Crescimentos de fungos produtores de micotoxinas em grãos de amendoim / Growths of mycotoxin-producing fungi on peanut grains

O amendoim (Arachis hypogaea L.) é uma oleaginosa com alto valor energético e nutricional, servindo de substrato ideal para o crescimento de fungos durante o processo de colheita, estocagem e processamento dos grãos. As micotoxinas são originadas a partir do metabolismo secundário de fungos toxigênicos; quando essas toxinas são ingeridas, podem causar efeitos tóxicos em humanos e animais. O objetivo deste trabalho foi avaliar a contaminação fúngica em amostras de grãos de amendoim disponíveis para o consumo humano. Foram analisadas amostras de amendoim torrado na vagem, amendoim cru (in natura) e amendoim torrado sem a vagem. A metodologia utilizada foi o método de plaqueamento direto em placas de Petri, contendo o meio cultura Sabouraud Dextrose Ágar (SDA). Porções de 40 grãos de amendoim de cada amostra foram utilizadas para o teste. Os resultados obtidos foram expressos em quantidade de grãos que apresentaram crescimento fúngico em porcentagem. Para identificação ao nível do género das colônias fúngicas isoladas, foi efetuada uma observação microscópica das suas estruturas morfológicas. Em todas as amostras estudadas ocorreram o crescimento de fungos potencialmente micotoxigênicos. Os grãos de amendoim cru (in natura) sem a vagem foram os mais contaminados por fungos como Aspergillus sp. (20%), Alternaria sp. (13,1%), Penicillium sp. (13,3%) e Fusarium sp. (23,3%) quando comparados com os grãos torrados. A presença desses fungos nas amostras de amendoim indica a possibilidade de desenvolvimento de micotoxinas potencialmente tóxicas para o humano. O processo de torrefação inibe o crescimento de determinadas espécies de fungos micotoxigênicos.(AU)

Peanut is an oilseed with high energy and nutritional value, serving as an ideal substrate for the growth of fungi during the process of harvesting, storing and processing the grains. Mycotoxins originate from the secondary metabolism of toxigenic fungi; when ingested, they can cause toxic effects in humans and animals. The objective of this work was to evaluate the fungal contamination in samples of peanut grains available for human consumption. The methodology used was the direct plating method in Petri dishes containing Sabouraud Dextrose Agar (SDA) culture. Portions of 40 peanut kernels from the samples were immersed in a 0.4% sodium hypochlorite solution for two minutes for surface disinfection, then rinsed once in distilled water. Incubation was carried out at room temperature for 7 days and the results were expressed as the amount of grains that showed fungal growth in percentage. To identify the colonies of isolated filamentous fungi at the genus level, a microscopic observation of their morphological structures was carried out, which consists of removing a sample from the edge of the colony and placing it in a drop of cotton blue (1g/L in lactic acid 88%), between slide and coverslip. Potentially toxigenic fungi were identified: Aspergillus sp., Rhizopus sp., Alternaria sp., Penicillium sp. and Fusarium sp. The presence of these fungi in peanut samples indicates the possibility of development of mycotoxins potentially toxic to humans. The roasting process may not be sufficient to destroy some mycotoxins.(AU)

Ocorrência de genes codificadores de enterotoxinas estafilocócicas em amostras de leite de vacas / Occurrence of genes encoding staphylococcal enterotoxins isolated from cow's milk samples

Objetivou-se com este trabalho identificar a ocorrência de genes codificadores de enterotoxinas estafilocócicas (sea, seb, sec e seg) e do gene da toxina 1 responsável pela síndrome do choque tóxico (tst) em isolados de Staphylococcus aureus procedentes de casos de mastite bovina, no estado de Pernambuco, Brasil. Foram analisados 93 isolados e observou-se a presença de genes toxigênicos em 20 (21,6%) deles, dos quais 11 (55,0%) foram positivos para o gene tst, sete (35,0%) para o gene sec e dois (10,0%) para o gene seg. Dentre os 20 isolados que amplificaram na PCR para presença dos genes sec, seg e tst, 16 (80,0%) foram positivos apenas para um gene e quatro (20,0%) foram positivos para dois genes (sec e tst). Das 17 propriedades de onde as amostras tiveram origem, sete (41,2%) apresentaram amostras positivas para pelo menos um dos genes sec, seg e tst. Este é primeiro registro de ocorrência dos genes codificadores das enterotoxinas SEC e TST-1 em amostras de leite de vacas com mastite no estado de Pernambuco, Brasil.

The objective of this study was to identify the occurrence of genes expressing staphylococcal enterotoxin (sea, seb, sec, and seg) and the toxin gene 1 of toxic shock syndrome (tst) in Staphylococcus aureus coming from cases of bovine mastitis in the state of Pernambuco, Brazil. We analyzed 93 isolates and we observed the presence of toxigenic gene in 20 (21.6%) samples, of which 11 (55.0%) were positive for tst gene, seven (35.0%) for the sec gene, and two (10.0%) for the seg gene. Of the 20 isolates amplified in PCR for the presence of the sec gene, seg and tst, 16 (80.0%) were positive for only one gene and four (20.0%) were positive for two genes (sec and tst). Of the 17 properties from which the samples originated, seven (41.2%) had positive samples for at least one of the genes sec, seg, and tst. This is the first record of the occurrence of the genes encoding the enterotoxin SEC and TST-1 in milk samples from cows with mastitis in the state of Pernambuco, Brazil.

Ocorrência de genes codificadores de enterotoxinas estafilocócicas em amostras de leite de vacas / Occurrence of genes encoding staphylococcal enterotoxins isolated from cow's milk samples

Objetivou-se com este trabalho identificar a ocorrência de genes codificadores de enterotoxinas estafilocócicas (sea, seb, sec e seg) e do gene da toxina 1 responsável pela síndrome do choque tóxico (tst) em isolados de Staphylococcus aureus procedentes de casos de mastite bovina, no estado de Pernambuco, Brasil. Foram analisados 93 isolados e observou-se a presença de genes toxigênicos em 20 (21,6%) deles, dos quais 11 (55,0%) foram positivos para o gene tst, sete (35,0%) para o gene sec e dois (10,0%) para o gene seg. Dentre os 20 isolados que amplificaram na PCR para presença dos genes sec, seg e tst, 16 (80,0%) foram positivos apenas para um gene e quatro (20,0%) foram positivos para dois genes (sec e tst). Das 17 propriedades de onde as amostras tiveram origem, sete (41,2%) apresentaram amostras positivas para pelo menos um dos genes sec, seg e tst. Este é primeiro registro de ocorrência dos genes codificadores das enterotoxinas SEC e TST-1 em amostras de leite de vacas com mastite no estado de Pernambuco, Brasil.(AU)

The objective of this study was to identify the occurrence of genes expressing staphylococcal enterotoxin (sea, seb, sec, and seg) and the toxin gene 1 of toxic shock syndrome (tst) in Staphylococcus aureus coming from cases of bovine mastitis in the state of Pernambuco, Brazil. We analyzed 93 isolates and we observed the presence of toxigenic gene in 20 (21.6%) samples, of which 11 (55.0%) were positive for tst gene, seven (35.0%) for the sec gene, and two (10.0%) for the seg gene. Of the 20 isolates amplified in PCR for the presence of the sec gene, seg and tst, 16 (80.0%) were positive for only one gene and four (20.0%) were positive for two genes (sec and tst). Of the 17 properties from which the samples originated, seven (41.2%) had positive samples for at least one of the genes sec, seg, and tst. This is the first record of the occurrence of the genes encoding the enterotoxin SEC and TST-1 in milk samples from cows with mastitis in the state of Pernambuco, Brazil.(AU)

Occurrence of ochratoxin A in grapes, juices and wines and risk assessment related to this mycotoxin exposure

Ochratoxin A (OTA) is a mycotoxin with nephrotoxic, genotoxic, teratogenic and carcinogenic properties. The presence of this toxin in wines and juices occurs due to the development of toxigenic fungi in grapes. Studies have shown the presence of this toxic secondary metabolite in these beverages may results in economic losses to the winery as well as health problems for consumers. In Europe, several studies have been done in order to map the areas where the development of ochratoxigenic fungi is more favorable. However, in Brazil these studies are still incipient. The Joint Expert Committee on Food Additives of the World Health Organization (JECFA) established the safe tolerable intake of 112ng OTA per kg of body weight per week. To verify whether the population is exposed to OTA levels that pose a risk to health is necessary to compare the parameter of safe ingestion defined by JECFA with the levels of exposure to this toxin. Periodic monitoring of the OTA levels in food and beverage has been justified by some reasons including: (i) the toxic effects of this toxin, (ii) the recent publication of the Brazilian legislation establishing maximum limit for OTA, (iii) the introduction of grape juice in school meals and (iv) the recommendation of regular wine intake because of their functional properties.

A ocratoxina A (OTA) é uma micotoxina que possui propriedades nefrotóxicas, genotóxicas, teratogênicas e carcinogênicas. A presença dessa toxina em vinhos e sucos ocorre devido à contaminação das uvas por fungos toxigênicos. Estudos têm mostrado a presença desse metabólito secundário tóxico nestas bebidas, o que pode significar perdas econômicas ao setor vitícola, bem como problemas à saúde dos consumidores. Na Europa, vários estudos têm sido realizados com o objetivo de mapear as áreas em que o desenvolvimento de fungos ocratoxigênicos é mais favorável. Entretanto, no Brasil estes estudos ainda são incipientes. O Comitê de Especialistas em Aditivos Alimentares da Organização Mundial da Saúde (JECFA) estabeleceu a ingestão tolerável segura de 112ng de OTA por quilo de peso corpóreo por semana. Para verificar se população está exposta a OTA em níveis que representam risco para à saúde, é necessário comparar o parâmetro de ingestão segura, definido pelo JECFA, com os níveis de exposição a esta toxina. O monitoramento periódico dos níveis de OTA em alimentos e bebidas é justificado por alguns motivos que incluem: (i) os efeitos tóxicos dessa toxina, (ii) a publicação recente da legislação brasileira que estabelece limite máximo para OTA, (iii) a introdução do suco de uva na merenda escolar; e (iv) a recomendação da ingestão regular de vinho/suco de uva devido as suas propriedades funcionais.

Occurrence of ochratoxin A in grapes, juices and wines and risk assessment related to this mycotoxin exposure

Ochratoxin A (OTA) is a mycotoxin with nephrotoxic, genotoxic, teratogenic and carcinogenic properties. The presence of this toxin in wines and juices occurs due to the development of toxigenic fungi in grapes. Studies have shown the presence of this toxic secondary metabolite in these beverages may results in economic losses to the winery as well as health problems for consumers. In Europe, several studies have been done in order to map the areas where the development of ochratoxigenic fungi is more favorable. However, in Brazil these studies are still incipient. The Joint Expert Committee on Food Additives of the World Health Organization (JECFA) established the safe tolerable intake of 112ng OTA per kg of body weight per week. To verify whether the population is exposed to OTA levels that pose a risk to health is necessary to compare the parameter of safe ingestion defined by JECFA with the levels of exposure to this toxin. Periodic monitoring of the OTA levels in food and beverage has been justified by some reasons including: (i) the toxic effects of this toxin, (ii) the recent publication of the Brazilian legislation establishing maximum limit for OTA, (iii) the introduction of grape juice in school meals and (iv) the recommendation of regular wine intake because of their functional properties.

A ocratoxina A (OTA) é uma micotoxina que possui propriedades nefrotóxicas, genotóxicas, teratogênicas e carcinogênicas. A presença dessa toxina em vinhos e sucos ocorre devido à contaminação das uvas por fungos toxigênicos. Estudos têm mostrado a presença desse metabólito secundário tóxico nestas bebidas, o que pode significar perdas econômicas ao setor vitícola, bem como problemas à saúde dos consumidores. Na Europa, vários estudos têm sido realizados com o objetivo de mapear as áreas em que o desenvolvimento de fungos ocratoxigênicos é mais favorável. Entretanto, no Brasil estes estudos ainda são incipientes. O Comitê de Especialistas em Aditivos Alimentares da Organização Mundial da Saúde (JECFA) estabeleceu a ingestão tolerável segura de 112ng de OTA por quilo de peso corpóreo por semana. Para verificar se população está exposta a OTA em níveis que representam risco para à saúde, é necessário comparar o parâmetro de ingestão segura, definido pelo JECFA, com os níveis de exposição a esta toxina. O monitoramento periódico dos níveis de OTA em alimentos e bebidas é justificado por alguns motivos que incluem: (i) os efeitos tóxicos dessa toxina, (ii) a publicação recente da legislação brasileira que estabelece limite máximo para OTA, (iii) a introdução do suco de uva na merenda escolar; e (iv) a recomendação da ingestão regular de vinho/suco de uva devido as suas propriedades funcionais.

Occurrence of ochratoxin A in grapes, juices and wines and risk assessment related to this mycotoxin exposure / Ocorrência de ocratoxina A em uvas, sucos e vinhos e avaliação de risco relacionada à exposição a essa micotoxina

Ochratoxin A (OTA) is a mycotoxin with nephrotoxic, genotoxic, teratogenic and carcinogenic properties. The presence of this toxin in wines and juices occurs due to the development of toxigenic fungi in grapes. Studies have shown the presence of this toxic secondary metabolite in these beverages may results in economic losses to the winery as well as health problems for consumers. In Europe, several studies have been done in order to map the areas where the development of ochratoxigenic fungi is more favorable. However, in Brazil these studies are still incipient. The Joint Expert Committee on Food Additives of the World Health Organization (JECFA) established the safe tolerable intake of 112ng OTA per kg of body weight per week. To verify whether the population is exposed to OTA levels that pose a risk to health is necessary to compare the parameter of safe ingestion defined by JECFA with the levels of exposure to this toxin. Periodic monitoring of the OTA levels in food and beverage has been justified by some reasons including: (i) the toxic effects of this toxin, (ii) the recent publication of the Brazilian legislation establishing maximum limit for OTA, (iii) the introduction of grape juice in school meals and (iv) the recommendation of regular wine intake because of their functional properties.(AU)

A ocratoxina A (OTA) é uma micotoxina que possui propriedades nefrotóxicas, genotóxicas, teratogênicas e carcinogênicas. A presença dessa toxina em vinhos e sucos ocorre devido à contaminação das uvas por fungos toxigênicos. Estudos têm mostrado a presença desse metabólito secundário tóxico nestas bebidas, o que pode significar perdas econômicas ao setor vitícola, bem como problemas à saúde dos consumidores. Na Europa, vários estudos têm sido realizados com o objetivo de mapear as áreas em que o desenvolvimento de fungos ocratoxigênicos é mais favorável. Entretanto, no Brasil estes estudos ainda são incipientes. O Comitê de Especialistas em Aditivos Alimentares da Organização Mundial da Saúde (JECFA) estabeleceu a ingestão tolerável segura de 112ng de OTA por quilo de peso corpóreo por semana. Para verificar se população está exposta a OTA em níveis que representam risco para à saúde, é necessário comparar o parâmetro de ingestão segura, definido pelo JECFA, com os níveis de exposição a esta toxina. O monitoramento periódico dos níveis de OTA em alimentos e bebidas é justificado por alguns motivos que incluem: (i) os efeitos tóxicos dessa toxina, (ii) a publicação recente da legislação brasileira que estabelece limite máximo para OTA, (iii) a introdução do suco de uva na merenda escolar; e (iv) a recomendação da ingestão regular de vinho/suco de uva devido as suas propriedades.(AU)

Toxigenic mycobiota and mycotoxins in shrimp feed / Micobiota toxígena e micotoxinas em ração de camarão

The objective of this study was to identify the toxigenic mycobiota and the occurrence of aflatoxins in shrimp feed products intended for shrimp cultivated in the coastal area of the state of Piauí, Brazil, in three farms ("A", "B" and "C"). The toxigenic capacity of the fungal species isolated was tested for aflatoxins (AF) and ochratoxin A production. The fungal counts of shrimp feed were similar for the "A" and "B" farms at all cultivation phases, collection sites, in closed and opened packages (1.33 to 2.66CFU g-1 log10 -1). The lowest fungal counts were found in feed from "C" farm (0.65CFU g-1 log10 -1) from closed packages. Thirty-four strains of Aspergillus were detected with a greater prevalence of A. flavus. Two strains produced B1, B2, G1 and G2 aflatoxins at concentrations from 0.39 to 0.42ng g-1; 0.18 to 0.27ng g-1; 1.78ng g-1 and 0.09ng g-1 respectively and were classified as atypical A. flavus. Two strains of A. niger aggregate were OTA producers. Fifteen samples (13.88%) presented AFB1 contamination at levels ranging from 0.25ng to 360ng g-1. This study demonstrates the presence of toxigenic fungi in shrimp feed used at different phases of cultivation and farms. Atypical strains of A. flavus were isolated which produced AF B1, B2, G1 and G2 in shrimp feeds. Only AFB1 was detected in the analyzed feed.(AU)

O objetivo deste estudo foi identificar a micobiota toxigênica e a incidência de aflatoxinas em rações comerciais para camarão cultivado no litoral do Estado do Piauí, Brasil, em três fazendas ("A", "B" e "C"). Foi realizada a capacidade toxigênica das espécies de fungos isolados e a produção de aflatoxinas (AF) e ocratoxina A (OTA). As contagens fúngicas da ração foram semelhantes nas fazendas "A" e "B" e em todas as fases de cultivo, locais de coleta e de embalagens fechadas e abertas (1,33-2,66UFC g-1 log10 -1). As mais baixas contagens de fungos foram encontradas nas rações de embalagens fechadas da fazenda "C" (0,65UFC g-1 log10 -1). Foram isoladas trinta e quatro cepas de Aspergillus com maior prevalência de A. flavus e duas linhagens eram produtoras de aflatoxinas B1, B2, G1 e G2 em concentrações 0,39-0,42ng g-1; 0,18-0,27ng g-1; 1,78ng g-1, e 0,09ng g-1, respectivamente, e foi classificado como A. flavus atípico, sendo necessária posteriormente a classificação filogenética desta cepa. Duas cepas de A. niger agregados eram produtoras de OTA. Quinze amostras de ração (13,88%) apresentaram contaminação AFB1 em níveis que variam de 0,25ng a 360ng g-1. Este estudo demonstra a presença de fungos toxigênicos em rações de camarão nas fazendas analisadas e nas diferentes fases de cultivo. Foram isoladas, em rações de camarões, cepas atípicas de A. flavus, produzindo AF B1, B2, G1 e G2. Apenas AFB1 foi detectada na ração analisada.(AU)

Identification of toxigenic Aspergillus species from diet dairy goat using a polyphasic approach / Identificação de espécies toxigênicas de Aspergillus isoladas da dieta de cabras leiteiras utilizando uma abordagem polifásica

Some species of filamentous fungi that infest agricultural commodities are able to produce mycotoxins, contaminating feed and animal products. The aim of this research was to identify the mycoflora present in the feed and forage for dairy goat and to isolate and characterize the Aspergillus flavusand A. parasiticusstrains based on a morphological and molecular characterization and mycotoxigenic ability. The goat dairy diets were collected monthly from 11 goat milk farms, totaling 129 and 106 samples of concentrate and forage, respectively. For the isolation of the mycobiota the surface plating method was used. Aspergillus, Penicillium,and Fusariumwere the main fungi producing mycotoxins isolated. The morphological and molecular characterization and mycotoxigenic ability were used for A. flavusand A. parasiticusidentification. The Aspergillusspp. from feed 39% produced aflatoxins B1 and B2, 17% produced cyclopiazonic acid (CPA), 18% produced both toxins, and 42% had no toxigenic ability. Only 2.0% of the strains produced aflatoxins B1, B2, G1, and G2, but no CPA. The strains from forage were producers of aflatoxins B1 and B2 (37%), CPA (14%), 14% of both mycotoxins, whereas 49% have shown no toxigenic ability. The aflD and aflR genes were used by PCR and PCR-RFLP, respectively. The presence of toxigenic species in samples of feed for lactating goats indicates a potential risk of contamination of dairy products, if they are exposed to environmental conditions favorable to fungal growth and mycotoxin production.(AU)

Algumas espécies de fungos filamentosos que infestam os produtos agrícolas e ração são capazes de produzir micotoxinas. O objetivo deste trabalho foi identificar a micoflora presente nos concentrados e volumosos utilizados na dieta de cabras leiteiras e isolar as espécies Aspergillus flavuse A. parasiticus, com base em uma caracterização morfológica e molecular e capacidade micotoxigênica. Os alimentos foram coletados mensalmente em 11 fazendas produtoras de leite de cabra, totalizando 129 e 106 amostras de concentrado e volumoso, respectivamente. Para o isolamento da micobiota, foi utilizado o método de plaqueamento de superfície.Aspergillus, Penicilliume Fusariumforam os principais gêneros de fungos produtores de micotoxinas isolados das amostras. A caracterização morfológica e molecular e capacidade micotoxigênica foram utilizadas para identificação de A. flavus e A. parasiticus.Das cepas Aspergillusspp isoladas do concentrado, 39% produziram aflatoxinas B1 e B2, 17% produziram ácido ciclopiazônico (ACP), 18% produziram ambas as toxinas e 42% não tinham capacidade toxigênica. Apenas 2,0% das cepas produziram aflatoxinas B1, B2, G1 e G2. As cepas de Aspergillusspp. isoladas do volumoso foram produtores de aflatoxinas B1 e B2 (37%), ACP (14%), sendo que 14% produziram ambas toxinas e 49% não foram produtoras. Os genes aflD e aflR foram utilizados para a PCR e a PCR-RFLP, respectivamente. A presença de espécies toxigênicas em amostras de alimentos destinados a caprinos em lactação indica um risco potencial de contaminação dos produtos lácteos por aflatoxinas e ACP, caso estes sejam expostos a condições ambientais favoráveis ao crescimento de fungos e produção de micotoxinas.(AU)

Analysis of mycobiota linked to insects isolated from pet food collected in pet shops / Análise da micobiota associada à entomofauna em rações a granel para animais domésticos

Insects invade stored foods such as corn, nuts and dried fruits that are ingredients of pet food. Toxigenic fungi (Aspergillus, Penicillium and Fusarium) are also contaminants of these substrates. The insects are mechanical vectors and the infestation increases the humidity of dried food, thus promoting the fungal growth and the production of mycotoxins. The objective of this study was to analyze the mycobiota associated with insect infestation found in pet foods. Twenty samples were plated on potato agar incubated at 25º C during 7 days, for the isolation of fungi from pet food and from insects isolated from each ingredient. The insects were identified by using a dichotomous key. All samples showed fungal presence, and Sitophilus zeamais was the predominant insect with the highest frequency in the collected samples, indicating it as a vector of many fungal genera. Pet foodscomposed by a mixture of seeds and grains are subject to microbial contamination, and the insects are important mechanical vectors of spoilage and toxigenic fungi, endangering animal health.

Insetos podem infestar sementes e grãos que integram as rações destinadas à alimentação de pequenos roedores e aves domésticas como amendoim, girassol, trigo, milho, aveia e outros. Fungos toxigênicos (Aspergillus, Penicillium e Fusarium) também são contaminantes destes substratos e podem ser carreados por insetos. A deterioração da massa de sementes e grãos pela atividade dos insetos associado à presença de umidade, pode ser um facilitador para o crescimento fúngico e produção de micotoxinas. O objetivo do estudo foi o de analisar a micobiota associada às sementes, grãos e insetos em ração mista para animais domésticos. Vinte amostras foram plaqueadas em ágar-batata-dextrose incubadas a 25º C durante 7 dias para o isolamento fúngico de ração e em insetos isolados de cada componente da ração. Todas as amostras apresentaram presença de fungos e Sitophilus zeamais, inseto predominante e com maior frequencia nas amostras coletadas, demonstrando ser um vetor de vários gêneros fúngicos. Rações animais compostas de misturas de sementes e grãos estão sujeitas à contaminação microbiológica, sendo os insetos importantes vetores mecânicos de fungos deteriorantes e toxigênicos, comprometendo a saúde animal.

Analysis of mycobiota linked to insects isolated from pet food collected in pet shops / Análise da micobiota associada à entomofauna em rações a granel para animais domésticos

Insects invade stored foods such as corn, nuts and dried fruits that are ingredients of pet food. Toxigenic fungi (Aspergillus, Penicillium and Fusarium) are also contaminants of these substrates. The insects are mechanical vectors and the infestation increases the humidity of dried food, thus promoting the fungal growth and the production of mycotoxins. The objective of this study was to analyze the mycobiota associated with insect infestation found in pet foods. Twenty samples were plated on potato agar incubated at 25º C during 7 days, for the isolation of fungi from pet food and from insects isolated from each ingredient. The insects were identified by using a dichotomous key. All samples showed fungal presence, and Sitophilus zeamais was the predominant insect with the highest frequency in the collected samples, indicating it as a vector of many fungal genera. Pet foodscomposed by a mixture of seeds and grains are subject to microbial contamination, and the insects are important mechanical vectors of spoilage and toxigenic fungi, endangering animal health.(AU)

Insetos podem infestar sementes e grãos que integram as rações destinadas à alimentação de pequenos roedores e aves domésticas como amendoim, girassol, trigo, milho, aveia e outros. Fungos toxigênicos (Aspergillus, Penicillium e Fusarium) também são contaminantes destes substratos e podem ser carreados por insetos. A deterioração da massa de sementes e grãos pela atividade dos insetos associado à presença de umidade, pode ser um facilitador para o crescimento fúngico e produção de micotoxinas. O objetivo do estudo foi o de analisar a micobiota associada às sementes, grãos e insetos em ração mista para animais domésticos. Vinte amostras foram plaqueadas em ágar-batata-dextrose incubadas a 25º C durante 7 dias para o isolamento fúngico de ração e em insetos isolados de cada componente da ração. Todas as amostras apresentaram presença de fungos e Sitophilus zeamais, inseto predominante e com maior frequencia nas amostras coletadas, demonstrando ser um vetor de vários gêneros fúngicos. Rações animais compostas de misturas de sementes e grãos estão sujeitas à contaminação microbiológica, sendo os insetos importantes vetores mecânicos de fungos deteriorantes e toxigênicos, comprometendo a saúde animal.(AU)

Avaliação de extratos de plantas quanto à atividade antimicrobiana e à detoxificação de micotoxinas

A exposição humana a microrganismos patogênicos e suas toxinas em alimentos constitui um grave problema de saúde pública. O uso indiscriminado de antimicrobianos convencionais promove o aumento da resistência dos microrganismos às principais moléculas existentes no mercado. Além disso, as limitações do uso de substâncias químicas em matérias primas alimentares têm estimulado pesquisas para o desenvolvimento de metodologias eco-amigáveis para evitar a multiplicação de fungos e/ou eliminar suas toxinas. O Staphylococcus aureus é uma das principais bactérias patogênicas que apresenta taxas elevadas de resistência aos antimicrobianos, e por este motivo tem sido objeto de estudo de pesquisas que tentam identificar novos compostos bioativos para o combate de infecções. O Aspergillus parasiticus é um dos principais fungos produtores de aflatoxinas, substâncias carcinogênicas que contaminam diversos tipos de cereais antes e após o processamento. Estudos recentes demonstraram que extratos de plantas possuem atividade antimicrobiana e antifúngica, além de potencial para degradação de micotoxinas. Neste contexto, o presente estudo teve por objetivos avaliar a atividade antimicrobiana in vitro de extratos brutos e liofilizados de folhas de maracujá, araçá, alecrim e orégano sobre células planctônicas de S. aureus e A. parasiticus, bem como verificar a capacidade dos referidos extratos em degradar in vitro a aflatoxina B1 (AFB1), ocratoxina A (OTA) e zearalenona (ZEA). Os efeitos antibacterianos e antifúngicos dos extratos foram avaliados através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida / fungicida mínima (CBM/CFM). Os ensaios de degradação da micotoxinas foram realizados em diferentes tempos de incubação (12-48 h) a 37º C, utilizando-se cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) para determinação das concentrações das micotoxinas. O maracujá não demonstrou atividade antimicrobiana tanto para S. aureus quanto para A. parasiticus. Dos quatro extratos estudados, o araçá demonstrou o maior efeito antibacteriano, cujos valores de CIM para extratos bruto e liofilizado foram 0.39 mg/mL e 0.45 mg/mL, respectivamente. Os menores valores de CIM para A. parasiticus foram obtidos com o orégano liofilizado (8.33 mg/mL) e o araçá bruto (3.215 mg/mL). Contudo, não foi possível identificar valores de CFM para o fungo analisado. Não houve efeito de degradação de OTA e ZEA por nenhum dos extratos avaliados. Todos os extratos reduziram a concentração de AFB1 após 48 h de incubação. A maior porcentagem (60.3%) de redução de AFB1 foi obtida com o extrato de alecrim após 48 h de incubação. A atividade antimicrobiana demonstrada pelos extratos das plantas avaliadas indica um potencial para sua aplicação no combate a bactérias patogênicas e fungos toxigênicos. Este é o primeiro estudo realizado com extratos dessas quatro espécies de plantas que evidenciou a capacidade de redução in vitro de AFB1.

Human exposure to pathogenic microorganisms and their toxins in food is a serious public health problem. The indiscriminate use of conventional antimicrobials increases the resistance of microorganisms to the main molecules available in the market. In addition, limitations on the use of chemical substances in food raw materials have stimulated researches for the development of eco-friendly methodologies to avoid the multiplication of fungi and/or eliminate their toxins. Staphylococcus aureus is one of the major pathogenic bacteria with high rates of antimicrobial resistance, and for this reason it has been the subject of research studies aiming to identify new bioactive compounds to combat infections. Aspergillus parasiticus is one of the main aflatoxin-producing fungi, which are carcinogenic substances that contaminate many types of cereals before and after processing. Recent studies have demonstrated that plant extracts have antimicrobial and antifungal activity, as well as potential for degradation of mycotoxins. In this context, the objective of the present study was to evaluate the in vitro antimicrobial effects of crude and lyophilized extracts of leaves from sweet passion fruit, araçá, rosemary and oregano on planktonic cells of S. aureus and A. parasiticus. The in vitro degradation of aflatoxin B1 (AFB1), ochratoxin A (OTA) and zearalenone (ZEN) by the crude extracts was also investigated. The antimicrobial and antifungal effects were evaluated by determining the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal / fungicidal concentration (MBC / MFC). Mycotoxin detoxification assays were conducted at different incubation times (12-48h) at 37 °C. The concentrations of mycotoxins were determined by high performance liquid chromatography (HPLC). Sweet passion fruit had no antimicrobial activity on S. aureus or A. parasiticus. Out of the four extracts evaluated, araçá showed the highest antimicrobial effect with MIC of 0.39 mg/mL and 0.45 mg/mL for crude and lyophilized extracts, respectively. The lowest MIC values for A. parasiticus were obtained with lyophilized oregano (8.33 mg/mL) and crude araçá (3.215 mg/mL). However, no MFC values were obtained for the analyzed fungi. Although OTA e ZEN were not degraded by any extract evaluated, all extracts reduced the concentration of AFB1 after 48 h of incubation. The highest percentage of AFB1 reduction (60.3%) was obtained with rosemary extract after 48h of incubation. The antimicrobial activity demonstrated by extracts of the evaluated plants indicates a potential for application against pathogenic bacteria and toxigenic fungi. This is the first study carried out with extracts of these four plants species that demonstrated the in vitro ability for AFB1 reduction.

EXPRESSÃO HETERÓLOGA E AVALIAÇÃO DO POTENCIAL INIBITÓRIO DE PEPTÍDEOS ANFIPÁTICOS SOBRE MICRORGANISMOS DE IMPORTÂNCIA ALIMENTAR

A demanda por alternativas naturais às substâncias antimicrobianas tradicionalmente utilizadas na indústria de alimentos vem aumentando. A aplicação de peptídeos antimicrobianos se mostra como uma abordagem eficiente para este fim, devido, sobretudo ao forte caráter anfipático dessas moléculas, responsável por interações com membranas das células que podem levar a inibição do crescimento e de funções e à morte de microrganismos. A pesquisa de peptídeos pode ser realizada in silico em sequências proteicas, sendo o potencial antimicrobiano da substância posteriormente verificado através de ensaios experimentais. Estudos in silico com peptídeos de cadeia curta têm obtido resultados promissores quanto à capacidade antimicrobiana. Contudo, os métodos de obtenção desses peptídeos que se baseiam atualmente em hidrólise química ou enzimática de matrizes proteicas não são economicamente viáveis em escala industrial. Como matriz de obtenção desses peptídeos, destacam-se o soro de leite e a biomassa vegetal, por seu baixo custo e pela geração de extratos com alta atividade antimicrobiana. O objetivo do presente estudo foi estabelecer um sistema bacteriano de expressão heteróloga de peptídeos derivados da enzima vegetal ribulose-1,5-bisfosfato carboxilase oxigenase (RuBisCO), visando viabilizar um método viável para aplicação industrial. Paralelamente, a atividade antimicrobiana de peptídeos anfipáticos derivados de proteínas do soro de leite foi avaliada frente a importantes microrganismos patogênicos e toxigênicos de interesse da indústria de alimentos. Para isso, plasmídeos contendo o inserto codificante da sequência peptídica GSIKAFKEATKVDKVVVLWTALVPR derivada da RuBisCO foram propagados. Esse material foi extraído e transformado em células de alto rendimento Escherichia coli Rosetta(DE3)pLysS, e a produção dos peptídeos foi comprovada, confirmando o estabelecimento de um sistema de expressão viável. Na sequência, os peptídeos HQPHQPLPPTVMFPPQ e KIPAVF, derivados de soro de leite, foram avaliados frente a bactérias patogênicas e fungos micotoxigênicos. Contudo, as concentrações inibitórias mínimas (CIMs) não puderam ser determinadas em doses de até 5000 mg.L-1, divergindo das previsões in silico obtidas. Concentrações superiores inviabilizariam a aplicação industrial devido aos custos de obtenção dos compostos. D

The demand for natural alternatives to antimicrobial substances traditionally used in the food industry has been increasing. Application of antimicrobial peptides represents an interesting approach for this purpose, mainly due to the strong amphipathic character of these molecules, which is responsible for interactions with cell membranes that may lead to growth and metabolism inhibition and death of microorganisms. The search for these peptides can be performed in silico using protein sequences, and the antimicrobial potential is subsequently verified by experimental analyses. In silico studies with short chain peptides have found promising results regarding their antimicrobial capacity. However, production of such peptides currently based on chemical or enzymatic hydrolysis of protein matrices are still inapplicable at industrial scale. As matrices for this production, whey and plant biomass show great interest due to their low cost and high antimicrobial activity of the generated extracts. The objective of the present study was to establish a bacterial system for the heterologous expression of peptides derived from the simulated in silico proteolysis of the plant enzyme ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase oxygenase (RuBisCO), in order to obtain a viable method for industrial application. In parallel, the antimicrobial activity of amphipathic peptides derived from whey proteins was evaluated against pathogenic and toxigenic microorganisms of interest to the food industry. Hereby, plasmids containing the coding insert of the peptidic sequence GSIKAFKEATKVDKVVVLWTALVPR derived from RuBisCO were cloned into a competent strain. The material was extracted and transformed into high-efficiency Escherichia coli Rosetta(DE3)pLysS cells. Peptide production was obtained, confirming the establishment of a viable expression system. Subsequently, whey-derived peptides HQPHQPLPPTVMFPPQ and KIPAVF were evaluated against pathogenic bacteria and mycotoxigenic fungi. However, the minimum inhibitory concentrations (MICs) could not be determined at doses up to 5000 mg.L-1, unlike the in silico predictions. Higher concentrations would make industrial application unviable due to compounds obtainment costs. Nevertheless, different peptides can be further tested for the same purpose.

Monitoramento de fungos toxigênicos e aflatoxinas em rações utilizadas em piscicultura / Monitoring of toxigenic fungi and aflatoxins in rations used in aquaculture

Objetivou-se determinar a ocorrência de fungos e aflatoxinas em rações para peixes. Foram analisadas 36 amostras de ração para peixes, sendo essas com duas composições proteicas (juvenil/engorda) e em duas formas de uso (lacrado/aberto). Foi realizada a contagem, isolamento e a identificação das espécies de Aspergillus e Penicillium, a capacidade toxígena das cepas da seção Flavi, e ainda fez-se a pesquisa de aflatoxinas na ração. As médias das contagens fúngicas variaram de 2,96 a 4,00 UFC/g em log10, e não houve diferença significativas entre os tratamentos. As espécies mais isoladas foram: Aspergillus flavus, Eurotion spp. e Penicillium implicatum. Concluiu-se que as rações analisadas apresentaram elevadas contagens fúngicas, as cepas de Aspergillus flavus isoladas não eram produtoras de aflatoxinas e não foram detectadas aflatoxinas nas amostras de ração analisadas.

The aim of this study was to determine the occurrence of fungi and aflatoxins in fish feeds. We analyzed 36 samples of feed for fish, with two protein compositions (juvenile/fattening) and two forms of use (sealed/open). Aspergillus and Penicillium species were counted, isolated and identified, the toxic capacity of Flavi strains was measured and aflatoxins in the feed were researched. The mean fungal counts ranged from 2.96 to 4.00 log10 CFU/g and there was no significant difference between treatments. The most isolated species were Aspergillus flavus, Eurotion spp. and Penicillium implicatum. We concluded that the feeds studied had high fungal counts; the isolated Aspergillus flavus strains were not producers of aflatoxin; and aflatoxin was not detected in the feed samples analyzed.

Monitoramento de fungos toxigênicos e aflatoxinas em rações utilizadas em piscicultura / Monitoring of toxigenic fungi and aflatoxins in rations used in aquaculture

Objetivou-se determinar a ocorrência de fungos e aflatoxinas em rações para peixes. Foram analisadas 36 amostras de ração para peixes, sendo essas com duas composições proteicas (juvenil/engorda) e em duas formas de uso (lacrado/aberto). Foi realizada a contagem, isolamento e a identificação das espécies de Aspergillus e Penicillium, a capacidade toxígena das cepas da seção Flavi, e ainda fez-se a pesquisa de aflatoxinas na ração. As médias das contagens fúngicas variaram de 2,96 a 4,00 UFC/g em log10, e não houve diferença significativas entre os tratamentos. As espécies mais isoladas foram: Aspergillus flavus, Eurotion spp. e Penicillium implicatum. Concluiu-se que as rações analisadas apresentaram elevadas contagens fúngicas, as cepas de Aspergillus flavus isoladas não eram produtoras de aflatoxinas e não foram detectadas aflatoxinas nas amostras de ração analisadas.(AU)

The aim of this study was to determine the occurrence of fungi and aflatoxins in fish feeds. We analyzed 36 samples of feed for fish, with two protein compositions (juvenile/fattening) and two forms of use (sealed/open). Aspergillus and Penicillium species were counted, isolated and identified, the toxic capacity of Flavi strains was measured and aflatoxins in the feed were researched. The mean fungal counts ranged from 2.96 to 4.00 log10 CFU/g and there was no significant difference between treatments. The most isolated species were Aspergillus flavus, Eurotion spp. and Penicillium implicatum. We concluded that the feeds studied had high fungal counts; the isolated Aspergillus flavus strains were not producers of aflatoxin; and aflatoxin was not detected in the feed samples analyzed.(AU)

Fungos potencialmente toxigênicos em amostras de amendoim disponível para o consumo humano

Avaliou-se a contaminação por fungos potencialmente toxigênicos em amendoim in natura disponível para consumo humano e comercializado em supermercados de Juiz de Fora, MG. Foram adquiridas 31 amostras de sete diferentes marcas de amendoim em grãos cru; amendoim torrado em grãos e amendoim torrado e triturado (moído), em embalagens originais e invioladas, em cinco estabelecimentos comerciais. A análise da presença de fungos potencialmente toxigênicos nos grãos de amendoim foi realizada por meio da técnica de plaqueamento direto em placas de Petri, contendo os meios de cultura Ágar Batata Dextrose (ABD) e Ágar Dicloran Rosa de Bengala Cloranfenicol (ADRBC). Das 31 amostras analisadas, 17 (54,84%) estavam contaminadas por fungos potencialmente toxigênicos (Aspergillus niger, Aspergillus flavus e/ou Aspergillus parasiticus, Aspergillus fumigatus e Penicillium spp) além de outros não toxigênicos (Rhizopus spp. e leveduras). O índice de contaminação nas diferentes amostras de amendoim avaliadas foi expressivo, sendo que as espécies encontradas foram de fungos potencialmente toxigênicos produtores de micotoxinas importantes como as aflatoxinas.(AU)

It was evaluated contamination by potentially toxigenic fungi in peanut in natura available for human consumption and marketed in supermarket in Juiz de Fora - MG. Were obtained 31 samples of seven different marks of the peanut raw grains; roasted peanuts in grains and roasted and ground peanuts in original packaging and inviolate, in five shops. The analysis of presence of potentially toxigenic fungi in peanut grains was made through the direct plating technique in Petri dishes containing Agar Potato Dextrose and Agar Dicloran Rose Bengal Chloramphenieol. Of the 31 samples analyzed, 17 (54.84%) were contaminated with potentially toxigenic fungi (Aspergillus niger; Aspergillus jlavus and/or Aspergillus parasitieus Aspergillus fumigatus an Penicillium spp), and other non-toxigenic (Rhizopus spp and yeasts). The contamination rate in the different evaluated peanut samples was significant, and the species found were potentially toxigenic fungi producers of mycotoxins important as aflatoxins.(AU)

DESENVOLVIMENTO TECNOLÓGICO DE COMPLEXOS DE ÓLEOS ESSENCIAIS COM -CICLODEXTRINAS E AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIFÚNGICA FRENTE A LINHAGENS TOXIGÊNICAS DE Aspergillus parasiticus

Os óleos essenciais, em geral, possuem componentes com atividade antimicrobiana que inibem o crescimento de fungos fitopatogênicos e toxigênicos, mostrando ser uma alternativa aos antifúngicos sintéticos na prevenção da deterioração dos alimentos. Entretanto, sua instabilidade térmica e sua baixa solubilidade aquosa limitam sua aplicação. No presente trabalho extraímos e caracterizamos os óleos essenciais de Origanum majorana, Mentha arvensis, Lippia alba, Ocimum basilicum e Cymbopogon citratus cultivados no horto de plantas medicinais e aromáticas da Universidade Federal do Piauí. Preparamos complexos de inclusão destes óleos com -ciclodextrina, pelo método de coprecipitação e os caracterizamos por métodos cromatográficos e espectroscópicos. Determinamos a influência da -ciclodextrina na estabilidade térmica dos óleos pelo método de headspace e, avaliamos sua atividade antifúngica contra Aspergillus parasiticus. Os constituintes majoritários identificados para os óleos essenciais de Origanum majorana foram o limoneno, linalol e estragol; Mentha arvensis, p-mentona, isomentona e mentol; Lippia alba, L-limoneno e L-carvona; Ocimum basilicum, linalol e estragol e Cymbopogon citratus, Z-citral e geranial. A formação do complexo de inclusão com todos os óleos essenciais aumentou a estabilidade térmica a 45°C de todos os componentes dos óleos durante 120 minutos e, os óleos essenciais de Origanum majorana, Mentha arvensis, Lippia alba, Ocimum basilicum e Cymbopogon citratus inibiram o crescimento fúngico, entretanto seus complexos de inclusão apresentaram baixo potencial antifúngico no modelo experimental utilizado frente a linhagem de Aspergillus parasiticus.

Os óleos essenciais, em geral, possuem componentes com atividade antimicrobiana que inibem o crescimento de fungos fitopatogênicos e toxigênicos, mostrando ser uma alternativa aos antifúngicos sintéticos na prevenção da deterioração dos alimentos. Entretanto, sua instabilidade térmica e sua baixa solubilidade aquosa limitam sua aplicação. No presente trabalho extraímos e caracterizamos os óleos essenciais de Origanum majorana, Mentha arvensis, Lippia alba, Ocimum basilicum e Cymbopogon citratus cultivados no horto de plantas medicinais e aromáticas da Universidade Federal do Piauí. Preparamos complexos de inclusão destes óleos com -ciclodextrina, pelo método de coprecipitação e os caracterizamos por métodos cromatográficos e espectroscópicos. Determinamos a influência da -ciclodextrina na estabilidade térmica dos óleos pelo método de headspace e, avaliamos sua atividade antifúngica contra Aspergillus parasiticus. Os constituintes majoritários identificados para os óleos essenciais de Origanum majorana foram o limoneno, linalol e estragol; Mentha arvensis, p-mentona, isomentona e mentol; Lippia alba, L-limoneno e L-carvona; Ocimum basilicum, linalol e estragol e Cymbopogon citratus, Z-citral e geranial. A formação do complexo de inclusão com todos os óleos essenciais aumentou a estabilidade térmica a 45°C de todos os componentes dos óleos durante 120 minutos e, os óleos essenciais de Origanum majorana, Mentha arvensis, Lippia alba, Ocimum basilicum e Cymbopogon citratus inibiram o crescimento fúngico, entretanto seus complexos de inclusão apresentaram baixo potencial antifúngico no modelo experimental utilizado frente a linhagem de Aspergillus parasiticus.

Fungos toxigênicos em camarões marinhos cultivados e potenciais toxigênicos das cepas isoladas de Aspergillus seção Flavi e seção Nigri / Toxigenic fungi in cultivated marine shrimp and the toxigenic potential of Aspergillus sections Flavi and Nigri strains

O objetivo do presente estudo foi quantificar, isolar e identificar a micobiota toxigênica em camarões marinhos cultivados no litoral do Piauí. Foram selecionadas, randomicamente, quatro propriedades (“A”, “B”, “C” e “D”), de onde foram coletadas 84 amostras de camarão de três fases de cultivo: “I”, “II” e “III”. A contagem de fungos foi realizada em ágar dicloran rosa de bengala cloranfenicol. As colônias isoladas de Aspergillus e Penicillium spp foram transferidas para tubos contendo ágar extrato de malte. As contagens de fungos nas amostras de camarões coletadas variaram de 1,85 a 2,73 UFC/g log10 e não diferiram entre si em todas as fases de cultivo. Foram isoladas 64 cepas de fungos, e os gêneros mais prevalentes foram Aspergillus (34,4%) e Penicillium (25,0%). Foram identificadas dezoito cepas do gênero Aspergillus. Duas cepas de A. ochraceus e cinco cepas de A. agregados niger foram produtoras de ocratoxina A. Uma cepa de A. flavus produziu aflatoxina B1, B2, G1 e G2, respectivamente, nas concentrações de 14,8 ng/g, 4,3 ng/g, 2,6 ng/g e 1,1 ng/g, e foi classificada como A. flavus atípico. Os camarões cultivados no litoral piauiense, quando recentemente capturados, apresentaram baixas contagens fúngicas em todas as fases de cultivo. (AU)

The aim of this study was to isolate and to identify the toxigenic mycobiota in marine shrimp raised in Piauí coast. Four farms were randomly selected (“A”, “B”, “C” and “D”), from whence eighty-four shrimp samples of three farming stages “I”, “II” and “III” were collected. The fungi count was done on dichloran rose bengal chloramphenicol agar. The isolated Aspergillus and Penicillium spp colonies were transferred into tubes containing malt extract agar. The fungi counts in shrimps samples ranged from 1.85 to 2.73 CFU/g log10, and they did not differ between them at all of the cultivation stages. Sixty-four fungi strains were isolated; and Aspergillus (34.4%) and Penicillium (25.0%) genus were mostly prevalent. Eighteen strains of Aspergillus genus were identified. Two A. ochraceus strains and five strains of A. niger aggregate were ochratoxin A producers. One A. flavus strain produced aflatoxin B1, B2, G1 and G2 in concentrations of 14.8 ng/g, 4.3 ng/g, 2.6 ng/g and 1.1 ng/g, respectively, and it was classified as atypical A. flavus. When freshly captured, the shrimps raised in Piauí coast showed low fungal counts at all of the cultivation stages.(AU)

Qualidade microbiológica de castanhas de caju (Anacardium occidentale, L) industrializadas e processadas artesanalmente / Study on the microbiological quality of industrialized and handmade cashew nuts (Anacardium occidentale L)

O objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade microbiológica de castanhas industrializadas e das castanhas artesanalmente processadas, comercializadas por ambulantes em Teresina (PI). Foram coletadas 40 amostras de castanhas, sendo 21 amostras de castanhas industrializadas de três marcas (“A”, “B” e “C”) e 19 amostras de castanhas processadas artesanalmente (“D”), nas quais foram realizadas a determinação de coliformes a 35 °C e a 45 °C (NMP/g), a pesquisa de Salmonella spp. e a contagem de fungos. As amostras da marca “D” apresentaram maiores valores de coliformes a 35 °C (1,16 × 101 NMP/g); para coliformes a 45 °C, foram detectados valores de 7,0 NMP/g, e de 1,22 × 102 UFC/g para fungos e leveduras. Nas amostras da marca “A”, os valores para coliformes a 35 °C e 45 °C foram de 4,0 NMP/g e, para fungos e leveduras,de 1,0 × 102 UFC/g. Foram isoladas 43 cepas fúngicas. Do gênero Aspergillus, houve maior prevalência da espécie Aspergillus niger agregados (64,7%), e as espécies P. corylophillum (33,3%) e P. citrinum (29,2%) do gênero Penicillium. As amostras de castanhas industrializadas e processadas artesanalmente apresentaram condições higiênico-sanitárias satisfatórias e de acordo com a legislação vigente. (AU)

FUMIGAÇÃO DO ISOTIOCIANATO DE ALILA CONTRA O CRESCIMENTO DE FUNGOS PRODUTORES DE MICOTOXINAS EM MILHO ESTOCADO

A busca por novas substâncias a partir de fontes naturais tem ganhado importância no cenário mundial como alternativa ao uso de fungicidas sintéticos. Dentre esses compostos naturais, o isotiocianato de alila (AITC) tem se destacado pelo seu potencial antifúngico. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a eficiência do AITC na forma gasosa para a redução do crescimento de Aspergillus parasiticus e Fusarium verticillioides visando a redução da produção de micotoxinas (aflatoxinas AFB1, AFB2, AFG1 e AFG2; fumonisinas FB1 e FB2) em milho estocado por180 dias. Amostras de 300 g de grãos de milho foram tratados com AITC (0,5; 10 e 50 µL/L em volume do frasco) em frascos de vidro (830 mL), sendo então selados e armazenados por 2 dias sob condições ambientais de umidade e temperatura. Em seguida, os frascos foram abertos por 1 h para eliminar o excesso de AITC e inoculados respectivamente com 104 e 105 conídios/g de A. parasiticus CECT 2947 e F. verticillioides CECT 2983. Os grupos controle não receberam tratamento com AITC. Alíquotas de 10 g foram usadas para determinar a população fúngica após 0, 2, 7, 14, 30, 60, 90, 120, 150 e 180 dias. Similarmente, os níveis de aflatoxinas (B1, B2, G1 e G2), fumonisinas (FB1 e FB2) e AITC foram quantificados por HPLC nesses mesmos tempos. O AITC a 50 µL/L resultou na redução significativa (p<0,05) da população em 180 dias de estocagem, reduzindo 3,17 log UFC/g e 3,9 log UFC/g de A. parasiticus e F. verticillioides, respectivamente. Além disso, tratamentos com 10 e 50 µL/L evitaram a produção de FB1. Os níveis de AITC residual no milho tratado com 10 e 50 µL/L foram respectivamente, 6,5 e 29,1% após 14 dias, enquanto que somente o tratamento de 50 µL/L apresentava AITC residual (25,9%) nos grãos após 30 dias. O AITC residual não foi detectado no grupo tratado com 0,5 µL/L já após 2 dias. O tratamento profilático com AITC foi eficaz na redução da população fúngica e inibiu a produção de FB1. Por ser um composto volátil, o AITC mostrou-se capaz de penetrar no milho, sendo que doses de 50 µL/L apresentaram maior efeito residual. Todos esses resultados sugerem que o AITC pode ser usado como agente fumigante em silos ou até mesmo em embalagens, a fim de evitar a deterioração fúngica e, consequentemente, a produção de micotoxinas em grãos de milho.

The search for new substances from natural sources has gained importance worldwide as an alternative to synthetic fungicides. Among these natural compounds, allyl isothiocyanate (AITC) has been evaluated for its antifungal potential. The objective of the present study was to evaluate the efficiency of gaseous AITC to inhibit the growth of Aspergillus parasiticus and Fusarium verticillioides, and to reduce mycotoxin production (aflatoxins B1, B2, G1 and G2, fumonisins B1 and B2) in corn during 180 days of storage. Samples (300 g) of corn kernels were treated with AITC (0.5, 10 and 50 L/L) in glass jars (830 mL), then hermetically closed and stored for 2 d under normal environmental conditions. The flasks were opened for 1 h to let the excess of AITC to escape and inoculated with 104 and 105 spores/g of A. parasiticus CECT 2947 and F. verticillioides CECT 2983, respectively. Control groups were not treated with AITC. Aliquots of 10 g were used to determine the fungal population after 0, 2, 7, 14, 30, 60, 90, 120, 150 and 180 d. Similarly, levels of aflatoxins (B1, B2, G1 and G2), fumonisins (B1 and B2) and AITC were quantified by HPLC in these same time points using 5 g samples. AITC at 50 L/L resulted in a significant reduction of the fungal population (p <0.05) after 180 d of storage, decresing 3.17 log CFU/g and 3.9 log CFU/g of A. parasiticus and F verticillioides, respectively. In addition, treatments with 10 and 50 L/L prevented the production of FB1. Residual levels of AITC in corn treated with 10 and 50 L/L were 6.5 and 29.1% after 14 d;

Determinação de biomarcadores de aflatoxina B1 e aplicabilidade na avaliação da eficiência de adsorventes em frangos de corte

As aflatoxinas são metabólitos secundários produzidos por fungos toxigênicos das espécies Aspergillus flavus, A. parasiticus e A. nomius. São amplamente encontradas em matérias-primas de rações animais, em especial o milho, e têm a capacidade de levar a quadros clínicos agudos ou crônicos de aflatoxicose, caracterizados por, desde a morte por hepatite aguda até a diminuição do desempenho zootécnico por diminuição de peso ou consumo de ração. A aflatoxina B1 tem sido considerada o metabólito mais perigoso, uma vez que possui alto poder hepatotóxico, além de ser mutagênica e carcinogênica. Atualmente a ciência trabalha rumo à descoberta de substâncias que sejam indicadoras confiáveis de contaminação por componentes tóxicos em homens e em animais, os chamados biomarcadores, que medem uma mudança celular, biológica ou molecular em um meio biológico (tecidos humanos, células ou fluídos) que fornecem informação a respeito de uma doença ou exposição a uma determinada substância. Sua detecção pode auxiliar na identificação, no diagnóstico e no tratamento de indivíduos afetados que podem estar sob risco, mas ainda não exibem os sintomas. Sendo assim, com o auxílio de análises que confirmem a patogenicidade da aflatoxina B1 (determinação da atividade de enzimas hepáticas, da avaliação da função renal, de hematologia, da dosagem de minerais séricos e da avaliação de desempenho zootécnico), o objetivo deste trabalho foi avaliar a aplicabilidade da determinação de resíduos hepáticos de aflatoxinas e do aduto sérico AFB1-lisina na avaliação da eficiência de adsorventes em frangos de corte. Utilizou-se 240 pintos de 1 dia, machos, de linhagem Cobb 500®, distribuídos aleatoriamente em 4 dietas experimentais: Controle Negativo: Ração Basal (RB); RB + 0,5% de adsorvente ((aluminosilicato de cálcio e sódio hidratado/HSCAS); RB + 0,5% de adsorvente + 500 µg de AFB1/kg de ração e; RB + 500 µg de AFB1/kg de ração.Os resultados experimentais mostram que o efeito deletério da AFB1, na concentração utilizada, é mais pronunciado que os efeitos protetores do HSCAS sobre os parâmetros de saúde dos animais. Não houve ação efetiva do adsorvente utilizado sobre quase nenhuma variável estudada, apenas para a redução das lesões histopatológicas em fígado, na redução da concentração de gama-glutamiltransferase (GGT), fósforo e aumento da contagem de hemáceas aos 21 dias de idade. Porém, influenciou positivamente a redução de resíduos hepáticos de aflatoxina G1 aos 21 dias e as concentrações de AFB1-lisina sérica aos 21 e aos 42 dias de idade. Estes dados são importantes porque permite concluir que, embora sintomatologicamente o HSCAS não tenha exercido função efetiva, molecularmente foi capaz de mostrar de eficácia sobre os alguns biomarcadores de aflatoxinas no organismo das aves.

Aflatoxins are secondary metabolites produced by toxigenic fungi of the species Aspergillus flavus, A. parasiticus and A. nomius. They are widely found in raw materials of animal feed, in particular corn, and have the ability to lead to clinical cases of acute or chronic aflatoxicosis, characterized by acute hepatites leading to death until lower performance by decreased weight or feed intake. Aflatoxin B1 has been considered the most dangerous metabolite, since it has high hepatotoxic power, besides being mutagenic and carcinogenic. Nowadays science works toward the discovery of substances that are reliable indicators of contamination by toxic components in humans and animals, called biomarkers, which measure a cell change, biological or molecular in a biological medium (human tissues, cells or fluids) that provide information regarding a disease or exposure to a particular substance. Its detection can assist in the identification, diagnosis and treatment of affected individuals who may be at risk, but still do not exhibit symptoms. Thus, with the help of analysis that confirm aflatoxin B1 pathogenicity(determination of liver enzymes activity, assessment of renal function, hematology, dosage of serum minerals and evaluation of animal performance), the objective of this work was to evaluate the applicability of the determination of aflatoxin liver residues and serum AFB1-lysine adduct in the evaluation of the adsorbents efficiency in broiler chickens. Two hundred and fourty day-old male chicks, Cobb 500® lineage, were randomly distributed into 4 experimental diets: Negative Control: Basal Feed (BF); BF + 0.5% adsorbent (hydrated sodium calcium aluminosilicate/HSCAS); RB + 0.5% adsorbent + 500 µg AFB1/kg of feed; and RB +500 µg AFB1/kg of feed. The experimental results show that the deleterious effect of AFB1, at the concentration used, is more pronounced that the protective effects of HSCAS on animal health parameters. There was no effective action of the adsorbent used on almost any variable studied, only for the reduction of the histopathological lesions in the liver, reduction of gamma-glutamyltransferase (GGT) and phosphorus concentration, and increased count of red blood cells at 21 days. However, influenced positively the reduction of aflatoxin G1 liver residues at 21 days and the concentrations of serum AFB1-lysine at 21 and 42 days. These are important data because they allow to conclude that, although symptomatically the HSCAS has not exercised effective function, molecularly was able to show some efficacy on aflatoxin biomarkers in the birds body.