Evidence of post-formed structures during systemic Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens infection in resistant Phaseolus vulgaris genotypes / Evidência de estruturas pós-formadas na infecção sistêmica de Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens em genótipos resistentes de Phaseolus vulgaris L

Bacterial wilt of the common bean caused by Curtobacterium flaccumfacienspv. flaccumfaciensresults in economic losses. The aim of this study was to analyze the colonization of C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens in resistant, moderately resistant, and susceptible genotypes of common bean plants. The genotypes OuroBranco and IPA 9 (resistant), Diacol Calima (moderately resistant), and CNFRS 11997 and CNFP 10429 (susceptible) were inoculated in the epicotyl, with 100 µL of bacterial suspension of the BRM 14933(Cff25). Disease severity was evaluated 21 days after inoculation (DAI), on a scale from 1 to 9. Plant samples were prepared for scanning electron microscopy analyses. Ouro Branco and IPA 9 (resistant) plants exhibited low colonization, the formation of filaments surrounding bacterial cells and vestures more developed in the pit the xylem vessels. Diacol Calima (moderately resistant) plants presented lower levels of colonization and filament formation than that of resistant cultivars. CNFC 10429 and CNFRS 11997 (susceptible) showed high levels of colonization in the xylem and vessel obstruction, preventing water and nutrient flow, which explains the symptoms of wilt and plant death. Thus, resistance to C. flaccumfacienspv. flaccumfacienscan be explained by plant's capacity to limit pathogen propagation as a post-formed defense mechanismin this pathosystem.(AU)

Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciensé causadora da murcha-de-curtobacterium, responsável por perdas econômicas.O objetivo deste estudo foi analisara colonização de C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciensem genótipos de feijoeiro comumresistente, moderamente resistente e suscetível. Ouro Branco e IPA 9 (resistente), Diacol Calima (moderadamente resistente), CNFRS 11997 e CNFP 10429 (suscetíveis) foram inoculados,no epicótilo,com 100 µL de suspensão bacteriana do isolado BRM 14933(Cff25). A severidade da doença foi avaliada 21 dias após a inoculação, utilizando a escala de 1 a 9. As amostras para MEV foram desidratadas em série alcoólica, secas em ponto crítico com dióxido de carbono (CO2), banhadas em ouro e analisadas em microscópio eletrônico de varredura. As plantas de Ouro Branco e IPA 9 (resistentes) exibiram baixa colonização, formação de filamentos envolvendo células bacterianas e guarnições mais desenvolvidas nas pontoaçõesdos vasos do xilema. Diacol Calima (moderadamente resistente) apresentou menor colonização e formação de filamentos do que as cultivares resistentes. Os genótipos CNFC 10429 e CNFRS 11997 (suscetíveis) mostraram grande colonização no xilema, com vasos obstruídos, impedindo o fluxo de água e nutrientes, explicando os sintomas de murcha e morte da planta. Portanto, a resistência à C. flaccumfacienspv. flaccumfacienspode ser explicada pela capacidade da planta em limitar a multiplicação do patógeno como um mecanismo de defesa celular, sugerindo que este é um dos fatores de resistência estrutural pós-formado que ocorre nesse patossistema.(AU)

Gênero arcobacter e saúde pública: revisão sobre sua importância na saúde humana, principais vias de transmissão e patogenicidade / Arcobacter genus and Public Health: review of its importance in human health, main transmission routes and pathogenicity

É apresentada uma revisão de literatura sobre o gênero Arcobacter, tratando da sua ocorrência determinando doença em humanos, da sua presença no meio ambiente e em alimentos de origem animal contaminados, bem como dos seus prováveis fatores de patogenicidade. Estes microrganismos estão dispersos no meio ambiente, sendo comumente encontrados em animais de produção e produtos de origem animal. Já foram descritos surtos decorrentes da infecção humana a partir do consumo de carne de frango, suína e leite contaminados. Este agente, além de possuir fatores de adesão e invasão para colonizar o trato gastrintestinal, produz citotoxinas que induzem o organismo do hospedeiro à resposta inflamatória.

This is a review on the Arcobacter genus, highlighting its occurrence causing disease in humans, and also its presence in the environment and in contaminated animal foods, as well what is known about its probable pathogenicity factors. These microorganisms are dispersed in the environment, being commonly found in farm animals and animal products. Outbreaks of human infection from the consumption of contaminated chicken, pork and milk have been described. This agent, presents adhesion and invasion factors for gastrointestinal tract colonization and produces cytotoxins that induces the inflammation of the host’s organism.

Gênero arcobacter e saúde pública: revisão sobre sua importância na saúde humana, principais vias de transmissão e patogenicidade / Arcobacter genus and Public Health: review of its importance in human health, main transmission routes and pathogenicity

É apresentada uma revisão de literatura sobre o gênero Arcobacter, tratando da sua ocorrência determinando doença em humanos, da sua presença no meio ambiente e em alimentos de origem animal contaminados, bem como dos seus prováveis fatores de patogenicidade. Estes microrganismos estão dispersos no meio ambiente, sendo comumente encontrados em animais de produção e produtos de origem animal. Já foram descritos surtos decorrentes da infecção humana a partir do consumo de carne de frango, suína e leite contaminados. Este agente, além de possuir fatores de adesão e invasão para colonizar o trato gastrintestinal, produz citotoxinas que induzem o organismo do hospedeiro à resposta inflamatória.(AU)

This is a review on the Arcobacter genus, highlighting its occurrence causing disease in humans, and also its presence in the environment and in contaminated animal foods, as well what is known about its probable pathogenicity factors. These microorganisms are dispersed in the environment, being commonly found in farm animals and animal products. Outbreaks of human infection from the consumption of contaminated chicken, pork and milk have been described. This agent, presents adhesion and invasion factors for gastrointestinal tract colonization and produces cytotoxins that induces the inflammation of the hosts organism.(AU)

Antibacterial effects of seven essential plant oils on fish pathogens / Efeitos antibacterianos de sete óleos de plantas essenciais em patógenos de peixe

The use of natural products which have the least harmful effects on the environment has recently been taken as a novel approach against fish diseases. References on in vitro studies have demonstrated antibacterial activity of essential oils (EOs) against certain fish pathogens. The aim of this study was to evaluate the antibacterial effect of some plant essential oils against fish pathogenic bacteria in vitro conditions. Seven plant EOs: lavender (Lavandula angustifolia), clove (Eugenia caryophyllus), peppermint (Mentha piperitae), basil (Ocimum sanctum), rosemary (Rosmarinus officinalis), cinnamon (Cinnamomum zeylanicum) and black cumin (Nigella sativa) were used to identify their antibacterial properties against Yersinia ruckeri, Aeromonas hydrophila, Vibrio anguillarum, Vibrio alginolyticus, Lactococcus garvieae and Vagococcus salmoninarum at five concentrations using disc diffusion method. Especially the EOs of clove, cinnamon and rosemary showed the strongest antibacterial activities than other oils against the three most susceptible bacterial strains (Y. ruckeri, A. hydrophila and V. salmoninarum). Besides, the EOs of clove, rosemary, cinnamon and black cumin showed similar inhibition zones with OTC against A. hydrophila. The minimum inhibitory concentrations of the used EOs found between 500 and 62.5 µl mL-1. As a result, three of the EOs used in this study were...

A utilização de produtos naturais com menos efeitos nocivos para o ambiente foi recentemente considerada uma nova abordagem contra as doenças dos peixes. Referências em estudos in vitro demonstraram atividade antibacteriana de óleos essenciais (OE) contra certos patógenos de peixes. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito antibacteriano de alguns óleos essenciais de plantas contra bactérias patogênicas de peixes em condições in vitro. Sete EOs de plantas: alfazema (Lavandula angustifolia), cravo (Eugenia caryophyllus), hortelã-pimenta (Mentha piperitae), manjericão (Ocimum sanctum), alecrim (Rosmarinus officinalis), canela (Cinnamomum zeylanicum) e cominho preto (Nigella sativa) foram usados para identificar suas propriedades antibacterianas contra Yersinia ruckeri, Aeromonas hydrophila, Vibrio anguillarum, Vibrio alginolyticus, Lactococcus garvieae e Vagococcus salmoninarum em cinco concentrações usando o método de difusão em disco. Especialmente os OEs de cravo, canela e alecrim mostraram as atividades antibacterianas mais fortes do que outros óleos contra as três cepas bacterianas mais suscetíveis (Y. ruckeri, A. hydrophila e V. salmoninarum). Além disso, os OEs de cravo, alecrim, canela e cominho preto mostraram zonas de inibição semelhantes com OTC contra A. hydrophila. As concentrações inibitórias mínimas dos OE usados encontradas entre 500 e 62.5 µl mL-1...

Antibacterial effects of seven essential plant oils on fish pathogens / Efeitos antibacterianos de sete óleos de plantas essenciais em patógenos de peixe

The use of natural products which have the least harmful effects on the environment has recently been taken as a novel approach against fish diseases. References on in vitro studies have demonstrated antibacterial activity of essential oils (EOs) against certain fish pathogens. The aim of this study was to evaluate the antibacterial effect of some plant essential oils against fish pathogenic bacteria in vitro conditions. Seven plant EOs: lavender (Lavandula angustifolia), clove (Eugenia caryophyllus), peppermint (Mentha piperitae), basil (Ocimum sanctum), rosemary (Rosmarinus officinalis), cinnamon (Cinnamomum zeylanicum) and black cumin (Nigella sativa) were used to identify their antibacterial properties against Yersinia ruckeri, Aeromonas hydrophila, Vibrio anguillarum, Vibrio alginolyticus, Lactococcus garvieae and Vagococcus salmoninarum at five concentrations using disc diffusion method. Especially the EOs of clove, cinnamon and rosemary showed the strongest antibacterial activities than other oils against the three most susceptible bacterial strains (Y. ruckeri, A. hydrophila and V. salmoninarum). Besides, the EOs of clove, rosemary, cinnamon and black cumin showed similar inhibition zones with OTC against A. hydrophila. The minimum inhibitory concentrations of the used EOs found between 500 and 62.5 µl mL-1. As a result, three of the EOs used in this study were...(AU)

A utilização de produtos naturais com menos efeitos nocivos para o ambiente foi recentemente considerada uma nova abordagem contra as doenças dos peixes. Referências em estudos in vitro demonstraram atividade antibacteriana de óleos essenciais (OE) contra certos patógenos de peixes. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito antibacteriano de alguns óleos essenciais de plantas contra bactérias patogênicas de peixes em condições in vitro. Sete EOs de plantas: alfazema (Lavandula angustifolia), cravo (Eugenia caryophyllus), hortelã-pimenta (Mentha piperitae), manjericão (Ocimum sanctum), alecrim (Rosmarinus officinalis), canela (Cinnamomum zeylanicum) e cominho preto (Nigella sativa) foram usados para identificar suas propriedades antibacterianas contra Yersinia ruckeri, Aeromonas hydrophila, Vibrio anguillarum, Vibrio alginolyticus, Lactococcus garvieae e Vagococcus salmoninarum em cinco concentrações usando o método de difusão em disco. Especialmente os OEs de cravo, canela e alecrim mostraram as atividades antibacterianas mais fortes do que outros óleos contra as três cepas bacterianas mais suscetíveis (Y. ruckeri, A. hydrophila e V. salmoninarum). Além disso, os OEs de cravo, alecrim, canela e cominho preto mostraram zonas de inibição semelhantes com OTC contra A. hydrophila. As concentrações inibitórias mínimas dos OE usados encontradas entre 500 e 62.5 µl mL-1...(AU)

Adaptação de Staphylococcus aureus ao óleo essencial de Cinnamomum cassia / Adaptation of Staphylococcus aureus to Cinnamomum cassia essential oil

O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade de adaptação de Staphylococcus aureus ao óleo essencial (OE) de canela cássia (Cinnamomum cassia). Primeiro determinou-se a Concentração Mínima Bactericida (CMB) do OE de C. cassia utilizando a técnica de microdiluição. Em seguida as células de S.aureus foram expostas a concentrações subletais do OE de C. cassia(CMB/4 e CMB/8) por um período de 6h e testadas frente a diferentes concentrações do OE (CMB/2; CMB; 1,2CMB; 1,4CMB; 1,6CMB; 1,8CMB e 2CMB), estas foram incubadas e plaqueadas em TSA (Ágar Triptona de Soja) empregando a técnica de microgotas. As células de S.aureus apresentaram uma nova CMB, maior que a anterior, portanto foram classificadas como capazes de se adaptarem ao OE de C. cassia. Após a exposição a concentrações subletais do OE, a CMB foi de 0,0744%. Os resultados evidenciam a importância de se utilizar a concentração adequada do antimicrobiano para evitar a adaptação do microrganismo.(AU)

Adaptação de Staphylococcus aureus ao óleo essencial de Cinnamomum cassia / Adaptation of Staphylococcus aureus to Cinnamomum cassia essential oil

O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade de adaptação de Staphylococcus aureus ao óleo essencial (OE) de canela cássia (Cinnamomum cassia). Primeiro determinou-se a Concentração Mínima Bactericida (CMB) do OE de C. cassia utilizando a técnica de microdiluição. Em seguida as células de S.aureus foram expostas a concentrações subletais do OE de C. cassia(CMB/4 e CMB/8) por um período de 6h e testadas frente a diferentes concentrações do OE (CMB/2; CMB; 1,2CMB; 1,4CMB; 1,6CMB; 1,8CMB e 2CMB), estas foram incubadas e plaqueadas em TSA (Ágar Triptona de Soja) empregando a técnica de microgotas. As células de S.aureus apresentaram uma nova CMB, maior que a anterior, portanto foram classificadas como capazes de se adaptarem ao OE de C. cassia. Após a exposição a concentrações subletais do OE, a CMB foi de 0,0744%. Os resultados evidenciam a importância de se utilizar a concentração adequada do antimicrobiano para evitar a adaptação do microrganismo.

Adaptação de Escherichia coli enterotoxigênica ao eugenol / Adaptation of enterotoxigenic Escherichia coli to eugenol

O objetivo do trabalho foi verificar a capacidade de adaptação de ETEC- ATCC 35401 ao antimicrobiano eugenol. Para isso, a Concentração Mínima Bactericida (CMB) de eugenol foi determinada e em seguida,as células de ETEC foram expostas a concentrações subletais de eugenol (CMB/4, CMB/8 e CMB/16). Posteriormente testadas frente a diferentes concentrações do composto (CMB/2; CMB; 1,2CMB; 1,4CMB; 1,6CMB; 1,8CMB e 2CMB), estas foram incubadas e plaqueadas em TSA (Ágar Triptona de Soja) empregando a técnica de microgotas. As células de ETEC foram classificadas como capazes de se adaptarem quando essas cresceram em placas após cultivo em presença do componente em concentração igual ou maior que a CMB do eugenol (1,0% (v/v)). As células de ETEC apresentaram a capacidade de adaptação por crescerem na CMB, após exposta a CMB/16. Os resultados demonstram a necessidade de obtenção da concentração de uso adequado de eugenol a fim de evitar a adaptação.(AU)

Adaptação de Escherichia coli enterotoxigênica ao eugenol / Adaptation of enterotoxigenic Escherichia coli to eugenol

O objetivo do trabalho foi verificar a capacidade de adaptação de ETEC- ATCC 35401 ao antimicrobiano eugenol. Para isso, a Concentração Mínima Bactericida (CMB) de eugenol foi determinada e em seguida,as células de ETEC foram expostas a concentrações subletais de eugenol (CMB/4, CMB/8 e CMB/16). Posteriormente testadas frente a diferentes concentrações do composto (CMB/2; CMB; 1,2CMB; 1,4CMB; 1,6CMB; 1,8CMB e 2CMB), estas foram incubadas e plaqueadas em TSA (Ágar Triptona de Soja) empregando a técnica de microgotas. As células de ETEC foram classificadas como capazes de se adaptarem quando essas cresceram em placas após cultivo em presença do componente em concentração igual ou maior que a CMB do eugenol (1,0% (v/v)). As células de ETEC apresentaram a capacidade de adaptação por crescerem na CMB, após exposta a CMB/16. Os resultados demonstram a necessidade de obtenção da concentração de uso adequado de eugenol a fim de evitar a adaptação.

Transcriptomic analysis of differential gene expression reveals an increase in COX2 levels during in vitro canine herpesvirus infection / Análise transcriptômica da expressão gênica diferencial revela um aumento nos níveis de COX2 durante a infecção in vitro por herpesvirus canino

Canine herpesvirus (CaHV-1) affects canids worldwide, causing death in neonates and immunosuppressed hosts. Acute infection by CaHV-1 can cause reproductive, respiratory, and neurological problems in adult animals. Viral pathogenesis and host genes expressions during of CaHV-1infection are not clearly understood. In the present study, the transcriptome of canine kidney cell Mardin-Darby (MDCK) infected in vitro with canine herpesvirus was explored. For this, RNA sequencing (RNA-seq) of the samples in different moments during infection was carried out. Subsequently, the transcriptomic analysis genes related to cell activities and process involved to viral cycle infection were evaluated until 32h post-inoculation (pi). Among evaluated genes, was verified a significant and gradative increase of the prostaglandin-endoperoxide synthase 2 (PTGS2) or cyclooxygenase 2 (COX2) gene expression, throughout of infection, though differential gene expression analysis and validated by quantitative reverse transcription PCR (RT-qPCR). High COX2 expression is usually induced in response to inflammation, pathogens or activation of the immune system but can be a viral mechanism to favor viral replication. Thus, COX2 level increase can be a favorable factor for viral infection with Cahv-1 virus and the use of selective COX2 inhibitors may be beneficial for limiting the infection or clinical signs by causing interruption of the viral replication cycle during active infection. Additionally, the regulation genes expression differential verified in this study can contribute to determining important targets for inhibiting canine herpesvirus infection either by cellular or viral mechanisms.(AU)

O herpesvírus canino (CaHV-1) afeta os canídeos em todo o mundo, causando morte em neonatos e hospedeiros imunossuprimidos. A infecção aguda por CaHV-1 pode causar problemas reprodutivos, respiratórios e neurológicos em animais adultos. A patogênese viral e expressão de genes hospedeiros durante a infecção por CaHV-1 ainda não são bem compreendidos. No presente estudo, o transcriptoma de células de rim canino Madin-Darby (MDCK) infectadas in vitro com herpesvirus canino foi explorado. Para isso, foi realizado o sequenciamento de RNA (RNA-seq) de amostras coletadas em diferentes momentos durante a infecção. Subsequentemente, a análise transcriptômica dos genes relacionados à atividade celular e aos processos envolvidos no ciclo de infecção do vírus foram avaliadas até 32 horas após a inoculação (pi). Dentre os genes avaliados, constatamos uma elevação significativa e gradativa da expressão da Prostaglandina-endoperoxide sintase 2 (PTGS2) ou ciclooxigenase 2 (COX2), ao longo da infecção viral, foi verificada por análise de expressão gênica diferencial e validada por resultados de transcrição reversa por PCR quantitativo (RT-qPCR). O aumento da expressão de COX2 geralmente é induzida em resposta a inflamação, patógenos ou ativação do sistema imune, mas também pode ser um mecanismo para favorecer a replicação viral. Assim, o aumento do nível de COX2 pode ser um fator favorável à infecção viral pelo vírus CaHV-1 e o uso de inibidores seletivos da COX2 pode ser benéfico para limitar a infecção ou os sinais clínicos, causando a interrupção do ciclo de replicação viral durante a infecção ativa. Além disso, a regulação diferencial da expressão dos genes verificados neste estudo podem contribuir para determinar alvos importantes para inibir a infecção por herpesvírus canino, seja por mecanismos celulares ou virais.(AU)

Genotypic profile of Listeria monocytogenes isolated in refrigerated chickens in southern Rio Grande do Sul, Brazil

ABSTRACT: Listeria monocytogenes is of notable concern to the food industry, due to its ubiquitous nature and ability to grow in adverse conditions. This study aimed to determine the genotypic profile of L. monocytogenes strains isolated from refrigerated chickens marketed in the southern part of Rio Grande do Sul, Brazil. The strains of L. monocytogenes isolated were characterized by serotyping and Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). Three different serotypes (1/2a, 1/2b and 4e) were evaluated by PFGE, and the macrorestriction patterns utilizing enzymes AscI and ApaI, revealed five different pulsotypes. The presence of such varied genotypic profiles demonstrates the prevalence of L. monocytogenes contamination of chicken processing environments, which combined with ineffective cleaning procedures, allowing the survival, adaptation and proliferation of these pathogens, not only in the processing environment, but also in local grocery stores.

RESUMO: Listeria monocytogenes é uma notável preocupação para a indústria de alimentos, devido à sua natureza ubíqua e a capacidade de se multiplicar em condições adversas. Este estudo objetivou determinar o perfil genotípico de L. monocytogenes isolada a partir de frangos refrigerados comercializados na região sul do Rio Grande do Sul, Brasil. As cepas de L. monocytogenes foram selecionadas e caracterizadas por sorotipagem e Eletroforese em Gel de Campo Pulsado (PFGE). Três sorotipos diferentes (1/2a, 1/2b e 4e) foram avaliados por PFGE, e a combinação dos padrões de macrorestrição utilizando as enzimas AscI e ApaI revelou cinco diferentes pulsotipos. A presença de diferentes perfis genotípicos demonstra a importância da contaminação no ambiente de processamento de frangos, o qual, juntamente com procedimentos de limpeza ineficazes, permitem a sobrevivência, adaptação e proliferação desses patógenos, não somente no ambiente de processamento, mas também no local de comercialização destes produtos.

Genotypic profile of Listeria monocytogenes isolated in refrigerated chickens in southern Rio Grande do Sul, Brazil

ABSTRACT: Listeria monocytogenes is of notable concern to the food industry, due to its ubiquitous nature and ability to grow in adverse conditions. This study aimed to determine the genotypic profile of L. monocytogenes strains isolated from refrigerated chickens marketed in the southern part of Rio Grande do Sul, Brazil. The strains of L. monocytogenes isolated were characterized by serotyping and Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). Three different serotypes (1/2a, 1/2b and 4e) were evaluated by PFGE, and the macrorestriction patterns utilizing enzymes AscI and ApaI, revealed five different pulsotypes. The presence of such varied genotypic profiles demonstrates the prevalence of L. monocytogenes contamination of chicken processing environments, which combined with ineffective cleaning procedures, allowing the survival, adaptation and proliferation of these pathogens, not only in the processing environment, but also in local grocery stores.

RESUMO: Listeria monocytogenes é uma notável preocupação para a indústria de alimentos, devido à sua natureza ubíqua e a capacidade de se multiplicar em condições adversas. Este estudo objetivou determinar o perfil genotípico de L. monocytogenes isolada a partir de frangos refrigerados comercializados na região sul do Rio Grande do Sul, Brasil. As cepas de L. monocytogenes foram selecionadas e caracterizadas por sorotipagem e Eletroforese em Gel de Campo Pulsado (PFGE). Três sorotipos diferentes (1/2a, 1/2b e 4e) foram avaliados por PFGE, e a combinação dos padrões de macrorestrição utilizando as enzimas AscI e ApaI revelou cinco diferentes pulsotipos. A presença de diferentes perfis genotípicos demonstra a importância da contaminação no ambiente de processamento de frangos, o qual, juntamente com procedimentos de limpeza ineficazes, permitem a sobrevivência, adaptação e proliferação desses patógenos, não somente no ambiente de processamento, mas também no local de comercialização destes produtos.

Genotypic profile of Listeria monocytogenes isolated in refrigerated chickens in southern Rio Grande do Sul, Brazil / Perfil genotípico de Listeria monocytogenes isolada em frangos refrigerados comercializados na região sul do Rio Grande do Sul, Brasil

Listeria monocytogenes is of notable concern to the food industry, due to its ubiquitous nature and ability to grow in adverse conditions. This study aimed to determine the genotypic profile of L. monocytogenes strains isolated from refrigerated chickens marketed in the southern part of Rio Grande do Sul, Brazil. The strains of L. monocytogenes isolated were characterized by serotyping and Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). Three different serotypes (1/2a, 1/2b and 4e) were evaluated by PFGE, and the macrorestriction patterns utilizing enzymes AscI and ApaI, revealed five different pulsotypes. The presence of such varied genotypic profiles demonstrates the prevalence of L. monocytogenes contamination of chicken processing environments, which combined with ineffective cleaning procedures, allowing the survival, adaptation and proliferation of these pathogens, not only in the processing environment, but also in local grocery stores.(AU)

Listeria monocytogenes é uma notável preocupação para a indústria de alimentos, devido à sua natureza ubíqua e a capacidade de se multiplicar em condições adversas. Este estudo objetivou determinar o perfil genotípico de L. monocytogenes isolada a partir de frangos refrigerados comercializados na região sul do Rio Grande do Sul, Brasil. As cepas de L. monocytogenes foram selecionadas e caracterizadas por sorotipagem e Eletroforese em Gel de Campo Pulsado (PFGE). Três sorotipos diferentes (1/2a, 1/2b e 4e) foram avaliados por PFGE, e a combinação dos padrões de macrorestrição utilizando as enzimas AscI e ApaI revelou cinco diferentes pulsotipos. A presença de diferentes perfis genotípicos demonstra a importância da contaminação no ambiente de processamento de frangos, o qual, juntamente com procedimentos de limpeza ineficazes, permitem a sobrevivência, adaptação e proliferação desses patógenos, não somente no ambiente de processamento, mas também no local de comercialização destes produtos.(AU)

Efeito do uso isolado e do mix de bactérias probióticas suplementadas na dieta de juvenis de tambaqui Colossoma macropomum (Cuvier, 1818) e tilápia do Nilo Oreochromis niloticus (Linnaeus, 1758)

A intensificação da piscicultura continental nacional exige o aprimoramento e desenvolvimento de estratégias produtivas sustentáveis para a produção de suas espécies, e o tambaqui e a tilápia se destacam no mercado nacional e do continente Latino Americano. Como medidas de incrementar o desempenho produtivo, sanitário e ambiental, o uso de probióticos possibilita a melhora na digestão dos animais, otimização das atividades enzimática, inibe o crescimento de agentes patogênicos e promove o equilíbrio da microflora intestinal, porém a maioria dos esforços se limita ao uso de monocepas para finalidades benéficas, sendo escassas as análises e os efeitos benéficos de uma combinação de probióticos em animais aquáticos. Desta forma, a presente pesquisa teve como objetivo avaliar os efeitos do uso de uma formulação probiótica multicepas (mix) durante a recria de juvenis de Colossoma macropomum e Oreochromis niloticus, sobre os parâmetros de desempenho zootécnico e sanitário. Para isso, foram utilizados 400 alevinos de tambaqui (1,13±0,01g 4,17±0,99cm) e 240 de tilápias (6,71±0,93g e 61,88±1,44mm) que foram alimentados durante 120 e 90 dias, respectivamente, com as dietas contendo a inclusão de: Enterococcus faecium (1) 2x106 UFC.g-1 na ração; Enterococcus faecium (2) 1x108 UFC.g-1 na ração; Bacillus cereus 2.8x106 UFC.g -1 na ração e uma formulação multicepas 1x108 UFC.g -1 na ração, além da dieta base. A formulação multicepas foi resultado da melhor resposta in vitro da interação entre as bactérias utilizadas de forma a não haver antagonismos. Durante o período de suplementação, o desempenho produtivo dos animais foi acompanhado a cada 30 dias, a partir de biometrias periódicas até o termino do experimento, e posteriormente foram realizadas as análises dos parâmetros microbiológicos, índice hepatossomático, esplenossomático, viscerossomático e hematológicos. Após a suplementação dietética, 90 tambaquis e 54 tilápias, foram infectados por injeção intraperitoneal de Aeromonas hydrophila e Streptococcus agalactiae na concentração de 1,8x108 UFC.g-1 de peixe e 1,7x107 UFC.g-1 de peixe, respectivamente, além de dois grupos controle, um positivo que representou animais do grupo isento de probiótico injetados com o patógeno e o negativo que foi injetado com solução estéril de NaCl (0,65%). As respostas inflamatórias com A. hydrophila e S. agalactiae foram monitoradas durante 96 h para registro dos sinais clínicos das doenças para intensidade infecciosa e mortalidade acumulada. Durante e ao término do período experimental, foram avaliados os parâmetros hematológicos para a contagem de células vermelhas, células totais, células leucocitárias, trombócitos e bioquímica sanguínea dos animais moribundos e sobreviventes. Para o tambaqui, o uso das dietas que continham os probióticos promoveu melhora no desempenho produtivo a partir dos 90 dias experimentais (p<0,05), e se mantiveram até o final de 120 dias para os parâmetros de comprimento total (15,30±0,29mm), comprimento padrão (12,20±0,45cm), peso (62,21±1,41g) e ganho de peso (27,54±0,70g). Resultado semelhante de desempenho foi observado nas tilápias, onde o uso de probióticos melhorou (p<0,05) o desempenho dos animais, com os espécimes do tratamento contendo B. cereus apresentaram o maior ganho de peso e ganho de comprimento, seguido do tratamento multicepas, com as maiores taxas de sobrevivência. Para as análises microbiológicas, tanto para o tambaqui como para a tilápia, o uso de multicepas probióticas (mix) na ração, apresentou isenção de bactérias potencialmente patogênicas no intestino dos animais ao final de 120 e 90 dias de produção, respectivamente. Em ambos os experimentos, o uso de probióticos na disponibilidade de cepa única ou mix, determinaram melhorias hematológicas. Para o tambaqui os tratamentos que continham B. cereus e mix determinaram melhoria no sistema imune com aumento nas contagens de trombócitos, linfócitos e neutrófilos. Para as tilápias alimentadas com as dietas contendo o mix probiótico, maiores valores para hematócrito (33,5±7,6 x106.µL-1), hemoglobina (13,8±1,3 g.dL-1) e proteína total (5,3±0,4 g.dL-1) foram observados. As dietas contendo os probióticos na ração influenciaram de forma positiva a resistência dos animais contra os patógenos A. hydrophila e S. agalactiae. Na infecção dos tambaquis com A. hydrophila, os tratamentos com B. cereus e mix na dieta obtiveram os menores registros de mortalidade (26 e 20%, respectivamente) e maiores concentrações (p<0,05) de leucócitos e trombócitos. Para as tilápias com S. agalactiae, as unidades que continham E. faecium (1), B. cereus e mix obtiveram as maiores taxas de sobrevivência após o período agudo infeccioso. Dessa forma, com os resultados alcançados com a pesquisa, o uso de probióticos na administração em cepa única e multicepas mix, melhoraram os parâmetros produtivos durante 120 e 90 dias, na produção de tambaquis e tilápias, respectivamente, e sanitários contra as infecções agudas e patogênicas. Ressalta-se, que as respostas de desempenho e profiláticas nos tratamentos que continham a inclusão de multicepas mix, foram capazes de promover efeitos promissores aos animais confinados, devido a um efeito sinérgico entre as bactérias utilizadas, mesmo em concentrações menores que às recomendadas de cada cepa para uso na aquicultura. Além disso, a formulação multicepas promoveu uma modulação na microbiota intestinal com ausência de cepas potencialmente patogênicas nos animais suplementados.

The intensification of national continental fish farming requires the improvement and development of sustainable production strategies for the production of their species, and tambaqui and tilapia stand out in the national market and in the Latin American continent. As measures to increase productive, sanitary and environmental performance, the use of probiotics makes it possible to improve the digestion of animals, optimize enzymatic activities, inhibit the growth of pathogens and promote the balance of the intestinal microflora, but most efforts are limited. to the use of single strains for beneficial purposes, and there are few analyzes and beneficial effects of a combination of probiotics in aquatic animals. Thus, the present research aimed to evaluate the effects of the use of a multi-strain probiotic formulation (mix) during the rearing of Colossoma macropomum and Oreochromis niloticus juveniles, on the parameters of zootechnical and sanitary performance. For this, 400 tambaqui fingerlings (1.13±0.01g 4.17±0.99cm) and 240 tilapia (6.71±0.93g and 61.88±1.44mm) were fed during 120 and 90 days, respectively, with diets containing: Enterococcus faecium (1) 2x106 CFU.g-1 in the diet; Enterococcus faecium (2) 1x108 CFU.g-1 in the diet; Bacillus cereus 2.8x106 CFU.g -1 in the ration and a multistrain formulation 1x108 CFU.g -1 in the ration, in addition to the base diet. The multistrain formulation was the result of the best in vitro response to the interaction between the bacteria used so that there were no antagonisms. During the period of supplementation, the productive performance of the animals was monitored every 30 days, from periodic biometrics until the end of the experiment, and later analyzes of the microbiological parameters, hepatosomatic, splenosomatic, viscerosomatic and hematological indexes were carried out. After dietary supplementation, 90 tambaquis and 54 tilapia were infected by intraperitoneal injection of Aeromonas hydrophila and Streptococcus agalactiae at a concentration of 1.8x108 CFU.g-1 of fish and 1.7x107 CFU.g-1 of fish, respectively, in addition to of two control groups, one positive that represented animals from the probiotic-free group injected with the pathogen and the negative that was injected with sterile NaCl solution (0.65%). Inflammatory responses with A. hydrophila and S. agalactiae were monitored for 96 h to record clinical signs of disease for infectious intensity and cumulative mortality. During and at the end of the experimental period, hematological parameters were evaluated for counting red cells, total cells, leukocyte cells, thrombocytes and blood biochemistry of the dying and surviving animals. For tambaqui, the use of diets containing probiotics promoted an improvement in productive performance from the 90 experimental days (p<0.05), and remained until the end of 120 days for the parameters of total length (15.30 ±0.29mm), standard length (12.20±0.45cm), weight (62.21±1.41g) and weight gain (27.54±0.70g). A similar result of performance was observed in tilapia, where the use of probiotics improved (p<0.05) the performance of the animals, with the specimens of the treatment containing B. cereus showed the highest weight gain and length gain, followed by the treatment multiceps, with the highest survival rates. For the microbiological analysis, both for tambaqui and for tilapia, the use of probiotic multi-strains (mix) in the ration showed an exemption of potentially pathogenic bacteria in the animals' intestines at the end of 120 and 90 days of production, respectively. In both experiments, the use of probiotics in the availability of single strain or mix, determined hematological improvements. For tambaqui, treatments containing B. cereus and mix determined improvement in the immune system with increased counts of thrombocytes, lymphocytes and neutrophils. For tilapia fed diets containing the probiotic mix, higher values for hematocrit (33.5±7.6 x106.µL-1), hemoglobin (13.8±1.3 g.dL-1) and total protein ( 5.3±0.4 g.dL-1) were observed. Diets containing probiotics in the ration positively influenced the resistance of animals against the pathogens A. hydrophila and S. agalactiae. In the infection of tambaqui with A. hydrophila, the treatments with B. cereus and mix in the diet had the lowest mortality records (26 and 20%, respectively) and the highest concentrations (p<0.05) of leukocytes and thrombocytes. For tilapia with S. agalactiae, the units containing E. faecium (1), B. cereus and mix had the highest survival rates after the acute infectious period. In this way, with the results achieved with the research, the use of probiotics in the administration in single strain and multi-strain mix, improved the productive parameters during 120 and 90 days, in the production of tambaquis and tilapia, respectively, and sanitary against acute and pathogen house It is noteworthy that the performance and prophylactic responses in treatments that contained the inclusion of multi-strain mix were able to promote promising effects to confined animals, due to a synergistic effect between the bacteria used, even at concentrations lower than those recommended for each strain for use in aquaculture. In addition, the multi-strain formulation promoted a modulation in the intestinal microbiota with the absence of potentially pathogenic strains in the supplemented animals.

Francisella sp. uma revisão

O objetivo desta revisão sistemática foi descrever o gênero Francisella sp. e suas consequências para a aquicultura. Francisella sp. é um patógeno emergente responsável por grandes perdas econômicas e compreende três espécies vastamente conhecidas: F. tularensis; F philomiragia e F. novicida. Há muito a ser feito para melhor compreender a provável importância da Francisella sp. como causadora de doenças em peixes. Particular atenção deve ser dada a se obter uma melhor compreensão da imunopatogênese da doença a fim de desenvolver vacinas e medidas de controle. (AU)

The aim of this review was to describe the genus Francisella sp., and its consequences to aquaculture. Francisella sp. is an emerging pathogen, which is responsible for large economic losses and it includes three widely known species: F. tularensis; F philomiragia e F. Novicida. There is plenty work to be done to further understand the likely importance of Francisella sp. as a cause of disease in fish. Particular attention should be provided to obtain a better understanding of the immunopathogenesis of the disease for the purpose of developing vaccines and control measures. (AU)

Francisella sp. – uma revisão

O objetivo desta revisão sistemática foi descrever o gênero Francisella sp. e suas consequências para a aquicultura. Francisella sp. é um patógeno emergente responsável por grandes perdas econômicas e compreende três espécies vastamente conhecidas: F. tularensis; F philomiragia e F. novicida. Há muito a ser feito para melhor compreender a provável importância da Francisella sp. como causadora de doenças em peixes. Particular atenção deve ser dada a se obter uma melhor compreensão da imunopatogênese da doença a fim de desenvolver vacinas e medidas de controle.

The aim of this review was to describe the genus Francisella sp., and its consequences to aquaculture. Francisella sp. is an emerging pathogen, which is responsible for large economic losses and it includes three widely known species: F. tularensis; F philomiragia e F. Novicida. There is plenty work to be done to further understand the likely importance of Francisella sp. as a cause of disease in fish. Particular attention should be provided to obtain a better understanding of the immunopathogenesis of the disease for the purpose of developing vaccines and control measures.

Pesquisa de Gallibacterium anatis em frangos de corte e poedeiras comerciais de granjas avícolas do estado de Pernambuco, Brasil.

A avicultura está entre as atividades agropecuárias de maior importância para a economia brasileira, assim como para o estado de Pernambuco. Por isso, o controle de doenças que possam interfir na produção é essencial, e inúmeras doenças emergentes têm surgido, causadas por diversos patógenos, dentre os quais está o Gallibacterium anatis, que foi descrito inicialmente como agente comensal do trato respiratório, digestivo e reprodutivo das aves, porém existem inúmeros relatos relacionando a este patógeno com prejuízos econômicos na produção comercial. Diante do exposto, objetivou-se pesquisar Gallibacterium anatis em frangos de corte e poedeiras comerciais em granjas avícolas no estado de Pernambuco, Brasil. Foram selecionados por conveniência 20 lotes de diferentes granjas avícolas, das quais 10 eram de frangos de corte e 10 de poedeiras comerciais, em cada lote, de forma aleatória, foram coletados 10 swabs, cinco traqueais e cinco cloacais, de aves selecionadas aleatoriamente, totalizando 200 amostras. As amostras de swabs coletadas foram conservadas em caldo Brain Heart Infusion (BHI), e encaminhadas ao laboratório para cultivo e isolamento microbiológico, coloração de Gram, catalase e provas bioquímicas. Foram isoladas 366 colônias bacterianas, das quais 227 foram selecionadas através de características morfotintoriais e provas bioquímicas. E posteriormente foi realizada a extração do material genético por meio do Kit comercial Promega®, direto dos caldos com swabs. E das colônias isoladas, foi realizada por meio da extração térmica, e posteriormente submetidas a reação em cadeia da polimerase (PCR). Os resultados obtidos detectaram G. anatis em 41 amostras de swabs sendo 29 de traqueia e 12 de cloaca, e em 33 das colônias selecionadas, foram confirmadas. A bactéria G. anatis estave presente em (75%) dos lotes pesquisados, por isso sugerimos que é necessário um monitoramento com relação a este agente na produção avícola, o qual apresenta um potencial patológico relatado em diversas pesquisas, as quais sugerem que o mesmo é uma potencial ameaça na produção avícola, por causar queda na produção de ovos e/ou baixa conversão alimentar secundária a lesões no sistema digestório, como consequencias podem levar à perdas econômicas ao produtor. Além disso este agente também possui potencial zoonótico, isto torna-o relevante para a saúde pública.

Poultry farming is among the activities agricultural activities of greater importance to the Brazilian economy, as well as for the state of Pernambuco. Therefore, disease control that may interfere with production is essential, and numerous emerging diseases have emerged, caused by several pathogens, among which is Gallibacterium anatis, which was initially described as a commensal agent in the respiratory, digestive and reproductive tract of birds, however, there are countless reports relating to this pathogen with economic losses in commercial production. Given the above, the objective was to research Gallibacterium anatis in broilers and laying hens in poultry farms in the state of Pernambuco, Brazil. For convenience, 20 lots of different poultry farms were selected, of which 10 were broilers and 10 commercial laying hens, in each batch, at random, 10 swabs, five tracheal and five cloacals, were collected from randomly selected birds, totaling 200 samples. The swab samples collected were kept in Brain Heart Infusion (BHI) broth, and sent to the laboratory for cultivation and microbiological isolation, Gram stain, catalase and biochemical tests. They were isolated 366 bacterial colonies, of which 227 were selected through morphotintorial characteristics and biochemical tests. And after genetic material was extracted through the Promega® Commercial Kit, end the isolated colonies, was performed through thermal extraction, and subsequently subjected to polymerase chain reaction (PCR). The results obtained detected G. anatis in 41 swab samples, 29 of which were tracheal and 12 of cloaca, and in 33 of the selected colonies, they were confirmed. The bacterium G. anatis was present in (75%) of the surveyed lots, which has a pathological potential reported in several surveys, which suggest that it is a potential threat in poultry production, for causing a drop in egg production and / or low feed conversion secondary to lesions in the digestive system, as a consequence it can lead to economic losses for the producer. In addition, this agent also has zoonotic potential, which makes it relevant to public health.

CARACTERIZAÇÃO DE EXTRATOS DE PRÓPOLIS E EFEITO SOBRE Campylobacter TERMOTOLERANTES DE ORIGEM AVÍCOLA

Campylobacter termotolerantes relacionam-se a um grupo de patógenos que são veiculados por alimentos e atualmente são considerados como os principais patógenos de ocorrência global e com alta frequência de resistência a antimicrobianos. Pelo exposto, o presente estudo teve por objetivo identificar biocompostos presentes em quatro extratos de própolis verde e vermelha e avaliar alternativas quanto ao potencial antimicrobiano. Foram avaliados extratos originários do Brasil, obtidos por extração convencional etanólica e extração assistida por ultrassom. Quatro culturas de coleções e vinte e cinco isolados de três espécies (Campylobacter jejuni, Campylobacter coli e Campylobacter lari) compuseram o estudo. A técnica utilizada foi a de microdiluição em caldo em placa de 96 poços que permitiu analisar onze concentrações de extratos de própolis (0,01 a 100 mg/mL-1). Observou-se variabilidade para atividade antimicrobiana. Identificou-se maior viabilidade microbiana e motilidade, por microscopia óptica, nas maiores concentrações de própolis testadas. Quanto ao efeito sobre viabilidade bacteriana da própolis vermelha com relação a própolis verde, a primeira foi mais eficiente. Não foi observada diferença quanto aos métodos de extração. Conclui-se que os extratos de própolis apresentaram efeito antimicrobiano insatisfatório, bem como efeito protetor celular para altas concentrações deste estudo, independentemente do método de extração, o que pode ter conotação desejável para diagnóstico laboratorial.

Thermotolerants Campylobacter are related to a group of pathogens that are carried by food and are currently considered as the main ones of global occurrence and with high frequency of resistance to antimicrobials. From the above, the present study aimed to identify biocomposites present in four extracts of green and red propolis and to evaluate alternatives regarding the antimicrobial potential. Extracts from Brazil, obtained by conventional ethanol extraction and extraction assisted by ultrasound, were evaluated. Four cultures of collections and twenty-five isolates from three species (Campylobacter jejuni, Campylobacter coli and Campylobacter lari) comprised the study. The technique used was microdilution in broth in a 96-well plate, which allowed the analysis of eleven concentrations of the propolis extracts (0.01 to 100 mg / mL-1). Variability was observed for antimicrobial activity. Greater microbial viability and motility were identified by optical microscopy at the highest concentrations of propolis tested. In addition, regarding the effect on bacterial viability of red propolis in relation to green propolis, the red one showed more efficient. There was no difference in extraction methods. It is concluded that the propolis extracts had an unsatisfactory antimicrobial effect, as well as a cellular protective effect for high concentrations in this study, regardless of the extraction method, which may have a desirable connotation for laboratory diagnosis.

Análise da microbiota gastrointestinal de Chelonoidis provenientes de cativeiro da região noroeste de São Paulo / Microbiota analysis of gastrointestinal Chelonoidis from captivity in the northwestern region of São Paulo / Análisis de la microflora gastrointestinal de Chelonoidis coming from cautividad de región noroeste de São Paulo

O jabuti é a designação vulgar dos répteis do género Chelonoidis, da ordem dos Quelônios, da família dos testudinídeos. A literatura apresenta escassas informações a respeito da importância desse réptil silvestre na cadeia epidemiológica das infecções. A determinação da microbiota entérica de animais silvestres tem por importância não só o conhecimento de micro-organismos que venham a compor a flora intestinal normal dessas espécies, como também a possibilidade de se descobrir novos agentes veiculadores de micro-organismos patogênicos ao homem, e para as demais espécies animais. Com a finalidade de verificar a microbiota de Chelonoidis, foram colhidos "swabs" retais de nove membros desta espécie que se encontram confinados no Zoológico Municipal da cidade de Araçatuba. O material foi enviado e processado no laboratório de Microbiologia da Faculdade de Medicina Veterinária UNESP - Campus de Araçatuba. As amostras foram semeadas em meios de Ágar Sangue e MacConkey incubadas em atmosfera de aerobiose à temperatura de 37°C por 24h, e em ágar Sabouraud que permaneceram em anaerobiose por 7 a 15 dias. Características morfológicas e tintoriais fundamentaram a identificação das colônias bacterianas, além das provas bioquímicas. Das amostras analisadas somente 55,5% obtiveram resultados conclusivos, sendo identificadas prevalências de 100% e 20% para Escherichia coli e a Klebsiella oxytoca, respectivamente. Os resultados revelam que geoquelônios atuam significativamente na ecoepidemiologia de doenças infecciosas com a manutenção e a propagação de patógenos no ambiente.

The jabuti is the common name of the genus Chelonoidis reptiles of the order of turtles, the family of testudinídeos. The literature presents little information on the importance of reptile in the wild epidemiological chain of infection. The determination of the enteric microbiota of wild animals is important not only to knowledge of microorganisms that will form the normal intestinal flora of these species, but also the possibility to discover new agents of pathogenic microorganisms to humans and to other animal species. In order to verify the microbiota of Chelonoidis, were collected "swabs" rectal nine members of this species that are confined in the Municipal Zoo of the city of Araçatuba. The material was sent and processed in the laboratory of Microbiology, Faculty of Veterinary Medicine UNESP - Campus de Araçatuba. The samples were sown in media of blood and MacConkey agar incubated in aerobic atmosphere at a temperature of 37 °C for 24h, and Sabouraud agar remained in anaerobiosis for 7 to 15 days. Morphological characteristics and staining based identification of bacterial colonies, in addition to the biochemical evidence. Samples of only 55.5% obtained conclusive results, and identified prevalence of 100% and 20% for Escherichia coli and Klebsiella oxytoca, respectively. The results show that significantly geoquelônios work in Eco-epidemiology of infectious diseases with the maintenance and spread of pathogens in the environment.

El jabuti es una especie de tortuga del género Chelonoidis, de la familia de los testudinídeos. En la literatura hay poca información acerca de la naturaleza de estos reptiles en la cadena epidemiológica de la infección. La determinación de la microflora entérica de los animales silvestres es importante no sólo para el conocimiento de los microorganismos que forman la flora intestinal normal de estas especies, sino también en la posibilidad de descubrir nuevos agentes de microorganismos patógenos para los seres humanos y otras especies animales. Con la finalidad de verificar la microflora de Chelonoidis se tomarán "frotis" del recto de esta especie de tortugas las cuales se encuentran en el zoológico municipal. El material fue enviado y procesado en el Laboratorio de Microbiología, Facultad de Medicina Veterinaria de la UNESP - Campus de Araçatuba. Las muestras fueron manejadas en medios de cultivo para bacterias (agar sangre, Mac Conkey y Sabouraud) se incubaron en una ambiente para bacterias aerobias y anaerobias a una temperatura de 37°C. Serrealizaron pruebas bioquímicas para identificación bacteriana. Las muestras fueron sembradas en medios enriquecidos de agar sangre y MacConkey incubadas en atmósfera aeróbica a una temperatura de 37 ° C durante 24 horas, para luego ser mantenidas en agar Sabouraud en anaerobiosis por 7 a 15 días. La identificación de colonias bacterianas fue realizada en base a sus características morfológicas, de tinción y a través de las pruebas bioquímicas. De las muestras analizadas, sólo en el 55,5% se obtuvieron resultados concluyentes y se logro determinar la prevalencia de Escherichiacoli y Klebsiella oxytoca en un 100% y 20% respectivamente, de los casos analizados. Los resultados obtenidos en este trabajo muestran que los geoquelônios "influyen" significativamente en Eco-epidemiología de las enfermedades infecciosas con la propagación y el mantenimiento de los agentes patógenos en el medio ambiente.

Genotipificação de Staphylococcusaureusisolados de queijo minas frescal e leite de bovinos com mastite subclínica

Espécies do gênero Staphylococcus são bactérias oportunista presentes na microbiota normal de mamíferos e causa mastite bovina. Representa na área de qualidade de alimentos um risco a saúde pública por estar envolvido em surtos de intoxicação alimentar, pela presença dos genes de enterotoxinas e resistência aos antimicrobianos. O objetivo deste trabalho foi genotipificar Staphylococcus aureus oriundos do leite de vacas com mastite subclínica e queijo do tipo minas frescal fracionado, obtidas na região do Distrito Federal, Brasil. As amostras de queijo foram isoladas em Baird Parker, em seguida, colônias selecionadas foram identificadas a partir dos testes bioquímicos. Cepas caracterizadas como Staphylococcus coagulase positiva seguiram para análise molecular e antibiograma. As amostras de S. aureus do leite mastítico utilizadas foram do banco de germoplasma do laboratório de microbiologia clínica veterinária da UNB. Após extração do DNA total, foi executada a PCR com primers: espécie-específico AroA, enterotoxinas SEA, SEC e SEE, e resistência MecA. Dentre o grupo amostral de 134 queijos coletados, 54 amostras foram detectadas a presença de Staphylococcus coagulase positivas, e após PCR do gene AroA espécie específico foram identificados 38 S. aureus. Das estirpes do leite mastítico bovino foram caracterizados 55 S. aureus. A eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) foi realizada em 21 linhagens selecionadas aleatoriamente, sendo 18/38 de linhagens do queijo e 3/55 da linhagem do leite mastítico. Todas as cepas foram positivas para os genes AroA e CoA (93). Foi detectada a predominância do gene COA de 600pb nas linhagens oriundas do leite (33/55) e do queijo (16/38). Observou-se a presença de enterotoxina estafilocócica em 16 (SEA), 4 (SEC) e 16 (SEE) isolados de S. aureus no leite; e 6 (SEA), 2 (SEC) e 2 (SEE) em isolados de queijo. Dentre os queijos avaliados foi encontrado um predomínio de cepas enterotoxigênicas na região Guará (Central Adjacente) (4/10) e no ponto de venda informal (7/10). Um isolado de S. aureus do estudo foi identificado o gene MecA (MRSA), originária do queijo de São Sebastião (Leste) comercializado em uma casa de frios. Trinta e seis (36/38) S.aureus isolados do queijo apresentaram resistência a droga ceftazidima. Na análise PFGE, foram detectados 19 perfis, todas com similaridade genotípica acima de 70%. Foram encontrados 2 clones, um entre cepas originária do leite e queijo e outro do queijo de diferentes regiões. A correspondência genotípica analisada entre as linhagens estudadas sugere contaminação de origem animal, e a manutenção das mesmas linhagens através da cadeia produtiva a partir da matéria-prima. Este resultado implica provável falha de pasteurização e manuseio no processo produtivo, reforçando a necessidade de melhores medidas de controle de higiene alimentar.

Staphylococcus genus species are opportunistic bacteria present in the normal mammalian microbiota and may cause bovine mastitis. In the area of food quality, it represents a public health risk since it is involved in outbreaks of food poisoning due to the presence of enterotoxin genes and antimicrobials resistance. The aim of this work was to genotype Staphylococcus aureus from cow milk with subclinical mastitis and fractional Minas fresh cheese, obtained in the Federal District, Brazil. The cheese samples were isolated in Baird Parker from which selected colonies were identified by biochemical tests. Strains characterized as coagulase positive Staphylococcus were then evaluated by both molecular analysis and antibiogram. The S. aureus samples from mastitic milk used were from the germplasm bank of the UNB veterinary clinical microbiology laboratory. After total DNA extraction, PCR was performed with the following primers: species-specific AroA, enterotoxins SEA, SEC and SEE, and MecA resistance. Within the sample group where 134 cheeses were collected, 54 samples were detected with the presence of coagulase positive Staphylococcus, and after PCR of the specific species AroA gene 38 S. aureus were identified. 55 S. aureus were characterized from bovine mastitic milk strains. Pulsed field gel electrophoresis (PFGE) was performed on 21 strains randomly selected: 18/38 of the cheese and 3/55 of the mastitic milk. All strains were positive for AroA and CoA genes (93). The predominance of the 600bp COA gene amplicon was detected from milk (33/55) and cheese strains (16/38). Staphylococcal enterotoxin was observed in 16 (SEA), 4 (SEC) and 16 (SEE) S. aureus isolates in milk; and 6 (SEA), 2 (SEC) and 2 (SEE) isolates in cheese. Among the evaluated cheeses, a predominance of enterotoxigenic strains was found in the Guará region (Central Adjacent) (4/10) and at the informal point of sale (7/10). A S. aureus isolate from the study was identified with the MecA gene (MRSA), originating from São Sebastião cheese (East) sold in a cheese shop. Thirty-six (36/38) S.aureus isolates in cheese showed ceftazidime drug resistance. In the PFGE analysis, 19 profiles were detected, all with genotypic similarity above 70%. Two clones were found, one between strains originating from milk and cheese, and the other from cheese, from different regions. The analyzed genotypic correspondence between the studied strains suggests animal origin contamination and the maintenance of the same strains through the production chain from the raw material. These results implies a probable failure during production process regarding the pasteurization and handling, reinforcing the need for better measures of food hygiene control.