Studies on the recombinant production and anticancer activity of thermostable L- asparaginase I from Pyrococcus abyssi

Abstract L-Asparaginase catalysing the breakdown of L-Asparagine to L-Aspartate and ammonia is an enzyme of therapeutic importance in the treatment of cancer, especially the lymphomas and leukaemia. The present study describes the recombinant production, properties and anticancer potential of enzyme from a hyperthermophilic archaeon Pyrococcus abyssi. There are two genes coding for asparaginase in the genome of this organism. A 918 bp gene encoding 305 amino acids was PCR amplified and cloned in BL21 (DE3) strain of E. coli using pET28a (+) plasmid. The production of recombinant enzyme was induced under 0.5mM IPTG, purified by selective heat denaturation and ion exchange chromatography. Purified enzyme was analyzed for kinetics, in silico structure and anticancer properties. The recombinant enzyme has shown a molecular weight of 33 kDa, specific activity of 1175 U/mg, KM value 2.05mM, optimum temperature and pH 80°C and 8 respectively. No detectable enzyme activity found when L-Glutamine was used as the substrate. In silico studies have shown that the enzyme exists as a homodimer having Arg11, Ala87, Thr110, His112, Gln142, Leu172, and Lys232 being the putative active site residues. The free energy change calculated by molecular docking studies of enzyme and substrate was found as G 4.5 kJ/mole indicating the affinity of enzyme with the substrate. IC50 values of 5U/mL to 7.5U/mL were determined for FB, caco2 cells and HepG2 cells. A calculated amount of enzyme (5U/mL) exhibited 78% to 55% growth inhibition of caco2 and HepG2 cells. In conclusion, the recombinant enzyme produced and characterized in the present study offers a good candidate for the treatment of cancer. The procedures adopted in the present study can be prolonged for in vivo studies.

Resumo A L-asparaginase, que catalisa a degradação da L-asparagina em L-aspartato e amônia, é uma enzima de importância terapêutica no tratamento do câncer, especialmente dos linfomas e da leucemia. O presente estudo descreve a produção recombinante, propriedades e potencial anticancerígeno da enzima de Pyrococcus abyssi, um archaeon hipertermofílico. Existem dois genes que codificam para a asparaginase no genoma desse organismo. Um gene de 918 bp, que codifica 305 aminoácidos, foi amplificado por PCR e clonado na cepa BL21 (DE3) de E. coli usando o plasmídeo pET28a (+). A produção da enzima recombinante foi induzida sob 0,5mM de IPTG, purificada por desnaturação seletiva por calor e cromatografia de troca iônica. A enzima purificada foi analisada quanto à cinética, estrutura in silico e propriedades anticancerígenas. A enzima recombinante apresentou peso molecular de 33 kDa, atividade específica de 1.175 U / mg, valor de KM 2,05 mM, temperatura ótima de 80º C e pH 8. Nenhuma atividade enzimática detectável foi encontrada quando a L-glutamina foi usada como substrato. Estudos in silico mostraram que a enzima existe como um homodímero, com Arg11, Ala87, Thr110, His112, Gln142, Leu172 e Lys232 sendo os resíduos do local ativo putativo. A mudança de energia livre calculada por estudos de docking molecular da enzima e do substrato foi encontrada como G 4,5 kJ / mol, indicando a afinidade da enzima com o substrato. Valores de IC50 de 5U / mL a 7,5U / mL foram determinados para células FB, células caco2 e células HepG2. Uma quantidade de enzima (5U / mL) apresentou inibição de crescimento de 78% a 55% das células caco2 e HepG2, respectivamente. Em conclusão, a enzima recombinante produzida e caracterizada no presente estudo é uma boa possibilidade para o tratamento do câncer. Os procedimentos adotados na presente pesquisa podem ser aplicados para estudos in vivo.

Rheological characterization of rhea (Rhea americana) eggs subjected to different storage periods / Caracterização reológica de ovos rhea (Rhea americana) submetidos a diferentes períodos de armazenamento

Eggs are used as food industry ingredients due to their functional properties. Eggs from different bird species are used in industrial processing; therefore, rheological experiments were carried out at steady state to obtain the flow curves and also at a dynamic state to study the rheological properties of greater rhea eggs. The viscoelastic behavior of the fluids as a function of the coagulation temperatures for albumen and yolk and of the oscillatory shear frequency was studied. Fifteen rhea eggs stored for up to 28 days at 10 °C were analyzed at 1, 7, 14, 21, and 28 days. The albumen and yolk fractions showed pseudoplastic rheological behavior with small initial flow shear and dependence on shear time, with albumen demonstrating thixotropy and the yolk showing rheopexy. In low shear rheological tests, thermal gelation of albumen was observed, presenting a first change in the elastic modulus around 56 °C, and a second from 78 °C. In the yolk, a change was observed from 66 °C, with more structural variations in the development of the gel at higher temperatures. For rhea eggs, the gel structuring (gelation) temperature of albumen (80 °C) and egg yolk (69 °C) did not undergo variations during the storage periods. Compared to commercial eggs, the higher viscosity and gelation temperatures presented by the rhea eggs can help determine the size of the industrial processing system as they can be submitted to higher temperatures without modifying protein structures and hindering the process.

Os ovos são usados como ingredientes da indústria alimentícia devido às suas propriedades funcionais. Ovos de diferentes espécies de aves podem ser usados no processamento industrial. Foram realizados experimentos reológicos em estado estacionário para obtenção das curvas de fluxo e também em estado dinâmico para estudar as propriedades reológicas dos ovos de emas Rhea americana. O comportamento viscoelástico dos fluidos em função das temperaturas de coagulação para albúmen e gema e da frequência oscilatória foi estudado. Foram analisados 15 ovos de rhea armazenados por até 28 dias a 10 °C em 1, 7, 14, 21 e 28 dias. As frações de albumina e gema mostraram comportamento reológico pseudoplástico com pequeno cisalhamento de fluxo inicial e dependência do tempo de cisalhamento, com albúmen demonstrando tixotropia e a gema mostrando reopexia. Em testes reológicos de cisalhamento baixo, observou-se gelificação térmica de albúmen, apresentando uma primeira mudança no módulo elástico em torno de 56 °C, e um segundo de 78 °C. Na gema, observou-se uma mudança a partir de 66 °C, com variações mais estruturais no desenvolvimento do gel a temperaturas mais elevadas. Para os ovos de rhea, a temperatura estruturante de gel (gelificação) de albumen (80 °C) e gema de ovo (69 °C) não sofreu variações durante os períodos de armazenamento. Em comparação com os ovos comerciais, as maiores temperaturas de viscosidade e gelificação apresentadas pelos ovos rhea podem ajudar a determinar o tamanho do sistema de processamento industrial, pois podem ser submetidos a temperaturas mais altas sem modificar estruturas proteicas e dificultar o processo.

Studies on the recombinant production and anticancer activity of thermostable L- asparaginase I from Pyrococcus abyssi / Estudos sobre a produção recombinante e atividade anticancerígena da L asparaginase I termoestável de Pyrococcus abyssi

L-Asparaginase catalysing the breakdown of L-Asparagine to L-Aspartate and ammonia is an enzyme of therapeutic importance in the treatment of cancer, especially the lymphomas and leukaemia. The present study describes the recombinant production, properties and anticancer potential of enzyme from a hyperthermophilic archaeon Pyrococcus abyssi. There are two genes coding for asparaginase in the genome of this organism. A 918 bp gene encoding 305 amino acids was PCR amplified and cloned in BL21 (DE3) strain of E. coli using pET28a (+) plasmid. The production of recombinant enzyme was induced under 0.5mM IPTG, purified by selective heat denaturation and ion exchange chromatography. Purified enzyme was analyzed for kinetics, in silico structure and anticancer properties. The recombinant enzyme has shown a molecular weight of 33 kDa, specific activity of 1175 U/mg, KM value 2.05mM, optimum temperature and pH 80°C and 8 respectively. No detectable enzyme activity found when L-Glutamine was used as the substrate. In silico studies have shown that the enzyme exists as a homodimer having Arg11, Ala87, Thr110, His112, Gln142, Leu172, and Lys232 being the putative active site residues. The free energy change calculated by molecular docking studies of enzyme and substrate was found as ∆G – 4.5 kJ/mole indicating the affinity of enzyme with the substrate. IC50 values of 5U/mL to 7.5U/mL were determined for FB, caco2 cells and HepG2 cells. A calculated amount of enzyme (5U/mL) exhibited 78% to 55% growth inhibition of caco2 and HepG2 cells. In conclusion, the recombinant enzyme produced and characterized in the present study offers a good candidate for the treatment of cancer. The procedures adopted in the present study can be prolonged for in vivo studies.

A L-asparaginase, que catalisa a degradação da L-asparagina em L-aspartato e amônia, é uma enzima de importância terapêutica no tratamento do câncer, especialmente dos linfomas e da leucemia. O presente estudo descreve a produção recombinante, propriedades e potencial anticancerígeno da enzima de Pyrococcus abyssi, um archaeon hipertermofílico. Existem dois genes que codificam para a asparaginase no genoma desse organismo. Um gene de 918 bp, que codifica 305 aminoácidos, foi amplificado por PCR e clonado na cepa BL21 (DE3) de E. coli usando o plasmídeo pET28a (+). A produção da enzima recombinante foi induzida sob 0,5mM de IPTG, purificada por desnaturação seletiva por calor e cromatografia de troca iônica. A enzima purificada foi analisada quanto à cinética, estrutura in silico e propriedades anticancerígenas. A enzima recombinante apresentou peso molecular de 33 kDa, atividade específica de 1.175 U / mg, valor de KM 2,05 mM, temperatura ótima de 80º C e pH 8. Nenhuma atividade enzimática detectável foi encontrada quando a L-glutamina foi usada como substrato. Estudos in silico mostraram que a enzima existe como um homodímero, com Arg11, Ala87, Thr110, His112, Gln142, Leu172 e Lys232 sendo os resíduos do local ativo putativo. A mudança de energia livre calculada por estudos de docking molecular da enzima e do substrato foi encontrada como ∆G – 4,5 kJ / mol, indicando a afinidade da enzima com o substrato. Valores de IC50 de 5U / mL a 7,5U / mL foram determinados para células FB, células caco2 e células HepG2. Uma quantidade de enzima (5U / mL) apresentou inibição de crescimento de 78% a 55% das células caco2 e HepG2, respectivamente. Em conclusão, a enzima recombinante produzida e caracterizada no presente estudo é uma boa possibilidade para o tratamento do câncer. Os procedimentos adotados na presente pesquisa podem ser aplicados para estudos in vivo.

Studies on the recombinant production and anticancer activity of thermostable L- asparaginase I from Pyrococcus abyssi / Estudos sobre a produção recombinante e atividade anticancerígena da L asparaginase I termoestável de Pyrococcus abyssi

L-Asparaginase catalysing the breakdown of L-Asparagine to L-Aspartate and ammonia is an enzyme of therapeutic importance in the treatment of cancer, especially the lymphomas and leukaemia. The present study describes the recombinant production, properties and anticancer potential of enzyme from a hyperthermophilic archaeon Pyrococcus abyssi. There are two genes coding for asparaginase in the genome of this organism. A 918 bp gene encoding 305 amino acids was PCR amplified and cloned in BL21 (DE3) strain of E. coli using pET28a (+) plasmid. The production of recombinant enzyme was induced under 0.5mM IPTG, purified by selective heat denaturation and ion exchange chromatography. Purified enzyme was analyzed for kinetics, in silico structure and anticancer properties. The recombinant enzyme has shown a molecular weight of 33 kDa, specific activity of 1175 U/mg, KM value 2.05mM, optimum temperature and pH 80°C and 8 respectively. No detectable enzyme activity found when L-Glutamine was used as the substrate. In silico studies have shown that the enzyme exists as a homodimer having Arg11, Ala87, Thr110, His112, Gln142, Leu172, and Lys232 being the putative active site residues. The free energy change calculated by molecular docking studies of enzyme and substrate was found as ∆G 4.5 kJ/mole indicating the affinity of enzyme with the substrate. IC50 values of 5U/mL to 7.5U/mL were determined for FB, caco2 cells and HepG2 cells. A calculated amount of enzyme (5U/mL) exhibited 78% to 55% growth inhibition of caco2 and HepG2 cells. In conclusion, the recombinant enzyme produced and characterized in the present study offers a good candidate for the treatment of cancer. The procedures adopted in the present study can be prolonged for in vivo studies.(AU)

A L-asparaginase, que catalisa a degradação da L-asparagina em L-aspartato e amônia, é uma enzima de importância terapêutica no tratamento do câncer, especialmente dos linfomas e da leucemia. O presente estudo descreve a produção recombinante, propriedades e potencial anticancerígeno da enzima de Pyrococcus abyssi, um archaeon hipertermofílico. Existem dois genes que codificam para a asparaginase no genoma desse organismo. Um gene de 918 bp, que codifica 305 aminoácidos, foi amplificado por PCR e clonado na cepa BL21 (DE3) de E. coli usando o plasmídeo pET28a (+). A produção da enzima recombinante foi induzida sob 0,5mM de IPTG, purificada por desnaturação seletiva por calor e cromatografia de troca iônica. A enzima purificada foi analisada quanto à cinética, estrutura in silico e propriedades anticancerígenas. A enzima recombinante apresentou peso molecular de 33 kDa, atividade específica de 1.175 U / mg, valor de KM 2,05 mM, temperatura ótima de 80º C e pH 8. Nenhuma atividade enzimática detectável foi encontrada quando a L-glutamina foi usada como substrato. Estudos in silico mostraram que a enzima existe como um homodímero, com Arg11, Ala87, Thr110, His112, Gln142, Leu172 e Lys232 sendo os resíduos do local ativo putativo. A mudança de energia livre calculada por estudos de docking molecular da enzima e do substrato foi encontrada como ∆G 4,5 kJ / mol, indicando a afinidade da enzima com o substrato. Valores de IC50 de 5U / mL a 7,5U / mL foram determinados para células FB, células caco2 e células HepG2. Uma quantidade de enzima (5U / mL) apresentou inibição de crescimento de 78% a 55% das células caco2 e HepG2, respectivamente. Em conclusão, a enzima recombinante produzida e caracterizada no presente estudo é uma boa possibilidade para o tratamento do câncer. Os procedimentos adotados na presente pesquisa podem ser aplicados para estudos in vivo.(AU)

Studies on the recombinant production and anticancer activity of thermostable L- asparaginase I from Pyrococcus abyssi / Estudos sobre a produção recombinante e atividade anticancerígena da L-asparaginase I termoestável de Pyrococcus abyssi

L-Asparaginase catalysing the breakdown of L-Asparagine to L-Aspartate and ammonia is an enzyme of therapeutic importance in the treatment of cancer, especially the lymphomas and leukaemia. The present study describes the recombinant production, properties and anticancer potential of enzyme from a hyperthermophilic archaeon Pyrococcus abyssi. There are two genes coding for asparaginase in the genome of this organism. A 918 bp gene encoding 305 amino acids was PCR amplified and cloned in BL21 (DE3) strain of E. coli using pET28a (+) plasmid. The production of recombinant enzyme was induced under 0.5mM IPTG, purified by selective heat denaturation and ion exchange chromatography. Purified enzyme was analyzed for kinetics, in silico structure and anticancer properties. The recombinant enzyme has shown a molecular weight of 33 kDa, specific activity of 1175 U/mg, KM value 2.05mM, optimum temperature and pH 80°C and 8 respectively. No detectable enzyme activity found when L-Glutamine was used as the substrate. In silico studies have shown that the enzyme exists as a homodimer having Arg11, Ala87, Thr110, His112, Gln142, Leu172, and Lys232 being the putative active site residues. The free energy change calculated by molecular docking studies of enzyme and substrate was found as ∆G ­ 4.5 kJ/mole indicating the affinity of enzyme with the substrate. IC50 values of 5U/mL to 7.5U/mL were determined for FB, caco2 cells and HepG2 cells. A calculated amount of enzyme (5U/mL) exhibited 78% to 55% growth inhibition of caco2 and HepG2 cells. In conclusion, the recombinant enzyme produced and characterized in the present study offers a good candidate for the treatment of cancer. The procedures adopted in the present study can be prolonged for in vivo studies.

A L-asparaginase, que catalisa a degradação da L-asparagina em L-aspartato e amônia, é uma enzima de importância terapêutica no tratamento do câncer, especialmente dos linfomas e da leucemia. O presente estudo descreve a produção recombinante, propriedades e potencial anticancerígeno da enzima de Pyrococcus abyssi, um archaeon hipertermofílico. Existem dois genes que codificam para a asparaginase no genoma desse organismo. Um gene de 918 bp, que codifica 305 aminoácidos, foi amplificado por PCR e clonado na cepa BL21 (DE3) de E. coli usando o plasmídeo pET28a (+). A produção da enzima recombinante foi induzida sob 0,5mM de IPTG, purificada por desnaturação seletiva por calor e cromatografia de troca iônica. A enzima purificada foi analisada quanto à cinética, estrutura in silico e propriedades anticancerígenas. A enzima recombinante apresentou peso molecular de 33 kDa, atividade específica de 1.175 U / mg, valor de KM 2,05 mM, temperatura ótima de 80º C e pH 8. Nenhuma atividade enzimática detectável foi encontrada quando a L-glutamina foi usada como substrato. Estudos in silico mostraram que a enzima existe como um homodímero, com Arg11, Ala87, Thr110, His112, Gln142, Leu172 e Lys232 sendo os resíduos do local ativo putativo. A mudança de energia livre calculada por estudos de docking molecular da enzima e do substrato foi encontrada como ∆G ­ 4,5 kJ / mol, indicando a afinidade da enzima com o substrato. Valores de IC50 de 5U / mL a 7,5U / mL foram determinados para células FB, células caco2 e células HepG2. Uma quantidade de enzima (5U / mL) apresentou inibição de crescimento de 78% a 55% das células caco2 e HepG2, respectivamente. Em conclusão, a enzima recombinante produzida e caracterizada no presente estudo é uma boa possibilidade para o tratamento do câncer. Os procedimentos adotados na presente pesquisa podem ser aplicados para estudos in vivo.

Bebida láctea de chocolate processada pela tecnologia de plasma frio: características físicas, comportamento térmico e microestrutura / Chocolate milk drink processed by cold plasma technology: physical characteristics, thermal behavior and microstructure

Este estudo avaliou o efeito do plasma frio nas características físicas (reologia e tamanho de partícula), propriedades térmicas e microestrutura de achocolatados comparados a pasteurização (controle). Bebidas tratadas por plasma frio apresentaram partículas com maior tamanho e consistência e perfil de fusão alterado (menor temperatura, água ligada e maior entalpia) do que o produto pasteurizado, sugerindo processos de desnaturação. Condições mais severas resultaram em maior consistência (partículas de maiores áreas superficiais [D 3,2] e diâmetros volumétricos [D 4,3]). Condições intermediárias resultaram em produtos com características mais semelhantes às bebidas pasteurizadas. Os resultados indicam que bebidas lácteas achocolatadas com diferentes características poderiam ser obtidas variando os parâmetros do processo de plasma frio.(AU)

Bebida láctea de chocolate processada pela tecnologia de plasma frio: características físicas, comportamento térmico e microestrutura / Chocolate milk drink processed by cold plasma technology: physical characteristics, thermal behavior and microstructure

Este estudo avaliou o efeito do plasma frio nas características físicas (reologia e tamanho de partícula), propriedades térmicas e microestrutura de achocolatados comparados a pasteurização (controle). Bebidas tratadas por plasma frio apresentaram partículas com maior tamanho e consistência e perfil de fusão alterado (menor temperatura, água ligada e maior entalpia) do que o produto pasteurizado, sugerindo processos de desnaturação. Condições mais severas resultaram em maior consistência (partículas de maiores áreas superficiais [D 3,2] e diâmetros volumétricos [D 4,3]). Condições intermediárias resultaram em produtos com características mais semelhantes às bebidas pasteurizadas. Os resultados indicam que bebidas lácteas achocolatadas com diferentes características poderiam ser obtidas variando os parâmetros do processo de plasma frio.

Cinética da proteína total, fibrinogênio e ceruloplasmina em cordeiros Santa Inês durante os primeiros cinco meses de vida / Kinetics of total protein, fibrinogen, and ceruloplasmin in Santa Inês lambs during the first five months of life

Objetivou-se estudar a cinética da proteína total, fibrinogênio e ceruloplasmina durante os primeiros cinco meses de vida, em cordeiros saudáveis da raça Santa Inês, no município de São Gonçalo dos Campos, Bahia, Brasil. Amostras de sangue foram colhidas de 22 animais, ao longo de onze momentos: logo após o parto (T0), 12 (T1), 24 (T2), 48 horas (T3), sete (T4), 15 (T5), 30 (T6), 60 (T7), 90 (T8), 120 (T9) e 150 dias de vida (T10). A proteína total e o fibrinogênio plasmáticos foram analisados por meio de refratômetro clínico e pela técnica de desnaturação pelo calor, respectivamente, enquanto que a determinação da ceruloplasmina sérica se baseou em sua atividade oxidásica. Para análise estatística utilizou-se o programa SPSS versão 18; os dados com distribuição não paramétrica foram submetidos ao teste de Friedman para avaliar o efeito do tempo, enquanto que as comparações múltiplas pelo teste de Wilcoxon permitiram a identificação das diferenças entre os momentos, adotando-se nível de significância de 5% (p<0,05). A proteína total apresentou o menor valor no T0 diferindo estatisticamente dos demais tempos, com pico às 12 horas (T1), porém estabilizando-se até o final do experimento. O fibrinogênio não apresentou diferença estatística entre os tempos. De T1 (12h) a T3 (48h) constatou-se baixos valores de ceruloplasmina, muito embora às 24 horas (T2) tenha diferido estatisticamente (p<0,05), em relação ao T0. A partir do sétimo dia (T4) a concentração desta proteína aumentou significativamente, atingindo pico nos tempos T8 (90 dias) e T9 (120 dias). Foi possível estabelecer a cinética das proteínas estudadas, identificar os principais momentos com alterações e sugerir os fatores associados com as mudanças observadas.(AU)

The objective was to study the kinetics of the total protein, fibrinogen, and ceruloplasmin during the first five months of life in healthy lambs Santa Inês, in São Gonçalo dos Campos, Bahia, Brazil. Blood samples were collected from 22 animals, over eleven times: immediately after birth (T0), 12 (T1), 24 (T2), 48 hours (T3), seven (T4), 15 (T5), 30 (T6), 60 (T7), 90 (T8) 120 (T9), and 150 days of age (T10). The total protein and plasma fibrinogen were analyzed by means of a clinical refractometer and the heat denaturation technique, respectively, while the determination of serum ceruloplasmin was based on its oxidase activity. For statistical analysis, the SPSS version 18 program was used; the non-parametric data were submitted to the Friedman test to evaluate the effect of time, whereas the multiple comparisons by the Wilcoxon test allowed the identification of the differences between the moments, adopting a significance level of 5% (P < 0.05). The total protein presented the lowest value at T0 differing statistically from the other times, with a peak at 12 hours (T1), but stabilizing until the end of the experiment. Fibrinogen is not able to differentiate between the times. Between T1 (12h) and T3 (48h), low values of ceruloplasmin were observed, although at 24 hours (T2) it differed statistically (p <0.05) in relation to T0. On the seventh day (T4) the concentration of this protein increased significantly, reaching a peak at T8 (90 days) and T9 (120 days). It was possible to establish the kinetics of the proteins studied, to identify the main moments with alterations and to suggest the factors associated with the observed changes.(AU)

AVALIAÇÃO DA ADIÇÃO DE XILANASE E FITASE LÍQUIDAS PÓS-PELETIZAÇÃO SOBRE O APROVEITAMENTO ENERGÉTICO, DO CÁLCIO E FÓSFORO DA DIETA

O processo térmico conhecido como peletização é considerada um técnica de processamento de ração que busca a maximização dos resultados com um custo baixo de produção. No entanto, este processo no qual as enzimas estão presentes envolvem altas temperaturas, umidade e pH, podendo ocorrer desnaturação total ou parcial, e em consequência a esta desnaturação, a eficiência das catálises enzimáticas é diminuída ou anuladas. Portanto os objetivos deste estudo foram avaliar o efeito da adição de enzimas líquidas pós peletização, sobre o aproveitamento, digestibilidade dos nutrientes em frangos de corte suplementados com fitase e xilanase na forma líquida, com diferentes níveis de inclusão via ração. A presente pesquisa foi conduzida nas instalações do setor e avicultura, da UNOESC Xanxerê, campus II. Foram conduzidos três experimentos, nas instalações do setor de avicultura da UNOESC Xanxerê, sendo utilizadas em cada um, 120 machos da linhagem COBB, de 14 a 24 dias de idade. Em delineamento experimental inteiramente casualizado, composto por cinco tratamentos, constituídos por oito repetições, com três animais em cada repetição, constituído por três experimentos, sendo Xilanase (controle, 10.000 UI/kg, 15.000 UI/kg, 20.000 UI/kg, 25.000 UI/kg), Fitase (controle, 500 FTUs/kg, 1.000 FTUs/kg, 1.500 FTUs/kg, 2.000FTUs/kg), e Xilanase + Fitase (controle, xilanase + 500 FTUs/kg, xilanase + 1000 FTUs/kg, xilanase + 1500 FTUs/kg, xilanase + 2000 FTUs/kg). A adição de xilanase nas dietas melhorou linearmente o aproveitamento energético das rações, e a fitase, sozinha ou em combinação com xilanase, a partir de 500FTUs de inclusão, melhorou a digestibilidade do fósforo das dietas, reduzindo a excreção deste elemento. Conclui-se que a adição das enzimas fitase e xilanase, na sua forma líquida, podem ser utilizadas adequadamente na alimentação de frangos de corte, melhorando, respectivamente, o aproveitamento do fósforo e da energia das dietas.

The thermal process known as pelletizing is considered a feed processing technique that seeks to maximize results with a low production cost. However, this process in which the enzymes are present involves high temperatures, humidity and pH, and total or partial denaturation may occur, and as a result of this denaturation, the efficiency of enzymatic analyzes is reduced or canceled. Therefore, the objectives of this study were to evaluate the effect of adding liquid enzymes after pelletization, on the utilization, digestibility of nutrients in broilers supplemented with phytase and xylanase in liquid form, with different levels of inclusion via feed. This research was conducted at the facilities of the sector and poultry, of UNOESC Xanxerê, campus II. Three experiments were conducted in the facilities of the poultry sector of UNOESC Xanxerê, being used in each one, 120 males of the COBB lineage, from 14 to 24 days old. In a completely randomized design, consisting of five treatments, consisting of eight repetitions, with three animals in each repetition, consisting of three experiments, being Xylanase (control, 10,000 IU / kg, 15,000 IU / kg, 20,000 IU / kg, 25,000 IU / kg), Phytase (control, 500 FTUs / kg, 1,000 FTUs / kg, 1,500 FTUs / kg, 2,000FTUs / kg), and Xylanase + Phytase (control, xylanase + 500 FTUs / kg, xylanase + 1000 FTUs / kg, xylanase + 1500 FTUs / kg, xylanase + 2000 FTUs / kg). The addition of xylanase in the diets linearly improved the energy utilization of the diets, and phytase, alone or in combination with xylanase, from 500FTUs of inclusion, improved the digestibility of phosphorus in the diets, reducing the excretion of this element. It is concluded that the addition of phytase and xylanase enzymes, in their liquid form, can be used properly in the broiler feed, improving, respectively, the use of phosphorus and the energy of the diets.

DEVELOPMENT OF ALGINATE MICROPARTICLES COATED WITH HPMCAS CONTAINING THE ANTIMICROBIAL PEPTIDE Ctx(Ile21)-Ha FOR APPLICATION AS A NATURAL ORAL ADDITIVE IN LAYING HENS AGAINST SYSTEMIC Salmonella Enteritidis INFECTION

A pesquisa por novos compostos que possam aumentar e melhorar o desempenho ou diminuir resíduos químicos em produtos de origem animal torna-se relevante e demandada. Paralelamente, o uso constante de antibióticos sintéticos como promotores de crescimento causa uma grande resistência bacteriana em aves poedeiras, além de rastros e resíduos em seus produtos, os quais podem afetar a sanidade animal e, consequentemente, a saúde humana. Neste sentido, o peptídeo antimicrobiano (PAM) Ctx(Ile21)-Ha, extraído e isolado da rã do cerrado brasileiro Hypsiboas albopunctatus, é uma molécula muito promissora no controle de bactérias patogênicas. No entanto, os PAMs aplicados em sistemas in vivo, podem sofrer degradação ou desnaturação pela presença de proteases ou hidrolise pelo entorno ácido. Assim, este estudo objetivou a síntese e purificação peptídeo Ctx(Ile21)-Ha, e o revestimento de micropartículas de alginato com acetato/succinato de hipromelose (HPMCAS), além de sua caracterização fisioquímica. Foi também avaliada a atividade hemolítica e liberação in vitro gastrointestinal simulada das micropartículas revestidas. O estudo in vivo foi realizado com galinhas de postura recém-nascidas, desafiadas com Salmonella Enteritidis, e tratadas com as micropartículas na ração. Foi realizado a contagem bacteriana em fígado, baço e ceco para verificação dos efeitos do peptídeo. Os resultados obtidos mostraram micropartículas termoestáveis, com eficiência de encapsulação acima do 70%, leve liberação gástrica, ótima liberação intestinal, atividade hemolítica do peptídeo diminuída em 95%, além no experimento in vivo obteve-se diferença significativa na contagem principalmente no fígado, seguida do baço. Portanto, este estudo demonstrou que as micropartículas revestidas contendo o PAM Ctx(Ile21)-Ha possuem alta atividade antimicrobiana e serve de ferramenta para prevenção de infecção sistêmica, sem resíduos contaminantes em comparação com os fármacos convencionais.

The search for new compounds that can increase and improve performance or reduce chemical residues in products of animal origin is becoming relevant and in demand. At the same time, the constant use of synthetic antibiotics as growth promoters causes great bacterial resistance in laying birds, as well as traces and residues in their products, which can affect animal health and, consequently, human health. In this sense, the antimicrobial peptide (AMP) Ctx(Ile21)-Ha, extracted and isolated from the Brazilian Cerrado frog Hypsiboas albopunctatus, is a very promising molecule in the control of pathogenic bacteria. However, AMPs applied in an in vivo system can undergo degradation or denaturation due to the presence of proteases or hydrolysis by the acidic environment. Thus, this study aimed at the synthesis and purification of the Ctx(Ile21)-Ha peptide, and the coating of alginate microparticles with hypromellose acetate/succinate (HPMCAS), in addition to its physicochemical characterization. Hemolytic activity and simulated in vitro gastrointestinal release of the coated microparticles were also evaluated. In vivo study was carried out with newly hatched laying hens, challenged with Salmonella Enteritidis and treated with microparticles in the feed. Bacterial counts were performed in liver, spleen, and cecum to verify the effects of peptide. The results obtained showed thermostable microparticles, with encapsulation efficiency greater than 70%, slight gastric release, excellent intestinal release, the hemolytic activity of peptide decreased by 95%, and in the in vivo experiment a significant difference was obtained in bacterial count, mainly in liver, followed by spleen. Therefore, this study demonstrated that the coated microparticles containing AMP Ctx(Ile21)-Ha have a high antimicrobial activity and serve as a tool for the prevention of systemic infections, without contaminating residues compared to conventional drugs.

Evaluation of bacterial diversity recovered from petroleum samples using different physical matrices

Unraveling the microbial diversity and its complexity in petroleum reservoir environments has been a challenge throughout the years. Despite the techniques developed in order to improve methodologies involving DNA extraction from crude oil, microbial enrichments using different culture conditions can be applied as a way to increase the recovery of DNA from environments with low cellular density for further microbiological analyses. This work aimed at the evaluation of different matrices (arenite, shale and polyurethane foam) as support materials for microbial growth and biofilm formation in enrichments using a biodegraded petroleum sample as inoculum in sulfate reducing condition. Subsequent microbial diversity characterization was carried out using Scanning Electronic Microscopy (SEM), Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE) and 16S rRNA gene libraries in order to compare the microbial biomass yield, DNA recovery efficiency and diversity among the enrichments. The DNA from microbial communities in petroleum enrichments was purified according to a protocol established in this work and used for 16S rRNA amplification with bacterial generic primers. The PCR products were cloned, and positive clones were screened by Amplified Ribosomal DNA Restriction Analysis (ARDRA). Sequencing and phylogenetic analyses revealed that the bacterial community was mostly represented by members of the genera Petrotoga, Bacillus, Pseudomonas, Geobacillus and Rahnella. The use of different support materials in the enrichments yielded an increase in microbial biomass and biofilm formation, indicating that these materials may be employed for efficient biomass recovery from petroleum reservoir samples. Nonetheless, the most diverse microbiota were recovered from the biodegraded petroleum sample using polyurethane foam cubes as support material.(AU)

AVALIAÇÃO HISTOLÓGICA, MICROESTRUTURAL E DE BIOCOMPATIBILIDADE IN VIVO DE CARTILAGENS AURICULARES DE BOVINO TRATADAS EM SOLUÇÃO ALCALINA

Com o avanço de técnicas para a correção de defeitos ou perdas teciduais, busca-se a utilização de biomateriais que promovam o reparo com o mínimo de resposta inflamatória. Estudos anteriores realizados utilizaram diferentes meios de preparo e obtenção de cartilagens elásticas de bovinos, visando o uso como biomaterial. Entretanto, um dos grandes desafios relacionados ao uso dessas membranas, refere-se na ocorrência de reações imunogênicas indesejadas, no local de implantação. Este estudo objetivou caracterizar as propriedades físico-químicas, microestruturais e histológicas de cartilagens elásticas de bovinos tratadas em solução alcalina e sua biocompatibilidade in vivo. Para tanto, foram realizadas análises físico-químicas para a caracterização deste material. As análises térmicas realizadas, Termogravimetria (TGA) e a Calorimetria Exploratória Diferencial (DSC), verificaram as possíveis alterações do material frente as variações de temperatura em que foi submetido. As curvas da TGA demonstraram a variação da massa de cartilagens elásticas tratadas e não tratadas em função da temperatura e na DSC foi avaliado a temperatura de desnaturação do colágeno das amostras de cartilagem. As análises demonstraram que a cartilagem tratada apresentou características físico-químicas similares a cartilagem não tratada. Nas avaliações microestruturais, foi realizado a Microtomografia computadorizada 2D e 3D e a Microscopia de scanner a laser confocal. Na Micro-Ct bidimensional evidenciou que a região da cartilagem apresentou maior densidade em relação ao pericôndrio, e o tratamento alcalino foi efetivo na descelularização, pela presença de lacunas observadas na matriz extracelular entremeadas a estrutura do colágeno. A Micro-Ct tridimensional demonstrou que a cartilagem apresenta menor porosidade e poros com maior diâmetro e na Microscopia de scanner a laser notou-se que a cartilagem tratada apresenta uma rugosidade considerável, fatores que podem contribuir com a proliferação e adesão celular. Neste estudo também foram feitos o processamento histológico da cartilagem, demonstrando que o tratamento alcalino promoveu a descelularização tecidual, com a manutenção da arquitetura da matriz extracelular e da estrutura das fibras elásticas e de colágeno. Concluiu-se que o tratamento alcalino foi eficiente para promover a descelularização na cartilagem elástica. A última etapa do estudo consistiu em avaliar a biocompatibilidade in vivo de implantes de cartilagens elásticas tratadas com solução alcalina (CA) comparadas a tela de polipropileno (TP) em coelhos. Foi verificado que o grupo (CA) apresentou processo inflamatório menos intenso que o grupo (TP), no qual foi observado a formação de cápsula fibrosa ao redor dos implantes. Notou-se no grupo (CA) a presença de calcificação promovida pela osteoindução de osteoblastos em decorrência do processamento alcalino, o que pode ser considerado um viés de interesse para estudos posteriores, envolvendo a regeneração de tecidos ósseos, em que a aplicabilidade de tipo celular observado é viável.

With the advancement of techniques for the correction of tissue defects or losses, the use of biomaterials that promote repair with a minimum of inflammatory response is sought. Previous studies carried out used different means of preparing and obtaining elastic bovine cartilage, aiming at the use as biomaterial. However, one of the major challenges related to the use of these membranes, refers to the occurrence of unwanted immunogenic reactions at the implantation site. This study aimed to characterize the physical-chemical, microstructural and histological properties of elastic bovine cartilages treated in alkaline solution and their biocompatibility in vivo. Therefore, physical-chemical analyzes were carried out to characterize this material. The thermal analyzes performed, Thermogravimetry (TGA) and Differential Exploratory Calorimetry (DSC), verified the possible changes in the material in view of the temperature variations in which it was submitted. The TGA curves showed the variation in the mass of treated and untreated elastic cartilages as a function of temperature and in the DSC the temperature of the collagen denaturation of the cartilage samples was evaluated. The analyzes showed that the treated cartilage had physicochemical characteristics similar to untreated cartilage. In the microstructural evaluations, 2D and 3D computed microtomography and confocal laser scanner microscopy were performed. Two-dimensional Micro-Ct showed that the cartilage region showed higher density in relation to the perichondrium, and the alkaline treatment was effective in decellularization, due to the presence of gaps observed in the extracellular matrix interspersed with the collagen structure. The three-dimensional Micro-Ct showed that the cartilage has less porosity and pores with a larger diameter and in the laser scanner microscopy it was noted that the treated cartilage has considerable roughness, factors that can contribute to cell proliferation and adhesion. In this study, histological processing of cartilage was also performed, demonstrating that the alkaline treatment promoted tissue decellularization, with the maintenance of the architecture of the extracellular matrix and the structure of elastic and collagen fibers. It was concluded that the alkaline treatment was efficient to promote decellularization in the elastic cartilage. The last stage of the study consisted of evaluating the in vivo biocompatibility of elastic cartilage implants treated with alkaline solution (CA) compared to polypropylene (TP) mesh in rabbits. It was found that the group (CA) had a less intense inflammatory process than the group (TP), in which the formation of a fibrous capsule around the implants was observed. It was noted in the group (CA) the presence of calcification promoted by osteoinduction of osteoblasts due to alkaline processing, which can be considered a bias of interest for further studies, involving the regeneration of bone tissues, in which the cell-type applicability observed is feasible.

Avaliação de multirresistência de Staphylococcus aureus isolados de amostras de leite provenientes de vacas em assentamentos da região do Pontal do Paranapanema - SP

O estudo teve como objetivo investigar a presença de genes de resistência a meticilina, mecA e mecC, em Staphylococcus aureus isolados de leite de vacas em assentamentos na região do Pontal do Paranapanema, estado de São Paulo. O Staphylococcus aureus e responsável por causar prejuízo na produção leiteira, como causador de mastite, assim como no impacto na saúde publica humana. Ela está presente em quase todo o ambiente natural, e é considerada parte da flora comum do ser humano. O mais preocupante e a resistência que esta bactéria vem desenvolvendo aos antibióticos ao longo dos tempos. Nos últimos anos as cepas de Staphylococcus aureus resistentes a meticilina, SARM ou em inglês MRSA (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus), vem desafiando a área da Saúde Publica. O universo de pesquisa utilizou leite colhido de 724 animais estudados, após visitas em 8 assentamentos e 181 propriedades da região. Os oito assentamentos visitados foram analisados previamente em relação a manejo, higiene na ordenha e características dos animais, e posteriormente as amostras de leite foram submetidos a investigação dos micro-organismos responsáveis pela mastite na região, bem como a avaliação da contagem de células somáticas. Após o crescimento de bactérias presentes no leite, em placas de ágar sangue, realização de técnica bacterioscopica de Gram, teste de sensibilidade antimicrobiana in vitro, e isolamento de Staphylococcus sp, foram enviadas para o laboratório Qualileite, para que através da técnica de MALDI-TOF MS, fossem isolados as cepas de Staphylococcus aureus. Posteriormente foram utilizadas 100 amostras isoladas de Staphylococcus aureus, para a pesquisa da presença do gene de resistência a meticilina, mecA, e mecC, pela técnica de PCR (polymerase chain reaction), que amplifica um segmento de DNA de interesse, produzindo milhões de copias. A PCR imita o que acontece dentro da célula, replicando o DNA antes da divisão celular, amplificando o gene, que e sequenciado. A dupla fita de DNA e separada no processo de desnaturação. A temperatura da solução então e reduzida, e os primers se ligam as sequencias alvo do DNA, iniciando a polimerização. Novas fitas de DNA são originadas através das fitas originais modelos. A enzima Taq polimerase, isolada de uma bactéria termofilica chamada Thermus aquaticus, une nucleotídeos de DNA livres as fitas de DNA separadas. Não foram encontrados resultados positivos nas amostras testadas, fato epidemiologicamente relevante para a região do Pontal do Paranapanema, considerando-se o aumento gradativo da resistência dos microrganismos aos antimicrobianos usados na pratica clínica. Os genes mecA ou mecC geralmente estão associados ao MRSA, e para que a resistência bacteriana e transmissão entre as espécies possam ser monitoradas, a caracterização genotípica e importante. Para tanto, este trabalho buscou entender a ocorrência de genes de multirresistência nos isolados com essas características, buscando obter a presença dos genes mecA e mecC em rebanhos da região, nas amostras obtidas na região do Pontal do Paranapanema, a fim de associar com o tipo de manejo adotado.

This project is about the research of the presence of methicillin resistant genes, mecA and mecC, in Staphylococcus aureus isolated from milk samples from cows in settlements in the Pontal do Paranapanema, state of Sao Paulo. The Staphylococcus aureus is responsible for causing damage to the milk production, because of mastitis, and therefore it brings impact on the human public healthcare. This bacteria is present in almost all of the natural environment, and it is part of the human bacterial flora. What is worrying about it is the antibiotic resistance the bacteria has been gaining over the years. From the last decades Methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA, has been a challenge to public healthcare. The milk samples used in this research were collected from 724 studied animals, after visiting 8 settlements and 181 properties of the region, proportionally distributed. The 8 settlements were previously analysed regarding handling, hygiene while milking and animals' characteristics, and later on the milk samples were submitted to investigation of microorganisms responsible for mastitis in the region, as well as the evaluation of somatic cells' counting. After the growth of bacterias present in the milk, in blood agar plate, bacterioscopy Gram's technique, test of anti macrobiotic sensibility in vitro, and Staphylococcus sp isolation, those were sent to the Qualileite laboratory, and through the MALDI-TOF MS technique the strains were isolated. Later on 100 samples of isolated Staphylococcus aureus were analyzed to search for the presence of the gene resistant to methicillin, mecA, and mecC, by the PCR (polymerase chain reaction) method which amplifies a DNA segment of interest, producing millions of copies. The PCR simulates what happens inside a cell, replicating the DNA before cellular division, amplifying the gene which is sequenced. The DNA double strand is separated in the process of denaturation. The temperature of the solution is reduced, the primers combine themselves to the aim sequences of the DNA starting the polymerization. New DNA strands originated from the original strands models. The Taq polymerase, isolated from a thermophilic bacteria called Thermus aquaticus, combines nucleotides of DNA free from the separated strands of DNA. There were no positive results on the tested samples, which is a relevant fact regarding the region of Pontal do Paranapanema, considering the rise of microorganisms resistant to antibiotics used in the clinical field. The mecA or mecC genes are often associated with the MRSA, and in order to control bacterial resistance and its transmission between the species the genotypic information is important. Therefore, this research is about the genotypic distribution of isolated samples with the mecA e mecC genes in the region of Pontal do Paranapanema in order to associate the ways of handling.

DETECÇÃO DE Escherichia coli ENTEROPATOGÊNICA (EPEC) E SHIGATOXIGÊNICA (STEC) EM GALINHAS CAIPIRAS NA REGIÃO DE RIBEIRÃO PRETO SP

A enterobactéria Escherichia coli está entre os principais agentes causadores de perdas econômicas na avicultura, vinculada diretamente à maneira e ao ambiente como as aves são criadas, podendo causar infecções nas próprias aves como também nos seres humanos. Os patótipos de E. coli enteropatogênica (EPEC) e shigatoxigênica (STEC) constituem patógenos de importância na saúde pública pelo potencial de transmissão na forma de doenças entéricas ao homem e pela possível emergência de isolados multirresistentes. Baseado nisso, o presente estudo teve como objetivo verificar a prevalência dos genes eae, stx1 e stx2, característicos destes dois patótipos em amostras de galinhas caipiras na região de Ribeirão Preto - SP. Para tanto, foram coletadas com auxílio de suabe amostras de fezes de 80 galinhas caipiras e estas foram submetidas a uma triagem por triplex-PCR para a detecção de STEC e EPEC. O programa de amplificação gênica constituiu de um primeiro ciclo a 95C por 2 minutos, seguido de outros 25 ciclos, cada constituído por três passos (94C por 30 segundos, para desnaturação da dupla fita de DNA; 50C por 30 segundos, para o pareamento dos oligonucleotídeos iniciadores e 72C por 30 segundos de extensão) e um clico a 72C por 7 minutos para extensão final. Os genes de virulência estavam presentes em 18 das 80 amostras analisadas, representando um percentual de 22,5%, sendo detec

Fontes proteicas em rações extrudadas para peixes onívoros: características físicas e química dos péletes

Há uma intensa busca por ingredientes proteicos que possam ser usados nas formulações das rações para aquicultura. Além de atender as exigências nutricionais dos peixes, espera-se que os ingredientes proteicos sejam passíveis ao processo de extrusão, resultando em péletes de qualidade. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar como a inclusão de diferentes fontes proteicas de origem vegetal e animal em rações para peixes onívoros influencia no processo de extrusão e nas características físicas dos péletes. Inicialmente, foram formuladas quatro rações experimentais isoproteicas (28% PB) e isoenergéticas (3600 kcal de EB/Kg) de acordo com a exigência nutricional do tambaqui (Colossoma macropomum) durante a fase de engorda. As rações foram formuladas com 20% de cada ingrediente teste, sendo dois de origem vegetal (CPS: concentrado proteico de soja e GM: glúten de milho) e dois de origem animal (FPM: farinha de peixe marinho e FVA: farinha de vísceras de aves). Todas as rações foram extrudadas em extrusora monorosca, com temperaturas da água no pré-condicionador e no canhão em 80 e 100 ºC, respectivamente. Os péletes das rações foram avaliados quanto ao teor de umidade (UM), densidade aparente (DA), flutuabilidade (F), taxa de expansão (TE), índice de absorção de água (IAA), índice de solubilidade em água (ISA), resistência à água (RA), índice de durabilidade do péletes (IDP) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os maiores valores de DA foram das rações FVA 334,02 ± 6,61 g/L e CPS com 325,99 ± 3,86 g/L. Os péletes apresentaram maiores valores de TE nas rações elaboradas com fonte proteica de origem vegetal, 65,81 e 58,65% para CPS e GM, respectivamente. Todas as rações apresentaram flutuabilidade de 100%. Na avaliação do IAA, para as rações CPS e GM foram observados os valores 5,46 ± 0,50 e 5,37±0,29 g/g respectivamente, assim como as rações CPS e GM apresentaram os melhores valores para ISA, 2,51 ± 0,38 e 2,40 ± 0,29%, demonstrando que os péletes das rações com fonte proteica de origem vegetal têm a menor desintegração de péletes na água. A capacidade de RA das rações CPS e FPM foi semelhante com valores de 81,92 ± 3,78, 79,18 ± 2,02%, respectivamente, diferindo das rações GM e FVA. As rações testadas apresentaram IDP inferiores a 1% e na avaliação da MEV, os péletes das rações CPS e GM apresentaram poros com câmaras de ar sem deformação e uniformes, ao passo que as rações FVA e FPM apresentaram péletes com poros e câmaras de ar deformadas e desuniformes. Entretanto, não foram observadas diferenças na superfície dos péletes de todas as rações. Apesar das combinações de 20% de ingredientes proteicos de origem vegetal ou animal com 21% de amido proporcionarem péletes com alta qualidade física, as rações CPS e GM destacaram-se se por apresentarem melhores ISA, IAA e TE além de microestrutura dos poros mais uniformes.

There is an emerging need for protein ingredients to produce aquafeeds. In addition to meeting the fish nutritional requirements, it is expected that the protein ingredients are amenable to the extrusion process, resulting in high quality pellets. Therefore, the aim of this study was to evaluate how the inclusion of different protein sources of vegetable and animal origin in omnivorous fish feeds influences the extrusion process and the physical characteristics of the pellets. Initially, four experimental isoproteic (28% CP) and isoenergetic (3600 kcal EB / Kg) diets were formulated according to the nutritional requirement of tambaqui (Colossoma macropomum) during the fattening phase. The diets were formulated with 20% of each test ingredient, two of vegetable origin (SPC: soy protein concentrate and CG: corn gluten) and two of animal origin (MFM: marine fishmeal and POM: poultry offal meal). All feeds were extruded in a single screw extruder with water at 80º C from the preconditioner and extruding chamber at 100 ºC. Feed pellets were evaluated for moisture content (MC), bulk density (BD), buoyancy (B), expansion rate (ER), water absorption index (WAI), water solubility index (WSI), water resistance (WR), pellet durability index (PDI) and scanning electron microscopy (SEM). The highest values of BD were from POM 334.02 ± 6.61 g / L and CPS 325.99 ± 3.86 g / L. The pellets showed higher ER values in diets prepared with protein source of vegetable origin, 65.81 and 58.65% for SPC and CG, respectively. All diets showed 100% of buoyancy pellets. The SPC and CG diets presented 5.46 ± 0.50 and 5.37 ± 0.29 g / g for WAI, respectively, as well as the SPC and CG diets showed the best values for WSI, 2.51 ± 0.38 and 2.40 ± 0.29%.These values demonstrates that the feed pellets with protein source of vegetable origin have the lowest loss of pellet disintegration to water. The WR capacity of the SPC and MFM was similar with values of 81.92 ± 3.78 and, 79.18 ± 2.02%, respectively, differing significantly from CG and OMB diets. The tested diets showed PID less than 1%. SPC and CG pellets showed pores with unformed and uniform air chambers in SEM, whereas the POM and MFM showed pellets with deformed and uneven pores and air chambers. However, for SEM, no significant differences were observed in pellet surface of all diets. Despite the combinations of 20% of protein ingredients of vegetable or animal origin with 21% of starch provide pellets with high physical quality, the SPC and CG diets presented higher quality for WSI, WAI, ER and uniform pore microstructure.

SUPLEMENTAÇÃO DE BOVINOS A PASTO COM FONTES DE LIPÍDIOS PROTEGIDOS SOBRE AS CARACTERÍSTICAS SEMINAIS, PARÊNQUIMA TESTICULAR E PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES.

A hipótese do presente estudo é de que o uso de gordura de palma e gordura de soja, protegidos com sais de cálcio e fornecidos via dieta afetam a histologia testicular e melhoram a qualidade do sêmen fresco e congelado de touros Nelores jovens, e pode interferir diretamente no perfil lipídico das células espermáticas e na fertilidade das doses de sêmen crio preservadas a ponto de melhorar a produção in vitro de embriões. No primeiro capítulo o objetivo foi avaliar a qualidade do sêmen fresco e a histologia testicular de 48 touros jovens da raça Nelore distribuídos aleatoriamente em quatro grupos consumindo os seguintes suplementos: Controle (CO, suplemento proteico-energético sem adição de gordura protegida); gordura de palma (OP, suplemento controle + adição de 285 g de gordura de palma protegida); gordura de soja (OS, suplemento controle + 285g de gordura de soja protegida) ou associação (OP+OS, suplemento controle + 145 g de gordura de soja protegida + 145 g de palma protegida). O período de suplementação durou 84 dias sendo então realizada a coleta e as avaliações do sêmen e a histologia dos testículos. As variáveis testiculares analisadas foram: circunferência escrotal (CE), consistência do testículo esquerdo (CONSTE), volume testicular do lado esquerdo (VOLTE), consistência do testículo direito (CONSTD) e volume testicular do testículo direito (VOLTD). Foram avaliados também os parâmetros seminais do sêmen fresco: Turbilhonamento (TURB), Motilidade (MOT), Vigor (VIG), Concentração (CONC) e o Volume seminal (VOL). Além disso, avaliou-se a Atividade Citoquímica mitocondrial (DAB) e a integridade funcional da membrana plasmática (HIPO). Com o auxílio da análise histológica avaliou-se o número de túbulos seminíferos (NTF), a densidade de superfície tubular (DST) e as características morfológicas das células germinativas: Célula (área (ARC), perímetro (PTC), circularidade (CIR), diâmetro mínimo (DMiC) e diâmetro máximo (DMaC) e Núcleo (área (ARN), perímetro, circularidade (PTN), diâmetro mínimo (DMiN), diâmetro máximo (DMaN), e relação núcleo/célula (NC). No segundo capítulo o objetivo foi avaliar o sêmen pós descongelamento na produção in vitro de embriões, associando com possíveis mudanças no perfil lipídico dos espermatozóides, após os 84 dias de suplementação foi realizada a criopreservação seminal dos ejaculados dos touros experimentais. No sêmen pós descongelamento as variáveis de movimentação foram avaliadas com técnica assistida por computador (CASA). Analisou-se também a atividade mitocondrial (DAB) e o estresse oxidativo induzido (TBARS induzido). Com o uso de sondas fluorescentes e análise em citometro de fluxo avaliou-se: a integridade de membrana plasmática e acrossomal (FITC-PI), o potencial de membrana mitocondrial sonda (JC-1), a quantidade de radicais livres intracelular (CellROX) e a desnaturação do DNA espermático através estabilidade da cromatina (LA). Foi realizada também a análise do perfil lipidico (LIP) dos espermatozóides sendo também testado na produção in vitro de embriões (PIVE). Os dados foram analisados utilizando o programa estatístico SAS (versão 9.3). Primeiro, verificou-se a normalidade e homogeneidade das variáveis e, quando necessário, foram aplicadas mudanças. Os dados foram primeiramente analisados através da ANOVA (análise de variância). Quando encontrada diferença para as variáveis paramêtricas utilizou-se o teste de médias Tukey e para as variáveis não paramétricas utilizou-se do teste Wilcoxon. Na análise de lipidômica utilizou-se de contrastes ortagonais (FC de 1.5, sem usar FDR- taxa de descoberta falsa). Utilizou-se 5% como nível de significância para todas as avaliações. Nas análises do sêmen fresco os animais dos grupos que receberam a suplementação contendo gordura de palma e gordura de soja protegidos, separados ou em associação apresentaram maior circunferência escrotal em comparação aos animais do grupo CO, porém os animais que consumiram dieta contendo oléo de Palma apresentaram maior volume do testículo direito (P= 0,0109) e tendência para menor volume do testículo esquerdo (P=0,0541), além disso apresentaram menor quantidade de túbulos seminíferos e números de células espermatogênica, menor densidade testicular. Por outro lado, apresentaram células com maior diâmetro máximo e maior relação núcleo-célula. Já a diferença estatística encontrada para a variável DAB -3, onde o grupo OP também apresentou diferença em relação aos outros grupos experimentais (P=0,0290) e é reflexo do maior número de espermatozoides DAB 1 nos animais que consumiram gordura de Palma. Já no sêmen pós-descongelamento a suplementação com a associação de gordura de palma e gordura de soja diminuiu a quantidade de espermatozoides com atividade mitocondrial reduzida (DAB 3) e melhorou a porcentagem da movimentação dos espermatozoides de touros Nelores jovens. Observou-se também a diminuição de 79 lipídeos (membrana e armazenamento) em todos os grupos que receberam suplementação com gordura protegida comparando os dias 0 e 86 do período experimental. Ademais, o grupo suplementado com gordura de Palma (OP) teve maior porcentagem de blastocistos (P= 0,0018) na produção in vitro de embriões. Dessa forma, conclui-se que a utilização de 285g de gordura de palma (protegido com sais de cálcio) pode ser uma alternativa de suplementação para melhorar os índices reprodutivos de touros jovens da raça Nelore.

The hypothesis of the present study was that testicular histology, fresh and post-thawed semen quality, sperm cells lipid profile and in vitro embryo production of young Nellore bulls could be affected after dietary supplementation with palm and soy oils protected with calcium salts. A review was carried out in order to answer the main questions of dietary supplementation with protected fat. In addition, two scientific papers were written aiming a better understanding of the results regarding dietary supplementation with protected fat in bulls. In the first chapter, the objective was to evaluate fresh semen quality and testicular histology of forty-eight young Nellore breeders. Therefore, the animals were randomly divided in four groups which were fed with the following supplements: Control (CO, corn and distillery grains supplement without the addition of protected fat); Palm oil (OP, control supplement + 285 g of protected palm fat); Soy oil (OS, control supplement + 285g of protected soy fat) or combination (OP + OS, control supplement + 145 g of protected soy fat + 145 g of protected palm). The supplementation lasted 84 days, and at the end this period semen collection and evaluation, as well as testicular sampling for histological analysis were performed. Scrotal circumference (SC), testicular consistency of the left testis (LTCONS), testicular volume on the left side (LTV), testicular consistency of the right testicle (RTCONS) and testicular volume of the right testicle (RTV) were assessed. Additionally, fresh semen swirling (SWIR), motility (MOT), vigor (VIG), concentration (CONC), seminal volume (VOL), mitochondrial cytochemical activity (DAB) and functional integrity of the plasma membrane (HIPO) were also evaluated. Histological analysis was performed by determining the number of seminiferous tubules (NTF), tubular surface density (DST) and germ cells morphological characteristics. Thus, for the latter: cell area (CAR), perimeter (CPT), circularity (CCIR), minimum diameter (CMiD) and maximum diameter (CMaD); and nucleus area (NAR), perimeter (NPT), circularity (NCIR), minimum diameter (NMiD), maximum diameter (NMaD), and nucleus/cell ratio (NC) were determined. The second chapter aimed to evaluate the sperm fertility of post-thawed semen on in vitro embryo production, and to determine if there was any correlation between this variable and changes in the sperm lipid profile. Therefore, post-thawed sperm movement characteristics were assessed by computer assisted sperm analysis (CASA). Sperm mitochondrial cytochemical activity and induced oxidative stress (induced TBARS) were also analyzed. Flow cytometry with the aid of fluorescent probes determined integrity of the plasma and acrosomal membranes (FITC-PI), mitochondrial membrane potential (JC-1), the amount of intracellular reactive oxygen species (CellROX) and DNA sperm denaturation through chromatin stability (LA). Sperm lipid profile (LIP) was performed and sperm was tested for fertility by in vitro embryo production (IVP). Normality and homogeneity of the variables were verified and, when necessary, changes were applied. Data were subjected to analysis of variance (ANOVA) and compared by the Tukey mean test and Wilcoxon test for parametric and non-parametric variables, respectivelly. Orthogonal contrasts were applied (FC 1.5, without using FDR- false discovery rate) for lipidomic analysis. Level of significance was set at 5%, using SAS statistical program (version 9.3). Fresh semen evaluations showed lower percentage of sperm with less than half of the active mitochondria - DAB 3 (P = 0.0267) in animals supplemented with palm and soy oils (OP + OS). In addition, this finding affected directly the percentage of sperm with total (MOT) and progressive (PROG) motilities. Additionally, animals receiving palm and/or soy oils supplements showed greater scrotal circumference compared to the ones that were not supplemented. Nevertheless, animals fed with an enriched palm oil diet presented a greater right testicle volume (P = 0.0109) and a tendency of a smaller left testicle volume (P = 0.0541). The statistical difference found for the variable DAB 3 on OP group compared to the others experimental groups (P = 0.0290) is a reflection of an increased percentage of DAB 1 sperm in animals that consumed palm oil. In the post-thaw semen, supplementation with palm and/or soybean oils decreased the amount of sperm with reduced mitochondrial activity (DAB 3) and improved the percentage of motile sperm in young Nellore bulls. Sperm lipid profile evaluation showed a decrease of 79 lipids (membrane and storage) in all groups supplemented with protected fat comparing days 0 86 of the experimental period. As for the sperm fertility tested by IVP, palm oil supplementation led to a higher percentage of blastocysts (P = 0.0018). In conclusion, the use of 285g of palm oil (protected with calcium salts) in the animal feed could be used as a supplement alternative to improve reproductive rates of young Nellore bulls.

Estudo histoquímico e lectino-histoquímico da intoxicação por feijão preto (Phaseolus vulgaris) em búfalos

O feijão (Phaseolus vulgaris) é um grão comumente utilizado na alimentação humana e de animais monogástricos, que está ganhando espaço na nutrição de ruminantes em regiões tropicais. O Brasil é o maior produtor e exportador deste grão, o que torna o uso de excedentes de produção ou subprodutos na alimentação animal uma alternativa. P. vulgaris é uma leguminosa que possui elevado teor proteico e que tem um custo de produção menor em relação a proteína animal. Entretanto seus grãos apresentam alguns limitantes, como fatores antinutricionais em sua composição. Um destes fatores é a fito-hemaglutinina (PHA), uma lectina capaz de provocar intoxicação em humanos e animais. A intoxicação ocorre pela ingestão de grãos não processados, sendo a cocção o método mais empregado na desnaturação dos fatores antinutricionais como a PHA. A intoxicação é amplamente estudada em humanos e animais monogástricos, entretanto, estudos em ruminantes são escassos. O acompanhamento de um surto de intoxicação natural por P. vulgaris em búfalos há alguns anos possibilitou o presente projeto, que tem por objetivo aprofundar alguns aspectos histoquímicos e imuno-histoquímicos da intoxicação nesta espécie animal.

Bean (Phaseolus vulgaris) is a common grain used in human food and monogastric animals, which is gaining ground in ruminant nutrition in tropical regions. Brazil is the largest producer and exporter of this grain which makes the use of surplus production or by-products in animal feed an alternative. P. vulgaris is a legume that has a high protein content and a relatively lower production cost in relation to animal protein. However, it presents some limitations, as antinutritional factors in its composition. One of these factors is phytohemagglutinin (PHA), a lectin capable of causing intoxication in humans and animals. Intoxication occurs by ingestion of unprocessed grains. Cooking is the most used method for the denaturation of antinutritional factors such as PHA. Intoxication is widely studied in monogastric humans and animals, however, studies on ruminants are scarce. The follow up of an outbreak of natural poisoning by P. vulgaris in buffaloes a few years ago enabled the present project, which aims to deepen some histochemical and immunohistochemical aspects of intoxication in this animal species.

PADRONIZAÇÃO DE UMA PCR MULTIPLEX PARA DETECÇÃO SIMULTÂNEA DA PRESENÇA DE SALMONELLA SPP. E DA AUTENTICIDADE DE SALMO SALAR EM PRATOS DA CULINÁRIA JAPONESA

O consumo mundial do pescado tem sofrido um crescimento significativo nos últimos anos em decorrência do aumento populacional e da busca por alimentos mais saudáveis. Entre as formas mais consumidas desses produtos, destacam-se as inspiradas na culinária japonesa, como os sushis e sashimis. Nesses pratos, o pescado de maior valor comercial e nutricional é o salmão, um salmonídeo pertencente à espécie Salmo salar, que pelo alto valor agregado tem sido alvo de fraudes por substituição. Outro agravante com relação a esse tipo de alimento é a sua susceptibilidade à contaminação microbiológica, como contaminações por Vibrio parahaemolyticus e por Salmonella spp., por serem alimentos altamente manipulados e consumidos crus. Por essa razão, o objetivo desse estudo é padronizar uma PCR multiplex para a detecção simultânea de S. salar e V. parahaemolyticus e de Salmo salar e Salmonella spp. e aplicar os referidos protocolos em amostras de sushi. Para isso, inicialmente serão extraídos DNAs das espécies S. salar, V. parahaemolyticus e Salmonella Enteritidis, que serão utilizados para a padronização e como controles na PCR, na qual serão testadas diferentes temperaturas de desnaturação, anelamento e extensão. Os amplicons obtidos serão submetidos a eletroforese em gel de agarose e revelados em equipamento de foto documentação. Posteriormente, lotes de sushi serão produzidos e contaminados experimentalmente para determinar o limite de detecção da técnica, onde serão avaliadas a sensibilidade e eficiência da PCR proposta. Por fim, amostras de sushi do tipo niguiri serão coletadas em restaurantes que comercializam comida japonesa na região metropolitana de Belém - PA e essas amostras serão processadas, a fim de se avaliar a aplicação da técnica em amostras comerciais. Ao final da execução dessa pesquisa, espera-se padronizar uma técnica para detecção rápida, confiável e sensível voltada à autenticação do salmão e detecção simultânea de possíveis contaminantes, desenvolvendo assim subsídios técnicos que contribuirão para a melhoria da saúde coletiva.

The world consumption of fish has undergone significant growth in recent years, due to population increase and the search for healthier food. Among the most consumed these products, are inspired by Japanese cuisine, such as sushi and sashimi. In these dishes, the fish of greater commercial and nutritional value is a salmonídeo belonging to salmon species Salmo salar, which at high added value has been the target of fraud by substitution. Another aggravating factor in relation to this type of food is its susceptibility to microbiological contamination, such as Salmonella spp. contamination, due to being highly manipulated foods and eaten raw. For this reason, the objective of this study was to standardize a multiplex PCR for simultaneous detection of S. salar and Salmonella spp. and apply this Protocol on sushi samples from experimental contamination by checking your efficiency and sensitivity. For Standardization, were purchased fish of the species s. salar, authenticated from the molecular PCR technique, which were used as positive control, and standard strain of Salmonella spp. To the standardization of the methodology proposed, tested various times and temperatures of denaturation, annealing and extension, until they take parameters common to both species, enabling simultaneous detection. Then, lots of sushi of type Makizushi were produced and contaminated with standard strain of s. Typhimurium from inoculation of 1, 2 and 3. Samples of experimental infection were collected on hours 0, 6, 12 and 18. Concomitantly, some dilutions were performed to detect the limit of concentration of the bacterium in produced sushi. The results show that it was possible to detect Salmonella spp. from 6h inoculation and that Salmo salar DNA was amplified at all hours. Therefore, it was concluded that the protocol presented here is efficient and can be a very reliable and fast tool in detecting fraud and contamination by Salmonella spp. in Japanese cuisine foods that use Salmon in its composition.

EXTRAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE COLÁGENO DA PELE DE PIRARUCU

O aproveitamento integral dos recursos pesqueiros tem produzido muitas pesquisas sobre os aspectos tecnológicos e nutricionais com fins comerciais de várias espécies incentivando o crescimento industrial. Responsáveis pelo aumento do ônus ambiental mas ricos em colágeno e outras biomoléculas, esses resíduos tornam-se subprodutos de maior valor comercial. Por tais motivos a presente pesquisa contemplou o aproveitamento desses resíduos para extrair colágeno, nesse caso, da pele do Arapaima gigas ou pirarucu que é uma espécie emblemática da Bacia Amazônica. Foi realizada a obtenção do colágeno solúvel em ácido (ASC) da pele do pirarucu a uma temperatura de 20°C utilizando uma solução de ácido acético 0,5M. O rendimento obtido foi de 27.8% e por meio do SDS PAGE (Eletroforese em gel de poliacrilamina - Dodecil sulfato de sódio) foi determinado que o colágeno obtido é do tipo I. Esse colágeno mostrou maior solubilidade relativa em pH 3 e diminuição da solubilidade a partir do 3% de concentração de NaCl. A temperatura de desnaturação do colágeno foi de 38,10°C e a sua estrutura molecular foi visualizada mediante a técnica do FTIR (espectrofotometria de infravermelho com transformada de Fourier). Os resultados obtidos mostraram que o colágeno obtido apresenta as características típicas do colágeno tipo I comercial, e o procedimento utilizado sugere ser uma alternativa interessante para a extração do colágeno da pele do pirarucu, devido que esse colágeno estaria destinado para diferentes aplicações em níveis industriais mostrando que o aproveitamento integral e sustentável dos recursos pesqueiros, nesse caso do pirarucu, outorga à sociedade uma alternativa para diminuir o ônus ambiental gerando novos produtos a partir de subprodutos.

The full utilization of the fishing resources has produced many research on the aspects technological and nutritional benefits for commercial purposes of various species, encouraging the industrial. Responsible for increased environmental burden but rich in collagen and other biomolecules, these residues become by-products of higher commercial value. For these reasons, this research has contemplated the use of these residues to extract collagen, in this case, the skin of the Arapaima gigas or pirarucu that is an emblematic species of the Amazon Basin. The obtaining the acid soluble collagen (ASC) from the skin of the pirarucu at a temperature of 20 ° C using a 0.5M solution of acetic acid. The yield obtained was 27.8% and SDS PAGE (Polyacrylamine Gel Electrophoresis - Sodium Dodecyl Sulfate) was determined to be the collagen obtained is of type I. This collagen showed higher relative solubility at pH 3 and decrease solubility from 3% NaCl concentration. The denaturation temperature of the collagen was 38.10 ° C and its molecular structure was visualized using the FTIR technique (Fourier Transform Infrared Spectrophotometry). The results obtained that the collagen obtained shows the typical characteristics of commercial type I collagen, and the procedure used is an interesting alternative for the extraction of collagen from the skin of the pirarucu, because this collagen would be destined for different applications at industrial levels showing that the integral and sustainable use of the fishery resources, in this case of the pirarucu, grants to society an alternative to reduce the environmental burden by generating new products from by-products.

Avaliação e correlações entre modificações no método Warner-Bratzler para a determinação da força de cisalhamento de diferentes cortes cárneos bovinos

Considerando a importância da maciez dentre os atributos de qualidade de carnes, a necessidade do estabelecimento de um método mais rápido e moderno, que forneça resultados mais precisos, com baixa variabilidade e que possa ser utilizado para a determinação da maciez instrumental de diferentes cortes cárneos é uma demanda evidente. Sendo assim, o objetivo desta tese foi estudar a maciez instrumental de diferentes cortes cárneos bovinos, testando diferentes temperaturas finais de cocção e tempos de resfriamento no preparo das amostras e utilizando diferentes equipamentos, bem como estabelecer correlações entre a maciez instrumental e diversos outros atributos de qualidade de carnes. Foram avaliados os efeitos de três temperaturas finais de cocção (65, 70 e 75 °C) e dois tempos de resfriamento das amostras (4 e 24 horas) e ainda a utilização de três diferentes equipamentos (Texturômetro TAXT2icon equipado com lâminas de 1 e 3 mm de espessura e Warner-Bratzler clássico) na determinação da força de cisalhamento de cinco cortes cárneos bovinos. Os cortes foram caracterizados quanto aos atributos pH, índice de fragmentação miofibrilar, temperaturas de desnaturação das proteínas Actina e Miosina, cor instrumental, teor de colágeno, comprimento de sarcômeros, composição química e perda de peso por cocção. Foram determinadas as correlações lineares entre estes atributos, entre estes atributos e as forças de cisalhamento e entre as forças de cisalhamento. Foram estudados ainda, os comportamentos mecânico e estrutural dos cortes durante a realização dos testes de determinação da força de cisalhamento por meio da microestrutura das superfícies cisalhadas e das curvas mecânicas geradas durante os testes no texturômetro. Não houve efeito significativo do tempo de resfriamento nos resultados dos testes de determinação da força de cisalhamento. O Texturômetro com lâmina de 1 mm produziu valores mais baixos, enquanto que o Warner-Bratzler provocou os maiores valores. O Texturômetro com lâmina de 3 mm provocou menor precisão nos resultados. Em quase todos os casos, a temperatura de 65 °C produziu os menores valores de força de cisalhamento, enquanto que a utilização de 75 °C provocou os maiores valores. Foram observadas baixas correlações entre os atributos de qualidade avaliados e a força de cisalhamento dos cortes em estudo. Foram determinadas quatro equações de predição de força de cisalhamento de uma técnica com base nos resultados de outra. Os equipamentos e temperaturas finais de cocção utilizados ocasionaram diferentes comportamentos mecânicos e estruturais nos cortes cárneos avaliados. O Texturômetro com lâmina de 1 mm produziu menor variação nos resultados mas ao mesmo tempo, na maioria dos casos, provocou corte ao invés de cisalhamento nas amostras. Foi possível concluir que a utilização de diferentes equipamentos e pequenas variações na temperatura final de cocção das amostras pode ser uma grande fonte de variação nos resultados de testes de determinação da força de cisalhamento de carnes e que comparações entre resultados devem ser feitas com cautela observando estes detalhes.

Considering the importance of tenderness among the meat quality attributes, the need to establish a faster and more modern method that provides more accurate results with low variability and can be used to determine the instrumental tenderness of different meat cuts is an obvious demand. Thus, the objective of this thesis was to study the instrumental tenderness of different beef cuts, by testing different cooking endpoint temperatures and cooling times in the sample preparation step and using different equipment, as well as to establish correlations among the instrumental tenderness and several other meat quality attributes. The effects of using three cooking endpoint temperatures (65, 70 and 75 °C) and two cooling times of the samples (4 and 24 hours) and the use of three different equipment (TAXT2icon Texturometer equipped with shear blades of 1 and 3 mm thick, and a classical Warner-Bratzler) in the shear force determination of five beef cuts were evaluated. The cuts were evaluated for pH, myofibrillar fragmentation index, denaturation temperatures of Actin and Myosin proteins, instrumental color, collagen content, sarcomere length, chemical composition and cooking loss. Linear correlations between these attributes, between these attributes and shear force results and between shear force results were determined. The mechanical and structural behaviors of the cuts during the shear force tests were studied through the microstructure of the sheared surfaces and the mechanical curves generated during the tests in the texturometer. There was no significant effect of the cooling time on shear force results. The texturometer equipped with a 1 mm blade produced lower values, while Warner-Bratzler produced the higher ones. The texturometer equipped with a 3 mm blade resulted in decreased precision in the results. In most cases, the temperature of 65 °C produced the lowest shear force values, whereas the use of 75 °C resulted in the highest ones. Low correlations among the quality attributes evaluated and the shear force results of the cuts under study were observed. Four prediction equations of shear force were determined from one technique based on the results of another. The equipment and cooking endpoint temperatures used resulted in different mechanical and structural behaviors in the beef cuts evaluated. The texturometer equipped with a 1 mm blade produced less variation in the results, but at the same time, in most cases, it caused cutting rather than shearing of the samples. It is possible to conclude that the use of different equipment and small variations in the cooking endpoint temperature of the samples may be a great source of variation in the meat shear force results and that comparisons between results should be made with caution and observing these details.