Hepatocitos Humanos Upcytes como modelo experimental in vitro para el estudio del daño hepático inducido por fármacos a largo plazo / Human Hepatocytes Upcytes (R) as in vitro experimental model to study long-term drug-induced liver injury

La determinación de la hepatotoxicidad a largo plazo de nuevos fármacos es esencial para el desarrollo farmacéutico pero está limitada por la falta de modelos celulares adecuados que mantengan una expresión prolongada de la funcionalidad hepática. En el presente trabajo se ha explorado la idoneidad de un nuevo modelo celular llamado Hepatocitos Humanos Upcytes (HHU) cuyas células preservan funciones hepáticas y capacidad replicativa. La caracterización exhaustiva de los principales enzimas de Fase I y II implicados en el metabolismo hepático de fármacos en HHU de tres donantes independientes a diferentes tiempos de cultivo (hasta 21 días) reveló que estas células muestran perfiles de expresión (mRNA) y niveles de actividades enzimáticas más cercanos a los hepatocitos humanos que las células HepG2. Dada la estabilidad fenotípica de los HHU, tanto a nivel transcripcional como a nivel funcional, se exploró su utilidad potencial para evaluar la hepatotoxicidad a largo plazo. Para ello las células se trataron durante diferentes periodos (hasta 21 días) con varias concentraciones de tres fármacos modelo y se evaluaron los efectos sobre la viabilidad celular, la acumulación de lípidos y fosfolípidos, el calcio intracelular y los niveles de GSH. Nuestro estudio permitió detectar efectos tóxicos crónicos, como la esteatosis o la fosfolipidosis, a concentraciones en las que la viabilidad celular no estaba comprometida, confirmando la idoneidad de este nuevo modelo celular para el estudio de la hepatotoxicidad tras tratamientos prolongados con los fármacos (AU)

Determining long-term hepatotoxicity of new drugs is essential for the pharmaceutical industry development; however, it is limited by the lack of suitable cell-based models able to maintain hepatic functions over time. In the present work we explored the suitability of a new cellular model called Human Hepatocytes Upcytes (HHU) which preserves liver functions and replicative capacity. The exhaustive characterization of the major Phase I and II enzymes involved in hepatic drug metabolism in HHU from three independent donors at different culture times (up to 21 days) revealed that these cells show expression profiles (mRNA) and activity levels enzymes that are closer to human hepatocytes than those of HepG2 cells. Given the phenotypic stability of HHU, both at the transcriptional and functional level, their potential utility to assess long-term hepatotoxicity was explored. Cells were treated for various periods (up to 21 days) with several concentrations of three model drugs and the effects on cell viability, lipid and phospholipid accumulation, intracellular calcium and GSH levels were evaluated. Our study allowed us to detect chronic toxic effects, such as steatosis or phospholipidosis, at concentrations that did not compromise celular viability, confirming the suitability of this new cellular model for the study of long-term drug-induced hepatotoxicity (AU)

Bases epidemiológicas y mecanismos moleculares implicados en las asociaciones de obesidad y diabetes con cáncer / Epidemiological bases and molecular mechanisms linking obesity, diabetes, and cancer

Hace casi un siglo que se hipotetizó la asociación entre la diabetes y el cáncer. Hoy, numerosos estudios epidemiológicos sostienen que las poblaciones con obesidad y/o diabetes poseen una mayor predisposición a padecer cáncer en órganos específicos. Los mecanismos moleculares subyacentes se desconocen. Las alteraciones metabólicas, hormonales e inmunológicas que comparten la obesidad, la diabetes y el cáncer pueden contribuir a justificar la relación existente. Por otra parte, la influencia de los tratamientos antidiabéticos en la aparición/evolución de algunos cánceres y la inducción de la diabetes por los tratamientos antineoplásicos han despertado una gran controversia debido a las implicaciones éticas y los intereses comerciales asociados. Esta actualización de los datos epidemiológicos presenta un enfoque mecanístico que sugiere la existencia de múltiples mecanismos comunes y diferenciales que asocian la obesidad y la diabetes tipo1 y tipo2 a ciertos cánceres. Identificar los mecanismos responsables de la asociación diabetes-cáncer es un reto de la investigación actual; la clasificación de los cáncer por sus firmas moleculares podría facilitar futuros estudios mecanísticos y epidemiológicos (AU)

The association between diabetes and cancer was hypothesized almost one century ago. Today, a vast number of epidemiological studies support that obese and diabetic populations are more likely to experience tissue-specific cancers, but the underlying molecular mechanisms remain unknown. Obesity, diabetes, and cancer share many hormonal, immune, and metabolic changes that may account for the relationship between diabetes and cancer. In addition, antidiabetic treatments may have an impact on the occurrence and course of some cancers. Moreover, some anticancer treatments may induce diabetes. These observations aroused a great controversy because of the ethical implications and the associated commercial interests. We report an epidemiological update from a mechanistic perspective that suggests the existence of many common and differential individual mechanisms linking obesity and type 1 and 2 diabetes mellitus to certain cancers. The challenge today is to identify the molecular links responsible for this association. Classification of cancers by their molecular signatures may facilitate future mechanistic and epidemiological studies (AU)

RIT1: un nuevo gen causal del síndrome de Noonan / RIT1: a novel gene associated with Noonan syndrome

Introducción. El síndrome de Noonan es el más frecuente del grupo de los síndromes malformativos congénitos originados por mutaciones germinales en genes de la vía RAS/MAPK, denominados genéricamente RAS-opatías, uno de los grupos más comunes de alteraciones genéticas congénitas en la práctica clínica. Recientemente se han descrito mutaciones en el gen RIT1 en pacientes con síndrome de Noonan. Caso clínico. Niña de 7 años con diagnóstico clínico de síndrome de Noonan, que entre sus manifestaciones clínicas incluye miocardiopatía hipertrófica, en la que se ha identificado una mutación de novo en heterocigosis, en RIT1, c.295T>C (p.Phe99Leu), no descrita previamente, probablemente causal. Conclusiones. RIT1 comparte homología con otras proteínas RAS y la expresión de alelos mutantes origina un efecto de ganancia de función que apoya su papel causal en el síndrome de Noonan. Podemos estimar actualmente que es responsable de un 3-5% de los casos del síndrome. Estos casos con síndrome de Noonan, respecto a los que presentan mutaciones en otros genes, se caracterizan por una mayor frecuencia de alteraciones prenatales, alta frecuencia de miocardiopatía hipertrófica y menor frecuencia de talla baja y deformidad torácica. Destaca la importancia de incorporar los nuevos genes identificados en los paneles diagnósticos (AU)

Introduction. Noonan syndrome is the most frequent of the congenital group of malformation syndromes caused by germline mutations that encode components of the RAS/MAPK pathway, termed RASopathies, one of the most frequent congenital genetic disorders in the clinical practice. Recently RIT1 mutations have been reported in patients with Noonan syndrome. Case report. A 7 years-old girl with a clinical diagnosis of Noonan syndrome, and with a hypertrophic cardiomyopathy included in her clinical manifestations, where a de novo heterozygous, probably pathogenic, novel mutation in RIT1, c.295T>C (p.Phe99Leu), has been identified. Conclusions. RIT1 shares homology with other RAS proteins and the expression of mutant alleles demonstrates a gain-offunction effect supporting a causative role in Noonan syndrome pathogenesis. Data suggest that the frequency of RIT1 mutations can be estimated as 3-5% in Noonan syndrome patients. These cases compared with Noonan patients harboring mutations in other genes are characterized by high frequency of prenatal abnormalities and hypertrophic cardiomyopathy, and lower frequencies of short stature and pectus abnormalities. We emphasize the importance of the novel identified genes in order to be included in the diagnostic panels (AU)

Incidencia y distribución del género Armillaria en viñedos de las cinco denominaciones de origen de vino de Galicia (noroeste de España) / Incidence and distribution of the genus Armillaria in vineyards of the five protected designation of origin wines in Galicia (Northwestern Spain)

Antecedentes: el género Armillaria, y más concretamente la especie Armillaria mellea, constituye un problema muy importante en el sector vitivinícola de Galicia, lo que ha ocasionado importantes reducciones del rendimiento de los viñedos en los últimos 15 años. Este hongo ataca al sistema radicular, causando un descenso del vigor y, finalmente, la muerte de la planta. Hasta la fecha, no se conoce ningún método químico o biológico que resulte efectivo contra el patógeno una vez que ha entrado en la planta. Objetivos: el objetivo principal del presente trabajo fue conocer la incidencia y distribución del género Armillaria mediante técnicas moleculares en las distintas zonas de cultivo de vid en Galicia, abarcando las cinco denominaciones de origen (DO) vitivinícolas gallegas (Rías Baixas, Ribeiro, Ribeira Sacra, Valdeorras y Monterrei). Métodos: se analizaron 624 muestras (483 de suelo y 141 de plantas de vid sintomáticas) mediante nested-PCR/RFLP, PCR-RFLP y análisis filogenéticos. Resultados: Armillaria mellea está ampliamente distribuida en viñedos de las cinco DO, con mayor incidencia en la DO del Ribeiro. Conclusiones: es necesario establecer medidas para reducir el avance de la podredumbre radicular causada por Armillaria mellea en las cinco DO de Galicia

Blackground: the genus Armillaria, specifically Armillaria mellea, is an important phytopathological problem in the wine sector in Galicia (NW Spain), having caused yield reductions in vineyards for the last 15 years. The fungus attacks the root system, resulting in a decrease in vigour, and eventually in the death of the plant. Up to now, there is no chemical or biological method really effective against the pathogen once it has infected the plant. Aims: the main objective of this work was to study the incidence and distribution of the genus Armillaria across the five Galician protected designation of origin (DO) wines (namely Rías Baixas, Ribeiro, Ribeira Sacra, Valdeorras and Monterrei) through the application of molecular techniques. Methods: a total of 624 samples (483 soils and 141 symptomatic vines) were analyzed by nested-PCR/RFLP, PCR-RFLP and phylogeny. Results: Armillaria mellea is widely distributed in vineyards of the five DO wines, with the highest incidence in the Ribeiro DO. Conclusions: preventive control measures against Armillaria mellea must be established in the five DO wines of Galicia, in order to reduce the advance of white root rot

Defining bioidentical hormones for menopause-related symptoms / Definiendo hormonas bioidénticas para síntomas asociados a la menopausia

In the last decade, the use of bioidentical hormones (BHs) to treat menopause-related symptoms has become increasingly popular. However, the many different definitions of BHs have led to a great deal of confusion often making it difficult for health care providers to discuss this area with patients. Objective: The purpose of this paper was to produce a concise definition of bioidentical hormones, based on a review of the literature. Methods: Searches, using systematic review methodology, were conducted from inception to June 2010 in PubMed, EMBASE, IPA, The Journal of International Compounding and the Internet to identify definitions of bioidentical hormones. There were no restrictions on type, date or language of publication. Included papers/website included those that contained a definition of BHs. Definitions were extracted, similarities and differences summarized, and these were then examined to produce a concise definition. Results: Sixty-three definitions were found. Based on the analysis of similarities and differences, the following definition, comprised of three components (term being defined; category to which term belongs; distinctive characteristics of term) was produced: «Bioidentical hormones are chemical substances that are identical in molecular structure to human hormones». Conclusions: This definition clearly and concisely explains the meaning of BHs which should lead to a common understanding of the term and limit confusion among health care providers, the general public and the scientific community (AU)

En la década pasada, se ha vuelto popular el uso de hormonas bioidenticas (HB) para tratar los síntomas asociados a la menopausia. Sin embargo, las muchas definiciones de HB han llevado a una gran confusión haciendo, a menudo, difícil para los profesionales de la salud discutir esto con los pacientes. Objetivo: El propósito de este artículo es producir una definición concisa de hormonas bioidenticas, basándose en una revisión de la literatura. Métodos: Para identificar definiciones de HB, sSe realizaron búsquedas en PubMed, EMBASE, IPA, Journal of International Compounding e Internet desde su inicio hasta junio de 2010, utilizando metodología de revisión sistemática. No hubo restricciones en cuanto al tipo, fecha o idioma de las publicaciones. Los artículos/páginas web incluidas comprendían aquellas que contenían una definición de HB. Se extrajeron las definiciones, y se resumieron las similitudes y diferencias, y después se examinaron éstas para producir una definición concisa. Resultados: Se encontraron 63 definiciones. Basándose en el análisis de similitudes y diferencias, se produjo la siguiente definición, que comprendía tres componentes (término bien definido; categoría a la que pertenece el término; características distintivas del término): «Hormonas bioidenticas son substancias químicas que son idénticas en estructura molecular a las hormonas humanas». Conclusiones: Esta definición explica clara y resumidamente el significado de HB lo que debería llevar a un entendimiento común del término y reducir la confusión entre los profesionales de la salud, el público en general y la comunidad científica (AU)

Análisis mutacional de GNPTAB para el diagnóstico molecular de mucolipidosis tipo II (I-cell disease). Descripción de dos nuevas mutaciones sin sentido asociadas con la enfermedad / GNPTAB mutational analysis for the molecular diagnosis of mucolipidosis type II (I-cell disease). Description of two novel nonsense disease-associated mutations

Introducción. La mucolipidosis tipo II alfa/beta, también conocida como I-cell disease (MIM 252500), es una enfermedad metabólica consistente en una alteración en el tráfico de las hidrolasas lisosomales, causada por la actividad deficiente de la N-acetilglucosaminil 1-fosfo (NAcGlc-1-P) transferasa, responsable del paso inicial en la generación del marcador molecular manosa-6-fosfato. NAcGlc-1-P-transferasa es una enzima multimérica compuesta de tres subunidades polipeptídicas codificadas por dos genes diferentes (afa, Beta y Gamma), el gen que codifica las subunidades alfa y Beta (GNPTAB), localizado en el cromosoma 12q23.3, se encuentra alterado en MLII. Hasta la fecha, han sido descritas al menos 20 mutaciones missense/nonsense en GNPTAB relacionadas con esta enfermedad autosómica recesiva. En este estudio, caracterizamos las alteraciones moleculares de un nuevo caso de mucolipidosis II, que presentaba importantes defectos esqueléticos. Materiales y métodos. Determinación de la actividad de las hidrolasas lisosomales en fibroblastos del paciente, plasma y medio de cultivo de los fibroblastos, mediante los correspondientes sustratos fluorogénicos. Secuenciación de todos los exones y de las regiones intrón-exón del gen GNPTAB, tras la amplificación del DNA genómico del paciente. Además, se analizó el exón 11 de todos los familiares por enzimas de restricción. Resultados. La actividad residual hallada de las hidrolasas lisosomales en los fibroblastos del paciente fue de aproximadamente 14% frente a los controles, mientras que la actividad de estas enzimas se multiplicó por 32 en plasma y por 9 en el líquido extra celular de los fibroblastos en cultivo del paciente, con respecto a los valores normales. Se identificaron dos nuevas mutaciones nonsense en GNPTAB asociadas con MLII, c.1383C>A (p.Cys461X) y c.3410T>A (p.Leu1136X), para las que el paciente fue heterocigoto compuesto. Conclusiones. Caracterización de los defectos moleculares de GNPTAB en un nuevo caso de MLII y la identificación de dos mutaciones noveles sin sentido, que facilitarán el diagnóstico prenatal de la enfermedad en la familia del paciente (AU)

Introduction: Mucolipidosis type II alpha/beta (MLII or I-cell disease) (MIM 252500) is a rare inborn lysosomal hydrolase trafficking disorder caused by the deficient activity of Nacetylglucosaminyl 1-phospho (NAcGlc-1-P) transferase, the enzyme responsible for the initial step in the generation of the mannose 6-phosphate recognition marker. NAcGlc-1-P-transferase is a multimeric enzyme composed of 3 polypeptide subunits (alpha Beta and gamma) encoded by 2 different genes. The gene encoding for the alpha/Beta subunits (GNPTAB), located on chromosome 12q23.3, is altered in MLII. To date, at least 20 missense/nonsense GNPTAB mutations have been described and incriminated in this autosomal recessive disorder. In this study, we characterized the molecular defect of a new case of MLII, presenting important skeletal abnormalities. Material and methods: The activity of lysosomal hydrolases in the patient’s fibroblasts, plasma and cell culture medium was determined using appropriate fluorogenic substrates. All exons, as well as exon-intron boundaries, of the GNPTAB gene were sequenced after PCR amplification of the patient’s genomic DNA. GNPTAB exon 11 was also studied by enzyme restriction analysis in the whole family. Results: In the patient’s fibroblasts, a residual activity of lysosomal hydrolases averaging 14% of control values was found, while a 32 and 9-fold increase in the activity of these enzymes was detected in plasma and the fibroblast culture medium, respectively. Two novel nonsense disease-associated GNPTAB mutations, c.1383C > A (p.Cys461X) and c.3410T > A (p.Leu1136X) were identified, the patient being a compound heterozygote. Conclusions: Characterization of the GNPTAB molecular defects in a new case of MLII and the identification of two novel nonsense mutations facilitated the prenatal diagnosis of this disease in the patient’s family (AU)

Etravirina: barrera genética y desarrollo de resistencias / Etravirine: genetic barrier and resistance development

A diferencia de los inhibidores de la transcriptasa inversa no análogos de nucleósidos (ITINAN) de primera generación, para desarrollar resistencia completa a etravirina (ETR) se requiere el acúmulo de varias mutaciones. Muestra una barrera intermedia frente a la aparición de resistencia parcial, y alta para el de resistencia completa. Algunas mutaciones seleccionadas por nevirapina o efavirenz impactan la actividad de ETR, siendo las más frecuentes Y181C, G190A/S, K101E, L100I, Y188L y V90I. El grado de resistencia conferida por cada una es distinto. En la actualidad se dispone de al menos 3 listados de mutaciones que otorgan la puntuación exacta a cada mutación. Estos listados se han validado con el grado de resistencia observado en fenotipos pareados, y con respuesta clínica en los estudios DUET. Los 3 scores muestran un elevado grado de concordancia entre ellos. ETR es, en la actualidad, uno de los antirretrovirales en los que se puede calcular de modo sencillo y con mayor precisión su actividad basándose en datos genotípicos. Las mutaciones seleccionadas tras fracasos a inhibidores de la transcriptasa inversa análogos de nucleósidos, especialmente análogos de la timidina, T69D/N y M184I/V, confieren hipersusceptibilidad frente a ETR (fold change < 0,4) en hasta 1 de cada 3 muestras analizadas. Es crucial la retirada precoz de ITINAN de primera generación en pacientes con fracaso virológico para evitar el acúmulo de mutaciones que puedan comprometer la actividad del fármaco

Unlike first-generation non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors (NNRTI), to develop complete resistance to etravirine (ETR), various mutations must be accumulated. This drug shows an intermediate barrier against partial resistance and a high barrier to complete resistance. Some mutations selected by nevirapine or efavirenz affect the activity of ETR, the most frequent being Y181C, G190A/S, K101E, L100I, Y188L and V90I. The grade of resistance conferred by each mutation differs. Currently, there are at least three lists of mutations that confer an exact score to each mutation. These lists have been validated with the grade of resistance observed in paired phenotypes and with clinical response in the DUET studies. The three scores show a high degree of agreement. ETR is currently one of the antiretroviral drugs whose activity can be calculated simply and accurately on the basis of genotypic data. The mutations selected after failure to nucleoside reverse transcriptase inhibitors, thymidine analogue, T69D/N and M184I/V, confer hypersusceptibility to ETR (fold change < 0.4) in up to 1 out of every 3 samples analyzed. The early withdrawal of first-generation NNRTIs in patients with virological failure is essential to avoid the accumulation of mutations that could compromise the activity of this drug

Microdiálisis de alta resolución. Aspectos metodológicos y aplicación al estudio de larespuesta inflamatoria cerebral / High Resolution Microdialysis. Methodological issues and application to the study of inflammatory brain response

La técnica de microdiálisis (MD) cerebral es un instrumentoque proporciona información relevante en lamonitorización del metabolismo cerebral en pacientesneurocríticos. La MD es una técnica especialmente efectivapara la detección y análisis de pequeñas moléculas,puesto que el tamaño de los poros de la membranadializante actúa como barrera restringiendo el paso deespecies mayores, tales como proteínas u otras macromoléculas.La reciente disponibilidad de catéteres demicrodiálisis con poros de mayor calibre, denominadosde “alta resolución”, permite ampliar el rango de moléculasdetectables en el dializado. Sin embargo, existencomplicaciones técnicas relacionadas con la utilizaciónde estos catéteres para estos propósitos, por lo que estacapacidad potencial para la recuperación de proteínasnecesita ser validada antes de su aplicación como herramientapara estudios de proteómica asociados a la lesióncerebral. En esta revisión se contemplan los principiosbásicos de la microdiálisis y los diferentes factores queintervienen en los procesos de recuperación de moléculasen el dializado, tales como las características físicasde la membrana dializante, así como de las moléculasque se desea investigar (AU)

Cerebral microdialysis is a tool that provides veryrelevant information in the metabolic monitoring ofbrain injured patients. It is a particularly effective technique for the detection and analysis of small molecules,given that the pores of the dialysis membrane actas a barrier to restrict the transport of larger species,such as proteins and other macromolecules. The recentavailability of microdialysis catheters with membranepores of larger size, termed “high resolution” catheters,would widen the spectrum of molecules detectablein the dialisate. However, there are technical complicationsrelated to the use of these catheters for suchpurposes, and therefore, this potential capacity for therecovery of proteins needs to be validated, in order tobegin its application as a tool in studies of proteomicsassociated with brain injuries. The following reviewdepicts the basic principles of microdialysis, and describessome of the issues involved in the recovery ofmolecules in the dialisate, including the physical propertiesof the dialysis membrane and of the moleculesof interest (AU)

On the relevance of defining protein structures in cancer research

Are three-dimensional structures of proteins relevant in the study of cancer? The knowledge of the three-dimensional structure of a protein is crucial to gain a full understanding of its function, and structural determination has already shown its potential for guided drug design. The knowledge of the structures of proteins and their complexes with other biological macromolecules helps to elucidate functional networks and provide a better understanding of the functionally relevant behaviour of the molecular machinery of the cell. To study the cell, we must be able to work with proteins, to elucidate how they diffuse and move, to know their interacting partners, and to understand the changes induced by those interactions. Three-dimensional structures give us a picture of the protein and thereby the opportunity to introduce mutations that alter its affinity and specificity for other interactions helping us to understand the physico-chemical mechanisms that control their function. In turn these can lead to the development of novel therapies (AU)

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Desarrollo de un Modelo Matemático preliminar para la detección de cáncer de próstata en los pacientes con biopsias prostáticas de repetición / A preliminar mathematical model for patients with a previous negative prostate biopsy

Objetivo: Analizamos las variables clínicas e histopatológicas de los pacientes hombres a biopsiar por sospecha de cáncer de próstata y cuáles de ellos tienen carácter pronóstico para los pacientes con biopsia previa sin hallazgos de neoplasia. Pretendemos desarrollar un nomograma que nos ayude en la decisión de indicar la repetición de la prueba. Material y método: Incluimos 179 pacientes con, al menos una biopsia previa sin hallazgos neoplásicos. Registramos, antes de cada biopsia, edad del paciente, antígeno próstatico específico (PSA) total, PSA libre/total, densidad del PSA, velocidad del PSA, tacto rectal, volumen ecográfico, aparición de área sospechosa en la escala de grises durante la ecografía transrectal, número de cilindros biopsiados, lesiones histológicas premalignas en alguna de las biopsias previas, así como el tiempo transcurrido entre las biopsias. Mediante un modelo de regresión logística determinamos la asociación de cada variable con la presencia de cáncer (biopsia positiva). Construimos un nomograma con las variables estadísticamente más relevantes y averiguamos la capacidad de discriminación del modelo mediante el índice de concordancia. Resultados: Nuestras biopsias de repetición consiguen una tasa de detección de cáncer del 46%. En el estudio univariante la edad, el tacto rectal, el volumen prostático, la densidad del PSA, las zonas sospechosas en la escala de grises, y las lesiones histológicas premalignas se asocian a biopsia de repetición positiva para cáncer (p <0.05). En el análisis multivariante, la edad, el tacto rectal, el volumen prostático y los antecedentes histológicos de una lesión preneoplásica se asociaron a biopsia positiva. Construimos un nomograma con un índice de concordancia de 0,80.Conclusión: A expensas de una validación prospectiva externa de nuestro modelo, el nomograma desarrollado podría ser de ayuda en la difícil de tarea de indicar una biopsia de repetición (AU)

Introduction and objectives: It is usual to identify patients with a negative prostate biopsy who are still at risk of prostate cancer. We try to analyse if the classical variables used in the prostate cancer screening are useful for those patients with a previous negative prostate biopsy, and if there is a possibility for making a nomogram witch would help us in the decision to repeat the biopsy. Material and methods: We studied 179 patients with at least 1 initial negative biopsy. At each biopsy session we recorded: Patient age, serum prostate specific antigen (PSA), free PSA/total PSA, PSA slope, digital rectal examination, prostate volume, PSA density, cancer suspicion in previous transrectal ultrasounds findings, number of negative cores previously obtained, history of precarcinomatous lesions and time between biopsies. Through Logistic regression analysis we determined the association of each variable a positive biopsy. A nomogram was constructed using all variables and discrimination was calculated as the concordance index. Results: Overall 46% of patients had cancer at the repeated biopsy session. In the univariate analysis: Age, digital rectal examination, prostate volume, PSA density, cancer suspicion in ultrasounds findings, and precarcinomatous lesions were associated with repeat positive biopsy for cancer (all p <0.05). In the multivariate study, age, digital rectal examination, prostate volume and history of precarcinomatous lesions were associated with repeat positive biopsy. Anomogram was constructed that had a concordance index of 0.80 (AU)

Canales iónicos sensibles a la concentración extracelular de protones: estructura, función, farmacología y fisiopatología / Ion channels that are sensitive to the extracellular concentration of protons: their structure, function, pharmacology and pathophysiology

Objetivo. Realizar una revisión sobre los canales iónicos ASIC (acid sensing ion channels), los cuales se han investigado arduamente desde su clonación; se ha podido demostrar su participación en diversas modalidades sensoriales incluida la nocicepción, así como en la transmisión sináptica, procesos de memoria y aprendizaje y en la fisiopatología del daño por isquemia cerebral. Desarrollo. La concentración de protones en el organismo está regulada de manera muy estricta por distintos sistemas amortiguadores. Cambios drásticos de pH se generan únicamente bajo condiciones patológicas como la isquemia; sin embargo, algunos procesos fisiológicos producen cambios locales de pH extracelular. Recientemente, se ha clonado una nueva familia de receptores de protones conocida como ASIC. Éstos son canales iónicos que se encuentran inactivos al pH fisiológico (7,4) y se activan cuando el pH desciende, son permeables al ión de sodio y en menor medida al de calcio, y al activarse incrementan la excitabilidad de la célula que los expresa. Se encuentran distribuidos ampliamente en el sistema nervioso central y periférico, así como en epitelios especializados. En los últimos años su estudio se ha intensificado debido a su papel en la nocicepción, en la percepción gustativa, en la potenciación de larga duración y en la fisiopatología de la isquemia cerebral. Conclusiones. En esta revisión se discuten los aspectos moleculares, fisiológicos y farmacología de los ASIC, su participación en algunos procesos patológicos y las perspectivas de investigación básica y clínica en este incipiente campo de investigación (AU)

Aim. Acid sensing ion channels (ASIC) members of the ENaC de generine channel family, have been shown to participate in various sensorial pathways including nociception, also they have been shown to participate in synaptic transmission, learning and memory processes and in the physiopathology of the ischemic stroke. Development. The proton concentration in the organism is strictly regulated by distinct buffer systems. Drastic changes of pH are generated only by pathological conditions as is the ischemia; however, some physiological processes may produce local changes in the extracellular pH. Recently, a new family of proton receptors known as ASIC has been cloned. These are ionic channels in activated at physiological pH (7.4) and activated with a pH fall (increase in H+ concentration). ASICs are permeable to sodium ions and in a lesser degree to calcium ions, activation of these channels leads to an increase in cell excitability. The Asics are distributed widely in the central and peripheral nervous system, and in specialized epithelia. In the past few years they have become a focus of interest due to its role in nociception, taste perception, long term potentiation and the physiopathology of ischemic stroke. Conclusions. In this review we address the most relevant molecular, physiological and pharmacological aspects of the ASICs, its participation in some pathological process, and the perspectives of basic and clinic investigation in this arising research field (AU)

Modelos celulares para la caracterización del transporte intestinal de fármacos / Cell culture models for characterize the intestinal drug transport

Numerosos grupos de investigación de distintos países abogan por la inclusión, en el proceso de desarrollo de nuevos medicamentos, de ensayos in vitro en los que se evalúa la capacidad de transporte y difusión de los fármacos a través de monocapas de células epiteliales de diferentes tejidos, con el fin de reducir el número de ensayos en animales de experimentación y conseguir una selección orientada de las moléculas candidatas. En el presente trabajo se exponen las características y metodologías de trabajo destinadas a facilitar la manipulación y uso de dos líneas celulares: las Caco- 2, células de carcinoma de colon humano, que reproducen las características del intestino y las MDCK, células renales de perro (Madin- Darby Canine Kidney), útiles para cuantificar la excreción renal de fármacos, fundamentalmente mediada por la glicoproteína P, además de representar una alternativa a las células Caco- 2 en ensayos de permeabilidad, para fármacos que se absorben pasivamente

Numerous research groups of different countries defend the inclusion, in the process of development of new drugs, of in vitro test in which it can evaluates drug permeability and diffusion across epithelial cell monolayers of different tissues. The aims of these studies are to reduce the number of tests in animal models and to obtain an oriented selection of molecules candidates. In the present paper, characteristics and methodologies of work are exposed destined to facilitate the manipulation and use of two cellular lines: intestinal epithelial cell line (Caco-2) derived from a human colon adenocarcinoma, that reproduce the characteristics of the enterocytes, and a renal epithelial cell line MDCK (Madin-Darby Canine Kidney), useful to quantify renal excretion of drugs, fundamentally mediated by the P-glycoprotein, besides to represent an alternative to the cells Caco-2 in tests of drug permeability that is absorbed passively

Avances en la inmunopatología de la infección por el VIH / Advances in the immunopathology of HIV infection

La infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) origina una destrucción progresiva e irreversible del sistema inmunitario. Aunque este proceso está directamente relacionado con la infección de los linfocitos CD4, la disminución de esta población celular a lo largo de la infección por el VIH no se debe únicamente al efecto citopático provocado por la replicación viral. La inmunopatogenia del sida es un proceso extraordinariamente complejo en el que se encuentran implicados mecanismos patogénicos muy diferentes, algunos de los cuales no son todavía completamente comprendidos. En este artículo se analizan los mecanismos mediante los cuales el VIH se adapta y destruye sus células diana, la respuesta del sistema inmunitario frente a la infección por el VIH y, por último, los mecanismos de escape que permiten al VIH eludir esta respuesta inmunitaria (AU)

La matriz extracelular del sistema nervioso central: los proteoglicanos del tipo condroitinsulfato y la reparación neural / The extracellular matrix of the central nervous system: chondroitin sulphate type proteoglycans and neural repair

Objetivo. En este artículo realizamos un estudio de las características de la matriz extracelular (MEC) del sistema nervioso central (SNC). Desarrollo. Los proteoglicanos (PG) son glicoproteínas, un tipo de molécula muy abundante en la MEC. Dentro de este grupo de PG destacan los hialectanos o lecticanos. Los hialectanos se caracterizan por poseer dos componentes: la proteína eje y la fracción glucídica, que está formada por los glucosaminoglicanos (GAG). Los GAG están formados por la polimerización de dímeros de azúcares sencillos. Los GAG de los hialectanos son del tipo condroitinsulfato (CS). Por esta razón, estos PG se denominan PG del tipo CS (PG-CS). Los PG-CS se unen al ácido hialurónico y a otras moléculas de la MEC para formar una red tridimensional de naturaleza proteica, que cumple funciones muy importantes en la homeostasis del tejido nervioso. Conclusiones. Diversas hipótesis se han planteado para tratar de explicar la falta de regeneración del SNC tras la lesión neural o en ciertas patologías. Se ha propuesto que los PG-CS, cuya expresión se incrementa tras las lesiones del SNC, pudieran desempeñar algún papel en este proceso de inhibición de la capacidad regenerativa neural. En este sentido, realizamos finalmente un análisis de las aproximaciones terapéuticas, experimentales, que se realizan para tratar de inducir la regeneración del SNC tras la actuación sobre los PG-CS de la MEC (AU)

Aim. In this paper we present a review of the main features of the extracellular matrix (ECM) of the central nervous system (CNS). Development. Proteoglycans (PG) are glycoproteins, a very common type of protein in the ECM. Among the PG, the most abundant type is the hyalectan or lectican family. The PG is formed by two main components; a protein and a sugar chain, which that is termed glycosaminoglycan (GAG). These GAGs are polymers of two simple sugars. The hyalectan family has GAGs of the Chondroitin sulphate type (CS), and for this reason they are termed PG-CS. PG-CS are linked to the hyaluronic acid (HA) and other molecules of the ECM in order to form a three-dimensional network. This network has several important roles in the maintenance of the homeostasis of the CNS. Conclusions. Several hypotheses have been proposed to elucidate the failure of the CNS regeneration after an injury or in several pathologies. It has been suggested that PG-CS, which expression is up-regulated after CNS injury, may play some role in this process of inhibition of the CNS regeneration. Furthermore, we present an approach to the therapeutic potential of the CNS regeneration after the inactivation of the PG-CS up-regulation (AU)

La contribución de la diabetes tipo MODY a nuestros conocimientos sobre los mecanismos moleculares que intervienen en la diabetes tipo 2 / The contribution of MODY diabetes to our understanding of molecular mechanisms involved in type 2 diabetes

Naturity onset diabetes of the young (MODY) es una forma autosómica dominante de diabetes resultante de mutaciones de los genes de las células beta pancreáticas. En cambio, la diabetes tipo 2 (DT2) es una enfermedad multifactorial de comienzo tardío en la que los factores ambientales y los genéticos son importantes en su desarrollo, y la disfunción de las células beta y la resistencia a la insulina lo son en su fisiopatología. Aunque son escasas las similitudes fenotípicas existentes entre MODY y DT2, en ambas existe disfunción de las células beta, y en estudios recientes se ha demostrado que variantes comunes de los genes MODY, son excelentes genes candidatos para la susceptibilidad a la DT2. Se revisan las pruebas acerca de las variantes comunes de los genes MODY que predisponen a la DT2. De entre los genes MODY que se han analizado a fondo, existen pruebas convincentes de que las variantes de HNF1α, HNF4α, IPF1 y glucocinasa predisponen a la DT2 o influyen sobre un rasgo afín a la diabetes. Se concluye que los genes MODY son unos excelentes genes candidatos para la diabetes tipo 2, y que es necesario investigar con profundidad los genes MODY en la DT2 (AU)

Maturity onset diabetes of the young (MODY) is a young-onset, autosomal dominant form of diabetes, resulting from mutations in pancreatic beta-cell genes. In contrast, type 2 diabetes (T2D) is a late-onset, multi-factorial disease, with both environmental and genetic factors important in its development and both beta-cell dysfunction and insulin resistance important in its pathophysiology. Although there is limited phenotypic similarity between MODY and T2D, both show beta-cell dysfunction, and recent studies have demonstrated that common variation in MODY genes are excellent T2D susceptibility candidate genes. Here we review the evidence for common variants of MODY genes predisposing to T2D. Of the MODY genes that have been extensively analysed, there is convincing evidence that variants of HNF1α, HNF4α, IPF1 and glucokinase predispose to T2D or affect a diabetes related trait. We conclude that MODY genes are excellent candidate genes for Type 2 diabetes and further comprehensive analysis of the MODY genes in T2D is required (AU)

Estructura de proteínas: plegamiento y priones / Protein structure: folding and prions

Las encefalopatías espongiformes transmisibles han constituido en el último año un tema de gran alarma social, con relación al denominado "mal de las vacas locas" y su posible transmisión al ser humano. Entre los aspectos científicos más importantes de estas enfermedades destacan las características peculiares de su agente transmisor. En este artículo se describen brevemente los aspectos más relevantes de la hipótesis más aceptada para los mismos: los priones. Nos centramos en los aspectos moleculares de esta proteína, codificada en el genoma del huésped que padece la enfermedad, y en describir los cambios conformacionales en la estructura terciaria de la proteína a los que se atribuye su carácter patógeno. Nuestro objetivo es resumir el estado actual del conocimiento sobre los priones, las hipótesis formuladas sobre los posibles mecanismos de transmisión de la enfermedad sin recurrir a agentes con carga genética, y algunas peculiaridades específicas del nuevo agente infeccioso. La conexión entre este conocimiento y las posibles terapias de tratamiento de la enfermedad justifican una vez más la relación entre la química, la biología molecular y la medicina (AU)

Unusual characteristics of ciliate actins

Actin is a cytoskeletal protein that is ubiquitous in eukaryotes, hence the corresponding genes and proteins have been isolated from numerous organisms as different as animals, plants, fungi and protozoa. Several atomic models are available for the monomeric as well as the filamentous form, and more than 70 proteins that bind actin and control filament dynamics have been isolated from diverse eukaryotes. Moreover, the function and dynamics of the actin cytoskeleton in several eukaryotic systems have been depicted in depth. Unlike other protozoa, such as amoeba, actin is not an abundant protein in ciliates, whose cytoskeleton is mainly composed of microtubular arrays. Ciliate actin has been studied in several species, and it was established early on that this ciliate protein is very different from that of other eukaryotes. Similarly, the actin-binding proteins studied in ciliates display great differences with those of other eukaryotes. Consequently, ciliate actin has been considered as «unconventional», and this review focuses on molecular data leading to this conclusion (AU)

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ABC transporters in the protozoan parasite Leishmania

ATP-binding cassette (ABC) transporters constitute one of the biggest and most conserved protein families in the evolutionary scale. Many of them are of enormous clinical relevance, due to their relationship with genetic diseases and drug resistance during the treatment of cancer and infectious diseases. Leishmaniasis is a major and globally widespread group of parasitic diseases, whose treatment has been complicated by the expansion of resistance to conventional drugs. Here, we review the current knowledge about ABC transporters in Leishmania spp, with special attention to their relationship with the drug-resistance phenotype (AU)

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Homocisteína y patología del embarazo / Homocysteine and abnormal pregnancy

La homocisteína es un aminoácido no esencial que ha resultado ser un nuevo factor de riesgo cardiovascular independiente y un posible marcador biológico de las complicaciones ocurridas durante la gestación. Su tratamiento es fácil e inocuo, la prevalencia parece ser alta y su determinación mediante nuevas técnicas automatizadas hará posible que se realice en cualquier laboratorio. Esto nos hace pensar en la homocisteína como un posible factor de cribado poblacional, especialmente en aquellos pacientes con un mayor riesgo cardiovascular y en mujeres gestantes con antecedentes de embarazo complicado. Pero, por ahora, es una prueba que sólo se realiza en la investigación clínica. (AU)