Assessment of the microbiological quality of pattern minas cheese commercialized in Uberlândia and Patos de Minas, Minas Gerais / Avaliação microbiológica de queijo minas padrão comercializado em Uberlândia e Patos de Minas, Minas Gerais

Pattern minas cheese is a product developed with pasteurized milk, fermented with mesophilic cultures, and with the final addition of rennet. This cheese undergoes an artisanal maturation process and possesses a firm shell of yellowish color and striking and acidic flavor. Our study objective was to evaluate the microbiological quality of pattern minas cheese. We collected 40 samples from two micro regions (Uberlândia and Patos de Minas) of the Triângulo Mineiro and Alto Paranaíba mesor regions of the State of Minas Gerais, Brazil. The microbiological test results were recorded as counts of enterobacteria, Escherichia coli, coliforms at 35°C, coagulase-positive Staphylococcus and Salmonella spp. In the Patos de Minas micro region, the results were 45%, 35%, 20%, and 20% higher than 103 CFU/g for the counts of enterobacteria, Escherichia coli, coliforms at 35°C, and Staphylococcus coagulase-positive, respectively. Five percent of the analyzed samples were positive for Salmonella spp. in the Uberlândia micro region. Based on the findings of the microbiota in the cheese analyzed from the micro regions (Uberlândia and Patos de Minas), we concluded that the hygiene conditions in the manufacturing, handling, transport, and storage stages were precarious, requiring the implementation of Good Manufacturing Practices (GMP) systems, including Hazard Analysis and Critical Control Points (HACCP).(AU)

O queijo minas padrão é um produto elaborado com leite pasteurizado, fermentado com culturas mesófilas e adição de coalho. Esse queijo passa por um processo de maturação artesanal, possui uma casca firme de cor amarelada e sabor ácido. O presente trabalho avaliou a qualidade microbiológica de queijo minas padrão comercializado em duas microrregiões (Uberlândia e Patos de Minas) da mesorregião do Triângulo Mineiro e Alto Paranaíba do estado de Minas Gerais, Brasil. Foram examinadas 40 amostras de queijo. Os ensaios microbiológicos foram contagens de enterobactérias, Escherichia coli, coliformes a 35 oC, Staphylococcus coagulase positiva e pesquisa de Salmonella spp. Na microrregião de Patos de Minas, os resultados foram de 45%, 35%, 20% e 20% superiores a 103 CFU/g para as contagens de enterobactérias, Escherichia coli, coliformes a 35oC e Staphylococcus coagulase positiva, respectivamente. Cinco por cento das amostras analisadas foram positivas à pesquisa de Salmonella spp. Considerando a microrregião analisada (Uberlândia e Patos de Minas), a conclusão obtida foi que na região estudada, as condições de higiene nas etapas de fabricação, manuseio, transporte e armazenamento do queijo minas padrão são precárias, sendo necessária a implementação de sistemas de Boas Práticas de Fabricação (GMP), incluindo Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (HACCP).(AU)

Assessment of the microbiological quality of pattern minas cheese commercialized in Uberlândia and Patos de Minas, Minas Gerais / Avaliação microbiológica de queijo minas padrão comercializado em Uberlândia e Patos de Minas, Minas Gerais

Pattern minas cheese is a product developed with pasteurized milk, fermented with mesophilic cultures, and with the final addition of rennet. This cheese undergoes an artisanal maturation process and possesses a firm shell of yellowish color and striking and acidic flavor. Our study objective was to evaluate the microbiological quality of pattern minas cheese. We collected 40 samples from two micro regions (Uberlândia and Patos de Minas) of the Triângulo Mineiro and Alto Paranaíba mesor regions of the State of Minas Gerais, Brazil. The microbiological test results were recorded as counts of enterobacteria, Escherichia coli, coliforms at 35°C, coagulase-positive Staphylococcus and Salmonella spp. In the Patos de Minas micro region, the results were 45%, 35%, 20%, and 20% higher than 103 CFU/g for the counts of enterobacteria, Escherichia coli, coliforms at 35°C, and Staphylococcus coagulase-positive, respectively. Five percent of the analyzed samples were positive for Salmonella spp. in the Uberlândia micro region. Based on the findings of the microbiota in the cheese analyzed from the micro regions (Uberlândia and Patos de Minas), we concluded that the hygiene conditions in the manufacturing, handling, transport, and storage stages were precarious, requiring the implementation of Good Manufacturing Practices (GMP) systems, including Hazard Analysis and Critical Control Points (HACCP).(AU)

O queijo minas padrão é um produto elaborado com leite pasteurizado, fermentado com culturas mesófilas e adição de coalho. Esse queijo passa por um processo de maturação artesanal, possui uma casca firme de cor amarelada e sabor ácido. O presente trabalho avaliou a qualidade microbiológica de queijo minas padrão comercializado em duas microrregiões (Uberlândia e Patos de Minas) da mesorregião do Triângulo Mineiro e Alto Paranaíba do estado de Minas Gerais, Brasil. Foram examinadas 40 amostras de queijo. Os ensaios microbiológicos foram contagens de enterobactérias, Escherichia coli, coliformes a 35 oC, Staphylococcus coagulase positiva e pesquisa de Salmonella spp. Na microrregião de Patos de Minas, os resultados foram de 45%, 35%, 20% e 20% superiores a 103 CFU/g para as contagens de enterobactérias, Escherichia coli, coliformes a 35oC e Staphylococcus coagulase positiva, respectivamente. Cinco por cento das amostras analisadas foram positivas à pesquisa de Salmonella spp. Considerando a microrregião analisada (Uberlândia e Patos de Minas), a conclusão obtida foi que na região estudada, as condições de higiene nas etapas de fabricação, manuseio, transporte e armazenamento do queijo minas padrão são precárias, sendo necessária a implementação de sistemas de Boas Práticas de Fabricação (GMP), incluindo Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (HACCP).(AU)

Mycobacteria in Minas cheese commercialized in open fairs in São Paulo, Brazil / Mycobacteria em queijos tipo Minas comercializados em feiras-livres de São Paulo, Brasil

Mycobacterium bovis is the causative agent of bovine tuberculosis, a disease that affects dairy herds throughout the Brazilian territory, constituting a neglected zoonosis transmitted by raw milk and its derivatives. In this study, we evaluated the presence of M. bovis and other mycobacteria in Minas cheese obtained from open fairs in the city of São Paulo between 2012 and 2013. Samples (n = 133) were decontaminated using hexa-cetylpyridinium chloride and seeded on StonebrinkLeslie medium. The isolates were submitted to molecular identification by TB Multiplex PCR targeting the 16S rRNA gene and amplicon nucleotide sequencing. From 16 cheese samples (12%), we obtained 26 putative colonies of Mycobacterium spp., none of which belonged to any of the Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium, or Mycobacterium intracellulare complexes. Phylogenetic analysis showed that sample sequences were grouped in a clade that includes only non-tuberculous mycobacteria with proximity to sequences obtained from Mycobacterium novocastrense (3 sequences), Mycobacterium holsaticum (1 sequence), andMycobacterium elephantis (2 sequences). Although no epidemiological evidence was found regarding the importance of oral transmission of mycobacteria in healthy people, their importance in the immunosuppressed population remains uncertain.(AU)

Mycobacterium bovis é o agente da tuberculose bovina, doença que acomete o rebanho em todo território brasileiro e é uma negligenciada zoonose transmitida pelo leite e seus derivados. Este trabalho avaliou a presença de M. bovis e outras micobactérias, em queijo minas meia-cura, obtidos em feiras-livres na cidade de São Paulo, entre os anos de 2012 e 2013. As amostras (n = 133) foram descontaminadas pelo método HPC (hexa-cetyl-pyridinium chloride) e semeadas em meio Stonebrink Leslie. Os isolados foram submetidos à identificação molecular por PCR TB multiplex, pesquisando-se o gene 16S rRNA, e ao sequenciamento nucleotídico. Dezesseis amostras (12%) possuiam 26 colônias sugestivas de Mycobacterium spp., mas nenhuma delas pertencia aos complexos Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium e Mycobacterium intracellulare. A análise filogenética mostrou que todas as amostras estavam agrupadas em clados que incluem apenas micobactérias não tuberculosas (MNT), sendo que algumas possuiam proximidade com sequências obtidas de Mycobacterium novocastrense (3 sequências), Mycobacterium hosaticum (1 sequência) e Mycobacterium elephantis (2 sequências). Embora no momento não haja evidência epidemiológica da importância da transmissão oral das micobactérias pra indivíduos saudáveis, sua importância na população imunossuprimida ainda é incerta.(AU)

Mycobacteria in Minas cheese commercialized in open fairs in São Paulo, Brazil / Mycobacteria em queijos tipo Minas comercializados em feiras-livres de São Paulo, Brasil

Mycobacterium bovis is the causative agent of bovine tuberculosis, a disease that affects dairy herds throughout the Brazilian territory, constituting a neglected zoonosis transmitted by raw milk and its derivatives. In this study, we evaluated the presence of M. bovis and other mycobacteria in Minas cheese obtained from open fairs in the city of São Paulo between 2012 and 2013. Samples (n = 133) were decontaminated using hexa-cetylpyridinium chloride and seeded on Stonebrink­Leslie medium. The isolates were submitted to molecular identification by TB Multiplex PCR targeting the 16S rRNA gene and amplicon nucleotide sequencing. From 16 cheese samples (12%), we obtained 26 putative colonies of Mycobacterium spp, none of which belonged to any of the Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium, or Mycobacterium intracellulare complexes. Phylogenetic analysis showed that sample sequences were grouped in a clade that includes only non-tuberculous mycobacteria with proximity to sequences obtained from Mycobacterium novocastrense (3 sequences), Mycobacterium holsaticum (1 sequence), and Mycobacterium elephantis (2 sequences). Although no epidemiological evidence was found regarding the importance of oral transmission of mycobacteria in healthy people, their importance in the immunosuppressed population remains uncertain.(AU)

Mycobacterium bovis é o agente da tuberculose bovina, doença que acomete o rebanho em todo território brasileiro e é uma negligenciada zoonose transmitida pelo leite e seus derivados. Este trabalho avaliou a presença de M. bovise outras micobactérias, em queijo minas meia-cura, obtidos em feiras-livres na cidade de São Paulo, entre os anos de 2012 e 2013. As amostras (n = 133) foram descontaminadas pelo método HPC (hexa-cetyl-pyridinium chloride) e semeadas em meio Stonebrink Leslie. Os isolados foram submetidos à identificação molecular por PCR TB multiplex, pesquisando-se o gene 16S rRNA, e ao sequenciamento nucleotídico. Dezesseis amostras (12%) possuiam 26 colônias sugestivas de Mycobacterium spp, mas nenhuma delas pertencia aos complexos Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium e Mycobacterium intracellulare. A análise filogenética mostrou que todas as amostras estavam agrupadas em clados que incluem apenas micobactérias não tuberculosas (MNT), sendo que algumas possuiam proximidade com sequências obtidas de Mycobacterium novocastrense (3 sequências), Mycobacterium hosaticum(1 sequência) e Mycobacterium elephantis (2 sequências). Embora no momento não haja evidência epidemiológica da importância da transmissão oral das micobactérias pra indivíduos saudáveis, sua importância na população imunossuprimida ainda é incerta.(AU)

Mycobacteria in Minas cheese commercialized in open fairs in São Paulo, Brazil / Mycobacteria em queijos tipo Minas comercializados em feiras-livres de São Paulo, Brasil

Mycobacterium bovis is the causative agent of bovine tuberculosis, a disease that affects dairy herds throughout the Brazilian territory, constituting a neglected zoonosis transmitted by raw milk and its derivatives. In this study, we evaluated the presence of M. bovis and other mycobacteria in Minas cheese obtained from open fairs in the city of São Paulo between 2012 and 2013. Samples (n = 133) were decontaminated using hexa-cetylpyridinium chloride and seeded on StonebrinkLeslie medium. The isolates were submitted to molecular identification by TB Multiplex PCR targeting the 16S rRNA gene and amplicon nucleotide sequencing. From 16 cheese samples (12%), we obtained 26 putative colonies of Mycobacterium spp., none of which belonged to any of the Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium, or Mycobacterium intracellulare complexes. Phylogenetic analysis showed that sample sequences were grouped in a clade that includes only non-tuberculous mycobacteria with proximity to sequences obtained from Mycobacterium novocastrense (3 sequences), Mycobacterium holsaticum (1 sequence), andMycobacterium elephantis (2 sequences). Although no epidemiological evidence was found regarding the importance of oral transmission of mycobacteria in healthy people, their importance in the immunosuppressed population remains uncertain.

Mycobacterium bovis é o agente da tuberculose bovina, doença que acomete o rebanho em todo território brasileiro e é uma negligenciada zoonose transmitida pelo leite e seus derivados. Este trabalho avaliou a presença de M. bovis e outras micobactérias, em queijo minas meia-cura, obtidos em feiras-livres na cidade de São Paulo, entre os anos de 2012 e 2013. As amostras (n = 133) foram descontaminadas pelo método HPC (hexa-cetyl-pyridinium chloride) e semeadas em meio Stonebrink Leslie. Os isolados foram submetidos à identificação molecular por PCR TB multiplex, pesquisando-se o gene 16S rRNA, e ao sequenciamento nucleotídico. Dezesseis amostras (12%) possuiam 26 colônias sugestivas de Mycobacterium spp., mas nenhuma delas pertencia aos complexos Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium e Mycobacterium intracellulare. A análise filogenética mostrou que todas as amostras estavam agrupadas em clados que incluem apenas micobactérias não tuberculosas (MNT), sendo que algumas possuiam proximidade com sequências obtidas de Mycobacterium novocastrense (3 sequências), Mycobacterium hosaticum (1 sequência) e Mycobacterium elephantis (2 sequências). Embora no momento não haja evidência epidemiológica da importância da transmissão oral das micobactérias pra indivíduos saudáveis, sua importância na população imunossuprimida ainda é incerta.

Determining the minimum ripening time of artisanal Minas cheese, a traditional Brazilian cheese

Physical, physicochemical, and microbiological changes were monitored in 256 samples of artisanal Minas cheese from eight producers from Serro region (Minas Gerais, Brazil) for 64 days of ripening to determine the minimum ripening time for the cheese to reach the safe microbiological limits established by Brazilian legislation. The cheeses were produced between dry season (April–September) and rainy season (October–March); 128 cheeses were ripened at room temperature (25 ± 4 °C), and 128 were ripened under refrigeration (8 ± 1 °C), as a control. No Listeria monocytogenes was found, but one cheese under refrigeration had Salmonella at first 15 days of ripening. However, after 22 days, the pathogen was not detected. Seventeen days was the minimum ripening time at room temperature to reduce at safe limits of total coliforms > 1000 cfu.g−1), Escherichia coli and Staphylococcus aureus (> 100 cfu.g−1) in both periods of manufacture. Otherwise under refrigeration, as expected, the minimum ripening time was longer, 33 days in the dry season and 63 days in the rainy season. To sum up, we suggest that the ripening of artisanal Minas cheese be done at room temperature, since this condition shortens the time needed to reach the microbiological quality that falls within the safety parameters required by Brazilian law, and at the same time maintain the appearance and flavor characteristics of this traditional cheese.(AU)

Microbiological aspects of the biofilm on wooden utensils used to make a Brazilian artisanal cheese

The artisanal Minas cheese is produced from raw cow's milk and wooden utensils were employed in its manufacture, which were replaced by other materials at the request of local laws. This substitution caused changes in the traditional characteristics of cheese. Due to the absence of scientific studies indicating the microbial composition of biofilms formed on wooden forms, tables and shelves used in these cheese production, the present work evaluated the counts of Staphylococcus aureus, Escherichia coli, coliforms at 32 °C, yeasts, presumptive mesophilic Lactobacillus spp. and Lactococcus spp. in these biofilms, milk, whey endogenous culture and ripened cheese in two traditional regions: Serro and Serra da Canastra. Also, we checked for the presence of Salmonella sp. and Listeria monocytogenes in the ripened cheeses. The ultra structure of the biofilms was also assessed. Counts above legislation (> 2 log cfu/mL) for the pathogens evaluated were found in milk samples from both regions. Only one shelf and one form from Serro were above limits proposed (5 cfu/cm² for S. aureus and E. coli and 25 cfu/cm² for coliforms) in this study for contaminants evaluated. In Canastra, few utensils presented safe counting of pathogens. There was no Salmonella sp. and Listeria monocytogenes in the cheeses after ripening. Thus, the quality of the cheese is related to improving the microbiological quality of milk, implementation and maintenance of good manufacturing practices, correct cleaning of wooden utensils, and not its replacement.

Propriedades probióticas in vitro de Lactobacillus spp. isolados de queijos minas artesanais da Serra da Canastra - MG / In vitro probiotic properties of Lactobacillus spp. isolated from Minas artisanal cheese from Serra da Canastra - MG

O objetivo deste estudo foi determinar o potencial probiótico in vitro de Lactobacillus spp. isolados de queijos minas artesanais da Serra da Canastra, considerando-se o antagonismo entre amostras isoladas frente a microrganismos indicadores, a susceptibilidade a antimicrobianos, a sensibilidade ao ácido gástrico e a sensibilidade a sais biliares. Todas as bactérias ácido-lácticas testadas apresentaram resistência ao ácido gástrico (pH 2,0) e aos sais biliares (0,3%), bem como atividade antagonista contra Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Salmonella enterica var. Typhimurium, Enterococcus faecalis e bactérias ácido-lácticas isoladas dos próprios queijos - Lactobacillus plantarum (D27) e Lactobacillus rhamnosus (B25). Todas as amostras foram sensíveis à eritromicina e tetraciclina e resistentes à ciprofloxacina, gentamicina, oxacilina, estreptomicina e vancomicina. L. plantarum (B17) apresentou melhor potencial probiótico, pois obteve resultados satisfatórios em todas as propriedades avaliadas. Mais estudos são necessários para verificar a presença e a capacidade de transmissão de genes de resistência antimicrobiana a outros microrganismos e para avaliar o potencial dos microrganismos in vivo. As bactérias selecionadas poderão ser utilizadas na elaboração de queijos em que sejam mantidos o sabor e a tradição do queijo minas artesanal do estado de Minas Gerais.(AU)

The aim of this study was to determine some in vitro probiotic features of Lactobacillus spp. isolated from Minas artisanal cheese from Serra da Canastra in order to select some bacteria for future production of safer cheeses keeping their natural flavor and tradition. The evaluated properties were antagonism against indicator microorganisms, antimicrobial susceptibility and also sensitivity to gastric acid and to bile salts. All lactic acid bacteria tested were resistant to gastric acid (pH 2.0) and bile salts (0.3%). Antagonistic activities were detected against Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Salmonella entericavar. Typhimurium, Enterococcus faecalis and other lactic bacteria isolated from the same cheese - Lactobacillus plantarum (D27) and Lactobacillus rhamnosus (B25). All samples were sensitive to the antimicrobials erythromycin, tetracycline and resistant to ciprofloxacin, gentamycin, oxacillin, streptomycin and vancomycin. L.plantarum (B17) presented the best probiotic potential. Further studies are needed to verify the presence and the capacity of transmission of antimicrobial resistance genes to other microorganisms and evaluate the in vivo probiotic potential of the selected microorganisms.(AU)

The influence of ripening period length and season on the microbiological parameters of a traditional Brazilian cheese

The ripening process of Serro Minas cheese, one of the most popular cheeses produced with raw milk in Brazil, was studied over the course of 60 days of ripening during dry and rainy seasons. Brazilian legislation prohibits the production of cheese from raw milk unless it was submitted to a maturation period greater than 60 days. However Minas Serro cheese is sold within a few days of ripening. A total of 100 samples of Serro cheese were obtained from five farms, 50 samples were collected during the dry season (winter in Brazil) and 50 samples were collected during the rainy season (summer in Brazil). From each farm, ten cheeses were collected during each season after two days of ripening. Our results showed high levels of total and fecal coliforms at the beginning of the ripening period (approximately 4 Log MPN/g with 3 days of ripening) that decreased with 60 days of ripening reaching almost 1.5 Log MPN/g. Contamination by coagulase-positive staphylococci was reduced by the end of the ripening period. Salmonella spp. was not detected. The staphylococcal enterotoxins B and C were detected in 1% and 4% of the cheeses, respectively, after 30 days of ripening. These results suggest that the ripening process was not effective in eliminating staphylococcal enterotoxins from the cheese. However, none of the investigated strains of Staphylococcus spp. isolated from Serro cheese produced enterotoxins A, B, C or D. The high pathogen and coliform levels at the beginning of the ripening process for the cheese produced during both seasons indicate the need for improvement of the sanitation of the manufacturing conditions.(AU)

Application of Scharer's quantitative method for the determination of residual alkaline phosphatase activity in standard Minas / Aplicação do método modificado de Scharer para a determinação quantitativa da atividade de fosfatase alcalina residual em queijo minas padrão

Milk pasteurization is a critical issue in the dairy industry, and failures in this process can affect final product safety. Scharer's enzymatic method is still traditionally used to verify pasteurization efficiency compliance, and it is based on screening for residual alkaline phosphatase in milk. Although several methods are used to quantify enzymatic activity to assess milk pasteurization efficiency, there is a small amount of published data regarding the use of these methods to quantify alkaline phosphatase in cheese. In this study, the Scharer's modified method was used to determine the levels of residual alkaline phosphatase in standard minas cheese, before and after 20 days of ripening. The cheeses were made using raw or pasteurized milk with the addition of different concentrations of raw milk (0; 0.05%; 0.10%; 0.20%; and 0.50%). In the fresh cheese samples, the method showed a sensitivity of only 0.50% with the addition of raw milk to the pasteurized milk used to make cheese. In addition, levels of up 0.20% of raw milk in pasteurized milk, the concentrations of phenol was inferior to 1μg phenol/g of dairy product which is the preconized indicator value for adequate pasteurization.(AU)

A pasteurização do leite é um ponto crítico na indústria de laticínios, e falhas nessa etapa comprometem a segurança do produto. O método enzimático de Scharer é tradicionalmente utilizado na verificação da eficiência da pasteurização e baseia-se na pesquisa da atividade de fosfatase alcalina residual em leite. Embora vários métodos estejam disponíveis para avaliar a eficiência da pasteurização, há um número reduzido de dados publicados baseados na quantificação da atividade da fosfatase alcalina em queijo. Neste estudo, o método modificado de Scharer foi utilizado para determinar os níveis de fosfatase alcalina residual em queijo minas padrão, antes e após 20 dias de maturação. Os queijos foram feitos com leite cru ou com leite pasteurizado com adição de diferentes concentrações de leite cru (0, 0,05%, 0,10%, 0,20% e 0,50%). Nas amostras de queijo fresco, o método apresentou sensibilidade apenas com 0,50% de adição de leite cru ao leite pasteurizado utilizado na fabricação de queijo. Em níveis de adição de até 0,20% de leite cru no leite pasteurizado, as concentrações de fenol se mostraram inferiores a 1μg de fenol/g de produto lácteo, que é o valor preconizado como indicador de pasteurização adequada.(AU)

Influência do fermento natural sobre características microbiológicas, físico-químicas e perfil de textura do queijo minas artesanal do campo das vertentes

O fermento natural tradicionalmente conhecido como pingo é amplamente utlizado na fabricação de queijos Minas artesanais. Ao mesmo é atribuído o papel de um dos principais agentes que confere identidade a esse alimento. Tal premissa implica que sem o fermento natural haveria menor diversidade de queijos dentre as regiões e diante disso o uso do fermento natural tornou-se obrigatório para o queijo Minas artesanal. Todavia é preciso testar cientificamente essa premissa para comprovar a necessidade de utilização desse fermento e dar respaldo a legislação vigente. Diante disso objetivou-se com este trabalho investigar o efeito da adição do fermento natural sobre as características microbiológicas, físico-químicas e perfil de textura dos queijos Minas artesanais da Região do Campo das Vertentes. Para isso, antes do experimento, fez-se uma revisão bibliográfica para buscar na literatura científica estudos correlatos ao objetivo supracitado. Sob uma perspectiva contrária, estudos mostram a existência de patógenos e alteradores nesse fermento o que abre a possibilidade para que o mesmo comprometa a qualidade dos queijos. Para o experimento foram coletadas amostras de fermento natural de diferentes propriedades da região e levadas para a produção dos queijos com a utilização do fermento e sem o mesmo. As análises foram realizadas nos tempos: 7, 14, 21, 28 e 35 dias, com três repetições. Os resultados mostraram que o fermento exerceu algum efeito inibitório em grupos microbianos de queijos Minas artesanais dessa região. Todavia essa diferença não determina ação positiva ou negativa para os queijos. A continuidade dos estudos é necessária dada à obrigatoriedade da utilização do fermento e sob as condições estudadas não foi verificada a necessidade da sua utilização.

The natural yeast traditionally known as "pingo" is widely used in the manufacture of artisanal Minas cheeses. It is also given the role of one of the main agents that confers identity to cheeses. This premise implies that without the natural starter there would be less diversity of cheeses from the regions and before this the use of natural yeast became obligatory for the Minas artisanal cheese. However, it is necessary to scientifically test this premise to prove the need to use this yeast and to support the current legislation. The objective of this work was to investigate the effect of the addition of natural starter on the microbiological, physico-chemical and texture characteristics of the artisanal Minas Gerais cheese from the Campo das Vertentes region. For this, a bibliographical review was made to search in the scientific literature for studies related to the aforementioned objective. From a contrary perspective, studies show the existence of pathogens and alterers in this yeast which opens the possibility for the same to compromise the quality of the cheeses. For the experiment, samples of natural yeast from different properties of the region were collected and taken to produce the cheeses with and without the yeast. The analyzes were performed at the times: 7, 14, 21, 28 and 35 days, with three replicates. The results showed that the yeast exerted some inhibitory effect on microbial groups of artisanal Minas Gerais cheeses. However this difference does not determine positive or negative action for the cheeses. Continuity of studies is necessary given the mandatory use of yeast and under the conditions studied the need for its use has not been verified.

Identification of Staphylococcus spp. isolated during the ripening process of a traditional minas cheese / Identificação de Staphylococcus spp. isolados durante o processo de maturação de um queijo-de-minas tradicional

The population dynamics of Staphylococcus spp. was studied during the ripening of Canastra Minas cheese at three farms located in the State of Minas Gerais, Brazil. The presence of coagulase (coa), thermonuclease (nuc), and enterotoxin (sea, seb, sec, and sed) genes was investigated in Staphylococcus strains isolated during the 60-day cheese-ripening period. The presence of the staphylococcal enterotoxins A, C, and D was also investigated in the cheese samples. Cheese samples that were matured for 0, 7, 15, 30, and 45 days presented staphylococci counts from 10³ to 10(8)cfu/g. All isolates considered coagulase-positive by physiological tests had the coa gene. However, no association was observed between the results obtained with biochemical tests and those obtained by PCR using gene-specific primers for coagulase-negative strains. Coagulase and thermonuclease genes occurred simultaneously in 41.3 percent of Staphylococcus spp. tested. None of the investigated Staphylococcus strains expressed enterotoxins SEA, SEB, SEC, and SED. Enterotoxins A, C, and D were not detected in any of the cheese samples.(AU)

Estudou-se a dinâmica das populações de Staphylococcus spp. durante a maturação do queijo Canastra, em três fazendas localizadas no estado de Minas Gerais. A presença dos genes que codificam para a produção das enzimas coagulase (coa), termonuclease (nuc) e produção de enterotoxinas (sea, seb, sec e sed), em linhagens de Staphylococcus isoladas durante os 60 dias de maturação do queijo foi analisada. Também foi investigada a presença de enterotoxina estafilocócica A, C e D nas amostras de queijo. As amostras de queijo com 0, 7, 15, 30 e 45 dias de maturação apresentaram contagens de Staphylococcus spp. entre 10³ e 10(8)ufc / g. Todos os isolados coagulase positivo nos testes fisiológicos apresentaram o gene coa. Não foi observada associação entre os resultados obtidos com os testes bioquímicos e aqueles obtidos com a PCR usando iniciadores gene-específicos para linhagens coagulase negativa. Os genes da coagulase e termonuclease ocorreram simultaneamente em 41,3 por cento dos Staphylococcus spp. testados. Nenhum dos isolados de Staphylococcus apresentou os genes que codificam para a produção das enterotoxinas SEA, SEB, SEC ou SED. As enterotoxinas A, C ou D não foram detectadas em nenhuma das amostras de queijo analisadas.(AU)

ELABORAÇÃO DE PRODUTOS LÁCTEOS PROBIÓTICOS E AVALIAÇÃO DOS EFEITOS ANTIBACTERIANOS FRENTE A PATÓGENOS

Probióticos são definidos como microrganismos vivos que, quando administrados e quantidades adequadas, conferem benefícios à saude do consumidor. Além disso, possuem capacidade de reduzir ou inibir a contaminação por microrganismos deteriorantes e/ou patogênicos, devido à produção de bacteriocinas, ácido acético, lático, peróxido de hidrogênio e de outras substâncias antimicrobianas. Os derivados lácteos são as principais fontes de probióticos, considerando queijos e sobremesas lácteas em menor proporção. Considera-se de grande importância o estudo do efeito de probióticos sobre a inibição de patógenos, visto que o leite e seus derivados têm sido relatados como alimentos veiculadores desses microrganismos. Diante do exposto, objetivou-se no presente trabalho: avaliar a viabilidade das cepas probióticas Lactobacillus acidophillus e Lactobacillus casei em sobremesa láctea sabor chocolate e queijo Minas Frescal, respectivamente, além da inibição dessas cepas frente a patógenos alimentares; avaliar os efeitos antibacterianos in vitro de Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus casei e cultura mista frente a patógenos e a capacidade de formação de biofilme de STEC O157:H7 em superfície de aço inoxidável. Com base nos resultados, demonstrou-se que tanto a sobremesa láctea, quanto o queijo Minas Frescal foram considerados boa matriz para o desenvolvimento das cepas probióticas e de patógenos; tanto o Bifidobacterium bifidum quanto a cultura mista exerceram atividades antagonistas frente à patógenos in vitro e esta ação foi diretamente correlacionada à produção de ácidos orgânicos e consequente diminuição do pH do meio. Em relação à formação de biofilme, houve uma redução somente de E. coli no sobrenadante de L. casei não ajustado, pela influência do pH. Conclui-se que as cepas probióticas reduziram a contagem de importantes patógenos alimentares nos produtos elaborados, mas não a níveis seguros. Portanto, a utilização de probióticos na fabricação dos produtos não pode ser considerada como uma ferramenta única, e sim complementar, no que se refere à inocuidade dos alimentos. Palavras-chave: probióticos, patógenos alimentares, sobremesa láctea, queijo Minas Frescal, fatores antibacterianos, biofilme

Probiotics are defined as live microorganisms that, when administered in adequate amounts, confer a health benefit on the host. Moreover, they have the ability to reduce or inhibit the contamination by spoilage micro-organisms and / or pathogenic due to bacteriocin production, acetic acid, lactic acid, hydrogen peroxide and other antimicrobial substances. The dairy products are major sources of probiotics, considering cheeses and dairy desserts to a lesser extent. It is considered of great importance to study the effect of probiotics on the inhibition of pathogens, since milk and its derivatives have been reported as backers foods such microorganisms. In this light, the aim in the present work: to evaluate the viability of the probiotic strains Lactobacillus acidophilus and Lactobacillus casei in milk chocolate dessert taste and Minas cheese, respectively, and the inhibition of these strains against food pathogens; evaluate the in vitro antibacterial effects of Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus casei and forward mixed culture pathogens and the biofilm formation of STEC O157:H7 in stainless steel surface. Based on the results, it was demonstrated that the dairy dessert and the Minas Frescal cheese were considered good matrix for the development of probiotic strains and pathogens; Bifidobacterium bifidum and the mixed culture exerted antagonists front activities to pathogens in vitro, and this action was directly correlated to the production of organic acids and consequent decrease of pH. Regarding the formation of biofilm, a reduction of E. coli was observed only in the supernatant of L. casei not adjusted for the influence of pH. It was concluded that the probiotic strains reduced the major food pathogen counts in finished products, but not to safe levels. Therefore, the use of probiotics in the manufacture of the products can not be regarded as a single tool, but complementary with regard to food safety. Keywords: probiotics, food pathogens, milk dessert, Minas cheese, antibacterial factors, biofilm

Bactérias do acido láctico e leveduras associadas com o queijo-de-minas artesanal produzido na região da Serra do Salitre, Minas Gerais / Lactic acid bacteria and yeasts associated with the artisanal Minas cheese produced in the region of Serra do Salitre, Minas Gerais

Em 10 fazendas da região da Serra do Salitre, MG, foram coletadas amostras de leite, soro fermentado (pingo), coalhada e queijo frescal para avaliar a microbiota de bactérias láticas e leveduras presentes. Uma diversidade menor de bactérias láticas foi observada durante a produção do queijo quando comparada à de leveduras. As espécies de bactérias láticas mais freqüentes foram Lactococcus lactis, Enterococcus spp., Enterococcus faecalis e Streptococcus agalactiae e de leveduras foram Debaryomyces hansenii e Kluyveromyces lactis. Apenas as populações de Enterococcus spp., Enterococcus faecalis e Leuconostoc mesenteroides apresentaram aumento significativo durante a produção do queijo. As espécies de bactérias láticas e leveduras encontradas nos diferentes substratos estudados podem ser responsáveis pelas características de aroma e sabor do queijo artesanal da Serra do Salitre.(AU)

Samples of milk, curd, cheese whey, and cheese were collected in 10 farms located at the region of Serra do Salitre, Minas Gerais state. These samples were studied in relation to their lactic acid bacteria and yeast populations. The diversity of lactic acid bacteria species was lower than the diversity of yeasts in these samples. The isolated lactic acid bacteria were Lactococcus lactis, Enterococcus spp., Enterococcus faecalis, and Streptococcus agalactiae; and the yeasts were Debaryomyces hansenii and Kluyveromyces lactis. Only the species Enterococcus spp., Enterococcus faecalis, and Leuconostoc mesenteroides showed an increase in their populations during the production of the artisanal cheese. Lactic acid bacteria and yeasts found in this study could be responsible by the sensorial characteristics of the artisanal cheese produced in the region of Serra do Salitre.(AU)

Avaliação da qualidade microbiológica do queijo-de-minas artesanal do Serro-MG / Microbiological quality of artisanal minas cheese, manufactured in the region of Serro-MG

Avaliaram-se a qualidade microbiológica do queijo-de-minas artesanal do Serro e a variação da microbiota do queijo recém-fabricado e no último dia de validade, após estocagem sob as condições recomendadas no rótulo. Foram analisadas 40 amostras de queijo, sendo 20 analisadas frescas, imediatamente após a coleta, e 20 no último dia de validade, após estocagem em câmara fria a 10ºC. As amostras foram analisadas para coliformes a 35ºC e 45ºC, Staphylococcus coagulase positiva, Salmonella spp. e Listeria monocytogenes. Trinta e sete amostras (92,5 por cento) encontraram-se impróprias para o consumo humano, de acordo com os parâmetros estabelecidos pela resolução: RDC ANVISA nº12/01, sendo a principal causa de condenação a contagem de Staphylococcus coagulase positiva. Nenhuma das amostras analisadas apresentou contaminação por Salmonella sp. ou Listeria monocytogenes. As contagens de Staphylococcus coagulase positiva dos queijos frescos foram mais altas (P<0,01) que as dos queijos analisados no último dia da validade(AU)

The microbiological quality of artisanal minas cheese produced in the region of Serro-MG was evaluated. Cheeses were analyzed fresh and at the end of the shelf life, under specific storage conditions (30 days, 10ºC). Forty samples of minas cheese were analyzed, twenty still fresh, and 20 after storage at 10ºC. The microbiological analyses were counts of fecal and total coliforms, and Staphylococcus coagulase positive; and search of Salmonella sp. and Listeria monocytogenes. Twenty-seven samples (92.5 percent) were in disagreement with the Brazilian Standard, Resolution nº 12 of January 12, 2001, from ANVISA (National Health Surveillance Agency), and Staphylococcus coagulase positive was the major contaminant. No sample was contaminated by Salmonella sp. or Listeria monocytogenes. During the storage, there was a decrease of countings in the population of Staphylococcus coagulase positive (P<0.01)(AU)

Efeito do processamento sobre as características físico-químicas de queijos artesanais produzidos na região do Serro, MG / Effect of processing on the physicochemical characteristics of artisanal cheeses produced in the region of Serro, MG

O presente estudo surgiu a partir da necessidade de caracterização do Queijo Minas Artesanal a fim de padronizar a tecnologia nas regiões tradicionais do Estado de Minas Gerais. Foram avaliados os efeitos dos diferentes processos de fabricação de três queijarias da Região do Serro sobre suas características físico-químicas. Conclui-se que há diferenças na composição dos queijos e, algumas delas são devidas às variações das etapas de fabricação. Sugere-se um estudo mais detalhado das etapas de fabricação, a fim de padronizar os queijos artesanais produzidos na região do Serro, melhorando o padrão e a qualidade dos mesmos.(AU)

The present study appeared starting from the need of characterization of Minas artisanal Cheese in order to standardize the technology in the traditional areas of the State of Minas Gerais. They were evaluatedthe effects of the different processes in production of three cheese farms of the Serro-MG on their physicochemical characteristics. It was conclude that there are differences in the composition of the cheeses and, some of them are due to the variations of the production stages. It suggests more detailed study of the production stages, in order to standardize the craft cheeses produced in the area of the Serro-MG, improving the pattern and the quality of the same ones. (AU)

Enumeração de coliformes fecais e presença de Salmonella sp. em queijo Minas

There were submitted to the fecal coliforms enumeration and Samonella sp. search 168 samples of "Minas" cheese varieties (20 white, 48 "canastra" and 100 standardized), collected in Belo Horizonte, Brazil, from 1995 to 1996. There were purchased cheeses with and without Federal Inspection Service (FIS) register, in order to evaluate microbiological quality difference. However, it was verified that 90.0% of the "Minas" white cheese, 81.2% of the "canastra Minas" and 52.0% of the standardized "Minas" presented high fecal coliforms counts, which were superior to the inspection allowed values. There was no significant statistical difference among FIS registered and not registered cheeses concerning "Minas" white and standardized cheeses microbiological analysis.

Foram submetidas à contagem de coliformes fecais e pesquisa de Salmonella sp. 168 amostras de variedades de queijo Minas (20 frescal, 48 canastra e 100 padronizado) coletadas em Belo Horizonte no período de 1995 a 1996. Foram adquiridos queijos com e sem registro no Serviço de Inspeção Federal (SIF) para avaliar a diferença de qualidade microbiológica. Os resultados evidenciaram ausência de Salmonella sp. em todas as amostras de queijo. Entretanto, verificou-se que 90% das amostras de queijo Minas frescal, 81,2% de Minas canastra e 52% de Minas padronizado apresentavam elevada contagem de coliformes fecais, sendo essas superiores aos valores permitidos para inspeção. Não houve diferença estatística significativa entre os queijos com e sem SIF com relação aos resultados das análises microbiológicas de queijo Minas frescal padronizado.

Avaliação de ensaios analíticos para detecção de coliformes fecais em queijo Minas

There were submitted to fecal coliforms enumeration, according to the most probable number (MPN/g) method, 168 samples of "Minas" cheese varieties (20 white, 48 "canastra" and 199 standardized), collected in Belo Horizonte, Brazil. In order to comparing different assays under high temperature, there was used EC broth isolated, and EC broth and tryptophane broth in parallel. With the aim of indol search, it was carried out an assay for beta-D-glucuronidase in indol production in fluorocult lauryl sulphate broth. The results did not show significant statistical difference among the three approaches used for fecal coliforms research, considering the acceptance indexes established by legal standards for "Minas" cheese inspection. The feasibility for beta-D-glucuronidase assay in fluorocult lauryl sulphate broth, coupled with results confidence and time required (reduction from 96 to up to 48h), suggest it as a preference method for fecal coliforms enumeration in "Minas" cheese.

Foram submetidas à pesquisa de coliformes fecais, utilizando-se a técnica do número mais provável (NMP/g), 168 amostras de variedades de queijo Minas (20 frescal, 48 canastra e 100 padronizado) coletadas em Belo Horizonte. Para a comparação de diferentes ensaios em temperatura elevada, utilizou-se o caldo EC isoladamente, e caldos EC e triptofano em paralelo. Visando à pesquisa de indol foi realizado ensaio para confirmação de produção de beta-D-glucuronidase e indol em caldo fluorocult lauril sulfato. Os resultados demonstraram não haver diferença estatística significativa entre as três metodologias utilizadas para a pesquisa de coliformes fecais, considerando os índices de aceitação definidos pelos padrões legais de inspeção de queijo Minas. A facilidade de execução do ensaio da beta-D-glucuronidase em caldo fluorocult lauril sulfato, associada à confiabilidade dos resultados e demanda de tempo (redução de 96 para até 48h), permitem sugeri-lo como método de escolha para enumeração de coliformes em queijo Minas.

Occurrence of coagulase positive - Staphylococci in fresh and cured types Minas cheese sold at open free market of Goiânia-GO / Ocorrência de Staphylococcus coagulase positiva em queijos Minas tipos frescal e padrão comercializados nas feiras-livres de Goiânia-GO

Minas cheese is widely consumed in Brazil. This cheese is often made in an inadequate and inaccurately way, which could be a cause foodborne disease, and among these microorganisms Staphylococcus aureus plays a crucial role. This study was performed in order to evaluate the cheese commercialized at open free market in Goiânia-GO concerning the contamination by coagulase positive - Staphylococcus. Eighty-four samples (42 samples of fresh Minas cheese and 42 samples of cured one) were collected from 21 open markets set up in different locations of Goiânia, and to conduct this study the local extension was divided into four quadrants. Cheese samples were analyzed for coagulase positive Staphylococcus counting. The mean values of coagulase positive-Staphylococcus counting were 6.3 x 104; 9.3 x 104; 3.8 x 103 and 5.6 x 104 CFU/g in fresh Minas cheese collected from quadrants I, II, III, and IV , respectively. In cured Minas cheese, the mean values of counting were: 1.8 x 105; 1.3 x 103; 1.3 x 104 and 2.5 x102 CFU/g, in samples collected from quadrants I, II, III e IV, respectively. The mean values for coagulase positive- Staphylococcus counting in cured cheese were higher in samples from quadrants I and III. In conclusion Minas cheese samples commercialized at open market located in Goiânia-GO present high counting of coagulase positive-Staphylococcus, and the occurrence of pathog

O queijo Minas, produto largamente consumido no Brasil, por vezes fabricado de forma inadequada, pode causar intoxicações alimentares. Nesses eventos o Staphylococcus aureus desempenha importante papel. Desenvolveu-se este trabalho com objetivo de determinar a ocorrência de Staphylococcus coagulase positivo em queijos comercializados em feiras-livres de Goiânia-GO. Foram analisadas 84 amostras (42 de queijo Minas frescal e 42 de Minas padrão) oriundas de 21 feiras-livres distribuídas pela cidade de Goiânia, cuja extensão foi dividida em quatro quadrantes para sorteio das feiras. As amostras coletadas foram submetidas à análise para contagem de Staphylococcus coagulase positivo. Os valores médios de contaminação por Staphylococcus coagulase positivo de queijos frescais foram: 6,3 x 104; 9,3 x 104; 3,8 x 103 e 5,6 x 104 UFC/g, respectivamente para os quadrantes I, II, III e IV. Para os queijos Minas padrão, os valores médios foram: 1,8 x 105; 1,3 x 103; 1,3 x 104 Os queijos Minas comercializados em feiras livres de Goiânia/GO apresentam elevadas contagens de Staphylococcus coagulase positivo, que podem representar perigo para o consumidor.

Mycobacteria in Minas cheese commercialized in open fairs in São Paulo, Brazil / Mycobacteria em queijos tipo Minas comercializados em feiras-livres de São Paulo, Brasil

Mycobacterium bovis is the causative agent of bovine tuberculosis, a disease that affects dairy herds throughout the Brazilian territory, constituting a neglected zoonosis transmitted by raw milk and its derivatives. In this study, we evaluated the presence of M. bovis and other mycobacteria in Minas cheese obtained from open fairs in the city of São Paulo between 2012 and 2013. Samples (n = 133) were decontaminated using hexa-cetylpyridinium chloride and seeded on StonebrinkLeslie medium. The isolates were submitted to molecular identification by TB Multiplex PCR targeting the 16S rRNA gene and amplicon nucleotide sequencing. From 16 cheese samples (12%), we obtained 26 putative colonies of Mycobacterium spp., none of which belonged to any of the Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium, or Mycobacterium intracellulare complexes. Phylogenetic analysis showed that sample sequences were grouped in a clade that includes only non-tuberculous mycobacteria with proximity to sequences obtained from Mycobacterium novocastrense (3 sequences), Mycobacterium holsaticum (1 sequence), andMycobacterium elephantis (2 sequences). Although no epidemiological evidence was found regarding the importance of oral transmission of mycobacteria in healthy people, their importance in the immunosuppressed population remains uncertain.

Mycobacterium bovis é o agente da tuberculose bovina, doença que acomete o rebanho em todo território brasileiro e é uma negligenciada zoonose transmitida pelo leite e seus derivados. Este trabalho avaliou a presença de M. bovis e outras micobactérias, em queijo minas meia-cura, obtidos em feiras-livres na cidade de São Paulo, entre os anos de 2012 e 2013. As amostras (n = 133) foram descontaminadas pelo método HPC (hexa-cetyl-pyridinium chloride) e semeadas em meio Stonebrink Leslie. Os isolados foram submetidos à identificação molecular por PCR TB multiplex, pesquisando-se o gene 16S rRNA, e ao sequenciamento nucleotídico. Dezesseis amostras (12%) possuiam 26 colônias sugestivas de Mycobacterium spp., mas nenhuma delas pertencia aos complexos Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium e Mycobacterium intracellulare. A análise filogenética mostrou que todas as amostras estavam agrupadas em clados que incluem apenas micobactérias não tuberculosas (MNT), sendo que algumas possuiam proximidade com sequências obtidas de Mycobacterium novocastrense (3 sequências), Mycobacterium hosaticum (1 sequência) e Mycobacterium elephantis (2 sequências). Embora no momento não haja evidência epidemiológica da importância da transmissão oral das micobactérias pra indivíduos saudáveis, sua importância na população imunossuprimida ainda é incerta.