level. At 42 and 47 days of age, the living weight of the birds fed with the reduced ME was low, while birds fed with reduced ME + CCE had the same weight as those fed with other energy diets (ME and ME + CCE). Feed conversion was poorest at 47 days of age for the birds on reduced ME diet. In the metabolic test (with fattening diets) to determine AME and AMEn, the reduced ME diet had the lowest result, confirming the effect of the addition of enzymes. The addition of CCE to sorghum-based diets provides enough enzymatic activity to increase the metabolizable energy of the diet (50 kcal of AME) and influence the growth performance of broilers at the slaughtering age.(AU)

Grãos, farelos e farinhas de origem vegetal podem conter polissacarídeos não amiláceos (PNAs), que aumentam a viscosidade do trato grastro intestinal (TGI) e interferem na digestão e absorção de nutrientes. Objetivou-se avaliar o desempenho e determinar à energia metabolizável da dieta a base de sorgo, com e sem adição do complexo enzimático (CCE), para frangos de corte. Foram utilizados 1200 frangos de corte, distribuídos em delineamento inteiramente casualisado, alimentados com dois níveis de Energia Metabolizável (EM kg-1), em dietas à base de sorgo com ou sem a adição de 50g de completo enzimático (β-glucanase e β-xylanase): Energia Metabolizável (EM); Energia Metabolizável com Complexo Enzimático (EM + CCE); EM reduzida (-50kcal EM kg-1) e EM reduzida + CCE. Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância e as médias dos tratamentos em cada variável estudada foram comparadas entre si pelo Teste de Tukey a nível de 5% de significância. Aos 42 e 47 dias de idade o peso vivo das aves alimentadas com EM reduzida foi menor, enquanto que EM reduzida + CCE apresentou peso igual ao das dietas EM e EM + CCE. A conversão alimentar aos 47 dias de idade na dieta EM reduzida apresentou o pior resultado. No teste metabólico, com as dietas de engorda, os valores de Energia Metabolizável Aparente (EMA) e Energia Metabolizável Aparente corrigida para nitrogênio (EMAn) foram menores na dieta com EM reduzida, comprovando o efeito da adição das enzimas. Concluiu-se que a adição de complexo enzimático (β-glucanase and β-xylanase) melhora o desempenho de frangos de corte e aumenta a energia metabolizável aparente da dieta em 50 kcal.(AU)

Aquatic microbiota diversity in the culture of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) using bioflocs or periphyton: virulence factors and biofilm formation / Diversidade da microbiota aquática em cultivo de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) utilizando bioflocos ou perifiton: fatores de virulência e formação de biofilme

The following research isolated and identified the main bacterial groups present in the culture of juvenile Nile tilapia in the presence of bioflocs and/or periphyton. The strains were also tested for the production of exoenzymes, indicative of potential virulence factors, and ability to form biofilm. The water samples were taken from tilapia cultured in the presence of bioflocs (T1), in the presence of bioflocs and periphyton (T2), from traditional culture (T3) and from culture in the presence of periphyton (T4). In the growth and selection of the bacterial groups, pour plate method was used, along with the following media: Plate Count Agar (PCA - DIFCO), Aero Pseudo Selective Agar (GSP - Himedia) and Nutrient Agar (AN - Merck). 46 strains were isolated in the following distribution: T1 (n = 12); T2 (n = 10); T3 (n = 14) and T4 (n = 10). Among the isolates, the most frequent genera were: Pseudomonas spp., Aeromonas spp., Staphylococcus spp., Bacillus spp., Mycobacterium spp., Micrococcus spp., and Corybacterium spp. Bacterial isolates in treatments T1 and T3 tested positive for five virulence profiles each, while those isolated from T2 and T4 for two and three virulence profiles, respectively. Treatments in bioflocs and periphyton (T2) or only periphyton (T4) yielded bacteria of less pathogenic potentials. In relation to the fish growth, T1 and T4 resulted in a higher final we

A presente pesquisa isolou e identificou os principais grupos bacterianos presentes no cultivo de juvenis de tilápia do Nilo na presença de bioflocos e/ou perifíton. Verificou-se a produção de exoenzimas como indicadoras de potenciais fatores de virulência e a capacidade de formação de biofilme. As amostras de água foram retiradas do cultivo das tilápias na presença de bioflocos (T1), cultivo na presença de bioflocos e perifíton (T2), cultivo tradicional (T3) e cultivo na presença de perifíton (T4). Para o crescimento e seleção dos grupos bacterianos foi utilizada a técnica da semeadura em profundidade com os seguintes meios de cultura: Ágar para Contagem em Placas (PCA DIFCO), Aero Pseudo Seletive Ágar (GSP Himedia) e Ágar Nutriente (AN Merck). Foram isoladas 46 cepas, distribuídas da seguinte forma: T1 (n = 12); T2 (n = 10); T3 (n = 14) e T4 (n = 10). Entre os isolados, os gêneros mais frequentes foram: Pseudomonas spp., Aeromonas spp., Staphylococcus spp., Bacillus spp., Mycobacterium spp., Micrococcus spp., e Corybacterium spp. Os isolados bacterianos dos tratamentos T1 e T3 expressaram cinco perfis de virulência enquanto aqueles isolados dos tratamentos T2 e T4 apresentaram dois e três perfis de virulência, respectivamente. Os tratamentos com presença de bioflocos e perifíton (T2) ou somente perifíton (T4) apresentaram bactérias com menor potencial patogênico. Em rel

Aquatic microbiota diversity in the culture of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) using bioflocs or periphyton: virulence factors and biofilm formation / Diversidade da microbiota aquática em cultivo de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) utilizando bioflocos ou perifiton: fatores de virulência e formação de biofilme

The following research isolated and identified the main bacterial groups present in the culture of juvenile Nile tilapia in the presence of bioflocs and/or periphyton. The strains were also tested for the production of exoenzymes, indicative of potential virulence factors, and ability to form biofilm. The water samples were taken from tilapia cultured in the presence of bioflocs (T1), in the presence of bioflocs and periphyton (T2), from traditional culture (T3) and from culture in the presence of periphyton (T4). In the growth and selection of the bacterial groups, pour plate method was used, along with the following media: Plate Count Agar (PCA - DIFCO), Aero Pseudo Selective Agar (GSP - Himedia) and Nutrient Agar (AN - Merck). 46 strains were isolated in the following distribution: T1 (n = 12); T2 (n = 10); T3 (n = 14) and T4 (n = 10). Among the isolates, the most frequent genera were: Pseudomonas spp., Aeromonas spp., Staphylococcus spp., Bacillus spp., Mycobacterium spp., Micrococcus spp., and Corybacterium spp. Bacterial isolates in treatments T1 and T3 tested positive for five virulence profiles each, while those isolated from T2 and T4 for two and three virulence profiles, respectively. Treatments in bioflocs and periphyton (T2) or only periphyton (T4) yielded bacteria of less pathogenic potentials. In relation to the fish growth, T1 and T4 resulted in a higher final we(AU)

A presente pesquisa isolou e identificou os principais grupos bacterianos presentes no cultivo de juvenis de tilápia do Nilo na presença de bioflocos e/ou perifíton. Verificou-se a produção de exoenzimas como indicadoras de potenciais fatores de virulência e a capacidade de formação de biofilme. As amostras de água foram retiradas do cultivo das tilápias na presença de bioflocos (T1), cultivo na presença de bioflocos e perifíton (T2), cultivo tradicional (T3) e cultivo na presença de perifíton (T4). Para o crescimento e seleção dos grupos bacterianos foi utilizada a técnica da semeadura em profundidade com os seguintes meios de cultura: Ágar para Contagem em Placas (PCA DIFCO), Aero Pseudo Seletive Ágar (GSP Himedia) e Ágar Nutriente (AN Merck). Foram isoladas 46 cepas, distribuídas da seguinte forma: T1 (n = 12); T2 (n = 10); T3 (n = 14) e T4 (n = 10). Entre os isolados, os gêneros mais frequentes foram: Pseudomonas spp., Aeromonas spp., Staphylococcus spp., Bacillus spp., Mycobacterium spp., Micrococcus spp., e Corybacterium spp. Os isolados bacterianos dos tratamentos T1 e T3 expressaram cinco perfis de virulência enquanto aqueles isolados dos tratamentos T2 e T4 apresentaram dois e três perfis de virulência, respectivamente. Os tratamentos com presença de bioflocos e perifíton (T2) ou somente perifíton (T4) apresentaram bactérias com menor potencial patogênico. Em rel(AU)

Perfil clonal, resistência antimicrobiana e atividade bactericida do Polipirrol e extrato aquoso de Moringa oleifera em Staphylococcus spp. de leite, ambiente e ordenhadores

O objetivo desta pesquisa foi determinar a frequência de mastite bovina por Staphylococcus spp. em fazendas leiteiras no estado de Pernambuco, Brasil. Detectar os genes mecA e mecC responsáveis pela resistência à meticilina e norA, norB, norC, msrA, mgrA, tet-38 e lmrS de sistema de efluxo multidrogas em isolados de Staphylococcus spp., realizar a tipagem dos isolados de S. aureus Resistentes à Meticilina (MRSA) por meio da técnica de Eletroforese em Gel Pulsante (PFGE) e avaliar a atividade antimicrobiana das Nanopartículas Polipirrol (NPs-PPy) e do extrato aquoso de Moringa oleifera nos isolados de Staphylococcus spp. portadores dos genes de sistema de efluxo multidrogas. Foram coletadas 676 amostras de leite de vacas, 15 amostras de swabs nasais e de mãos de ordenhadores, 14 swabs de teteiras e nove de baldes de ordenha em cinco propriedades rurais (A-E). Inicialmente foi realizado o California Mastits Tests (CMT) e as amostras que apresentaram resultado + (uma cruz) (319 amostras) ou aquelas que foram positivas no teste da caneca (16 amostras) foram coletadas para as análises microbiológicas. As amostras foram submetidas ao exame microbiológico para detecção de Staphylococcus spp., técnica molecular (PCR) para identificação de Staphylococcus aureus e dos genes mecA, mecC, norA, norB, norC, msrA, mgrA, tet-38 e lmrS. Para os isolados de mecA-MRSA foi determinada a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e, estes foram submetidos à genotipagem por meio da técnica de Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE) e naqueles portadores de mecC foi realizado o sequenciamento do genoma. Nos isolados portadores dos genes de sistema de efluxo multidrogas foi determinada a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Bactericida Mínima (CBM) das NPs-PPy e do extrato aquoso Moringa oleifera. MRSA foi detectado em 1,49% (5/335), 20% (3/15), 6,6% (1/15) e 7,1% (1/14) das amostras de leite, nariz, mãos e teteiras, respectivamente. Todos os isolados foram sensíveis à oxacilina na CIM. Na PFGE foi possível identificar VIII pulsotipos (A-H), divididos em três clusters maiores nos isolados de MRSA. O mecC foi detectado em 4,68% (3/64) isolados de S. aureus pertencentes a mesma cepa. No sequenciamento, esta cepa apresentou genes de virulência relacionados às exoenzimas, toxinas, enterotoxina, genes de sistema de efluxo multidrogas, de inativação de antibióticos e plasmídeo, e esta cepa foi atribuída a ST 126 e MRSA t605; ainda foram identificadas nove proteínas relacionadas à resistência à meticilina. Os resultados obtidos apresentam impacto direto na saúde pública uma vez que, este é o primeiro estudo que detecta a disseminação de isolados de Staphylococcus spp. multirresistentes com diferentes perfis clonais no ambiente agropecuário de fazendas leiteiras no estado de Pernambuco, Nordeste do Brasil. Também foi comprovada a atividade bactericida do extrato aquoso de Moringa oleifera e das NPs-PPy, sendo necessários novos estudos com o intuito de utilizar essas compostos como alternativas para tratamento de infecções por Staphylococcus spp. resistentes a antimicrobianos.

This study aimed to determine the frequency of bovine mastitis caused by Staphylococcus spp. in dairy farms from Pernambuco state, Brazil. Detect mecA and mecC genes responsible for resistance to methicillin, and norA, norB, norC, msrA, mgrA, tet-38 and lmrS genes responsible for multidrug efflux system on Staphylococcus spp. isolates, typify Methicillin-resistant S. aureus (MRSA) strains by Pulsed Field Electrophoresis Gel (PFGE) method, and evaluate the antimicrobial activity of Polypyrrole Nanoparticles (PPy-NPs) and aqueous extract of Moringa oleifera on multidrug efflux system gene carrying Staphylococcus spp. strains. 676 milk samples, 15 swabs from milkers nostrils and hands, 14 swabs from teat cup and 9 from milking buckets were collected from 5 rural properties (A-E). Initially, the California Mastitis Tests (CMT) was performed, and samples with results higher than + (one cross) (319 samples) or those positive on the strip cup test (16 samples) were collected for microbiological analysis. Samples were submitted to microbiological test for detection of Staphylococcus spp., molecular technique (PCR) for identification of Staphylococcus aureus and mecA, mecC, norA, norB, norC, msrA, mgrA, tet-38 and lmrS genes. For mecA-MRSA isolates, Minimal Inhibitory Concentration (MIC) was determined and genotyped by Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE), and mecC-carrying isolates were submitted to genome sequencing. On isolates carrying multidrug efflux system genes, Minimal Inhibitory Concentration (MIC) and Minimal Bactericidal Concentration (MBC) of PPy-NPs and aqueous extract of Moringa oleifera were determined. MRSA were detected in 1,49% (5/335), 20% (3/15), 6,6% (1/15) and 7,1% (1/14) of milk, nostrils, hands, and teat liners samples respectively. All isolates were susceptible to oxacillin by MIC. By PFGE it was possible to identify VIII pulsotypes (A-H) between MRSA isolates, divided into three major clusters. MecC gene was detected in 4,68% (3/64) isolates of S. aureus of the same strain. By sequencing, this strain presented virulence genes related to exoenzymes, toxins, enterotoxins, multidrug efflux system, antibiotic inactivation genes and plasmid, this strain was attributed to ST 126 and MRSA t605, also nine new proteins related to methicillin resistance were identified. The results obtained impact directly on public health as this is the first study that detects dissemination of multi-resistant Staphylococcus spp. isolates with different clonal profiles in agricultural environment of dairy farms from Pernambuco state, Northeastern of Brazil. It was also comproved the bactericidal activity of aqueous extract of Moringa oleifera and PPy-NPs, being necessary new studies about using these compounds as alternatives for treatment of infections by multidrug resistant Staphylococcus spp.

Efeitos do Enriquecimento Nutricional com Riboflavina na Virulência e Resposta de Fungos Entomopatogênicos a Fatores Abióticos de Estresse

Os fatores abióticos de estresse (estresse térmico, radiação UV) podem limitar a eficiência de agentes biológicos utilizados para o controle de artrópodes e por isso discute-se o biocontrole dentro de um contexto de manejo integrado de pragas (MIP), que busca aliar as boas características das diferentes abordagens de controle. Os fungos entomopatogênicos são os maiores representantes do controle microbiano de pragas e o enriquecimento nutricional com diferentes moléculas durante seu cultivo pode influenciar a resposta fisiológica do microrganismo em relação à sua virulência e resposta ao estresse biótico e abiótico. Destaca- se a riboflavina, vitamina que foi capaz de conferir fotoproteção aos conídios de Metarhizium spp. e aumentar a secreção de enzimas envolvidas em processos celulares de tolerância ao estresse. O trabalho buscou evidenciar efeitos de termotolerância, aumento da atividade de proteases e aumento da virulência em três espécies de fungos entomopatogênicos suplementação do substrato com riboflavina. A análise da virulência foi realizada através do cálculo da %mortalidade corrigida de larvas L3 de Tenebrio molitor L. infectadas por imersão Metarhizium robertsii, Beauveria bassiana e Isaria javanica ocasionados pela 5 -1 7 -1 em suspensão de conídios (10 conídios/mL foi observada após estresse térmico (45ºC). A atividade proteolítica do extrato bruto também foi acessada, por espectrofotometria. A atividade proteolítica de I. javanica demonstrou-se ou 10 conídios/mL ). A germinação de conídios variável quanto ao pH, substrato e temperatura de incubação das amostras, demonstrando a variedade biológica de exoenzimas produzidas pelo microrganismo. Ademais, a adição de riboflavina ao substrato foi capaz de aumentar a atividade de proteases do microrganismo. Conídios de fungos cultivados em meio suplementado com a vitamina mostraram-se até 40,8% mais viáveis, após estresse térmico. A virulência variou de acordo com o isolado observado, concentração de conídios e com a suplementação do meio de cultura. A radiação UV-B foi capaz de interferir negativamente na virulência de B. bassiana e I. javanica (p < 0,05). Ademais, a suplementação foi capaz de manter a virulência (p < 0,05) de Beauveria e Isaria (a partir do sétimo e décimo dias, respectivamente), mesmo após exposição à radiação. Estudos proteômicos devem ser realizados para evidenciar o mecanismo pelo o qual a vitamina confere tais efeitos ao fungo.

Abiotic stress factors (heat, UV radiation) may limit the efficacy of biological agents used to control arthropods and, thus, biocontrol is discussed into an integrated pest management (IPM) scenario, Entomopathogenic fungi are important representatives of pest microbial control, and enriched nutritional conditions during cultivation with different molecules might influence the microorganism physiological response, regarding virulence and response against biotic and abiotic stress factors. Among them, riboflavin stands out. The vitamin was capable of protecting Metarhizium spp. conidia against radiation and enhancing secretion of enzymes which allies good characteristics of the different controlling approaches. involved in cellular stress tolerance processes. The study aimed to highlight thermotolerance effects as well as enzymatic activity and virulence enhancement on three different species of entomopathogenic fungi Metarhizium robertsii, Beauveria bassiana e Isaria javanica caused by substrate supplementation with riboflavin. The virulence analysis has been performed through the calculus of %corrected mortality of Tenebrio molitor L. L3 larvae 5 -1 7 -1 immersed in suspensions of conidia (10 conidia/mL germination of conidia has been assessed after thermal stress (45ºC). Enzymatic activity of the crude extract was assessed, via spectrophotometry. Enzymatic activity of I. javanica varied or 10 conidia/mL ). Relative depending on the pH and temperature range, and substrate, demonstrating biological variability of exoenzymes produced by the organism. Furthermore, supplementation with riboflavin enhanced enzymatic activity. Fungi grown in supplemented conditions produced 40.8% more viable conidia after thermal stress. Virulence has varied according to the strain, conidia concentration and substrate supplementation. UV-B radiation was able to interfere in B. bassiana e I. javanica virulence (p < 0,05). In addition, supplementation with riboflavin has maintained virulence (p < 0.05) of Beauveria e Isaria (from seventh and tenth days on, respectively) after radiation exposure. Proteomic studies must be performed in order to highlight the mechanism by which the vitamin is able to confer those effects to the fungi.

EXOENZIMAS EM RAÇÕES DE FRANGOS DE CORTE

Objetivou-se avaliar o desempenho,peso relativo do intestino delgado, digestibilidade e deposição de minerais nos ossos de frangos de corte suplementados com complexo exoenzimático (carboidrases e fitase) em rações a base de sorgo, sorgo e milheto. Nos experimentos a base de sorgo foram utilizados 912 pintos machos e fêmeas (50:50) de um dia linhagem Hubbard Flex distribuídos em delineamento inteiramente casualizado em arranjo fatorial 2x2 (Ração Controle base Sorgo (ContS); Ração base Sorgo Reduzida (RedS); Ração Controle base Sorgo + Complexo Exoenzimático (ContS+Enz); Ração base Sorgo Reduzida + Complexo Exoenzimático (RedS+Enz). No estudo a base de sorgo e milheto foram utilizados o mesmo numero de aves e o mesmo delineamento do experimento anterior (Ração Controle base Sorgo + Milheto (ContSM); Ração base Sorgo + Milheto Reduzida (RedSM); Ração Controle base Sorgo + Milheto + Complexo Exoenzimático (ContSM+Enz); Ração base Sorgo + Milheto Reduzida + Complexo Exoenzimático (RedSM+Enz). Aos 35 e 42 dias de idade foram determinados os dados de desempenho: consumo de ração (CR), peso vivo (PV), conversão alimentar (CA), viabilidade (VIAB), peso relativo do intestino delgado e deposição de minerais no osso. Para a digestibilidade foi avaliado a granulometria do sorgo (moído e inteiro) com e sem o complexo exoenzimatico. Foram utilizadas 32 aves, oito aves por tratamento, nos períodos de 17 a 21(inicial) e 31 a 35 dias de idade (engorda). O complexo exoenzimático utilizado nas rações favoreceu os resultados de ganho de peso, conversão alimentar e mineralização óssea quando comparado a uma ração testemunha não adicionada às enzimas, demonstrando seu efeito sobre polissacarídeos não amiláceos e fósforo fítico presentes como fatores antinutricionais nestas rações, aumentando a digestibilidade e oferta de energia metabolizável, aminoácidos essenciais, metionina e lisina e cálcio e fósforo destinados a formação óssea. Conclui-se que uma estratégia segura de sua inclusão nas rações baseia-se na redução dos níveis de energia, aminoácidos essenciais, metionina e lisina e cálcio e fósforo na razão esperada da atividade das enzimas constante deste complexo exoenzimático

The study aimed to evaluate performance, relative weight of the small intestine, digestibility and deposition of minerals in the bone of broilers supplemented with enzymatic complex (carbohydrases and phytase) in sorghum-based diets or sorghum and millet. In the experiments based of sorghum and sorghum and millet were used 912 day-old male and female Hubbard Flex chicks (50:50) were distributed in a completely randomized design in a 2x2 factorial arrangement (Feed Control base Sorghum (Contcs); FeedReducedbase Sorghum (RedS); Feed Control base sorghum + Enzymatic Complex (Contcs + Enz);. Feed reduced base sorghum + Enzymatic Complex (RedS + Enz) in the study of feed basis of sorghum and millet the design was similar (Feed Control base sorghum + millet ( ContSM); Reduced feed based on Millet + Sorghum (RedSM); Feed Control based Sorghum + Millet + EnzimaticComplex (ContSM + Enz); Reduced Feed base Sorghum+ Millet + Enzimatic Complex (RedSM + Enz). At 35 and 42 days of age were determined performance data: feed intake (CR), body weight (BW), feed conversion (FC), viability (VIAB), relative weight of the small intestine and deposition of minerals in the bone. The digestibility was evaluated sorghum grain size (crushed and whole) with and without exoenzimatico complex. They used 32 birds, eight birds per treatment, in periods from 17 to 21 (initial) and 31 to 35 days of age (fattening). The exoenzimático complex used in feed favored the weight gain results, feed conversion and bone mineralization when compared to a control diet not added to enzymes, demonstrating its effect on non-starch polysaccharides and phosphorus phytic present as anti-nutritional factors in these diets, increasing the digestibility and supply of metabolizable energy, essential amino acids, methionine and lysine and calcium and phosphorus for bone formation. It is concluded that a safe strategy for inclusion in feed is based on the reduction of energy levels, essential amino acids, methionine and lysine and calcium and phosphorus in the expected result of the constant activity of the enzymes of this exoenzimático complex.

Lack of association between genotypes and virulence factors in C. albicans strains isolated from vaginal secretion

The physiopathogenesis of vulvovaginal candidiasis (VVC) is still not completely elucidated. The objective of this study was to evaluate if there is a relationship between the different genotypes of Candida albicans, their main agent and the virulence of this yeast in vaginal isolates, and to check if there are laboratorial markers that can predict the ability of each isolate to develop VVC independently of symptoms. The production of exoenzymes protease, phospholipase and haemolysin, resistance to hydrogen peroxide, and the genotype were determined. Genotype A was predominant (75%), protease, phospholipase and haemolytic activity were highly expressed, and the majority of the yeasts were sensitive to H2O2 in 1 and 2 hours of exposure, suggesting that these factors are important in the virulence of vaginal isolates. However they did not have any correlation with the genotypes. The different isolates expressed similar virulence potential, suggesting that other factors relating to the yeasts and the host must participate in the development of the clinical disease.

A fisiopatogenia da candidíase vulvovaginal (CVV) não está completamente elucidada até o presente momento. O objetivo deste estudo foi avaliar se exite relação entre os diferentes genótipos de Candida albicans, seu principal agente, e a virulência desta levedura em isolados vaginais, e checar se existem marcadores laboratoriais que possam predizer a habilidade de cada isolado para desenvolver CVV independentemente dos sintomas. Foram determinados a produção de exoenzimas protease, fosfolipase and hemolisina, resistência ao peróxido de hidrogêncio, e genótipo. O genótipo A foi predominante (75%), protease, fosfolipase e atividade hemolítica foram alevadamente expressos, e a maioria das leveduras foram sensíveis ao H2O2 em 1 e 2 horas de exposição, sugerindo que estes fatores são importantes na virulênciae de isolados vaginais. Entretanto, não houve nenhuma correlação com os genótipos. Os diferentes isolados expressaram potencial de virulência similares, sugerindo que outros fatores relacionados às leveduras e ao hospedeiro devem participar no desenvolvimento da doença clínica.

Influence of Tween on constitutive and inducible laccase production by Botryosphaeria sp - DOI: 10.4025/actascibiolsci.v26i4.1536 / Influência de Tween na produção de lacases constitutivas e indutivas pelo Botryosphaeria sp - DOI: 10.4025/actascibiolsci.v26i4.1536

Botryosphaeria sp. is a ligninolytic fungus that produces laccase. It was previously established that veratryl alcohol (VA) strongly induced laccase production in this ascomyceteous. It is well known that surfactants such as Tween - 80 can increase the production of some fungal exo-enzymes. It has been reported that Tween-80 can also induce laccase production in basidiomycetes. In this work, the influence of Tweens 20, 40, 60 and 80 on the production of constitutive laccases (in the absence of VA) and inducible laccases (in the presence of VA) by Botryosphaeria sp. was evaluated, separately. Laccase activity was assayed using two putative laccase substrates: ABTS (PPO - I) and DMP (PPO - II). All of the Tweens examined increased the production of both constitutive and inducible laccase PPO - I, but did not affect the production of constitutive laccase PPO - II. Tweens 60 and 20 increased the production of inducible laccase PPO - II, while Tween 80 and 40 did not cause any effect

O Botryosphaeria sp. é um fungo ligninolítico produtor de lacases. Estudos anteriores demonstraram que o álcool veratrílico (AV) induziu fortemente a produção de lacases nesse ascomiceto. Sabe-se que surfactantes tais como o Tween - 80 podem aumentar a produção de algumas exoenzimas fúngicas. Tem sido relatado que o Tween-80 pode induzir a produção de lacase em basidiomicetos. No presente trabalho, foi avaliada a influência dos Tweens 80, 60, 40 e 20 na produção de lacases constitutivas (ausência de AV) e indutivas (presença de AV) pelo Botryosphaeria sp. A atividade de lacase foi determinada usando-se dois substratos diferentes, o ABTS (PPO - I) e o DMP (PPO - II). Todos os Tweens estudados aumentaram a produção das lacases (PPO - I) constitutivas e indutivas e não afetaram a produção da lacase (PPO - II) constitutiva. Os Tweens 60 e 20 aumentaram a produção da lacase (PPO - II) indutiva, enquanto que os Tweens 80 e 40 não causaram nenhum efeito

Influence of Tween on constitutive and inducible laccase production by Botryosphaeria sp - DOI: 10.4025/actascibiolsci.v26i4.1536 / Influência de Tween na produção de lacases constitutivas e indutivas pelo Botryosphaeria sp - DOI: 10.4025/actascibiolsci.v26i4.1536

Botryosphaeria sp. is a ligninolytic fungus that produces laccase. It was previously established that veratryl alcohol (VA) strongly induced laccase production in this ascomyceteous. It is well known that surfactants such as Tween - 80 can increase the production of some fungal exo-enzymes. It has been reported that Tween-80 can also induce laccase production in basidiomycetes. In this work, the influence of Tweens 20, 40, 60 and 80 on the production of constitutive laccases (in the absence of VA) and inducible laccases (in the presence of VA) by Botryosphaeria sp. was evaluated, separately. Laccase activity was assayed using two putative laccase substrates: ABTS (PPO - I) and DMP (PPO - II). All of the Tweens examined increased the production of both constitutive and inducible laccase PPO - I, but did not affect the production of constitutive laccase PPO - II. Tweens 60 and 20 increased the production of inducible laccase PPO - II, while Tween 80 and 40 did not cause any effect

O Botryosphaeria sp. é um fungo ligninolítico produtor de lacases. Estudos anteriores demonstraram que o álcool veratrílico (AV) induziu fortemente a produção de lacases nesse ascomiceto. Sabe-se que surfactantes tais como o Tween - 80 podem aumentar a produção de algumas exoenzimas fúngicas. Tem sido relatado que o Tween-80 pode induzir a produção de lacase em basidiomicetos. No presente trabalho, foi avaliada a influência dos Tweens 80, 60, 40 e 20 na produção de lacases constitutivas (ausência de AV) e indutivas (presença de AV) pelo Botryosphaeria sp. A atividade de lacase foi determinada usando-se dois substratos diferentes, o ABTS (PPO - I) e o DMP (PPO - II). Todos os Tweens estudados aumentaram a produção das lacases (PPO - I) constitutivas e indutivas e não afetaram a produção da lacase (PPO - II) constitutiva. Os Tweens 60 e 20 aumentaram a produção da lacase (PPO - II) indutiva, enquanto que os Tweens 80 e 40 não causaram nenhum efeito

Energetic values and performace of broilers feeding sorghum and soybean meal based diets supplemented with B-glucanase and B-xylanase / Valores energéticos e desempenho de frangos de corte alimentados com dietas a base de sorgo e farelo de soja suplementadas com B-glucanase and B-xylanase

Grains, brans, and vegetable meals may contain non-starch polysaccharides (NSP), which increases viscosity in the gastrointestinal tract (GIT) and interfere with the digestion and absorption of nutrients. This study aimed to evaluate the performance and determine the metabolizable energy of a sorghum-based broiler diet with and without the supplementation of an enzymatic complex. The experiments were conducted in a completely randomized design with 1200 chickens, using sorghum-based feed with and without the addition of 50 g of enzyme-CCE complex (β-glucanase and β-xylanase), and with two levels of metabolizable energy (ME kg-1): ME; ME + CCE; reduced ME (-50 kcal kg-1); and reduced ME + CCE. The data were subjected to an analysis of variance and the means were compared using a Tukey’s test at the 5% significance level. At 42 and 47 days of age, the living weight of the birds fed with the reduced ME was low, while birds fed with reduced ME + CCE had the same weight as those fed with other energy diets (ME and ME + CCE). Feed conversion was poorest at 47 days of age for the birds on reduced ME diet. In the metabolic test (with fattening diets) to determine AME and AMEn, the reduced ME diet had the lowest result, confirming the effect of the addition of enzymes. The addition of CCE to sorghum-based diets provides enough enzymatic activity to increase the metabolizable energy of the diet (50 kcal of AME) and influence the growth performance of broilers at the slaughtering age.

Grãos, farelos e farinhas de origem vegetal podem conter polissacarídeos não amiláceos (PNAs), que aumentam a viscosidade do trato grastro intestinal (TGI) e interferem na digestão e absorção de nutrientes. Objetivou-se avaliar o desempenho e determinar à energia metabolizável da dieta a base de sorgo, com e sem adição do complexo enzimático (CCE), para frangos de corte. Foram utilizados 1200 frangos de corte, distribuídos em delineamento inteiramente casualisado, alimentados com dois níveis de Energia Metabolizável (EM kg-1), em dietas à base de sorgo com ou sem a adição de 50g de completo enzimático (β-glucanase e β-xylanase): Energia Metabolizável (EM); Energia Metabolizável com Complexo Enzimático (EM + CCE); EM reduzida (-50kcal EM kg-1) e EM reduzida + CCE. Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância e as médias dos tratamentos em cada variável estudada foram comparadas entre si pelo Teste de Tukey a nível de 5% de significância. Aos 42 e 47 dias de idade o peso vivo das aves alimentadas com EM reduzida foi menor, enquanto que EM reduzida + CCE apresentou peso igual ao das dietas EM e EM + CCE. A conversão alimentar aos 47 dias de idade na dieta EM reduzida apresentou o pior resultado. No teste metabólico, com as dietas de engorda, os valores de Energia Metabolizável Aparente (EMA) e Energia Metabolizável Aparente corrigida para nitrogênio (EMAn) foram menores na dieta com EM reduzida, comprovando o efeito da adição das enzimas. Concluiu-se que a adição de complexo enzimático (β-glucanase and β-xylanase) melhora o desempenho de frangos de corte e aumenta a energia metabolizável aparente da dieta em 50 kcal.