Qualidade do leite cru refrigerado avaliado por diferentes laboratórios credenciados pelo MAPA / Quality of refrigerated raw milk evaluated by different laboratories accredited by MAPA

O objetivo deste trabalho foi analisar e correlacionar os resultados de qualidade do leite cru refrigerado de dez propriedades rurais de Viçosa (MG) obtidos por métodos de referências do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento e por espectrofotômetros de luz infravermelha em três laboratórios (A, B e C) credenciados pelo mesmo órgão de fiscalização. As amostras de leite foram analisadas quanto à contagem bacteriana, contagem de células somáticas (CCS) e teores de gordura, proteína e extrato seco desengordurado (ESD). Não houve discordância de amostras de leite quanto aos teores de proteína e gordura. Porcentagens diferentes de discordância foram observadas entre os resultados dos laboratórios e método de referência quanto à CCS, contagem bacteriana e teores de ESD. Os teores médios de proteína dos laboratórios A e B e os teores médios de ESD de todos laboratórios não foram estatisticamente iguais (p<0,05) aos teores obtidos pelo método de referência. Os teores de gordura obtidos no laboratório B não tiveram correlação estatística (p>0,05) com os teores obtidos pelo método de referência. Observou-se que as CCS e contagens bacterianas médias de todos os laboratórios foram estatisticamente iguais (p>0,05) e correlacionadas (p<0,05) às contagens médias obtidas pelos métodos de referência. Conclui-se que os teores de proteína em dois laboratórios e ESD em todos os laboratórios não são equivalentes com os métodos de referência do MAPA. É importante que os laboratórios revejam a calibração dos seus equipamentos quanto à quantificação dos teores de sólidos do leite.

The objective of this study was to analyze and to correlate the results of refrigerated raw milk quality in ten farms of Viçosa (MG). The milk was analyzed by the Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento standard methods and by infrared spectrophotometers in three laboratories (A, B and C) accredited by the same institution. The milk samples were analyzed for bacterial counts, somatic cell count (SCC) and fat, protein and solids not fat (SNF) tenors. There were no disagreement milk samples as the protein and fat tenors. Different percentages of disagreement were observed between the results of laboratory and standard method as the SCC, bacterial count and SNF tenor. The protein mean tenor of A and B laboratories and the SNF mean tenor of all laboratories were not statistically equal (p<0.05) the tenors obtained by standard method. The fat tenors obtained in B laboratory were not statistically correlated (p>0.05) with tenors obtained by the standard method. It was observed that the means of SCC and bacterial counts of all laboratories were statistically the same (p>0.05) and correlated (p<0.05) to the means counts obtained by standard methods. It is concluded that the protein tenors in two laboratories and SNF in all laboratories are not equivalent with the reference methods of MAPA. It is important that laboratories review the calibration of the equipment on the quantification of milk solids tenors.

Characterization of Coagulase-Negative Staphylococci and pheno-genotypic beta lactam resistance evaluation in samples from bovine Intramammary infection / Caracterização de Staphylococcus coagulase negativa e avaliação fenogenotípica da resistência aos beta-lactâmicos em amostras oriundas de infecção intra-mamária em bovinos

This study aimed to identify Coagulase-Negative Staphylococci (CoNS) species isolated from bovine mastitis, through phenotypic and PCR-RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism-Polimerase Chain Reaction) methods and to compare both techniques to matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) technique. Among them, the PCR-RFLP method, using a partially conserved sequence of the groEL gene, is a promising alternative, because of its reproducibility and reliability. On the other hand, the proteomic technique MALDI-TOF MS provides an accurate and much faster diagnosis and has been increasingly employed in microbiological identification. The pheno-genotypic profiles of beta-lactam resistance were also investigated, this characterization is important, considering that the use of antimicrobials is a key element for mastitis control in dairy farms. The concordance of the phenotypic, PCR-RFLP and MALDI-TOF MS assays to identify CoNS species was 77,5% (31/40). S. chromogenes was the species most frequently isolated. Antibiotic resistance rate was relatively low, registering values of 25.5% to penicillin, 9.6% to oxacillin and 6.2% to cefoxitin. Resistance to imipenem, cephalotin and amoxicillin+clavulanate was not observed. The mecA gene and its variant were detected in 7.6% and 4,1% of the isolates respectively. The blaZ gene was found in 43.2% of the strains resistant to penicillin.(AU)

Este estudo teve como objetivo identificar isolados de Staphylococcus coagulase-negativa (SCN) isolados de mastite bovina, por meio de métodos fenotípicos e PCR-RFLP (reação em cadeia de polimerase - polimorfismo nos fragmentos de restrição), e compará-los com a técnica de tempo de voo de ionização/desorção por laser assistida por matriz de espectrofotometria de massa (MALDI-TOF MS). O método de PCR-RFLP, que utiliza uma parte conservada da sequência do gene groEL, é uma alternativa promissora, por ser reprodutível e confiável. Por outro lado, a técnica proteômica MALDI-TOF MS permite uma acurácia e um diagnóstico muito mais rápidos e tem sido cada vez mais empregada na identificação microbiológica. Os perfis fenogenotípicos de resistência aos beta-lactâmicos também foram investigados. Essa caracterização é importante, considerando-se que os antimicrobianos são os elementos-chave para o controle da mastite na produção leiteira. A concordância entre os testes fenotípicos, PCR-RFLP E MALDI-TOF MS na identificação foi de 77,5% (31/40). S. chromogenes foi a espécie mais frequentemente isolada. A resistência antimicrobiana foi relativamente baixa, apresentando valores de 25,5% para penicilina, 9,6% para oxacilina e 6,2% para cefoxitina. Resistência ao imipenem, à cefalotina e à amoxacilina + ácido clavulâncico não foi observada. O gene mecA e sua variante foram detectados em 7,6% e 4,1% dos isolados, respectivamente. O gene blaZ foi encontrado em 43,2% dos isolados resistentes à penicilina.(AU)

Characterization of Coagulase-Negative Staphylococci and pheno-genotypic beta lactam resistance evaluation in samples from bovine Intramammary infection / Caracterização de Staphylococcus coagulase negativa e avaliação fenogenotípica da resistência aos beta-lactâmicos em amostras oriundas de infecção intra-mamária em bovinos

This study aimed to identify Coagulase-Negative Staphylococci (CoNS) species isolated from bovine mastitis, through phenotypic and PCR-RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism-Polimerase Chain Reaction) methods and to compare both techniques to matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) technique. Among them, the PCR-RFLP method, using a partially conserved sequence of the groEL gene, is a promising alternative, because of its reproducibility and reliability. On the other hand, the proteomic technique MALDI-TOF MS provides an accurate and much faster diagnosis and has been increasingly employed in microbiological identification. The pheno-genotypic profiles of beta-lactam resistance were also investigated, this characterization is important, considering that the use of antimicrobials is a key element for mastitis control in dairy farms. The concordance of the phenotypic, PCR-RFLP and MALDI-TOF MS assays to identify CoNS species was 77,5% (31/40). S. chromogenes was the species most frequently isolated. Antibiotic resistance rate was relatively low, registering values of 25.5% to penicillin, 9.6% to oxacillin and 6.2% to cefoxitin. Resistance to imipenem, cephalotin and amoxicillin+clavulanate was not observed. The mecA gene and its variant were detected in 7.6% and 4,1% of the isolates respectively. The blaZ gene was found in 43.2% of the strains resistant to penicillin.(AU)

Este estudo teve como objetivo identificar isolados de Staphylococcus coagulase-negativa (SCN) isolados de mastite bovina, por meio de métodos fenotípicos e PCR-RFLP (reação em cadeia de polimerase - polimorfismo nos fragmentos de restrição), e compará-los com a técnica de tempo de voo de ionização/desorção por laser assistida por matriz de espectrofotometria de massa (MALDI-TOF MS). O método de PCR-RFLP, que utiliza uma parte conservada da sequência do gene groEL, é uma alternativa promissora, por ser reprodutível e confiável. Por outro lado, a técnica proteômica MALDI-TOF MS permite uma acurácia e um diagnóstico muito mais rápidos e tem sido cada vez mais empregada na identificação microbiológica. Os perfis fenogenotípicos de resistência aos beta-lactâmicos também foram investigados. Essa caracterização é importante, considerando-se que os antimicrobianos são os elementos-chave para o controle da mastite na produção leiteira. A concordância entre os testes fenotípicos, PCR-RFLP E MALDI-TOF MS na identificação foi de 77,5% (31/40). S. chromogenes foi a espécie mais frequentemente isolada. A resistência antimicrobiana foi relativamente baixa, apresentando valores de 25,5% para penicilina, 9,6% para oxacilina e 6,2% para cefoxitina. Resistência ao imipenem, à cefalotina e à amoxacilina + ácido clavulâncico não foi observada. O gene mecA e sua variante foram detectados em 7,6% e 4,1% dos isolados, respectivamente. O gene blaZ foi encontrado em 43,2% dos isolados resistentes à penicilina.(AU)

Effects of seasonal variations and collection methods on the mineral composition of propolis from Apis mellifera Linnaeus Beehives / Efeitos de variações sazonais e métodos de coleta sobre a composição mineral de própolis de colmeias de Apis mellifera Linnaeus

Abstract The effects of seasonal variations and the methods of collection of propolis produced by Africanized honey bees Apis mellifera Linnaeus, 1758, on the composition of constituent minerals such as magnesium (Mg), zinc (Zn), iron (Fe), sodium (Na), calcium (Ca), copper (Cu), and potassium (K) were evaluated. Propolis was harvested from 25 beehives by scraping or by means of propolis collectors (screen, intelligent collector propolis [ICP], lateral opening of the super [LOS], and underlay method). During the one-year study, the propolis produced was harvested each month, ground, homogenized, and stored in a freezer at -10 ºC. Seasonal analyses of the mineral composition were carried out by atomic absorption spectrophotometry and the results were evaluated by analysis of variance (ANOVA), followed by Tukey-Kramers test to compare the mean values (p 0.05). The results showed that seasonal variations influence the contents of 5 minerals (Mg, Fe, Na, Ca, and Cu), and the propolis harvesting method affects the contents of 4 minerals (Mg, Zn, Fe, and Ca).(AU)

Resumo A influência da sazonalidade e de métodos de produção de própolis por abelhas africanizadas Apis mellifera Linnaeus, 1758, sobre a concentração de magnésio (Mg), zinco (Zn), ferro (Fe), sódio (Na), cálcio (Ca), cobre (Cu) e potássio (K) foram avaliados. 25 colmeias foram utilizadas, e a colheita de propolis ocorreu por raspagem ou a partir de coletores (tela, coletor de própolis inteligente CPI, abertura lateral da melgueira ALM e calço). Durante um ano a própolis foi colhida mensalmente, homogeneizada e armazenada em freezer a -10 ºC. A análise sazonal de minerais foi realizada por espectrofotometria de absorção atômica e os resultados avaliados por análise de variância (ANOVA) seguida do teste de Tukey-Kramer para comparação de médias (p 0,05). Os resultados demostraram que a sazonalidade afetou o conteúdo de cinco minerais (Mg, Fe, Na, Ca e Cu) e os métodos de coleta afetaram o conteúdo de quatro minerais (Mg, Zn, Fe e Ca).(AU)

Determinación de la concentración de Mycobacterium por espectrofotometría / Determination of Mycobacterium fortuitum concentration by spectrophotometry / Determinação da concentração de Mycobacterium fortuitum através da espectrofotometria

Mycobacterium fortuitum es agente causante de enfermidad oportunista en humanos y animales. Es un agente biológico modelo para estudios experimentales que sustituy Mycobacterium bovis, que es más patógeno. Este estudio presenta una metodología alternativa para el recuento de unidades formadoras de colonias por mililitro de inóculo para determinar la concentración de Mycobacterium fortuitum usando espectrofotometría. Catorce muestras se utilizaron Mycobacterium fortuitum, cultivadas en Lowesntein-Jensen, ocho de ellos de siete días de cultivo, y la otra entre 8 y 14 días en la cultura. Todas las muestras se colocaron en placas y se incubaron a 37o.C durante 7 días en un invernadero. De cada muestra se hicieron lecturas las variables de absorbancia (Abs) y transmitancia (T%) en un espectrofotómetro, a una longitud de onda de 560 nm y 600 nm. La comparación de los valores de UFC, ABS y T% por análisis de regresión lineal simple, el estadístico SAS versión 8.2 del software, hubo una fuerte evidencia estadística de que el aumento del valor de transmitancia se asocia con la disminución en el valor de UFC chapado, siguiendo el modelo matemático: LOG10 (UFC) = 21,012 - 0,1936 * transmitancia, con p = 0,0025 y una repetibilidad de más de 80%.(AU)

Mycobacterium fortuitum is an opportunistic agent which causes disease in human and animals. It is also a biological model for experimental studies instead of using Mycobacterium bovis, which is more pathogenic. This work presents an alternative methodology using spectrophotometry to count colony forming units (CFU) per milliliter of inoculum, in order to determinate Mycobacterium fortuitum concentration. Fourteen Mycobacterium fortuitum samples were cultivated in Lowenstein-Jensen culture media, considering that eight of them were seven days old cultures and the others were between eight and 14 days old. All samples were seeded and incubated at 37o.C for 7 days in an incubator. For each sample, the variables absorbance (Abs) and transmitance (T%) were read with an spectrophotometer and wave length of 560nm and 600nm. When the values of CFU, Abs and T% were compared through simple linear regression analysis and using the statistic software SAS Version 8.2., it was observed strong statistical evidence that the increase of transmitance value is associated to the decrease of CFU plate values, according to the mathematic model: LOG10 (CFU) = 21.012 - 0.1936*Transmitance, and p value = 0.0025 and a repeatability over 80%.(AU)

O Mycobacterium fortuitum é um agente oportunista causador de doença em humanos e animais. Além disso, é um modelo biológico para estudos experimentais em substituição ao Mycobacterium bovis, que é mais patogênico. Este estudo apresenta metodologia alternativa à contagem de unidades formadoras de colônia por mililitro de inóculo, para determinar a concentração do Mycobacterium fortuitum utilizando espectrofotometria. Utilizaram-se 14 amostras de Mycobacterium fortuitum, cultivadas em meio Lowesntein-Jensen, sendo oito delas com sete dias de cultivo e as demais entre oito e 14 dias de cultivo. Todas as amostras foram semeadas e incubadas a 37o.C por 7 dias em estufa. Fizeram-se, de cada amostra, leituras das variáveis absorbância (Abs) e transmitância (T%) em espectrofotômetro, nos comprimentos de onda de 560nm e 600nm. Comparando-se os valores obtidos de UFC, Abs e T% por meio da análise de regressão linear simples, pelo programa estatístico SAS versão 8.2, observou-se forte evidência estatística que o aumento do valor da transmitância está associado com o decréscimo do valor de UFC em placas, seguindo o modelo matemático: LOG10 (UFC) = 21.012 - 0.1936*Transmitância, com valor de p = 0,0025 e uma repetibilidade de mais de 80%.(AU)

Effects of seasonal variations and collection methods on the mineral composition of propolis from Apis mellifera Linnaeus Beehives

Abstract The effects of seasonal variations and the methods of collection of propolis produced by Africanized honey bees Apis mellifera Linnaeus, 1758, on the composition of constituent minerals such as magnesium (Mg), zinc (Zn), iron (Fe), sodium (Na), calcium (Ca), copper (Cu), and potassium (K) were evaluated. Propolis was harvested from 25 beehives by scraping or by means of propolis collectors (screen, intelligent collector propolis [ICP], lateral opening of the super [LOS], and underlay method). During the one-year study, the propolis produced was harvested each month, ground, homogenized, and stored in a freezer at -10 ºC. Seasonal analyses of the mineral composition were carried out by atomic absorption spectrophotometry and the results were evaluated by analysis of variance (ANOVA), followed by Tukey-Kramers test to compare the mean values (p 0.05). The results showed that seasonal variations influence the contents of 5 minerals (Mg, Fe, Na, Ca, and Cu), and the propolis harvesting method affects the contents of 4 minerals (Mg, Zn, Fe, and Ca).

Resumo A influência da sazonalidade e de métodos de produção de própolis por abelhas africanizadas Apis mellifera Linnaeus, 1758, sobre a concentração de magnésio (Mg), zinco (Zn), ferro (Fe), sódio (Na), cálcio (Ca), cobre (Cu) e potássio (K) foram avaliados. 25 colmeias foram utilizadas, e a colheita de propolis ocorreu por raspagem ou a partir de coletores (tela, coletor de própolis inteligente CPI, abertura lateral da melgueira ALM e calço). Durante um ano a própolis foi colhida mensalmente, homogeneizada e armazenada em freezer a -10 ºC. A análise sazonal de minerais foi realizada por espectrofotometria de absorção atômica e os resultados avaliados por análise de variância (ANOVA) seguida do teste de Tukey-Kramer para comparação de médias (p 0,05). Os resultados demostraram que a sazonalidade afetou o conteúdo de cinco minerais (Mg, Fe, Na, Ca e Cu) e os métodos de coleta afetaram o conteúdo de quatro minerais (Mg, Zn, Fe e Ca).

Determinación de la concentración de Mycobacterium por espectrofotometría / Determination of Mycobacterium fortuitum concentration by spectrophotometry / Determinação da concentração de Mycobacterium fortuitum através da espectrofotometria

Mycobacterium fortuitum es agente causante de enfermidad oportunista en humanos y animales. Es un agente biológico modelo para estudios experimentales que sustituy Mycobacterium bovis, que es más patógeno. Este estudio presenta una metodología alternativa para el recuento de unidades formadoras de colonias por mililitro de inóculo para determinar la concentración de Mycobacterium fortuitum usando espectrofotometría. Catorce muestras se utilizaron Mycobacterium fortuitum, cultivadas en Lowesntein-Jensen, ocho de ellos de siete días de cultivo, y la otra entre 8 y 14 días en la cultura. Todas las muestras se colocaron en placas y se incubaron a 37o.C durante 7 días en un invernadero. De cada muestra se hicieron lecturas las variables de absorbancia (Abs) y transmitancia (T%) en un espectrofotómetro, a una longitud de onda de 560 nm y 600 nm. La comparación de los valores de UFC, ABS y T% por análisis de regresión lineal simple, el estadístico SAS versión 8.2 del software, hubo una fuerte evidencia estadística de que el aumento del valor de transmitancia se asocia con la disminución en el valor de UFC chapado, siguiendo el modelo matemático: LOG10 (UFC) = 21,012 - 0,1936 * transmitancia, con p = 0,0025 y una repetibilidad de más de 80%.

Mycobacterium fortuitum is an opportunistic agent which causes disease in human and animals. It is also a biological model for experimental studies instead of using Mycobacterium bovis, which is more pathogenic. This work presents an alternative methodology using spectrophotometry to count colony forming units (CFU) per milliliter of inoculum, in order to determinate Mycobacterium fortuitum concentration. Fourteen Mycobacterium fortuitum samples were cultivated in Lowenstein-Jensen culture media, considering that eight of them were seven days old cultures and the others were between eight and 14 days old. All samples were seeded and incubated at 37o.C for 7 days in an incubator. For each sample, the variables absorbance (Abs) and transmitance (T%) were read with an spectrophotometer and wave length of 560nm and 600nm. When the values of CFU, Abs and T% were compared through simple linear regression analysis and using the statistic software SAS Version 8.2., it was observed strong statistical evidence that the increase of transmitance value is associated to the decrease of CFU plate values, according to the mathematic model: LOG10 (CFU) = 21.012 - 0.1936*Transmitance, and p value = 0.0025 and a repeatability over 80%.

O Mycobacterium fortuitum é um agente oportunista causador de doença em humanos e animais. Além disso, é um modelo biológico para estudos experimentais em substituição ao Mycobacterium bovis, que é mais patogênico. Este estudo apresenta metodologia alternativa à contagem de unidades formadoras de colônia por mililitro de inóculo, para determinar a concentração do Mycobacterium fortuitum utilizando espectrofotometria. Utilizaram-se 14 amostras de Mycobacterium fortuitum, cultivadas em meio Lowesntein-Jensen, sendo oito delas com sete dias de cultivo e as demais entre oito e 14 dias de cultivo. Todas as amostras foram semeadas e incubadas a 37o.C por 7 dias em estufa. Fizeram-se, de cada amostra, leituras das variáveis absorbância (Abs) e transmitância (T%) em espectrofotômetro, nos comprimentos de onda de 560nm e 600nm. Comparando-se os valores obtidos de UFC, Abs e T% por meio da análise de regressão linear simples, pelo programa estatístico SAS versão 8.2, observou-se forte evidência estatística que o aumento do valor da transmitância está associado com o decréscimo do valor de UFC em placas, seguindo o modelo matemático: LOG10 (UFC) = 21.012 - 0.1936*Transmitância, com valor de p = 0,0025 e uma repetibilidade de mais de 80%.

Caracterização de corantes solvatocrômicos como marcadores físico-químicos de medicamentos homeopáticos e de amostras biológicas de sobrenadantes

O presente estudo tem a finalidade de determinar se corantes solvatocrômicos podem ser utilizados como método de escolha de medicamentos homeopáticos para tratamento de sistemas vivos infectados com diferentes agentes infecciosos. Tal método permite analisar possíveis alterações no momento dipolo da água quando em contato com diluições homeopáticas de diferentes origens. Métodos: A pesquisa se desenvolveu a partir de sobrenadantes (SNs) colhidos de macrófagos RAW 264.7 estimulados com bacilos Calmette-Guérin (BCG) (cepa vacinal) e tratados com Silicea terra 6, 30, 200 cH, Zincum metallicum 6, 30, 200 cH e controles; desafiados com Encephalitozoon cuniculi (E. cuniculi) e tratados com Phosphorus 6, 30, 200 cH e controles; ou ainda ativados com LPS (mimetizando infecção por bactérias Gram negativas) e tratados com Aspirina 15 cH e controles. Os SNs descongelados foram diluídos 1:10 em água pura estéril e 1:100 em solução hidro-alcooólica 30%, sendo sucussionados por 100 vezes em braço mecânico automático (Autic®). Os respectivos medicamentos também foram preparados em solução hidro- alcooólica 30% do mesmo lote e sucussionados da mesma forma. Todas as amostras foram codificadas aleatoriamente, em números consecutivos, por um técnico não envolvido com a experimentação. Os códigos só foram quebrados após a análise estatística, de forma que todo o estudo foi realizado em cego. Antes de cada experimento, as amostras foram submetidas a 40 agitações verticais manuais, filtradas em filtro de malha 0.22 micrômetros e adicionadas aos corantes na proporção 1:60. Seis diferentes corantes solvatocrômicos (BDN, NNDMIA, Cumarina, Rodanina, Violeta metileno e Vermelho do Nilo) foram testados, a fim de cobrir todo o espectro de luz visível. A leitura em espectrofotômetro foi feita em cubetas descartáveis e a concentração dos corantes foi definida segundo padrões previamente estabelecidos, utilizando álcool absoluto como solvente. Todas as preparações foram feitas em capela de fluxo laminar e com o mínimo de incidência de luz possível sobre os corantes, até o momento da leitura. As condições ambientais foram controladas diariamente, sendo medidas temperatura, umidade e fluxo magnético. Antes de cada série de medidas, o equipamento foi calibrado com o mesmo álcool absoluto usado na preparação dos corantes e o comprimento de onda correspondente ao pico de absorbância foi registrado. As amostras foram analisadas em triplicata, em três séries experimentais consecutivas (N=9). O perfil de absorbância de cada medicamento foi comparado com a absorbância dos respectivos SNs. O método estatístico usado foi a ANOVA de uma via, seguido de Tukey, sendo os valores de p<0,05 considerados significantes. Testes de normalidade foram feitos por Shapiro- Wilk e eventuais outliers foram removidos após inspeção do QQ plot. Conclusão: Concluiu-se, portanto, que a Rodanina é um bom marcador de solventes submetidos à sucussão, provavelmente em função da atividade oxidativa associada; Cumarina é marcador de Phosphorus 6cH e de sobrenadantes tratados com Aspirina 15 cH e LPS; BDN é marcador de Silicea terra 6 cH, 30 cH e 200 cH, Zincum metallicum 30 cH e 200cH e Aspirina 15cH; Violeta metileno é marcador de sobrenadantes tratados com Silicea terra 30 cH e 200cH, bem como Zincum metallicum 6 cH e 200cH. Os demais corantes não apresentaram interações específicas com as amostras estudadas.

The present study aims to determine whether solvatochromic dyes can be used as a method of choice for homeopathic medicines to treat living systems infected with different infectious agents. This method allows analyzing possible changes in the dipole moment of water when in contact with homeopathic dilutions of different origins. The research was developed from supernatants (SNs) collected from RAW 264.7 macrophages stimulated with bacilli Calmette-Guérin (BCG) (vaccinal strain) and treated with Silicea terra 6, 30, 200 cH, Zincum metallicum 6, 30, 200 cH, and controls. Supernatants challenged with Encephalitozoon cuniculi (E. cuniculi) and treated with Phosphorus 6, 30, and 200 cH and controls, or even from macrophages activated with LPS (mimicking infection by Gram-negative bacteria) treated with Aspirin 15 cH and controls. The thawed SNs were diluted 1:10 in sterile water, then 1:100 in 30% hydro-alcoholic solution and submitted to 100 succussions in a robotic mechanical arm (Autic®). The respective medicines were also prepared in 30% hydro- alcoholic solution from the same batch, being succussed in the same way. All samples were randomly coded in consecutive numbers by a technician not involved in the experiment. The codes were only broken after statistical analysis; thus, the study was performed entirely blind. Before each experiment, the samples were submitted to 40 manual vertical agitations, filtered in a 0.22- micrometer mesh filter, and added to the dyes in a 1:60 ratio. Six different solvatochromic dyes (BDN, NNDMIA, Coumarin, Rhodanine, Methylene Violet, and Nile Red) were tested to cover the whole visible light spectrum. The reading was done in a spectrophotometer in disposable cuvettes, and the concentration of the dyes was defined according to previously established standards, using absolute alcohol as a solvent. All preparations were carried out in a laminar flow hood, with an as little light incidence as possible on the dyes, until the moment of reading. The environmental conditions were controlled daily, being measured temperature, humidity, and magnetic flux. Before each series of measurements, the equipment was calibrated with the same absolute alcohol used in the preparation of the dyes, and the wavelength corresponding to the peak of absorbance was recorded. The samples were analyzed in triplicate, in three consecutive experimental series (N=9). The absorbance profile of each drug was compared with the absorbance of the respective SNs. The statistical method used was one-way ANOVA, followed by Tukey, with p<0.05 being considered significant. The Shapiro-Wilk test checked normality, and eventual outliers were removed after inspection of the QQ plot. Therefore, it was concluded that Rodanine is a good marker of solvents subjected to succussion, probably due to its associated oxidative activity; Coumarin is a marker of Phosphorus 6cH and of supernatants treated with Aspirin 15cH and LPS; BDN is a marker of Silicea terra 6 cH, 30 cH and 200 cH, Zincum metallicum 30 cH and 200cH and Aspirin 15cH; Methylene violet is a marker of supernatants treated with Silicea terra 30 cH and 200cH, as well as Zincum metallicum 6 cH and 200cH. The other dyes did not show specific interactions with the samples studied.

k-casein proteolysis during the shelf-life of UHT milk and milk beverage / Proteólise da k-caseína em leite e bebida láctea UAT durante o período de validade comercial

The UHT milk and milk beverage proteolysis during storage is the major factor that limits the shelf-life of these products. The GMP content has assumed importance because it can indirectly indicate the integrity of -casein in milk. So, this study focused on evaluates the -casein proteolysis in UHT milk and milk beverage during the shelf-life. 60 samples obtained of five different brands of each product were evaluated by spectrophotometric assay for quantifying acid sialic. For UHT milk was observed the values ranging from 3.83 to 15.27 g acid sialic/ml at the begin of the shelf-life, from 5.95 to 17.16 mg sialic acid/ml at the middle of the period (60 days after the production) and 6.54 to 21.11 mg sialic acid/ml at the end of shelf-life (120 days). For milk beverages were observed ranges between 11.12 to 24.25, 15.74 to 24.73 g of sialic acid/ml and from 17.19 to 26.49 mg sialic acid/ml respectively for the beginning, 60 and 120 days of the shelf-life. The proteolysis rate in UHT milk and milk beverage increased during the shelflife and is detectable after 60 days of the shelf-life. The practice of open the package did not influence the -casein proteolysis.(AU)

A proteólise do leite e da bebida láctea UAT durante a estocagem é um dos fatores mais importantes na determinação da validade comercial desses. O teor de glicomacropeptídeos (GMP) é um marcador das ações proteolíticas no leite, pois é capaz de indicar indiretamente a integridade da -caseína. Assim, no presente trabalho, objetivou-se avaliar a proteólise da -caseína do leite e da bebida láctea UAT ao longo do período de validade. Foram avaliadas 60 amostras de cinco diferentes marcas comerciais de cada produto através do método espectrofotométrico para quantificação de ácido siálico. Para o leite UAT foi observado o intervalo entre 3,83 e 15,27 g de ácido siálico/mL no início do período de validade (D0), 5,95 a 17,16 g de ácido siálico/mL 60 dias após o início do período (D60) e 6,54 a 21,11 g de ácido siálico/mL no final do período, ou seja, 120 dias após (D120) a produção. Já para as bebidas lácteas foram observados intervalos entre 11,12 e 24,25; 15,74 e 24,73 e 17,19 e 26,49 g de ácido siálico/mL para o dia inicial, 60 e 120 dias do período de validade, respectivamente. Os valores obtidos para o índice proteolítico do leite e bebida láctea UAT aumentaram gradativamente ao longo do período de validade dos produtos, sendo tal diferença detectável a partir de sessenta dias. Não foi observada influência da abertura da embalagem na proteólise da k-caseína.(AU)

SELEÇÃO DE EXTRATOS DE PLANTAS BRASILEIRAS COM AÇÃO SOBRE A ENZIMA ACETILCOLINESTERASE

A doença de Alzheimer é progressiva, multifatorial, neurodegenerativa e incurável, caracterizada por alterações comportamentais e nas funções cognitivas de memória e aprendizado, que afeta, em geral, pessoas a partir de 60 anos. O tratamento dessa patologia envolve o uso de inibidores da enzima acetilcolinesterase (AChE). A investigação de novos compostos ativos de extratos vegetais é uma alternativa para a introdução de novos fármacos. O objetivo do presente trabalho foi selecionar extratos de plantas brasileiras capazes de inibir a AChE. Para tanto, foi realizada uma triagem a partir de 2.302 extratos vegetais, a fim de se identificar aqueles que continham taninos, por meio da reação com gelatina 1% e acetato de chumbo 10%. Os taninos são interferentes negativos em reações enzimáticas. Desta triagem prévia, 107 extratos vegetais isentos de taninos foram selecionados e submetidos ao ensaio feito a partir do método colorimétrico de Ellman. A partir dessa seleção, apenas sete extratos vegetais apresentaram significativa atividade inibidora da AChE, e foram novamente testados, agora em quatro concentrações diferentes, pelo método quantitativo de Ellman em microplacas, e pelo método qualitativo de Rhee, em cromatografia em camada delgada (CCD) cujo revelador é o reagente de Ellman. Os extratos N631, N713, N1046, N1189, N1447, N2155 e N2266 foram selecionados para serem submetidos a futuros ensaios, através dos quais os componentes ativos serão identificados.

Alzheimer's disease is progressive, multifactorial, neuro degen proliferative and incurable, characterized by behavioral changes and cognitive functions of memory and learning, which affects in general, people from 60 years. The treatment of this condition involves the use of inhibitors of the enzyme acetylcholinesterase (AChE). The investigation of new active compounds from plant extracts is an alternative for the introduction of new drugs. The aim of the present study was to select extracts from Brazilian plants capable of inhibiting the AChE. For this purpose, a screening was carried out from 2,302 plant extracts, in order to identify those that contained tannins, through the reaction with diluted gelatin 1% and lead acetate 10%. Tannins are negative interferers in enzymatic reactions. From this previous screening, 107 tannin-free plant extracts were selected and subjected to an assay based on Ellman's colorimetric method. From this selection, only seven plant extracts showed significant inhibitory activity of the AChE, and were tested again, now in four different concentrations, by the quantitative Ellman method in microplates, and by the qualitative Rhee method, in thin layer chromatography (CCD) whose revealer is Ellman's reagent. The extracts N631, N713, N1046, N1189, N1447, N2155 and N2266 were selected to be submitted to future tests, through which the active components will be identified

Possible heavy metal residues in poultry and their products that are bred around cement industry / Possíveis resíduos de metais pesados na carne de aves domésticas e seus produtos que são criados em torno da indústria de cimento

Industry is an efficient tool for industrial development that is present in human lives and that mobilizes local and regional economies. When inspected from this aspect, industrial regions provide economic and social benefits for the societies. However on the other hand, they leave harmful effects to the environment and they may cause health and safety threats for communities. Mismanaged industrial regions may cause air and water pollution, noise problems and industrial accidents. One of the main purposes of this investigation is to determine the heavy metal (Pb, Cd, Cu, Cr, Co, Mo and Ni) levels in the liver, thigh and chest tissues of the chickens bred around the cement factory in a residential area. It is determined that the heavy metal levels in the livers of poultries bred in these areas are quite high (P 0,01) and also in the heavy metal analyses performed, the values obtained from the samples taken from the egg, thigh and chest tissues of the poultries are specified as high (P 0,01).(AU)

A indústria é uma ferramenta eficiente para o desenvolvimento industrial, que está presente em vidas humanas e que mobiliza a economia local e regional.Quando inspecionados a partir deste aspecto, as regiões industriais proporcionam benefícios econômicos e sociais para as sociedades. No entanto, por outro lado, elas deixam os efeitos nocivos no meio ambiente e podem causarameaças de segurança e saúde para as comunidades. Regiões industriais mal administradas podem causar poluição do ar e da água, problemas de ruído e acidentes industriais. Um dos principais objetivos deste trabalho é determinar os níveis de metais pesados (Pb, Cd, Cu, Cr, Co, Mo e Ni) nos tecidos dofígado, coxas e peito de frangos criados em torno da fábrica de cimento em uma área residencial. Determinou-se que os níveis de metais pesados no fígado de frangos criados nestes domínios são bastante elevados (P <0,01) e também, naanálise de metais pesados realizada, os valores obtidos para as amostras tomadas a partir do ovo, coxa e peito das aves de capoeira são especificados como elevada (P <0,01).(AU)

Possible heavy metal residues in poultry and their products that are bred around cement industry / Possíveis resíduos de metais pesados na carne de aves domésticas e seus produtos que são criados em torno da indústria de cimento

Industry is an efficient tool for industrial development that is present in human lives and that mobilizes local and regional economies. When inspected from this aspect, industrial regions provide economic and social benefits for the societies. However on the other hand, they leave harmful effects to the environment and they may cause health and safety threats for communities. Mismanaged industrial regions may cause air and water pollution, noise problems and industrial accidents. One of the main purposes of this investigation is to determine the heavy metal (Pb, Cd, Cu, Cr, Co, Mo and Ni) levels in the liver, thigh and chest tissues of the chickens bred around the cement factory in a residential area. It is determined that the heavy metal levels in the livers of poultries bred in these areas are quite high (P 0,01) and also in the heavy metal analyses performed, the values obtained from the samples taken from the egg, thigh and chest tissues of the poultries are specified as high (P 0,01).

A indústria é uma ferramenta eficiente para o desenvolvimento industrial, que está presente em vidas humanas e que mobiliza a economia local e regional.Quando inspecionados a partir deste aspecto, as regiões industriais proporcionam benefícios econômicos e sociais para as sociedades. No entanto, por outro lado, elas deixam os efeitos nocivos no meio ambiente e podem causarameaças de segurança e saúde para as comunidades. Regiões industriais mal administradas podem causar poluição do ar e da água, problemas de ruído e acidentes industriais. Um dos principais objetivos deste trabalho é determinar os níveis de metais pesados (Pb, Cd, Cu, Cr, Co, Mo e Ni) nos tecidos dofígado, coxas e peito de frangos criados em torno da fábrica de cimento em uma área residencial. Determinou-se que os níveis de metais pesados no fígado de frangos criados nestes domínios são bastante elevados (P <0,01) e também, naanálise de metais pesados realizada, os valores obtidos para as amostras tomadas a partir do ovo, coxa e peito das aves de capoeira são especificados como elevada (P <0,01).

Application of Scharer's quantitative method for the determination of residual alkaline phosphatase activity in standard Minas / Aplicação do método modificado de Scharer para a determinação quantitativa da atividade de fosfatase alcalina residual em queijo minas padrão

Milk pasteurization is a critical issue in the dairy industry, and failures in this process can affect final product safety. Scharer's enzymatic method is still traditionally used to verify pasteurization efficiency compliance, and it is based on screening for residual alkaline phosphatase in milk. Although several methods are used to quantify enzymatic activity to assess milk pasteurization efficiency, there is a small amount of published data regarding the use of these methods to quantify alkaline phosphatase in cheese. In this study, the Scharer's modified method was used to determine the levels of residual alkaline phosphatase in standard minas cheese, before and after 20 days of ripening. The cheeses were made using raw or pasteurized milk with the addition of different concentrations of raw milk (0; 0.05%; 0.10%; 0.20%; and 0.50%). In the fresh cheese samples, the method showed a sensitivity of only 0.50% with the addition of raw milk to the pasteurized milk used to make cheese. In addition, levels of up 0.20% of raw milk in pasteurized milk, the concentrations of phenol was inferior to 1μg phenol/g of dairy product which is the preconized indicator value for adequate pasteurization.(AU)

A pasteurização do leite é um ponto crítico na indústria de laticínios, e falhas nessa etapa comprometem a segurança do produto. O método enzimático de Scharer é tradicionalmente utilizado na verificação da eficiência da pasteurização e baseia-se na pesquisa da atividade de fosfatase alcalina residual em leite. Embora vários métodos estejam disponíveis para avaliar a eficiência da pasteurização, há um número reduzido de dados publicados baseados na quantificação da atividade da fosfatase alcalina em queijo. Neste estudo, o método modificado de Scharer foi utilizado para determinar os níveis de fosfatase alcalina residual em queijo minas padrão, antes e após 20 dias de maturação. Os queijos foram feitos com leite cru ou com leite pasteurizado com adição de diferentes concentrações de leite cru (0, 0,05%, 0,10%, 0,20% e 0,50%). Nas amostras de queijo fresco, o método apresentou sensibilidade apenas com 0,50% de adição de leite cru ao leite pasteurizado utilizado na fabricação de queijo. Em níveis de adição de até 0,20% de leite cru no leite pasteurizado, as concentrações de fenol se mostraram inferiores a 1μg de fenol/g de produto lácteo, que é o valor preconizado como indicador de pasteurização adequada.(AU)

Magnésio urinário, plasmático e eritrocitário: validação do método de análise por espectrofotometria de absorção atômica com chama / Magnesium contents in urine, plasma and erythrocyte samples: validation of analytical methodology using flame atomic absorption spectrophotometry

Neste estudo foi validada a metodologia de análise de magnésio urinário, plasmático e eritrocitário por espectrofotometria de absorção atômica com chama. As análises foram realizadas em pools de amostras de urina, de plasma e de eritrócitos de humanos. Para a validação, foram considerados os parâmetros de linearidade da curva-padrão, faixa de trabalho, limite de detecção (LD), limite de quantificação (LQ), precisão e exatidão da medição. Os LD e LQ da curva foram, respectivamente, de 0,006 e 0,021 μg/mL de Mg para urina e plasma, e de 0,003 e 0,010 μg/mL de Mg para eritrócitos. A faixa linear de trabalho para determinação de Mg foi entre 0,05 e 0,5 μg/mL de Mg, e as curvas-padrão apresentaram coeficientes de correlação maiores do que 0,99, que demonstram a linearidade da metodologia. As precisões intra e interensaio superiores a 90% foram consideradas adequadas. As recuperações obtidas, usando-se materiais de referência certificados, foram de 101% e de 97%, respectivamente, em urina e plasma. As médias de recuperação por adição de padrão foram de 87% para urina e eritrócitos e de 91% para plasma. A metodologia avaliada foi linear, sensível, seletiva, precisa e exata; portanto, são confiáveis os resultados obtidos.(AU)

This study aimed at validating the methodology for analyzing magnesium contents in urine, plasma, and erythrocytes samples by atomic absorption spectrophotometry. Pools of human urine, plasma, and erythrocytes samples were analyzed. The standard curve linearity, linear response range, detection limit (DL), quantitation limit (QL), precision, and accuracy of measurement were determined. DL and QL values were, respectively, 0.006 and 0.021 μg/mL of Mg for urine and plasma, and 0.003 and 0.010 μg/mL of Mg for erythrocytes. The linear response ranged from 0.05 to 0.5 μg/mL of Mg, and the standards curves showed the correlation coefficients higher than 0.99, which demonstrated the linearity of the methodology. Intra- and inter-assay precisions above 90% were considered adequate. The accuracy obtained with certified reference materials for urine and plasma was 101% and 97%, respectively. The average recoveries found by adding the standard were 87% for urine and erythrocytes, and 91% for plasma. Therefore, the evaluated methodology showed to be linear, sensitive, specific, precise and accurate, and the obtained results were reliable.(AU)

Ciclamato de sódio em refrigerantes de baixa caloria / Sodium cyclamate in low calorie soft drinks

O objetivo deste estudo foi determinar os teores de ciclamato de sódio nos refrigerantes de baixa caloria mais consumidos no país. Os refrigerantes de baixa caloria dos tipos cola, guaraná, laranja, limão e uva foram analisados seguindo-se a técnica descrita por Sjõberg e Alanko (1987), com algumas modificações. Os ensaios de recuperação da metodologia foram realizados em três níveis de fortificação, com recuperação média de 92,5 e 110,3, respectivamente, para cola e guaraná, e o desvio-padrão relativo foi de 3,7. Os teores médios de ciclamato de sódio variaram de 27,1 ± 1,1 (cola A) a 127,3 ± 1,5 mg.100 mL-1 (limão B), o que mostra que a ingestão diária aceitável do edulcorante pode ser facilmente excedida com o consumo de refrigerantes de baixa caloria. Todas as amostras de refrigerantes apresentaram teores de ciclamato de sódio superiores àqueles indicados no rótulo, com 12,9 (cola A) a 19,0 (limão B) acima do declarado. Dos 18 refrigerantes analisados, apenas quatro apresentaram teor médio de ciclamato de sódio de acordo com o limite máximo de 40 mg.100 mL-1 de bebida, permitido pela legislação brasileira; e os demais apresentaram variação de 74,8 (laranja) a 218,3 (limão B) acima do limite permitido.(AU)

Atividade antioxidante e correlação com fenólicos totais em genótipos de Urucum (Bixa orellana L) / Antioxidant activity and correlation with total phenolicin genotypes of Annatto (Bixa orellana L)

O estudo objetivou quantificar os fenóis totais em cinco genótipos de Bixa orellana (Piave vermelha, Piavevermelha gigante, CPATU 0060, Bico-de-pato I e Peruana Paulista). Os extratos foram obtidos em etanol PAe solução hidroetanólica (80:20,v.v-1), sendo os resultados obtidos comparados a dois antioxidantes sintéticos, butil-hidroxitolueno (BHT) e ácido gálico (GAE). Os teores de fenólicos totais dos genótipos analisados apresentaram valores médios de 776,02 a 1.498,48 mg GAE.100 g-1 de amostra (peso seco) e 297,08 a 450,97 mgGAE.100 g-1, para os extratos hidroetanólicos e etanólicos, respectivamente. A medida da atividade antioxidante para os extratos hidroetanólicos variou entre 48,31 e 70,10. Valores inferiores foram obtidos para atividade antioxidante dos extratos etanólicos (18,91 a 35,26). Os resultados evidenciaram que o genótipo CPATU0060 apresentou teores de fenólicos totais e atividade antioxidante superiores aos demais genótipos analisados. Foi observada baixa correlação entre as variáveis de fenóis totais e atividade antioxidante para os extratos hidroetanólicos (R= -0,5328) e etanólicos (R= 0,4115). Considerando a ampla aplicação do urucum na indústria de alimentos e farmacêutica, os resultados sugerem que seus grãos podem ser considerados uma fonte potencial de antioxidante natural.(AU)

DESENVOLVIMENTO E VALIDAÇÃO DE MÉTODOS PARA CARACTERIZAÇÃO E QUANTIFICAÇÃO DE MARBOFLOXACINO EM FORMULAÇÃO FARMACÊUTICA DE USO ANIMAL

As fluoroquinolonas são fármacos antibióticos de primeira escolha no tratamento de infecções de diversos tipos de infeções sejam elas de origem cutânea, intestinal, genitourinária ou respiratórias. Esses fármacos são empregados tanto na medicina humana como na animal, por possuírem amplo espectro de ação e dificilmente desenvolvem resistência bacteriana. No emprego destes fármacos em medicina veterinária, vários princípios ativos tem sido desenvolvidos, porem estudos de controle de qualidade sejam das matérias-primas como de formulações tem sido pouco explorados. Um exemplo de fármaco da classe de uso animal que apresenta poucos relatos na literatura, mas que se encontra disponível no mercado é o Marbofloxacino, uma fluoroquinolona de segunda geração, utilizada somente em medicina veterinária. O presente estudo realizado teve como objetivo o desenvolvimeto e validação de métodos analíticos para determinação de Marbofloxacino em comprimidos palatáveis de uso animal. Dois métodos foram desenvolvidos e validados, sendo um por Espectrofotometria UV e o outro por CLAE, bem como a caracterização da matéria-prima por CCD, IV, UV e técnica termoanalíticas de TG/DTG e DSC. Os Resultados para a validação por Espectrofotometria UV foram: curva de calibração de 5,0 a 15,0 g/mL com coeficiente correlação de 0,9990, repetibilidade com teor de 101,60 % e desvio padrão relativo inferior a 1%, e a média das recuperações de 101,53 ± 0,4, robustez dentro da faixa de 90-110% e variação menor que 2% e limites de detecção e quantificação de 0,033 e 0,625 respectivamente. Já os resultados da validação por CLAE foram: curva de 2,0 a 18,0 g/mL com valor de correlação de 0,9991, repetibilidade com teor de 104,40% desvio padrão relativo inferior a 1%, a média das recuperações foi de 98,74 ± 0,55, robustez também dentro da faixa preconizada e limites de detecção e quantificação de 0,81 e 0,25 respectivamente. Com os resultados obtidos em ambos os métodos, e a realização da análise estatística conclui-se que os métodos desenvolvidos são válidos com significância estatística e podem ser empregados no Controle de Qualidade de Marbofloxacino nesta forma farmacêutica.

Fluoroquinolones are the first choice of antibiotics drugs in the treatment of the various kinds of infections, will they have cutaneous, intestinal, genitourinary or respiratory origin. These drugs are used in human and animals medicine, because they possess a large spectrum of action and hardly develop bacterial resistance. The use of these drugs, in veterinary medicine, it has been developed several active principles, however quality control studies such as raw materials or formulations has been little explored. It is an example of an animal drug class use that has few reports in the literature, but which is available on the market is Marbofloxacino, a fluoroquinolone of second generation, currently used, only in veterinary medicine. This study aimed to the development and validation of analytical methods for determination of Marbofloxacino in palatable tablets of animal use. Two methods were developed and validated, one was by UV spectrophotometry and the other by HPLC, as well as the characterization of the raw material by CCD, IV, UV and thermoanalytical technique TG / DTG and DSC. The results for the validation by UV spectrophotometry were: calibration curve from 5,0 to 15,0 g / ml with correlation coefficient of 0.9990, repeatability with 101.60% content and relative standard deviation less than 1%, and the average recoveries of 101.53 ± 0.4, ruggedness in the range of 90-110% and the variation less than 2% and limits of detection and quantification of 0.033 and 0.625 respectively. The HPLC validation results were: curve of 2,0 to 18,0 ug / ml with 0.9991 correlation value, standard deviation of 104,40% content, relative standard deviation less than 1%, the average recovery was 98,74 ± 0.55, robustness was also within the recommended range and limits of detection and quantification of 0.81 and 0.25 respectively. With the results obtained by both methods, and statistical analysis it is concluded that the developed methods are valid with statistical significance and can be used in Marbofloxacino Quality Control in this dosage form.

EVALUATION OF ACID DIGESTION PROCEDURES TO ESTIMATE MINERAL CONTENTS IN MATERIALS FROM ANIMAL TRIALS

RESUMO PALMA, Malber Nathan Nobre, M. Sc., Universidade Federal de Viçosa, fevereiro de 2015. Avaliação de procedimentos de digestão ácida para estimar o conteúdo de minerais em materiais de experimentação animal. Orientador: Edenio Detmann. Coorientadores: Sebastião de Campos Valadares Filho e Mário Fonseca Paulino. A presente dissertação foi elaborada com base em dois experimentos para avaliação do teor de minerais em diferentes materiais oriundos de experimentos com animais. No primeiro experimento avaliou-se a acurácia das concentrações de cromo em fezes de bovinos, utilizando-se técnicas de digestão com diferentes razões de ácido nítrico e perclórico em um ou dois passos de digestão. As técnicas avaliadas foram: razão ácido nítrico e perclórico 2:1, 3:1, e 4:1 v/v em um ou dois passos de digestão; e ácido nítrico e perclórico 3:1 v/v sem sódio molibdato em um passo de digestão. A quantificação de cromo foi realizada por espectrofotometria de absorção atômica. A acurácia das técnicas foi avaliada através de amostras-padrão com conteúdo conhecido de cromo (0, 2, 4, 6, 8 e 10 g de cromo por kg de fezes), produzidos a partir de fezes de cinco animais, pelo ajuste de um modelo de regressão linear simples dos valores estimados sobre os valores reais de cromo. A melhor recuperação de cromo foi obtida usando a razão 3:1 v/v, com uma etapa de digestão e molibdato de sódio como catalisador. O uso de molibdato de sódio como catalisador deve ser visto como obrigatório. Conclui-se que a concentração de cromo nas fezes de bovino é quantificada com acurácia pela técnica de digestão com ácidos nítrico e perclórico na razão de 3:1 v/v em um passo de digestão com molibdato de sódio como catalisador. No segundo experimento seis técnicas de digestão ácida foram avaliadas utilizando diferentes relações de ácido nítrico e perclórico (2:1, 3:1 e 4:1 v/v) em uma ou duas etapas de digestão para estimar a concentração de cálcio, fósforo, magnésio e zinco em amostras de carcaça, osso, excreta, concentrado, forragem e fezes. Não houve efeito direto ou interação da relação ácido nítrico e perclórico e número de etapas de digestão na concentração de magnésio e zinco. Houve interação significativa entre o tipo de amostra e a relação ácido nítrico e perclórico para concentração de cálcio e fósforo. Houve maior recuperação de cálcio e fósforo nas amostras de ossos utilizando-se solução de digestão de 2:1 v/v em comparação a 3:1 e 4:1 v/v. A relação entre os ácidos não influenciou a concentração de cálcio e fósforo na carcaça, excreta, concentrado, forragem e fezes. O número de etapas de digestão não afetou a concentração de mineral. A concentração de cálcio, fósforo, magnésio e zinco vii em carcaça, excreta, concentrado, forragens e fezes pode ser estimada utilizando-se solução com relação entre ácido nítrico e perclórico 4:1 v/v em uma etapa de digestão. No entanto, para as amostras de ossos, solução com relação entre ácido nítrico e perclórico 2:1 v/v em uma etapa de digestão é recomendada.

ABSTRACT PALMA, Malber Nathan Nobre, M. Sc., Universidade Federal de Viçosa, February 2015. Evaluation of acid digestion procedures for estimating the mineral content in materials from animal trials. Adviser: Edenio Detmann. Co-Advisers: Sebastião de Campos Valadares Filho and Mário Fonseca Paulino. This dissertation was based on two experiments which were carried out to evaluate mineral contents in different materials from animal trials. In the first one, it was evaluated the accuracy of chromium contents in cattle feces using digestion techniques with different nitric to perchloric acid ratios and one or two digestion steps. The following techniques were evaluated: ratio of nitric to perchloric acid 2:1, 3:1, and 4:1 v/ v in a one- or two-step digestion; and nitric to perchloric acid 3:1 v/v without sodium molybdate in a one-step digestion. The chromium quantifications were carried out using atomic absorption spectrophotometry. The accuracy of the estimates was evaluated through standard samples containing known chromium contents (0, 2, 4, 6, 8 and 10 g of chromium per kg of feces) which were produced from feces obtained from five animals. Accuracy evaluation was performed by adjusting a simple linear regression equation of estimated chromium concentrations on actual concentrations. The chromium recovery closest to unity was obtained using the ratio 3:1 v/v, with one-step digestion and sodium molybdate as catalyst. The utilization of sodium molybdate as catalyst was found mandatory. It could be concluded that the chromium content in cattle feces is accurately evaluated using digestion procedures based on nitric to perchloric acids ratio of 3:1 v/v in a one-step digestion with sodium molybdate as catalyst. In the second experiment, acid digestion procedures were evaluated using different nitric to perchloric acid ratios and one- or two-step digestion to estimate the concentration of calcium, phosphorus, magnesium, and zinc in samples of carcass, bone, excreta, concentrate, forage, and feces. Six procedures were evaluated: ratio of nitric to perchloric acid at 2:1, 3:1, and 4:1 v/v in a one- or two-step digestion. There were no direct or interaction effects of nitric to perchloric acid ratio or number of digestion steps on magnesium and zinc contents. Calcium and phosphorus contents presented a significant interaction between sample type and nitric to perchloric acid ratio. Digestion solution of 2:1 v/v provided greater recovery of calcium and phosphorus from bone samples than 3:1 and 4:1 v/v ratio. Different acid ratios do not affect calcium or phosphorus contents in carcass, excreta, concentrate, forage, and feces. Number of digestion steps did not affect ix mineral content. Estimated concentration of calcium, phosphorus, magnesium, and Zn in carcass, excreta, concentrated, forage, and feces samples can be performed using digestion solution of nitric to perchloric acid 4:1 v/v in a one-step digestion. However, for bone samples, digestion solution of nitric to perchloric acid 2:1 v/v in a one-step digestion is recommended.

AVALIAÇÃO DA INTERAÇÃO DAS PROTEÍNAS DO OVO (OVALBUMINA E OUTRAS) COM OS ANTIBIÓTICOS TETRACICLINA, OXITETRACICLINA E CLOROTETRACICLINA EMPREGANDO TÉCNICAS ESPECTROSCÓPICAS E ELETROFORESE

A ovalbumina é a proteína majoritária da clara do ovo, sendo amplamente utilizada na alimentação, principalmente na suplementação nutricional e na composição de diferentes alimentos. As tetraciclinas constituem uma classe de antibióticos de amplo espectro empregada em veterinária na criação de animais e produção de aves. No entanto, o seu uso abundante e indiscriminado pode resultar na presença de resíduos deste medicamento em alimentos como o ovo, causando efeitos tóxicos, além da possibilidade de reações alérgicas. Este trabalho teve como objetivo estudar a interação da ovalbumina (comercial e in natura) com os antibióticos tetraciclina, oxitetraciclina e clorotetraciclina empregando fluorescência molecular, absorção molecular e eletroforese. A partir dos dados obtidos por fluorescência foram calculadas as constantes de SternVolmer, ligação, o número de sítios de ligação (n) entre as três tetraciclinas (TC, OTC e CTC) e a ovalbumina, e por fim os parâmetros termodinâmicos (G, H e S) em diferentes condições de pH. Os valores de Kb para a TC variaram de 2,11 (± 0,21) a 25,8 (± 0,30) x104 L mol-1, para a OTC variaram de 3,96 (± 0,07) a 58,4 (± 0,50) x104 L mol-1 e por fim para a CTC variaram de 2,45 (± 0,13) a 32,4 (± 0,40) x104 L mol-1 a depender do valor do pH do meio. O número de sítios de ligação em todas as condições foi próximo à unidade. O mecanismo de interação foi estudado e os dados experimentais demonstraram que o processo de interação entre a ovalbumina e as diferentes tetraciclinas ocorreu através de quenching estático com formação de complexos não-fluorescentes. Os dados termodinâmicos calculados indicaram que as interações ocorrem espontaneamente (G < 0), e as forças de ligação predominantes são ligações de hidrogênio, forças de Van der Waals e interações eletrostáticas, a depender do valor de pH do meio. A partir dos estudos por fluorescência sincronizada foi possível observar que houve deslocamentos para os resíduos de tirosina apenas em pH 7,4 independente da tetraciclina e da origem da ovalbumina. Para os resíduos de triptofano foram observados deslocamentos em todos os valores de pH independente do ligante e da origem da ovalbumina. Através dos estudos por fluorescência 3D observou-se que houve redução na intensidade de fluorescência dos picos 2 e 3 para as proteínas comercial e in natura independente da tetraciclina adicionada. A partir dos estudos por FRET foi possível calcular as distâncias intermoleculares entre a ovalbumina e as três tetraciclinas estudadas em diferentes condições de pH, que variaram de 2,95 a 3,52 nm. Com os estudos de competição observou-se que houve competição pelo sítio de ligação da ovalbumina apenas para o íon Mg(II) para a TC. Para a OTC, houve competição pelo sítio de ligação da proteína entre todos os íons avaliados. Por fim, para CTC, a adição dos íons Ca(II), Mg(II) e Cu(II) provocou competição entre estes íons e a CTC pela proteína. Através dos estudos por UV-Vis verificou-se que houve a formação de complexos entre a ovalbumina e as diferentes tetraciclinas avaliadas neste trabalho, independente do pH do meio. A partir dos estudos por eletroforese foi observado um deslocamento na banda protéica para a proteína nativa (indicando aumento da mobilidade eletroforética) em função da presença dos ligantes. A partir dos estudos por ressonância magnética nuclear de hidrogênio (RMN 1H) observou-se que houve deslocamento e alargamento dos sinais para todos os hidrogênios da molécula de tetraciclina, e os tempos de relaxação (T1) para os átomos de hidrogênio da tetraciclina reduziram na presença da ovalbumina. Por fim, com base nos resultados obtidos empregando diferentes técnicas espectroscópicas e eletroforese foi possível avaliar a interações de três tetraciclinas em diferentes condições de pH.

The albumin is the major protein from egg white, being widely used in the food, mainly in nutritional supplementation and in different food composition. Tetracyclines are a class of antibiotics broad spectrum employed in animal husbandry and poultry production. However, its abundant use and indiscriminate may result in the presence of residues this medicine in foods like egg causing toxic effects, in addition the possibility of allergic reactions. The aim of this work was evaluation interaction between ovalbumin (commercial and in natura) with tetracycline, oxitetracycline and chlortetracycline employing molecular fluorescence, molecular absorption and electrophoresis. Through the results obtained by fluorescence were calculated Stern-Volmer´s constant, biding, binding sites number between the three tetracyclines and ovalbumin, finally, the thermodynamic parameters (G, H and S) under different conditions of pH. Kb values for TC variety from 2.11 (± 0.21) to 25.8 (± 0.30) x104 L mol-1 for OTC variety from 3.96 (± 0.07) to 58.4 (± 0.50) x104 L mol-1. And finally, the values for CTC variety from 2.45 (± 0.13) to 32.4 (± 0.40) x104 L mol-1. Depending on the pH of the resource. The number of the binding sites in all conditions was close to unity. The interaction mechanism was studied and the experimental results showed that interaction process between ovalbumin and differents tetracyclines occurred by static quenching with non-fluorescent complexes formation. The thermodynamics parameters calculated indicated that interactions occur spontaneously (G < 0), and bonding forces predominant are hydrogen bonds, Van der Waals force and electrostatic interactions, depending on the pH of the resource. From the studies by synchronous fluorescence was observed shift to the tyrosine residues only pH 7.4 independent of tetracycline and ovalbumin source. For tryptophan residues were observed shift in all values of pH independent of ligand and source of ovalbumin. Through the studies by 3D fluorescence was observed decreased the fluorescence intensity of peaks 2 e 3 for commercial and egg white proteins independent of tetracycline added. From studies by FRET was possible to calculate the intermolecular distances between ovalbumin and three tetracycline studied under different conditions of pH, variety from 2.95 to 3.52 nm. With competition studies was observed there was competition for ovalbumin binding site only by ion Mg (II) and TC. For OTC, there was competition for the binding site of the protein among all ions evaluated. Finally, for CTC, the addition of ions Ca (II), Mg (II) e Cu (II) caused competition between these ions and CTC by protein. Through UV-Vis studies, there was the formation of complexes between ovalbumin and distintic tetracyclines evaluated in this work, independent of pH and source. From electrophoresis studies was observed shift of the protein band for the native protein (indicating increase electrophoretic mobility) due to the presence of the ligands. The nuclear magnetic resonance of hydrogen (NMR 1H) studies indicated that signals of all hydrogens tetracycline molecule had shift and enlargement and the relaxation time (T1) decreasing in the presence of the ovalbumin.

Métodos de análise de compostos fenólicos em vinhos / Methods of analysis of phenolic compounds in wine

O estudo dos compostos fenólicos das uvas e dos vinhos é imprescindível na busca pela qualidade. Existem várias metodologias descritas para análise de fenóis totais, antocianinas, compostos não f1avonóides e taninos, cada uma com vantagens e desvantagens. Nesse trabalho de revisão foram analisadas as metodologias por espectrofotometria disponíveis, uma vez que elas são muito utilizadas, especialmente pela industria vinícola. Algumas metodologias foram desenvolvidas há muitos anos e com o aumento do conhecimento das estruturas dos compostos fenólicos, é possível observar confusões nas nomenclaturas. Outras sofreram revisões e algumas modificações foram propostas por diversos autores. Dessa forma, para uma correta análise dos resultados é fundamental o conhecimento das frações analisadas por cada metodologia, bem como possíveis interferentes.(AU)

The study of phenolic compounds of grapes and wines is essential in the search for quality. There are several methods described for analysis of total phenols, anthocyanin, flavonoid and tannin compounds; each one has advantages and disadvantages. In this review, only available spectrophotometric methods will be discussed, once they are still widely used, especially in the wine industry. Some methodologies have been developed many years ago and, with the increasing knowledge of phenolic compounds' structures, some nomenclature misunderstandings have been observed. Other methodologies suffered some changes and several revisions were proposed by many authors. So, for a correct analysis of the results, the understanding of the fractions analyzed by each method and possible interferences is critical.(AU)