Fetal sexing in small ruminants through visualization of the genital tubercle / Sexagem fetal em pequenos ruminantes por meio da visibilização do tubérculo genital

The objective of this study was to verify the accuracy of sexing and fetal number estimation in small ruminants by ultrasonographic examination. Fifty fetuses from 36 sheep and 23 fetuses from 11 goats were evaluated. In the case of sheep, twenty-four, ten, and two pregnancy were single, double, and triple, respectively. Regarding the goats, three, five, two, and one simple pregnancy were single, double, triple, and quadruple, respectively. The evaluations were performed on days 55 and 65 of gestation, by means of transrectal ultrasonographic examination, using a dual-frequency linear transducer, (6.0 and 8.0 MHz). Fetal sex was diagnosed by the location of the genital tubercle or visualization of external genitalia. The accuracy of fetal sexing was evaluated using the Chi-square test (X2) considering a 5% significance level. The gestational period interfered in the accuracy of fetal sexing in both species (P 0.05). Obtained results showed 30% and 82.61% accuracy on day 55 of gestation, and 90% and 95.83% on day 65 for goats and sheep, respectively. The fetal sex and the type of pregnancy did not interfere in the sexing accuracy in both species during the evaluated periods (P> 0.05). Thus, B-mode ultrasonography is an efficient method to perform an early diagnosis of fetal sex and to determine the number of fetuses in the studied small ruminants on day 65 of gestation. In addition, the accuracy of fetal sexing is not influenced by the type of pregnancy or fetal sex.(AU)

O objetivo com este estudo foi verificar a acurácia da sexagem e da estimativa do número fetal em pequenos ruminantes por meio de exame ultrassonográfico. Foram avaliados 50 fetos de 36 ovelhas e 23 fetos de 11 cabras. No caso das ovelhas, 24, 10 e duas gestações foram simples, duplas e triplas, respectivamente. Enquanto nas cabras, três, cinco, duas e uma gestação foram simples, duplas, triplas e quádrupla, respectivamente. As avaliações foram realizadas aos 55 e 65 dias de gestação, por meio de exame ultrassonográfico transretal, utilizando-se um transdutor linear de dupla frequência (6,0 e 8,0 MHz). O sexo fetal foi diagnosticado pela localização do tubérculo genital ou visibilização da genitália externa. A acurácia da sexagem fetal foi avaliada por meio do teste Qui-quadrado (X2) considerando 5% de significância. O período gestacional interferiu (P 0,05) na acurácia da sexagem fetal. Obteve-se 30% e 82,61% de acurácia aos 55 dias de gestação, e 90% e 95,83% aos 65 dias, para cabras e ovelhas, respectivamente. O sexo fetal e o tipo de gestação não interferiram (P>0,05) na acurácia da sexagem em ambas as espécies nos períodos avaliados. Desta forma, a ultrassonografia em modo-B é um método eficiente para realização de diagnóstico precoce do sexo fetal e para determinação do número de fetos nos pequenos ruminantes no 65° dia da gestação, além disso, a acurácia da sexagem fetal não é influenciada pelo tipo de gestação, nem pelo sexo fetal.(AU)

Fetal sexing in small ruminants through visualization of the genital tubercle / Sexagem fetal em pequenos ruminantes por meio da visibilização do tubérculo genital

The objective of this study was to verify the accuracy of sexing and fetal number estimation in small ruminants by ultrasonographic examination. Fifty fetuses from 36 sheep and 23 fetuses from 11 goats were evaluated. In the case of sheep, twenty-four, ten, and two pregnancy were single, double, and triple, respectively. Regarding the goats, three, five, two, and one simple pregnancy were single, double, triple, and quadruple, respectively. The evaluations were performed on days 55 and 65 of gestation, by means of transrectal ultrasonographic examination, using a dual-frequency linear transducer, (6.0 and 8.0 MHz). Fetal sex was diagnosed by the location of the genital tubercle or visualization of external genitalia. The accuracy of fetal sexing was evaluated using the Chi-square test (X2) considering a 5% significance level. The gestational period interfered in the accuracy of fetal sexing in both species (P 0.05). Obtained results showed 30% and 82.61% accuracy on day 55 of gestation, and 90% and 95.83% on day 65 for goats and sheep, respectively. The fetal sex and the type of pregnancy did not interfere in the sexing accuracy in both species during the evaluated periods (P> 0.05). Thus, B-mode ultrasonography is an efficient method to perform an early diagnosis of fetal sex and to determine the number of fetuses in the studied small ruminants on day 65 of gestation. In addition, the accuracy of fetal sexing is not influenced by the type of pregnancy or fetal sex.

O objetivo com este estudo foi verificar a acurácia da sexagem e da estimativa do número fetal em pequenos ruminantes por meio de exame ultrassonográfico. Foram avaliados 50 fetos de 36 ovelhas e 23 fetos de 11 cabras. No caso das ovelhas, 24, 10 e duas gestações foram simples, duplas e triplas, respectivamente. Enquanto nas cabras, três, cinco, duas e uma gestação foram simples, duplas, triplas e quádrupla, respectivamente. As avaliações foram realizadas aos 55 e 65 dias de gestação, por meio de exame ultrassonográfico transretal, utilizando-se um transdutor linear de dupla frequência (6,0 e 8,0 MHz). O sexo fetal foi diagnosticado pela localização do tubérculo genital ou visibilização da genitália externa. A acurácia da sexagem fetal foi avaliada por meio do teste Qui-quadrado (X2) considerando 5% de significância. O período gestacional interferiu (P 0,05) na acurácia da sexagem fetal. Obteve-se 30% e 82,61% de acurácia aos 55 dias de gestação, e 90% e 95,83% aos 65 dias, para cabras e ovelhas, respectivamente. O sexo fetal e o tipo de gestação não interferiram (P>0,05) na acurácia da sexagem em ambas as espécies nos períodos avaliados. Desta forma, a ultrassonografia em modo-B é um método eficiente para realização de diagnóstico precoce do sexo fetal e para determinação do número de fetos nos pequenos ruminantes no 65° dia da gestação, além disso, a acurácia da sexagem fetal não é influenciada pelo tipo de gestação, nem pelo sexo fetal.

Técnicas de citologia aspirativa, biópsia e citobloco de medula óssea para identificação e determinação de intensidade parasitária na leishmaniose visceral canina / Techniques of aspiration cytology, biopsy and cell block of the bone marrow for the identification and determination of parasite intensity in Canine Visceral Leishmaniasis

O objetivo com este estudo foi comparar as técnicas de citologia aspirativa, biópsia e citobloco para identificação e quantificação parasitológica de Leishmania (Leishmania) infantum chagasi em medula óssea de cães. Amostras de tecido medular de 26 animais, em diferentes estágios clínico-laboratoriais da doença, foram estudadas obedecendo-se os mesmos critérios de investigação nas técnicas de citologia aspirativa, biópsia e citobloco. O menor número de campos para a confirmação parasitológica foi constatado no esfregaço direto obtido por citologia aspirativa. O estágio clínico-laboratorial não influenciou no número de campos necessários para a primeira visualização do agente em nenhuma das técnicas (p>0,05), e menor intensidade parasitária foi observada nas lâminas de citobloco. As técnicas de citologia aspirativa e biópsia concordaram na estimativa do coeficiente de infectividade no tecido estudado (p<0,05). Apesar de a técnica de citobloco permitir a concentração de células e o melhor reaproveitamento de amostras, não demonstrou ser um método adequado para rápida identificação e quantificação parasitológica na leishmaniose visceral canina. Considerando-se suas vantagens, a citologia aspirativa foi o melhor método para detecção microscópica do parasito e determinação do nível de intensidade parasitária no tecido estudado.(AU)

The aim of the present study was to compare the aspiration cytology, biopsy and cell block techniques for identification and parasitological quantification of Leishmania (Leishmania) infantum chagasi in dog bone marrow. Bone marrow tissue samples from 26 animals, in different clinical-laboratory stages of the disease, were studied according to the same criteria of investigation in the aspiration cytology, biopsy and cell block techniques. The lowest number of fields for the parasitological confirmation was found in the direct smear obtained by aspiration cytology. The clinical-laboratory stage did not influence the number of fields required for the first visualization of the agent in any of the techniques (p> 0.05) and less parasitic intensity was observed in the cell block slides. The aspiration cytology and biopsy techniques agreed on the estimation of infectivity coefficient in the tissue studied (p< 0.05). Although the cell block technique allows the concentration of cells and better reutilization of samples, it has not been shown to be an adequate method for rapid identification and parasitological quantification in canine visceral leishmaniasis. Considering its advantages, aspiration cytology was the best method for microscopic detection of the parasite and determination of the level of parasite intensity in the tissue studied.(AU)

Técnicas de citologia aspirativa, biópsia e citobloco de medula óssea para identificação e determinação de intensidade parasitária na leishmaniose visceral canina / Techniques of aspiration cytology, biopsy and cell block of the bone marrow for the identification and determination of parasite intensity in Canine Visceral Leishmaniasis

O objetivo com este estudo foi comparar as técnicas de citologia aspirativa, biópsia e citobloco para identificação e quantificação parasitológica de Leishmania (Leishmania) infantum chagasi em medula óssea de cães. Amostras de tecido medular de 26 animais, em diferentes estágios clínico-laboratoriais da doença, foram estudadas obedecendo-se os mesmos critérios de investigação nas técnicas de citologia aspirativa, biópsia e citobloco. O menor número de campos para a confirmação parasitológica foi constatado no esfregaço direto obtido por citologia aspirativa. O estágio clínico-laboratorial não influenciou no número de campos necessários para a primeira visualização do agente em nenhuma das técnicas (p>0,05), e menor intensidade parasitária foi observada nas lâminas de citobloco. As técnicas de citologia aspirativa e biópsia concordaram na estimativa do coeficiente de infectividade no tecido estudado (p<0,05). Apesar de a técnica de citobloco permitir a concentração de células e o melhor reaproveitamento de amostras, não demonstrou ser um método adequado para rápida identificação e quantificação parasitológica na leishmaniose visceral canina. Considerando-se suas vantagens, a citologia aspirativa foi o melhor método para detecção microscópica do parasito e determinação do nível de intensidade parasitária no tecido estudado.(AU)

The aim of the present study was to compare the aspiration cytology, biopsy and cell block techniques for identification and parasitological quantification of Leishmania (Leishmania) infantum chagasi in dog bone marrow. Bone marrow tissue samples from 26 animals, in different clinical-laboratory stages of the disease, were studied according to the same criteria of investigation in the aspiration cytology, biopsy and cell block techniques. The lowest number of fields for the parasitological confirmation was found in the direct smear obtained by aspiration cytology. The clinical-laboratory stage did not influence the number of fields required for the first visualization of the agent in any of the techniques (p> 0.05) and less parasitic intensity was observed in the cell block slides. The aspiration cytology and biopsy techniques agreed on the estimation of infectivity coefficient in the tissue studied (p< 0.05). Although the cell block technique allows the concentration of cells and better reutilization of samples, it has not been shown to be an adequate method for rapid identification and parasitological quantification in canine visceral leishmaniasis. Considering its advantages, aspiration cytology was the best method for microscopic detection of the parasite and determination of the level of parasite intensity in the tissue studied.(AU)

Bovine fetal testicular development in the Nellore breed / Desenvolvimento testicular fetal bovino na raça Nelore

The study of gonadal development improves the understanding of factors that can influence the reproductive development process. This study aims to characterize bovine fetal testicular development and the testosterone level in the Nellore breed. For the study, 162 bovine fetuses aged between 3 and 8 months were collected from Nellore cows at a local abattoir. The fetal age was estimated by DP=8.4+0.087L+5.46?L, where DP is the estimated pregnancy day and L represents fetal length. The fetal gonadal weight (g), width (cm), and thickness (cm) were measured. Thereafter, the gonads were submitted to classic histology processes in 3-µm-thick slices cut at 210 µm intervals. The Sertoli cells, Leydig cells, and germ cells were counted. Blood samples were collected from umbilical cords for testosterone levels. The data were analyzed using the Spearman correlation test followed by Principal Component Analysis and one-way ANOVA to compare the averages between months. The testicular weight and volume were found to have a positive correlation with the numbers of Sertoli cells (r = 0.84; p 0.0001 and r = 0.92; p 0.0001, respectively), Leydig cells (r = 0.80; p 0.0001 and r = 0.90; p 0.0001, respectively), and germ cells (r = 0.84; p 0.0001 and r = 0.93; p 0.0001, respectively) and to be negatively correlated with testosterone plasmatic concentration (r = -0.31; p = 0.0001 andr = -0.22; p = 0.006, respectively) during pregnancy. After the fifth month, the numbers of Sertolicells, Leydig cells and germ cells differed (p < 0.0001) from the following gestational months. Thehighest testosterone concentration (p = 0.007) was observed in the fifth month of gestation and wasfollowed by a concentration decrease in the seventh and eighth months. The increase in cell quantitywas responsible for the increase in testicular weight and volume during fetal development. On the otherhand...

O estudo do desenvolvimento gonadal melhora o entendimento dos fatores que podem influenciar o processo de desenvolvimento reprodutivo. Esse estudo objetivou caracterizar o desenvolvimento testicular bovino e os níveis de testosterona na raça Nelore. Para o estudo, 162 fetos bovinos com idade entre 3 e 8 meses foram coletados de vacas Nelore em frigorífico local. A idade fetal foi estimada pela fórmula DP=8.4+0.087L+5.46?L, onde DP corresponde ao dia estimado de gestação e L representa o comprimento fetal. Foram medidos o peso gonadal fetal (g), a largura (cm) e a espessura (cm). Após as mensurações, as gônadas foram submetidas ao processamento histológico clássico, sendo utilizadas para elaboração das lâminas cortes com 3 µm de espessura com intervalos entre cortes de 210 µm. As células de Sertoli, Leydig e germinativas foram contadas. Amostras de sangue foram coletadas do cordão umbilical para quantificação dos níveis de testosterona. Os dados foram analisados utilizando a correlação de Spearman seguida pela análise de componentes principais, sendo o comparativo de médias entre os meses realizados utilizando o one-way ANOVA. O peso e o volume testicular apresentaram correlação positiva com o número de células de Sertoli (r = 0,84; p 0,0001 e r = 0,92; p 0,0001, respectivamente), células de Leydig (r = 0,80; p 0,0001 e r = 0,90; p 0,0001, respectivamente), porém foramnegativamente correlacionados com a concentração plasmática de testosterona (r = -0,31; p = 0,0001e r = -0,22; p = 0,006, respectivamente) durante a gestação. Após o quinto mês, o número de célulasde Sertoli, de Leydig e germinativas diferiram (p < 0,0001) dos meses seguintes de gestação. A maiorconcentração de testosterona encontrada (p < 0,007) foi observada no quinto mês de gestação, sendoseguida por uma diminuição entre o sétimo e oitavo mês. O aumento na quantidade de células duranteo desenvolvimento fetal foi o responsável pelo aumento do peso e volume testicular...

Bovine fetal testicular development in the Nellore breed / Desenvolvimento testicular fetal bovino na raça Nelore

The study of gonadal development improves the understanding of factors that can influence the reproductive development process. This study aims to characterize bovine fetal testicular development and the testosterone level in the Nellore breed. For the study, 162 bovine fetuses aged between 3 and 8 months were collected from Nellore cows at a local abattoir. The fetal age was estimated by DP=8.4+0.087L+5.46?L, where DP is the estimated pregnancy day and L represents fetal length. The fetal gonadal weight (g), width (cm), and thickness (cm) were measured. Thereafter, the gonads were submitted to classic histology processes in 3-µm-thick slices cut at 210 µm intervals. The Sertoli cells, Leydig cells, and germ cells were counted. Blood samples were collected from umbilical cords for testosterone levels. The data were analyzed using the Spearman correlation test followed by Principal Component Analysis and one-way ANOVA to compare the averages between months. The testicular weight and volume were found to have a positive correlation with the numbers of Sertoli cells (r = 0.84; p 0.0001 and r = 0.92; p 0.0001, respectively), Leydig cells (r = 0.80; p 0.0001 and r = 0.90; p 0.0001, respectively), and germ cells (r = 0.84; p 0.0001 and r = 0.93; p 0.0001, respectively) and to be negatively correlated with testosterone plasmatic concentration (r = -0.31; p = 0.0001 andr = -0.22; p = 0.006, respectively) during pregnancy. After the fifth month, the numbers of Sertolicells, Leydig cells and germ cells differed (p < 0.0001) from the following gestational months. Thehighest testosterone concentration (p = 0.007) was observed in the fifth month of gestation and wasfollowed by a concentration decrease in the seventh and eighth months. The increase in cell quantitywas responsible for the increase in testicular weight and volume during fetal development. On the otherhand...(AU)

O estudo do desenvolvimento gonadal melhora o entendimento dos fatores que podem influenciar o processo de desenvolvimento reprodutivo. Esse estudo objetivou caracterizar o desenvolvimento testicular bovino e os níveis de testosterona na raça Nelore. Para o estudo, 162 fetos bovinos com idade entre 3 e 8 meses foram coletados de vacas Nelore em frigorífico local. A idade fetal foi estimada pela fórmula DP=8.4+0.087L+5.46?L, onde DP corresponde ao dia estimado de gestação e L representa o comprimento fetal. Foram medidos o peso gonadal fetal (g), a largura (cm) e a espessura (cm). Após as mensurações, as gônadas foram submetidas ao processamento histológico clássico, sendo utilizadas para elaboração das lâminas cortes com 3 µm de espessura com intervalos entre cortes de 210 µm. As células de Sertoli, Leydig e germinativas foram contadas. Amostras de sangue foram coletadas do cordão umbilical para quantificação dos níveis de testosterona. Os dados foram analisados utilizando a correlação de Spearman seguida pela análise de componentes principais, sendo o comparativo de médias entre os meses realizados utilizando o one-way ANOVA. O peso e o volume testicular apresentaram correlação positiva com o número de células de Sertoli (r = 0,84; p 0,0001 e r = 0,92; p 0,0001, respectivamente), células de Leydig (r = 0,80; p 0,0001 e r = 0,90; p 0,0001, respectivamente), porém foramnegativamente correlacionados com a concentração plasmática de testosterona (r = -0,31; p = 0,0001e r = -0,22; p = 0,006, respectivamente) durante a gestação. Após o quinto mês, o número de célulasde Sertoli, de Leydig e germinativas diferiram (p < 0,0001) dos meses seguintes de gestação. A maiorconcentração de testosterona encontrada (p < 0,007) foi observada no quinto mês de gestação, sendoseguida por uma diminuição entre o sétimo e oitavo mês. O aumento na quantidade de células duranteo desenvolvimento fetal foi o responsável pelo aumento do peso e volume testicular...(AU)

Efeito da adição do ácido linoleico conjugado no cultivo in vitro de embriões F1 Holandês x Zebu na sobrevivência pós-vitrificação

ABSTRACT The effect of adding conjugated linoleic acid (CLA) to the culture media on the viability after cryopreservation of F1 Holstein X Zebu embryos was evaluated. Three different culture media were tested: control (n = 340 oocytes): SOF medium and fetal bovine serum (FBS) without the CLA; FBS + CLA (n = 359 oocytes): SOF, FBS and CLA; CLA (n = 339 oocytes): SOF and CLA without the FBS. The produced blastocysts were subjected to vitrification, by the Open Pulled Straw method. Fifteen blastocysts per treatment were fixed for lipid quantification by staining with Sudan Black B. Embryo re-expansion and hatching capability were used to assess viability (control = 27; FBS + CLA = 30; CLA = 17). Transfers of one or two embryos to recipients were performed to evaluate in vivo survival: T1 [recipients that received one blastocyst (n=17 embryos, Control=5, FBS+CLA=6 and CLA=6)]; T2 [recipients that received two blastocysts (n =54 embryos, Control=18, FBS+CLA=14 and CLA=22)]. There was no difference in cleavage rate (62.1%; 74%; 74% for Control; FBS + CLA, CLA, respectively), blastocyst production in relation to the cleaved structures (59.7%; 47.7%; 38 3% for Control; FBS + CLA, CLA, respectively) and blastocyst production relative to the total oocytes (37.1%, 35.4%, 28.3% for Control; FBS + CLA, CLA, respectively) between treatments (P> 0.05). A reduction of lipid droplets was observed in embryos cultured in medium supplemented with CLA compared to embryos cultured in the FCS in the absence and presence of CLA (P 0.05). The reexpansion rate was higher in the Control group (70.4%) compared to the CLA (47.1%) and lowest for FBS+CLA (43.3%) (P 0.05). The hatching rates were similar among treatments, 42.1%; 23.1%; 25% for control; SFB + CLA; CLA respectively (P>0.05). Only one pregnancy was observed in early and confirmatory diagnosis, as the result of a Control group embryo transfer. Although embryos cultured with CLA have shown smaller intracytoplasmic lipid content, no difference was observed in viability following vitrification between treatments.

RESUMO Avaliou-se o efeito da adição do ácido linoleico conjugado (CLA) ao meio de cultivo in vitro na viabilidade pós-vitrificação de embriões F1 Holandês x Zebu. Foram utilizados três meios de cultivo: controle (n=340 oócitos): meio SOF e soro fetal bovino (SFB), sem o CLA; SFB+CLA (n=359 oócitos): meio SOF, SFB e CLA; CLA (n=339 oócitos): meio SOF e CLA, sem o SFB. Todos os blastocistos produzidos foram submetidos à vitrificação, pelo método de Open Pulled Straw. Quinze blastocistos de cada tratamento foram fixados para quantificação lipídica por coloração com Sudan Black B. Para avaliar a viabilidade embrionária, foi observada a capacidade de reexpansão e eclosão pós-aquecimento dos embriões (controle=27; SFB+CLA=30; CLA=17). Foram realizadas transferências em um ou dois embriões por receptora para avaliação da sobrevivência in vivo: T1 [receptoras que receberam um blastocisto (n=17 embriões, sendo controle=5, SFB+CLA=6 e CLA=6)]; T2 [receptoras que receberam dois blastocistos, (n= 54 embriões, sendo controle=18, SFB+CLA=14 e CLA=22)]. Não houve diferença nas taxas de clivagem (62,1%; 74,0%; 74,0% para controle; SFB+CLA; CLA, respectivamente), produção de blastocistos em relação aos clivados (59,7%; 47,7%; 38,3% para controle; SFB+CLA; CLA, respectivamente) e produção de blastocistos em relação ao total de oócitos (37,1%; 35,4%; 28,3% para controle; SFB+CLA; CLA, respectivamente) (P>0,05). Houve diminuição de gotículas lipídicas nos embriões cultivados em meio suplementado com CLA em relação aos embriões cultivados na presença do SFB e na ausência do CLA (P 0,05). A taxa de reexpansão foi maior no grupo controle (70,4%) em relação ao CLA (47,1%) e menor no grupo SFB+CLA (43,3%) (P 0,05). O CLA foi eficaz em reduzir a deposição de lipídeos intracitoplasmáticos nas células embrionárias, porém não houve diferença de viabilidade após a desvitrificação dos embriões.

Efeito da adição do ácido linoleico conjugado no cultivo in vitro de embriões F1 Holandês x Zebu na sobrevivência pós-vitrificação / Effect of conjugated linoleic acid addition in in vitro culture medium in F1 Holstein X Zebu embryo survival post vitrification

Avaliou-se o efeito da adição do ácido linoleico conjugado (CLA) ao meio de cultivo in vitro na viabilidade pós-vitrificação de embriões F1 Holandês x Zebu. Foram utilizados três meios de cultivo: controle (n=340 oócitos): meio SOF e soro fetal bovino (SFB), sem o CLA; SFB+CLA (n=359 oócitos): meio SOF, SFB e CLA; CLA (n=339 oócitos): meio SOF e CLA, sem o SFB. Todos os blastocistos produzidos foram submetidos à vitrificação, pelo método de Open Pulled Straw. Quinze blastocistos de cada tratamento foram fixados para quantificação lipídica por coloração com Sudan Black B. Para avaliar a viabilidade embrionária, foi observada a capacidade de reexpansão e eclosão pós-aquecimento dos embriões (controle=27; SFB+CLA=30; CLA=17). Foram realizadas transferências em um ou dois embriões por receptora para avaliação da sobrevivência in vivo: T1 [receptoras que receberam um blastocisto (n=17 embriões, sendo controle=5, SFB+CLA=6 e CLA=6)]; T2 [receptoras que receberam dois blastocistos, (n= 54 embriões, sendo controle=18, SFB+CLA=14 e CLA=22)]. Não houve diferença nas taxas de clivagem (62,1%; 74,0%; 74,0% para controle; SFB+CLA; CLA, respectivamente), produção de blastocistos em relação aos clivados (59,7%; 47,7%; 38,3% para controle; SFB+CLA; CLA, respectivamente) e produção de blastocistos em relação ao total de oócitos (37,1%; 35,4%; 28,3% para controle; SFB+CLA; CLA, respectivamente) (P>0,05). Houve diminuição de gotículas lipídicas nos embriões cultivados em meio suplementado com CLA em relação aos embriões cultivados na presença do SFB e na ausência do CLA (P<0,05). A taxa de reexpansão foi maior no grupo controle (70,4%) em relação ao CLA (47,1%) e menor no grupo SFB+CLA (43,3%) (P<0,05). O CLA foi eficaz em reduzir a deposição de lipídeos intracitoplasmáticos nas células embrionárias, porém não houve diferença de viabilidade após a desvitrificação dos embriões.(AU)

The effect of adding conjugated linoleic acid (CLA) to the culture media on the viability after cryopreservation of F1 Holstein X Zebu embryos was evaluated. Three different culture media were tested: control (n = 340 oocytes): SOF medium and fetal bovine serum (FBS) without the CLA; FBS + CLA (n = 359 oocytes): SOF, FBS and CLA; CLA (n = 339 oocytes): SOF and CLA without the FBS. The produced blastocysts were subjected to vitrification, by the Open Pulled Straw method. Fifteen blastocysts per treatment were fixed for lipid quantification by staining with Sudan Black B. Embryo re-expansion and hatching capability were used to assess viability (control = 27; FBS + CLA = 30; CLA = 17). Transfers of one or two embryos to recipients were performed to evaluate in vivo survival: T1 [recipients that received one blastocyst (n=17 embryos, Control=5, FBS+CLA=6 and CLA=6)]; T2 [recipients that received two blastocysts (n =54 embryos, Control=18, FBS+CLA=14 and CLA=22)]. There was no difference in cleavage rate (62.1%; 74%; 74% for Control; FBS + CLA, CLA, respectively), blastocyst production in relation to the cleaved structures (59.7%; 47.7%; 38 3% for Control; FBS + CLA, CLA, respectively) and blastocyst production relative to the total oocytes (37.1%, 35.4%, 28.3% for Control; FBS + CLA, CLA, respectively) between treatments (P> 0.05). A reduction of lipid droplets was observed in embryos cultured in medium supplemented with CLA compared to embryos cultured in the FCS in the absence and presence of CLA (P <0.05). The reexpansion rate was higher in the Control group (70.4%) compared to the CLA (47.1%) and lowest for FBS+CLA (43.3%) (P<0.05). The hatching rates were similar among treatments, 42.1%; 23.1%; 25% for control; SFB + CLA; CLA respectively (P>0.05). Only one pregnancy was observed in early and confirmatory diagnosis, as the result of a Control group embryo transfer. Although embryos cultured with CLA have shown smaller intracytoplasmic lipid content, no difference was observed in viability following vitrification between treatments.(AU)

Efeito da adição do ácido linoleico conjugado no cultivo in vitro de embriões F1 Holandês x Zebu na sobrevivência pós-vitrificação / Effect of conjugated linoleic acid addition in in vitro culture medium in F1 Holstein X Zebu embryo survival post vitrification

Avaliou-se o efeito da adição do ácido linoleico conjugado (CLA) ao meio de cultivo in vitro na viabilidade pós-vitrificação de embriões F1 Holandês x Zebu. Foram utilizados três meios de cultivo: controle (n=340 oócitos): meio SOF e soro fetal bovino (SFB), sem o CLA; SFB+CLA (n=359 oócitos): meio SOF, SFB e CLA; CLA (n=339 oócitos): meio SOF e CLA, sem o SFB. Todos os blastocistos produzidos foram submetidos à vitrificação, pelo método de Open Pulled Straw. Quinze blastocistos de cada tratamento foram fixados para quantificação lipídica por coloração com Sudan Black B. Para avaliar a viabilidade embrionária, foi observada a capacidade de reexpansão e eclosão pós-aquecimento dos embriões (controle=27; SFB+CLA=30; CLA=17). Foram realizadas transferências em um ou dois embriões por receptora para avaliação da sobrevivência in vivo: T1 [receptoras que receberam um blastocisto (n=17 embriões, sendo controle=5, SFB+CLA=6 e CLA=6)]; T2 [receptoras que receberam dois blastocistos, (n= 54 embriões, sendo controle=18, SFB+CLA=14 e CLA=22)]. Não houve diferença nas taxas de clivagem (62,1%; 74,0%; 74,0% para controle; SFB+CLA; CLA, respectivamente), produção de blastocistos em relação aos clivados (59,7%; 47,7%; 38,3% para controle; SFB+CLA; CLA, respectivamente) e produção de blastocistos em relação ao total de oócitos (37,1%; 35,4%; 28,3% para controle; SFB+CLA; CLA, respectivamente) (P>0,05). Houve diminuição de gotículas lipídicas nos embriões cultivados em meio suplementado com CLA em relação aos embriões cultivados na presença do SFB e na ausência do CLA (P<0,05). A taxa de reexpansão foi maior no grupo controle (70,4%) em relação ao CLA (47,1%) e menor no grupo SFB+CLA (43,3%) (P<0,05). O CLA foi eficaz em reduzir a deposição de lipídeos intracitoplasmáticos nas células embrionárias, porém não houve diferença de viabilidade após a desvitrificação dos embriões.(AU)

The effect of adding conjugated linoleic acid (CLA) to the culture media on the viability after cryopreservation of F1 Holstein X Zebu embryos was evaluated. Three different culture media were tested: control (n = 340 oocytes): SOF medium and fetal bovine serum (FBS) without the CLA; FBS + CLA (n = 359 oocytes): SOF, FBS and CLA; CLA (n = 339 oocytes): SOF and CLA without the FBS. The produced blastocysts were subjected to vitrification, by the Open Pulled Straw method. Fifteen blastocysts per treatment were fixed for lipid quantification by staining with Sudan Black B. Embryo re-expansion and hatching capability were used to assess viability (control = 27; FBS + CLA = 30; CLA = 17). Transfers of one or two embryos to recipients were performed to evaluate in vivo survival: T1 [recipients that received one blastocyst (n=17 embryos, Control=5, FBS+CLA=6 and CLA=6)]; T2 [recipients that received two blastocysts (n =54 embryos, Control=18, FBS+CLA=14 and CLA=22)]. There was no difference in cleavage rate (62.1%; 74%; 74% for Control; FBS + CLA, CLA, respectively), blastocyst production in relation to the cleaved structures (59.7%; 47.7%; 38 3% for Control; FBS + CLA, CLA, respectively) and blastocyst production relative to the total oocytes (37.1%, 35.4%, 28.3% for Control; FBS + CLA, CLA, respectively) between treatments (P> 0.05). A reduction of lipid droplets was observed in embryos cultured in medium supplemented with CLA compared to embryos cultured in the FCS in the absence and presence of CLA (P <0.05). The reexpansion rate was higher in the Control group (70.4%) compared to the CLA (47.1%) and lowest for FBS+CLA (43.3%) (P<0.05). The hatching rates were similar among treatments, 42.1%; 23.1%; 25% for control; SFB + CLA; CLA respectively (P>0.05). Only one pregnancy was observed in early and confirmatory diagnosis, as the result of a Control group embryo transfer. Although embryos cultured with CLA have shown smaller intracytoplasmic lipid content, no difference was observed in viability following vitrification between treatments.(AU)

Aspectos reprodutivos de Dinomys branickii (pacarana) em cativeiro - Relato de caso / Reproductive aspects of Dinomys branickii (pacarana) in captivity - Case report

A pacarana (Dinomys branickii) é um roedor raro de hábito noturno, sendo a única representante dafamília Dinomyidae. A espécie é ameaçada de extinção em vida livre, e pouco se conhece sobre sua reprodução.Este trabalho teve por objetivo estudar as fases do ciclo estral por meio da citologia vaginal, associado aos sinaisclínicos da genitália externa e o estabelecimento da primeira prenhez de uma única fêmea de pacarana. O animalera mantido em cativeiro no Parque Ambiental Chico Mendes, localizado em Rio Branco, Acre, Brasil. Foramrealizados exames de citologia vaginal em uma fêmea pré-púbere (11 meses) cativa, durante sete meses. Osesfregaços foram corados pelo Método de Shorr, para a quantificação e observação de células do epitélio vaginalde acordo com a sua morfologia. Além disso, os sinais clínicos da genitália externa foram observados durante ociclo estral. A fêmea iniciou a puberdade aos 14 meses, período no qual foi evidenciada uma maior diferenciaçãocelular, sendo visualizadas células intermediárias, parabasais e superficiais anucleadas e nucleadas, além deleucócitos. Verificou-se que o período do ciclo estral para este espécime foi em média 30 dias. Aos 20 meses, afêmea demonstrou sinais de gestação, sendo confirmada posteriormente por exame ultrassonográfico.(AU)

The pacarana (Dinomys branickii) is a rare nocturnal rodent and the sole member of Dinomyidae family. Thespecies is threatened in its distribution range and little is known of its reproduction. This study aimed to reportthe phases of the estrous cycle through vaginal cytology, related to the clinical signs of external genitalia andthe establishment of the first pregnancy of a single female pacarana. The animal was kept in captivity at theAmbiental Chico Mendes Park, situated in the municipality of Rio Branco, Acre, Brazil. Vaginal smears wereperformed in a prepubescent female (aged 11 months). For vaginal epithelial cell morphology and quantificationwe used Shorrs staining. Besides, clinical signs of the external genitalia were observed during estrous cycle.The female turned into pubescent at 14 months, with significant cell type differentiation. We found intermediate,parabasal and superficial, nucleated and anucleated cells, besides leukocytes. Pacaranas estrous cycle lastedapproximately 30 days. When aged 20 months the female exhibited pregnancy signs, which was confirmedthrough ultrasonography exam.(AU)

Aspectos reprodutivos de Dinomys branickii (pacarana) em cativeiro - Relato de caso / Reproductive aspects of Dinomys branickii (pacarana) in captivity - Case report

A pacarana (Dinomys branickii) é um roedor raro de hábito noturno, sendo a única representante dafamília Dinomyidae. A espécie é ameaçada de extinção em vida livre, e pouco se conhece sobre sua reprodução.Este trabalho teve por objetivo estudar as fases do ciclo estral por meio da citologia vaginal, associado aos sinaisclínicos da genitália externa e o estabelecimento da primeira prenhez de uma única fêmea de pacarana. O animalera mantido em cativeiro no Parque Ambiental Chico Mendes, localizado em Rio Branco, Acre, Brasil. Foramrealizados exames de citologia vaginal em uma fêmea pré-púbere (11 meses) cativa, durante sete meses. Osesfregaços foram corados pelo Método de Shorr, para a quantificação e observação de células do epitélio vaginalde acordo com a sua morfologia. Além disso, os sinais clínicos da genitália externa foram observados durante ociclo estral. A fêmea iniciou a puberdade aos 14 meses, período no qual foi evidenciada uma maior diferenciaçãocelular, sendo visualizadas células intermediárias, parabasais e superficiais anucleadas e nucleadas, além deleucócitos. Verificou-se que o período do ciclo estral para este espécime foi em média 30 dias. Aos 20 meses, afêmea demonstrou sinais de gestação, sendo confirmada posteriormente por exame ultrassonográfico.

The pacarana (Dinomys branickii) is a rare nocturnal rodent and the sole member of Dinomyidae family. Thespecies is threatened in its distribution range and little is known of its reproduction. This study aimed to reportthe phases of the estrous cycle through vaginal cytology, related to the clinical signs of external genitalia andthe establishment of the first pregnancy of a single female pacarana. The animal was kept in captivity at theAmbiental Chico Mendes Park, situated in the municipality of Rio Branco, Acre, Brazil. Vaginal smears wereperformed in a prepubescent female (aged 11 months). For vaginal epithelial cell morphology and quantificationwe used Shorr’s staining. Besides, clinical signs of the external genitalia were observed during estrous cycle.The female turned into pubescent at 14 months, with significant cell type differentiation. We found intermediate,parabasal and superficial, nucleated and anucleated cells, besides leukocytes. Pacarana’s estrous cycle lastedapproximately 30 days. When aged 20 months the female exhibited pregnancy signs, which was confirmedthrough ultrasonography exam.

Utilização da LAMP (amplificação isotermal mediada por Loop) como ferramenta para determinação do sexo na espécie eqüina

A sexagem fetal em equinos representa uma abordagem de grande importância para a equideocultura. Através da determinação do sexo do feto, tomadas de decisões por parte do produtor podem ser realizadas quanto ao concepto, como, a manutenção do potro no plantel, venda e determinação do valor da venda, utilização para determinada atividade, entre outros. Algumas técnicas já são utilizadas com essa finalidade, como ultrassonografia, aplicações moleculares, bioquímicas e citogenéticas, porém, o longo tempo empregado nas técnicas, a necessidade de mão-de-obra treinada, e a utilização de equipamentos laboratoriais caros, oneram e restringem a sua realização. O objetivo deste trabalho é desenvolver um protocolo baseado na técnica de LAMP (Amplificação Isoretmal Mediada por Loop) para sexagem de equinos que possa ser aplicada para a sexagem fetal utilizando o DNA circulante no sangue materno. Para isso, foram realizados estudos para a identificação de genes macho específicos, que foram determinantes para o desenvolvimento do trabalho in silico, com desenhos e análise de primers e na otimização das técnicas da Reação em cadeia da Polimerase (PCR) e LAMP. Foi coletado sangue de 10 cavalos e 10 éguas e realizada ainda a quantificação e diluição do DNA obtido para a determinação da quantidade mínima de DNA necessário para obtenção de resultados esperados. Através dessa quantificação a menor concentração adotada para a otimização da etapa colorimétrica na técnica de LAMP foi de 0,004 ng/L de DNA. Após a otimização, foi coletado sangue venoso de 13 éguas prenhas, nos tempos de 30, 60, 90 dias de gestação, e, através da extração de DNA do plasma sanguíneo, foi realizado o teste de diagnóstico do sexo dos fetos por LAMP. Como resultados das otimizações da PCR e LAMP foi verificado que é possível diagnosticar o sexo dos equinos através dos genes escolhidos. No entanto, não se obteve resultado quanto a sexagem fetal utilizando o sangue materno até os 90 dias de gestação. Assim, considera-se a necessidade de realização de testes de diagnóstico fetal com a ampliação do período de coleta do sangue materno, quanto a idade gestacional das éguas, no terço médio e final da gestação.

The equine fetal sexing represents a great important subject for an equine culture. Through the fetal gender determination, producer decisions may be taken regarding the conceptus, as a foal maintenance in a squad, sale and sale price determination, assignment for a given task, and others. Some techniques have already been used for this goal, as ultrasound, molecular, biochemical and cytogenetics applications, however, the long time period required for each technique of those, specialized labor skills needs and expensive laboratory equipment burden this realization. The aim of this study is to develop an equine sexing protocol based on LAMP technique allowed to be applied to fetal sexing using the DNA that flows into maternal blood. Therefore, studies were performed to identify specific male genes that were determinants to in silico work development, with drawings and primers analysis and optimization of Polymerase Chain Reaction (PCR) and LAMP technique. Blood of 10 male and 10 female horses were collected and the quantification and dilution of DNA obtained were done to determinate the minimum amount DNA required to expected results. Through this quantification, the least adopted concentration to the optimization of colorimetric step in a LAMP technique was 0,004 ng/L of DNA. After optimization, venous blood of 13 male inseminated horses were collected, at times of 30, 60, 90 days after and, through the DNA plasma blood extraction, the fetal gender diagnostic test were made by LAMP. As an optimization of PCR and LAMP results were verified that is possible the equine sex diagnosis by the choose genes. However, results about fetal sexing were no obtained using maternal blood until 90 days of pregnancy. So that, the necessity carrying out fetal diagnostic tests with the extension of the maternal blood collection period regarding the gestational age of the mares, for the middle and final third of gestation.

AVALIAÇÃO HISTOMOLECULAR DA DIMENSÃO FRACTAL E DA REMODELAÇÃO DA MATRIZ EXTRACELULAR DURANTE O DESENVOLVIMENTO OVARIANO

Avaliação histomolecular da dimensão fractal e da remodelação da matriz extracelular durante o desenvolvimento ovariano A fisiologia reprodutiva de fêmeas mamíferas é distinta em decorrência de sua fase estral, formação dos gametas femininos e dos folículos ovarianos iniciada no período pré-natal. O aparecimento dos estágios pré-antrais no ovário tem padrão temporal espécie-específico. Em fêmeas de Bos taurus indicus, estudos já demonstraram que folículos primordiais, primários e secundários aparecem próximo aos 90, 120 e 150 dias de gestação, respectivamente. Embora os estudos foquem na remodelação da matriz extracelular (MEC) durante a formação e funcionalidade de ovários adultos, há escassez no entendimento sobre os mecanismos que controlam a formação dos folículos pré-antrais durante a gestação. O objetivo do estudo foi caracterizar o fenótipo histomolecular do remodelamento MEC através da dimensão fractal (DF), quantificação de colágeno e perfil de transcritos envolvidos com remodelação de MEC em ovários de fetos bovinos associados à temporalidade de formação dos folículos pré-antrais. Assim, a fim de investigar o remodelamento tecidual ao longo do desenvolvimento ovariano fetal, foi utilizado ovários de fetos para quantificar a DF, o colágeno total e a abundância relativa de mRNA de genes relacionados ao remodelamento da MEC (COL1A1, COL1A2, COL4A1, MMP2, MMP9, MMP14, TIMP1 e TIMP2). Para tanto, pares de ovários fetais foram obtidos de fêmeas Bos taurus indicus com 60, 90, 120 e 150 dias de gestação em matadouro, sendo um deles destinado à extração de RNA total e posterior investigação dos transcritos alvos e o outro para análise de colágeno total e DF. O presente estudo demonstrou que a partir dos 120 dias houve maior área de colágeno total no ovário fetal. Nas análises de coloração em hematoxilina eosina (HE), a DF foi menor aos 150 dias quando comparada aos 60 dias de gestação, todavia, apresentou padrão inverso na coloração de picrosirius. A expressão dos genes alvos da abundância relativa dos transcritos de mRNA para COL1A1, COL4A1, MMP2, MMP14, TIMP1 e TIMP2 foi maior aos 150 dias em comparação ao dia 60. Conclui-se que a dimensão fractal reflete às alterações morfológicas durante a organização estrutural do tecido ovariano fetal e que a expressão de genes relacionados ao remodelamento da MEC é modulada ao longo da gestação em ovários fetais bovinos.

Histomolecular evaluation of the fractal dimension and remodeling of the extracellular matrix during the ovarian development The reproductive physiology of female mammals is different due to their estrous phase, the formation of female gametes and ovarian follicles that started in the prenatal period. The appearance of preantral stages in the ovary has a species-specific temporal pattern. In females of Bos taurus indicus, studies have already shown that primordial, primary and secondary follicles appear close to 90, 120 and 150 days of gestation, respectively. Although studies have focused on remodeling the extracellular matrix (ECM) during the formation and functionality of adult ovaries, there is a lack of understanding about the mechanisms that control the formation of preantral follicles during pregnancy. The aim of the study was to characterize the histomolecular phenotype of ECM remodeling through the fractal dimension (FD), quantification of collagen and profile of transcripts involved with remodeling of ECM in ovaries of bovine fetuses associated with the temporality of formation of pre-antral follicles. Thus, in order to investigate tissue remodeling along fetal ovarian development, fetal ovaries were used to quantify FD, total collagen and relative mRNA abundance of genes related to ECM remodeling (COL1A1, COL1A2, COL4A1, MMP2, MMP9, MMP14, TIMP1 and TIMP2). For this purpose, pairs of fetal ovaries were obtained from Bos taurus indicus females at 60, 90, 120 and 150 days of gestation in a slaughterhouse, one of which was destined for the extraction of total RNA and further investigation of the target transcripts and the other for collagen analysis. total and FD. The present study demonstrated that after 120 days there was a greater area of total collagen in the fetal ovary. In the staining analyzes in hematoxylin eosin (HE), the FD was lower at 150 days when compared to 60 days of gestation, however, it presented an inverse pattern in the picrosirius staining. The expression of the target genes for the relative abundance of mRNA transcripts for COL1A1, COL4A1, MMP2, MMP14, TIMP1 and TIMP2 was greater at 150 days compared to day 60. It is concluded that the fractal dimension reflects the morphological changes during structural organization of fetal ovarian tissue and that the expression of genes related to ECM remodeling is modulated throughout pregnancy in fetal bovine ovaries.

Geração de organóides intestinais a partir de células-tronco derivadas do saco vitelino canino

Os organóides intestinais possuem grande relevância na terapia celular, pois fornecem informações mais precisas sobre a composição e arquitetura de tecidos em relação ao cultivo bidimensional, além de servir como modelo de estudo para interação de hospedeiros e testes de fármacos. O saco vitelino, membrana de nutrição fetal, é um dos responsáveis pela formação do epitélio intestinal durante o desenvolvimento embrionário. Com isso, este trabalho teve como objetivo verificar se o cultivo tridimensional in vitro de células-tronco derivadas do saco vitelino canino possui capacidade de desenvolver organóides intestinais. Células-tronco mesenquimais do saco vitelino canino foram isoladas e caracterizadas, sendo posteriormente cultivadas tridimensionalmente em Matrigel® sob diferentes condições de indução da diferenciação, sendo o próprio tecido do saco vitelino digerido também testado para este cultivo tridimensional, utilizando como grupo controle células-tronco intestinais caninas. As estruturas derivadas dos diferentes tipos de cultivo foram testadas com RT-qPCR para diferentes marcadores endodermais e intestinais, sendo a quantificação das amostras avaliada utilizando o método 2-CT. As estruturas tridimensionais derivadas do tecido do saco vitelino foram capazes de desenvolver morfologia semelhante ao grupo controle, possuindo marcação para células epiteliais intestinais e células do cólon intestinal. Enquanto que as estruturas derivadas do grupo das mesenquimais, apesar de apresentar expressão de células intestinais, não desenvolveu uma morfologia adequada. Concluindo assim que o saco vitelino canino possui capacidade para desenvolver organóides intestinais, enquanto que as células-tronco mesenquimais isoladas, apesar de serem capazes de sofrer diferenciação intestinal, não formam uma morfologia semelhante a organóides no cultivo tridimensional.

The intestinal organoids have great relevance in cell therapy, since they provide more precise information on the composition and architecture of tissues in relation to the two-dimensional culture, besides serving as a study model for host interaction and drug tests. The yolk sac, fetal nutrition membrane, is one of the responsible for the formation of the intestinal epithelium during the embryonic development. The objective of this study was to verify if the in vitro three-dimensional culture of stem cells derived from the canine yolk sac has the capacity to develop intestinal organoids. The mesenchymal stem cells of the canine yolk sac were isolated and characterized, and were subsequently cultured three-dimensionally in Matrigel® under different conditions of induction of differentiation, and the same yolk sac tissue was also tested for this three-dimensional culture using canine intestinal stem cell as control. The structures derived from the different culture types were tested with RT-qPCR for different endodermal and intestinal markers, and the quantification of the samples was evaluated using the 2-CT method. The three-dimensional structures derived from yolk sac tissue were able to develop similar morphology to the control group, expressing intestinal epithelial cells and intestinal colon cells genes. While the structures derived from the mesenchymal group, despite presenting intestinal cell expression, did not develop an adequate morphology. Concluding that the canine yolk sac is capable of developing intestinal organoids, whereas isolated mesenchymal stem cells, although capable of undergoing intestinal differentiation, do not form organoids-like structures in three-dimensional culture.

Crescimento vascular em membrana do saco vitelínico e desenvolvimento embrionário de codornas japonesas (Coturnix japonica) expostas a campo magnético de baixa frequência / Vascular growth in yolk sac membrane and embryonic development of Japanese quail (Coturnix japonica) exposed to low frequency magnetic field

O objetivo deste trabalho foi observar a influência do campo magnético (CM) de baixa frequência na membrana do saco vitelínico (MSV) e no desenvolvimento do embrião de codornas japonesas (Coturnix japonica) em 72 horas de incubação. Ovos fertilizados foram expostos a nove horas consecutivas de CM, sendo um grupo a partir das 48 horas e o outro a partir das 63 horas de incubação. A quantificação da vascularização da MSV foi determinada pela obtenção da dimensão fractal por meio dos métodos de box-counting e de dimensão de informação, enquanto o peso corporal e o percentual de comprimento cefálico dos embriões foram utilizados como parâmetros de desenvolvimento embrionário. O CM não causou diferenças significativas na densidade vascular da MSV nem no desenvolvimento embrionário, quando comparados ao grupo controle.(AU)

The aim of this study was to observe the influence of the low frequency magnetic field (MF) on the yolk sac membrane (YSM) and embryonic development of Japanese quail (Coturnix japonica) in 72 hours of incubation. Fertilized eggs were exposed to 9 consecutive hours of MF, with a group from 48 hours and the second group from 63 hours of incubation. The evaluation of YSM vascularization was determined by the fractal dimensions obtained through box-counting method and information dimension, while body weight of the embryo and percentage of cephalic length were used as parameters for embryo development. The MF caused no significant differences in vessel density in the YSM, nor in the embryonic development considering the body weight and percentage cephalic length, when were compared to the control group.(AU)

Avaliação imunofenotípica de subpopulações linfocitárias no sangue do cordão umbilical e periférico de suínos neonatos (Sus scrofa) / Imunophenotyping avaliation of lymphocyte subsets in cord blood and peripheral blood of newborn piglets (Sus scrofa)

Considerando a importância do uso do sangue do cordão umbilical como fonte potencial de células tronco hematopoiéticas e o uso do suíno doméstico (Sus scrofa) como modelo para pesquisas biomédicas em medicina regenerativa, e por outro lado, visando dar um contributo sobre a quantificação das subpopulações linfocitárias no sangue do cordão umbilical e periférico, objetivou-se quantificar as células CD4+, CD5+ e CD8+ nas amostras de sangue de suínos neonatos. Analisaram-se as amostras do sangue do cordão umbilical e periférico de 48 leitões de linhagem Topigs, provenientes de porcas hígidas, inseminadas artificialmente e de parto natural. Foram coletadas amostras de sangue do cordão umbilical e periférico no momento do nascimento, por meio de venopunção da veia umbilical e seio venoso retro-oftálmico, respectivamente. As quantificações imunofenotípicas de células CD4+, CD5+ e CD8+ foram obtidas por citometria de fluxo. Os valores médios obtidos para as contagens das células CD4+, CD5+ e CD8+ do sangue do cordão umbilical e periférico apresentaram-se inferiores aos reportados para o sangue periférico de suínos adultos, sugerindo um componente imunológico imaturo. A proporção CD4+:CD8+ obtida no sangue do cordão umbilical (3,2±1,2 por cento) e no sangue periférico (3,2±1,7 por cento) ilustrou a predominância dos linfócitos TCD4+ com relação aos TCD8+. A quantidade relativa de células CD4+ e CD8+ no sangue do cordão umbilical e periférico foi de 1,37±0,86 por cento e 1,15±0,57 por cento, respectivamente.(AU)

Considering the importance of umbilical cord blood as a potential source of stem cell and, on the other hand, the use of the domestic swine (Sus scrofa) as a useful model for biomedical research in regenerative medicine and aiming to contribute about the quantification of lymphocyte subsets in umbilical cord blood and peripheral blood of newborn piglets, this study aimed to quantify CD4+, CD5+ and CD8+ cells from umbilical cord blood and peripheral blood from pigs at term blood samples. Were analyzed samples of the umbilical cord blood and peripheral of 48 piglets of Topigs lineage, from healthy mothers, artificially inseminated and natural birth. Blood samples were collected from the umbilical cord at birth, by the umbilical vein, and peripheral blood by venous sinus retro-ophthalmic. The immunological measurements of CD4+, CD5+ and CD8+ were obtained by flow cytometry. The relative average values for the CD4+, CD5+ e CD8+ counts in umbilical cord blood and peripheral blood of newborn piglets were inferior to those reported for peripheral blood in adult pigs, suggesting immunological immaturity. The ratio CD4+:CD8+ in umbilical cord blood (3.2±1.2 percent) and peripheral blood (3.2±1.7 percent) showed a predominance of TCD4+ over TCD8+. The percentage of CD4+ and CD8+ cells was 1.37±0.86 percent and 1.15±0.57 percent, respectively, in umbilical cord blood and peripheral blood.(AU)

Quantificação dos líquidos fetais, placentônios e peso do útero em vacas aneloradas ao longo da gestação / Quantification of fetal fluid, placentomes and uterine weight in zebu cows throughout gestation

Samples of pregnant uterus of 71 zebu cows were collected in a slaughterhouse. The fetuses were divided into three gestational stages: initial stage until 90 days (T1), an intermediate stage from 91 to 180 days (T2) and the fi nal stage after 181 days (T3) and the descriptive statistical analysis of the data was used SPSS Statistics 17.0. The volumes of the fetal fl uids have increased during the pregnancy, with T1 and T3 the volume of allantoic liquid was higher, was not the case in T2. Every stage of pregnancy was increased by an average of 20 placentomes and 1318.5g in weight of the uterus and pregnancy presented with greater frequency in the right horn.

Foram coletadas em frigoríficos 71 amostras de úteros gravídicos de vacas aneloradas. Os fetos foram distribuídos em três fases gestacionais: fase inicial até 90 dias (T1), fase intermediária de 91 a 180 dias (T2) e a fase final após 181 dias (T3) e para a análise estatística descritiva dos dados foi utilizado o programa SPSS Statistics 17.0. Os volumes dos líquidos fetais aumentaram no decorrer da gestação, sendo que em T1 e T3 o volume do líquido alantóide foi maior, não ocorrendo o mesmo em T2. A cada terço gestacional houve um aumento, em média, de 20 placentônios e de 1318,5 g no peso do útero e a gestação apresentou-se com maior frequência no corno direito.

Quantificação dos líquidos fetais, placentônios e peso do útero em vacas aneloradas ao longo da gestação / Quantification of fetal fluid, placentomes and uterine weight in zebu cows throughout gestation

Samples of pregnant uterus of 71 zebu cows were collected in a slaughterhouse. The fetuses were divided into three gestational stages: initial stage until 90 days (T1), an intermediate stage from 91 to 180 days (T2) and the fi nal stage after 181 days (T3) and the descriptive statistical analysis of the data was used SPSS Statistics 17.0. The volumes of the fetal fl uids have increased during the pregnancy, with T1 and T3 the volume of allantoic liquid was higher, was not the case in T2. Every stage of pregnancy was increased by an average of 20 placentomes and 1318.5g in weight of the uterus and pregnancy presented with greater frequency in the right horn. (AU)

Foram coletadas em frigoríficos 71 amostras de úteros gravídicos de vacas aneloradas. Os fetos foram distribuídos em três fases gestacionais: fase inicial até 90 dias (T1), fase intermediária de 91 a 180 dias (T2) e a fase final após 181 dias (T3) e para a análise estatística descritiva dos dados foi utilizado o programa SPSS Statistics 17.0. Os volumes dos líquidos fetais aumentaram no decorrer da gestação, sendo que em T1 e T3 o volume do líquido alantóide foi maior, não ocorrendo o mesmo em T2. A cada terço gestacional houve um aumento, em média, de 20 placentônios e de 1318,5 g no peso do útero e a gestação apresentou-se com maior frequência no corno direito.(AU)

DETERMINAÇÃO DO TAMANHO E QUANTIFICAÇÃO DOS EXOSSOMOS UTERINOS EM GESTAÇÕES BOVINAS PRODUZIDAS POR INSEMINAÇÃO ARTIFICIAL E POR FERTILIZAÇÃO IN VITRO

As bases moleculares envolvidas no sucesso gestacional não estão totalmente definidas em todas as espécies. O fluido uterino contém uma variedade de nutrientes, proteínas, lipídeos e vesículas extracelulares, incluindo exossomos, provenientes de diversos tipos celulares de origem materna ou fetal. Os exossomos presentes no fluido uterino atuam na comunicação materno-fetal sendo capazes de transportar proteínas, moléculas de RNAm e microRNAs. O objetivo desse estudo foi determinar o tamanho e quantificar os exossomos presentes no fluido uterino de vacas não prenhes e prenhes por inseminação artificial (IA) e por fertilização in vitro em diferentes períodos gestacionais. As microvesículas extracelulares uterinas foram isoladas por centrifugação, o tamanho e a concentração dos exossomos foram analisados utilizando o NanoSight NS300. Observou-se aumento significativo na concentração dos exossomos do grupo IA 18 para o IA 32 e uma tendência de aumento na concentração do grupo FIV 18 para o grupo FIV 32. Os dados indicam que a concentração dos exossomos uterinos aumenta com a evolução da gestação, sendo necessário estudos em outras idades gestacionais e ainda estudos que determinem o conteúdo e origem desses exossomos, tornando possível elucidar questões relacionadas a comunicação maternofetal, bem como as diferenças observadas na viabilidade de gestações oriundas de inseminação artificial e fertilização in vitro.

Molecular basis involved in successful pregnancy is not fully defined in all species. Uterine fluid contains a variety of nutrients, proteins, lipids and extracellular vesicles, including the exosomes, excreted by different cell types of maternal or fetal origin. The exosomes present in uterine fluid modulate maternal-fetal communication, transporting proteins, mARN molecules and microARNs. The objective of this study was to determine the size and quantify the exosomes present in the uterine fluid of nonpregnant and pregnant cows from artificial insemination (AI) and in vitro fertilization (IVF), in different gestational periods. The uterine fluid was collected by uterine lavage on day 18 of the estrous cycle and at 18 and 32 days of gestation. Extracellular uterine microvesicles were isolated by centrifugation; the size and concentration of the exosomes were analyzed using the NanoSight NS300. There was a significant increase in the concentration of exosomes from group AI18 to AI32 and a tendency of concentration increase from group IVF 18 to group IVF 32. Data indicate that the concentration of uterine exosomes increases with the evolution of gestation. Studies in other gestational ages and studies that determine the content and origin of these exosomes are necessary, contributing to elucidate questions related to maternal-fetal communication, as well as the differences observed in the viability of pregnancies obtained by artificial insemination and in vitro fertilization.

CONSERVAÇÃO DE TECIDO SOMÁTICO DE CATETOS (Pecari tajacu LINNAEUS, 1758) SUBMETIDO A DIFERENTES CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO

A clonagem por transferência nuclear de células somáticas consiste numa atraente ferramenta para a conservação da biodiversidade e sua eficiência depende da obtenção e seleção de células doadoras de núcleo derivadas da pele de indivíduos de interesse. Especificamente para catetos, mamíferos silvestres encontrados algumas vezes em regiões de difícil acesso ou distantes de laboratórios especializados, o armazenamento a 46°C de tecidos da pele seria uma alternativa para a conservação do material genético desses animais. Portanto, o objetivo foi avaliar diferentes períodos de armazenamento e a presença de meio nutritivo sobre a recuperação de células somáticas derivadas da pele de catetos. Para tanto, 476 explantes auriculares (9,0 mm3) recuperados de onze animais adultos, oriundos do Centro de Multiplicação de Animais Silvestres (CEMAS/UFERSA), foram distribuídos em sete grupos: amostras não refrigeradas (controle) e refrigeradas na ausência ou presença de Meio de Eagle Modificado por Dulbecco suplementado com 2,2 g/L de bicarbonato de sódio, 10% de soro fetal bovino e 2% de solução de antibiótico-antimicótico por 10, 30 e 50 dias de estocagem. Para as análises histológicas, amostras foram fixadas em paraformaldeído a 4%, processadas e coradas com hematoxilina-eosina para avaliação da espessura da epiderme e derme, número de fibroblastos e halos. Além disso, fragmentos foram avaliados quanto à quantificação de regiões argirofílicas organizadoras nucleolares (AgNORs) e atividade metabólica por brometo de 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólio (MTT). Para as análises de cultivo in vitro, explantes foram cultivados e avaliados quanto à morfologia celular, qualidade do cultivo, viabilidade celular por azul de tripan, atividade proliferativa pela determinação da curva de crescimento e tempo de duplicação da população celular e atividade metabólica pelo ensaio de MTT. Comparações entre os fragmentos refrigerados e não refrigerados foram analisadas usando o software GraphPad Prisma. Quanto à espessura tecidual, apenas os fragmentos armazenados por 50 dias na ausência de meio nutritivo, apresentaram uma redução e aumento, respectivamente, da espessura da epiderme (55,8 ± 3,2 m vs. 64,8 ± 2,1 m) e derme (172,7 ± 2,5 m vs. 147,6 ± 2,5 m) quando comparado ao controle (P < 0,05). Além disso, o período de estocagem, independente da presença de meio, promoveu uma redução do número de fibroblastos e aumento no número de halos. Ainda, o número de AgNORs indicando atividade proliferativa, e atividade metabólica dos explantes, diminuíram com o período de armazenamento. Após o cultivo in vitro dos explantes, apenas os fragmentos armazenados sem meio por 50 dias não foram capazes de obter células somáticas. Além disso, células oriundas de explantes na presença de meio por 10 dias mostraram características similares às células de explantes não refrigerados, especialmente quanto à duração do cultivo, tempo de duplicação da população celular, dia de todos os explantes aderidos e tempo total de subconfluência. Desta forma, células viáveis de catetos podem ser recuperadas de fragmentos teciduais armazenados por até 50 dias na presença de meio nutritivo; contudo, tecidos somáticos refrigerados até 10 dias na presença de meio resultaram em células mais viáveis.

Cloning by somatic cell nuclear transfer is an attractive tool for biodiversity conservation and its efficiency depends on the obtaining and selection of nucleus donor cells derived from the skin of individuals of interest. Specifically for collared peccaries, wild mammals found sometimes in regions difficult to access or far from specialized laboratories, the storage at 46°C of skin tissues would be an alternative for the conservation of the genetic material of these animals. Therefore, the aim was to evaluate different periods of storage and the presence of nutrient medium on the recovery of somatic cells derived from skin of collared peccaries. Thus, 476 ear explants (9.0 mm3) recovered from eleven adult animals from the Centro de Multiplicação de Animais Silvestres (CEMAS/UFERSA) were distributed in seven groups: samples not refrigerated (control) and refrigerated in absence or presence of Dulbeccos Modified Eagles Medium supplemented with 2.2 g/L sodium bicarbonate, 10% fetal bovine serum and 2% antibioticantimycotic for 10, 30 and 50 days of storage. For the histological analyzes, samples were fixed in 4% paraformaldehyde, processed and stained with hematoxylin-eosin for evaluation of epidermal and dermal thickness, number of fibroblasts and halos. Moreover, fragments were evaluated for the quantification of argyrophilic nucleolar organizer region (AgNORs) and metabolic activity by 3-[4,5-dimethylthiazol- 2-yl] -2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT). For in vitro culture analyzes, explants were cultured and evaluated for cell morphology, culture quality, cell viability by trypan blue, proliferative activity by determination of the growth curve and doubling time of the cell population and metabolic activity by MTT assay. Comparisons between the refrigerated and not refrigerated fragments were analyzed using the GraphPad Prisma software. As for the tissue thickness, only the fragments stored for 50 days in the absence of nutrient medium showed a reduction and increase, respectively, in the thickness of the epidermis (55.8 ± 3.2 m vs. 64.8 ± 2.1 m) and dermis (172.7 ± 2.5 m vs. 147.6 ± 2.5 m) when compared to control (P < 0.05). Moreover, the storage period, regardless of the presence of medium, promoted a reduction in the number of fibroblasts and increase in the number of halos. Also, the number of AgNORs indicating proliferative activity, and metabolic activity of the explants, decreased with the storage period. After the in vitro culture of the explants, only the fragments stored without medium for 50 days were not able to obtain somatic cells. Likewise, cells from explants in the presence of medium for 10 days showed similar characteristics to the cells of not refrigerated explants, especially regarding the duration of culture, doubling time of the cell population, day of all attached explants and subconfluence total time. Thus, viable cells derived from collared peccaries can be recovered from tissue fragments stored for up to 50 days in the presence of nutrient medium; nevertheless, refrigerated somatic tissues up to 10 days in the presence of medium resulted in more viable cells.