Evaluation of the MALDI-TOF mass spectrometry technique for the identification of dermatophytes: Use of an extended database / Evaluación de la técnica de espectrometría de masas MALDI-TOF para la identificación de dermatofitos: utilización de una base de datos ampliada

Background: Identification of dermatophytes is usually performed through morphological analyses. However, it may be hindered due to the discovery of new species and complexes and, with some isolates, by the absence of fructification. Matrix-assisted laser desorption/ionisation-time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) seems to be an option for improving identification. Aims: To develop a database (DB) for the identification of dermatophytes with MALDI-TOF MS, including 32 isolates from the Red de Micología de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires [Mycology Network of the Autonomous City of Buenos Aires] (RMCABA) and one reference isolate (RMCABA DB), and evaluate its performance when added to the DB from the supplier, Bruker (Bruker DB). Methods: All the isolates in the RMCABA DB were identified based on morphology and sequencing. To evaluate the performance of the extended DB (Bruker DB plus RMCABA DB), 136 clinical isolates were included. Results: The percentages of identification at the species level increased from 45% to 88%, but the identification at the genus level decreased from 23% to 7%.Conclusions: MALDI-TOF MS yielded better performance in the identification of dermatophytes after including the RMCABA DB, which encompassed local isolates.(AU)

Antecedentes: La identificación de dermatofitos se realiza, usualmente, a través del análisis morfológico, pero puede verse dificultada por la aparición de nuevas especies y complejos de especies y, en algunos aislamientos, por la falta de elementos de fructificación. Matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) aparece como una alternativa para mejorar la identificación. Objetivos: Construir una base de datos (BaDa) para la identificación de dermatofitos mediante MALDI-TOF MS, con 32 aislamientos de la Red de Micología de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires (RMCABA) y una cepa de referencia (BaDa RMCABA), y evaluar su desempeño al incorporarla a la BaDa del proveedor Bruker (BaDa Bruker). Métodos: Todos los aislamientos incorporados a la BaDa RMCABA se identificaron por morfología y secuenciación. Para la evaluación de la BaDa ampliada (BaDa Bruker más BaDa RMCABA) se incluyeron 136 aislamientos clínicos. Resultados: El porcentaje de identificación a nivel de especie se incrementó del 45 al 88%, mientras que la identificación a nivel de género disminuyó del 23 al 7%. Conclusiones: Con la incorporación de la BaDa RMCABA, que contó con aislamientos regionales, se observó un mejor desempeño en la identificación de dermatofitos por MALDI-TOF MS.(AU)

PCR a tiempo real comercial para diagnóstico rápido de las onicomicosis: un nuevo algoritmo de trabajo en el laboratorio clínico / Commercial real time PCR implementation for rapid diagnosis of onychomycosis: A new workflow in a clinical laboratory

Introduction: Onychomycosis is a frequent and underdiagnosed condition. Approximately 90% of toenail onychomycosis infections are caused by dermatophytes, but classical diagnosis based on culture and microscopy observation is slow and has low sensitivity. Both limitations can be solved incorporating molecular techniques to routine diagnosis of onychomycosis. Objective: Prospective evaluation of the utility of incorporating in the clinical laboratory workflow a commercial real time PCR (qPCR) for dermatophytes detection in nails after potassium hydroxide direct observation screening. Materials and methods: 152 nail samples were included (34 KOH negative and 118 KOH positive) and processed by culture and qPCR. Results: In the negative KOH group, only one dermatophyte grew in culture and three were detected by qPCR. In the group of positive KOH, 57 dermatophytes grew in culture and 81 were detected by qPCR. In this group, 25% of diagnosed dermatophytes were detected only by qPCR. The sensitivity of qPCR compared to culture is 92.8% and time of response decreases from days to hours. Conclusion: Based in our results, we propose a workflow algorithm for a clinical laboratory that eliminates culture for qPCR positive samples.(AU)

Introducción: La onicomicosis es una patología frecuentemente infradiagnosticada. Aproximadamente el 90% de las infecciones en las uñas del pie están causadas por dermatofitos, pero el diagnóstico microbiológico clásico basado en cultivo y microscopia es lento y tiene una baja sensibilidad. Ambas limitaciones pueden resolverse incorporando técnicas moleculares al diagnóstico de la onicomicosis. Objetivo: Evaluación prospectiva de la utilidad de incorporar en un laboratorio clínico una PCR a tiempo real (qPCR) comercial para detección de dermatofitos en uñas tras cribado por examen directo con hidróxido de potasio (KOH). Materiales y métodos: Se incluyeron 152 muestras de uñas (34 KOH negativas y 118 KOH positivas) y se procesaron mediante cultivo y qPCR. Resultados: En el grupo KOH negativo, solo un dermatofito creció en cultivo y 3 se detectaron mediante qPCR. En el grupo KOH positivo, 57 dermatofitos crecieron en cultivo y 81 se detectaron por qPCR. En este grupo, el 25% de los dermatofitos diagnosticados se detectaron únicamente mediante qPCR. La sensibilidad de la qPCR comparada con el cultivo es del 92,8% y el tiempo de respuesta disminuye de días a horas. Conclusión: En base a nuestros resultados, proponemos un algoritmo de flujo de trabajo para los laboratorios de microbiología clínica, que elimina el cultivo para aquellas muestras con qPCR positiva.(AU)

Dermatophytes: the names they are a-changin' / Dermatofitos: los nombres están cambiando

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Arthroderma benhamiae, un dermatofito causante de una tiña emergente / Arthroderma benhamiae, An Emerging Dermatophyte Cause of Tinea

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Dermatophytosis caused by Nannizzia nana in two siblings / Dermatofitosis causada por Nannizzia nana en dos hermanos

Background: Nannizzia nana is a zoophilic dermatophyte that affects animals like pigs, boars and, exceptionally, humans, in whom it causes tinea capitis, as well as tinea corporis and onychomycosis. Case report: Case 1. A previously healthy 8 year-old boy presented to our clinic with a 1-month evolution dermatosis that affected scalp, developing a pseudoalopecic tumor lesion with abundant seropurulent material. The patient had worked in a pig farm. Case 2. A previously healthy 6 year-old girl, sister of the aforementioned child, presented to our clinic with a dermatosis characterized by multiple erythematous-scaly plaques that affected her face, trunk and arms. N. nana was the fungus isolated on culture in both cases. The children were treated with oral griseofulvin and topical ketoconazole that led to clinical and mycological cures. Conclusions: N. nana dermatophytosis, although being rare in humans, can be treated as other cases of dermatophytosis

Antecedentes: Nannizzia nana es un dermatofito zoófilo que habitualmente afecta a animales, como el cerdo, el jabalí y, excepcionalmente, al ser humano, en el cual provoca tiña de la cabeza, tiña corporal y onicomicosis. Casos clínicos: Caso 1: niño sano de 8 años, con dermatosis de un mes de evolución que afectaba al cuero cabelludo con una lesión tumoral seudoalopécica y abundante material seropurulento. Como antecedente, el niño había trabajado en una granja porcina. Caso 2: niña sana de 6 años y hermana del niño del caso anterior, con dermatosis que le afectaba a la cara, el tronco y los brazos con numerosas placas eritematoescamosas. En ambos casos se aisló en cultivo Nannizzia nana. El tratamiento administrado a los niños fue griseofulvina por vía oral y ketoconazol tópico. Se consiguió la curación clínica y micológica. Conclusiones: Las dermatofitosis por N. nana, aunque son raras en el ser humano, pueden ser tratadas como otras dermatofitosis más habituales

Arthroderma benhamiae en pacientes con cobayas / Arthroderma benhamiae in patients with guinea pigs

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Lesión inflamatoria en el mentón / Inflammatory injury on the chin

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Aplicación de la espectrometría de masas en micología Inmaculada / Application of mass spectrometry in mycology

La espectrometría de masas (EM) MALDI-TOF (matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight) se está convirtiendo en esencial en la mayoría de los laboratorios de micología clínica. En la actualidad, según un "perfil fúngico" característico, ya sea obtenido a partir de células intactas o mediante unos protocolos de extracción rápidos y reproducibles, la EM MALDI-TOF permite identificar hongos patógenos con un alto poder discriminatorio. Este hecho acorta enormemente los tiempos de respuesta y mejora el diagnóstico del laboratorio de micología clínica, optimizando la detección de las micosis. Esta revisión describe el estado actual del uso de EM MALDI-TOF para la detección en el laboratorio clínico de hongos patógenos humanos y presenta una perspectiva de las futuras aplicaciones de esta tecnología relativamente reciente, que está destinada a mejorar todavía más el diagnóstico micológico de rutina

MALDI-TOF (matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight) mass spectrometry (MS) is becoming an essential tool in most microbiology laboratories. At present, by using a characteristic fungal profile obtained from whole cells or through simple extraction protocols, MALDI-TOF MS allows the identification of pathogenic fungi with a high performance potential. This methodology decreases the laboratory turnaround time, optimizing the detection of mycoses. This article describes the state-of-the-art of the use of MALDI-TOF MS for the detection of human clinical fungal pathogens in the laboratory and discusses the future applications of this technology, which will further improve routine mycological diagnosis

Tinea capitis in adults in southern Spain. A 17-year epidemiological study / Tinea capitis en pacientes adultos del sur de España. Un estudio epidemiológico de 17 años

Background. Tinea capitis is an infection of the hair due to keratinophilic fungi, known as dermatophytes. Although the disease is common in children, several studies have also shown that it is far from unusual in adults, especially in post-menopausal women and immunocompromised persons. Aims. To determine the incidence of tinea capitis in adults in our area, as well as the predisposing factors (gender, immunity), and causative species. Materials and methods. A retrospective study was conducted over a period of 17 years, from 1995 to 2011, collecting data on cases of tinea capitis diagnosed in our dermatology department. Information collected for all patients included age, gender, location of the lesions, results of direct examination and culture, immune status, cause of immunosuppression, and the prescribed treatment. Results. Thirty-three cases (11.4%) out of 289 cases of tinea capitis occurred in adults. Most of these adults (72%) were immunocompetent, and the rest were immunocompromised for different reasons. Three of the patients were men and 30 women, with 70% of the latter being post-menopausal. Trichophyton species were isolated in 76% of these adult patients, with Trichophyton violaceum being the most common. Treatment with oral terbinafine was successful in all these cases. Microsporum species were responsible for the other cases, all treated successfully with oral griseofulvin. Conclusions. This series of tinea capitis in adults is one of the largest to date. It shows that tinea capitis is not uncommon among the immunocompetent adult population. In our geographical area, except for prepubescent patients, most cases affecting the adult population were caused by species of the genus Trichophyton. In these cases the treatment of choice was oral terbinafine, which considerably shortened the treatment time, and was associated with fewer side effects than the classical griseofulvin (AU)

Antecedentes. Tinea capitis es una infección del pelo producida por hongos queratinofílicos llamados dermatofitos. Aunque la enfermedad es más común en niños, varios estudios han demostrado que no es infrecuente en adultos, especialmente en mujeres posmenopáusicas y personas inmunodeprimidas. Objetivo. Determinar la incidencia de tinea capitis en adultos de nuestra área, así como los factores predisponentes (inmunidad, género) y agentes causales. Métodos. Llevamos a cabo un estudio retrospectivo de un periodo de 17 años, desde 1995 a 2012, seleccionando casos de tinea capitis diagnosticados en nuestro departamento de Dermatología. Se recogió información clínico-demográfica de los pacientes que incluyó edad, sexo, localización de las lesiones, resultados de examen directo y cultivos, inmunidad, causa de la inmunosupresión y tratamiento. Resultados. De los 289 casos de tinea capitis, 33 (11,4%) eran de pacientes adultos. La mayoría (72%) fueron inmunocompetentes; la inmunodepresión en el resto de los casos era por diferentes causas. Tres de los pacientes eran hombres y 30 mujeres, la mayoría de las cuales eran posmenopáusicas (70%). Las especies de Trichophyton fueron aisladas en el 76% de los casos, con Trichophyton violaceum como el dermatofito más común; el tratamiento con terbinafina oral fue exitoso en todos los casos. Las especies microspóricas fueron responsables de los casos restantes y tuvieron una buena evolución con griseofulvina. Conclusiones. Esta serie de tinea capitis del adulto es una de las más largas hasta la fecha. Se demuestra que tinea capitis no es infrecuente entre la población adulta inmunocompetente. En nuestra área geográfica, salvo en prepúberes, la mayoría de los casos de tinea capitis de adultos son debidos a especies del género Trichophyton. En estos casos el tratamiento de elección fue la terbinafina oral, que acorta considerablemente la duración de tratamiento y se asocia a menos efectos secundarios que la clásica griseofulvina (AU)

Tiña del cuerpo de rápida evolución / Rapidly evolving tinea corporis

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Lesión inflamatoria 'en espumadera' en región parietal / Inflammatory injury 'in skimmer' in the parietal area

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Toma de muestras y examen directo en dermatomicosis / Sample Taking and Direct Examination in Dermatomycoses

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Interacción de Pseudomonas aeruginosa y hongos dermatofitos: repercusión en el curso clínico y en el diagnóstico microbiológico de la tinea pedis / Interaction between Pseudomonas aeruginosa and dermatophyte fungi: Repercussions on the clinical course and microbiological diagnosis of tinea pedis

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Evaluación del perfil de sensibilidad in vitro de aislamientos clínicos deTrichophyton mentagrophytes y Trichophyton rubrum en Santiago, Chile / Evaluation of the in vitro susceptibility pattern of clinical isolates of Trichophyton mentagrophytes and Trichophyton rubrum in Santiago, Chile

Antecedentes: Los dermatofitos son un grupo de hongos queratinolíticos que producen infecciones denominadas dermatofitosis o tiñas. En Chile, los dermatofitos aislados con mayor frecuencia son Trichophyton rubrumy Trichophyton mentagrophytes en la población adulta, y Microsporum canis en niños prepúberes. Para el tratamiento de estas micosis se emplean antifúngicos tópicos y orales como la griseofulvina, antifúngicos azólicos como el clotrimazol, el itraconazol o el fluconazol, alilaminas como la terbinafina, y nuevas moléculas antifúngicas. Objetivos: Evaluar la sensibilidad in vitro de los dermatofitos frente a cinco antifúngicos y establecer posibles cambios respecto a estudios anteriores. Métodos: Se estudiaron 62 dermatofitos obtenidos de muestras clínicas (marzo-junio de 2010). Se utilizó el método de microdilución en caldo (M38-A2). Resultados: El rango de CMI para el fluconazol fue de 0,25-1 μg/ml; 0,03-0,06 μg/ml para el clotrimazol, la terbinafina y el itraconazol, y 0,015-0,03 μg/ml para la griseofulvina frente a T. rubrum y T. mentagrophytes. Excepto para le fluconazol, no se encontraron diferencias estadísticas significativas en los rangos de sensibilidad antifúngica. Conclusiones: Los valores de CMI para el fluconazol fueron los más altos (0,25-1 μg/ml) de todas las sustancias ensayadas, habiendo diferencias estadísticamente significativas entre este y el resto de antifúngicos. No hubo cepas resistentes a los antifúngicos analizados, y tampoco se encontraron cambios en el perfil de sensibilidad antifúngica in vitro en relación con estudios anteriores realizados en Chile (AU)

Background: Dermatophytes are a group of keratinophilic fungi able to produce dermatophytosis or tinea infections. In Chile, Trichophyton rubrum and Trichophyton mentagrophytes are the ones most commonly isolated in adults, while Microsporum canis is found among children. Treatment of these infections is usually with topical or oral antifungals, such as griseofulvin or azole derivatives (clotrimazole, itraconazole, fluconazole), allylamines (terbinafine) or new drugs that are available. Aims: Evaluation of the in vitro susceptibility of dermatophytes to five antifungal agents and the comparison of the susceptibility pattern with that of previous years. Methods: Sixty-two clinical isolates of dermatophyte fungi were studied (March-June 2010). The CLSI M38-A2 micromethod was used. Results: Fluconazole MIC values for T. rubrum and T. mentagrophytes varied between 0.25 and 1 μg/ml; MIC range to clotrimazole, terbinafine and itraconazole was 0.03-0.06 μg/ml, and MIC values for griseofulvin were 0.015-0.03 μg/ml. No statistically significant differences were found between susceptibility patterns, except for fluconazole. Conclusions: Fluconazole was less active in comparison with other drugs tested (0.25-1 μg/ml). None of the isolates were resistant to any of the drugs, and no changes in the susceptibility pattern were observed when comparing the results with data previously reported concerning dermatophytes in Chile (AU)

Colonización por dermatofitos en cuyes (Cavia porcellus) mantenidos en tiendas de mascotas. Primer reporte en Santiago de Chile / Dermatophyte colonization on guinea pigs (Cavia porcellus) kept in pet stores. First report from Santiago, Chile

Antecedentes: Los dermatofitos son hongos patógenos que pueden formar parte de la microbiota de mamíferos como perros, gatos y roedores, que pueden ser fuente y vehículo de transmisión a otros hospederos, incluyendo al hombre. En nuestro medio, existe un aumento sostenido en la incorporación de cuyes (Cavia porcellus) como mascota, sin contar con estudios locales que evidencien la colonización de dermatofitos. Objetivos: Determinar la presencia de dermatofitos en cuyes clínicamente sanos, mantenidos en tiendas de mascotas en la ciudad de Santiago de Chile. Métodos: Se incluyeron en el estudio 52 animales clínicamente sanos, muestreados mediante el método de Mariat y Tapia (1966). Para el cultivo de las muestras y la identificación de los agentes aislados se siguieron los procedimientos micológicos clásicos. Resultados: Del total de cuyes, 4 (7,7%) presentaron colonización por dermatofitos; las especies aisladas fueronTrichophyton mentagrophytes (3 casos) y Trichophyton verrucosum (un caso). Conclusiones: Este estudio evidencia, por primera vez en Chile, que los cuyes pueden ser colonizados por dermatofitos, lo cual debe alertar a los administradores de las tiendas de mascotas y a los médicos veterinarios y humanos, para tenerlo presente en el momento de adquirir o atender a este tipo de mascota en la clínica veterinaria (AU)

Background: Dermatophytes are pathogenic fungi that can be present in the flora of mammals, such as dogs, cats and rodents, which can be a source and transmission vehicle to other hosts, including humans. In Chile, there is a steady increase of acquiring guinea pigs (Cavia porcellus) as pets, with no local studies on their colonization by dermatophytes. Objective: To determine the presence of dermatophytes on clinically healthy guinea pigs, kept in pet stores in Santiago, Chile. Methods: A total of 52 clinically healthy animals were studied using the method by Mariat and Tapia (1966). The specimen culture and identification of the dermatophytes were performed using classical mycological procedures. Results: Four guinea pigs (7.7%) out of 52 were colonized by dermatophytes, and were identified as Trichophyton mentagrophytes (3 cases) and Trichophyton verrucosum (one case). Conclusion: This study shows, for the first time in Chile, that guinea pigs can be colonized by dermatophytes, which should alert administrators of pet stores, veterinarians and physicians, to keep this in mind when purchasing or looking after this type of pet in a veterinary office (AU)

Lesión anular de crecimiento centrífugo / Annular lesion of centrifugal growth

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Les tinyes / No disponible

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The use of MALDI-TOF ICMS as an alternative tool for Trichophyton rubrum identification and typing

AIMS: In this study, the potential of matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight intact cell mass spectrometry (MALDI-TOF ICMS) was investigated for the identification of clinical isolates. The isolates were analyzed at the species and strain level. Methods Spectral identification by MALDI-TOF ICMS was performed for all strains, and compared with the results of sequencing of the internal transcribed spacers (ITS1 and ITS2), and the 5.8S rDNA region. PCR fingerprinting analysis using primers M13, (GACA)4, and (AC)10 was performed in order to assess the intra-specific variability of Trichophyton rubrum strains. Results The identification of strains at species level by MALDI-TOF ICMS was in agreement with the previously performed morphological and biochemical analysis. Sequence data confirmed spectral mass identification at species level. Intra-specific variability was assessed. Within the T. rubrum cluster, strains were distributed into smaller highly related sub-groups with a similarity values above 85%.ConclusionsMALDI-TOF ICMS was shown to be a rapid, low-cost and accurate alternative tool for the identification and strain typing of T. rubruM

OBJETIVO: En este estudio se investigó el potencial de matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight intact cell mass (MALDI-TOF ICMS) para la identificación de aislados clínicos. Los aislados fueron analizados al nivel de especie y de cepa. MÉTODOS: Se realizó una identificación espectral mediante MALDI-TOF ICMS de todas las cepas que se comparó con los resultados de secuenciación de la región espaciadores transcritos internos (ITS1 e ITS2) y el ADNr 5,8S. Los análisis PCR fingerprinting usando los primers M13, (GACA)4 y (AC)10 se realizaron con la intención de evaluar la variabilidad intraespecífica de las cepas de Trichophyton rubrum. RESULTADOS: La identificación de las cepas al nivel de especie mediante MALDI-TOF ICMS concordó con la ID realizada retrospectivamente en el análisis morfológico y bioquímico. La secuencia de datos confirmó la identificación por espectro de masas a nivel de especie. Se evaluó la variabilidad intraespecífica. Dentro del clúster de T. rubrum, las cepas se distribuyeron en subgrupos menores y muy relacionados con valores de similaridad superiores a 85%. CONCLUSIONES: Se demuestra que MALDI-TOF ICMS es una herramienta alternativa rápida, de bajo coste y precisa para la identificación y tipificación de cepas de T. rubrum

Influencia del grupo ecológico sobre la sensibilidad in vitro de los hongos dermatofitos a los antifúngicos / Influence of the ecological group on the in vitro antifungal susceptibility of dermatophytic fungi

Antecedentes. Los hongos dermatofitos se agrupan en geofílicos (suelo), zoofílicos (animales) y antropofílicos (humanos), dependiendo de la fuente de queratina que pueden utilizar como sustrato nutritivo energético. Objetivos. Se ha estudiado la sensibilidad in vitro de aislamientos clínicos de hongos dermatofitos pertenecientes a los 3 grupos ecológicos frente a antifúngicos utilizados para el tratamiento tópico de las dermatofitosis, con el fin de conocer la influencia del grupo en esta actividad. Métodos. Mediante un micrométodo de dilución en medio líquido se determinó la actividad antifúngica in vitro de 9 antifúngicos de uso tópico: amorolfina (AMR), bifonazol (BFZ), clotrimazol, econazol, ketoconazol, miconazol, oxiconazol, terbinafina (TRB) y tioconazol frente a 124 aislamientos clínicos de hongos dermatofitos pertenecientes a los 3 grupos ecológicos (antropofílicos, zoofílicos y geofílicos). Resultados. La actividad antifúngica in vitro mostró diferencias según el grupo ecológico en el que se dividen los hongos dermatofitos, observándose también un patrón especie dependiente. Conclusiones. Los derivados azólicos mostraron un patrón de actividad similar entre ellos, con mayor actividad frente a los antropofílicos > zoofílicos > geofílicos. La actividad de TRB y AMR, por el contrario, fue: zoofílicos > antropofílicos > geofílicos. TRB y AMR fueron las más activas frente a los 3 grupos y BFZ la menos activa(AU)

Background. Dermatophytes can be divided into geophilic (soil), zoophilic (animals) and anthropophilic (humans) strains, depending on the source of the keratin that they use for nutritional purposes. Aims. The in vitro susceptibility of clinical isolates of dermatophyte fungi has been studied in the 3 ecological groups with several antifungal agents for the topical management of dermatophytoses in order to determine their relationship with the ecological group. Methods. A standardised dilution micromethod in a liquid medium was used for the determination of the in vitro antifungal activity of 9 topical antifungal drugs: amorolfine (AMR), bifonazole (BFZ), clotrimazole, econazole, ketoconazole, miconazole, oxiconazole, terbinafine (TRB) and tioconazole. The in vitro activity was obtained against 124 clinical isolates of dermatophyte moulds from the anthropophilic, zoophilic and geophilic ecological groups. Results. The in vitro antifungal activity was different depending on the ecological group, although a species-dependent profile was also observed. Conclusions. Azole derivatives showed a similar antifungal profile, being more active against anthropophilic dermatophytes > zoophilic > geophilic. Activity of TRB and AMR was different from that of azole derivatives (zoophilic > anthropophilic > geophilic). A higher in vitro antifungal activity against the 3 ecological groups was observed with TRB and AMR, whilst BFZ was the less active drug(AU)