Estafilococos resistentes à oxacilina isolados em casos de mastite subclínica em ovinos

Staphylococcus bacteria are among the main agents of ovine mastitis. One of the greatest barriers to treatment of sick animals are strains resistant to antimicrobial agents. The research of the mecA gene in staphylococci is an auxiliary tool for the determination of epidemiological aspects of disease. The present study aimed to investigate oxacillin resistance in coagulase-negative staphylococci isolated in the milk from ewes with subclinical mastitis. A total of 448 samples from 2 flocks were analyzed. Colonies were previously submitted to testing for susceptibility to antibiotics in-vitro using the technique of disk diffusion. Using the oxacillin-resistant strains in these tests, the research of mecA gene was conducted with the extraction of chromosomal DNA by way of the technique of phenol-chloroform extraction. Coagulase-negative staphylococci were resistant to oxacillin, and the mecA gene was detected in 4 isolates, which also showed characteristics of multidrug resistance. These findings reinforce the importance of these microorganisms in the etiology of subclinical mastitis in ewes, and open perspectives for future research to investigate the epidemiology of this disease.

Bactérias do gênero Staphylococcus estão entre os principais agentes causadores da mastite ovina. Um dos maiores entraves ao tratamento dos animais doentes são cepas resistentes aos antimicrobianos empregados. A pesquisa do gene mecA nos estafilococos é um instrumento auxiliar para a determinação de aspectos epidemiológicos da doença. Este trabalho teve por objetivo investigar a resistência à oxacilina em estafilococos coagulase-negativos isolados no leite de ovelhas com mastite subclínica. Foram analisadas 448 amostras de leite de dois rebanhos. Os micro-organismos isolados foram submetidos previamente a testes de sensibilidade a antibióticos in vitro a partir da técnica de difusão em disco. Naqueles resistentes à oxacilina nestes testes efetuou-se a pesquisa do gene mecA, com a extração do DNA cromossômico por meio da técnica de extração fenol-clorofórmio. Os estafilococos coagulase-negativos apresentaram resistência à oxacilina e a presença do gene mecA foi detectada em quatro isolados, que também apresentaram características de multirresistência. Tais achados reforçam a importância deste grupo de micro-organismos na etiologia da mastite subclínica em ovinos e abre perspectivas para futuras pesquisas para a investigação da epidemiologia da doença.

Estafilococos resistentes à oxacilina isolados em casos de mastite subclínica em ovinos / Oxacillin-resistant Staphylococci isolated from ovine subclinical mastitis

Bactérias do gênero Staphylococcus estão entre os principais agentes causadores da mastite ovina. Um dos maiores entraves ao tratamento dos animais doentes são cepas resistentes aos antimicrobianos empregados. A pesquisa do gene mecA nos estafilococos é um instrumento auxiliar para a determinação de aspectos epidemiológicos da doença. Este trabalho teve por objetivo investigar a resistência à oxacilina em estafilococos coagulase-negativos isolados no leite de ovelhas com mastite subclínica. Foram analisadas 448 amostras de leite de dois rebanhos. Os micro-organismos isolados foram submetidos previamente a testes de sensibilidade a antibióticos in vitro a partir da técnica de difusão em disco. Naqueles resistentes à oxacilina nestes testes efetuou-se a pesquisa do gene mecA, com a extração do DNA cromossômico por meio da técnica de extração fenol-clorofórmio. Os estafilococos coagulase-negativos apresentaram resistência à oxacilina e a presença do gene mecA foi detectada em quatro isolados, que também apresentaram características de multirresistência. Tais achados reforçam a importância deste grupo de micro-organismos na etiologia da mastite subclínica em ovinos e abre perspectivas para futuras pesquisas para a investigação da epidemiologia da doença.

OXACILLIN-RESISTANT STAPHYLOCOCCI ISOLATED FROM OVINE SUBCLINICAL MASTITIS. Staphylococcus bacteria are among the main agents of ovine mastitis. One of the greatest barriers to treatment of sick animals are strains resistant to antimicrobial agents. The research of the mecA gene in staphylococci is an auxiliary tool for the determination of epidemiological aspects of disease. The present study aimed to investigate oxacillin resistance in coagulase-negative staphylococci isolated in the milk from ewes with subclinical mastitis. A total of 448 samples from 2 flocks were analyzed. Colonies were previously submitted to testing for susceptibility to antibiotics in-vitro using the technique of disk diffusion. Using the oxacillin-resistant strains in these tests, the research of mecA gene was conducted with the extraction of chromosomal DNA by way of the technique of phenol-chloroform extraction. Coagulase-negative staphylococci were resistant to oxacillin, and the mecA gene was detected in 4 isolates, which also showed characteristics of multidrug resistance. These findings reinforce the importance of these microorganisms in the etiology of subclinical mastitis in ewes, and open perspectives for future research to investigate the epidemiology of this disease.

Avaliação sorológica de vacinas comerciais polivalentes contra a enterotoxemia em caprinos / Serological evaluation of polyvalent commercial vaccines against enterotoxemia in goats

Foram avaliadas as respostas sorológicas a cinco vacinas comerciais polivalentes que continham o toxóide épsilon do Clostridium perfringens tipo D na sua formulação. Para isso, foram utilizados 84 caprinos jovens, divididos aleatoriamente em seis grupos experimentais com 14 animais em cada grupo. Os caprinos do Grupo Controle não receberam nenhuma dose de vacina e os dos Grupos 1 ao 5 receberam duas doses de vacina com intervalo de quatro semanas entre elas. A primeira dose de vacina foi aplicada aos 45 (± 3) dias de vida dos animais (início do experimento - dia zero) e a segunda aos 75 (± 3 – dia 30). As amostras de sangue para a realização dos testes sorológicos foram colhidas antes (dia zero), e nos dias 30, 60, 90, 120 e 150 após o início do experimento. Utilizou-se a técnica de ELISA Indireto para quantificação dos anticorpos antitoxina épsilon do C. perfringens tipo D. De maneira geral ocorreu um aumento nos valores médios do título de anticorpos séricos dos caprinos no dia 60 em resposta às duas doses de vacina recebidas nos dias zero e 30, sendo que o maior número de animais considerados protegidos também foi detectado neste dia. Apenas cinco caprinos jovens do Grupo 1 e um do Grupo 3 permaneceram com títulos de anticorpos considerados protetores até o dia 150. Diante dos resultados obtidos, concluiu-se que as vacinas avaliadas apresentaram baixa capacidade de estimular uma resposta imune protetora nos caprinos avaliados.

We evaluated the serological response of five commercial polyvalent vaccines containing epsilon toxoid of Clostridium perfringens type D. For this, 84 young goats were randomly divided into six groups, with 14 animals in each group. The goats in the Control Group were not vaccinated, while goats of Groups 1 to 5 received two vaccine shots four weeks apart. The first shot was administered when the goats were 45 (± 3) days old and the second at 75 (± 3). Blood samples for serological tests were collected on days zero, and 30, 60, 90, 120 and 150 after the start of the experiment. The Indirect ELISA technique was used to quantify the epsilon antitoxin antibodies for Clostridium perfringens type D. In general, the mean serum antibody titers of goats on day 60 increased as a response to the two vaccine shots received on days zero and 30. The largest number of animals considered protected was also detected on day 60, in response to the two vaccine shots. Only five animals from Group 1 and one goat from Group 3 displayed antibody titers that are considered protective up to 150 days after vaccination. Based on these results, we concluded that the evaluated vaccines showed poor ability of stimulate a protective immune response in the assessed goats.

SOROLOGICAL EVALUATION OF POLYVALENT COMMERCIAL VACCINES AGAINST ENTEROTOXEMIA IN GOATS. / Avaliação sorológica de vacinas comerciais polivalentes contra a enterotoxemia em caprinos

Foram avaliadas as respostas sorológicas a cinco vacinas comerciais polivalentes que continham o toxóide épsilon do Clostridium perfringens tipo D na sua formulação. Para isso, foram utilizados 84 caprinos jovens, divididos aleatoriamente em seis grupos experimentais com 14 animais em cada grupo. Os caprinos do Grupo Controle não receberam nenhuma dose de vacina e os dos Grupos 1 ao 5 receberam duas doses de vacina com intervalo de quatro semanas entre elas. A primeira dose de vacina foi aplicada aos 45 (± 3) dias de vida dos animais (início do experimento - dia zero) e a segunda aos 75 (± 3 – dia 30). As amostras de sangue para a realização dos testes sorológicos foram colhidas antes (dia zero), e nos dias 30, 60, 90, 120 e 150 após o início do experimento. Utilizou-se a técnica de ELISA Indireto para quantificação dos anticorpos antitoxina épsilon do C. perfringens tipo D. De maneira geral ocorreu um aumento nos valores médios do título de anticorpos séricos dos caprinos no dia 60 em resposta às duas doses de vacina recebidas nos dias zero e 30, sendo que o maior número de animais considerados protegidos tamb&eacu

Avaliação sorológica de vacinas comerciais polivalentes contra a enterotoxemia em caprinos / Serological evaluation of polyvalent commercial vaccines against enterotoxemia in goats

Foram avaliadas as respostas sorológicas a cinco vacinas comerciais polivalentes que continham o toxóide épsilon do Clostridium perfringens tipo D na sua formulação. Para isso, foram utilizados 84 caprinos jovens, divididos aleatoriamente em seis grupos experimentais com 14 animais em cada grupo. Os caprinos do Grupo Controle não receberam nenhuma dose de vacina e os dos Grupos 1 ao 5 receberam duas doses de vacina com intervalo de quatro semanas entre elas. A primeira dose de vacina foi aplicada aos 45 (± 3) dias de vida dos animais (início do experimento - dia zero) e a segunda aos 75 (± 3 dia 30). As amostras de sangue para a realização dos testes sorológicos foram colhidas antes (dia zero), e nos dias 30, 60, 90, 120 e 150 após o início do experimento. Utilizou-se a técnica de ELISA Indireto para quantificação dos anticorpos antitoxina épsilon do C. perfringens tipo D. De maneira geral ocorreu um aumento nos valores médios do título de anticorpos séricos dos caprinos no dia 60 em resposta às duas doses de vacina recebidas nos dias zero e 30, sendo que o maior número de animais considerados protegidos também foi detectado neste dia. Apenas cinco caprinos jovens do Grupo 1 e um do Grupo 3 permaneceram com títulos de anticorpos considerados protetores até o dia 150. Diante dos resultados obtidos, concluiu-se que as vacinas avaliadas apresentaram baixa capacidade de estimular uma resposta imune protetora nos caprinos avaliados.(AU)

We evaluated the serological response of five commercial polyvalent vaccines containing epsilon toxoid of Clostridium perfringens type D. For this, 84 young goats were randomly divided into six groups, with 14 animals in each group. The goats in the Control Group were not vaccinated, while goats of Groups 1 to 5 received two vaccine shots four weeks apart. The first shot was administered when the goats were 45 (± 3) days old and the second at 75 (± 3). Blood samples for serological tests were collected on days zero, and 30, 60, 90, 120 and 150 after the start of the experiment. The Indirect ELISA technique was used to quantify the epsilon antitoxin antibodies for Clostridium perfringens type D. In general, the mean serum antibody titers of goats on day 60 increased as a response to the two vaccine shots received on days zero and 30. The largest number of animals considered protected was also detected on day 60, in response to the two vaccine shots. Only five animals from Group 1 and one goat from Group 3 displayed antibody titers that are considered protective up to 150 days after vaccination. Based on these results, we concluded that the evaluated vaccines showed poor ability of stimulate a protective immune response in the assessed goats.(AU)

Estafilococos resistentes à oxacilina isolados em casos de mastite subclínica em ovinos / Oxacillin-resistant Staphylococci isolated from ovine subclinical mastitis

Bactérias do gênero Staphylococcus estão entre os principais agentes causadores da mastite ovina. Um dos maiores entraves ao tratamento dos animais doentes são cepas resistentes aos antimicrobianos empregados. A pesquisa do gene mecA nos estafilococos é um instrumento auxiliar para a determinação de aspectos epidemiológicos da doença. Este trabalho teve por objetivo investigar a resistência à oxacilina em estafilococos coagulase-negativos isolados no leite de ovelhas com mastite subclínica. Foram analisadas 448 amostras de leite de dois rebanhos. Os micro-organismos isolados foram submetidos previamente a testes de sensibilidade a antibióticos in vitro a partir da técnica de difusão em disco. Naqueles resistentes à oxacilina nestes testes efetuou-se a pesquisa do gene mecA, com a extração do DNA cromossômico por meio da técnica de extração fenol-clorofórmio. Os estafilococos coagulase-negativos apresentaram resistência à oxacilina e a presença do gene mecA foi detectada em quatro isolados, que também apresentaram características de multirresistência. Tais achados reforçam a importância deste grupo de micro-organismos na etiologia da mastite subclínica em ovinos e abre perspectivas para futuras pesquisas para a investigação da epidemiologia da doença. (AU)

OXACILLIN-RESISTANT STAPHYLOCOCCI ISOLATED FROM OVINE SUBCLINICAL MASTITIS. Staphylococcus bacteria are among the main agents of ovine mastitis. One of the greatest barriers to treatment of sick animals are strains resistant to antimicrobial agents. The research of the mecA gene in staphylococci is an auxiliary tool for the determination of epidemiological aspects of disease. The present study aimed to investigate oxacillin resistance in coagulase-negative staphylococci isolated in the milk from ewes with subclinical mastitis. A total of 448 samples from 2 flocks were analyzed. Colonies were previously submitted to testing for susceptibility to antibiotics in-vitro using the technique of disk diffusion. Using the oxacillin-resistant strains in these tests, the research of mecA gene was conducted with the extraction of chromosomal DNA by way of the technique of phenol-chloroform extraction. Coagulase-negative staphylococci were resistant to oxacillin, and the mecA gene was detected in 4 isolates, which also showed characteristics of multidrug resistance. These findings reinforce the importance of these microorganisms in the etiology of subclinical mastitis in ewes, and open perspectives for future research to investigate the epidemiology of this disease. (AU)

Atividade antimicrobiana in vitro de extratos etanólicos de própolis de três estados brasileiros sobre Aeromonas hydrophila isoladas de peixes

The present study was aimed to evaluate the in-vitro susceptibility of Aeromonas spp. to ethanolic extracts of propolis (one green and two brown) from three Brazilian states (Minas Gerais, Ceará and Pernambuco). In order to verify the antimicrobial activity of the propolis in vitro, 15 Aeromonas spp. isolates were tested to determine the minimal bactericidal concentration (MBC) of the extracts. Ethanol at 70% was used as a control. Survival curves for the bacterial growth were determined by incubation of the isolates in ethanolic extracts of propolis at 15% for 24 hours. The averages of the MBC of propolis extracts were 1.68% for the green propolis of Minas Gerais, 2.31% for the brown propolis of Ceará, and 3.75% for the brown propolis of Pernambuco. The survival curve of the isolates showed partial inhibition until three hours of incubation. This result is compatible with the bacteriostatic effect of propolis that may be useful to antibiotic therapy in aquaculture, as an alternative to few available antimicrobial drugs.

O presente estudo teve como objetivo avaliar a sensibilidade in vitro de Aeromonas hydrophila frente a extratos etanólicos de própolis (uma verde e duas marrons) obtidos em três estados brasileiros (Minas Gerais, Ceará e Pernambuco). Para verificar a atividade antimicrobiana in vitro da própolis, 15 isolados de A. hydrophila foram testados para determinar a Concentração Bactericida Mínima (CBM) dos extratos. Curvas de sobrevivência para o crescimento bacteriano foram determinadas pela incubação dos isolados em extratos etanólicos de própolis a 15% por 24 horas. As médias da CBM dos extratos de própolis foram 1,68% para a própolis verde, 2,31% para a própolis marrom do Ceará e 3,75% para a própolis marrom de Pernambuco. A curva de sobrevivência dos isolados demonstrou uma inibição parcial com até três horas de incubação. Este resultado é compatível com o efeito bacteriostático da própolis, o que pode ser de interesse para a terapia em aquicultura, como alternativa às poucas drogas antimicrobianas disponíveis.

Atividade antimicrobiana in vitro de extratos etanólicos de própolis de três estados brasileiros sobre Aeromonas hydrophila isoladas de peixes / Evaluation of ethanolic extracts of propolis from three Brazilian states for in-vitro antimicrobial activity on em>Aeromonas hydrophila isolated from fish

O presente estudo teve como objetivo avaliar a sensibilidade in vitro de Aeromonashydrophila frente a extratos etanólicos de própolis (uma verde e duas marrons) obtidos em três estados brasileiros (Minas Gerais, Ceará e Pernambuco). Para verificar a atividade antimicrobiana invitro da própolis, 15 isolados de A. hydrophila foram testados para determinar a Concentração Bactericida Mínima (CBM) dos extratos. Curvas de sobrevivência para o crescimento bacteriano foram determinadas pela incubação dos isolados em extratos etanólicos de própolis a 15% por 24 horas. As médias da CBM dos extratos de própolis foram 1,68% para a própolis verde, 2,31% para a própolis marrom do Ceará e 3,75% para a própolis marrom de Pernambuco. A curva de sobrevivência dos isolados demonstrou uma inibição parcial com até três horas de incubação. Este resultado é compatível com o efeito bacteriostático da própolis, o que pode ser de interesse para a terapia em aquicultura, como alternativa às poucas drogas antimicrobianas disponíveis.

The present study was aimed to evaluate the in-vitro susceptibility of Aeromonas spp. to ethanolic extracts of propolis (one green and two brown) from three Brazilian states (Minas Gerais, Ceará and Pernambuco). In order to verify the antimicrobial activity of the propolis in vitro, 15 Aeromonas spp. isolates were tested to determine the minimal bactericidal concentration (MBC) of the extracts. Ethanol at 70% was used as a control. Survival curves for the bacterial growth were determined by incubation of the isolates in ethanolic extracts of propolis at 15% for 24 hours. The averages of the MBC of propolis extracts were 1.68% for the green propolis of Minas Gerais, 2.31% for the brown propolis of Ceará, and 3.75% for the brown propolis of Pernambuco. The survival curve of the isolates showed partial inhibition until three hours of incubation. This result is compatible with the bacteriostatic effect of propolis that may be useful to antibiotic therapy in aquaculture, as an alternative to few available antimicrobial drugs.

Atividade antimicrobiana in vitro de extratos etanólicos de própolis de três estados brasileiros sobre Aeromonas hydrophila isoladas de peixes / Evaluation of ethanolic extracts of propolis from three Brazilian states for in-vitro antimicrobial activity on em>Aeromonas hydrophila isolated from fish

O presente estudo teve como objetivo avaliar a sensibilidade in vitro de Aeromonashydrophila frente a extratos etanólicos de própolis (uma verde e duas marrons) obtidos em três estados brasileiros (Minas Gerais, Ceará e Pernambuco). Para verificar a atividade antimicrobiana invitro da própolis, 15 isolados de A. hydrophila foram testados para determinar a Concentração Bactericida Mínima (CBM) dos extratos. Curvas de sobrevivência para o crescimento bacteriano foram determinadas pela incubação dos isolados em extratos etanólicos de própolis a 15% por 24 horas. As médias da CBM dos extratos de própolis foram 1,68% para a própolis verde, 2,31% para a própolis marrom do Ceará e 3,75% para a própolis marrom de Pernambuco. A curva de sobrevivência dos isolados demonstrou uma inibição parcial com até três horas de incubação. Este resultado é compatível com o efeito bacteriostático da própolis, o que pode ser de interesse para a terapia em aquicultura, como alternativa às poucas drogas antimicrobianas disponíveis. (AU)

The present study was aimed to evaluate the in-vitro susceptibility of Aeromonas spp. to ethanolic extracts of propolis (one green and two brown) from three Brazilian states (Minas Gerais, Ceará and Pernambuco). In order to verify the antimicrobial activity of the propolis in vitro, 15 Aeromonas spp. isolates were tested to determine the minimal bactericidal concentration (MBC) of the extracts. Ethanol at 70% was used as a control. Survival curves for the bacterial growth were determined by incubation of the isolates in ethanolic extracts of propolis at 15% for 24 hours. The averages of the MBC of propolis extracts were 1.68% for the green propolis of Minas Gerais, 2.31% for the brown propolis of Ceará, and 3.75% for the brown propolis of Pernambuco. The survival curve of the isolates showed partial inhibition until three hours of incubation. This result is compatible with the bacteriostatic effect of propolis that may be useful to antibiotic therapy in aquaculture, as an alternative to few available antimicrobial drugs. (AU)

SOROLOGICAL EVALUATION OF POLYVALENT COMMERCIAL VACCINES AGAINST ENTEROTOXEMIA IN GOATS. / Avaliação sorológica de vacinas comerciais polivalentes contra a enterotoxemia em caprinos.

Foram avaliadas as respostas sorológicas a cinco vacinas comerciais polivalentes que continham o toxóide épsilon do Clostridium perfringens tipo D na sua formulação. Para isso, foram utilizados 84 caprinos jovens, divididos aleatoriamente em seis grupos experimentais com 14 animais em cada grupo. Os caprinos do Grupo Controle não receberam nenhuma dose de vacina e os dos Grupos 1 ao 5 receberam duas doses de vacina com intervalo de quatro semanas entre elas. A primeira dose de vacina foi aplicada aos 45 (± 3) dias de vida dos animais (início do experimento - dia zero) e a segunda aos 75 (± 3 – dia 30). As amostras de sangue para a realização dos testes sorológicos foram colhidas antes (dia zero), e nos dias 30, 60, 90, 120 e 150 após o início do experimento. Utilizou-se a técnica de ELISA Indireto para quantificação dos anticorpos antitoxina épsilon do C. perfringens tipo D. De maneira geral ocorreu um aumento nos valores médios do título de anticorpos séricos dos caprinos no dia 60 em resposta às duas doses de vacina recebidas nos dias zero e 30, sendo que o maior número de animais considerados protegidos tamb&eacu