Relationship between superovulation and embryo production with ovarian follicular population before superovulatory treatment in Brazilian Bergamasca sheep / [Relação da resposta superovulatória e produção embrionária com a população folicular ovariana antes do tratamento superovulatório de ovelhas da raça Bergamácia Brasileira]

The objective of this study was to quantify the superovulatory response and embryo production of Brazilian Bergamasca sheep and to evaluate the link to the follicular condition before superovulatory treatment, as a reference for selection of donors with potential for superovulation. Follicular population of twenty-three sheep was evaluated by ultrasound during metestrus phase of the estrous cycle and divided into groups of low, medium and high follicular population. Subsequently, they were synchronized, superovulated with 133mg of pFSH, mated and subjected to embryo collection. The superovulatory response (9.0±3.3 vs 10.7±6.2 vs 13.8±7.1) and embryo production (4.0±3.8 vs 2.6±2.0 vs 1,8±4.0) were similar between groups (P>0.05). There was a positive correlation between the number of follicles during the metestrus phase and the number of corpus luteum with premature regression (PLR) (0.52) and a negative correlation between the recovery rate and PLR (-0.44) (P<0.05). The sheep that presented PLR had more follicles during metestrus (16.9±7.8 vs 12.7±3.2) and lower embryo recovery rate (38.8±29.3 vs 72.2±29.9) than those with functional CLs (P<0.05). Follicular quantification during metestrus phases was unable to identify donors with high embryo production. Animals with PLR had a larger follicular population during metestrus and lower embryo recovery rate.(AU)

O objetivo deste trabalho foi quantificar a resposta superovulatória e a produção embrionária de ovelhas Bergamácia Brasileira e relacioná-las com a condição folicular antes do tratamento superovulatório, como referência para seleção de doadoras com potencial para superovulação. Vinte e três ovelhas foram avaliadas quanto à população folicular por ultrassonografia na fase de metaestro do ciclo estral e divididas em grupos com baixa, média e alta população folicular. Posteriormente foram sincronizadas, superovuladas com 133mg de pFSH, acasaladas e submetidas à coleta de embriões. A resposta superovulatória (9,0±3,3 vs. 10,7±6,2 vs. 13,8±7,1) e a produção embrionária (4,0±3,8 vs. 2,6±2,0 vs. 1,8±4,0) foram semelhantes entre os grupos (P>0,05). Houve correlação positiva entre o número de folículos no metaestro e o número de corpos lúteos com regressão prematura (RPCL) (0,52) e correlação negativa entre a taxa de recuperação e RPCL (-0,44) (P <0,05). As ovelhas que apresentaram RPCL tiveram mais folículos no metaestro (16,9±7,8 vs. 12,7±3,2) e menor taxa de recuperação embrionária (38,8±29,3 vs. 72,2±29,9) do que as que apresentaram CLs funcionais (P<0,05). A quantificação folicular nas fases de metaestro não foi capaz de identificar doadoras com alto potencial de produção embrionária. Animais com RPCL tiveram maior população folicular no metaestro e menor recuperação de embriões.(AU)

Superovulação em éguas da raça Crioula e Quarto de Milha com extrato de pituitária equina (EPE) / Superovulatory protocol with equine pituitary extract (EPE) in mares Crioula and the Quarter Horse

Este trabalho compara a resposta superovulatória de éguas doadoras de embriões das raças Quarto de Milha (QM) e Crioula, utilizando um protocolo com baixa dose de extrato de pituitária equina (EPE). Oito éguas QM e seis éguas Crioulas foram acompanhadas durante 3 ciclos estrais consecutivos, sendo que cada ciclo corresponde a um grupo. Grupo Controle – monitoramento do crescimento folicular até a ovulação; Grupo EPE – monitoramento ultrassonográfico até que os folículos atingissem cerca de 20 mm de diâmetro e, posteriormente, administração de 7 mg de EPE, duas vezes ao dia, até a indução da ovulação com 2500UI de hCG; Grupo Pós-EPE – idem ao grupo controle. Os dados foram submetidos à análise de variância, utilizando o procedimento GLM do pacote estatístico SAS, sendo previamente testadas para normalidade dos resíduos, e as médias comparadas pelo teste de Tukey ao nível de 5%. Nas éguas Crioulas tratadas com EPE houve um aumento no número de ovulações (p=0,0534), com média de 3,33±2,06 quando comparadas aos grupos controle e pós-EPE e às éguas da raça QM (2,00±0,53). O tratamento com EPE na dose preconizada permitiu uma melhor resposta superovulatória e produção embrionária nas éguas Crioulas, quando comparadas com as éguas Quarto de Milha.

This study compared the superovulatory response of embryos donor mares of Quarter Horse (QH) and Crioula using a protocol with low dose of equine pituitary extract (EPE). Eight QH mares and six Crioula mares were monitored during 3 consecutive estrous cycles, with each cycle corresponds to a group. Control Group - monitoring of follicle growth up to the ovulation; EPE group - when the follicles reached 20 mm in diameter were administered 7 mg EPE twice daily. When the follicles achieved a diameter 35 mm, the ovulation was induced with 2500UI hCG; Post-EPE Group - idem to the control group. Data were analyzed using GLM procedure of the SAS statistical package. The variables were submitted to the Tukey’s test and least square means adjusted for multiple comparisons using the Tukey-Kramer’s test, with significance level of 5%. Values are presented as mean ± SD. In the Crioula mares treated with EPE, there was an increase in the number of ovulations (p =0.0534) with a mean of 3.33 ± 2.06 ovulations when compared to the control and post-EPE groups, and mares QM. (2.00±0.53). Treatment with EPE in the recommended dose allowed better superovulatory response and rate of embryo recovery in Crioula mares when compared to the QM mares.

Superovulação em éguas da raça Crioula e Quarto de Milha com extrato de pituitária equina (EPE) / Superovulatory protocol with equine pituitary extract (EPE) in mares Crioula and the Quarter Horse

Este trabalho compara a resposta superovulatória de éguas doadoras de embriões das raças Quarto de Milha (QM) e Crioula, utilizando um protocolo com baixa dose de extrato de pituitária equina (EPE). Oito éguas QM e seis éguas Crioulas foram acompanhadas durante 3 ciclos estrais consecutivos, sendo que cada ciclo corresponde a um grupo. Grupo Controle monitoramento do crescimento folicular até a ovulação; Grupo EPE monitoramento ultrassonográfico até que os folículos atingissem cerca de 20 mm de diâmetro e, posteriormente, administração de 7 mg de EPE, duas vezes ao dia, até a indução da ovulação com 2500UI de hCG; Grupo Pós-EPE idem ao grupo controle. Os dados foram submetidos à análise de variância, utilizando o procedimento GLM do pacote estatístico SAS, sendo previamente testadas para normalidade dos resíduos, e as médias comparadas pelo teste de Tukey ao nível de 5%. Nas éguas Crioulas tratadas com EPE houve um aumento no número de ovulações (p=0,0534), com média de 3,33±2,06 quando comparadas aos grupos controle e pós-EPE e às éguas da raça QM (2,00±0,53). O tratamento com EPE na dose preconizada permitiu uma melhor resposta superovulatória e produção embrionária nas éguas Crioulas, quando comparadas com as éguas Quarto de Milha.(AU)

This study compared the superovulatory response of embryos donor mares of Quarter Horse (QH) and Crioula using a protocol with low dose of equine pituitary extract (EPE). Eight QH mares and six Crioula mares were monitored during 3 consecutive estrous cycles, with each cycle corresponds to a group. Control Group - monitoring of follicle growth up to the ovulation; EPE group - when the follicles reached 20 mm in diameter were administered 7 mg EPE twice daily. When the follicles achieved a diameter 35 mm, the ovulation was induced with 2500UI hCG; Post-EPE Group - idem to the control group. Data were analyzed using GLM procedure of the SAS statistical package. The variables were submitted to the Tukeys test and least square means adjusted for multiple comparisons using the Tukey-Kramers test, with significance level of 5%. Values are presented as mean ± SD. In the Crioula mares treated with EPE, there was an increase in the number of ovulations (p =0.0534) with a mean of 3.33 ± 2.06 ovulations when compared to the control and post-EPE groups, and mares QM. (2.00±0.53). Treatment with EPE in the recommended dose allowed better superovulatory response and rate of embryo recovery in Crioula mares when compared to the QM mares.(AU)

DIETA ENRIQUECIDA COM LIPÍDEO ASSOCIADA À SOMATOTROPINA RECOMBINANTE BOVINA EM NOVILHAS SUPEROVULADAS

Objetivou-se avaliar os efeitos da suplementação com óleo de soja e administração de somatotropina recombinante bovina (rBST) sobre a população de folículos ovarianos, uniformização da resposta superovulatória e recuperação embrionária. Foram utilizadas 40 novilhas da raça holandesa submetidas a um fatorial 2x2, sendo duas dietas, sem (DC = controle) ou com suplementação de óleo de soja (OL) e a administração ou não de 320 mg de rBST, sete dias após o primeiro estro e dos estros subsequentes, constituindo os seguintes grupos experimentais: DC-SL (dieta controle mais a aplicação de solução salina); OL-SL (dieta suplementada com gordura mais a aplicação de solução salina); DC-rBST (dieta controle mais a aplicação de 320 mg de rBST) e OL-rBST (dieta suplementada com gordura mais a aplicação de 320 mg de rBST). Os animais receberam duas aplicações de 500 mg de PGF2 para sincronização do estro e, em seguida, foram superovulados com 400 UI de FSH em doses diárias decrescentes durante quatro dias consecutivos. No dia anterior ao início da superovulação, os dois maiores folículos foram puncionados para quantificação da concentração intrafolicular de lipoproteína de alta densidade (HDL). As análises estatísticas foram processadas pelo software estatístico Action R versão 3.0.2, utilizando a ANOVA e Teste Fisher (Teste F; duas comparações) para as médias das características com nível de probabilidade de 5%. Não foram verificadas diferenças no consumo de matéria seca, atividade folicular ovariana, concentração de P4 e resposta superovulatória. Por outro lado, o grupo OL-rBST obteve maior área de CL (4,67±0,67 cm2 ) e um efeito positivo foi evidenciado para concentração de HDL nos grupos de tratamentos OL-SL (40,86±9,8 mg/dL) e OL-rBST (53,67±10,35 mg/d). A suplementação com óleo de soja na dieta associada à administração de rBST não proporcionou uniformização da resposta superovulatória e na recuperação embrionária de novilhas.

The aim was to evaluate the effects of soybean oil supplementation associated with the administration of bovine recombinant somatotropin (rBST) on the population of ovarian follicles, standardization of the superovulation response, and embryo recovery. We used 40 Holstein heifers submitted to a 2x2 factorial, with two diets, without or with soybean oil supplementation; and the administration or not of rBST seven days after estrus, forming the experimental groups: DC-SL (control diet plus saline solution application); OL-SL (diet with soybean oil plus saline application); DC-rBST (control diet plus application of 320 mg rBST) e OL-rBST (diet with soybean oil plus the application of 320 mg rBST). The animals received two applications of 500 mg of PGF2 for estrus synchronization and were superovulated with 400 IU of FSH in decreasing daily doses for four consecutive days. On the day before the start of superovulation, the two largest follicles were punctured to quantify the intrafollicular concentration of high-density lipoprotein (HDL). Statistical analyzes were processed using the Action R statistical software version 3.0.2, using ANOVA and Fisher's Test (F test; two comparisons) for the mean characteristics with a probability level of 5%. There were no differences in dry matter intake, follicular activity, P4 concentration, and superovulation response. The group OL-rBST got a greater CL area (4.67±0.67 cm2) and a positive effect was evidenced for HDL concentration in the treatment groups OL-SL (40.86±9.8 mg/dL) and OL-rBST (53.67±10.35 mg/dL). Soybean oil supplementation in the diet associated with the administration of rBST did not provide uniformity in the superovulation response and the embryonic recovery of heifers.

PRODUÇÃO E COLETA DE EMBRIÕES PELO MÉTODO NÃO CIRÚRGICO EM OVELHAS MORADA NOVA

O objetivo do presente estudo foi viabilizar a produção e coleta de embriões pelo método não cirúrgico (NSER) em ovelhas Morada Nova, uma vez que o uso desta técnica pode contribuir para o Programa de Conservação de Recursos Genéticos desta importante raça brasileira, aumentando o número de embriões nos bancos de germoplasma. Este estudo foi realizado em duas etapas sendo que na primeira, foi comparada a produção de embriões in vivo de doadoras submetidas a diferentes protocolos de sincronização de estro e/ou superovulação. As ovelhas receberam esponjas intravaginais embebidas em 60 mg de acetato de medroxiprogesterona (MAP), as quais foram mantidas por seis (G6; n = 12), nove (G9; n = 12) ou 12 (G12; n = 12) dias. Metade das ovelhas em cada grupo permaneceu sincronizada (SYNCH) enquanto a outra metade foi superovulada (SOV) com hormônio folículo estimulante suíno (pFSH). Das variáveis analisadas, houve diferença no início do estro que ocorreu 10-12 h depois (P <0,01) em ovelhas G9SYNCH quando comparadas a G6SYNCH e G12SYNCH, e a duração do estro foi 19 h maior (P <0,01) em G9SOV do que em G6SOV. A duração média do procedimento de coleta foi de 32,6 ± 1,3 min. Pelo menos uma estrutura foi recuperada em 85,7% das ovelhas sincronizadas e em 87,5% das superovuladas. As taxas de recuperação de embriões viáveis também foram semelhantes (P> 0,05) para os grupos sincronizados e superovulados: G6 (1,0 ± 0,3 e 2,5 ± 1,5), G9 (1,3 ± 0,5 e 4,8 ± 2,0) e G12 (1,0 ± 0,3 e 4,8 ± 2,3). Conclui-se que o pré-tratamento com diferentes durações de progesterona pode ser empregado em ovelhas Morada Nova, resultando em taxas de recuperação embrionária viáveis em animais sincronizados e/ou superovulados. Na segunda etapa, procurou-se correlacionar quantidade de folículos acima de 2 mm de diâmetro no momento da última dose de pFSH com a resposta superovultória (número de corpos lúteos) e a produção de embriões (quantidade de blastocisto e qualidade embrionária) em ovelhas sincronizadas com os dois tratamentos mais promissores do experimento anterior (G9 e G12). A contagem total de folículos com diâmetro 2 mm dobrou entre a 1ª e a 6ª dose de pFSH em ambos os grupos de ovelhas (P <0,05). As respostas ao estro não variaram entre os dois subconjuntos de ovelhas Morada Nova e foram em média 95,2%. Corpos lúteos (CL) foram detectados em 85,0% e 60,0% das ovelhas que apresentaram cio, respectivamente, nos grupos G9 e G12. A NSER foi concluída com sucesso em 86,2% de todas as ovelhas estudadas. O número médio de CLs por doadora e por doadora lavada com sucesso foi maior (P <0,05) no G12 (12,3 ± 1,7 / 12,1 ± 1,9) do que no G9 (7,9 ± 1,4 / 8,2 ± 1,6). O número médio de blastocistos recuperados e de embriões viáveis foi maior (P <0,05) para G12 (5,8 ± 1,9 e 3,7 ± 1,7) do que para G9 (3,5 ± 1,1 e 0,8 ± 0,3, respectivamente). A contagem total de folículos no momento da aplicação da 6ª dose de pFSH no grupo G12 foi positivamente correlacionada (P <0,05) com o número de CLs (r = 0,95) e com o de embriões viáveis (r = 0,91). Conclui-se que o protocolo de sincronização de estro baseado na utilização de P4 por 12 dias resultou em melhores resultados superovulatórios quando comparado ao protocolo de 9 dias e que a contagem total de folículos na última dose de pFSH foi um bom preditor de resposta superovulatória apenas nas ovelhas tratadas com P4 por 12 dias.

The objective of the present study was to enable the production and collection of embryos by the non-surgical method (NSER) in Morada Nova ewes, since the use of this procedure can contribute to the Program for the Conservation of Genetic Resources of this important Brazilian breed, increasing the number of embryos in germplasm banks. This study was carried out in two experiments; the first one compared the production of embryos in vivo from donors submitted to different estrous and / or superovulation synchronization protocols. The ewes received intravaginal sponges soaked in 60 mg of medroxyprogesterone acetate (MAP), which were maintained for six (G6; n = 12), nine (G9; n = 12) or 12 (G12; n = 12) days. Half of the ewes in each group remained synchronized (SYNCH) while the other half were superovulated (SOV) with porcine follicle stimulating hormone (pFSH). Of the analyzed variables, there was a difference in the beginning of estrus that occurred 10-12 h later (P <0.01) in G9SYNCH ewes when compared to G6SYNCH and G12SYNCH, and the duration of estrus was 19 h longer (P <0.01) in G9SOV than in G6SOV. The average duration of the collection procedure was 32.6 ± 1.3 min. At least one structure was recovered in 85.7 and 87.5% of the synchronized and superovulated ewes, respectively. The recovery rates of viable embryos were also similar (P> 0.05) for the synchronized and superovulated groups: G6 (1.0 ± 0.3 and 2.5 ± 1.5), G9 (1.3 ± 0, 5 and 4.8 ± 2.0) and G12 (1.0 ± 0.3 and 4.8 ± 2.3). It is concluded that pretreatment with different progesterone durations can be used in Morada Nova ewes, resulting in viable embryo recovery rates in synchronized and / or superovulated animals. In the second experiment, the number of follicles 2 mm at the time of the last dose of pFSH was correlate with the superovultory response (number of corpus luteum) and the production of embryos (number of blastocyst and embryonic quality) in synchronized ewes with the two most promising treatments from the previous experiment (G9 and G12). The total count of follicles 2 mm doubled from the 1st to the 6th pFSH dose in both groups of ewes (P < 0.05). Estrus responses did not vary between the two subsets of Morada Nova sheep and they averaged 95.2%. Corpora lutea (CL) were detected in 85.0% and 60.0% of ewes going estrus in G9 Days and G12 Days groups, respectively. NSER was successfully completed in 86.2% of all ewes studied (P > 0.05). The mean number of CL per ewe/successfully flushed donor ewe was greater (P < 0.05) in G12 (12.3 ± 1.7/12.1 ± 1.9) than in G9 (7.9 ± 1.4/8.2 ± 1.6). Mean numbers of retrieved blastocysts and viable embryos were greater (P > 0.05) for G12 (5.8 ± 1.9 and 3.7 ± 1.7) than for G9 ewes (3.5 ± 1.1 and 0.8 ± 0.3, respectively). The total follicle count when applying the 6th dose of pFSH in the G12 group was positively correlated (P <0.05) with the number of CLs (r = 0.95) and with the number of viable embryos (r = 0.91). It was concluded that estrus synchronization protocol based on the use of P4 for 12 days resulted in better superovulatory results when compared to the 9 days protocol and that the total follicle count in the last dose of pFSH was a good predictor of superovulatory response only in Morada Nova ewes treated with P4 for 12 days.

AVALIAÇÃO DE PERDAS GESTACIONAIS EM BOVINOS DE LEITE EM PROGRAMAS DE BIOTÉCNICAS DA REPRODUÇÃO E A PARTICIPAÇÃO DO Neospora caninum

O uso de biotécnicas como ferramenta de manejo reprodutivo, tem evoluído de forma significativa nas últimas décadas, proporcionando aumento da eficiência reprodutiva em bovinos de leite. Dentre as biotécnicas, Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF), Transferência de Embriões (TE) e a Fertilização in vitro (FIV), são as que mais evoluíram e são atualmente utilizadas em programas reprodutivos de rebanhos leiteiros. Apesar da capacidade destas é necessária a compreensão dos fatores relacionados ao seu sucesso para a aplicação das mesmas, desta forma o desenvolvimento de estudos que avaliem a resposta superovulatória, as taxas de prenhez e perdas gestacionais podem contribuir para o aumento da eficácia. O rigoroso controle sanitário dos rebanhos, torna-se imprescindível para que os respectivos programas possam proporcionar os ganhos esperados em eficiência reprodutiva. Desta forma, dois experimentos foram desenvolvidos. O primeiro experimento teve como objetivo detectar, através da técnica de PCR, o DNA de Neospora caninum em embriões oriundos de vacas soropositivas em protocolos de superovulação para transferência de embriões. Entre receptoras de embriões provenientes de doadoras soropositivas e soronegativas não foram encontradas diferenças na taxa de prenhez (60 e 57,1%, P=0,57), perda gestacional (50% e 43,8%, P=0,79) e número de embriões produzidos após superovulação (40 e 51, P=0.64). Não houve também alteração do status sorológicos das receptoras, independente do status da doadora, assim como não foram identificados o DNA do protozoário em embriões e amostras de PBS da lavagem uterina realizada para a coleta de embriões. Assim, pode-se demonstrar que a técnica de TE é segura e pode ser utilizada em programas de controle da neosporose, ressaltando que apesar da similaridade no número de embriões, houve diferença significativa no número de estruturas congeláveis (25% e 74%, P<0,0001) e transferíveis (27,5% e 78,4%, P<0,0001). O segundo estudo avaliou o efeito do aumento da progesterona circulante (P4) pela indução da formação de corpo lúteo acessório (CL) em receptoras de embriões clonados (TNCS) e produzidos in vitro (FIV). Como esperado, o tratamento com hCG causou ovulação e aumentou a P4 circulante, embora o hCG tendesse a aumentar as prenhezes por TE (P/TE) para receptoras de embriões TNCS nos dias 28 (P = 0,07) e 42 (P = 0,09). As taxas de prenhez foram semelhantes para FIV e embriões TNCS nos dias 28 e 33, no entanto, P/TE foi maior para FIV do que TNCS no dia 42 e mais tarde, devido a maiores (P = 0,05) perdas de gestação no TNCS (44,4%) do que embriões FIV (15,0%) dos dias 33-42. Assim, o aumento da P4 circulante pode melhorar a fertilidade em receptoras de embriões TNCS, como evidenciado pela tendência do tratamento com hCG para aumentar P/ET de embriões TNCS. Conclui-se que a TE é uma técnica viável para o melhoramento genético do rebanho, podendo ser utilizadas também no controle de enfermidades como a neosporose bovina

The use of biotechniques as a reproductive management tool has evolved significantly in recent decades, increasing reproductive efficiency in dairy cattle. Among the biotechniques, FixedTime Artificial Insemination (FTAI), Embryo Transfer (ET) and in vitro Fertilization (IVF) the most evolved and currently used in reproductive programs for dairy herds. Despite their capacity, it is necessary to understand the factors related to their success for their application, thus the development of studies that assess the superovulatory response, pregnancy rates and pregnancy losses can contribute to increased effectiveness. The strict sanitary control of the herds becomes essential so that the respective programs can provide the expected gains in reproductive efficiency. In this way, two experiments were developed. The first experiment aimed to detect, through the PCR technique, the DNA of Neospora caninum in embryos from seropositive cows in superovulation protocols for embryo transfer. Among recipients of embryos from seropositive and seronegative donors, no differences were found in the pregnancy rate (60 and 57.1%, P=0.57), gestational loss (50% and 43.8%, P=0.79) and number of embryos produced after superovulation (40 and 51, P=0.64). There was also no change in the serological status of the recipients, regardless of the status of the donor, as well as the protozoan DNA in embryos and PBS samples from the uterine lavage performed for embryo flushing were not identified. Thus, it can be demonstrated that the TE technique is safe and can be used in neosporosis control programs, noting that despite the similarity in the number of embryos, there was a significant difference in the number of freezeable (25% and 74%, P <0.0001) and transferable (27.5% and 78.4%, P<0.0001) structures. The second study evaluated the effect of increasing circulating progesterone (P4) by inducing accessory corpus luteum (CL) formation in recipients of cloned (SCNT) and in vitro produced (IVF) embryos. As expected, treatment with hCG caused ovulation and increased circulating P4, although hCG tended to increase pregnancies by ET (P/ET) for SCNT embryo recipients on days 28 (P = 0.07) and 42 (P = 0.09). Pregnancy rates were similar for IVF and SCNT embryos on days 28 and 33, however, P/ET was higher for IVF than SCNT on day 42 and later, due to higher (P = 0.05) pregnancy losses in SCNT (44.4%) than IVF embryos (15.0%) from days 33-42. Thus, increasing circulating P4 may improve fertility in recipients of SCNT embryos, as evidenced by the tendency of treatment with hCG to increase P/ET of SCNT embryos. Although additional research is needed, it can be concluded that ET is a viable technique for the genetic improvement of the herd, which can also be used to control diseases such as bovine neosporosis

Resposta superovulatória e produção embrionária de ovelhas da raça Bergamácia Brasileira

O objetivo deste trabalho foi quantificar a resposta superovulatória e produção embrionária de ovelhas Bergamácia Brasileira e relacioná-las com a condição folicular antes do tratamento superovulatório, como referência para seleção de doadoras com potencial para superovulação. Vinte e três ovelhas foram avaliadas quanto a população folicular por ultrassonografia na fase de metaestro do ciclo estral e divididas em grupos com baixa, média e alta população folicular. Posteriormente foram sincronizadas, superovuladas com 133mg de pFSH, acasaladas e submetidas a coleta de embriões. A resposta superovulatória (9,0±3,3 vs 10,7±6,2 vs 13,8±7,1) e produção embrionária (4,0±3,8 vs 2,6±2,0 vs 1,8±4,0) foram semelhantes entre os grupos (P>0,05). Houve correlação positiva entre o número de folículos no metaestro e o número de corpos lúteos com regressão prematura (RPCL) (0,52) e correlação negativa entre a taxa de recuperação e RPCL (-0,44) (P <0,05). As ovelhas que apresentaram RPCL tiveram mais folículos no metaestro (16,9±7,8 vs 12,7±3,2) e menor taxa de recuperação embrionária (38,8±29,3 vs 72,2±29,9) do que as que apresentaram CLs funcionais (P<0,05). A quantificação folicular nas fases de metaestro não foi capaz de identificar doadoras com alto potencial de produção embrionária. Animais com RPCL tiveram maior população folicular no metaestro e menor recuperação de embriões.

The objective was to quantify the superovulatory response and embryonic production of Brazilian Bergamacia sheep and to relate them to the follicular condition before superovulatory treatment, as a reference for selection of donors with potential for superovulation. Twenty-three sheep were evaluated for the follicular population by ultrasound in the metestrus phase of the estrous cycle and divided into groups with low, medium and high follicular population. Subsequently, they were synchronized, superovulated with 133mg of pFSH, mated and subjected to embryo collection. The superovulatory response (9.0±3.3 vs 10.7±6.2 vs 13.8±7.1) and embryonic production (4.0±3.8 vs 2.6±2.0 vs 1,8±4.0) were similar between groups (P>0.05). There was a positive correlation between the number of follicles in the metestrus and the number of corpus luteum with premature regression (PLR) (0.52) and a negative correlation between the recovery rate and PLR (-0.44) (P<0.05). The sheep that presented PLR had more follicles in the metestrus (16.9±7.8 vs 12.7±3.2) and a lower embryo recovery rate (38.8±29.3 vs 72.2±29.9) than those with functional CLs (P<0.05). Follicular quantification in the metestrus phases was not able to identify donors with high potential for embryonic production. Animals with PLR had a larger follicular population in the metestrus and less embryo recovery

RESPOSTA SUPEROVULATÓRIA E PRODUÇÃO IN VIVO DE EMBRIÕES EM DIFERENTES RAÇAS OVINAS NATIVAS BRASILEIRAS

Com finalidade de aumentar o rebanho e a variabilidade genética, produtores de ovinos, estão optando pela biotécnica de múltipla ovulação e transferência de embriões. Porém, está técnica apresenta resultados imprevisíveis, devido a fatores intrínsecos e extrínsecos, dos quais destaca-se o efeito raça. Portanto, esse estudo avaliou o efeito raça sobre a resposta superovulatória e a produção in vivo de embriões em ovelhas nativas brasileiras (Morada Nova, Santa Inês e Somalis Brasileira). Trinta ovelhas multíparas (n = 10/ raça) foram submetidas a protocolo de nove dias de duração à base de progesterona e tratamento superovulatório com 133 mg de FSH. Nos Dias 11 (36 horas após a remoção do dispositivo) e 15 (12 horas antes da colheita não cirúrgica de embriões), os animais foram submetidos às análises ultrassonográficas em modo-B e Doppler para avaliação da população ovariana e características de perfusão ovariana. A colheita transcervical dos embriões foi realizada 7 dias após a remoção do dispositivo. Os dados foram submetidos aos testes ANOVA, teste de Tukey e teste de Bartlett; e as correlações foram testadas pelo teste de Spearman (p < 0,05). O número de folículos médios (4,0 a 5,99 mm) no Dia 11 foi maior (p = 0,0025) em ovelhas Santa Inês e Somalis Brasileira comparadas às ovelhas Morada Nova. O número de corpos lúteos e o status Superovulatório no Dia 15 foram maiores (p < 0,0001) para ovelhas Santa Inês (15,3 ± 1,4 e 2,4 ± 0,2), seguido pelas ovelhas Somalis Brasileira (10,4 ± 0,8 e 1,5 ± 0,2) e então pelas ovelhas Morada Nova (5,5 ± 1,6 e 0,8 ± 0,3). A área ovariana (p = 0,02), área de fluxo sanguíneo (p= 0,05) e porcentagem da área dopller (p = 0,007) tiveram maiores valores no Dia 15 em relação ao Dia 11 para as ovelhas Santa Inês e Somalis Brasileira. Para as características de fluxo sanguíneo de alta velocidade foram encontrados maiores valores no Dia 15 em relação ao Dia 11, independentemente da raça. Para cada raça foram registradas distintas correlações entre características ovarianas e resposta superovulatória e produção de embriões. Em conclusão, houve influência da raça sobre as respostas superovulatórias e características da vascularização ovariana. No entanto, a produção de embriões foi similar entre as raças de ovelhas nativas brasileiras.

In order to increase the herd and genetic variability, sheep producers are opting for multiple ovulation and embryo transfer. This technique, however, provides unpredictable results due to intrinsic and extrinsic factors. Among these factors the breed effect stands out. The present study assessed if the breed effect influences the follicular population, ovarian blood perfusion, superovulatory response, and the in vivo production of embryos in native Brazilian sheep breeds (Morada Nova, Santa Inês and Somalis Brasileira). Thirty multiparous ewes (n=10/breed) received intravaginal devices impregnated with 0.33 g of progesterone for nine days and superovulatory treatment with 133 mg of FSH started 60 h before the device removal. On Days 11 (36h after device removal) and 15 (12h before nonsurgical embryo recovery, NSER) the ewes were submitted to B-mode and Doppler ultrasonography to evaluate the ovarian population and characteristics of ovarian blood perfusion. NSER was performed seven days after device removal. The number of medium follicles (4.0 to 5.99 mm) on Day 11 was greater (p=.0025) in Santa Inês and Somalis Brasileira compared to Morada Nova ewes. The number of corpora lutea and superovulatory status on Day 15 was greater (p<0.0001) for Santa Inês (15.3±1.4 and 2.4±0.2), followed by Somalis Brasileira (10.4±0.8 and 1.5±0.2) and then Morada Nova ewes (5.5±1.6 and 0.8±0.3). The ovarian area (DA, p=.02), blood flow area (TA, p=.05), and DA/TAx100% (p=.007) had greater values on Day 15 in relation to Day 11 for the Santa Inês and Somalis Brasileira ewes. The high-velocity blood flow characteristics had greater values on Day 15 in relation to Day 11, regardless of breed. For each breed, different correlations were recorded between ovarian blood flow characteristics and superovulatory response and embryo yield. In conclusion, there was an influence of the breed effect on the number of medium follicles, superovulatory responses and for characteristics of ovarian blood perfusion; however, the in vivo embryo production was similar among native Brazilian sheep breeds.

Addition of sucrose on cryoprotectant solution of vitrification enhances the quality of Dorper sheep embryos produced in vivo / Adição de sacarose na solução crioprotetora de vitrificação melhora a qualidade de embriões ovinos Dorper produzidos in vivo

This study aimed to evaluate the efficacy of adding sucrose in vitrification solution of ovine embryos produced in vivo. Forty Dorper ewes were selected and superovulated. Immediately prior to the embryo collection by laparotomy, a laparoscopy was performed to verify the superovulatory response. The recovered flushing was followed by embryo evaluation and embryos were divided in two experimental groups where embryos from Control group were submitted to a traditional vitrification protocol and embryos from Sucrose group to a modified vitrification protocol with sucrose. After warming, embryos were again divided regarding cryoprotectant removal (Indirect) or not (Direct). The embryo quality was classified as embryos of degrees I (excellent or good), II (regular), III (poor) and IV (dead or degenerate). It was also verified the homogeneity of mass, occurrence of embryonic mass retraction and rupture of pellucid zone. The results were expressed as percentages and were subjected to Chi-square test with P 0.05. The embryos vitrified in the presence of sucrose had lower proportions of lower-quality embryos after warming (22.20 vs. 44.50%), higher percentages of homogeneous embryos after warming (63.89 vs. 38.89 %) while concerning other parameters there was no difference between these groups. It can be concluded that the addition of 0.4 M sucrose during vitrification improves the embryo quality.(AU)

Este estudo objetivou avaliar a eficácia da adição de sacarose na solução de vitrificação de embriões ovinos produzidos in vivo. Foram selecionadas 40 ovelhas da raça Dorper as quais foram superovuladas. Imediatamente antes da colheita de embriões por laparotomia, uma laparoscopia foi realizada para verificar a resposta superovulatória. O lavado recuperado foi submetido à procura e avaliação de embriões e estes foram divididos em dois grupos experimentais, onde os embriões do Grupo Controle foram submetidos ao protocolo tradicional de vitrificação e os embriões do Grupo Sacarose a um protocolo modificado de vitrificação com sacarose. Após a descongelação, os embriões foram novamente divididos considerando a remoção (Indireto) ou não (Direto) do crioprotetor. A qualidade embrionária foi classificada como embriões de graus I (excelente ou bom), II (regular), III (pobre) e IV (morto ou degenerado). Foi também verificada a homogeneidade da massa, ocorrência de retração da massa e ruptura de zona pelúcida. Os resultados foram expressos em porcentagem e foram submetidos ao teste do Qui-quadrado com P < 0.05. Os embriões vitrificados na presença de sacarose apresentaram menores proporções de embriões de menor qualidade após a descongelação (22,20 vs. 44,50%), e maiores percentuais de embriões homogêneos após a descongelação (63,89 vs. 38,89%) enquanto com relação aos demais parâmetros não existiram diferenças entre grupos. Pode-se concluir que a adição de 0,4 M de sacarose durante os procedimentos de vitrificação e descongelação beneficia a qualidade embrionária.(AU)

Effect of pFSH dose reduction on in vivo embryo production in Dorper ewes / Efeito da redução da dose de pFSH na produção in vivo de embriões em ovelhas Dorper

To evaluate the effect of pFSH dose on the in vivo embryo production of Dorper ewes in the semi-arid northeast of Brazil, 40 sheep females were distributed into two groups of 20 animals that received intravaginal CIDR for 14 days, and two days before device removal, they received one of the following treatments: in the FSH200 group, the ewes received 200 mg of pFSH; and in the FSH128 group, the ewes received a total of 128 mg in decreasing doses every 12 h. Beginning 12 h after the conclusion of the treatments, estrus detection was performed every four hours using two Dorper rams of proven fertility. The ewes were mated at estrus onset and 24 hours later. Seven days after intravaginal device removal, the superovulatory response was evaluated, and embryo collection was performed using the laparotomy method. The recovered flushings were subjected to embryo searches under a stereomicroscope and classified according to their qualities. Analyses of variance (ANOVAs) and LSD tests were used to compare the different parameters. The data expressed as percentages were analysed by chi-square test. The ovulation rate was higher in the FSH200 group, which had 16.3 ± 0.3 corpora lutea (CL), than in the FSH128 group, which had 11.3 ± 0.3 CL (P 0.05). However, higher fertilization rate (83.6% vs. 62.4%) and higher transferable (86.0% vs. 71.6%) and freezable (67.9% vs. 40.8%) embryo rates were observedin the FSH 128 group compared with the group that received 200 mg. Furthermore, no significant differences in the remaining parameters were observed between the experimental groups (P>0.05), demonstrating that pFSH dose reduction promoted a greater production of freezable and transferableembryos in Dorper ewes subjected to MOET.(AU)

Com o objetivo de avaliar o efeito da redução de pFSH na produção in vivo de embriões de ovelhas da raça Dorper exploradas no semiárido do Nordeste do Brasil, 40 fêmeas ovinas foram distribuídas em dois grupos com 20 animais, os quais receberam um CIDR intravaginal por 14 dias e dois dias antes da remoção do dispositivo receberam um tratamento superovulatório proposto: grupo FSH200 onde as ovelhas receberam 200 mg de pFSH, enquanto o grupo FSH128 totalizou 128 mg em doses decrescentes intervaladas por 12 horas. Doze horas após o final do tratamento, foi realizada a detecção de estro, a cada quatro horas, utilizando dois carneiros Dorper, de fertilidade comprovada. As ovelhas foram cobertas no início do estro e 24 horas depois. Sete dias após a retirada do dispositivo intravaginal, foi realizada a avaliação da resposta superovulatória e a colheita de embriões pelo método de laparotomia. O lavado recuperado foi submetido à procura de embriões em estereomicroscópio e classificados de acordo com sua qualidade. Para comparação dos diversos parâmetros, foi utilizada a Análise de Variância (ANOVA), seguida da realização do teste LSD. Os dados expressos em porcentagem foram submetidos ao Teste de Qui-quadrado. A taxa de ovulação foi superior no grupo FSH200 com 16,3 ± 0,3 corpos lúteos (CL) quando comparado ao grupo FSH128 com de 11,3 ± 0,3 CL (P 0,05). Entretanto, foi verificada uma maior taxa de fecundação (83,6% vs. 62,4%) e uma maior taxa de embriões transferíveis (86,0% vs.71,6%) e congeláveis (67,9% vs. 40,8%) no grupo FSH 128 quando comparado ao grupo que recebeu200 mg. Além disso, não foi observada qualquer diferença significativa entre os grupos experimentais, para os demais parâmetros avaliados demonstrando que a redução da dose de pFSH promove maior produção de embriões congeláveis e transferíveis em ovinos Dorper submetidos à MOTE.(AU)

Effect of pFSH dose reduction on in vivo embryo production in Dorper ewes / Efeito da redução da dose de pFSH na produção in vivo de embriões em ovelhas Dorper

To evaluate the effect of pFSH dose on the in vivo embryo production of Dorper ewes in the semi-arid northeast of Brazil, 40 sheep females were distributed into two groups of 20 animals that received intravaginal CIDR for 14 days, and two days before device removal, they received one of the following treatments: in the FSH200 group, the ewes received 200 mg of pFSH; and in the FSH128 group, the ewes received a total of 128 mg in decreasing doses every 12 h. Beginning 12 h after the conclusion of the treatments, estrus detection was performed every four hours using two Dorper rams of proven fertility. The ewes were mated at estrus onset and 24 hours later. Seven days after intravaginal device removal, the superovulatory response was evaluated, and embryo collection was performed using the laparotomy method. The recovered flushings were subjected to embryo searches under a stereomicroscope and classified according to their qualities. Analyses of variance (ANOVAs) and LSD tests were used to compare the different parameters. The data expressed as percentages were analysed by chi-square test. The ovulation rate was higher in the FSH200 group, which had 16.3 ± 0.3 corpora lutea (CL), than in the FSH128 group, which had 11.3 ± 0.3 CL (P 0.05). However, higher fertilization rate (83.6% vs. 62.4%) and higher transferable (86.0% vs. 71.6%) and freezable (67.9% vs. 40.8%) embryo rates were observedin the FSH 128 group compared with the group that received 200 mg. Furthermore, no significant differences in the remaining parameters were observed between the experimental groups (P>0.05), demonstrating that pFSH dose reduction promoted a greater production of freezable and transferableembryos in Dorper ewes subjected to MOET.

Com o objetivo de avaliar o efeito da redução de pFSH na produção in vivo de embriões de ovelhas da raça Dorper exploradas no semiárido do Nordeste do Brasil, 40 fêmeas ovinas foram distribuídas em dois grupos com 20 animais, os quais receberam um CIDR intravaginal por 14 dias e dois dias antes da remoção do dispositivo receberam um tratamento superovulatório proposto: grupo FSH200 onde as ovelhas receberam 200 mg de pFSH, enquanto o grupo FSH128 totalizou 128 mg em doses decrescentes intervaladas por 12 horas. Doze horas após o final do tratamento, foi realizada a detecção de estro, a cada quatro horas, utilizando dois carneiros Dorper, de fertilidade comprovada. As ovelhas foram cobertas no início do estro e 24 horas depois. Sete dias após a retirada do dispositivo intravaginal, foi realizada a avaliação da resposta superovulatória e a colheita de embriões pelo método de laparotomia. O lavado recuperado foi submetido à procura de embriões em estereomicroscópio e classificados de acordo com sua qualidade. Para comparação dos diversos parâmetros, foi utilizada a Análise de Variância (ANOVA), seguida da realização do teste LSD. Os dados expressos em porcentagem foram submetidos ao Teste de Qui-quadrado. A taxa de ovulação foi superior no grupo FSH200 com 16,3 ± 0,3 corpos lúteos (CL) quando comparado ao grupo FSH128 com de 11,3 ± 0,3 CL (P 0,05). Entretanto, foi verificada uma maior taxa de fecundação (83,6% vs. 62,4%) e uma maior taxa de embriões transferíveis (86,0% vs.71,6%) e congeláveis (67,9% vs. 40,8%) no grupo FSH 128 quando comparado ao grupo que recebeu200 mg. Além disso, não foi observada qualquer diferença significativa entre os grupos experimentais, para os demais parâmetros avaliados demonstrando que a redução da dose de pFSH promove maior produção de embriões congeláveis e transferíveis em ovinos Dorper submetidos à MOTE.

Addition of sucrose on cryoprotectant solution of vitrification enhances the quality of Dorper sheep embryos produced in vivo / Adição de sacarose na solução crioprotetora de vitrificação melhora a qualidade de embriões ovinos Dorper produzidos in vivo

This study aimed to evaluate the efficacy of adding sucrose in vitrification solution of ovine embryos produced in vivo. Forty Dorper ewes were selected and superovulated. Immediately prior to the embryo collection by laparotomy, a laparoscopy was performed to verify the superovulatory response. The recovered flushing was followed by embryo evaluation and embryos were divided in two experimental groups where embryos from Control group were submitted to a traditional vitrification protocol and embryos from Sucrose group to a modified vitrification protocol with sucrose. After warming, embryos were again divided regarding cryoprotectant removal (Indirect) or not (Direct). The embryo quality was classified as embryos of degrees I (excellent or good), II (regular), III (poor) and IV (dead or degenerate). It was also verified the homogeneity of mass, occurrence of embryonic mass retraction and rupture of pellucid zone. The results were expressed as percentages and were subjected to Chi-square test with P 0.05. The embryos vitrified in the presence of sucrose had lower proportions of lower-quality embryos after warming (22.20 vs. 44.50%), higher percentages of homogeneous embryos after warming (63.89 vs. 38.89 %) while concerning other parameters there was no difference between these groups. It can be concluded that the addition of 0.4 M sucrose during vitrification improves the embryo quality.

Este estudo objetivou avaliar a eficácia da adição de sacarose na solução de vitrificação de embriões ovinos produzidos in vivo. Foram selecionadas 40 ovelhas da raça Dorper as quais foram superovuladas. Imediatamente antes da colheita de embriões por laparotomia, uma laparoscopia foi realizada para verificar a resposta superovulatória. O lavado recuperado foi submetido à procura e avaliação de embriões e estes foram divididos em dois grupos experimentais, onde os embriões do Grupo Controle foram submetidos ao protocolo tradicional de vitrificação e os embriões do Grupo Sacarose a um protocolo modificado de vitrificação com sacarose. Após a descongelação, os embriões foram novamente divididos considerando a remoção (Indireto) ou não (Direto) do crioprotetor. A qualidade embrionária foi classificada como embriões de graus I (excelente ou bom), II (regular), III (pobre) e IV (morto ou degenerado). Foi também verificada a homogeneidade da massa, ocorrência de retração da massa e ruptura de zona pelúcida. Os resultados foram expressos em porcentagem e foram submetidos ao teste do Qui-quadrado com P < 0.05. Os embriões vitrificados na presença de sacarose apresentaram menores proporções de embriões de menor qualidade após a descongelação (22,20 vs. 44,50%), e maiores percentuais de embriões homogêneos após a descongelação (63,89 vs. 38,89%) enquanto com relação aos demais parâmetros não existiram diferenças entre grupos. Pode-se concluir que a adição de 0,4 M de sacarose durante os procedimentos de vitrificação e descongelação beneficia a qualidade embrionária.

Redução da resposta superovulatória de fêmeas bovinas superestimuladas com FSH em doses split / Reduced superovulatory response of bovine females overstimulated with FSH in split doses

Objetivou-se avaliar a superovulação (SOV) de vacas zebuínas, utilizando protocolo convencional ou protocolo com número menor de aplicações e similar dosagem (dose split). Utilizaram-se 16 fêmeas (total 32 SOV), com idade entre 17-42 meses e escore de condição corporal 2,5-4 (escala de 1-5), em delineamento tipo cross-over. No início do tratamento (D0), os animais receberam um dispositivo de progesterona e 2mg de benzoato de estradiol. As fêmeas do grupo convencional receberam 250UI de FSH/LH divididas em oito doses decrescentes administradas em intervalos de 12h (FSH/LH no D4, D5, D6 e D7 no período da manhã e tarde, nas respectivas dosagens: 50,0 UI; 37,5 UI; 25,0 UI; 12,5 UI). No D7 pela manhã, as fêmeas foram tratadas com 150μg de D+cloprostenol, e a remoção da progesterona foi realizada no D7 à tarde. As fêmeas do grupo split também receberam 250 UI de FSH/LH. No D4 de manhã, administraram-se 62,5 UI de FSH/LH via IM e 125 UI por via SC. Quarenta e oito horas após (D6) administraram-se 62,5 UI via SC e na manhã do D7 foi removida a progesterona e aplicaram-se 150μg de D+cloprostenol. As fêmeas de ambos os grupos receberam 50μg de análogo de GnRH no D8 pela manhã e foram inseminadas 12 e 24 horas após. No D15 realizou-se a colheita dos embriões em ambos os tratamentos. Avaliou-se a resposta superovulatória pela contagem do número de folículos e CLs de cada ovário, com auxílio de ultrassom. Todas as variáveis foram submetidas ao teste T de Student para amostras pareadas. Houve diferença (P<0,05) na quantidade de folículos acima de 8mm no D8 (9,06±4,54 e 5,50±4,59); número de CLs no dia da colheita (8,12± 3,26 e 4,69±3,46), número de embriões totais (6,69±3,05 e 3,37±2,50) e de embriões viáveis (5,25±2,29 e 2,37±1,78) nas vacas do grupo convencional em relação às do split, respectivamente. Conclui-se que o protocolo split tem pior resposta superovulatória e de produção in vivo de embriões, em vacas zebuínas, quando comparado ao protocolo convencional.(AU)

The aim of this study was to evaluate the superovulation (SOV) response of zebu cows, using conventional protocol or other protocol with similar dose but smaller number of applications (split dose). 16 females (32 SOV), aged 17-42 months, and body condition score of 2.5-4 (1-5 scale) were used in randomized cross-over. At the start of treatment (D0), the animals received progesterone device and 2mg of estradiol benzoate. The females from the conventional group received 250 IU of FSH/LH divided into eight decreasing doses administered at intervals of 12 hours (FSH/LH in D4, D5, D6 and D7, with their respective strengths: 50.0 IU, 37.5 IU, 25.0 IU, 12.5 IU). In D7, the females were treated with 150μg of D+cloprostenol, and the removal of progesterone device was held in the afternoon. The females from the split group also received 250 IU of FSH/LH. In the morning D4 was administered in 62.5 IU FSH/LH IM and 125 IU subcutaneously. Forty eight hours later (D6) 62.5 IU was administered subcutaneously in the morning and on D7, the progesterone device was removed and 150 μg of D+cloprostenol was applied. The females in both groups were given 50 μg of GnRH in the morning and on D8 were inseminated after 12 and 24 hours. On D15 the embryo collection was performed in both treatments. The evaluation of superovulatory response was done by counting the number of follicles and corpus luteum (CL) in each ovary, with the aid of ultrasound. The variables were assessed by Student's t test for paired samples. There were differences (P<0.05) in the number of follicles over 8mm in D8 (9.06±4.54 and 5.50±4.59); in the amount of CL at the time of collection (8.12±3.26 and 4.69±3.46), total number of embryos (6.69±3.05 and 3.37±2.50) and viable embryos (5.25±2.29 and 2.37±1.78) for cows in the conventional group compared to the split group, respectively. It is concluded that the split protocol has worse superovulatory response and in vivo production of embryos in zebu cows compared with the conventional protocol.(AU)

Situação atual da superovulação em ovinos / Current status of superovulation in ewes

Esta revisão apresenta uma visão geral e crítica da base técnica dos procedimentos de superovulação,expondo as limitações e os últimos avanços dessa tecnologia na produção de embriões ovinos. Entre osresponsáveis pelas limitações dos protocolos comumente empregados, destacam-se a variabilidade no grau depurificação das gonadotrofinas derivadas da hipófise, a falta de controle da dinâmica folicular, as falhas noprocesso de fertilização e o elevado índice de regressão prematura do corpo lúteo. Algumas abordagens foramempregadas visando ao controle desses limitantes e obteve-se aceitável resposta superovulatória, como: autilização de gonadotrofinas recombinantes; a superestimulação no dia, ou em até 24 h, da emergência de umaonda folicular; a administração de GnRH e seus agonistas, como indutores de ovulação, principalmente quandofor realizada inseminação artificial com sêmen congelado; e a aplicação de hCG, GnRH ou inibidores daprostaglandina F2α após a ocorrência das ovulações múltiplas. Essas abordagens resultaram em melhoriasrelevantes nos programas de MOTE em ovinos.(AU)

The present paper reviews an overview and critique of the technical basis of the procedures forsuperovulation, exposing the limitations and recent advances in this technology in production of sheep embryos.Among those responsible for the limitations of commonly used protocols, those that stand out are the variability inthe degree of purification of pituitary gonadotropins, the lack of control of follicular dynamics, failures in thefertilization process and the high rate of premature regression of the corpus luteum. Some approaches have beenemployed for the control of these impediments, enhancing superovulatory response, such as the use of recombinantgonadotropins; superstimulation on the day or within 24 h of emergence of a follicular wave; and the administrationof GnRH agonists to induce ovulation, especially when artificial insemination is carried out with frozen semen; andthe administration of hCG, GnRH or prostaglandin F2α inhibitors after the occurrence of multiple ovulations.These approaches have resulted in significant improvements to MOET programs in sheep.(AU)

Situação atual da superovulação em ovinos / Current status of superovulation in ewes

Esta revisão apresenta uma visão geral e crítica da base técnica dos procedimentos de superovulação,expondo as limitações e os últimos avanços dessa tecnologia na produção de embriões ovinos. Entre osresponsáveis pelas limitações dos protocolos comumente empregados, destacam-se a variabilidade no grau depurificação das gonadotrofinas derivadas da hipófise, a falta de controle da dinâmica folicular, as falhas noprocesso de fertilização e o elevado índice de regressão prematura do corpo lúteo. Algumas abordagens foramempregadas visando ao controle desses limitantes e obteve-se aceitável resposta superovulatória, como: autilização de gonadotrofinas recombinantes; a superestimulação no dia, ou em até 24 h, da emergência de umaonda folicular; a administração de GnRH e seus agonistas, como indutores de ovulação, principalmente quandofor realizada inseminação artificial com sêmen congelado; e a aplicação de hCG, GnRH ou inibidores daprostaglandina F2α após a ocorrência das ovulações múltiplas. Essas abordagens resultaram em melhoriasrelevantes nos programas de MOTE em ovinos.

The present paper reviews an overview and critique of the technical basis of the procedures forsuperovulation, exposing the limitations and recent advances in this technology in production of sheep embryos.Among those responsible for the limitations of commonly used protocols, those that stand out are the variability inthe degree of purification of pituitary gonadotropins, the lack of control of follicular dynamics, failures in thefertilization process and the high rate of premature regression of the corpus luteum. Some approaches have beenemployed for the control of these impediments, enhancing superovulatory response, such as the use of recombinantgonadotropins; superstimulation on the day or within 24 h of emergence of a follicular wave; and the administrationof GnRH agonists to induce ovulation, especially when artificial insemination is carried out with frozen semen; andthe administration of hCG, GnRH or prostaglandin F2α inhibitors after the occurrence of multiple ovulations.These approaches have resulted in significant improvements to MOET programs in sheep.

CARACTERIZAÇÃO DE FOLÍCULOS OVARIANOS DE OVELHAS SANTA INÊS PORTADORAS DA MUTAÇÃO FecGE

Objetivou-se caracterizar os folículos ovarianos de ovelhas Santa Inês portadoras da mutação FecGE. Para isso, o trabalho foi constituído por quatro experimentos, nos quais as ovelhas foram distribuídas conforme seu grupo genótipo em homozigotas não mutantes (FecG+/+), heterozigotas (FecG+/E) e homozigotas mutantes (FecGE/E). No Primeiro Experimento objetivou-se avaliar algumas características ovarianas e foliculares e analisar a possibilidade de discriminação entre os grupos genótipos. Os ovários das ovelhas (n = 65) foram pesados, mensurados e os folículos (oócito, núcleo e nucléolo) histologicamente avaliados quanto a sua morfometria e morfologia. Os folículos morfologicamente normais, nos estágios primordiais e de transição, explicaram 70,18% da variabilidade existente entre ovelhas mutantes e não mutantes. Na avaliação morfométrica houve discriminação das ovelhas FecGE/E, FecG+/E daquelas FecG+/+ nos estágios de folículos primordiais em 36,76% e nos secundários em 10,63%. Os resultados permitem concluir que folículos morfologicamente normais nos estágios de desenvolvimento primordial e de transição são os parâmetros que possibilitam uma melhor discriminação das ovelhas portadoras da mutação FecGE. Além disso podem servir para viabilizar, de modo mais eficiente, o uso de biotécnicas que utilizam os folículos nos estágios iniciais como base na morfologia. No Segundo experimento objetivou-se caracterizar a morfologia e a morfometria dos folículos multioócitos (MOFs) e analisar a influência da variante genética FecGE sobre suas características. Os MOFs foram identificados e classificados quanto ao estágio de desenvolvimento, quantidade de oócitos inclusos, morfologia e morfometria. A frequência dos MOFs não sofreu influência (P > 0,05) da mutação (FecGE/E - 3,5%, FecG+/E - 3,3%, FecG+/+ - 3,0%), porém, constatou-se uma maior viabilidade (P < 0,05) nos MOFs de transição nas ovelhas FecGE/E (95,0%) e FecG+/E (90,9%) em relação as FecG+/+ (73,3%). Os resultados permitem concluir que a frequência dos MOFs não é influenciada pela mutação FecGE. Porém, as ovelhas mutantes possuem uma maior frequência desses folículos morfologicamente normais no estágio de transição. Ainda permitem concluir que os MOFs de transição morfologicamente normais com dois oócitos é o parâmetro que melhor discrimina as ovelhas portadoras da mutação. No Terceiro Experimento objetivou-se caracterizar a influência da mutação FecGE sobre a morfometria, morfologia e dinâmica dos folículos ovarianos. Fragmentos ovarianos (n=84) foram processados e os folículos analisados quanto a morfologia e morfometria pela histologia clássica. Para a avaliação da dinâmica folicular, as ovelhas tiveram o ciclo estral sincronizado e monitorado durante o período interovulatório. Foi observada uma maior (P < 0,05) porcentagem de folículos morfologicamente normais no estágio primordial nas ovelhas FecGE/E (90,0%) e FecG+/E (88,1%) quando comparadas àquelas FecG+/+ (73,0%). Maior (P < 0,05) quantidade de folículos morfologicamente normais no estágio de transição foi registrado nas ovelhas FecGE/E (87,3%) e FecG+/E (83,3%) do que naquelas FecG+/+ (76,8%). Na dinâmica folicular, registrou-se maior (P < 0,05) número de ovulações nas ovelhas FecGE/E (2,5 ± 0,2) quando comparado àquelas FecG+/+ (1,5 ± 0,3). Os folículos ovulatórios apresentaram menor diâmetro (P < 0,05) nas ovelhas FecGE/E (5,1 mm) e FecG+/E (5,2 mm) do que naquelas FecG+/+ (5,8 mm). Os resultados permitem concluir que as ovelhas com a mutação FecGE apresentam maior porcentagem de folículos morfologicamente normais nos estágios primordial e de transição e que as ovelhas FecGE/E expressam maior número de ovulações. Além disso, as ovelhas FecGE/E e FecG+/E apresentam folículos ovulatórios de menor diâmetro do que aquelas FecG+/+. No quarto experimento objetivou-se caracterizar a influência da mutação FecGE em ovelhas doadoras superovuladas e avaliar a probabilidade de modelos logísticos para a obtenção de melhores respostas superovulatórias. Constatou-se que a quantidade de corpos lúteos, bem como a taxa de embriões congeláveis e de fertilização discriminou ovelhas portadoras da mutação daquelas não portadoras. A taxa de recuperação foi maior (P<0,05) nas doadoras FecGE/E em relação as FecG+/E e as FecG+/+. Nas ovelhas FecG+/+ a taxa de fertilização foi maior que a FecG+/E e as ovelhas FecGE/E apresentaram valores semelhantes as demais. Constatou-se que a associação de ovelhas solteiras e portadoras do genótipo E/E, ovelhas solteiras pluríparas e ovelhas solteiras com mais de 6 anos são combinações que aumentam a probabilidade de melhores resultados superovulatórios. Os resultados permitem concluir que existe discriminação entre os grupos genótipos quando se avalia a resposta superovulatória. Que as ovelhas FecGE/E apresentaram maior taxa de estruturas recuperadas quando comparadas aos demais genótipos, porém com valor similar da taxa de estruturas fertilizadas em relação àquelas FecG+/+. Conclui-se ainda que modelos que incluem o status reprodutivo e a mutação, status reprodutivo e idade, status reprodutivo e quantidade de partos são adequados para predizer uma boa quantidade de corpos lúteos em ovelhas com ovário estimulados.

The aim was to characterize the ovarian follicles from Santa Inês ewes harboring the FecGE mutation. Therefore, this work was composed of four experiments, in which ewes were distributed according to the genotype into non-mutant homozygote (FecG+/+), heterozygotes (FecG+/E) and homozygous mutant (FecGE/E). In the first experiment, it was aimed to evaluate ovarian and follicular characteristics and to analyze the possibility of grouping them according to the genotypes. Ewes ovaries (n = 65) were weighted, measured and follicles (oocyte, nucleus and nucleolus) were histologically evaluated for its morphometrics and morphology. The follicles were morphologically normal, within the primordial and transition stages, thus explaining 70.18% of the variability existing between mutant and non-mutant. The morphometrics analysis did distinguish FecGE/E, FecG+/E ewes from their FecG+/+ controls on the primordial follicle stage in 36.76% and secondary stage in 10.63% of them. The results allow the conclusion that morphologically normal follicles in the primordial and transition stages of development allow for a better discrimination of ewes harboring the Fec E mutation. Moreover, such information can make it more viable and efficient to use biotechnologies that are based on follicles within the initial stages based on morphologic standards. In the second experiment, the aim was to characterize the morphology and morphometrics of multi-oocyte follicles (MOFs) and further analyze the influence of the FecGE genetic variance on such trait. The MOFs were identified and classified according to their stage of development, quantity of included oocytes, morphology, and morphometrics. The frequency of MOFs was not influenced (P > 0.05) by the mutation (FecGE/E- 3.5%, FecG+/E 3.3%, FecG+/+ - 3.0%), however, there was a greater viability (P < 0.05) in transition MOFs of FecGE/E (95.0%) and FecG+/E (90.9%) ewes in comparison to FecG+/+ ewes (73.3%). The results allow concluding that the frequency of MOFs was not influenced by the FecGE mutation. However, mutant ewes hold a greater frequency of such morphologically normal follicles in the transition stage. It still allows for concluding that transition MOFs with two oocytes is the best predictor to discriminate ewes harboring the mutation. In the third experiment, it was aimed to characterize the of the FecGE mutation on the morphometrics, morphology, and ovarian follicle dynamics. Ovarian fragments (n = 84) were processed and the follicles were analyzed according to their morphology and morphometrics by classical histology. To evaluate follicular dynamics, ewes had their estrous cycle synchronized and further monitored during the inter-ovulatory period. It was observed a greater (P < 0.05) percentage of morphologically normal follicles in the primordial stage for FecGE/E (90.0%) and FecG+/E (88.1%) ewes when compared to the FecG+/ + (73.0%) group. A greater (P < 0,05) quantity of morphologically normal follicles on the transition stage were registered in FecGE/E (87.3%) and FecG+/E (83,3%) ewes than FecG+/+ (76.8%) ewes. For follicular dynamic, it was observed a higher (P < 0.05) number of ovulations in FecGE/E ewes (2.5 ± 0.2) than FecG+/+ ewes (1.5 ± 0.3). The ovulatory follicles displayed smaller diameter (P < 0.05) than FecGE/E (5.1 mm) and FecG+/E (5.2 mm) ewes than FecG+/+ ewes (5.8 mm). The results allow the conclusion that ewes harboring a FecGE mutation display a greater percentage of morphologically normal follicles in both primordial and transition stages and FecGE/E ewes hold a greater number of ovulations. Further, FecGE/E and FecG+/E ewes display smaller ovulatory follicles than FecG+/+ ewes. In the fourth experiment, it was aimed to characterize the influence of the FecGE mutation in donor ewes subject to super-ovulation and to evaluate the probability of using logistic models to obtain better super-ovulatory responses. It was found that the quantity of corpus luteum, fertilization and freezable embryo rates allowed for determining ewes harboring the mutation to those non-mutant controls. The recovery rate was higher (P < 0.05) in FecGE/E donors than FecG+/E and FecG+/+ ewes. In FecG+/+ ewes, the fertilization was higher than the FecG+/E and FecGE/E ewes, which showed similar results to each other. It was noted that the association of single ewes and those from the E/E genotype, single pluriparous ewes and six-year old single ewes are combinations that increase the probability of better super-ovulatory results. The results allow concluding that there is discrimination between genotypes in terms of super-ovulatory response. Since FecGE/E ewes display higher recovery rates than other genotypes, although fertilization rates were similar among genotypes. In conclusion, models that include the reproductive status and the mutation, the reproductive status and age, reproductive status and number of deliveries are adequate to predict the quantity of corpus luteum in super-ovulated ewes.

Produção de embriões in vivo e expressão dos genes IGF-IR, IGF-II, GLUT-I e HSP 70.1 em embriões de cabras alimentadas com bagaço de caju desidratado ou raspa de mandioca

O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos do bagaço de caju (BC) e raspa de mandioca (RM) na alimentação sobre a produção de embriões in vivo e expressão de diferentes genes em cabras. Três dietas foram oferecidas a 28 cabras em quantidade para satisfazer 1,5 vezes as exigências de manutenção. A dieta controle foi composta por feno de tifton e concentrado (milho 80%, farelo de soja 15%, minerais 5%). Nos tratamentos, o farelo de soja foi substituído parcialmente pelo bagaço de caju ou raspa de mandioca no concentrado. Após o tratamento de superovulação, os embriões foram recuperados e classificados de acordo com as normas da IETS. A expressão relativa de RNAm para IGF-IR, IGF-II, GLUT-I and HSP-70.1 em embriões caprinos foi determinada pela RT-PCR semi-quantitativa. Não houve diferença entre dietas (p>0,05) na taxa de ovulação, resposta superovulatória, recuperação embrionária e taxa de fertilidade. O número de embriões não diferiu entre as dietas (p>0,05), porém no grupo BC e RM houve um incremento de mórulas (p 0,05). A expressão gênica diferiu apenas para o gene HSP 70.1 no grupo RM, não havendo diferenças na expressão dos genes IGF-IR, IGF-II e GLUT-I (p>0,05). A utilização do BC e da RM foram eficientes na produção de embriões in vivo e apenas a raspa de mandioca afetou a expressão do gene HSP 70.1, relacionado ao estresse embrionário. 2t es0 16%

Morfometria do aparelho genital e resposta superovulatória de coelhas suplementadas com geleia real / Morphometry of the genital tract and superovulatory response in rabbits supplemented with royal jelly

Avaliou-se o efeito da suplementação com geleia real sobre a morfometria do aparelho genital, resposta superovulatória e qualidade embrionária de coelhas. Trinta e seis fêmeas foram distribuídas em quatro grupos (G), sendo: G1 (n=9) formado por animais não suplementados com geleia real, e G2, G3 e G4 (n=9 em cada grupo) por animais suplementados com 10, 20 e 40mg/dia de geleia real. A superovulação consistiu na aplicação de 40UI de gonadotrofina coriônica equina, seguida por 40UI de gonadotrofina coriônica humana, via intramuscular, 48 horas após, e submetidas à cobrição natural. Os animais foram sacrificados, e os embriões coletados 72 horas após a cópula. Não houve diferença estatística entre tratamentos para as variáveis analisadas. O peso médio do aparelho genital foi de 10,88±0,38g; dos ovários - direito e esquerdo -, 0,28±0,02g; e o índice gonadossomático, 0,02±0,0g. O número médio de estruturas totais recuperadas foi de 9,2±1,4; de embriões viáveis, 8,7±1,4; e de degenerados, 0,5±0,2. Dos embriões viáveis, 5,6±0,8 foram classificados como grau I; 2,3±0,5, como grau II; e 0,8±0,2, como grau III. A suplementação com geleia real na dose de até 40mg/dia não apresentou efeito estimulador sobre o aparelho genital e a qualidade embrionária de coelhas.(AU)

The purpose of this paper was to assess the effect of supplementation of royal jelly on the morphometry of the genital tract, superovulatory response and embryonic quality in adult rabbits. 36 rabbits were distributed in four groups (G), as follows: G1 (n=9): no supplementation with royal jelly, G2, 3 and 4 (n=9): supplementation with 10, 20 and 40mg/day of royal jelly. The superovulatory protocol consisted in the application of a dose of 40UI of Equine Chorionic Gonadotrophin, followed by a dose of UI of Human Chorionic Gonadotrophin, intramuscularly, 48 hours later, and submitted to natural cover. The animals were euthanasiated and the embryos collected 72 hours after copulation. There was no statistical difference for the analyzed variables (P>0.05). The average weight for the female genital tract was 10.89±0.38g; the average weight of right and left ovaries was 0.28±0.02g and the average gonadosomatic index rate was 0.02±0.0g. The number of total recovered structures was 9.2±1.4. The average number of viable embryos was 8.7±1.4 and of degenerated embryos was 0.5±0.2. Viable embryos were morphologically classified as degree I: 5.6±0.8; degree II: 2.3±0.5; degree III: 0.8±0.2. Royal jelly did not present stimulatory effect on organs related to the reproduction of rabbits, nor was it effective to improve their embryonic quality at dosages of up to 40mg of in natura royal jelly.(AU)

Superovulação e transferência de embriões em ovelhas / Multiple ovulation and embryo transfer in the ewe

A ovinocultura possui posição de destaque atualmente na pecuária brasileira, devido a uma crescente necessidade dos centros urbanos em cortes especiais de ovinos. Isto impõe que a ovinocultura eleve os seus índices produtivos, o que aumenta a relevância das biotecnologias da reprodução animal no melhoramento genético da espécie ovina. A superovulação com posterior transferência de embriões entre essas biotecnologias, ganha importância na multiplicação de indivíduos de elevado mérito produtivo. Por outro lado, há grandes limitações na sua utilização, nos custos do procedimento, no método de colheitas das estruturas embrionárias, na dificuldade de se promover um crescimento folicular uniforme, levando-a a apresentar uma extensa variabilidade na resposta superovulatória. A colheita dos embriões via transcervical esbarra na barreira natural da cérvix, que apresenta uma conformação de anéis acêntricos de difícil transposição, promovendo uma limitação no seu usoem escala comercial. O objetivo desta revisão é demonstrar alguns dos fatores limitantes na utilização dessa biotécnica para que, com isto, novas alternativas venham a ser utilizadas, a fim de que a superovulação e a transferência de embriões se tornem uma realidade na criação de ovinos do Brasil.(AU)

The sheep industry has a prominent position in the Brazilian livestock industry today due to a growing need in urban centers for special cuts of meat. This sets higher standards for the industry and the need for better production rates, increasing the importance of animal reproduction biotechnologies as a way to achieve genetic improvement when breeding sheep. Multiple ovulation and subsequent embryo transfer (MOET), takes great importance in the multiplication of individuals of high productive levels. On the other hand, there are major limitations using this technique, the cost of the procedure, the method of harvesting embryonic structures, the difficulty in promoting a uniform follicular growth, resulting in great response variability. The transcervical embryo collection touches the natural barrier of the cervix, which has a conformation of acentric rings of difficult access, providing limitations to its use on a commercial scale. This review demonstrates some of the limiting factors in using this biotechnology in hopes to inspire new alternatives that will make MOET a viable reality in the sheep industry in Brazil.(AU)

Superovulação e transferência de embriões em ovelhas / Multiple ovulation and embryo transfer in the ewe

A ovinocultura possui posição de destaque atualmente na pecuária brasileira, devido a uma crescente necessidade dos centros urbanos em cortes especiais de ovinos. Isto impõe que a ovinocultura eleve os seus índices produtivos, o que aumenta a relevância das biotecnologias da reprodução animal no melhoramento genético da espécie ovina. A superovulação com posterior transferência de embriões entre essas biotecnologias, ganha importância na multiplicação de indivíduos de elevado mérito produtivo. Por outro lado, há grandes limitações na sua utilização, nos custos do procedimento, no método de colheitas das estruturas embrionárias, na dificuldade de se promover um crescimento folicular uniforme, levando-a a apresentar uma extensa variabilidade na resposta superovulatória. A colheita dos embriões via transcervical esbarra na barreira natural da cérvix, que apresenta uma conformação de anéis acêntricos de difícil transposição, promovendo uma limitação no seu usoem escala comercial. O objetivo desta revisão é demonstrar alguns dos fatores limitantes na utilização dessa biotécnica para que, com isto, novas alternativas venham a ser utilizadas, a fim de que a superovulação e a transferência de embriões se tornem uma realidade na criação de ovinos do Brasil.

The sheep industry has a prominent position in the Brazilian livestock industry today due to a growing need in urban centers for special cuts of meat. This sets higher standards for the industry and the need for better production rates, increasing the importance of animal reproduction biotechnologies as a way to achieve genetic improvement when breeding sheep. Multiple ovulation and subsequent embryo transfer (MOET), takes great importance in the multiplication of individuals of high productive levels. On the other hand, there are major limitations using this technique, the cost of the procedure, the method of harvesting embryonic structures, the difficulty in promoting a uniform follicular growth, resulting in great response variability. The transcervical embryo collection touches the natural barrier of the cervix, which has a conformation of acentric rings of difficult access, providing limitations to its use on a commercial scale. This review demonstrates some of the limiting factors in using this biotechnology in hopes to inspire new alternatives that will make MOET a viable reality in the sheep industry in Brazil.