Penicillium species present in Uruguayan salami / Especies de Penicillium presentes en salamines uruguayos

The surface coverage of certain dry fermented sausages such as Italian salami by some species of Penicillium provides their characteristic flavor and other beneficial properties. One of them is the protective effect by means of a uniform film of white mold against undesirable microorganisms. The aim of this work was to identify and to isolate the fungal species present in mature Italian type of salami and to evaluate if it is possible to obtain some of them as starters. In addition, the effects of temperature (14 °C and 25 °C), water activity (a w) (0.90, 0.95 and 0.995) and 2.5 % sodium chloride (NaCl) on fungal growth were determined. Similarly, the proteolytic and lipolytic activity and the ability to produce toxic secondary metabolites were evaluated in order to characterize some possible starter strain. All species found belong to the genus Penicillium, including a performing starter as Penicillium nalgiovense and some potentially toxicogenic species. All the strains showed a higher growth rate at 25 °C. The production of extracellular proteases and lipases was significantly higher at 25 °C than at 14 °C with and without sodium chloride. Only Penicillium expansum produced patulin. On the other hand, Penicillium griseofulvum was the only species that produced ciclopiazonic acid but none of the strains produced penicillin. The species present on salami, Penicillium nalgiovense, Penicillium minioluteum, Penicillium brevicompactum and Penicillium puberulum were unable to produce any of the evaluated toxins. These findings suggest that some fungal isolates from the surface of salami such as P. nalgiovense are potentially useful as starters in sausage manufacture.

La cobertura de la superficie de los embutidos fermentados secos -como el salamín tipo italiano- por algunas especies de Penicillium les proporciona un sabor característico y otras propiedades beneficiosas. Una de ellas es el efecto de protección contra microorganismos indeseables, al formarse una película blanca uniforme de mohos. El objetivo de este trabajo fue aislar e identificar los hongos filamentosos encontrados en la superficie de salamines tipo italiano y evaluar la posibilidad de obtener especies para utilizarse como cultivos iniciadores. Se determinó el efecto de la temperatura, la actividad de agua y del cloruro de sodio sobre el crecimiento fúngico. La actividad proteolítica y lipolítica y la capacidad de producir metabolitos secundarios tóxicos fueron evaluadas con el fin de caracterizar algunos posibles cultivos iniciadores. Todas las cepas fúngicas aisladas e identificadas correspondieron a especies del género Penicillium, algunas benéficas, como Penicillium nalgiovense, y otras potencialmente toxicogénicas. Estas cepas tuvieron diferentes tasas de crecimiento en respuesta a las diferentes condiciones de cultivo. Todas las cepas mostraron mayor crecimiento a 25 °C. La producción de proteasas y lipasas extracelulares fue significativamente mayor a 25 °C que a 14 °C. Penicillium expansum fue la única especie que produjo patulina y Penicillium griseofulvum fue la única que produjo ácido ciclopiazónico. Ninguna de las especies produjo penicilina. Penicillium nalgiovense, Penicillium minioluteum, Penicillium brevicompactum y Penicillium puberulum no produjeron ninguna de las toxinas evaluadas. Estos resultados sugieren que algunos aislamientos fúngicos, como P. nalgiovense, son potencialmente útiles como cultivos iniciadores en la fabricación de estos productos.

Patulin accumulation in apples during storage by Penicillium expansum and Penicillium griseofulvum strains

A part of apples destined to juice production is generally of poor quality. Apples from cold storage or recently harvest (ground harvested or low quality apples) are stored under ambient conditions until they are processed. Since Penicillium expansum and P. griseofulvum are the principal fungal species isolated from stored apples in Brazil, the objective of this study was to investigate the ability of these strains to produce patulin in apples and report the consequences of this type of storage in loss of quality. The toxin was quantified using thin layer chromatography and charge-coupled device camera (TLC-CCD). The rate and quantities that P. expansum and P. griseofulvum can grow and produce patulin are highly dependent on the fungal strain and time. Lesion diameter resulted to be independent of the strain considered. The maximum period of time which apples were kept at cold storage (4 ºC) without patulin accumulation was 27 days. When these apples were kept at 25 ºC during 3 days, both factors lesion diameter and patulin production increased significantly. These results confirm that time in which apples are taken out from cold storage room before juice production is critical in order to prevent patulin accumulation.

Penicillium expansum versus antagonist yeasts and patulin degradation in vitro

Taking into account the preliminary antagonistic/biodegradation property showed by Pichia membranifaciens and Sporobolomyces roseus, which decreased the initial patulin concentration of 588.4 to 290.0 mug/mL, ability of P. ohmeri 158 in biocontrol against Penicillium expansum and patulin decrease in vitro was performed. The culture supernatant of P. ohmeri 158 was effective against 66.17 percent micelial growth, indicating antibiosis related with the killer phenomenon. The initial patulin concentration of 223 mug in the presence of P. ohmeri 158 cells was decreased over 83 percent of the original concentration, when incubated at 25°C/2 days and > 99 percent after 5 days incubation time, with undetectable patulin level after 15 days. The initial pH 4.0 decreased to pH 3.3 along 15 days experiment, suggesting that patulin decrease was an active process and a consequence of yeast metabolism. The results suggested that P. ohmeri 158 could be a promising alternative for the inhibition of P. expansum growth and patulin degradation.

Considerando o antagonismo e degradação de patulina detectados em Pichia membranifaciens e Sporobolomyces roseus no estudo preliminar, este trabalho avaliou o efeito antagônico de Pichia ohmeri 158 no desenvolvimento de Penicillium expansum e a degradação de patulina "in vitro". O sobrenadante do cultivo de P. ohmeri 158 inibiu 66,17 por cento do desenvolvimento micelial, indicando antibiose relacionada ao fator killer. A concentração inicial de patulina (223 mug) na presença de células íntegras de P. ohmeri foi reduzida em mais de 83 por cento após dois dias de incubação a 25°C e superior a 99 por cento após 5 dias, com níveis indetectáveis no 15° dia. O decréscimo do pH 4,0 inicial para pH 3,3 sugeriu que a eliminação de patulina é um processo ativo e uma conseqüência do metabolismo da levedura. Os resultados obtidos concluem que P. ohmeri 158 é uma alternativa promissora na inibição do desenvolvimento de P. expansum e na degradação de patulina.

Suco de maçã: metodologia analítica para determinação de patulina e qualidade físico-química e microbiológica / Apple juice: analytical methodology in house for determination of patulin and phisic-chemistry and microbiological quality

Patulina (PAT) é uma micotoxina encontrada principalmente em maçãs e produtos de maçã, produzida por fungos, sendo o Penicillium expansum um dos principais produtores. Os objetivos deste trabalho foram: (1) desenvolver e/ou adaptar, validar in house e comparar métodos analíticos para determinação de PAT; (2) estudar sua estabilidade na temperatura ambiente e de geladeira; (3) verificar a incidência deste metabólito em bebidas a base de maçã comercializadas em cidades do Estado de São Paulo; (4) avaliar a qualidade físico-química e microbiológica do suco e néctar de maçã comercializados em cidades do Estado de São Paulo. Foram avaliados três métodos para análise de PAT em suco de maçã utilizando técnicas deextração diferentes: (a) extração líquido-líquido (ELL); (b) ELL e limpeza em coluna MycoSep® 228 e (c) ELL e limpeza em coluna preparada no laboratório. Foi utilizada Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com colunaC18 e detector de arranjo de diodo para a determinação de PAT. Os parâmetros de validação avaliados foram: linearidade, recuperação, precisão e exatidão, limite de detecção e quantificação e robustez. Os métodos apresentaram, como principal vantagem, a utilização de solventes não tóxicos na fase móvel, etanol e água. Os parâmetros da validação mostraram-se adequados para análise de PAT em suco de maçã em pequenas quantidades. No estudo de incidência das 134 amostras analisadas foi encontrada PAT em apenas 4 (3%) bebidas, em concentração entre 3-7 g/L. Na avaliação da qualidade físico-química e microbiológica do suco e néctar de maçã, os resultados das análises indicaram que foram utilizados frutos adequados, e que não ocorreram falhas durante oprocessamento e/ou transporte e/ou estocagem dos produtos fato este que também foi comprovado pela não detecção de PAT nestes produtos. O presente estudo fornecerá subsídios para as autoridades brasileiras estabelecerem níveis de PAT em bebidas de maçã comercializados no Brasil

Suco de maçã: metodologia analítica para determinação de patulina e qualidade físico-química e microbiológica

Patulina (PAT) é uma micotoxina encontrada principalmente em maçãs e produtos de maçã, produzida por fungos, sendo o Penicillium expansum um dos principais produtores. Os objetivos deste trabalho foram: (1) desenvolver e/ou adaptar, validar in house e comparar métodos analíticos para determinação de PAT; (2) estudar sua estabilidade na temperatura ambiente e de geladeira; (3) verificar a incidência deste metabólito em bebidas a base de maçã comercializadas em cidades do Estado de São Paulo; (4) avaliar a qualidade físico-química e microbiológica do suco e néctar de maçã comercializados em cidades do Estado de São Paulo. Foram avaliados três métodos para análise de PAT em suco de maçã utilizando técnicas deextração diferentes: (a) extração líquido-líquido (ELL); (b) ELL e limpeza em coluna MycoSep® 228 e (c) ELL e limpeza em coluna preparada no laboratório. Foi utilizada Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com colunaC18 e detector de arranjo de diodo para a determinação de PAT. Os parâmetros de validação avaliados foram: linearidade, recuperação, precisão e exatidão, limite de detecção e quantificação e robustez. Os métodos apresentaram, como principal vantagem, a utilização de solventes não tóxicos na fase móvel, etanol e água. Os parâmetros da validação mostraram-se adequados para análise de PAT em suco de maçã em pequenas quantidades. No estudo de incidência das 134 amostras analisadas foi encontrada PAT em apenas 4 (3%) bebidas, em concentração entre 3-7 g/L. Na avaliação da qualidade físico-química e microbiológica do suco e néctar de maçã, os resultados das análises indicaram que foram utilizados frutos adequados, e que não ocorreram falhas durante oprocessamento e/ou transporte e/ou estocagem dos produtos fato este que também foi comprovado pela não detecção de PAT nestes produtos. O presente estudo fornecerá subsídios para as autoridades brasileiras estabelecerem níveis de PAT em bebidas de maçã comercializados no Brasil

Ocorrência de patulina em uva fina (Vitis vinifera L. cv. Rubi) e sua relação com a podridão ácida / Occurrence of patulin in fine grape (Vitis vinifera L. cv. Rubi) and its relation with the sour rout

A podridão ácida é uma patologia das videiras, de alta freqüência nos períodos quentes e chuvosos, em conseqüência do desenvolvimento de fungos e bactérias em seus frutos. Um dos gêneros de fungos responsáveis por esta doença é o Penicillium spp., que poderá levar a produção de micotoxinas, como a patulina. Neste trabalho foi realizada uma investigação sobre a podridão ácida e a ocorrência de patulina em uvas itália (Vitis vinifera L. cv. Rubi) cultivadas no município de Marialva, Brasil. Foram avaliados os seguintes tratamentos: (I) testemunha sem sintomas de prodridão ácida; (II) amostra com sintomas, sem a remoção das bagas infectadas; (III) amostras com sintomas, com a remoção das bagas infectadas; (IV) amostras com sintomas da doença, com a remoção das bagas infectadas e desinfecção com hipoclorito. A cromatografia em camada delgada foi utilizada para a determinação de patulina. Nas amostras analisadas não foi detectada contaminação por esta micotoxina

The development of an analytical method for two mycotoxins, patulin and verruculogen, and survey of their presence in commercial tomato pulp

The mycotoxin patulin causes gastroinstestinal distress, neurotoxic and immunotoxic effects in animals. It can be produced by several species of Penicillium, Aspergillus and Byssochlamys and it has been found in fruits, vegetables and cereals. Verruculogen is a toxin produced mainly by Penicillium and Aspergillus spp. and causes severe tremors in affected animals. Tomatoes are especially susceptible to fungi invasion and their products need to be investigated for possible mycotoxin contamination. A method for the determination of patulin and verruculogen in tomato products was developed involving an extraction with ethyl acetate, a cleanup by silica gel column and determination and confirmation by high performance liquid chromatography with diode array detector. The quantification limits of the method, defined as the minimum amount that allowed quantification and confirmation by the DAD detector, were 10 ng/g and 20 ng/g. The average recovery for patulin at five levels of addition (from 20 to 200 ng/g) was 75 percent and at the single level of 100 ng/g was 90 percent .The average recovery for verruculogen at five levels of addition (from 50 to 300 ng/g) was 54 percent and at the single level of 100 ng/g was 52 percent. The processing of two tomato plants was followed during 1996, 1997, and 1998. Eighty-four samples of tomato pulp were analyzed for patulin and verruculogen. The toxins were not detected in any of the samples

Validación de un método para la determinación de patulina en jugos y purés de frutas por HPLC / Validation of a method for the determination of patulin in fruit juices and purees by high pressure liquid chromatography

Se validó el método de la Association of Official Analytical Chemist (AOAC) para la determinación de patulina en jugo de manzana por cromatografía líquida de alta presión (HPLC) con detector ultravioleta a 275 nm y una columna RP18, para jugo de manzana y puré de frutas. Se empleó como fase móvil una mezcla al 10 por ciento acetonitrilo-agua con una velocidad de flujo de 2,7 mL/min. La patulina presentó un tiempo de retención de 14,8 ñ 0,3 min. La ecuación de regresión fue Y = 1952,5X + 1673,5 y el coeficiente de correlación lineal de 0,9991. Se obtuvo un recobrado medio del 82,51 por ciento y un coeficiente de variación del 3,33 por ciento para los niveles de contaminación ensayados. La repetibilidad de una muestra contaminada con 33 µg/L de patulina fue de 3,12 µg/L. Se estableció para los jugos el límite de detección en 1,72 µg/L y el de cuantificación en 5,2 µg/L. Los purés de frutas fueron previamente diluidos y centrifugados, proponiéndose para el mango una purificación adicional por columna. Fue diseñado un control de calidad interno para el procesamiento de las muestras

Ocorrência de patulina em suco de maçä por cromatografia líquida de alta eficiência / Ocurrence of patulin in apple juice by high-performance liquid chromatography

Patulina é uma micotoxina produzida por várias espécies de fungos (Penicillium, Aspergillus e Biossochlamys), principalmente pelo Peniccillium expansum, fungo presente nas maçäs podres. É um composto tóxico, que em experimentos com animais tem demonstrado ter atividade mutagênica, carcinogênica. O conteúdo de patulina em suco de maçä é um bom indicador da qualidade das maçäs utlizadas no processamento. Treze marcas comercializadas em Belo Horizonte/Minas Gerais foram coletadas entre março e setembro de 1999. A metodologia utilizada foi a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em fase reversa. Patulina foi extraída com acetato de etila e o extrato foi purificado por participaçäo com soluçäo de carbonato de sódio. A separaçäo e quantificaçäo foi realizada em um cromatógrafo líquido por meio de uma coluna de fase reversa C18(3um) e detetor de ultravioleta a 278nm. Patulina e 5-hidroximetilfurfural (5-HMF) foram completamente separados utilizando como fase móvel 0,8(por cento) tetrahidrofurano em água contendo 0,02(por cento) de azida de sódio em uma vazäo de 0,5mL/minuto. O limite de detecçäo foi <5ug/L. Foram obtidos recuperaçöes média de patulina superiores a 73(por cento) e coeficientes de variaçäo menores que 7(por cento). Patulina foi detectada em apenas uma amostra (10ug/L). Apesar da baixa incidência de patulina em suco de maçä neste estudo, autoridades brasileiras de saúde devem continuar a monitorar estes produtos. (AU)

Patulin is a mycotoxin produced by several species of moulds (Penicillium, Aspergillus andBissochlamys), but mainly by the apple-rotting fungus Penicillium expansum. Patulin is a highly toxiccompound that has been shown to be mutagenic, carcinogenic and teratogenic in experiments with animals.The patulin content of apple juice is a good indicator of the quality of the apples used in the process.Thirteen brands were collected from retail markets in the city of Belo Horizonte, state of Minas Gerais,Brazil, between March and September 1999. A rapid reversed-phase liquid chromatographic determinationof patulin was used. Patulin was extracted with ethyl acetate and the extract was cleaned up by partitionwith sodium carbonate solution. The identification and quantification of patulin was determined by C18reversed phase column (3 µm) and a variable-wavelength UV-VIS detector set at 278 nm. Patulin and 5-hydroxymethylfurfural were completely resolved by using 0,8% tetrahydrofuran in water containing 0,02%sodium azide as the mobile phase at a flow rate of 0,5 mL/min. The detection limit was < 5 µg/L. Averagerecoveries greater than 73% of patulin and coefficients of variation of less than 7% were obtained. Patulinwas detected in only one sample (10 µg/L). Although the incidence of patulin in apple juice in the presentstudy was low, Brazilian health authorities should continue monitoring these products. (AU)

Patulina em alimentos: aspectos toxicologicos e analiticos / Toxicological and analytical aspects of patulin in foods

A patulina, micotoxina presente em frutas, principalmente na maca, e produzida por fungos dos generos Penicillium, Aspergillus, Byssochlamys, Gymnoascus e Paecilomyces. Esta micotoxina produz efeitos agudos em animais de experimentacao, alem de ser provavel agente toxico teratogenico, mutagenico e/ou carcinogenico. Portanto, pela ingestao de macas e de seus produtos industrializados como, poe exemplo, o suco, existe a possibilidade de grande numero de pessoas estarem expostas a patulina. A fim de contribuir para o entendimento dos efeitos toxicos decorrentes da exposicao a patulina e alterar para os riscos de seu aparecimento, preparou-se esta monografia que trata da ocorrencia da micotoxina em alimentos, suas caracteristicas gerais, propriedades fisico-quimicas, disposicao toxicocinetica, bem como seus aspectos analiticos

Determinación de patulina en frutas frescas y en conserva / Patulin determination in fresh and preserved fruits

La patulina es una micotoxina producida principalmente por la penicillium patulum y el aspergilus clavatus, es un carcinógeno por aplicación subcutánea y tiene efectos hepatotóxicos y neurotóxicos. Esta toxina ha sido encontrada en manzanas, cítricos, etc. Para la determinación de patulina en 230 muestras de frutas frescas y en conserva. Se ensayó un método por cromatografía de capa fina, que es una modificación al descrito por la AOAC en 1990, se obtuvieron recobrados entre el 75 y el 90 %y un límite de detección de 30 ug/kg. Fue detectado el 17,87 %de contaminación natural en las muestras analizadas

Bolores produtores de patulina em maçä e suco industrializado / Patulin producing moulds in apple and industrialized juice

Três variedades de maça - Anna, Ohio Beauty e Brasil - produzidas no Estado de Säo Paulo foram analisadas quanto à sua microbiota fúngica. Imediatamente após a colheita, os seguintes fungos foram isolados: Cladosporium sp., Phoma sp., Fusarium sp., Trichoderma sp., Alternaria sp., Phompsia sp., Penicillium sp., além de leveduras e outros bolores näo identificados. As cepas da Penicilina sp. isoladas näo eram produtoras de patulina. Após 1 mês de armazenamento a 4-C, duas cepas de Penicilliu expansum produtoras de patulina foram isoladas, a partir das maças Ohio Beauty e Brasil. A produçäo de patulina por uma dessas cepas foi estudada em meio de cultura a 7-C, 25-C e 35-C, durante um período de 7 a 42 dias e, em maças armazenadas a 4-C e 25-C, durante um período de 30 a 120 dias e 10 a 30 dias, respectivamente. A 7-C, em meio de cultura, a produçäo variou de 933 a 10.000*g/l; a 25-C a produçäo variou de 472 a 144.444*g/l; e a 35-C a produçäo foi entre 53,3 e 400*g/l. A temperatura de 25-C, a produçäo de toxina foi de 150 a 311*g/l e a 4-% de patulina

Introducción al tema de micotoxinas y micotoxicosis / Introduction to mycotoxins and mycotoxicoses

Se presenta un panorama general sobre las principales micotoxinas y sus efectos sobre la salud humana y animal