Bem-estar animal nos procedimentos de produção in vivo de embriões na espécie ovina / Animal welfare in the in vivo production of sheep embryos

A presente revisão tem por objetivo abordar aspectos relacionados ao bem-estar animal na produção in vivo de embriões ovinos. A cobrança da sociedade tem impulsionado o uso de práticas que atendam os preceitos de bem-estar na produção animal. Nesse contexto, destaca-se a necessidade de aprimoramento de procedimentos menos invasivos, como a coleta não cirúrgica de embriões. Avanços recentes nos protocolos de dilatação cervical melhoraram os resultados e tornaram essa técnica uma alternativa viável na espécie ovina. No entanto, a avaliação do estado de bem-estar das doadoras submetidas à coleta transcervical mostra a necessidade de melhor controle da dor durante a sua realização. Assim, acreditamos que a associação dos esforços de diferentes pesquisas pode proporcionar a resolução desses entraves e possibilitar maior aplicabilidade comercial da biotécnica.(AU)

This review aims to address aspects related to animal welfare in the in vivo production of ovine embryos. The use of practices that meet the precepts of welfare in animal production has been driven by demands from society. In this context, there is a need to improve less invasive procedures, such as nonsurgical embryo collection. Recent advances in cervical dilation protocols have improved results and made this technique a viable alternative in sheep. However, the assessment of the state of welfare of donors undergoing transcervical collection shows the need for better pain control during its performance. Thus, the association of different research efforts can provide the resolution of these obstacles and enable greater commercial applicability of the biotechnique.(AU)

Desafios e perspectivas na produção in vivo de embriões de pequenos ruminantes no Nordeste do Brasil / Challenges and perspectives in the in vivo production of small ruminant embryos in northeast of Brazil

Em decorrência da necessidade de aproveitamento de matrizes e reprodutores de alto mérito genético biotecnologias reprodutivas como a Multipla Ovulação e Transferência de Embriões (MOTE) vêm sendo cada vez mais utilizada, garantindo assim a produtividade mesmo diante de obstáculos. Nos últimos anos essa atividade vem apresentando um acentuado desenvolvimento e aprimoramento, principalmente em caprinos e ovinos que se constituem espécies de extrema importância para a Região Nordeste do Brasil, por serem uma das culturas mais vantajosas quando comparado com as demais culturas como a pecuária e por se tratar de uma atividade sustentável do ponto de vista ambiental, sociocultural e econômico. Dentre os principais fatores que ainda afetam o desempenho e sucesso dos programas de Transferência de Embriões (TE) em pequenos ruminantes podemos destacar a seleção de fêmeas doadoras e receptoras, variabilidade de resposta aos protocolos de superovulação, regressão prematura de corpo lúteo (CL), necessidade de etapas cirúrgicas como a laparotomia e laparoscopia e baixa disponibilidade de mão de obra especializada. Nesse sentido, este artigo aborda as principais etapas da produção in vivo de embriões em pequenos ruminantes bem como os desafios e as perspectivas de cada etapa a serem enfrentadas na Região Nordeste do Brasil.

As a result of the need to use matrices and breeders with high genetic merit, reproductive biotechnologies such as Multiple Ovulation and Embryo Transfer (MOTE) have been increasingly used, thus guaranteeing productivity even in the face of obstacles. In recent years, this activity has shown a marked development and improvement, especially in goats and sheep, which are extremely important species for the Northeast Region of Brazil, as they are one of the most advantageous crops for this region when compared to other crops such as livestock and because it is a sustainable activity from an environmental, socio-cultural and economic point of view. Among the main factors that still affect the performance and success of Embryo Transfer (ET) programs in small ruminants we can highlight the selection of donor and recipient females, variability in response to superovulation protocols, premature corpus luteum (CL) regression, need for surgical steps such as laparotomy and laparoscopy and low availability of specialized labor. In this sense, this article addresses the main stages of invivo embryo production in small ruminants as well as the challenges and perspectives of each stage to be faced in the Northeast Region of Brazil.

Desafios e perspectivas na produção in vivo de embriões de pequenos ruminantes no Nordeste do Brasil / Challenges and perspectives in the in vivo production of small ruminant embryos in northeast of Brazil

Em decorrência da necessidade de aproveitamento de matrizes e reprodutores de alto mérito genético biotecnologias reprodutivas como a Multipla Ovulação e Transferência de Embriões (MOTE) vêm sendo cada vez mais utilizada, garantindo assim a produtividade mesmo diante de obstáculos. Nos últimos anos essa atividade vem apresentando um acentuado desenvolvimento e aprimoramento, principalmente em caprinos e ovinos que se constituem espécies de extrema importância para a Região Nordeste do Brasil, por serem uma das culturas mais vantajosas quando comparado com as demais culturas como a pecuária e por se tratar de uma atividade sustentável do ponto de vista ambiental, sociocultural e econômico. Dentre os principais fatores que ainda afetam o desempenho e sucesso dos programas de Transferência de Embriões (TE) em pequenos ruminantes podemos destacar a seleção de fêmeas doadoras e receptoras, variabilidade de resposta aos protocolos de superovulação, regressão prematura de corpo lúteo (CL), necessidade de etapas cirúrgicas como a laparotomia e laparoscopia e baixa disponibilidade de mão de obra especializada. Nesse sentido, este artigo aborda as principais etapas da produção in vivo de embriões em pequenos ruminantes bem como os desafios e as perspectivas de cada etapa a serem enfrentadas na Região Nordeste do Brasil.(AU)

As a result of the need to use matrices and breeders with high genetic merit, reproductive biotechnologies such as Multiple Ovulation and Embryo Transfer (MOTE) have been increasingly used, thus guaranteeing productivity even in the face of obstacles. In recent years, this activity has shown a marked development and improvement, especially in goats and sheep, which are extremely important species for the Northeast Region of Brazil, as they are one of the most advantageous crops for this region when compared to other crops such as livestock and because it is a sustainable activity from an environmental, socio-cultural and economic point of view. Among the main factors that still affect the performance and success of Embryo Transfer (ET) programs in small ruminants we can highlight the selection of donor and recipient females, variability in response to superovulation protocols, premature corpus luteum (CL) regression, need for surgical steps such as laparotomy and laparoscopy and low availability of specialized labor. In this sense, this article addresses the main stages of invivo embryo production in small ruminants as well as the challenges and perspectives of each stage to be faced in the Northeast Region of Brazil.(AU)

Colheita transcervical de embriões em ovelhas e cabras / Transcervical embryo collection in ewes and does

A biotécnica de múltipla ovulação e transferência de embriões (MOTE) em pequenos ruminantes tem aplicações que se estendem da pesquisa básica à aplicada. Porém, ainda existem etapas no processo da biotécnica que reduzem sua eficiência e restringem sua utilização, a exemplo da necessidade de procedimentos cirúrgicos. Em caprinos, já é possível realizar a MOTE sem nenhuma intervenção cirúrgica e com resultados satisfatórios. Todavia, em ovinos, as particularidades anatômicas da cérvix dificultam sua transposição, fazendo com que etapas cirúrgicas ainda sejam necessárias. Com foco nessa limitação, tem-se estudado e descrito técnicas para a dilatação cervical e métodos para triagem de doadoras de embrião com maior facilidade para transposição cervical. Assim, a colheita não cirúrgica, principalmente na espécie ovina, vem se tornando uma realidade exequível em condições de campo e pesquisa.(AU)

In small ruminants, the multiple ovulation and embryo transfer (MOET) has applications in basic and applied research. However, there are still drawbacks in this biotechnology hampering its applicability and efficiency, as the need of surgical intervention. In goats, it is possible to perform MOET without any surgical procedure and with satisfactory results. Although, in sheep, the anatomical features of the cervix make transcervical transposition challenging, leading to a wider use of surgical steps in this specie. In the attempt to overcome these limitations, techniques for cervical dilation and methods for screening donors with cervices that can be easily transposed have been studied and described. Therefore, the nonsurgical embryo collection, mainly in the ovine species, has become feasible under field and research conditions.(AU)

Colheita transcervical de embriões em ovelhas e cabras / Transcervical embryo collection in ewes and does

A biotécnica de múltipla ovulação e transferência de embriões (MOTE) em pequenos ruminantes tem aplicações que se estendem da pesquisa básica à aplicada. Porém, ainda existem etapas no processo da biotécnica que reduzem sua eficiência e restringem sua utilização, a exemplo da necessidade de procedimentos cirúrgicos. Em caprinos, já é possível realizar a MOTE sem nenhuma intervenção cirúrgica e com resultados satisfatórios. Todavia, em ovinos, as particularidades anatômicas da cérvix dificultam sua transposição, fazendo com que etapas cirúrgicas ainda sejam necessárias. Com foco nessa limitação, tem-se estudado e descrito técnicas para a dilatação cervical e métodos para triagem de doadoras de embrião com maior facilidade para transposição cervical. Assim, a colheita não cirúrgica, principalmente na espécie ovina, vem se tornando uma realidade exequível em condições de campo e pesquisa.

In small ruminants, the multiple ovulation and embryo transfer (MOET) has applications in basic and applied research. However, there are still drawbacks in this biotechnology hampering its applicability and efficiency, as the need of surgical intervention. In goats, it is possible to perform MOET without any surgical procedure and with satisfactory results. Although, in sheep, the anatomical features of the cervix make transcervical transposition challenging, leading to a wider use of surgical steps in this specie. In the attempt to overcome these limitations, techniques for cervical dilation and methods for screening donors with cervices that can be easily transposed have been studied and described. Therefore, the nonsurgical embryo collection, mainly in the ovine species, has become feasible under field and research conditions.

Hormônio antimülleriano pode uma realidade usada em seres humanos ser transferida a bovinos e búfalos / Antimüllerian Hormone can a reality in humans translate to bovine and buffalos

O hormônio antimülleriano (AMH) nas fêmeas é produzido especificamente pelas células da granulosa dos folículos em crescimento e controla a velocidade do crescimento folicular ao inibir a enzima aromatase. Este hormônio tem sido explorado em várias aplicações biotecnológicas, sendo a mais bem estudada a relação positiva entre a sua concentração circulante e a população folicular antral (PFA) no ovário, tornando o AMH um indicador confiável desta característica em humanos e em outras espécies. O AMH também mostrou ser um indicador prognóstico positivo do rendimento de embriões em programas de ovulação múltipla e transferência de embriões (MOET) em bovinos, porém sua utilidade para identificar fêmeas doadoras de oócitos para produção de embriões in vitro (IVEP) ainda está em discussão. Em búfalos, apenas poucos estudos foram realizados até o momento, porém devido a baixa reserva folicular ovariana na espécie e a grande variabilidade individual, que criam um desafio para ART (Assisted Reproduction Technology) na espécie, o AMH surge com grande potencial de se tornar alternativa eficiente para a identificação precoce de doadores de oócitos para IVEP. Estudos sobre AMH demonstraram claramente sua utilidade como parte do "pacote de biotecnologia reprodutiva" em algumas espécies, especialmente em seres humanos. Em animais de produção, como bovinos, e principalmente no búfalo, estudos adicionais são necessários para definir a utilidade da AMH não apenas como um bom preditor da AFP, mas também como uma ferramenta chave em programas de biotecnologia reprodutiva em todo o mundo.(AU)

The antimüllerian hormone (AMH) in females ias specifically produced by the granulosa cells of growing follicles and controls the speed of follicular growth by inhibit the enzyme aromatase. This has been recently explored in several biotechnological applications with the most well studied being the positive relationship between circulating concentration of circulating AMH and the antral follicular population (PFA) in the ovary,where AMH is becoming accepted as a reliable indicator of this characteristic in both humans and other species. AMH has also been shown to be a positive prognostic indicator of embryo yield in multiple ovulation and embryo transfer (MOET) in cattle, however its utility for identifying good oocyte donors for in vitro embryo production (IVEP) in bovines is still under debate. In buffaloes, only limited studies have been completed, however with the low ovarian follicular reserve in the species and the great individual variability creating a challenge for ART (Assisted Reproduction Technology) the enormous potential of AMH as an efficient alternative of early identification of oocyte donors for IVEP has been suggested. In summary, studies on AMH have clearly demonstrated its utility as part of the "reproductive biotechnology package" in some species, especially in humans and in farm animals such as cattle. In the buffalo, further studies are needed to define the usefulness of AMH not only as a good predictor of AFP but also as a key tool in buffalo reproductive biotechnology programs worldwide.(AU)

Hormônio antimülleriano pode uma realidade usada em seres humanos ser transferida a bovinos e búfalos / Antimüllerian Hormone can a reality in humans translate to bovine and buffalos

O hormônio antimülleriano (AMH) nas fêmeas é produzido especificamente pelas células da granulosa dos folículos em crescimento e controla a velocidade do crescimento folicular ao inibir a enzima aromatase. Este hormônio tem sido explorado em várias aplicações biotecnológicas, sendo a mais bem estudada a relação positiva entre a sua concentração circulante e a população folicular antral (PFA) no ovário, tornando o AMH um indicador confiável desta característica em humanos e em outras espécies. O AMH também mostrou ser um indicador prognóstico positivo do rendimento de embriões em programas de ovulação múltipla e transferência de embriões (MOET) em bovinos, porém sua utilidade para identificar fêmeas doadoras de oócitos para produção de embriões in vitro (IVEP) ainda está em discussão. Em búfalos, apenas poucos estudos foram realizados até o momento, porém devido a baixa reserva folicular ovariana na espécie e a grande variabilidade individual, que criam um desafio para ART (Assisted Reproduction Technology) na espécie, o AMH surge com grande potencial de se tornar alternativa eficiente para a identificação precoce de doadores de oócitos para IVEP. Estudos sobre AMH demonstraram claramente sua utilidade como parte do "pacote de biotecnologia reprodutiva" em algumas espécies, especialmente em seres humanos. Em animais de produção, como bovinos, e principalmente no búfalo, estudos adicionais são necessários para definir a utilidade da AMH não apenas como um bom preditor da AFP, mas também como uma ferramenta chave em programas de biotecnologia reprodutiva em todo o mundo.

The antimüllerian hormone (AMH) in females ias specifically produced by the granulosa cells of growing follicles and controls the speed of follicular growth by inhibit the enzyme aromatase. This has been recently explored in several biotechnological applications with the most well studied being the positive relationship between circulating concentration of circulating AMH and the antral follicular population (PFA) in the ovary,where AMH is becoming accepted as a reliable indicator of this characteristic in both humans and other species. AMH has also been shown to be a positive prognostic indicator of embryo yield in multiple ovulation and embryo transfer (MOET) in cattle, however its utility for identifying good oocyte donors for in vitro embryo production (IVEP) in bovines is still under debate. In buffaloes, only limited studies have been completed, however with the low ovarian follicular reserve in the species and the great individual variability creating a challenge for ART (Assisted Reproduction Technology) the enormous potential of AMH as an efficient alternative of early identification of oocyte donors for IVEP has been suggested. In summary, studies on AMH have clearly demonstrated its utility as part of the "reproductive biotechnology package" in some species, especially in humans and in farm animals such as cattle. In the buffalo, further studies are needed to define the usefulness of AMH not only as a good predictor of AFP but also as a key tool in buffalo reproductive biotechnology programs worldwide.

PRODUÇÃO IN VIVO DE EMBRIÕES CAPRINOS DA RAÇA KALAHARI UTILIZANDO MEIOS À BASE DE ÁGUA DE COCO EM PÓ

O estudo objetivou validar a eficácia de duas novas formulações à base de água de coco em pó (ACP-421 e ACP-420) como substitutos dos meios tradicionais de lavagem uterina e manutenção de embriões durante a biotécnica de Múltipla Ovulação e Transferência de Embriões (MOTE) em caprinos da raça Kalahari. Foram selecionadas oito doadoras de embriões da raça Kalahari e como receptoras 45 fêmeas sem padrão racial definido. Os animais passaram por avaliação ginecológica (uterina e ovariana) e complementar através de ultrassonografia. Posteriormente, as fêmeas doadoras foram submetidas ao protocolo de tratamento hormonal para estimular a superovulação e as fêmeas receptoras por sincronização do estro simultaneamente, a fim de manter a sincronia entre o ambiente uterino das doadoras e receptoras. Posteriormente as doadoras foram divididas aleatoriamente em dois grupos. No Grupo 1 (controle), três dadoras foram submetidas à lavagem uterina e manutenção embrionária utilizando meios tradicionais (DMPBS® e Holding Plus®, respectivamente) e no Grupo 2, cinco doadoras foram submetidas à lavagem uterina e manutenção embrionária utilizando os meios à base de água de coco em pó (ACP-421 e ACP-420, respectivamente). As colheitas de embriões foram realizadas por laparotomia, onde no Grupo 1, as fêmeas foram submetidas a lavagem dos cornos uterinos com meio DMPBS® e no Grupo 2 com ACP-421. Posteriormente, as soluções de lavagem foram depositadas em placas de Petri aquecidas a 37 °C, analisadas e classificadas com auxílio de um estereomicroscópio. Os embriões recuperados do Grupo 1 (n=14) foram mantidos em meio Holding Plus® e os do Grupo 2 (n=31) em ACP-420 até o momento da inovulação. Os embriões foram inovulados por laparotomia para as fêmeas receptoras e o diagnóstico de gestação foi realizado no 30° dia pós-inovulação. Os resultados foram submetidos ao teste c2 com nível de significância a 5%. Foram recuperados 45 embriões, onde obteve-se uma taxa de gestação de 50% (7/14) no Grupo 1 (DMPBS® e Holding Plus®) e de 38,7% (12/31) no Grupo 2 (ACP-421 e ACP-420), não havendo diferença significativa entre os meios utilizado. Portanto, as duas formulações à base de água de coco em pó ACP-421 e ACP-420 são eficientes como meios de lavagem uterina e manutenção de embriões caprinos podendo ser utilizados em substituições aos meios tradicionais.

O estudo objetivou validar a eficácia de duas novas formulações à base de água de coco em pó (ACP-421 e ACP-420) como substitutos dos meios tradicionais de lavagem uterina e manutenção de embriões durante a biotécnica de Múltipla Ovulação e Transferência de Embriões (MOTE) em caprinos da raça Kalahari. Foram selecionadas oito doadoras de embriões da raça Kalahari e como receptoras 45 fêmeas sem padrão racial definido. Os animais passaram por avaliação ginecológica (uterina e ovariana) e complementar através de ultrassonografia. Posteriormente, as fêmeas doadoras foram submetidas ao protocolo de tratamento hormonal para estimular a superovulação e as fêmeas receptoras por sincronização do estro simultaneamente, a fim de manter a sincronia entre o ambiente uterino das doadoras e receptoras. Posteriormente as doadoras foram divididas aleatoriamente em dois grupos. No Grupo 1 (controle), três dadoras foram submetidas à lavagem uterina e manutenção embrionária utilizando meios tradicionais (DMPBS® e Holding Plus®, respectivamente) e no Grupo 2, cinco doadoras foram submetidas à lavagem uterina e manutenção embrionária utilizando os meios à base de água de coco em pó (ACP-421 e ACP-420, respectivamente). As colheitas de embriões foram realizadas por laparotomia, onde no Grupo 1, as fêmeas foram submetidas a lavagem dos cornos uterinos com meio DMPBS® e no Grupo 2 com ACP-421. Posteriormente, as soluções de lavagem foram depositadas em placas de Petri aquecidas a 37 °C, analisadas e classificadas com auxílio de um estereomicroscópio. Os embriões recuperados do Grupo 1 (n=14) foram mantidos em meio Holding Plus® e os do Grupo 2 (n=31) em ACP-420 até o momento da inovulação. Os embriões foram inovulados por laparotomia para as fêmeas receptoras e o diagnóstico de gestação foi realizado no 30° dia pós-inovulação. Os resultados foram submetidos ao teste c2 com nível de significância a 5%. Foram recuperados 45 embriões, onde obteve-se uma taxa de gestação de 50% (7/14) no Grupo 1 (DMPBS® e Holding Plus®) e de 38,7% (12/31) no Grupo 2 (ACP-421 e ACP-420), não havendo diferença significativa entre os meios utilizado. Portanto, as duas formulações à base de água de coco em pó ACP-421 e ACP-420 são eficientes como meios de lavagem uterina e manutenção de embriões caprinos podendo ser utilizados em substituições aos meios tradicionais.

Oocyte development and fecundity type of the Brazilian Snapper Lutjanus alexandrei Moura & Lindeman, 2007 (Perciformes: Lutjanidae)

Abstract Lutjanid species exhibit multiple spawning behaviour during an extended spawning season in warm months, asynchronous oocyte development and indeterminate fecundity. Although early studies have contributed to knowledge of the reproductive cycle of many species within the group, they have not considered aspects about the number of cortical alveoli oocyte stage throughout maturity phases along spawning season. The latter aspect is also considered very important to confirm indeterminate fecundity hypothesis. In the present study, were analyzed 154 Brazilian snapper Lutjanus alexandrei female gonads obtained from artisanal fisheries in Pernambuco State (Brazil) between October 2010 and March 2011. Were measured oocyte size frequency distribution for maturity phases (developing, spawning capable and actively spawning), and oocyte development stage (unyolked oocytes, cortical alveoli, primary, secondary and tertiary vitellogenic oocytes and hydrated oocytes), and also the oocyte stage frequency during spawning season. The frequency of cortical alveoli oocyte stage was constantly found in the spawning period (>37%), showing slight variation throughout maturity phases. The absence of gap in the oocyte size frequency distribution between primary and secondary oocyte growth stages during spawning season is a strong indicator of continuous oocyte recruitment from reserve stocks. In addition, co-occurrence of tertiary vitellogenic oocytes, hydrated oocytes, post-ovulatory follicles and yellow-brown bodies in the histological sections of ovaries reinforce indeterminate fecundity hypothesis.

Resumo Os lutjanídeos apresentam um comportamento de desovas parceladas ao longo de uma extensa estação reprodutiva nos meses mais quentes do ano, desenvolvimento assincrônico dos ovócitos e padrão de regulação de fecundidade indeterminado. Embora muitos estudos anteriores tenham contribuído no conhecimento do ciclo reprodutivo das espécies do grupo, não foram considerados os aspectos relacionados ao percentual dos ovócitos em estágio de cortical alveoli entre as fases de maturidade sexual durante a estação reprodutiva. Este último aspecto, considerado importante para confirmação da hipótese de fecundidade do tipo indeterminada. Para isso, no presente trabalho foram analisadas 154 gônadas de fêmeas da baúna de fogo Lutjanus alexandrei obtidas da pesca artesanal em Pernambuco entre o período de outubro de 2010 a março de 2011. Foram mensurados os diâmetros dos ovócitos nas fases de maturidade sexual (desenvolvimento, capaz de desovar e ativamente desovando), e para todos os estágios ovocitários (ovócitos pre-vitelogênicos, cortical alveolar, vitelogênese primária, secundária, terciária e ovócitos hidratados), e avaliada a frequência de ocorrência ao longo do período de desova. O percentual de ovócitos em estágio cortical alveoli permaneceu constante durante o período de reprodutivo (> 37%), apresentando pouca variação entre as fases de maturidade sexual. A ausência de um intervalo na frequência de diâmetro dos ovócitos em crescimento primário e secundário entre todas as fases de maturidade sexual é um forte indicador de recrutamento contínuo de ovócitos do estoque de reserva. Além disso, a presença conjunta de ovócitos em vitelogênese terciária, ovócitos hidratados, folículos pós-ovulatórios e corpos amarelados nos cortes histológicos reforçam a hipótese de fecundidade do tipo indeterminada.

Oocyte development and fecundity type of the Brazilian Snapper Lutjanus alexandrei Moura & Lindeman, 2007 (Perciformes: Lutjanidae)

Abstract Lutjanid species exhibit multiple spawning behaviour during an extended spawning season in warm months, asynchronous oocyte development and indeterminate fecundity. Although early studies have contributed to knowledge of the reproductive cycle of many species within the group, they have not considered aspects about the number of cortical alveoli oocyte stage throughout maturity phases along spawning season. The latter aspect is also considered very important to confirm indeterminate fecundity hypothesis. In the present study, were analyzed 154 Brazilian snapper Lutjanus alexandrei female gonads obtained from artisanal fisheries in Pernambuco State (Brazil) between October 2010 and March 2011. Were measured oocyte size frequency distribution for maturity phases (developing, spawning capable and actively spawning), and oocyte development stage (unyolked oocytes, cortical alveoli, primary, secondary and tertiary vitellogenic oocytes and hydrated oocytes), and also the oocyte stage frequency during spawning season. The frequency of cortical alveoli oocyte stage was constantly found in the spawning period (>37%), showing slight variation throughout maturity phases. The absence of gap in the oocyte size frequency distribution between primary and secondary oocyte growth stages during spawning season is a strong indicator of continuous oocyte recruitment from reserve stocks. In addition, co-occurrence of tertiary vitellogenic oocytes, hydrated oocytes, post-ovulatory follicles and yellow-brown bodies in the histological sections of ovaries reinforce indeterminate fecundity hypothesis.(AU)

Resumo Os lutjanídeos apresentam um comportamento de desovas parceladas ao longo de uma extensa estação reprodutiva nos meses mais quentes do ano, desenvolvimento assincrônico dos ovócitos e padrão de regulação de fecundidade indeterminado. Embora muitos estudos anteriores tenham contribuído no conhecimento do ciclo reprodutivo das espécies do grupo, não foram considerados os aspectos relacionados ao percentual dos ovócitos em estágio de cortical alveoli entre as fases de maturidade sexual durante a estação reprodutiva. Este último aspecto, considerado importante para confirmação da hipótese de fecundidade do tipo indeterminada. Para isso, no presente trabalho foram analisadas 154 gônadas de fêmeas da baúna de fogo Lutjanus alexandrei obtidas da pesca artesanal em Pernambuco entre o período de outubro de 2010 a março de 2011. Foram mensurados os diâmetros dos ovócitos nas fases de maturidade sexual (desenvolvimento, capaz de desovar e ativamente desovando), e para todos os estágios ovocitários (ovócitos pre-vitelogênicos, cortical alveolar, vitelogênese primária, secundária, terciária e ovócitos hidratados), e avaliada a frequência de ocorrência ao longo do período de desova. O percentual de ovócitos em estágio cortical alveoli permaneceu constante durante o período de reprodutivo (> 37%), apresentando pouca variação entre as fases de maturidade sexual. A ausência de um intervalo na frequência de diâmetro dos ovócitos em crescimento primário e secundário entre todas as fases de maturidade sexual é um forte indicador de recrutamento contínuo de ovócitos do estoque de reserva. Além disso, a presença conjunta de ovócitos em vitelogênese terciária, ovócitos hidratados, folículos pós-ovulatórios e corpos amarelados nos cortes histológicos reforçam a hipótese de fecundidade do tipo indeterminada.(AU)

RESPOSTA SUPEROVULATÓRIA E PRODUÇÃO IN VIVO DE EMBRIÕES EM DIFERENTES RAÇAS OVINAS NATIVAS BRASILEIRAS

Com finalidade de aumentar o rebanho e a variabilidade genética, produtores de ovinos, estão optando pela biotécnica de múltipla ovulação e transferência de embriões. Porém, está técnica apresenta resultados imprevisíveis, devido a fatores intrínsecos e extrínsecos, dos quais destaca-se o efeito raça. Portanto, esse estudo avaliou o efeito raça sobre a resposta superovulatória e a produção in vivo de embriões em ovelhas nativas brasileiras (Morada Nova, Santa Inês e Somalis Brasileira). Trinta ovelhas multíparas (n = 10/ raça) foram submetidas a protocolo de nove dias de duração à base de progesterona e tratamento superovulatório com 133 mg de FSH. Nos Dias 11 (36 horas após a remoção do dispositivo) e 15 (12 horas antes da colheita não cirúrgica de embriões), os animais foram submetidos às análises ultrassonográficas em modo-B e Doppler para avaliação da população ovariana e características de perfusão ovariana. A colheita transcervical dos embriões foi realizada 7 dias após a remoção do dispositivo. Os dados foram submetidos aos testes ANOVA, teste de Tukey e teste de Bartlett; e as correlações foram testadas pelo teste de Spearman (p < 0,05). O número de folículos médios (4,0 a 5,99 mm) no Dia 11 foi maior (p = 0,0025) em ovelhas Santa Inês e Somalis Brasileira comparadas às ovelhas Morada Nova. O número de corpos lúteos e o status Superovulatório no Dia 15 foram maiores (p < 0,0001) para ovelhas Santa Inês (15,3 ± 1,4 e 2,4 ± 0,2), seguido pelas ovelhas Somalis Brasileira (10,4 ± 0,8 e 1,5 ± 0,2) e então pelas ovelhas Morada Nova (5,5 ± 1,6 e 0,8 ± 0,3). A área ovariana (p = 0,02), área de fluxo sanguíneo (p= 0,05) e porcentagem da área dopller (p = 0,007) tiveram maiores valores no Dia 15 em relação ao Dia 11 para as ovelhas Santa Inês e Somalis Brasileira. Para as características de fluxo sanguíneo de alta velocidade foram encontrados maiores valores no Dia 15 em relação ao Dia 11, independentemente da raça. Para cada raça foram registradas distintas correlações entre características ovarianas e resposta superovulatória e produção de embriões. Em conclusão, houve influência da raça sobre as respostas superovulatórias e características da vascularização ovariana. No entanto, a produção de embriões foi similar entre as raças de ovelhas nativas brasileiras.

In order to increase the herd and genetic variability, sheep producers are opting for multiple ovulation and embryo transfer. This technique, however, provides unpredictable results due to intrinsic and extrinsic factors. Among these factors the breed effect stands out. The present study assessed if the breed effect influences the follicular population, ovarian blood perfusion, superovulatory response, and the in vivo production of embryos in native Brazilian sheep breeds (Morada Nova, Santa Inês and Somalis Brasileira). Thirty multiparous ewes (n=10/breed) received intravaginal devices impregnated with 0.33 g of progesterone for nine days and superovulatory treatment with 133 mg of FSH started 60 h before the device removal. On Days 11 (36h after device removal) and 15 (12h before nonsurgical embryo recovery, NSER) the ewes were submitted to B-mode and Doppler ultrasonography to evaluate the ovarian population and characteristics of ovarian blood perfusion. NSER was performed seven days after device removal. The number of medium follicles (4.0 to 5.99 mm) on Day 11 was greater (p=.0025) in Santa Inês and Somalis Brasileira compared to Morada Nova ewes. The number of corpora lutea and superovulatory status on Day 15 was greater (p<0.0001) for Santa Inês (15.3±1.4 and 2.4±0.2), followed by Somalis Brasileira (10.4±0.8 and 1.5±0.2) and then Morada Nova ewes (5.5±1.6 and 0.8±0.3). The ovarian area (DA, p=.02), blood flow area (TA, p=.05), and DA/TAx100% (p=.007) had greater values on Day 15 in relation to Day 11 for the Santa Inês and Somalis Brasileira ewes. The high-velocity blood flow characteristics had greater values on Day 15 in relation to Day 11, regardless of breed. For each breed, different correlations were recorded between ovarian blood flow characteristics and superovulatory response and embryo yield. In conclusion, there was an influence of the breed effect on the number of medium follicles, superovulatory responses and for characteristics of ovarian blood perfusion; however, the in vivo embryo production was similar among native Brazilian sheep breeds.

Addition of sucrose on cryoprotectant solution of vitrification enhances the quality of Dorper sheep embryos produced in vivo / Adição de sacarose na solução crioprotetora de vitrificação melhora a qualidade de embriões ovinos Dorper produzidos in vivo

This study aimed to evaluate the efficacy of adding sucrose in vitrification solution of ovine embryos produced in vivo. Forty Dorper ewes were selected and superovulated. Immediately prior to the embryo collection by laparotomy, a laparoscopy was performed to verify the superovulatory response. The recovered flushing was followed by embryo evaluation and embryos were divided in two experimental groups where embryos from Control group were submitted to a traditional vitrification protocol and embryos from Sucrose group to a modified vitrification protocol with sucrose. After warming, embryos were again divided regarding cryoprotectant removal (Indirect) or not (Direct). The embryo quality was classified as embryos of degrees I (excellent or good), II (regular), III (poor) and IV (dead or degenerate). It was also verified the homogeneity of mass, occurrence of embryonic mass retraction and rupture of pellucid zone. The results were expressed as percentages and were subjected to Chi-square test with P 0.05. The embryos vitrified in the presence of sucrose had lower proportions of lower-quality embryos after warming (22.20 vs. 44.50%), higher percentages of homogeneous embryos after warming (63.89 vs. 38.89 %) while concerning other parameters there was no difference between these groups. It can be concluded that the addition of 0.4 M sucrose during vitrification improves the embryo quality.(AU)

Este estudo objetivou avaliar a eficácia da adição de sacarose na solução de vitrificação de embriões ovinos produzidos in vivo. Foram selecionadas 40 ovelhas da raça Dorper as quais foram superovuladas. Imediatamente antes da colheita de embriões por laparotomia, uma laparoscopia foi realizada para verificar a resposta superovulatória. O lavado recuperado foi submetido à procura e avaliação de embriões e estes foram divididos em dois grupos experimentais, onde os embriões do Grupo Controle foram submetidos ao protocolo tradicional de vitrificação e os embriões do Grupo Sacarose a um protocolo modificado de vitrificação com sacarose. Após a descongelação, os embriões foram novamente divididos considerando a remoção (Indireto) ou não (Direto) do crioprotetor. A qualidade embrionária foi classificada como embriões de graus I (excelente ou bom), II (regular), III (pobre) e IV (morto ou degenerado). Foi também verificada a homogeneidade da massa, ocorrência de retração da massa e ruptura de zona pelúcida. Os resultados foram expressos em porcentagem e foram submetidos ao teste do Qui-quadrado com P < 0.05. Os embriões vitrificados na presença de sacarose apresentaram menores proporções de embriões de menor qualidade após a descongelação (22,20 vs. 44,50%), e maiores percentuais de embriões homogêneos após a descongelação (63,89 vs. 38,89%) enquanto com relação aos demais parâmetros não existiram diferenças entre grupos. Pode-se concluir que a adição de 0,4 M de sacarose durante os procedimentos de vitrificação e descongelação beneficia a qualidade embrionária.(AU)

AVALIAÇÃO DA EFICIÊNCIA DA REUTILIZAÇÃO DO CIDR® NA SUPEROVULAÇÃO DE OVELHAS: UMA ABORDAGEM UTILIZANDO O DOPPLER COLORIDO

Em programas de múltipla ovulação e transferência de embriões (MOTE) são utilizados dispositivos intravaginais como o Controlador de Liberação de Droga Interna (CIDR®) impregnados de progesterona (P4) para a sincronização de estro de doadoras e receptoras. O objetivo deste estudo foi avaliar a reutilização de CIDR® na sincronização de estro em protocolos de MOTE de ovinos por meio da ultrassonografia modo Doppler colorido. Vinte ovelhas da raça Morada Nova e 20 da Santa Inês foram submetidas à colheita embrionária não cirúrgica (CENC) após protocolo de superovulação. Este consistiu na inserção de dispositivo intravaginal novo ou reutilizado (uma única vez por nove dias) à base de P4, mantido por nove dias e com aplicação de seis doses decrescentes (25-25-15-15-10-10%) de p-FSH injetadas a cada 12 h intramuscularmente (i.m.) 60 h antes da retirada do dispositivo. As avaliações ultrassonográficas modo B e Doppler colorido (Z5 Vet® Mindray, China) foram realizadas nos dias 0, 7, 9, 36h (Dia 11) após a retirada deste e 12 h antes (Dia 15) da CENC (Dia 16) para avaliação da população ovariana. As ovelhas receberam duas doses de 37,5 g de d-cloprostenol (Prolise®; Tecnopec, São Paulo, Brasil) no terceiro dia do tratamento e três administrações i.m. de flunixin-meglumine (Banamine®, MSD, São Paulo, Brasil) nos dias 3, 4 e 5 após a retirada do CIDR® sendo também monitoradas quanto à resposta ao início do estro e acasaladas com carneiros férteis. Realizou-se a CENC após a dilatação cervical usando d-cloprostenol i.m. e benzoato de estradiol (latero-vulvar) às 20h do dia anterior e oxitocina intravenoso aos 20 min antes da colheita, respectivamente, nas fêmeas que apresentavam pelo menos quatro corpos lúteos (Dia 15). Não houve diferença (p > 0,05) entre os grupos G-Novo e G-Usado quanto às variáveis início (IE) e duração do estro (DE), número de corpos lúteos (CL), folículos anovulatórios luteinizados (FAL), estruturas recuperadas (ER) e embriões viáveis (EV) e entre as porcentagens de áreas de perfusão ovariana em D11 e D15. A variável IE para o estro apresentou correlações positivas de perfusão ovariana em ambos os tratamentos e dias. Porém, apenas no Dia 11 do grupo novo esse valor foi significativo (r = - 0.63 e p = 0.01). Em relação às variáveis DE e CL estas correlações foram negativas e significativamente diferentes no D11 para o G-Novo (p = 0.01). As variáveis EV e FAL em D11 apresentaram correlações positivas no G-Novo ao passo que no G-Usado foram negativas. Porém, apenas a variável EV significativamente diferente apenas no G-Novo (r = 0.54 e p = 0.04). Por fim, ambos os tratamentos apresentaram correlações positivas nas variáveis ER, EV e FAL no D15. Porém, significativamente apenas para o G-Novo enquanto que no grupo usado esta diferença ocorreu apenas na variável DAL e a correlação foi negativa (r = 0.48 e p = 0.04). Conclui-se que o uso do CIDR® reutilizado por um único tempo nos protocolos MOTE de médio prazo foi eficiente na sincronização de estro em protocolo de MOTE de ovinos avaliado por meio da ultrassonografia modo Doppler colorido.

In multiple ovulation and embryo transfer (MOET) programs, intravaginal devices such as the Internal Drug Release Controller (CIDR®) impregnated with progesterone (P4) are used to synchronize the estrus of donors and recipients. The aim of this study was to evaluate the reuse of CIDR® in estrus synchronization in sheep MOET protocols by means of color Doppler ultrasonography. Twenty Morada Nova and 20 Santa Inês ewes were submitted to non-surgical embryonic recovery (NSER) after a superovulation protocol. This consisted of inserting a new or reused intravaginal device (once only for nine days) based on P4, maintained for nine days and with the application of six decreasing doses (25-25-15-15-10-10% ) of p-FSH injected every 12 hours intramuscularly (i.m.) 60 h before removal of the device. Mode B ultrasound and color Doppler evaluations (Z5 Vet® Mindray, China) were performed on days 0, 7, 9, 36 h (Day 11) after removal and 12 h before (Day 15) of NSER (Day 16) for evaluation of the ovarian population. The sheep received two doses of 37.5 g of d-cloprostenol (Prolise®; Tecnopec, São Paulo, Brazil) on the third day of treatment and three administrations of flunixin-meglumine i.m. (Banamine®, MSD, São Paulo, Brazil ) on days 3, 4 and 5 after the removal of the CIDR® and are also monitored for response to the onset of estrus and mated with fertile sheep. NSER was performed after cervical dilation using d-cloprostenol (i.m.) and estradiol benzoate laterovulvar at 8 pm the previous day and oxytocin intravenous at 20 min before harvest, respectively, in those females that had at least four corpora luteum (Day 15). There was no difference (p > 0.05) between the G-New and G-Used groups regarding response, estrus onset (IE), and estrus duration (DE), in the number of corpora luteum (CL), luteinized unovulatory follicles (LUF), recovered structures (RS) and viable embryos (VE) and among the percentages of areas of ovarian perfusion in D11 and D15. The IE variable for estrus showed positive correlations of ovarian perfusion in both treatments and days. However, only on Day 11 of G-New was this value significant (r = -0.63 and p = 0.01). Regarding the DE and CL variables, these correlations were negative and significantly different in the G-New and D11 (p = 0.01). The VE and LUF variables showed positive correlations in the G-New while in the G-used they were negative, but only the VE variable LUF significantly different only in the G-New (r = 0.54 and p = 0.04). Finally, both treatments showed positive correlations in the variables RS, VE and LUF at D15. However, significantly only for the G-New, whereas in the group used, this difference occurred only in the variable DAL and the correlation was negative (r = 0.48 and p = 0.04). It was concluded that the use of CIDR® reused for a single time for nine days in the medium-term MOET protocols was efficient in the estrus synchronization in the sheep MOET protocol evaluated by means of color Doppler ultrasonography.

Addition of sucrose on cryoprotectant solution of vitrification enhances the quality of Dorper sheep embryos produced in vivo / Adição de sacarose na solução crioprotetora de vitrificação melhora a qualidade de embriões ovinos Dorper produzidos in vivo

This study aimed to evaluate the efficacy of adding sucrose in vitrification solution of ovine embryos produced in vivo. Forty Dorper ewes were selected and superovulated. Immediately prior to the embryo collection by laparotomy, a laparoscopy was performed to verify the superovulatory response. The recovered flushing was followed by embryo evaluation and embryos were divided in two experimental groups where embryos from Control group were submitted to a traditional vitrification protocol and embryos from Sucrose group to a modified vitrification protocol with sucrose. After warming, embryos were again divided regarding cryoprotectant removal (Indirect) or not (Direct). The embryo quality was classified as embryos of degrees I (excellent or good), II (regular), III (poor) and IV (dead or degenerate). It was also verified the homogeneity of mass, occurrence of embryonic mass retraction and rupture of pellucid zone. The results were expressed as percentages and were subjected to Chi-square test with P 0.05. The embryos vitrified in the presence of sucrose had lower proportions of lower-quality embryos after warming (22.20 vs. 44.50%), higher percentages of homogeneous embryos after warming (63.89 vs. 38.89 %) while concerning other parameters there was no difference between these groups. It can be concluded that the addition of 0.4 M sucrose during vitrification improves the embryo quality.

Este estudo objetivou avaliar a eficácia da adição de sacarose na solução de vitrificação de embriões ovinos produzidos in vivo. Foram selecionadas 40 ovelhas da raça Dorper as quais foram superovuladas. Imediatamente antes da colheita de embriões por laparotomia, uma laparoscopia foi realizada para verificar a resposta superovulatória. O lavado recuperado foi submetido à procura e avaliação de embriões e estes foram divididos em dois grupos experimentais, onde os embriões do Grupo Controle foram submetidos ao protocolo tradicional de vitrificação e os embriões do Grupo Sacarose a um protocolo modificado de vitrificação com sacarose. Após a descongelação, os embriões foram novamente divididos considerando a remoção (Indireto) ou não (Direto) do crioprotetor. A qualidade embrionária foi classificada como embriões de graus I (excelente ou bom), II (regular), III (pobre) e IV (morto ou degenerado). Foi também verificada a homogeneidade da massa, ocorrência de retração da massa e ruptura de zona pelúcida. Os resultados foram expressos em porcentagem e foram submetidos ao teste do Qui-quadrado com P < 0.05. Os embriões vitrificados na presença de sacarose apresentaram menores proporções de embriões de menor qualidade após a descongelação (22,20 vs. 44,50%), e maiores percentuais de embriões homogêneos após a descongelação (63,89 vs. 38,89%) enquanto com relação aos demais parâmetros não existiram diferenças entre grupos. Pode-se concluir que a adição de 0,4 M de sacarose durante os procedimentos de vitrificação e descongelação beneficia a qualidade embrionária.

Múltipla ovulação e transferência de embriões em ovinos

A Múltipla Ovulação e Transferência de Embriões (MOTE) é uma biotécnica da reprodução de aplicação imediata em animais de fazenda e é uma importante ferramenta de melhoramento genético. Este trabalho foi elaborado para abordar alguns aspectos significativos para o sucesso da MOTE na espécie ovina.

Múltipla ovulação e transferência de embriões em ovinos / Multiple ovulation an embryo transfer in sheep

A Múltipla Ovulação e Transferência de Embriões (MOTE) é uma biotécnica da reprodução de aplicação imediata em animais de fazenda e é uma importante ferramenta de melhoramento genético. Este trabalho foi elaborado para abordar alguns aspectos significativos para o sucesso da MOTE na espécie ovina.

The Multiple Ovulation and Embryo Transfer (MOET) is a reproductive biotechnique that it is immediately applied in farm animals and it is an important tool of genetic improvement. This paper was prepared in order to comment some significant aspects that lead to success of MOET in ovine species.

Múltipla ovulação e transferência de embriões em ovinos / Multiple ovulation an embryo transfer in sheep

A Múltipla Ovulação e Transferência de Embriões (MOTE) é uma biotécnica da reprodução de aplicação imediata em animais de fazenda e é uma importante ferramenta de melhoramento genético. Este trabalho foi elaborado para abordar alguns aspectos significativos para o sucesso da MOTE na espécie ovina.(AU)

The Multiple Ovulation and Embryo Transfer (MOET) is a reproductive biotechnique that it is immediately applied in farm animals and it is an important tool of genetic improvement. This paper was prepared in order to comment some significant aspects that lead to success of MOET in ovine species.(AU)

EFEITO DA ADMINISTRAÇÃO DE ANTICOAGULANTES SOBRE A RECUPERAÇÃO EMBRIONÁRIA DE ÉGUAS SUPEROVULADAS

A superovulação é uma biotécnica utilizada nos programas de transferência de embrião e proporciona diversos benefícios devido ao maior número de ovulações por ciclo. Entretanto, os protocolos superovulatórios na espécie equina ainda não são utilizados rotineiramente, pois apresentam resultados inconsistentes relacionados a baixa taxa de recuperação embrionária frente ao número de ovulações, estando muito aquém do esperado quando comparado a espécie bovina. Atualmente, sabe-se que uma das possíveis causas responsáveis por este fato pode estar relacionada pela formação de grandes coágulos de sangue obstruindo a fossa da ovulação, dificultando assim a captação do oócito para o interior da tuba uterina. Desta forma, o objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da utilização de dois tipos de anticoagulantes parenterais (heparina não fracionada - HNF e heparina de baixo peso molecular - HBPM) em éguas superovuladas com extrato de pituitária equina (EPE), sobre a posterior taxa de recuperação embrionária. Foram utilizados quatro ciclos estrais de 11 éguas, sendo subdivididos em quatro grupos: Grupo 1 (G1) utilizado como controle; Grupo 2 (G2) receberam 25 mg de EPE intramuscular (IM) a cada 12 horas sendo a primeira e a terceira administração associada a 5 mg de dinoprost-trometamina (IM) e solução fisiológica 0,9% única aplicação 35 horas após indução da ovulação; Grupo 3 (G3) foi utilizado mesmo protocolo superovulatório, sendo substituído a solução fisiológica por um dos anticoagulantes, Heparina Sódica 450 UI/Kg/IV, e Grupo 4 (G4) onde as éguas foram superovuladas pelo mesmo protocolo mencionada acima e receberam 1 mg/Kg/IV de Enoxaparina Sódica. Os animais foram aleatoriamente designados aos quatros grupos em cross-over design, nos quais todos foram submetidos a todos os tratamentos. O intervalo de um ciclo estral para cada égua foi utilizado entre os tratamentos. Os tratamentos foram iniciados no sétimo dia pós-ovulação. A duração do tratamento com EPE não excedeu oito dias, sendo interrompido quando a maioria dos folículos atingissem diâmetro adequado para indução da ovulação. A indução da ovulação foi realizada utilizando 1 ml (250µg) de GnRH (Histrelina Acetato) intramuscular e 2500 UI de hCG (Gonadotrofina Coriônica Humana) intravenoso quando o(s) folículo(s) atingisse um diâmetro médio entre eles de 35 mm em ambos os grupos. A partir da indução da ovulação, 24 horas após as éguas foram inseminadas com sêmen a fresco de um garanhão de fertilidade comprovada. A colheita de embriões foi realizada no nono dia após a primeira ovulação detectada. Para cada animal submetido ao tratamento com anticoagulante foram realizadas avaliações laboratoriais (hemograma e coagulograma). Para isso foram padronizados os seguintes momentos de avaliação; para hemograma as amostras de sangue foram coletadas nos momentos prévio a administração do anticoagulante (T0 hora) servindo como controle, e três horas após a aplicação do anticoagulante (T3 horas), já para o coagulograma as amostras foram coletadas nos momentos T0, T1, T2, T3, T6, T9 e T12 horas após aplicação do anticoagulante. Os resultados demostraram maior (p<0,05) número de ovulações nos grupos de éguas superovuladas (G2 4,6±0,4; G3 5,2±0,5; G4 4,9±0,6) em relação ao G1 (1±0). Já o número de embriões recuperados por égua não diferiu (p>0,05) entre o G1 (0,6±0,2) e G2 (1,6±0,5), no entanto, foi maior para os grupos que receberam anticoagulantes G3 (2,5±0,3) e G4 (2,6±0,6) em relação ao G1. Quando a taxa de recuperação embrionária por folículo ovulado foi avaliado, os resultados demostraram que os grupos tratados com anticoagulantes apresentaram taxas similares (G3 50%; G4 52%) em comparação ao grupo controle (G1 64%), já o grupo superovulado controle (G2 36%) apresentou tendência de redução (P = 0,8) em relação ao G1. Em relação a avaliação laboratorial, os valores hematológicos dos animais em ambos os grupos que receberam anticoagulante (G3 e G4) no momento T3 horas não diferiu (p>0,05) em relação ao momento T0 hora, mantendo-se dentro dos valores de referência. Quanto ao coagulograma, para o G3 os valores de tempo de tromboplastina parcial ativado (TTPA) a partir de uma hora após aplicação (T1 hora) apresentou aumento significativo se manteve até doze horas após aplicação (T12 horas), onde todos os momentos diferiram-se (p<0,05) em relação ao momento (T0 hora), já para o tempo de protrombina (TP) houve um aumento (p<0,05) após aplicação do anticoagulante (T1-T2 horas) em relação ao tempo de avaliação pré aplicação (T0 hora), reduzindo-se gradativamente a partir de três horas até doze horas após aplicação (T3-T12 horas), não diferindo (p>0,05) em relação do T0 hora. Para o G4, uma hora após a aplicação (T1 hora) houve um aumento (p<0,05) da atividade plasmática fator anti-Xa, apresentando um constante declínio até doze horas (T12), não apresentando diferença (p>0,05) apenas neste momento em relação ao T9 horas e T0 hora. Desta forma, pode-se concluir que o protocolo proposto no presente estudo é uma alternativa para melhoria das taxas de recuperação embrionária em éguas superovuladas com EPE, mostrando-se seguro para o uso de ambos os tipos de anticoagulantes sem apresentar alterações hematológicas ou efeitos adversos que possam comprometer ou colocar em risco a condição clínica do animal.

Superovulation is a biotechnic from embryo transfer programs providing several benefits due to the higher number of ovulations per cycle. However, superovulation protocols in the equine species are not yet routinely used, as they present inconsistent results related to the low embryonic recovery rate concerning the number of ovulations, being far below expectations when compared to the bovine species. Currently, one of the possible causes responsible for this fact may be related to the development of large blood clots obstructing the ovulation fossa, making it difficult to capture the oocyte into the fallopian tube. Therefore, this study aimed to evaluate the effect of two types of parenteral anticoagulants (unfractionated heparin - HNF and low molecular weight heparin - LMWH) on equine pituitary extract (EPE) superovulated mares of embryonic recovery. Four estrous cycles of 11 mares were used and subdivided into four groups: Group 1 (G1) as a control; Group 2 (G2) received 25 mg intramuscular EPE (MI) every 12 hours being the first and third administration associated with 5 mg dinoprost-tromethamine (IM) and 0.9% saline only application 35 hours after ovulation induction; Group 3 (G3) in the same superovulation protocol, replacing the physiological solution with one of the anticoagulants, Sodium Heparin 450 IU / kg / IV, and Group 4 (G4) where the mares were superovulated by the same protocol mentioned above and received 1 mg. / Kg / IV of Enoxaparin Sodium. All animals were randomly assigned to the four cross-over design groups, in which all underwent all treatments. The interval of one estrous cycle for each mare was used between treatments. Treatments started on the seventh day after ovulation. EPE treatment did not exceed eight days being interrupted when most follicles reached the appropriate diameter for ovulation induction. Ovulation induction was performed using 1 ml (250µg) of intramuscular GnRH (Histrelin Acetate) and 2500 IU of intravenous hCG (Human Chorionic Gonadotropin) when the follicle (s) reached a mean diameter of 35 mm in both groups. Twenty-four hours afterward ovulation induction the mares were inseminated with fresh semen from a proven fertility stallion. Embryo collection was performed on the ninth day after the first ovulation detected. Each animal at anticoagulant treatment was submitted to laboratory evaluations (blood count and coagulogram). For blood count blood samples were collected before anticoagulant administration (T0 hour) serving as a control, and three hours after applying anticoagulant (T3 hours), while for the coagulogram the samples were collected at T0, T1, T2, T3, T6, T9 and T12 hours after anticoagulant application. Groups of superovulated mares showed higher (p <0.05) number of ovulations (G2 - 4.6 ± 0.4; G3 - 5.2 ± 0.5; G4 - 4.9 ± 0.6) in relation to G1 (1 ± 0). The number of embryos recovered by mare did not differ (p> 0.05) between G1 (0.6 ± 0.2) and G2 (1.6 ± 0.5), however, it was higher for the groups that received anticoagulants G3 (2.5 ± 0.3) and G4 (2.6 ± 0.6) concerning G1. Evaluating the embryo recovery rate by ovulated follicle, anticoagulant-treated groups had similar rates (G3 - 50%; G4 - 52%) compared to the control group (G1 - 64%). Superovulated control (G2 - 36%) showed a tendency to decrease (P = 0.8) concerning G1. Hematological values in both groups receiving anticoagulant (G3 and G4) at T3 hours did not differ (p> 0.05) from T0 hour, remaining the reference values. As for the coagulogram, for G3 the activated partial thromboplastin time (TTPA) values from one hour after application (T1 hour) showed a significant increase until twelve hours after application (T12 hours), where all moments differed (p <0.05) to (T0 hour). Prothrombin time (PT) had an increase (p <0.05) after anticoagulant application (T1-T2 hours) about pre-application evaluation (T0 hour), gradually decreasing from three hours to twelve hours after application (T3-T12 hours), not differing (p> 0.05) from T0 hour. For G4, one hour after application (T1 hour) there was an increase (p <0.05) of anti-Xa factor plasma activity, showing a constant decline up to twelve hours (T12), with no difference (p> 0, 05) only at this moment in relation to T9 hours and T0 hour. The protocol proposed in this study is an alternative for improving embryo recovery rates in EPE superovulated mares, proving safe use of both types of anticoagulants without presenting hematological alterations or adverse effects compromising or endangering the clinical condition of the animal.

Uso de LH ou eCG no último dia do protocolo superovulatório em bovinos / Use of LH or eCG in the last day of superovulatolatory protocol in cattle

In the last decades several hormonal treatments to induce multiple ovulation and embryo transfer (MOET) have been developed. Tight control of the time of ovulation allowed the use of fixed-time artificial insemination (FTAI) in bovine embryos donors, facilitating animal management. Although, protocols that allow FTAI have evolved and yield as much embryo as conventional protocols that requires estrus detection, substantial increase in viable embryo production has not been observed in superestimulated bovine cattle. The present review put emphasis on superestimulatory protocols in wich the last two doses of pFSH are replaced by eCG or LH. Recent results indicate that an extra LH stimulus (using eCG or LH), on the last day of P-36 superestimulatory treatment, seems to improve transferable embryo yield in both Bos taurus and Bos indicus cattle.

Na última década, inúmeros tratamentos para induzir ovulação múltipla e transferência de embriões foram desenvolvidos. A sincronização precisa da ovulação permitiu a utilização da inseminação artificial em tempo fixo (IATF) em doadoras de embriões, facilitando o manejo destes animais. Embora os protocolos que permitem a IATF tenham evoluído e produzam tantos embriões viáveis quanto os protocolos convencionais que necessitam da observação do estro, não se observou aumento significativo na produção de embriões oriundos de fêmeas bovinas superestimuladas. Nesta mini-revisão será dada ênfase aos protocolos superestimulatórios nos quais as últimas duas doses de pFSH são substituídas por eCG or LH.Estudos recentes indicam que um estímulo extra de LH (por meio da aplicação de eCG ou LH), no último dia do tratamento superestimulatório, parece aumentar o número de embriões viáveis de raças zebuínas e taurinas.

Uso de LH ou eCG no último dia do protocolo superovulatório em bovinos / Use of LH or eCG in the last day of superovulatolatory protocol in cattle

In the last decades several hormonal treatments to induce multiple ovulation and embryo transfer (MOET) have been developed. Tight control of the time of ovulation allowed the use of fixed-time artificial insemination (FTAI) in bovine embryos donors, facilitating animal management. Although, protocols that allow FTAI have evolved and yield as much embryo as conventional protocols that requires estrus detection, substantial increase in viable embryo production has not been observed in superestimulated bovine cattle. The present review put emphasis on superestimulatory protocols in wich the last two doses of pFSH are replaced by eCG or LH. Recent results indicate that an extra LH stimulus (using eCG or LH), on the last day of P-36 superestimulatory treatment, seems to improve transferable embryo yield in both Bos taurus and Bos indicus cattle.(AU)

Na última década, inúmeros tratamentos para induzir ovulação múltipla e transferência de embriões foram desenvolvidos. A sincronização precisa da ovulação permitiu a utilização da inseminação artificial em tempo fixo (IATF) em doadoras de embriões, facilitando o manejo destes animais. Embora os protocolos que permitem a IATF tenham evoluído e produzam tantos embriões viáveis quanto os protocolos convencionais que necessitam da observação do estro, não se observou aumento significativo na produção de embriões oriundos de fêmeas bovinas superestimuladas. Nesta mini-revisão será dada ênfase aos protocolos superestimulatórios nos quais as últimas duas doses de pFSH são substituídas por eCG or LH.Estudos recentes indicam que um estímulo extra de LH (por meio da aplicação de eCG ou LH), no último dia do tratamento superestimulatório, parece aumentar o número de embriões viáveis de raças zebuínas e taurinas.(AU)