Padronização de uma PCR para diagnóstico molecular de Microsporum canis em amostras de pelos e crostas de cães e gatos / Standardization of a pcr for molecular diagnosis of microsporum canis in samples of fur and crusts of dogs and cats

Objetivou-se neste estudo padronizar um protocolo de reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção de Microsporum canis em amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos. Foram selecionadas 48 amostras previamente identificadas por meio de cultura. Destas, 23 foram positivas para dermatófitos no cultivo. Padronizou-se a PCR a partir de primers desenhados para o alvo M. canis. Sessenta e um por cento (14/23) das amostras positivas para dermatófitos foram identificadas como M. canis em cultura. Desse total, 71,4% (10/14) apresentaram um fragmento de 218pb compatível com o esperado para a espécie fúngica alvo dessa reação. Observou-se uma sensibilidade de 71,4% e especificidade de 100% na PCR, além de uma boa concordância entre essas técnicas de diagnóstico (Kappa: 0,78; P<0,0001). O protocolo utilizado neste estudo apresentou alta especificidade na detecção de M. canis diretamente de amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos, viabilizando um diagnóstico mais rápido e específico, podendo esse protocolo ser empregado como um método confirmatório para agilizar a detecção de M. canis.(AU)

The aim of this study was to standardize a Polymerase Chain Reaction protocol (PCR) for the detection of Microsporum canis in fur and/or crusts of dogs and cats. 48 samples previously identified by culture were selected. Of these, 23 were positive for dermatophytes in culture. PCR was standardized from drawn primers whose target is M. canis. A total of 61% (14/23) of the dermatophyte positive samples were identified as M. canis in culture. Of this total, 71.4% (10/14) presented a fragment of 218bp compatible with that expected for the fungal species target of the reaction. A sensitivity of 71.4% and specificity of 100% in the PCR were observed, in addition to a good agreement between the techniques (Kappa: 0.78; P<0.0001). The protocol used in this study showed high specificity in the detection of M. canis directly from fur and/or crusts of dogs and cats, making possible a faster and more specific diagnosis. This protocol could be used as a confirmatory method, speeding the detection of M. canis.(AU)

Padronização de uma PCR para diagnóstico molecular de Microsporum canis em amostras de pelos e crostas de cães e gatos / Standardization of a pcr for molecular diagnosis of microsporum canis in samples of fur and crusts of dogs and cats

Objetivou-se neste estudo padronizar um protocolo de reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção de Microsporum canis em amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos. Foram selecionadas 48 amostras previamente identificadas por meio de cultura. Destas, 23 foram positivas para dermatófitos no cultivo. Padronizou-se a PCR a partir de primers desenhados para o alvo M. canis. Sessenta e um por cento (14/23) das amostras positivas para dermatófitos foram identificadas como M. canis em cultura. Desse total, 71,4% (10/14) apresentaram um fragmento de 218pb compatível com o esperado para a espécie fúngica alvo dessa reação. Observou-se uma sensibilidade de 71,4% e especificidade de 100% na PCR, além de uma boa concordância entre essas técnicas de diagnóstico (Kappa: 0,78; P<0,0001). O protocolo utilizado neste estudo apresentou alta especificidade na detecção de M. canis diretamente de amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos, viabilizando um diagnóstico mais rápido e específico, podendo esse protocolo ser empregado como um método confirmatório para agilizar a detecção de M. canis.(AU)

The aim of this study was to standardize a Polymerase Chain Reaction protocol (PCR) for the detection of Microsporum canis in fur and/or crusts of dogs and cats. 48 samples previously identified by culture were selected. Of these, 23 were positive for dermatophytes in culture. PCR was standardized from drawn primers whose target is M. canis. A total of 61% (14/23) of the dermatophyte positive samples were identified as M. canis in culture. Of this total, 71.4% (10/14) presented a fragment of 218bp compatible with that expected for the fungal species target of the reaction. A sensitivity of 71.4% and specificity of 100% in the PCR were observed, in addition to a good agreement between the techniques (Kappa: 0.78; P<0.0001). The protocol used in this study showed high specificity in the detection of M. canis directly from fur and/or crusts of dogs and cats, making possible a faster and more specific diagnosis. This protocol could be used as a confirmatory method, speeding the detection of M. canis.(AU)

Evaluation of phytotoxicity of municipal landfill leachate before and after biological treatment / Avaliação da fitotoxicidade de chorume de aterro sanitário antes e após tratamento biológico

In the present study, leachate toxicity of a municipal solid waste landfill located in the Sinos River Valley region (southern Brazil) was evaluated using plant bioassays. Leachate toxicity was assessed by analysis of seed germination and root elongation of lettuce (Lactuca sativa L.) and rocket plant (Eruca sativa Mill.) and root elongation of onions (Allium cepa L.). Bioassays were performed by exposing the seeds ofL. sativa and E. sativa and the roots of A. cepa to raw leachate, treated leachate (biological treatment) and negative control (tap water). The levels of metals detected in both samples of leachate were low, and raw leachate showed high values for ammoniacal nitrogen and total Kjeldahl nitrogen. There is a reduction in the values of several physicochemical parameters, which demonstrates the efficiency of the treatment. Both L. sativa and A. cepa showed a phytotoxic response to landfill leachate, showing reduced root elongation. However, the responses of these two plant species were different. Root elongation was significantly lower in A. cepa exposed to treated leachate, when compared to negative control, but did not show any difference when compared to raw leachate. In L. sativa, seeds exposed to the raw leachate showed significant reduction in root elongation, when compared to treated leachate and negative control. Seed germination showed no difference across the treatments. The results of the study show that plant species respond differently and that municipal solid waste landfill leachate show phytotoxicity, even after biological treatment.(AU)

No presente trabalho, a toxicidade do lixiviado (chorume) de um aterro sanitário municipal, localizado na região do Vale do Rio dos Sinos, foi avaliada utilizando bioensaios em plantas. A toxicidade do chorume foi analisada pelo teste de germinação e crescimento radicular de alface (Lactuca sativa L.) e rúcula (Eruca sativa Mill.) e pelo teste de crescimento radicular em cebola (Allium cepa L.). Os bioensaios foram realizados com a exposição de sementes de L. sativa e E. sativa e raízes de A. cepa a amostras de chorume bruto, tratado por processo biológico e controle negativo (água de abastecimento público). Os níveis de metais detectados nas amostras de chorume foram baixos, e o chorume bruto apresentou valores elevados de nitrogênio amoniacal e nitrogênio Kjeldahl total. Ocorreu redução nos valores de vários parâmetros físico-químicos, demonstrando a eficiência do tratamento biológico. Os resultados indicam fitotoxicidade do chorume em L. sativa e A. cepa, evidenciada pela redução do crescimento radicular. Entretanto, as respostas destas duas espécies diferiram. O crescimento radicular foi significativamente inferior em A. cepa exposta ao chorume tratado quando comparado ao controle negativo, mas não apresentou diferença quando comparado ao chorume bruto. Em L. sativa, a exposição das sementes ao chorume bruto causou redução no crescimento radicular quando comparado com o chorume tratado e controle negativo. Não foram observadas diferenças entre os tratamentos para o parâmetro germinação de sementes. Os resultados deste trabalho indicam que as espécies de plantas estudadas são diferentes em suas respostas e que o chorume apresenta toxicidade, mesmo após o tratamento biológico.(AU)

Water quality assessment of the Sinos River RS, Brazil

Worldwide environmental pollution is increasing at the same rate as social and economic development. This growth, however, is disorganized and leads to increased degradation of water resources. Water, which was once considered inexhaustible, has become the focus of environmental concerns because it is essential for life and for many production processes. This article describes monitoring of the water quality at three points along the Sinos River (RS, Brazil), one in each of the upper, middle and lower stretches. The points were sampled in 2013 and again in 2014. The water samples were analyzed to determine the following physical and chemical parameters plus genotoxicity to fish: metals (Cr, Fe, Al), chemical oxygen demand, biochemical oxygen demand, chlorides, conductivity, total suspended solids, total phosphorous, total and fecal coliforms, pH, dissolved oxygen, turbidity, total Kjeldahl nitrogen nitrate and ammoniacal nitrogen. Genotoxicity was tested by exposing individuals of the species Astyanax jacuhiensis to water samples and then comparing them with a control group exposed to water from the public water supply. The results confirmed the presence of substances with genotoxic potential at the sample points located in the middle and lower stretches of the river. The results for samples from the upper stretch, at P1, did not exhibit differences in relation to the control group. The physical and chemical analyses did not detect reductions in water quality in the lower stretch, as had been expected in view of the large volumes of domestic and industrial effluents discharged into this part of the river.

Resumo A poluição ambiental aumenta mundialmente, no mesmo ritmo que o desenvolvimento social e econômico. Este crescimento é, muitas vezes, desorganizado e proporciona um aumento da degradação dos recursos hídricos. Água, que já foi considerado inesgotável, tornou-se o foco das preocupações ambientais, pois é essencial para a vida e para muitos processos de produção. Este artigo aborda o monitoramento da qualidade da água, em três pontos do Rio dos Sinos, compreendendo o trecho superior, médio e inferior. Os pontos foram monitorados entre 2013 e 2014. As amostras de água foram analisadas para determinar os parâmetros físico-químicos complementarmente a genotoxicidade em peixes: metais (Cr, Fe, Al), demanda química de oxigenio, demanda bioquímica de oxigênio, cloretos, condutividade, sólidos suspensos totais, fósforo total, coliformes totais e fecais, pH, oxigênio dissolvido, turbidez, nitrogênio total Kjeldahl, nitrato e nitrogênio amoniacal. A avaliação de genotoxicidade foi conduzida pela exposição à água de diferentes pontos do rio de indivíduos da espécie Astyanax jacuhiensis. O grupo controle foi exposto à água de abastecimento público. Os resultados confirmam a presença de substâncias com potencial genotóxico nos pontos localizados nos trechos médio e inferior. No trecho superior, ponto 1, não houve diferenças em relação ao grupo controle. A diminuição da qualidade da água do trecho inferior quando comparada com o superior também foi confirmada através das análises físico-químicas, as quais indicaram uma redução na qualidade da água nos trechos inferiores, como o esperado devido ao grande escoamento de esgotos domésticos e industriais neste trecho do rio.

Cytotoxicity assays as tools to assess water quality in the Sinos River basin / Ensaios de citotoxicidade como ferramentas para avaliar a qualidade da água da bacia do Rio do Sinos

Cytotoxicity assays using cell cultures may be an alternative to assess biological toxicity of surface waters and may help to improve the control of water quality. This study compared two methods to prepare culture media for the exposure of Hep-2 cells to water samples collected from the Rolante River, an important affluent of the Sinos River. The toxicity was evaluated using the MTT and neutral red assays. Two methods were used to prepare culture media. In method 1, the sample was diluted at 1:1, 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10.000 (v/v, sample/medium) in a standard culture medium; in method 2, water samples were used as the solvent for the culture medium, which was prepared at concentrations of 100, 80, 60, 40 and 20%. Semi-confluent cultures were then exposed to the media test for 24 hours, and cytotoxicity was determined immediately using the MTT and NR assays. Mitochondrial activity (MTT) was significantly lower at all concentrations in both methods, except at 1:1000 in method 1. However, the lysosome viability (NR) results revealed cytotoxicity only in the 1:1 sample of method 1. Both culture preparation methods were efficient and sensitive to the MTT assay, but method 2 seemed to be more adequate for the NR assay. The Rolante River has cytotoxic contaminants to Hep-2 cells, which may be one of the explanations for the poor water quality of the Sinos River basin.(AU)

Os ensaios de citotoxicidade utilizando culturas de células constituem uma alternativa para avaliar a toxicidade biológica de águas de superfície e podem auxiliar no controle da qualidade da água. Este estudo comparou dois métodos de preparação dos meios de cultura com amostras de água coletadas no rio Rolante, um importante afluente do Rio dos Sinos, para a exposição de células Hep-2. A toxicidade foi avaliada usando os ensaios do MTT e do vermelho neutro (VN). Dois métodos foram utilizados para preparar os meios de cultura. No método 1, a amostra foi diluída a 1:1, 1:10, 1:100, 1:1000 e 1:10.000 (v/v, amostra/ meio de cultivo) em um meio de cultura padrão; no método 2, as amostras de água foram utilizados como solventes para o meio de cultura, o qual foi preparado em concentração de 100% e nas diluições de 80, 60, 40 e 20%. Culturas semi-confluentes foram então expostas aos meios teste durante 24 horas, e a citotoxicidade foi determinada imediatamente usando os ensaios MTT e VN. A atividade mitocondrial (MTT) foi significativamente menor em todas as concentrações em ambos os métodos, exceto na diluição 1:1000 do método 1. No entanto, os resultados de viabilidade lisossomal (VN) revelaram citotoxicidade apenas no na diluição 1:1 do método 1. Ambos os métodos de preparação do meio cultura foram eficientes e sensíveis para o ensaio do MTT, mas o método 2 foi mais adequado para o ensaio do VN. O rio Rolante possui contaminantes citotóxicos para as células Hep-2, o que pode ser uma das explicações para a baixa qualidade da água da Bacia do Rio dos Sinos.(AU)

Water quality assessment of the Sinos River RS, Brazil / Qualidade da água do Rio dos Sinos RS, Brasil

Worldwide environmental pollution is increasing at the same rate as social and economic development. This growth, however, is disorganized and leads to increased degradation of water resources. Water, which was once considered inexhaustible, has become the focus of environmental concerns because it is essential for life and for many production processes. This article describes monitoring of the water quality at three points along the Sinos River (RS, Brazil), one in each of the upper, middle and lower stretches. The points were sampled in 2013 and again in 2014. The water samples were analyzed to determine the following physical and chemical parameters plus genotoxicity to fish: metals (Cr, Fe, Al), chemical oxygen demand, biochemical oxygen demand, chlorides, conductivity, total suspended solids, total phosphorous, total and fecal coliforms, pH, dissolved oxygen, turbidity, total Kjeldahl nitrogen nitrate and ammoniacal nitrogen. Genotoxicity was tested by exposing individuals of the species Astyanax jacuhiensis to water samples and then comparing them with a control group exposed to water from the public water supply. The results confirmed the presence of substances with genotoxic potential at the sample points located in the middle and lower stretches of the river. The results for samples from the upper stretch, at P1, did not exhibit differences in relation to the control group. The physical and chemical analyses did not detect reductions in water quality in the lower stretch, as had been expected in view of the large volumes of domestic and industrial effluents discharged into this part of the river.(AU)

A poluição ambiental aumenta mundialmente, no mesmo ritmo que o desenvolvimento social e econômico. Este crescimento é, muitas vezes, desorganizado e proporciona um aumento da degradação dos recursos hídricos. Água, que já foi considerado inesgotável, tornou-se o foco das preocupações ambientais, pois é essencial para a vida e para muitos processos de produção. Este artigo aborda o monitoramento da qualidade da água, em três pontos do Rio dos Sinos, compreendendo o trecho superior, médio e inferior. Os pontos foram monitorados entre 2013 e 2014. As amostras de água foram analisadas para determinar os parâmetros físico-químicos complementarmente a genotoxicidade em peixes: metais (Cr, Fe, Al), demanda química de oxigenio, demanda bioquímica de oxigênio, cloretos, condutividade, sólidos suspensos totais, fósforo total, coliformes totais e fecais, pH, oxigênio dissolvido, turbidez, nitrogênio total Kjeldahl, nitrato e nitrogênio amoniacal. A avaliação de genotoxicidade foi conduzida pela exposição à água de diferentes pontos do rio de indivíduos da espécie Astyanax jacuhiensis. O grupo controle foi exposto à água de abastecimento público. Os resultados confirmam a presença de substâncias com potencial genotóxico nos pontos localizados nos trechos médio e inferior. No trecho superior, ponto 1, não houve diferenças em relação ao grupo controle. A diminuição da qualidade da água do trecho inferior quando comparada com o superior também foi confirmada através das análises físico-químicas, as quais indicaram uma redução na qualidade da água nos trechos inferiores, como o esperado devido ao grande escoamento de esgotos domésticos e industriais neste trecho do rio.(AU)

Moving beyond classical markers of water quality: detection of enteric viruses and genotoxicity in water of the Sinos River / Indo além dos marcadores clássicos de qualidade da água: detecção de vírus entéricos e genotoxicidade na água do Rio dos Sinos

It is well recognized that the classical biological and chemical markers of environmental pollution do not necessarily indicate the presence or absence of emerging threats to public health, such as waterborne viruses and genotoxicants. The purpose of this preliminary study was to evaluate the presence of material of enteroviruses (EV), rotavirus (RV) and adenovirus (AdV) and genotoxicity in water samples from points of routine monitoring of water quality in the main course of the Sinos River. The points are classified into different levels of pollution in accordance to the Brazilian federal regulations. Viral genomes from EV, AdV were detected in two of the 4 collection points regardless of the level of urbanisation of the surrounding areas. In contrast, genotoxicity was not observed in piava (Leporinus obtusidens) fingerlings cultivated on these same water samples. Results were compared with classical physical, chemical and microbiological parameters. There was no clear evidence of association between any of the classical markers and the presence of viral genomes in the water samples tested.(AU)

É amplamente reconhecido que os marcadores biológicos e químicos clássicos para a poluição ambiental não necessariamente indicam a presença ou ausência de ameaças emergentes à saúde pública, tais como vírus transmitidos pela água e genotoxicantes. Este estudo preliminar teve por objetivo detectar material genético de enterovírus (EV), rotavírus (RV) e adenovírus (AdV) e genotoxicidade em amostras de água de pontos de monitoramento de rotina da qualidade da água no curso principal do rio dos Sinos. Os pontos são classificados em níveis diferentes de poluição, de acordo com as normativas federais brasileiras. Genomas virais de EV, RV e RV foram detectados em dois dos quatro pontos de coleta, independente do nível de urbanização das áreas adjacentes. Por outro lado, não foi observada genotoxicidade em alevinos de piava (Leporinus obtusidens) cultivados nestas mesmas amostras de água. Os resultados são comparados com marcadores físicos, químicos e microbiológicos clássicos, não há nenhuma evidência clara da associação entre qualquer um dos marcadores clássicos e da presença de genomas virais nas amostras de água testadas.(AU)

Evaluation of genotoxicity and cytotoxicity of water samples from the Sinos River Basin, southern Brazil / Avaliação da genotoxicidade e da citotoxicidade de amostras de água da Bacia do Rio dos Sinos, sul do Brasil

Some water bodies in the Sinos River Basin (SRB) have been suffering the effects of pollution by residential, industrial and agroindustrial wastewater. The presence of cytotoxic and genotoxic compounds could compromise the water quality and the balance of these ecosystems. In this context, the research aimed to evaluate the genotoxicity and cytotoxicity of the water at four sites along the SRB (in the cities of Santo Antônio da Patrulha, Parobé, Campo Bom and Esteio), using bioassays in fish and cell culture. Samples of surface water were collected and evaluated in vitro using the Astyanax jacuhiensis fish species (micronucleus test and comet assay) and the Vero lineage of cells (comet assay and cytotoxicity tests, neutral red - NR and tetrazolium MTT). The micronucleus test in fish showed no significant differences between the sampling sites, and neither did the comet assay and the MTT and NR tests in Vero cells. The comet assay showed an increase in genetic damage in the fish exposed to water samples collected in the middle and lower sections of the basin (Parobé, Campo Bom and Esteio) when compared to the upper section of the basin (Santo Antônio da Patrulha). The results indicate contamination by genotoxic substances starting in the middle section of the SRB.(AU)

Alguns corpos dágua da Bacia Hidrográfica do Rio dos Sinos (BHRS) vêm sofrendo os efeitos da poluição por efluentes domésticos, industriais e agroindustriais. A presença de compostos citotóxicos e genotóxicos pode comprometer a qualidade da água e o equilíbrio desses ecossistemas. Neste contexto, o objetivo do trabalho foi avaliar a genotoxicidade e a citotoxicidade da água em quatro pontos ao longo da BHRS (Santo Antônio da Patrulha, Parobé, Campo Bom e Esteio), utilizando bioensaios em peixes e em cultura celular. As amostras de água de superfície foram coletadas e avaliadas in vitro utilizando a espécie de peixe Astyanax jacuhiensis (teste de micronúcleo e ensaio cometa) e a linhagem celular tipo Vero (ensaio cometa e os testes de citotoxicidade vermelho neutro - VN e tetrazólio MTT). O teste de micronúcleos em peixes não apresentou diferenças significativas entre os pontos de coleta, assim como o ensaio cometa e os testes VN e MTT nas células Vero. O ensaio cometa demonstrou aumento nos danos genéticos em peixes expostos às amostras de água coletadas nos trechos médio e inferior da bacia (Parobé, Campo Bom e Esteio) em relação ao trecho superior da bacia (Santo Antônio da Patrulha). Os resultados indicam contaminação por substâncias genotóxicas a partir do trecho médio da BHRS.(AU)

Efeito do extrato aquoso e etanólico do angico preto sobre larvas de Rhipicephalus (Boophilus) microplus / The effect of aqueous and ethanolic extracts from the angico Preto about larvae of Rhipicephalus (Boophilus) microplus

Rhipicephalus (Boophilus) microplus representa um grande problema na bovinocultura e o uso de acaricidas é a medida de controle profilático e terapêutico mais comum contra esses ectoparasitos. Os principais problemas relacionados com essa prática dizem respeito ao desenvolvimento de linhagens resistentes de carrapatos. Assim, objetivou-se determinar o efeito de extratos da casca de Anadenanthera macrocarpa sobre as larvas de R. (B.) microplus, obtidas de um pool de ovos, acondicionadas em tubo de polietileno. De acordo com os resultados, o extrato aquoso na concentração de 8,26mg.mL-1 causou 85% de mortalidade nas primeiras 12 horas. Quanto ao extrato etanólico, observou-se maior mortalidade nas concentrações 12,5; 6,25 e 1,56mg.mL-1, em torno de 84%, percentuais semelhantes ao amitraz. Os controles negativos não apresentaram mortalidade durante o experimento. Assim, tanto o extrato aquoso como o extrato etanólico apresentaram efeito larvicida, embora o extrato etanólico tenha sido mais eficiente para a espécie, podendo ser uma alternativa no controle desse ectoparasito.(AU)

Rhipicephalus (Boophilus) microplus represents a major problem in cattle breeding and the use of acaricides is the most common prophylactic and therapeutic control measure against these ectoparasites. The main problems with this practice relate to the development of resistant strains of ticks. Thus, the objective was to determine the effect of bark extracts from Anadenanthera macrocarpa on the larvae of R.(B.) microplus, obtained from a pool of eggs packed in a polyethylene tube. According to the results, the aqueous extract at a concentration of 8.26mg.mL-1caused 85% mortality in the first 12 hours. As for the ethanolic extract, higher mortality of about 84%, a percentage similar to amitraz, was observed at concentrations of 12.5mg.mL-1, 6.25mg.mL-1 and 1.56mg.mL-1. The negative controls showed no mortality during the experiment. Thus, both the aqueous and ethanolic extracts showed larvicidal activity, although the ethanolic extract has been more efficient and could be an alternative to control this ectoparasite.(AU)

Estimativa do intervalo pós-morte em um canino (Canis lupus familiaris Linnaeus 1758) pela entomologia forense em Cabedelo-PB, Brasil: relato de caso / Estimate of postmortem interval through forensic entomology in a canine (Canis lupus familiaris Linnaeus 1758) in Cabedelo-PB, Brazil: case report

O intervalo pós-morte (IPM) é um instrumento importante de diagnóstico relacionado à prática forense. O uso de insetos tem sido relatado como um modo eficiente para estimá-lo, quando o cadáver encontra-se em estágio avançado de decomposição. Objetivou-se com este trabalho estimar o IPM com base em evidências entomológicas em um canino. Foram coletadas larvas de moscas no cadáver e encaminhadas ao laboratório de entomologia, onde foram criadas e eclodiram adultos da espécie Chrysomya albiceps (Wiedemann, 1819). Somando-se os dados abióticos de temperatura e umidade relativa do local de coleta e do local de criação, estimou-se um IPM mínimo de 3,34 dias do momento da postura dos ovos pelas moscas até a coleta das larvas. Com base nos resultados obtidos, conclui-se que a entomologia forense, como ferramenta para estimativa do IPM, mostrou-se eficaz e determinante na elucidação do caso em questão.(AU)

The postmortem interval (PMI) is an important tool for diagnosis related to the forensic practice. The use of insects has proved to be an efficient diagnosis tool when the cadaver is in advanced decomposition stage. The objective of this work was to estimate PMI based on entomological evidence in a canine. Fly larvae was collected from the cadaver and forwarded to the Entomology laboratory. The fly larvae were reared and hatched adults of Chrysomya albiceps (Wiedemann 1819). With these insects and the abiotic data of temperature and relative humidity, from the places of collection and rearing larvae, a minimum PMI of 3.34 days from the laying of eggs by the flies until the time that we collected the larvae was obtained. The results show that Forensic Entomology as tool to estimate PMI is decisive and effective in the elucidation of the case.(AU)

Perfil de sensibilidade antimicrobiana de agentes contagiosos e ambientais isolados de mastite clínica e subclínica de búfalas

ABSTRACT With the objective of examining the frequency of bacterial agents involved in the clinical and subclinical inflammatory processes of the mammary glands of buffalos and to study the sensitivity profile of the isolated agents 128 lactating buffalos (a total of 512 mammary quarters) were examined. The California Mastitis Test was the method used for the diagnosis of frequency of subclinical cases and physical examination of the udder and a screened mug test for identification of the clinical cases. Samples of milk were collected from the quarters that showed a reaction to CMT (scores 1+, 2+, 3+) and from those with clinical mastitis. All samples were previously microbiologically tested for the identification of the agents involved together with the sensitivity tests and antimicrobials. The results indicated that the bacteria isolated and associated in the clinical and subclinical cases of the disease were mainly Staphylococcus coagulase negative.The in vitrosensitivity tests showed greater efficacy for gentamicin antibiotics (97.98%), florfenicol (93.94%) and enrophloxine (90.90%). Gentamicin showed 100% efficacy in the treatment of the clinical cases and was considered the best treatment for the control of the disease in the herd in this study.

RESUMO Com o objetivo de estudar a freqüência de agentes bacterianos envolvidos nos processos inflamatórios clínicos e subclínicos da glândula mamária de búfalas e realizar o perfil de sensibilidade dos agentes isolados, foram estudadas 128 búfalas em lactação, totalizando 512 quartos mamários. Realizou-se o California Mastitis Test para diagnóstico da freqüência de casos subclínicos e o exame físico da glândula mamária e teste da caneca telada para identificar os casos clínicos. As amostras de leite foram colhidas dos quartos que apresentaram reação ao C.M.T. (escores 1+, 2+, 3+) e daqueles com mastite clínica, sendo posteriormente realizados os exames microbiológicos para a identificação dos agentes envolvidos, além dos testes de sensibilidade a antimicrobianos. Observaram-se bactérias isoladas e associações destas em casos clínicos e subclínicos da doença, destacando-se o Staphylococcus coagulase negativa como o mais freqüente. Os testes de sensibilidade in vitro demonstraram maior eficácia para os antibióticos gentamicina (97,98%), florfenicol (93,94%) e enrofloxacina (90,90%). A gentamicina apresentou 100% de eficácia no tratamento dos casos clínicos, sendo considerada uma boa opção para o controle da doença no rebanho estudado.

Corynebacterium pseudotuberculosis experimental infection of goats mamary gland

ABSTRACT The objective of this study is to describe some aspects of the pathogeny of Corynebacterium pseudotuberculosis, isolated from a natural case of caseous lymphadenitis. The study was comprised with 2 groups of 3 animals each; inoculated with a C. pseudotuberculosis strain, group 1 (GI) via intra dermal and group 2 (GII) via the mammary gland. The animals were clinically examined on a daily basis and hemograms carried out over a period of time at different intervals. Only 2 animals from GII showed changes in the clinical examination characterized by hyperthermia. All the animals in both groups developed papule and edema at the inoculation site. There were no significant alterations in the erythrogram but in the leucogram there was leucocytosis indicated by the presence of neutrophilia in 2 animals from GII. Results of the cellular analysis of the gland showed that 2 animals from GII developed acute mastitis. This experiment has proven that C. pseudotuberculosis, isolated from a natural infection of caseous lymphadenitis, could cause clinical mastitis, losses in goat keeping and that the expression cytology test could be used as an alternative diagnosis for mastitis.

RESUMO Objetivou-se com este trabalho descrever alguns aspectos da patogenia da infecção da glândula mamária por Corynebacterium pseudotuberculosis isolado de um caso natural de linfadenite caseosa. Os animais em número de seis, foram separados em dois grupos, no primeiro (GI) foi realizada inoculação da cepa de C. pseudotuberculosis pela via intradérmica e no segundo grupo (GII) pela via intramamária. Esses animais foram acompanhados diariamente por exame clínico e por hemogramas em diferentes tempos. Apenas dois animais do GII apresentaram alteração ao exame clínico caracterizada por hipertermia. Todos os animais (GI e GII) apresentaram pápula e edema no local da inoculação. No eritrograma, não foram observadas alterações significativas, contudo no leucograma, observou-se leucocitose por neutrofilia em dois animais do GII. A análise da celularidade das glândulas demonstrou que apenas dois animais do GII apresentaram mastite aguda. Comprovou-se com este experimento que o C. pseudotuberculosis isolado de infecção natural de linfadenite caseosa, pode ocasionar mastite clínica, causando prejuízos para caprinocultura, assim como a citologia de expressão pode ser utilizada como método de diagnóstico alternativo nos casos de mastite.