Comparative evaluation of plant extract effects on peritoneal, medullary and J774 cells G8 macrophages / Avaliação comparativa do efeito de extratos de plantas em macrófagos peritoneais, medulares e da linhagem J774. G8

The use of medicinal plants as raw material for extracts production and pure substances isolation and subsequence development of new drugs represents a constantly growing area. However, some stages are indispensable before pharmacologically evaluating natural products such as medicines. Toxicity tests in mammalian cells are essential to initiate new drugs development or verify the substance's biocompatibility. Thus, we verified the toxicity of crude extracts and fractions with different polarities obtained from the leaves and stems of eight plant species. The toxic effect was evaluated on macrophages obtained from the bone marrow and peritoneal cavity of a Swiss webster mouse and J774 macrophages. G8 cell lineage. These macrophages were cultured in a 96-well plate, and the compounds were added at a concentration of 100 µg/mL for 24 hours. After this time, the supernatant was removed. The toxicity was evaluated for lactate dehydrogenase (LDH) release assay and the resazurin assay, which uses an indicator dye to measure oxidation-reduction reactions. The results showed a difference in the percentage of toxicity when comparing the same extract in different types of macrophages. This outcome indicates that these cells from different origins may exhibit different responses when exposed to the same natural compounds.

A utilização de plantas medicinais como matéria-prima para a produção de extratos e isolamento de substâncias puras para o desenvolvimento de novos fármacos representa uma área em constante crescimento. No entanto, existem processos a serem realizados antes de avaliar farmacologicamente produtos naturais como medicamentos. Os testes de toxicidade em células de mamíferos são fundamentais para iniciar o desenvolvimento de novas drogas ou verificar a biocompatibilidade de substâncias. Assim, verificamos a toxicidade de extratos brutos e frações com diferentes polaridades obtidos de folhas e caule de oito espécies de planta. Para comparar o efeito tóxico, os testes foram realizados em macrófagos obtidos da medula óssea e cavidade do peritônio de camundongo Swiss webster, bem como no macrófago da linhagem celular J774.G8. Esses macrófagos foram cultivados em placa de 96 poços e os compostos adicionados na concentração de 100 µg/mL por 24 horas. Após esse período o sobrenadante foi removido. A toxicidade foi avaliada pelos ensaios de detecção da enzima lactato-desidrogenase (LDH) e pelo ensaio de resazurina, que usa um corante indicador para medir as reações de oxidação-redução. Os resultados mostraram uma diferença na porcentagem de toxicidade quando comparamos o mesmo extrato em diferentes tipos de macrófagos. Este resultado indica que essas células de várias origens podem exibir respostas distintas quando expostas aos mesmos compostos naturais.

Molecular docking studies and evaluation of the antiretroviral activity and cytotoxicity of the species Lafoensia pacari Saint-Hilaire / Estudos de docking molecular e avaliação da atividade antirretroviral e citotoxicidade da espécie Lafoensia pacari Saint-Hilaire

Interest in antiviral plant species has grown exponentially and some have been reported to have anti-HIV properties. This research aims to perform the bio-guided phytochemical fractionation by antiretroviral activity of Lafoensia pacari stem barks. This in vitro experimental study involved the preparation of plant material, obtention of ethanolic extract, fractionation, purification, identification and quantification of fractions, acid-base extraction, nuclear magnetic resonance, HIV-1 RT inhibition test and molecular docking studies. From the bio-guided fractionation by the antiretroviral activity there was a higher activity in the acetanolic subfractions, highlighting the acetate subfraction - neutrals with 60.98% of RT inhibition and ellagic acid with 88.61% of RT inhibition and absence of cytotoxicity. The macrophage lineage cytotoxicity assay showed that the chloroform fraction was more toxic than the acetate fraction. The analysis of the J-resolved spectrum in the aromatic region showed a singlet at 7.48 and 6.93 ppm which was identified as ellagic acid and gallic acid, respectively. The 5TIQ enzyme obtained better affinity parameter with the ellagic acid ligand, which was confirmed by the HSQC-1H-13C spectra. Gallic acid was also favorable to form interaction with the 5TIQ enzyme, being confirmed through the HSQC-1H-13C spectrum. From the PreADMET evaluation it was found that ellagic acid is a promising molecule for its RT inhibition activity and pharmacokinetic and toxicity parameters.

O interesse por espécies vegetais com ação antiviral tem crescido exponencialmente e algumas tem sido relatadas como possuídoras de propriedades anti-HIV. Essa pesquisa tem como objetivo realizar o fracionamento fitoquímico biodirecionado pela atividade antirretroviral das cascas do caule da espécie Lafoensia pacari. Trata-se de um estudo experimental in vitro e a metodologia envolve preparo do material vegetal, obtenção do extrato etanólico, fracionamento, purificação, identificação e quantificação das frações, extração ácido-base, ressonância magnética nuclear, teste de inibição da TR do HIV-1 e estudos de docking molecular. A partir do fracionamento biodirecionado pela atividade antirretroviral verificou-se uma maior atividade nas subfrações acetanólica. Com destaque para a subfração acetanólica neutros com 60,98% de inibição de TR e o ácido elágico com 88,61% de inibição de TR e ausência de citotoxicidade. Verificou-se com o teste de citotoxicidade em linhagem de macrófagos que a fração clorofórmica foi mais tóxica que a fração acetanólica. A análise do espectro J-resolvido na região aromática apresentou um simpleto em 7.48 e 6.93 ppm que foram identificados como ácido elágico e ácido gálico respectivamente. A enzima 5TIQ obteve melhor parâmetro de afinidade com o ligante ácido elágico que foi confirmado pelos espectros HSQC-1H-13C. O ácido gálico mostrou-se também favorável a formar interação com a enzima 5TIQ, sendo confirmado através do espectro HSQC-1H-13C. Através da avaliação do PreADMET verificou-se que o ácido elágico é uma molécula promissora pela sua atividade de inibição da TR e parâmetros farmacocinéticos e de toxicidade.

Evaluation of the immunomodulatory activity of thalidomide on tumor-associated macrophages in the 4T1 murine metastatic breast cancer model / [Avaliação do efeito imunomodulador da talidomida em macrófagos associados a tumores no modelo murino de câncer de mama metastático 4T1]

The present work evaluated the immunomodulatory effect of thalidomide (Thal) at different doses on tumor-associated macrophages (TAMs) using a mouse model of human breast cancer. Mice were inoculated with 4T1 cells in the left flank and treated with Thal once a day at concentrations of 50, 100, and 150mg/kg body weight from the 5th day until the 28th day of tumor inoculation. The tumors were sized, proliferation index and TAMs count were evaluated in primary tumors and metastatic lungs. In addition, the metastasis rate was evaluated in the lungs. Thal at 150mg/kg significantly decreased tumor growth, proliferation index, and TAMs infiltration in primary tumors. Conversely, a higher number of TAMs and lower proliferation index were observed in metastatic lungs in mice treated with 150mg/kg of Thal. Furthermore, Thal at 150mg/kg significantly decreased the metastatic nodules in the lungs. Our findings demonstrated that Thal treatment considerably decreased the primary tumor and lung metastasis in mice associated with different TAM infiltration effects in these sites.(AU)

No presente trabalho, foi avaliado o efeito imunomodulador de diferentes doses de talidomida em macrófagos associados ao tumor (TAMs), em um modelo murino de câncer de mama. Camundongos foram inoculados com células 4T1, na região do flanco esquerdo, e tratados com talidomida, uma vez ao dia, nas doses de 50, 100 e 150mg/k, por massa corporal, do quinto dia ao 28º dia de inoculação tumoral. Os tumores foram medidos, o índice de proliferação celular e a contagem de TAMs foram avaliados nos tumores primários e nos pulmões com metástases. Além disso, a taxa de metástases pulmonares também foi avaliada. A talidomida na dose de 150mg/kg diminuiu significativamente o crescimento tumoral, o índice de proliferação celular e a infiltração de TAMs nos tumores primários. Por outro lado, maior número de TAMs e menor índice de proliferação celular foram observados nos pulmões metastáticos, em camundongos tratados com 150mg/kg de talidomida. Ademais, a talidomida na dose de 150mg/kg diminuiu significativamente os nódulos metastáticos nos pulmões. Os resultados demonstraram que o tratamento com talidomida diminuiu o crescimento tumoral e as metástases pulmonares em camundongos, associado com diferentes efeitos na infiltração de TAMs nesses locais.(AU)

Marbofloxacin induces leishmanicidal activity and less inflammatory response in Leishmania chagasi infected macrophages / Marbofloxacina induz atividade leishmanicida e menos resposta inflamatória em macrófagos infectados por Leishmania chagasi / Marbofloxacino induce actividad leishmanicida y menor respuesta inflamatoria en macrófagos infectados con Leishmania chagasi

Marbofloxacin has promising leishmanicidal activity due to the direct action on the Leishmania chagasi amastigotes. It was developed only for veterinary medicine uses, and it could be used as an drug for the treatment of Canine Visceral Leishmaniasis (CVL).In the present study, we evaluated the leishmanicidal effect and macrophage modulation of marbofloxacin in macrophages infected with amastigotes of L. chagasi. Macrophages were collected from peritoneum of BALB/c mice and infected with promastigotes of L. chagasi. After internalization and transformation into amastigotes forms, cells were treated with marbofloxacinin concentration of100, 500 and 750 μg/mL for 18 hours. The leishmanicidal effect was evaluated by morphological spects of amastigotes inside of macrophages by phagocytosis assay and detection of death amastigotes and macrophages by TUNEL assay. Macrophage modulation was evaluated by release of cytotoxic metabolites and cytokine production. The results showed that L. chagasi-infected macrophages treated with the highest concentration of the drug showed lower amount of amastigotes into the macrophages (p<0,0632) than untreated infected cells. There was pronounced presence of cellular vacuoles in the treated infected-cells, and more apoptotic amastigotes in alive macrophages. It was observed decreased levels of H2O2, IL-1β, IL-6, and TNF-αdose-dependent of marbofloxacin in infected macrophages. The results indicate the leishmanicidal effect of marbofloxacin in infected macrophages and immunomodulation actions in these cells.

A marbofloxacina tem promissora atividade leishmanicida devido à ação direta sobre as amastigotas de Leishmania chagasi. Foi desenvolvido apenas para uso em medicina veterinária, podendo ser utilizado no tratamento da Leishmaniose Visceral Canina (LVC). No presente estudo, avaliamos o efeito leishmanicida e a modulação macrofágica da marbofloxacina em macrófagos infectados com amastigotas de L. chagasi. Os macrófagos foram coletados do peritônio de camundongos BALB/c infectados com promastigotas de L. chagasi. Após internalização e transformação em formas amastigotas, as células foram tratadas com marbofloxacina nas concentrações 100, 500 e 750μg / mL por 18 horas. O efeito leishmanicida foi avaliado pelos aspectos morfológicos de amastigotas dentro de macrófagos, por ensaio de fagocitose e detecção de amastigotas e macrófagos mortos por ensaio TUNEL. A modulação dos macrófagos foi avaliada pela liberação de metabólitos citotóxicos e produção de citocinas. Os resultados mostraram que macrófagos infectados com L. chagasi tratados com a maior concentração da droga apresentaram menor quantidade de amastigotas nos macrófagos (p <0,0632) do que células infectadas não tratadas. Houve a presença pronunciada de vacúolos celulares nas células infectadas tratadas, e mais amastigotas apoptóticas em macrófagos vivos. Observou-se diminuição dos níveis de H2O2, IL-1β, IL-6 e TNF-αdependente da dose de marbofloxacina em macrófagos infectados. Os resultados indicam o efeito leishmanicida da marbofloxacina em macrófagos infectados e ações imunomoduladoras nessas células.

El marbofloxacino tiene una actividad leishmanicida prometedora debido a la acción directa sobre amastigotes de Leishmania chagasi. Fue desarrollado solo para uso en medicina veterinaria y puede usarse en el tratamiento de la leishmaniasis visceral canina (LVC). En el presente estudio, evaluamos el efecto leishmanicida y la modulación de macrófagosde marbofloxacino en macrófagos infectados con amastigotes de L. chagasi. Se recogieron macrófagos del peritoneo de ratones BALB/c infectados con promastigotes de L. chagasi. Despuésde la internalizacion y transformacion en formas amastigotes, las células se trataron con marbofloxacina a concentraciones de 100, 500 y 750 μg / ml durante 18 horas. El efecto leishmanicida se evaluó mediante los aspectos morfológicosde amastigotes dentro de macrófagos, mediante ensayo de fagocitosis y detección de amastigotes y macrófagos muertos mediante ensayo TUNEL. La modulación de los macrófagos se evaluó mediante la liberación de metabolitos citotóxicos y la producción de citocinas. Los resultados mostraron que los macrófagos infectados con L. chagasi tratados con la concentración más altas del fármaco tenían una menor cantidad de amastigotes en los macrófagos (p <0,0632) que las células infectadas no tratadas. Hubo una presencia pronunciada de vacuolas celulares en las células infectadas tratadas y más amastigotes apoptóticas en macrófagos vivos. Se observó una disminuicón en los niveles de H2O2, IL-1β, IL-6 y TNF-α dependiendo de la dosis de marbofloxacino en macrófagos infectados. Los resultados indican el efecto leishmanicida de el marbofloxacino en macrófagos infectados y acciones inmunomoduladoras en estas células.

Marbofloxacin induces leishmanicidal activity and less inflammatory response in Leishmania chagasi infected macrophages / Marbofloxacina induz atividade leishmanicida e menos resposta inflamatória em macrófagos infectados por Leishmania chagasi / Marbofloxacino induce actividad leishmanicida y menor respuesta inflamatoria en macrófagos infectados con Leishmania chagasi

Marbofloxacin has promising leishmanicidal activity due to the direct action on the Leishmania chagasi amastigotes. It was developed only for veterinary medicine uses, and it could be used as an drug for the treatment of Canine Visceral Leishmaniasis (CVL).In the present study, we evaluated the leishmanicidal effect and macrophage modulation of marbofloxacin in macrophages infected with amastigotes of L. chagasi. Macrophages were collected from peritoneum of BALB/c mice and infected with promastigotes of L. chagasi. After internalization and transformation into amastigotes forms, cells were treated with marbofloxacinin concentration of100, 500 and 750 μg/mL for 18 hours. The leishmanicidal effect was evaluated by morphological spects of amastigotes inside of macrophages by phagocytosis assay and detection of death amastigotes and macrophages by TUNEL assay. Macrophage modulation was evaluated by release of cytotoxic metabolites and cytokine production. The results showed that L. chagasi-infected macrophages treated with the highest concentration of the drug showed lower amount of amastigotes into the macrophages (p<0,0632) than untreated infected cells. There was pronounced presence of cellular vacuoles in the treated infected-cells, and more apoptotic amastigotes in alive macrophages. It was observed decreased levels of H2O2, IL-1β, IL-6, and TNF-αdose-dependent of marbofloxacin in infected macrophages. The results indicate the leishmanicidal effect of marbofloxacin in infected macrophages and immunomodulation actions in these cells.(AU)

A marbofloxacina tem promissora atividade leishmanicida devido à ação direta sobre as amastigotas de Leishmania chagasi. Foi desenvolvido apenas para uso em medicina veterinária, podendo ser utilizado no tratamento da Leishmaniose Visceral Canina (LVC). No presente estudo, avaliamos o efeito leishmanicida e a modulação macrofágica da marbofloxacina em macrófagos infectados com amastigotas de L. chagasi. Os macrófagos foram coletados do peritônio de camundongos BALB/c infectados com promastigotas de L. chagasi. Após internalização e transformação em formas amastigotas, as células foram tratadas com marbofloxacina nas concentrações 100, 500 e 750μg / mL por 18 horas. O efeito leishmanicida foi avaliado pelos aspectos morfológicos de amastigotas dentro de macrófagos, por ensaio de fagocitose e detecção de amastigotas e macrófagos mortos por ensaio TUNEL. A modulação dos macrófagos foi avaliada pela liberação de metabólitos citotóxicos e produção de citocinas. Os resultados mostraram que macrófagos infectados com L. chagasi tratados com a maior concentração da droga apresentaram menor quantidade de amastigotas nos macrófagos (p <0,0632) do que células infectadas não tratadas. Houve a presença pronunciada de vacúolos celulares nas células infectadas tratadas, e mais amastigotas apoptóticas em macrófagos vivos. Observou-se diminuição dos níveis de H2O2, IL-1β, IL-6 e TNF-αdependente da dose de marbofloxacina em macrófagos infectados. Os resultados indicam o efeito leishmanicida da marbofloxacina em macrófagos infectados e ações imunomoduladoras nessas células.(AU)

El marbofloxacino tiene una actividad leishmanicida prometedora debido a la acción directa sobre amastigotes de Leishmania chagasi. Fue desarrollado solo para uso en medicina veterinaria y puede usarse en el tratamiento de la leishmaniasis visceral canina (LVC). En el presente estudio, evaluamos el efecto leishmanicida y la modulación de macrófagosde marbofloxacino en macrófagos infectados con amastigotes de L. chagasi. Se recogieron macrófagos del peritoneo de ratones BALB/c infectados con promastigotes de L. chagasi. Despuésde la internalizacion y transformacion en formas amastigotes, las células se trataron con marbofloxacina a concentraciones de 100, 500 y 750 μg / ml durante 18 horas. El efecto leishmanicida se evaluó mediante los aspectos morfológicosde amastigotes dentro de macrófagos, mediante ensayo de fagocitosis y detección de amastigotes y macrófagos muertos mediante ensayo TUNEL. La modulación de los macrófagos se evaluó mediante la liberación de metabolitos citotóxicos y la producción de citocinas. Los resultados mostraron que los macrófagos infectados con L. chagasi tratados con la concentración más altas del fármaco tenían una menor cantidad de amastigotes en los macrófagos (p <0,0632) que las células infectadas no tratadas. Hubo una presencia pronunciada de vacuolas celulares en las células infectadas tratadas y más amastigotes apoptóticas en macrófagos vivos. Se observó una disminuicón en los niveles de H2O2, IL-1β, IL-6 y TNF-α dependiendo de la dosis de marbofloxacino en macrófagos infectados. Los resultados indican el efecto leishmanicida de el marbofloxacino en macrófagos infectados y acciones inmunomoduladoras en estas células.(AU)

Salmonella typhimurium vaccine to control a brazilian Salmonella heidelberg strain in broiler chickens / Vacina de Salmonella typhimurium para controlar cepa brasileira de Salmonella heidelberg em frangos de corte

Foodborne Salmonella infections in humans, which results from the consumption of contaminated poultry meat and eggs, are a major public health concern. Vaccination of animals against Salmonella is one strategy to prevent these infections and reduce the risks to public health. Live attenuated Salmonella enterica vaccines can confer protection against salmonellosis by inducing both cell-mediated and mucosal immune responses. This study assessed a live, attenuated Salmonella enterica Typhimurium (ST) vaccine in broiler chickens against a heterologous challenge with Salmonella Heidelberg (SH) by evaluating bacterial quantification, immune cells infiltration, and cytokine gene expression in the cecum. The treatments were: T1, non-vaccinated, non-challenged; T2, non-vaccinated, SH-challenged; T3, ST-vaccinated and SH-challenged. At 28 days of age, the ST-vaccinated group had significantly recovered reduction of SH in the crop (P<0,01) and cecum (P = 0,021) compared to the non-vaccinated SH-challenged group, with no significant changes (P˃0,05) in macrophages, T CD4+, or T CD8+ cells dynamics during the same period. Aerosol vaccination on the first day promoted greater interleukin-12 expression in the liver (P<0,05) and interleukin-10 expression and T CD8+ cells in the ileum 16 hours after housing. After prime-boosted oral immunization on the 13th day, the vaccinated group had greater expression of macrophages and T CD4+ cells in the liver (P<0,05) than the control group. Two doses of a live ST-attenuated vaccine promoted a partial cross-protective effect against SH strain UFPR1 challenge in broilers.

Infecções por Salmonella transmitidas por alimentos como consumo de carne de frango e ovos contaminados em seres humanos constituem um importante problema de saúde pública. A vacinação de animais contra Salmonella é uma estratégia para prevenir essas infecções e reduzir o risco para a saúde pública. As vacinas vivas atenuadas de Salmonella enterica podem conferir proteção contra a salmonelose, induzindo respostas imunológicas mediadas por células e em mucosas. Este estudo avaliou uma vacina viva e atenuada de Salmonella enterica Typhimurium (ST) em frangos de corte contra um desafio heterólogo com Salmonella Heidelberg (SH), avaliando a quantificação de Salmonella, infiltração de células imunes e a expressão de genes de citocinas no ceco. Os tratamentos foram: T1, não vacinado, não desafiado; T2, não vacinado, desafiado com SH; T3, ST-vacinado, desafiado com SH. Aos 28 dias de idade, o grupo vacinado com ST apresentou significativa redução de SH no papo (P<0,01) e no ceco (P = 0,021) comparado ao grupo T2-não vacinado SH-desafiado, sem alterações significativas na dinâmica celular de macrófagos, T CD4+ ou T CD8+ (P˃0,05) durante o mesmo período. A vacinação por aerossol no primeiro dia promoveu maior expressão de IL-12 no fígado (P<0,05), maior expressão de IL-10 e células T CD8+ no íleo, 16 horas após o alojamento. Após o reforço de imunização oral ao 13º dia, o grupo vacinado apresentou maior expressão de macrófagos e células T CD4+ no fígado (P<0,05) do que o grupo controle. Duas doses de uma vacina viva atenuada de ST promoveram um efeito de proteção cruzada parcial contra o desafio da cepa de Salmonella Heidelberg cepa UFPR1 em frangos de corte.

Salmonella typhimurium vaccine to control a brazilian Salmonella heidelberg strain in broiler chickens / Vacina de Salmonella typhimurium para controlar cepa brasileira de Salmonella heidelberg em frangos de corte

Foodborne Salmonella infections in humans, which results from the consumption of contaminated poultry meat and eggs, are a major public health concern. Vaccination of animals against Salmonella is one strategy to prevent these infections and reduce the risks to public health. Live attenuated Salmonella enterica vaccines can confer protection against salmonellosis by inducing both cell-mediated and mucosal immune responses. This study assessed a live, attenuated Salmonella enterica Typhimurium (ST) vaccine in broiler chickens against a heterologous challenge with Salmonella Heidelberg (SH) by evaluating bacterial quantification, immune cells infiltration, and cytokine gene expression in the cecum. The treatments were: T1, non-vaccinated, non-challenged; T2, non-vaccinated, SH-challenged; T3, ST-vaccinated and SH-challenged. At 28 days of age, the ST-vaccinated group had significantly recovered reduction of SH in the crop (P<0,01) and cecum (P = 0,021) compared to the non-vaccinated SH-challenged group, with no significant changes (P˃0,05) in macrophages, T CD4+, or T CD8+ cells dynamics during the same period. Aerosol vaccination on the first day promoted greater interleukin-12 expression in the liver (P<0,05) and interleukin-10 expression and T CD8+ cells in the ileum 16 hours after housing. After prime-boosted oral immunization on the 13th day, the vaccinated group had greater expression of macrophages and T CD4+ cells in the liver (P<0,05) than the control group. Two doses of a live ST-attenuated vaccine promoted a partial cross-protective effect against SH strain UFPR1 challenge in broilers.(AU)

Infecções por Salmonella transmitidas por alimentos como consumo de carne de frango e ovos contaminados em seres humanos constituem um importante problema de saúde pública. A vacinação de animais contra Salmonella é uma estratégia para prevenir essas infecções e reduzir o risco para a saúde pública. As vacinas vivas atenuadas de Salmonella enterica podem conferir proteção contra a salmonelose, induzindo respostas imunológicas mediadas por células e em mucosas. Este estudo avaliou uma vacina viva e atenuada de Salmonella enterica Typhimurium (ST) em frangos de corte contra um desafio heterólogo com Salmonella Heidelberg (SH), avaliando a quantificação de Salmonella, infiltração de células imunes e a expressão de genes de citocinas no ceco. Os tratamentos foram: T1, não vacinado, não desafiado; T2, não vacinado, desafiado com SH; T3, ST-vacinado, desafiado com SH. Aos 28 dias de idade, o grupo vacinado com ST apresentou significativa redução de SH no papo (P<0,01) e no ceco (P = 0,021) comparado ao grupo T2-não vacinado SH-desafiado, sem alterações significativas na dinâmica celular de macrófagos, T CD4+ ou T CD8+ (P˃0,05) durante o mesmo período. A vacinação por aerossol no primeiro dia promoveu maior expressão de IL-12 no fígado (P<0,05), maior expressão de IL-10 e células T CD8+ no íleo, 16 horas após o alojamento. Após o reforço de imunização oral ao 13º dia, o grupo vacinado apresentou maior expressão de macrófagos e células T CD4+ no fígado (P<0,05) do que o grupo controle. Duas doses de uma vacina viva atenuada de ST promoveram um efeito de proteção cruzada parcial contra o desafio da cepa de Salmonella Heidelberg cepa UFPR1 em frangos de corte.(AU)

Tumor-associated macrophage is correlated with survival and SOCS protein expression in canine mammary carcinoma / Correlação do infiltrado macrofágico com a sobrevida e a expressão da proteína SOCS no carcinoma mamário canino

The inflammatory infiltrate in the tumor microenvironment, particularly in mammary tumors, has aroused great interest in oncology, to play different roles in the progression or tumor regression dependent on the types and cell subsets involved. The present study aimed to evaluate (1) the occurrence and intensity of macrophage infiltration in the mammary carcinoma microenvironment, (2) the expression of SOCS1 and SOCS3 proteins in tumor associated macrophages, (3) any association between these parameters and tumor development, as well as survival rates in female dogs. Twenty-two female dogs diagnosed as carcinoma arising in a mixed tumor (CMT) by histopathology were divided into two groups following mastectomy: dogs without metastasis (CMT(-)=11) and those with metastasis (CMT(+)=11). The following parameters were analyzed: tumor size, lymph node metastasis, clinical stage, histological grade, distribution and intensity of inflammatory infiltrate, tumor macrophage quantification by immunohistochemical analysis of SOCS1 and SOCS3 expression, and immunophenotyping of peripheral blood leukocytes by flow cytometry. Dogs with the higher proportions of macrophages in the inflammatory infiltrate (≥400/tumor) also had higher survival rates in comparison with dogs with less macrophages. Immunostaining revealed higher proportions of SOCS3-positive macrophages in dogs without lymph node metastasis, while SOCS1-positive macrophages were predominant in dogs with metastasis (p<0.05). Multivariate analysis found associations between survival rate and clinical staging (p=0.025), histological grade (p=0.007), and the expression of MHC-CI in circulating monocytes (p=0.018)...(AU)

O infiltrado inflamatório no microambiente tumoral, particularmente nos tumores mamários, tem despertado grande interesse na oncologia, por desempenhar diferentes funções na progressão ou regressão tumoral, dependendo dos tipos e subtipos celulares envolvidos. O presente estudo teve como objetivo avaliar: (1) a ocorrência e a intensidade do infiltrado macrofágico no microambiente do carcinoma mamário; (2) a expressão das proteínas SOCS1 e SOCS3 nos macrófagos associados ao tumor; (3) qualquer associação relacionada ao prognóstico entre estes parâmetros e o desenvolvimento tumoral, assim como a taxa de sobrevida. Vinte e duas cadelas diagnosticadas com carcinoma em tumor misto (CTM) por exame histopatológico foram divididas em dois grupos após a mastectomia: cadelas sem metástase (CTM(-)=11) e cadelas com metástase (CTM(+)=11). Foram analisados os seguintes parâmetros: tamanho do tumor, metástase para linfonodo, estadiamento clínico, grau histológico, distribuição e intensidade do infiltrado inflamatório, quantificação dos macrófagos tumorais por análise imuno-histoquímica da expressão de SOCS1 e SOCS3, e imunofenotipagem dos leucócitos (monócitos e linfócitos) do sangue periférico por citometria de fluxo. Cadelas que apresentavam maiores proporções de macrófagos no infiltrado inflamatório (≥400/tumor) também tiveram maior taxa de sobrevida em comparação àquelas com menos macrófagos. A imunomarcação revelou maiores proporções de macrófagos SOCS3-positivos em cães sem metástase para linfonodo, enquanto que macrófagos SOCS1-positivos foram predominantes naqueles com metástase (p<0,05). A análise multivariada identificou associações entre a taxa de sobrevida e o estadiamento clínico (p=0,025), grau histológico (p=0,007) e a expressão de MHC-CI em monócitos circulantes (p=0,018)...(AU)

Tumor-associated macrophage is correlated with survival and SOCS protein expression in canine mammary carcinoma / Correlação do infiltrado macrofágico com a sobrevida e a expressão da proteína SOCS no carcinoma mamário canino

The inflammatory infiltrate in the tumor microenvironment, particularly in mammary tumors, has aroused great interest in oncology, to play different roles in the progression or tumor regression dependent on the types and cell subsets involved. The present study aimed to evaluate (1) the occurrence and intensity of macrophage infiltration in the mammary carcinoma microenvironment, (2) the expression of SOCS1 and SOCS3 proteins in tumor associated macrophages, (3) any association between these parameters and tumor development, as well as survival rates in female dogs. Twenty-two female dogs diagnosed as carcinoma arising in a mixed tumor (CMT) by histopathology were divided into two groups following mastectomy: dogs without metastasis (CMT(-)=11) and those with metastasis (CMT(+)=11). The following parameters were analyzed: tumor size, lymph node metastasis, clinical stage, histological grade, distribution and intensity of inflammatory infiltrate, tumor macrophage quantification by immunohistochemical analysis of SOCS1 and SOCS3 expression, and immunophenotyping of peripheral blood leukocytes by flow cytometry. Dogs with the higher proportions of macrophages in the inflammatory infiltrate (≥400/tumor) also had higher survival rates in comparison with dogs with less macrophages. Immunostaining revealed higher proportions of SOCS3-positive macrophages in dogs without lymph node metastasis, while SOCS1-positive macrophages were predominant in dogs with metastasis (p<0.05). Multivariate analysis found associations between survival rate and clinical staging (p=0.025), histological grade (p=0.007), and the expression of MHC-CI in circulating monocytes (p=0.018). Higher SOCS3 expression in activated macrophages within the inflammatory infiltrate were considered indicative of an antitumor immune response, improved clinicopathological parameters and longer survival, whereas SOCS1-related activation was associated with tumor progression, metastasis development and reduced survival in female dogs with mammary carcinomas.(AU)

O infiltrado inflamatório no microambiente tumoral, particularmente nos tumores mamários, tem despertado grande interesse na oncologia, por desempenhar diferentes funções na progressão ou regressão tumoral, dependendo dos tipos e subtipos celulares envolvidos. O presente estudo teve como objetivo avaliar: (1) a ocorrência e a intensidade do infiltrado macrofágico no microambiente do carcinoma mamário; (2) a expressão das proteínas SOCS1 e SOCS3 nos macrófagos associados ao tumor; (3) qualquer associação relacionada ao prognóstico entre estes parâmetros e o desenvolvimento tumoral, assim como a taxa de sobrevida. Vinte e duas cadelas diagnosticadas com carcinoma em tumor misto (CTM) por exame histopatológico foram divididas em dois grupos após a mastectomia: cadelas sem metástase (CTM(-)=11) e cadelas com metástase (CTM(+)=11). Foram analisados os seguintes parâmetros: tamanho do tumor, metástase para linfonodo, estadiamento clínico, grau histológico, distribuição e intensidade do infiltrado inflamatório, quantificação dos macrófagos tumorais por análise imuno-histoquímica da expressão de SOCS1 e SOCS3, e imunofenotipagem dos leucócitos (monócitos e linfócitos) do sangue periférico por citometria de fluxo. Cadelas que apresentavam maiores proporções de macrófagos no infiltrado inflamatório (≥400/tumor) também tiveram maior taxa de sobrevida em comparação àquelas com menos macrófagos. A imunomarcação revelou maiores proporções de macrófagos SOCS3-positivos em cães sem metástase para linfonodo, enquanto que macrófagos SOCS1-positivos foram predominantes naqueles com metástase (p<0,05). A análise multivariada identificou associações entre a taxa de sobrevida e o estadiamento clínico (p=0,025), grau histológico (p=0,007) e a expressão de MHC-CI em monócitos circulantes (p=0,018). A maior expressão de SOCS3 nos macrófagos ativados foi considerada indicativa de uma resposta imune antitumoral, melhores parâmetros clínicos e maior taxa de sobrevida, ao passo que a ativação relacionada com SOCS1 foi associada à progressão tumoral, desenvolvimento de metástase e redução na taxa de sobrevida em cadelas com carcinoma mamário.(AU)

Characterization and frequency of histological changes in bovine livers from slaughterhouses in Brazil kept on Brachiaria spp / Caracterização e frequência das alterações histológicas nos fígados de bovinos mantidos em pastagens de Brachiaria spp. provenientes de abatedouros no Brasil

Background: Brachiaria spp. is the main pasture for ruminant productions in Brazil, but the limiting factor for its use is the toxicity due to the presence of steroidal saponins. Chronic ingestion of Brachiaria spp. by cattle may cause liver changes such as fibrosis, bile duct proliferation and clusters of foamy macrophages in the hepatic parenchyma. The main objective of the present study was to evaluate the most frequent histological changes and their frequencies in livers collected in abattoirs in Brazil from beef cattle raised exclusively on Brachiaria spp. and compare them with those observed in animals kept in Andropogon spp. grass and native pastures in Rio Grande do Sul.Materials, Methods & Results: Liver samples without macroscopic changes were collected in abattoirs from 561 healthy Nelore and Nelore crossbred cattle raised in Brachiaria spp. pastures from Mato Grosso (MT), Mato Grosso do Sul (MS), Minas Gerais (MG) and Pará (PA) States. Liver samples from 84 Angus cattle (Bos taurus) kept on native pastures in Rio Grande do Sul (RS) and from 60 Nelore and Nelore crossbreed cattle raised in Andropogon spp. pastures in Tocantins State (TO) were collected as control. Semi-quantitative analysis of the histopathological changes were proceeded: (-) = no change; (+) = slight or discreet change; (++) = moderate change and (+++) = marked change. The main histopathological [...]

Characterization and frequency of histological changes in bovine livers from slaughterhouses in Brazil kept on Brachiaria spp / Caracterização e frequência das alterações histológicas nos fígados de bovinos mantidos em pastagens de Brachiaria spp. provenientes de abatedouros no Brasil

Background: Brachiaria spp. is the main pasture for ruminant productions in Brazil, but the limiting factor for its use is the toxicity due to the presence of steroidal saponins. Chronic ingestion of Brachiaria spp. by cattle may cause liver changes such as fibrosis, bile duct proliferation and clusters of foamy macrophages in the hepatic parenchyma. The main objective of the present study was to evaluate the most frequent histological changes and their frequencies in livers collected in abattoirs in Brazil from beef cattle raised exclusively on Brachiaria spp. and compare them with those observed in animals kept in Andropogon spp. grass and native pastures in Rio Grande do Sul.Materials, Methods & Results: Liver samples without macroscopic changes were collected in abattoirs from 561 healthy Nelore and Nelore crossbred cattle raised in Brachiaria spp. pastures from Mato Grosso (MT), Mato Grosso do Sul (MS), Minas Gerais (MG) and Pará (PA) States. Liver samples from 84 Angus cattle (Bos taurus) kept on native pastures in Rio Grande do Sul (RS) and from 60 Nelore and Nelore crossbreed cattle raised in Andropogon spp. pastures in Tocantins State (TO) were collected as control. Semi-quantitative analysis of the histopathological changes were proceeded: (-) = no change; (+) = slight or discreet change; (++) = moderate change and (+++) = marked change. The main histopathological [...](AU)

T lymphocytes and macrophages in the intestinal tissues of dogs infected with Leishmania infantum / Linfócitos T e macrófagos nos tecidos intestinais de cães infectados com Leishmania infantum

This study was about a semi-quantitative analysis of T lymphocytes (CD4+ and CD8+, FoxP3+ regulatory T cells), and macrophages in the gut wall of dogs naturally infected with Leishmania infantum. Thirteen dogs were divided into three groups: group 1 (G1, n=5), dogs with canine visceral leishmaniasis (CVL) and infected with L. infantum amastigotes in the intestine; group 2 (G2, n=5), dogs with CVL but without intestinal amastigotes; and group 3 (G3, n=3), uninfected dogs (control group). There was no significant difference (p ≥ 0.05) on CD4+ and Treg cell numbers among the groups, whereas the levels of CD8+ T cells and macrophages were significantly higher in dogs from G1 group than in G2 and G3 (p ≤ 0.05), especially in intestinal segments with high parasite burden. Parasite burden correlated positively with levels of CD8+ T cells and macrophages (p ≤ 0.05), but was inversely correlated to levels of CD4+ T lymphocytes and FoxP3+ Treg cells. In conclusion, in the intestine of dogs with CVL, the increase of CD8+ T cells and macrophages population associated with high parasite burdens, but no changes of CD4+ T cells and FoxP3+ Treg cells suggest a possible immunoregulation by the parasite not dependent on Treg cells.(AU)

Este estudo foi uma análise semi-quantitativa de linfócitos T (CD4+, CD8+ e regulatórios - Treg FoxP3+) e macrófagos na parede intestinal de cães naturalmente infectados com Leishmania infantum. Treze cães foram divididos em três grupos: grupo 1 (G1, n=5) continha cães com leishmaniose visceral canina (LVC) e com amastigotas intestinais; grupo 2 (G2, n=5) continha cães com LVC, mas sem amastigotas intestinais e o grupo 3 (G3, n=3) continha cães não infectados (grupo controle). Verificou-se que não houve diferença significativa (p ≤ 0.05) no número de células CD4+ e de Treg entre os grupos, mas o número de células T CD8+ e macrófagos foi significativamente superior nos cães do grupo G1 em relação ao G2 e ao G3 (p ≤ 0,05), especialmente nos segmentos intestinais com altas cargas parasitárias. As altas cargas parasitarias correlacionaram positivamente com os números de CD8+ e macrófagos (p ≤ 0,05), mas negativamente com as células CD4+ e Treg. Em conclusão, no intestino dos cães com LVC, o aumento das populações de células T CD8+ e de macrófagos associado a altas cargas parasitárias, mas nenhuma alteração de células T CD4+ e células Treg FoxP3+ sugerem uma possível imunorregulação pelo parasita não dependente de células Treg.(AU)

Regulação da Atividade Macrofágica pela Aspirina 15 cH in vitro

Plaquetas e endotélio de vasos interagem em direção da homeostase circulatória durante processos inflamatórios, contudo, efeitos paradoxais podem ocorrer em função do balanço entre mediadores anti e prótrombóticos. A administração de uma única e alta dose de Aspirina pode ocasionar a formação de trombos arteriais em oito a dez dias. Tem-se observado que Aspirina ultradiluída também promove trombogênese após uma hora de administração, porém não é sabido se ambos os casos envolvem a mesma via regulatória. Os efeitos antitrombóticos de altas doses podem ser revertidos pela ação protrombótica da Aspirina ultradiluída. Para compreender os mecanismos envolvidos nessa regulação, postula-se que a Aspirina ultradiluída tenha seu mecanismo de ação relacionado a efeito rebote envolvendo COX-2 e células inflamatórias, como macrófagos. Objetivo: Estudar os efeitos da Aspirina 15 cH sobre macrófagos ativados ou não por LPS, um ativador de COX-2. Métodos: Água, água sucussionada e Aspirina 200 µg/ml foram usadas como controle. A atividade macrofágica foi estudada mediante avaliação de espraiamento; dosagens de óxido nítrico, peróxidos, citocinas, quimiocinas; expressão de receptores TLR4, viabilidade celular e produção intracelular de espécies reativas de oxigênio. Resultados: O tratamento das células com Aspirina 15 cH levou ao aumento no spreading e produção de H2O2 com a mesma magnitude do LPS, mas anulou seu efeito quando administrados ambos conjuntamente. A Aspirina 200 µg/ml produziu efeito anti-inflamatório clássico em todos os parâmetros analisados, revertendo os efeitos do LPS. A água sucussionada per se mostrou efeitos pró-inflamatórios independente do LPS, como aumento de spreading e redução de IL 10; ação regulatória sobre a produção de TNF e H2O2 e aumento na atividade oxidativa celular, com efeito paradoxal após estímulo com LPS. O tratamento com Aspirina 15 cH não alterou a atividade oxidativa intracelular, mas água sucussionada elevou o número absoluto de células que expressam essa atividade. A expressão de TLR-4, por sua vez, foi significativamente maior nos grupos tratados com LPS, independentemente dos co-tratamentos. Conclusão: O efeito paradoxal da Aspirina 15 cH observado in vivo foi reproduzido neste modelo in vitro. A Aspirina 15 cH isoladamente ou em associação com LPS produz efeitos antagônicos, com reversão de efeitos sobre spreading e produção de H2O2. Especula-se que sua ação seja sobre as proteínas dos microtúbulos, favorecendo o spreading. A Aspirina 200 µg/ml produz efeitos anti-inflamatórios clássicos e a água sucussionada produz efeitos pró-inflamatórios e regulação de TNF e H2O2 após o estímulo com LPS.

Introduction: platelets and endothelium interact towards circulatory homeostasis during inflammatory processes however, paradoxical effects may occur due to the balance between anti and prothrombotic mediators. The administration of a single high dose of Aspirin can lead to the formation of arterial thrombi in eight to ten days. It has been observed that ultra-diluted aspirin also promotes thrombogenesis after one hour of administration, but it is not known whether both cases involve the same regulatory pathway. The antithrombotic effects of high doses can be reversed by the prothrombotic action of ultra-diluted aspirin. To understand the mechanisms involved in this regulation, it is postulated that ultra-diluted aspirin has its mechanism of action related to a rebound effect involving COX-2 and inflammatory cells, such as macrophages. Objective: To study the effects of Aspirin 15 cH on macrophages activated or not by LPS, a COX-2 activator. Methods: Water, sucussed water and Aspirin 200 µg/ml were used as controls. The macrophage activity was studied by means of spreading evaluation; nitric oxide, peroxides, cytokines, and chemokines measurements; expression of TLR4 receptors; cell viability and intracellular production of reactive oxygen species. Results: The treatment of cells with Aspirin 15 cH led to increase in the cell spreading and production of H2O2, with the same magnitude as LPS did, but nullified its effect when both were administered together. Aspirin 200 µg/ml produced a classic anti-inflammatory effect in all parameters analyzed, reversing the effects of LPS. Sucussed water per se showed pro-inflammatory effects independent of LPS, such as increase in the cell spreading and reduction of IL 10; as well as regulatory action on the production of TNF and H2O2. Moreover, it increased the cellular oxidative activity, with paradoxical effect after stimulation with LPS. Treatment with Aspirin 15 cH did not change the intracellular oxidative activity, but sucussed water increased the absolute number of cells that express this activity. TLR-4 expression, in turn, was significantly higher in LPS-treated groups, regardless of the co-treatments. Conclusion: The paradoxical effect of Aspirin 15 cH observed in vivo was reproduced in this in vitro model. Aspirin 15 cH alone or in association with LPS produces antagonistic effects, with reversal of the effects on spreading and production of H2O2. It is speculated that it could act on microtubule proteins, favoring the spreading. Aspirin 200 µg/ml produces classic anti-inflammatory effects and sucussed water produces pro-inflammatory effects and regulation of TNF and H2O2 after being stimulated with LPS.

Chronic liver disease in cattle associated with ingestion of Brachiaria spp / Doença hepática crônica em bovinos associada com ingestão de Brachiaria spp

One hundred and ninety livers condemned due to chronic disease (fibrosis) were evaluated in a bovine slaughterhouse over 12 months. Hepatic lymph nodes were also examined while still attached to livers. The major macroscopic lesion observed in the livers was moderate to severe atrophy of the left lobe associated with compensatory hypertrophy of the right lobe. Histologically, the main changes corresponded to sites of macroscopic lesions, and fibrosis was observed in all livers, along with bile duct hyperplasia and neovascularization. Masson's trichrome stain highlighted the fibrous connective tissue. Most of the livers analyzed had macrophages with foamy cytoplasm and a peripheral nucleus that infiltrated fibrotic areas. Immunohistochemistry (IHC) for macrophages with monoclonal antibody clone MAC 387 revealed that the cytoplasm of the foamy macrophages of the liver and of the hepatic lymph nodes were positively immunostained. These cells are frequently associated to the consumption of grasses of the genus Brachiaria. Although the liver gross lesions described in this study have not been previously reported in animals consuming Brachiaria , the associated changes observed histologically, such as fibrosis and infiltration of foamy macrophages, showed a new form of chronic liver disease probably associated with the consumption of this forage. The IHC technique was important to prove that the foam cells observed are macrophages.(AU)

Cento e noventa e dois fígados condenados devido à doença crônica (fibrose) foram avaliados em um abatedouro de bovinos durante 12 meses. Os linfonodos hepáticos, quando ainda estavam ligados aos fígados, também foram examinados. A principal lesão macroscópica observada no fígado foi moderada a acentuada atrofia do lobo esquerdo associada à hipertrofia compensatória do lobo direito. Histologicamente, as principais alterações correspondiam aos locais das lesões macroscópicas, e fibrose foi observada em todos os fígados, juntamente com a hiperplasia de ductos biliares e neovascularização. A coloração de Tricrômico de Masson destacou o tecido conjuntivo fibroso. A maioria dos fígados analisados apresentavam macrófagos com citoplasma espumoso e um núcleo periférico que infiltravam as áreas de fibrose. A imuno-histoquímica (IHQ) para macrófagos realizada com o anticorpo monoclonl clone MAC 387 revelou imunomarcação positiva no citoplasma dos macrófagos espumosos do fígado e dos linfonodos hepáticos. Essas células estão frequentemente associadas ao consumo de gramíneas do gênero Brachiaria . Apesar das lesões hepáticas macroscópicas descritas neste trabalho não terem sido previamente relatadas em animais que consomem Brachiaria , as alterações histológicas associadas, como fibrose e infiltração de macrófagos espumosos, mostram uma nova forma crônica de doença hepática provavelmente associada à ingestão desta forragem. A técnica de IHQ foi importante para provar que as células espumosas observadas são macrófagos.(AU)

AÇÃO ANTI-INFLAMATÓRIA DE OSMOTINA RECOMBINANTE DE Calotropis procera EM MODELOS DE INFECÇÃO EXPERIMENTAL POR Listeria monocytogenes

Calotropis procera (Ait.) R. Br. é uma planta laticífera da família Apocynaceae, conhecida popularmente na Região Nordeste do Brasil como algodão de seda, flor de seda e queimadeira. O látex de C. procera é rico em proteínas e há evidências de que algumas estejam envolvidas com propriedades anti-inflamatórias observadas em diferentes modelos experimentais. Anteriormente, foi isolada do látex de C. procera uma osmotina nomeada como CpOsm. Osmotinas são proteínas que possuem semelhança estrutural e funcional à adiponectina humana, uma adipocina endógena que exibe efeitos anti-inflamatórios. O presente estudo investigou a hipótese de que uma Osmotina recombinante de C. procera (rCpOsm) obtida através de linhagem de E. coli transformada seria capaz de prevenir o desenvolvimento de um processo inflamatório derivado de uma infecção microbiana sistêmica. CalotropisComo modelo de infecção foi utilizado um isolado clínico de Listeria monocytogenes (cepa 619). Esta espécie é associada a infecções de origem alimentar que acometem animais e seres humanos provocando, dentre outros quadros, abortos e miningoencefalite. Inicialmente, foram realizados ensaios com culturas celulares de macrófagos peritoneais (pMØ) obtidas de camundongos Swiss. rCpOsm foi testada em relação à citotoxicidade em concentrações que variaram entre 6,25 e 400 g / mL. Concentrações não tóxicas de rCpOsm (1 e 10 g / mL) foram utilizadas nos tratamentos de pMØ, seguido de infecção por L. monocytogenes. Foi observado que os tratamentos com rCpOsm reduziram a carga bacteriana intracelular e aumentaram a viabilidade de pMØ infectados em comparação ao grupo sem tratamento, apesar da proteína não inibir o crescimento direto de L. monocytogenes in vitro. Nos grupos tratados, foi observada redução na produção de transcritos de mRNA para as citocinas IL-10 e TNF- e aumento na expressão das citocinas IL-1 e IL-6. A administração endovenosa de rCpOsm em camundongos Swiss foi capaz de diminuir significativamente a infiltração de leucócitos na cavidade peritoneal após inóculo de L. monocytogenes, via intraperitoneal. A quantificação de bactérias viáveis no fluido peritoneal e fígado dos animais tratados com rCpOsm foi superior nos animais que não receberam tratamento. A produção de transcritos de mRNA da citocina anti-inflamatória IL-10 no baço dos animais infectados foi aumentada com os tratamentos com rCpOsm. Dados histológicos mostraram que as concentrações de rCpOsm utilizadas não foram tóxicas ao tecido esplênico e hepático dos camundongos, alémda rCpOsm minimizar os danos no tecido hepático durante a fase aguda, após inoculação de L. monocytogenes. Tomados juntos, os resultados mostraram que rCpOsm foi capaz de prevenir um processo inflamatório grave derivado de uma infecção real, causada por L. monocytogenes, diminuindo também o dano histológico em órgão alvo da infecção. Esses dados são discutidos à luz da literatura.

Calotropis procera (Ait.) R. Br. is a laticifer plant from the Apocynaceae family popularly known as silk cotton, silk flower and burner in Brazil´s Northeast. C. procera latex is rich in proteins and there is evidence that some harbor anti-inflammatory properties reported with different experimental models. Previously, an osmotin named CpOsm was isolated from the latex of C. procera. Osmotins are proteins that have a structural and functional similarity to human adiponectin, an endogenous adipokine that exhibits anti-inflammatory actions. The present study investigated the hypothesis that a recombinant C. procera Osmotin (rCpOsm) obtained from a transformed E. coli strain would be able to prevent the development of an inflammatory process derived from a systemic microbial infection. As a model of infection, a clinical isolate of Listeria monocytogenes (strain 619) was used. This species is associated with food-borne infections that affect animals and humans, causing, among, abortions and miningoencephalitis. Firstlly, assays were performed with peritoneal macrophage cell cultures (pMØ) from Swiss mice. rCpOsm was tested for cytotoxicity at concentrations ranging from 6.25 and 400 g / mL. Non-toxic concentrations of rCpOsm (1 and 10 g / mL) were used in pMØ treatments, followed by infection with L. monocytogenes. Despite the fact that rCpOsm does not inhibit the growth of L. monocytogenes in vitro, protein treatments reduced the intracellular bacterial load and increased the viability of infected pMØ compared to the untreated group. It was observed a reduction in the level of mRNA transcripts for the cytokines IL-10 and TNF- and an increase in the expression of cytokines IL-1 and IL-6 in rCpOsm-treated groups. The intravenous administration of rCpOsm to Swiss mice significantly decrease the infiltration of leukocytes in the peritoneal cavity after inoculation of L. monocytogenes, intraperitoneally. Quantification of viable bacteria in the peritoneal fluid and liver of animals treated with rCpOsm was higher in comparison to animals that did not receive treatment. The production of mRNA transcripts for the anti-inflammatory cytokine IL-10 in the spleen of infected animals was increased with rCpOsm treatments. Histological data showed that the rCpOsm was not toxic to the splenic and hepatic tissue of the mice, and they also minimized damages to the liver tissue during the acute phase of L. monocytogenes after inoculation. Taken together, the results showed that rCpOsm was able to prevent a serious inflammatory process derived from a real infection, caused by L. monocytogenes, also decreasing the damage to target organs of infection. These data are discussed in the light of the literature.

Distribution of lymphocytes, immunoglobulin-containing cells, macrophages, and dendritic cells in the accessory sex glands of rams experimentally infected with Actinobacillus seminis / Distribuição de linfócitos, células carreadoras de imunoglobulinas, macrófagos e células dendríticas em glândulas sexuais acessórias de carneiros infectados experimentalmente com Actinobacillus seminis

The distribution of cells involved in the immune response in accessory sex glands of rams experimentally infected with Actinobacillus seminis was studied. Twelve one-year old rams were experimentally infected by intraurethral (IU) (n=4) and intraepididymal (IE) (n=4) route, and four control (CON) animals were used. The animals were slaughtered 35 days post-inoculation, samples were taken from accessory sex glands, and bacteriology and histopathology tests were performed. The presence of CD4, CD8 and TCRγδ (WC1) lymphocytes, CD45RO cells, macrophages (CD14), dendritic cells (CD1b), IgA-, IgG- and IgM-containing cells (IgCC) was determined. Animals of the IE group developed clinical epididymitis. No lesions were seen in rams of the IU group; two of the intraepididymal inoculated CON developed small lesions in the epididymis. A. seminis isolates were achieved from 6:16 (37.5%) accessory sex glands in the IE group, but not in the IU and CON groups. In the CON group, IgA- and IgM- containing cells predominated in the bulbourethral glands and the disseminated prostate, and they were scarce or null in the vesicles and ampullae. A significant increase of IgA-, IgG- and IgM- containing cells was confirmed in the seminal vesicles, the ampullae and the bulbourethral glands in the IE group. In the IE and IU groups, an increase in CD4, CD8, WC1, CD45RO and CD14 was evidenced in the vesicles and ampullae. CD1b dendritic cells were present in the ampullae and vesicles with inflammatory processes. A. seminis triggered a local immune response in the IE and IU groups. These results indicate a different pattern of infiltrating immune cells in the accessory sex glands of infected A. seminis rams.(AU)

A distribuição das células envolvidas na resposta imune em glândulas sexuais acessórias de carneiros experimentalmente infectados com Actinobacillus seminis foi estudada. Doze carneiros de um ano de idade foram experimentalmente infectados via intrauretral (IU) (n=4) e via intraepididimal (IE) (n=4) e quatro animais controles (CON) foram utilizados. Os animais foram abatidos 35 dias após a inoculação, amostras foram retiradas das glândulas sexuais acessórias e testes bacteriológicos e histopatológicos foram realizados. A presença de linfócitos CD4, CD8 e TCRγδ (WC1), células CD45RO, macrófagos (CD14), células dendríticas (CD1b) e células contendo IgA, IgG and IgM (IgCC) foi determinada. Os animais do grupo IE desenvolveram epididimite clínica. Não foram visualizadas lesões nos carneiros do grupo IU, dois dos CON inoculados intraepididimalmente desenvolveram pequenas lesões no epidídimo. Isolados de A. seminis foram obtidos de 6:16 (37,5%) nas glândulas sexuais acessórias no grupo IE mas não nos grupos IU e CON. No grupo CON células contendo IgA and IgM predominaram nas glândulas bulbouretrais e na próstata e foram escassas ou ausentes nas vesículas e na ampola. Um incremento significativo de células contendo IgA, IgG and IgM foi confirmado nas vesículas seminais, na ampola e nas glândulas bulbouretrais no grupo IE. Nos grupos IE e IU foi evidenciado um aumento em CD4, CD8, WC1, CD45RO e CD14 nas vesículas e ampola. As células dendríticas CD1b estavam presentes na ampola e nas vesículas com processo inflamatório. A. seminis induziu uma resposta imune local nos grupos IE e IU. Estes resultados indicam um padrão diferente de células imunes infiltrantes nas glândulas sexuais acessórias de carneiros infectados por A. seminis.(AU)

ESTUDO IN VITRO DA RESPOSTA DE MACRÓFAGOS NA INFECÇÃO COM MICROSPORUM CANIS

Os dermatófitos são fungos importantes para a saúde pública, são transmitidos entre animais e seres humanos causando zoonoses. Microsporum canis é o principal agente das dermatofitoses em cães e gatos. A imunidade inata desempenha importante papel frente à infecção contra dermatófitos; entretanto, existem poucos estudos sobre a relação entre resposta imune inata e M. canis. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade fagocítica, microbicida e imunomoduladora de macrófagos desafiados com microconídios de M. canis. Macrófagos murinos, tratados ou não com LPS (1µg/ml), foram infectados com M. canis na proporção de 0,25:1 (microconídios/macrófagos) e cultivados por 30 min, 1 h, 3 h e 6 h. Após cada intervalo, as lamínulas foram coletadas e coradas por Giemsa, contando-se duzentas células e calculando-se a porcentagem de macrófagos que internalizaram pelo menos um microconídio. O sobrenadante foi coletado para medir os níveis de citocinas e óxido nítrico, e checou-se a viabilidade celular e o perfil dos macrófagos durante a infecção. A porcentagem de fagocitose aumentou no transcorrer do tempo, atingindo o máximo às 6 h. A porcentagem de macrófagos não estimulados com LPS que fagocitaram microconídios foi de 28,0%, 33,5%, 62,5% e 71,5%, respectivamente em 30 min, 1 h, 3 h e 6 h. Nos macrófagos estimulados com LPS esta porcentagem foi de 34,5%, 47,5%, 67,0% e 74,0%, respectivamente nos intervalos de 30 min, 1 h, 3 h e 6 h. A produção de óxido nítrico foi similar em ambos, macrófagos estimulados ou não com LPS. Níveis de TNF aumentaram no transcorrer do tempo em macrófagos desafiados com M. canis estimulados ou não com LPS, quando comparados com macrófagos não infectados (p<0,05). Níveis superiores de IL-6 foram produzidos por macrófagos estimulados com LPS e infectados com M. canis no intervalo de 1 h (p<0,05). A viabilidade celular diminuiu com o tempo, com o pico de morte dos macrófagos às 6 h. O teste de microbicidade mostrou que, mesmo após a fagocitose, os microconídios de M. canis permaneciam viáveis dentro dos macrófagos. Os macrófagos mostraram um perfil M2, o qual produz uma tendência de resposta anti-inflamatória que favorece o crescimento fúngico. Macrófagos apresentaram alta atividade fagocítica frente o M. canis, a qual aumentou quando previamente estimulados com LPS. Estímulo com LPS também aumentou a produção de citocinas, sugerindo uma modulação na resposta à infecção. O aumento na produção das citocinas pró-inflamatórias TNF- e IL-6 que são importantes no recrutamento de novas células fagocíticas e na resolução da infecção, foi observado nos macrófagos desafiados com M. canis. Os resultados sugerem que, apesar dos macrófagos apresentarem atividade fagocítica e produção de citocinas quando desafiados com M. canis, sua viabilidade e a atividade microbicida são prejudicadas, não sendo capazes de controlar a infecção.

Dermatophytes are important fungi for public health, as they are transmitted between animals and humans causing zoonoses. Microsporum canis is the main agent of dermatophytosis in dogs and cats. Innate immunity plays an important role in the establishment of dermatophytic infection; however, there are few studies on the relationship between innate immune response and M. canis. Thus, the aim of this work was to evaluate the phagocytic, microbicidal and immunomodulatory capacity of macrophages challenged with M. canis microconidia. Murine macrophages, treated or not with LPS (1µg /ml), were infected with M. canis in a ratio of 0.25:1 (microconidia/macrophages) and incubated for 30 min, 1 h, 3 h, and 6 h. After each interval, the coverslips were collected and stained by Giemsa, counting two hundred cells and calculating the percentage of macrophages that internalized at least one microconidium. The supernatant was collected to measure cytokine and nitric oxide levels, and cell viability and macrophage profile during infection were checked. The percentage of phagocytosis increased over time, peaking at 6 h. The percentage of non-stimulated LPS macrophages that phagocytosed microconidia was 28.0%, 33.5%, 62.5%, and 71.5%, respectively at 30 min, 1 h, 3 h, and 6 h. In LPS-stimulated macrophages, these percentages were 34.5%, 47.5%, 67.0%, and 74.0%, respectively at 30 min, 1 h, 3 h, and 6 h intervals. Nitric oxide production was similar in both macrophages stimulated or not with LPS. TNF- levels increased over time in macrophages challenged with M. canis stimulated or not with LPS when compared to uninfected macrophages (p <0.05). Higher levels of IL-6 were produced by LPS-stimulated and M. canis-infected macrophages within 1 h (p <0.05). Cell viability decreased over time with macrophages death peak at 6 h. Microbicity test showed that even after phagocytosis, M. canis microconidia remained viable within the macrophages. Macrophages showed an M2 profile, which produces a tendency of anti-inflammatory response that favors fungal growth. Macrophages showed high phagocytic activity against M. canis, which increased when previously stimulated with LPS. LPS stimulation also increased cytokine production, suggesting a modulation in the response to infection. Increased production of pro-inflammatory cytokines TNF- and IL-6, which are important in recruiting new phagocytic cells and resolving the infection, was observed in macrophages challenged with M. canis. The results suggest that, although macrophages present phagocytic activity and cytokine production when challenged with M. canis, their viability and microbicidal activity are impaired and unable to control infection.

ENCEPHALITOZOON CUNICULI UTILIZA A EFEROCITOSE COMO MECANISMO DE EVASÃO DA IMUNIDADE

Os microsporídios são reconhecidos como patógenos oportunistas em indivíduos com imunodeficiências, especialmente de células T. Estudos tem demonstrado participação importante de macrófagos no início da infecção, embora a atividade de linfócitos T CD8+ seja primordial para eliminação desses patógenos, macrófagos e outras células da imunidade inata apresentam um papel critico na ativação da imunidade adquirida. Apos a morte programada, fragmentos celulares ou corpos apoptoticos sao depurados por células fagociticas, fenômeno denominado eferocitose e que tem sido reconhecido como forma de evasão da imunidade por patógenos intracelulares. Diante do exposto, o objetivo do presente estudo foi avaliar o impacto da eferocitose de células apoptoticas infectadas ou nao em macrófagos desafiados com o microsporídio Encephalitozoon cuniculi. Para tal, macrofagos, obtidos a partir de monócitos de medula óssea de camundongos C57BL, foram pré-incubados com células Jurkat apoptotica (ACs) e então desafiados com esporos de E. cuniculi. Os mesmos procedimentos foram realizados para experimentos utilizando células Jurkat previamente infectadas (IACs) com esporos de E. cuniculi antes da pré-incubação de macrófagos. Foram contabilizados os macrófagos em fagocitose e o número médio de esporos internalizados pelos mesmos pela técnica de Calcofluor. A expressão de CD40, CD206, CD80, CD86 e MHCII foram mensuradas por citômetria de fluxo, assim como as citocinas liberadas nos sobrenadantes das culturas. O estudo ultraestrutural foi realizado para analise das formas de multiplicação do patógeno. Macrófagos pré-incubados com ACs desafiados com E. cuniculi apresentaram maior porcentagem de fagocitose e media de esporos internalizados e presença de estágios de multiplicação do patógeno no interior dos macrófagos, particularmente apos a eferocitose de corpos apoptoticos infectados. Adicionalmente, a pré-incubação com ACs ou IACs e/ou o desafio com o patógeno diminuiu a viabilidade dos macrófagos, marcada por altas porcentagens de apoptose. Embora com expressão aumentada de CD40 e liberação de citocinas proinflamatórias, foi a expressão acentuada de CD206 e a liberação de grandes quantidades de IL-10 e IL-6 que indicou a polarização dos macrófagos para um perfil M2, compatível com eferocitose e a permissividade ao desenvolvimento do patógeno. Nos concluímos que o patógeno se favoreceu com a eferocitose e polarizou os macrófagos para um perfil M2, o que permitiu a sobrevivência e multiplicação do E. cuniculi no interior de macrófagos, fato que pode explicar a possibilidade de macrófagos atuarem como cavalos de Troia nas microsporidioses.

Microsporidia are recognized as opportunistic pathogens in individuals with immunodeficiencies, especially T cells. Studies have shown an important participation of macrophages in the beginning of the infection, although the activity of CD8+ T lymphocytes is essential to eliminate these pathogens, macrophages and other innate immunity cells. play a critical role in activating acquired immunity. After programmed death, cell fragments or apoptotic bodies are cleared by phagocytic cells, a phenomenon called efferocytosis and which has been recognized as a way of evading immunity by intracellular pathogens. In view of the above, the objective of the present study was to evaluate the impact of the efferocytosis of apoptotic cells infected or not on macrophages challenged with the Encephalitozoon cuniculi microsporidia. For this purpose, macrophages, obtained from bone marrow monocytes from C57BL mice, were pre-incubated with apoptotic Jurkat cells (ACs) and then challenged with E. cuniculi spores. The same procedures were performed for experiments using previously infected Jurkat cells (IACs) with E. cuniculi spores before macrophage preincubation. Macrophages in phagocytosis and the average number of spores internalized by the Calcofluor technique were counted. The expression of CD40, CD206, CD80, CD86 and MHCII were measured by flow cytometry, as well as the cytokines released in the culture supernatants. The ultrastructural study was carried out to analyze the forms of multiplication of the pathogen. Macrophages pre-incubated with CAs challenged with E. cuniculi showed a higher percentage of phagocytosis and an average number of internalized spores and the presence of stages of multiplication of the pathogen inside the macrophages, particularly after the efferocytosis of infected apoptotic bodies. Additionally, pre-incubation with ACs or IACs and/or the challenge with the pathogen decreased the viability of macrophages, marked by high percentages of apoptosis. Although with increased expression of CD40 and release of proinflammatory cytokines, it was the marked expression of CD206 and the release of large amounts of IL-10 and IL-6 that indicated the polarization of macrophages to an M2 profile, compatible with efferocytosis and permissiveness to pathogen development. We concluded that the pathogen favored efferocytosis and polarized the macrophages to an M2 profile, which allowed the survival and multiplication of E. cuniculi inside macrophages, a fact that may explain the possibility of macrophages acting as Trojan horses in microsporidiosis.

Papel do microambiente tumoral no desenvolvimento do melamoma / Components of the tumor microenvironment in melanoma model

Nos últimos dez anos a incidência do câncer tem sido mundialmente alarmante, constituindo um grave problema de saúde pública com expectativas de aumento para as próximas décadas. Estudos epidemiológicos no Brasil demonstraram que o câncer de maior prevalência é o de próstata, entretanto o câncer de pele tem impactado de forma significativa a população em geral. Dentre os principais tipos de câncer de pele, o melanoma é o que mais causa óbitos devido a sua alta capacidade de metástase. Vários fatores estão envolvidos no desenvolvimento do melanoma, entretanto interações entre as células neoplásicas e as células normais presentes no local onde o tumor se desenvolve é o foco de estudo da maioria dos centros de pesquisa em câncer. Assim, nesta revisão são apresentados os principais achados descritos nos últimos dez anos em relação às interações das células neoplásicas com os componentes do microambiente tumoral no modelo de melanoma.

The last ten years, the incidence of cancer has been globally alarming constituting a serious public health problem with increasing expectations for the coming decades. Epidemiological studies in Brazil showed that, the most prevalent of all cancers is prostate cancer, however skin cancer has impacted significantly the general population. Among the main types of skin cancer, melanoma causes more deaths due to its high ability to metastasize. Several factors are involved in the development of melanoma, however interactions between the neoplastic cells and the normal cells at the site where the tumor develops is the aim of many research centers in cancer. Thus, this review presents the main findings described in the last ten years in relation to the interactions between cancer cells and the components of the tumor microenvironment in melanoma model.

Papel do microambiente tumoral no desenvolvimento do melamoma / Components of the tumor microenvironment in melanoma model

Nos últimos dez anos a incidência do câncer tem sido mundialmente alarmante, constituindo um grave problema de saúde pública com expectativas de aumento para as próximas décadas. Estudos epidemiológicos no Brasil demonstraram que o câncer de maior prevalência é o de próstata, entretanto o câncer de pele tem impactado de forma significativa a população em geral. Dentre os principais tipos de câncer de pele, o melanoma é o que mais causa óbitos devido a sua alta capacidade de metástase. Vários fatores estão envolvidos no desenvolvimento do melanoma, entretanto interações entre as células neoplásicas e as células normais presentes no local onde o tumor se desenvolve é o foco de estudo da maioria dos centros de pesquisa em câncer. Assim, nesta revisão são apresentados os principais achados descritos nos últimos dez anos em relação às interações das células neoplásicas com os componentes do microambiente tumoral no modelo de melanoma.(AU)

The last ten years, the incidence of cancer has been globally alarming constituting a serious public health problem with increasing expectations for the coming decades. Epidemiological studies in Brazil showed that, the most prevalent of all cancers is prostate cancer, however skin cancer has impacted significantly the general population. Among the main types of skin cancer, melanoma causes more deaths due to its high ability to metastasize. Several factors are involved in the development of melanoma, however interactions between the neoplastic cells and the normal cells at the site where the tumor develops is the aim of many research centers in cancer. Thus, this review presents the main findings described in the last ten years in relation to the interactions between cancer cells and the components of the tumor microenvironment in melanoma model.(AU)