Cross-genera amplification and identification of Colpodella sp. with Cryptosporidium primers in fecal samples of zoo felids from northeast China / Amplificação cruzada de gêneros e identificação de Colpodella sp. com iniciadores de Cryptosporidium em amostras fecais de zoofilia do nordeste da China

The protozoans include many intracellular human pathogens. Accurate detection of these pathogens is necessary to treat the diseases. In clinical epidemiology, molecular identification of protozoan is considered a more reliable and rapid method for identification than microscopy. Among these protozoans, Cryptosporidium considered being one of the important water-borne zoonotic pathogens and a major cause of a diarrheal disease named cryptosporidiosis in humans, domestic animals, and wild animals. This study was aimed to identify Cryptosporidium in zoo felids (N= 56) belonging to different zoo of China, but accidentlly Colpodella was encountered in the zoo felids sample and phylogenetic data confirmed this unexpected amplification from fecal samples using two-step nested-PCR. Phylogenetic analysis revealed the fact about the specific primers used previously by many researchers and cross-genera amplification. We came to know that genetically sequenced amplicon gives more accurate identification of species. This study suggests more investigation on Colpodella which has been neglected previously but gains the attention of researchers after identified from humans and animals and has been known to correlate with neurological symptoms in patients.

Os protozoários incluem muitos patógenos humanos intracelulares. A detecção acurada desses patógenos é necessária para tratar as doenças. Na epidemiologia clínica, a identificação molecular de protozoários é considerada o método de identificação mais confiável e rápido do que a microscopia. Entre esses protozoários, o Cryptosporidium é considerado um dos importantes patógenos zoonóticos transmitidos pela água e uma das principais causas de uma doença diarreica denominada criptosporidiose em humanos, animais domésticos e selvagens. Este estudo teve como objetivo identificar Cryptosporidium em zoofelídeos (N = 56) pertencentes a diferentes zoológicos da China, mas acidentalmente Colpodella foi encontrada na amostra de zoofelídeos e os dados filogenéticos confirmaram essa amplificação inesperada de amostras fecais usando nested-PCR em duas etapas. A análise filogenética revelou o fato sobre os primers específicos usados anteriormente por muitos pesquisadores e a amplificação entre gêneros. Ficamos sabendo que o amplicon sequenciado geneticamente fornece uma identificação mais acurada das espécies. Este estudo sugere mais investigação sobre Colpodella, que foi negligenciada anteriormente, mas ganha a atenção dos pesquisadores depois de identificada em humanos e animais e é conhecida por se correlacionar com sintomas neurológicos em pacientes.

Cross-genera amplification and identification of Colpodella sp. with Cryptosporidium primers in fecal samples of zoo felids from northeast China / Amplificação cruzada de gêneros e identificação de Colpodella sp. com iniciadores de Cryptosporidium em amostras fecais de zoofilia do nordeste da China

The protozoans include many intracellular human pathogens. Accurate detection of these pathogens is necessary to treat the diseases. In clinical epidemiology, molecular identification of protozoan is considered a more reliable and rapid method for identification than microscopy. Among these protozoans, Cryptosporidium considered being one of the important water-borne zoonotic pathogens and a major cause of a diarrheal disease named cryptosporidiosis in humans, domestic animals, and wild animals. This study was aimed to identify Cryptosporidium in zoo felids (N= 56) belonging to different zoo of China, but accidentlly Colpodella was encountered in the zoo felids sample and phylogenetic data confirmed this unexpected amplification from fecal samples using two-step nested-PCR. Phylogenetic analysis revealed the fact about the specific primers used previously by many researchers and cross-genera amplification. We came to know that genetically sequenced amplicon gives more accurate identification of species. This study suggests more investigation on Colpodella which has been neglected previously but gains the attention of researchers after identified from humans and animals and has been known to correlate with neurological symptoms in patients.(AU)

Os protozoários incluem muitos patógenos humanos intracelulares. A detecção acurada desses patógenos é necessária para tratar as doenças. Na epidemiologia clínica, a identificação molecular de protozoários é considerada o método de identificação mais confiável e rápido do que a microscopia. Entre esses protozoários, o Cryptosporidium é considerado um dos importantes patógenos zoonóticos transmitidos pela água e uma das principais causas de uma doença diarreica denominada criptosporidiose em humanos, animais domésticos e selvagens. Este estudo teve como objetivo identificar Cryptosporidium em zoofelídeos (N = 56) pertencentes a diferentes zoológicos da China, mas acidentalmente Colpodella foi encontrada na amostra de zoofelídeos e os dados filogenéticos confirmaram essa amplificação inesperada de amostras fecais usando nested-PCR em duas etapas. A análise filogenética revelou o fato sobre os primers específicos usados anteriormente por muitos pesquisadores e a amplificação entre gêneros. Ficamos sabendo que o amplicon sequenciado geneticamente fornece uma identificação mais acurada das espécies. Este estudo sugere mais investigação sobre Colpodella, que foi negligenciada anteriormente, mas ganha a atenção dos pesquisadores depois de identificada em humanos e animais e é conhecida por se correlacionar com sintomas neurológicos em pacientes.(AU)

Cross-genera amplification and identification of Colpodella sp. with Cryptosporidium primers in fecal samples of zoo felids from northeast China / Amplificação cruzada de gêneros e identificação de Colpodella sp. com iniciadores de Cryptosporidium em amostras fecais de zoofilia do nordeste da China

Abstract The protozoans include many intracellular human pathogens. Accurate detection of these pathogens is necessary to treat the diseases. In clinical epidemiology, molecular identification of protozoan is considered a more reliable and rapid method for identification than microscopy. Among these protozoans, Cryptosporidium considered being one of the important water-borne zoonotic pathogens and a major cause of a diarrheal disease named cryptosporidiosis in humans, domestic animals, and wild animals. This study was aimed to identify Cryptosporidium in zoo felids (N= 56) belonging to different zoo of China, but accidentlly Colpodella was encountered in the zoo felids sample and phylogenetic data confirmed this unexpected amplification from fecal samples using two-step nested-PCR. Phylogenetic analysis revealed the fact about the specific primers used previously by many researchers and cross-genera amplification. We came to know that genetically sequenced amplicon gives more accurate identification of species. This study suggests more investigation on Colpodella which has been neglected previously but gains the attention of researchers after identified from humans and animals and has been known to correlate with neurological symptoms in patients.

Resumo Os protozoários incluem muitos patógenos humanos intracelulares. A detecção acurada desses patógenos é necessária para tratar as doenças. Na epidemiologia clínica, a identificação molecular de protozoários é considerada o método de identificação mais confiável e rápido do que a microscopia. Entre esses protozoários, o Cryptosporidium é considerado um dos importantes patógenos zoonóticos transmitidos pela água e uma das principais causas de uma doença diarreica denominada criptosporidiose em humanos, animais domésticos e selvagens. Este estudo teve como objetivo identificar Cryptosporidium em zoofelídeos (N = 56) pertencentes a diferentes zoológicos da China, mas acidentalmente Colpodella foi encontrada na amostra de zoofelídeos e os dados filogenéticos confirmaram essa amplificação inesperada de amostras fecais usando nested-PCR em duas etapas. A análise filogenética revelou o fato sobre os primers específicos usados ​​anteriormente por muitos pesquisadores e a amplificação entre gêneros. Ficamos sabendo que o amplicon sequenciado geneticamente fornece uma identificação mais acurada das espécies. Este estudo sugere mais investigação sobre Colpodella, que foi negligenciada anteriormente, mas ganha a atenção dos pesquisadores depois de identificada em humanos e animais e é conhecida por se correlacionar com sintomas neurológicos em pacientes.

Cryptosporidium sp. in cultivated oysters and the natural oyster stock of the state of Maranhão, Brazil / Detecção de Cryptosporidium sp. em ostras de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão, Brasil

This study detected Cryptosporidium spp. in cultivated oysters and the natural oyster stock of the state of Maranhão and determine the elective tissue(s) to examine this protozoan. For this purpose, 200 cultivated oysters were purchased from the municipality of Raposa and another 100 from Paço do Lumiar. Additionally, 100 oysters were extracted from the natural stock of the municipality of Primeira Cruz, thus making up a total of 400 oysters. They were grouped into 80 pools consisting of 5 oysters each. From each pool, the gills and visceral mass were removed to obtain 160 pools, 80 pools for the gill group and another 80 for the visceral mass group. Then, DNA was extracted from each pool using a commercial kit with modifications. Subsequently, the protozoan DNA was detected using nested polymerase chain reaction. With this technique, the DNA of the protozoan under investigation was detected in 2.5% (n = 2/80) of the pools containing gills, with 1.25% of the pools (n = 1/80) belonging to the cultivation group of oysters and the other 1.25% (n = 1/80) to the natural stock. With the results obtained in this study, it was concluded that the analyzed oysters of the genus Crassostrea, from cultivation and natural stock groups, found in the state of Maranhão, were contaminated by Cryptosporidium spp. and may become potential sources of infection in humans and other animals. In addition, the gills are the elective tissue for the study of Cryptosporidium spp. in oysters.

Objetivou-se com o estudo detectar Cryptosporidium sp. em ostras de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão e determinar o(s) tecido(s) eletivo(s) para pesquisa desse protozoário. Para a realização do estudo foram adquiridas 200 ostras de cultivo do município de Raposa e 100 de Paço do Lumiar, além de 100 ostras extraídas de estoque natural do município de Primeira Cruz, totalizando 400 ostras. Estas foram agrupadas em 80 pools constituídos por cinco animais. De cada pool, as brânquias e a massa visceral foram removidas totalizando 160 pools, sendo 80 para o grupo das brânquias e 80 para o grupo de massa visceral. Na sequência, procedeu-se à extração de DNA de cada pool com a utilização de kit comercial com modificações. Posteriormente, realizou-se a detecção do DNA do protozoário por meio da técnica de Nested-PCR. Com a técnica utilizada, foi detectado o DNA do protozoário pesquisado em 2,5% (n=2/80) pools apenas de brânquias, sendo 1,25% pools (n=1/80) oriundos de cultivo e os outros 1,25% (n=1/80) de estoque natural. Com os resultados obtidos nesse estudo, conclui-se que as ostras analisadas do gênero Crassostrea sp., oriundas de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão, estavam contaminadas por Cryptosporidium sp. e podem se reverter em fontes potenciais para seres humanos e outros animais. Para a pesquisa de Cryptosporidium sp. em ostras, as brânquias são o tecido eletivo.

Occurrence of Cryptosporidium in Anglonubian goats in the municipality of Teresina, state of Piauí, Brazil / Ocorrência de Cryptosporidium em cabras da raça Anglonubiana no município de Teresina, estado do Piauí, Brasil

This research aimed to investigate the occurrence of Cryptosporidium and correlate it with types of housing, feces consistency, and physiological parameters related to the reproductive status of Anglo-Nubian goats reared in the State of Piauí, Brazil. A total of 180 fecal samples were collected from 60 non-pregnant and lactating goats with a mean weight of 35 kg, a body condition score of 3.5, and a mean age of three years from an experimental herd at the Federal University of Piauí (UFPI). Oocysts of protozoa of the genus Cryptosporidium could be found in the studied animals using the modified Ziehl-Neelsen technique in fecal smears and the image analysis system to perform morphometry. Each independent variable in the quantitative and qualitative analyses, that is, weight, body condition score (BCS), physiological status (non-pregnant or lactating), feces consistency (normal, pasty, or diarrheal), and floor types (concrete and slatted), was tested with the dependent variable (positive samples, i.e., the presence of Cryptosporidium oocysts). Twenty-four out of the total number of fecal samples were considered positive for the presence of the protozoan, which means that 13.3% of the animals were parasitized. Moreover, 100% of the positive feces samples had normal consistency (firm) and all parasitized animals were reared in pens with a concrete floor. A statistical variation was observed in the BCS of parasitized animals compared to non-parasitized ones (p > 0.0253). The results showed that the occurrence of Cryptosporidium in experimental goats located in the municipality of Teresina, State of Piauí, Brazil, was considered low, requiring sanitary management measures to prevent infection in animals and humans. This is the first report of Cryptosporidium infection in goats in the State of Piauí.

O objetivo desta pesquisa foi investigar a ocorrência de Crypstoporidium e correlacionar com tipos de alojamento, consistência das fezes e parâmetros fisiológicos ligados ao estado reprodutivo de cabras da raça Anglonubiana criadas no estado do Piauí, Brasil. Foram utilizadas 180 amostras de fezes de 60 cabra, com peso médio de 35kg, escore de condição corporal de 3,5, com idade em média de três anos, e cabras vazias e lactantes, de um rebanho experimental da Universidade Federal do Piauí (UFPI). Utilizando-se a técnica de Ziehl-Neelsen modificada em esfregaço fecal e sistema de análise de imagens para a realização da morfometria, foi possível encontrar oocistos de protozoários do gênero Crypstoporidium nos animais estudados. Nas análises quantitativa e qualitativa, cada variável independente: peso, escore de condição corporal (ECC), estado fisiológico (vazia ou lactante), consistência das fezes (normal, pastosa ou diarreica) e tipos de piso (concreto e ripado), foi testada com a variável dependente (amostras positivas, ou seja, presença de oocistos de Cryptosporidium). Do total de amostras fecais analisadas, 24 delas foram consideradas positivas à presença do protozoário, o que significa que 13,3% dos animais estavam parasitados na ocasião da pesquisa. Foi observado que 100% das amostras de fezes positivas apresentaram consistência normal (firme) e que todos os animais parasitados eram criados em aprisco com piso de concreto. Houve uma variação estatística no ECC dos animais parasitados comparados aos não parasitados (p > 0,0253). Os resultados evidenciaram que a ocorrência de Cryptosporidium em caprinos experimentais localizados no município de Teresina, no estado do Piauí, foi considerada baixa, sendo necessária medidas de manejo sanitário para prevenir a infecção nos animais e no homem. Este é o primeiro relato da infecção por Cryptosporidium em cabras no estado do Piauí.

Prevalence of cestodes infection among school children of urban parts of Lower Dir district, Pakistan / Prevalência de infecção de cestóides entre crianças em idade escolar de partes urbanas do distrito de Lower Dir, Paquistão

Tapeworms of zoonotic importance have been described as a leading public health problem. Current research was aim to assess the prevalence of tapeworms among 5-12years school children residing in district Lower Dir, Pakistan from January 2019-December 2019. The wet mount preparation in saline/iodine/methods were used for stool examination. Data was analyzed using appropriate descriptive, static methods. Of the 400 children studied 71.7% were infected with one or more species of intestinal parasites. Single infection of cestode species was found in 69 individuals with 17.2% prevalence and multiple parasitic infections were identified in 19.7% (n=79/400) individuals. The multiple infection were comprised as 10% (n=40) double, 6.75% (n=27) triple and 3% (n=12) quadruple. A total of 9 species of helminths and one species of protozoan infection. Among the helminths Ascaris lumbricoides was the most prevalent 33.1% (n=95), Taenia saginata 22.6% (n=65), hookworm 19.8% (n=57), Hymenolepis nana 18.8% (n=54), Enterobius vermicularis and Hymenolepis diminuta 1.39% (n=4each), Trichuris trichura 1.04% (n=3), Toxocara spp 0.69% (n=2) and Schistosoma japonicum 0.34% (n=1) were reported. One protozoan species was Cryptosporidium spp 0.69% (n=2) in current study. In case of A.lumbricoides, hookworm, E.vermicularis, T.trichura, T.saginata, H.nana and H.diminuta the male children of below 8 years of age were highly infected. Other infections are reported in the same prevalence with slight difference if any. We conclude that there is a need for mass scale campaigns to create awareness regarding health and hygiene in children and the need for development of effective poverty control programs because deworming alone is not adequate to control parasitic infections.

As tênias de importância zoonótica têm sido descritas como um dos principais problemas de saúde pública. A pesquisa atual teve como objetivo avaliar a prevalência de tênias entre crianças em idade escolar de 5 a 12 anos que residem no distrito de Lower Dir, Paquistão, de janeiro de 2019 a dezembro de 2019. Os métodos de preparação para montagem úmida em solução salina/iodo foram usados para exame de fezes. Os dados foram analisados usando métodos descritivos e estáticos apropriados. Das 400 crianças estudadas, 71,7% estavam infectadas com uma ou mais espécies de parasitas intestinais. Infecção única de espécies de cestóides foi encontrada em 69 indivíduos com prevalência de 17,2% e infecções parasitárias múltiplas foram identificadas em 19,7% (n = 79/400) indivíduos. As infecções múltiplas foram compostas por 10% (n = 40) dupla, 6,75% (n = 27) tripla e 3% (n = 12) quádrupla. Um total de 9 espécies de helmintos e uma espécie de infecção por protozoários. Entre os helmintos, Ascaris lumbricoides foi o mais prevalente 33,1% (n = 95), Taenia saginata 22,6% (n = 65), ancilóstomo 19,8% (n = 57), Hymenolepis nana 18,8% (n = 54), Enterobius vermicularis e Hymenolepis diminuta 1,39% (n = 4cada), Trichuris trichura 1,04% (n = 3), Toxocara spp 0,69% (n = 2) e Schistosoma japonicum 0,34% (n = 1). Uma espécie de protozoário foi Cryptosporidium spp 0,69% (n = 2) no estudo atual. No caso de A.lumbricoides, ancilostomíase, E.vermicularis, T.trichura, T.saginata, H.nana e H.diminuta, as crianças do sexo masculino com menos de 8 anos de idade estavam altamente infectadas. Outras infecções são relatadas na mesma prevalência, com ligeira diferença, se houver. Concluímos que há uma necessidade de campanhas em massa para criar consciência sobre saúde e higiene em crianças e a necessidade de desenvolvimento de programas eficazes de controle da pobreza, porque a desparasitação por si só não é adequada para controlar infecções parasitárias.

In vitro and in vivo study of the antiparasitic effect of thymol on poultry drinking water

The current study evaluates the antiparasitic effect of thymol on reducing parasite burden, especially Cryptosporidium load, in poultry drinking water and in improving zootechnical performances of chicks. The first experiment assessed in vitro the anti-cryptosporidiumactivity of NP (thymol-based product) on drinking water samples using microscopic counting. Samples were treated by increasing concentrations of thymol (1, 2 and 4 g L-1of NP). In vivo, chicken wererandomly assigned to three groups (control and chicks consuming treated water with two concentration of thymol (1 and 2 g L-1of NP). Water treatment efficiency was evaluated on the intestinal parasitic load and zootechnical performances of animals (Body weight, body weight gain, food intake and the consumption index). In vitro the anti-cryptosporidium effect was dose dependent (p <0.05; p <0.01; p <0.001). The in vivo test showed that the intestinal parasitic load was significantly lower (p <0.05; p <0.01; p <0.001) in the group treated with 2 g L-1of NP. Additionally, results showed a significant increase (p <0.05; p <0.1; p <0.001) in the body weight and the body weight gain of treated groups during the whole rearing period compared to the control. Furthermore, treated groups represent a lower consumption index compared to the control.(AU)

Parasitos intestinais identificados em pelos de cães em Teresina/Piauí / Intestinal parasites identified in dog hair in Teresina/Piauí

A presença de cães em ambientes domiciliares se tornou bastante comum, porém é preciso manter cuidados com relação aos animais, uma vez que eles podem transmitir patógenos ao homem, causando, assim, doenças zoonóticas; e que uma das formas de transmissão pode ser por ingestão acidental de ovos de parasitos presentes nos pelos. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi avaliar a ocorrência de parasitos intestinais em pelos de cães atendidos em duas clínicas veterinárias do município de Teresina/PI. Os pelos colhidos foram levados ao Laboratório de Parasitologia da UFPI para avaliação e passaram por um processo de lavagem por meio de uma técnica modificada para essa finalidade. De 59 amostras de pelos de cães, 11 foram positivas para helmintos ou protozoários, sendo encontrados ovos da família Taeniidae e do gênero Ancylostoma, além de cistos de Giardia spp. e oocistos de Cryptosporidium spp., importantes parasitos de potencial zoonótico. Uma vez parasitados, os cães podem oferecer risco de contaminação para os humanos, tanto por meio das fezes como por meio dos pelos. Conclui-se que ovos de helmintos da família Taeniidae e do gênero Ancylostoma e os protozoários do gênero Giardia e Cryptosporidium podem ficar aderidos nos pelos da região perianal de cães, sendo que as ocorrências destes últimos parasitos são os primeiros relatos nos pelos dessa espécie animal.

The presence of dogs in domestic environments has become quite common, but it is necessary to maintain care of the animals, since they can transmit pathogens to humans causing zoonotic diseases and one of the forms of transmission can be by accidental ingestion of parasite eggs present in the hairs. The objective of this study was to evaluate the occurrence of intestinal parasites in the hair of dogs attended at two veterinary clinics in the city of Teresina, PI. The collected hairs were taken to the Parasitology Laboratory at UFPI for evaluation and underwent a washing process through a technique modified for this purpose. Of 59 dog hair samples, 11 were positive for helminths or protozoa, being found eggs of the family Taeniidae and the genus Ancylostoma, besides to cysts Giardia spp. and oocysts of Cryptosporidium spp., important zoonotic potential parasites. Once parasitized, the dogs can pose a risk of contamination to humans through their faeces or through their hair. It is concluded that the eggs helminths of the Taeniidae family and of the Ancylostoma genus and the protozoa of the Giardia and Cryptosporidium genus can be adhered to the hairs of the perianal region of dogs, and these last parasites are the first reports in the hair in this animals species.

Validation of a one-tube nested real-time PCR assay for the detection of Cryptosporidium spp. in avian fecal samples / Validação da nested PCR em tempo real em um tubo para detecção de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de aves

Abstract The aim of this study was to validate a one-tube nested real-time PCR assay followed by genetic sequencing to detect and identify Cryptosporidium species and genotypes in birds. A total of 443 genomic DNA extracted from avian fecal samples were analyzed by one-tube nested real-time PCR and conventional nested PCR. By one-tube nested real-time PCR, 90/443 (20.3%) samples were positive for Cryptosporidium spp. In contrast, 36/443 (8.1%) samples were positive for Cryptosporidium spp. by conventional nested PCR. The analytical sensitivity test showed that one-tube nested real-time PCR detects approximately 0.5 oocyst (2 sporozoites) per reaction. An evaluation of analytical specificity did not reveal amplification of microorganisms that commonly present nonspecific amplification with primers used for the diagnosis of Cryptosporidium spp. The repeatability analysis showed the same result in 27 out of 30 samples (90%). As for the reproducibility of one-tube nested real-time PCR, 24 of the 30 samples examined (80%) showed the same result. All the 90 samples amplified by one-tube real-time nested PCR were successfully sequenced, leading to the identification of C. baileyi, C. galli, C. meleagridis, C. proventriculi, and Cryptosporidium avian genotype I. Genetic sequencing of conventional nested PCR amplicons was successful in 10/36 (27.8%) of positive samples.

Resumo O objetivo deste trabalho foi validar um protocolo de nested PCR em tempo real em um tubo (nPCR-TR-1T) seguida de sequenciamento genético para detectar e caracterizar as espécies e genótipos de Cryptosporidium em aves. Um total de 443 amostras de DNA genômico, extraído de amostras fecais de aves, foi analisado pela nPCR-TR-1T e pela nested PCR convencional. Pela nPCR-TR-1T, foi observada positividade para Cryptosporidium spp. de 20,3% (90/443), em contraste com a nested PCR convencional, que apresentou positividade de 8,1% (36/443). O teste de sensibilidade analítica mostrou que a nPCR-TR-1T detecta aproximadamente 0,5 oocisto (2 esporozoítos) por reação. A avaliação da especificidade analítica não revelou amplificação de microrganismos que comumente apresentam amplificação inespecífica com primers utilizados para o diagnóstico de Cryptosporidium spp. O cálculo da repetibilidade evidenciou o mesmo resultado em 27 de 30 amostras (90%). Em relação à reprodutibilidade da nPCR-TR-1T, foi observado o mesmo resultado em 80% (24/30) das amostras examinadas. Foi possível realizar o sequenciamento em todas as 90 amostras amplificadas pela nPCR-TR-1T, com identificação de C. baileyi, C. galli, C. meleagridis, C. proventriculi e Cryptosporidium genótipo I em aves. O sequenciamento dos fragmentos amplificados pela nested PCR convencional foi possível em 10/36 (27,8%) das amostras positivas.

Standardization of molecular techniques for the detection and characterization of intestinal protozoa and other pathogens in humans

Background: The intrinsic sensitivity limitations of basic parasitological methods, along with the particular biological characteristics of parasites, make these methods ineffective to differentiate morphologically indistinguishable species. Molecular detection and characterization techniques could be used to overcome these problems. The purpose of this work was to standardize molecular polymerase chain reaction (PCR) techniques, described in the literature, for the detection and molecular characterization of intestinal protozoa and other pathogens in humans. Methods: DNA was extracted from human or animal feces, previously washed or cultured in Boeck Drbohlav's Modified Medium. DNA extraction was performed with Machery-Nagel extraction kits. The standardization of the PCR, nested-PCR or RFLP techniques was carried out according to the literature. For each molecular technique performed, the sensitivity of the test was determined based on the minimun quantity required of DNA (sensitivity A) and the minimum quantity of life forms that the test detected (sensitivity B). Results: Sensitivity A was 10 fg for G. duodenalis, 12.5 pg for Entamoeba histolytica or Entamoeba dispar, 50 fg for Cryptosporidium spp., 225 pg for Cyclospora spp. and 800 fg or 8 fg for Blastocystis spp. after performing a 1780 bp PCR or 310 bp nested PCR, respectively. The sensitivity B was 100 cysts for G. duodenalis, 500 cysts for E. histolytica or E. dispar, 1000 oocysts for Cyclospora spp. and 3600 or four vegetatives forms for PCR or nested PCR of Blastocystis spp., respectively. Conclusions: The molecular detection of protozoa and chromist was achieved and the molecular characterization allowed the genotyping of some of the parasites such as Giardia duodenalis, Cryptosporidium spp., and Blastocystis spp. This study summarizes the molecular techniques for epidemiological studies in humans and animals, and helps in the investigation of their transmission sources in countries where intestinal parasites are a public health problem.(AU)

Use of laboratory methodologies to confirm an outbreak of acute diarrheal disease caused by multiple pathogens / Uso de metodologias laboratoriais para confirmação de surto de doença diarreica aguda causada por múltiplos patógenos

The aim of this study was to investigate an outbreak caused by protozoa, which occurred in a municipality in the Brazil southern region. The investigations were carried out analyzing 47 fresh stool samples and 26 water samples by parasitological and molecular methods, as well as, direct immunofluorescence. After the filtrations of water samples and purification of stool samples, the concentrates were evaluated microscopically for presence of parasites. Molecular analyses were performed by polymerase chain reaction (PCR) for DNA detection of Giardia spp., Cryptosporidium parvum, C. hominis and Cyclospora cayetanensis. Out of 26 water samples, 30.8% (8/26) had waterborne protozoa and C. cayetanensis was the most prevalent (15.5%). Out of the 47 stool samples, 23.4% (11/47) were infected with C. cayetanensis and Giardia spp. The results showed that backwash water samples from filters of the Water Treatment Station were contaminated with C. cayetanensis, C. hominis and Giardia spp., suggesting the contamination of water sources with human waste brought by sewage. These results show the importance of protozoa investigation in water and stool samples by laboratory methodologies principally in outbreaks causing acute diarrheal disease (AU).

O objetivo do presente estudo foi investigar um surto causado por protozoários, ocorrido em um município da região sul do Brasil. As investigações foram realizadas analisando 47 amostras de fezes frescas e 26 amostras de água por métodos parasitológicos, moleculares e de imunofluorscência direta. Após as filtrações das amostras de água e purificação das amostras de fezes, os concentrados foram avaliados microscopicamente a procura de parasitas. A seguir, foram analisadas, pela reação em cadeia da polimerase (PCR), a detecção de DNA de Giardia spp., Cryptosporidium parvum, C. hominis e Cyclospora cayetanensis. Das 26 amostras de água, 30,8% (8/26) apresentaram protozoários de veiculação hídrica, sendo que, C. cayetanensis foi o mais prevalente (15,5%). Das 47 amostras de fezes, 23,4% (11/47) estavam infectadas por C. cayetanensis e Giardia spp. Os resultados mostraram que as águas de retrolavagem dos filtros da Estação de Tratamento de Água estavam contaminadas com C. cayetanensis, C. hominis e Giardia spp. sugerindo a contaminação dos mananciais com dejetos humanos trazidos pelo esgoto. Estes resultados mostram a importância da investigação de protozoários em água e fezes por metodologias laboratoriais, principalmente em surtos que causam doença diarreica aguda (AU).

Evaluation of fecal smear methods for research on Cryptosporidium spp. oocysts in the feces of dairy calves / Avaliação dos métodos de esfregaço fecal para a pesquisa de oocistos de Cryptosporidium spp. nas fezes de bezerros da bovinocultura de leite

The objective of this study is to compare the direct fecal smear (DFS) and centrifugal sedimentation (CS) methods in the detection of Cryptosporidium spp. oocysts in fecal samples of dairy calves. One hundred and fourteen fecal samples were collected from calves aged up to six months from 10 dairy farms located in Palotina and Francisco Alves, Paraná, Brazil. The microscopic analysis revealed the presence of Cryptosporidium spp. oocysts in 51.75% (59/114) of the samples in both methods. In CS, 48.25% (55/114) of the samples were positive, while in DFS slides, only 6.14% (7/114) were positive. Only 4 samples were positive exclusively in DFS. To ensure that there were no false-negative results in the microscopic analysis, the 55 samples that were negative in both DFS and CS were selected for molecular analysis using the nested PCR (nPCR). Of these 55 samples, 24% (13/55) were positive and forwarded for sequencing part of the genome, which made it possible to identify C. parvum, C. bovis and C. ryanae. Besides the characterization of the Cryptosporidium species, it was possible to identify bacteria of the genus Acinetobacter interfering directly in the analyzed samples. The microscopic analysis also revealed higher sensitivity when CS was used to make the fecal smears. However, some samples that were negative in this technique had positive PCR results. Thus, molecular analysis is indicated to confirm cases of Cryptosporidium spp. Further studies are necessary to prove the specificities of the used primers since the results obtained in nPCR were positive for the protozoan but, when genetic sequencing was performed, Acinetobacter spp. was identified.(AU)

O objetivo deste trabalho foi comparar os métodos de esfregaço fecal direto (DFS) e centrífugo sedimentação (CS) para a pesquisa de oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de bezerros leiteiros. Foram coletadas 114 amostras fecais de bezerros com até seis meses de idade, provenientes de dez propriedades leiteiras localizadas nos municípios de Palotina e Francisco Alves, Paraná. Por meio da análise microscópica, foi possível observar oocistos de Cryptosporidium spp. em 51,75% (59/114) das amostras. Pelo método da CS foi identificada positividade em 48,25% (55/114) das amostras, enquanto nas lâminas pelo método do esfregaço fecal direto (DFS), apenas 6,14% (7/114) foram positivas. Somente 4 amostras foram positivas exclusivamente no método do DFS. Para assegurar que na análise microscópica não houvesse resultados falso-negativos, as 55 amostras negativas para os dois métodos de confecção de lâminas (DFS e CS) foram selecionadas para análise molecular por meio da técnica de Nested PCR. Das 55 amostras submetidas a nPCR, 24% (13/55) apresentaram-se positivas e foram encaminhadas para o sequenciamento genético de uma porção do genoma, o qual possibilitou identificar as espécies de C. parvum, C. bovis e C. ryanae. Além da caracterização das espécies de Cryptosporidium, foi possível identificar a presença de bactérias do gênero Acinetobacter interferindo diretamente nas amostras analisadas. A análise microscópica revelou maior sensibilidade quando o método de CS foi usado para a confecção dos esfregaços fecais, entretanto, amostras negativas por meio dessa metodologia apresentaram resultados positivos na nPCR. Desta forma, para a confirmação dos casos de Cryptosporidium spp., é indicado a realização da análise molecular. Novos estudos são necessários para se comprovar a especificidade dos primers utilizados, uma vez que na nPCR o resultado obtido foi positivo, porém ao realizar o sequenciamento genético houve a identificação de Acinetobacter spp.(AU)

Antiparasitic and immunomodulating effects of nitazoxanide, ivermectin and selenium on Cryptosporidium infection in diabetic mice / Efeitos antiparasitários e imunomodulantes da nitazoxanida, ivermectina e selênio sobre a infecção por Cryptosporidium em camundongos diabéticos

Abstract The present work aims to investigate the antiparasitic and the immunomodulating effects of nitazoxanide (NTZ) and ivermectin (IVC) alone or combined together or combined with selenium (Se), on Cryptosporidium infection in diabetic mice. The results revealed that the combined NTZ and IVC therapy achieved the highest reduction of fecal oocysts (92%), whereas single NTZ showed the lowest reduction (63%). Also, adding Se to either NTZ or IVC resulted in elevation of oocyst reduction from 63% to 71% and from 82% to 84% respectively. All treatment regimens, with the exception of NTZ monotherapy, showed a significant improvement in the intestinal histopathology, the highest score was in combined NTZ and IVC therapy. The unique results of immunohistochemistry in this study showed reversal of the normal CD4/CD8 T cell ratio in the infected untreated mice, however, following therapy it reverts back to a normal balanced ratio. The combined (NTZ+ IVC) treatment demonstrated the highest level of CD4 T cell expression. Taken together, NTZ and IVC combined therapy showed remarkable anti-parasitic and immunostimulatory effects, specifically towards the CD4 population that seem to be promising in controlling cryptosporidiosis in diabetic individuals. Further research is required to explore other effective treatment strategies for those comorbid patients.

Resumo O presente trabalho tem como objetivo investigar os efeitos anti-parasitários e imunomodulantes da nitazoxanida (NTZ) e ivermectina (IVC), isoladas ou em associação, e do selênio (SE), associado à NTZ ou à IVC, sobre a infecção por Cryptosporidium em camundongos diabéticos. Os resultados revelaram que a terapia combinada com NTZ e IVC resultou em maior redução de oocistos fecais, enquanto a NTZ isolada mostrou a menor redução de oocistos fecais (63%). Além disso, a associação do SE com a NTZ ou IVC resultou em redução do número de oocistos fecais de 63% para 71% e de 82% para 84%, respectivamente. Todos os tratamentos, com exceção da monoterapia com NTZ, mostraram uma melhora significativa nos índices relacionados à histopatologia intestinal. Os resultados da imuno-histoquímica mostraram reversão da razão celular CD4/CD8 T normal nos camundongos infectados não tratados, no entanto, após a terapia, houve retorno à razão celular CD4/CD8 T normal. O tratamento combinado (NTZ+ IVC) demonstrou o mais alto nível de expressão celular CD4 T. Em conclusão, a terapia combinada com NTZ e IVC mostrou efeitos anti-parasitários e imunoestimuladores notáveis, especificamente para a população CD4, que parecem ser promissores para o controle da criptosporidiose em indivíduos diabéticos.

Prevalence of infection by Cryptosporidium spp. in calves and associated risk factors in Northeastern Brazil / [Prevalência da infecção por Cryptosporidium spp. e fatores de risco associados em bezerros do Nordeste do Brasil]

Cryptosporidium spp. are zoonotic protozoa, frequently associated with diarrhea in calves, which are responsible for important economic losses. The aim of this study was to assess the prevalence of infection by Cryptosporidium spp. and its associated risk factors among calves raised in a milk production region of Northeastern Brazil. Fecal samples (n = 385) were obtained from young animals (up to ten months old) and evaluated by means of centrifugal fecal sedimentation in formalin-ether followed by the modified Ziehl-Neelsen staining technique. In addition, Odds Ratio (OR) was calculated to evaluate associations between variables and infection by these protozoa. Out of all samples analyzed, 25.7% (99/385) scored positive for the presence of Cryptosporidium spp. Contact with other species (goat and sheep) (OR = 3.33; p = 0.000), use of a semi-intensive rearing system (OR = 1.70; p = 0.024) and absence of hygienic conditions (fecal contamination of food and water) (OR = 1.64; p = 0.029) were considered to be risk factors. Data herein reported shows that the implementation of hygienic-sanitary measures on the farms studied, it is imperative to reduce Cryptosporidium spp. infection and consequently the economic impact caused by this pathogen.(AU)

Cryptosporidium spp. são protozoários zoonóticos frequentemente associados à diarreia em bezerros e responsáveis por importantes perdas econômicas. O objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência e os fatores de risco associados à infecção por Cryptosporidium spp. em bezerros de propriedades leiteiras no Nordeste do Brasil. Amostras fecais (n = 385) foram obtidas de animais jovens (até 10 meses de idade) e avaliadas por centrífugo-sedimentação em formol éter, seguida da técnica de coloração de Ziehl-Neelsen modificada. A Odds Ratio (OR) foi calculada para avaliar a associação entre variáveis e infecção pelos protozoários. De todas as amostras analisadas, 25,7% (99/385) apresentaram oocistos de Cryptosporidium spp. Contato com outras espécies (caprino e ovino) (OR = 3,33; p = 0,000), sistema semi-intensivo de criação (OR = 1,70; p = 0,024) e ausência de condições higiênicas (contaminação fecal do alimento e da água) (OR = 1,64; p = 0,029) foram considerados fatores de risco. Com base nos resultados, é imprescindível a adoção de medidas higiênico-sanitárias nas fazendas estudadas, a fim de reduzir infecção por Cryptosporidium spp. e o impacto econômico causado por esse patógeno.(AU)

Gastrointestinal parasites of a population of emus (Dromaius novaehollandiae) in Brazil / Parasitas gastrointestinais de emus Dromaius novaehollandiae de cativeiro no Brasil

Emus are large flightless birds in the ratite group and are native to Australia. Since the mid-1980s, there has been increased interest in the captive breeding of emus for the production of leather, meat and oil. The aim of this study was to identify gastrointestinal parasites in the feces of emus Dromaius novaehollandiae from a South American scientific breeding. Fecal samples collected from 13 birds were examined by direct smears, both with and without centrifugation, as well as by the fecal flotation technique using Sheather's sugar solution. Trophozoites, cysts and oocysts of protozoa and nematode eggs were morphologically and morphometrically evaluated. Molecular analysis using PCR assays with specific primers for the genera Entamoeba, Giardia and Cryptosporidium were performed. Trophozoites and cysts of Entamoeba spp. and Giardia spp., oocysts of Eimeria spp. and Isospora dromaii, as well as eggs belonging to the Ascaridida order were found in the feces. Three animals were diagnosed with Giardia spp., and three were positive for Entamoeba spp. based on PCR techniques. After analyzing the data, we concluded that emus were infected enzootically by nematode and protozoan species.(AU)

Emus são aves grandes que não voam pertencentes ao grupo das ratitas e são originários da Austrália. Desde meados da década de 1980, aumentou o interesse pela criação de emus em cativeiro para a produção de couro, carne e óleo. O objetivo deste estudo foi identificar parasitas gastrointestinais nas fezes de emus Dromaius novaehollandiae de um criatório científico da América do Sul. Amostras de fezes coletadas de 13 aves foram examinadas por esfregaços diretos, tanto com e sem centrifugação, quanto com a técnica de flutuação fecal utilizando solução de açúcar de Sheather. Trofozoítos, cistos e oocistos de protozoários e ovos de nematóides foram avaliados morfologicamente e morfometricamente. Foram realizadas análises moleculares utilizando ensaios de PCR com primers específicos para os gêneros Entamoeba, Giardia e Cryptosporidium. Trofozoítos e cistos de Entamoeba spp. e Giardia spp., oocistos de Eimeria spp. e Isospora dromaii, bem como ovos pertencentes à ordem Ascaridida foram encontrados nas fezes. Três animais foram diagnosticados com Giardia spp., e três foram positivos para Entamoeba spp. com base em técnicas de PCR. Depois de analisar os dados, concluímos que os emus estavam infectados enzooticamente por espécies de nematóides e protozoários.(AU)

Molecular survey of Cryptosporidium spp. in calves from the state of Mato Grosso, Brazil / Levantamento molecular de Cryptosporidium spp. em bezerros do estado de Mato Grosso, Brasil

Cryptosporidium spp. is a protozoan that infects a wide range of vertebrate hosts; it has been reported to be the cause of severe illness or death in livestock worldwide, which leads to decreased performance and production losses, especially in young animals. This study investigated the presence of Cryptosporidiumin calves from beef farms in the state of Mato Grosso, midwestern Brazil. For this purpose, fecal samples from 237 animals aged ≤ 45 days, raised in 20 rural properties were subjected to DNA extraction and nested polymerase chain reaction (nPCR) targeting 18S ribosomal RNA (18S rRNA) gene followed by sequencing. Additionally, positive samples, previously identified as Cryptosporidium parvum by sequencing and phylogenetic analyses based on 18S rRNA gene, were subsequently analyzed focusing the amplification and sequencing using nPCR of a fragment of the 60 kDa glycoprotein (gp60) gene. Of the 237 fecal samples analyzed by PCR (18S rRNA), 50 (21.1%) fecal samples were positive for Cryptosporidium spp., while 14 (70%) of the 20 properties had at least one positive animal. The following Cryptosporidium species were detected: C. bovis, C. parvum, and C. ryanae. Thereafter, two potentially zoonotic subtypes (IIaA15G2R1 and IIaA16G3R1) of C. parvum were identified based on gp60 gene sequences. This study resulted in the detection of subtype IIaA16G3R1 for the first time in South America and showed a wide distribution of the protozoan in beef farms in the studied area of the State.

Cryptosporidium spp. é um protozoário que infecta uma grande variedade de hospedeiros vertebrados, sendo descrito como causa de doenças graves ou morte na pecuária em todo o mundo, o que leva à diminuição do desempenho e à perda de produção, especialmente em animais jovens. Este estudo investigou a presença de Cryptosporidium em bezerros de fazendas de bovinocultura de corte no estado de Mato Grosso, Centro-Oeste do Brasil. Para esse fim, amostras fecais de 237 animais com idade ≤ 45dias, criados em 20 propriedades rurais foram submetidas à extração de DNA e uma "nested" da reação em cadeia pela polimerase (nPCR) direcionada ao gene 18S RNA ribossomal (18S rRNA), seguido do sequenciamento. Adicionalmente, amostras positivas, previamente identificadas como Cryptosporidium parvum pelo sequenciamento e análises filogenéticas baseadas no gene 18S rRNA, foram posteriormente analisadas usando a nPCR buscando a amplificação e sequenciamento de um fragmento do gene de uma glicoproteína de 60 kDa (gp60). Das 237 amostras fecais analisadas pela PCR (18S rRNA), 50 (21,1%)amostras fecais foram positivas para Cryptosporidium spp., enquanto 14 (70%) das 20 propriedades tinham ao menos um animal positivo. As seguintes espécies de Cryptosporidium foram detectadas: C. bovis, C. parvum e C. ryanae. Posteriormente, dois subtipos potencialmente zoonóticos (IIaA15G2R1e IIaA16G3R1) foram identificados. Este estudo resultou na detecção do subtipo IIaA16G3R1 pela primeira vez na América do Sul e mostrou uma ampla distribuição do protozoário em rebanhos de corte na área estudada do Estado.

Molecular survey of Cryptosporidium spp. in calves from the state of Mato Grosso, Brazil / Levantamento molecular de Cryptosporidium spp. em bezerros do estado de Mato Grosso, Brasil

Cryptosporidium spp. is a protozoan that infects a wide range of vertebrate hosts; it has been reported to be the cause of severe illness or death in livestock worldwide, which leads to decreased performance and production losses, especially in young animals. This study investigated the presence of Cryptosporidiumin calves from beef farms in the state of Mato Grosso, midwestern Brazil. For this purpose, fecal samples from 237 animals aged ≤ 45 days, raised in 20 rural properties were subjected to DNA extraction and nested polymerase chain reaction (nPCR) targeting 18S ribosomal RNA (18S rRNA) gene followed by sequencing. Additionally, positive samples, previously identified as Cryptosporidium parvum by sequencing and phylogenetic analyses based on 18S rRNA gene, were subsequently analyzed focusing the amplification and sequencing using nPCR of a fragment of the 60 kDa glycoprotein (gp60) gene. Of the 237 fecal samples analyzed by PCR (18S rRNA), 50 (21.1%) fecal samples were positive for Cryptosporidium spp., while 14 (70%) of the 20 properties had at least one positive animal. The following Cryptosporidium species were detected: C. bovis, C. parvum, and C. ryanae. Thereafter, two potentially zoonotic subtypes (IIaA15G2R1 and IIaA16G3R1) of C. parvum were identified based on gp60 gene sequences. This study resulted in the detection of subtype IIaA16G3R1 for the first time in South America and showed a wide distribution of the protozoan in beef farms in the studied area of the State.(AU)

Cryptosporidium spp. é um protozoário que infecta uma grande variedade de hospedeiros vertebrados, sendo descrito como causa de doenças graves ou morte na pecuária em todo o mundo, o que leva à diminuição do desempenho e à perda de produção, especialmente em animais jovens. Este estudo investigou a presença de Cryptosporidium em bezerros de fazendas de bovinocultura de corte no estado de Mato Grosso, Centro-Oeste do Brasil. Para esse fim, amostras fecais de 237 animais com idade ≤ 45dias, criados em 20 propriedades rurais foram submetidas à extração de DNA e uma "nested" da reação em cadeia pela polimerase (nPCR) direcionada ao gene 18S RNA ribossomal (18S rRNA), seguido do sequenciamento. Adicionalmente, amostras positivas, previamente identificadas como Cryptosporidium parvum pelo sequenciamento e análises filogenéticas baseadas no gene 18S rRNA, foram posteriormente analisadas usando a nPCR buscando a amplificação e sequenciamento de um fragmento do gene de uma glicoproteína de 60 kDa (gp60). Das 237 amostras fecais analisadas pela PCR (18S rRNA), 50 (21,1%)amostras fecais foram positivas para Cryptosporidium spp., enquanto 14 (70%) das 20 propriedades tinham ao menos um animal positivo. As seguintes espécies de Cryptosporidium foram detectadas: C. bovis, C. parvum e C. ryanae. Posteriormente, dois subtipos potencialmente zoonóticos (IIaA15G2R1e IIaA16G3R1) foram identificados. Este estudo resultou na detecção do subtipo IIaA16G3R1 pela primeira vez na América do Sul e mostrou uma ampla distribuição do protozoário em rebanhos de corte na área estudada do Estado.(AU)

Comparação entre métodos de diagnóstico de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de bovinos / Comparison between diagnostic methods of Cryptosporidium spp. in fecal samples from cattle

Criptosporidiose é uma doença entérica com manifestações clínicas variadas e eventual mortalidade, principalmente em animais jovens, causando prejuízos ao desenvolvimento. Este estudo objetivou comparar técnicas de coloração para a detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. em fezes de bezerros leiteiros, provenientes dos 22 municípios da região Sul do Rio Grande do Sul, Brasil. Amostras fecais foram colhidas diretamente do reto de 359 bezerros de diferentes raças, machos e fêmeas, com até doze meses de idade. Oocistos de Cryptosporidium spp. foram observados por meio dos métodos colorimétricos de Kinyoun, Safranina e Ziehl-Neelsen e visualizados sob microscopia ótica e porfluorescência com coloração de Auramina. Oocistos de Cryptosporidium spp. Foram observados em 6,69% (24/359) das amostras analisadas. A partir destes resultados pode-se inferir que os quatros métodos colorimétricos, foram eficazes na detecção de Cryptosporidium spp., sendo capaz de revelar este parasito mesmo em amostras com reduzido número de oocistos. Não houve diferença estatisticamente significante entre os métodos para o diagnóstico, apesar do método de fluorescência com coloração de Auramina ter apresentado o melhor resultado em comparação com as técnicas colorimétricas utilizadas neste estudo.

Cryptosporidiosis is an enteric disease with varied clinical manifestations and eventual mortality, mainly in young animals, causing impairment in development. This study aimed to compare staining techniques for the detection of Cryptosporidium spp. oocysts in dairy calf feces from 22 municipalities of the southern region of Rio Grande do Sul, Brazil. Fecal samples were collected directly from the rectum of 359 calves of different breeds ,male and female, up to twelve months old. Cryptosporidium spp. oocysts were observed using the colorimetric methods of Kinyoun, Safranina and Ziehl-Neelsen and were visualized under optical microscopy and by fluorescence with auramine stain. Cryptosporidium spp. oocysts were observed in 6.69% (24/359) of the analyzed samples. From these results it can be inferred that the four colorimetric methods were effective in the detection of Cryptosporidium spp., being able to reveal this parasite even in samples with a reduced number of oocysts. There was no statistically significant difference between the methods for diagnosis, even though, the Auramine staining fluorescence method presented the best result in comparison with the colorimetric techniques used in this study.

Comparação entre métodos de diagnóstico de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de bovinos / Comparison between diagnostic methods of Cryptosporidium spp. in fecal samples from cattle

Criptosporidiose é uma doença entérica com manifestações clínicas variadas e eventual mortalidade, principalmente em animais jovens, causando prejuízos ao desenvolvimento. Este estudo objetivou comparar técnicas de coloração para a detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. em fezes de bezerros leiteiros, provenientes dos 22 municípios da região Sul do Rio Grande do Sul, Brasil. Amostras fecais foram colhidas diretamente do reto de 359 bezerros de diferentes raças, machos e fêmeas, com até doze meses de idade. Oocistos de Cryptosporidium spp. foram observados por meio dos métodos colorimétricos de Kinyoun, Safranina e Ziehl-Neelsen e visualizados sob microscopia ótica e porfluorescência com coloração de Auramina. Oocistos de Cryptosporidium spp. Foram observados em 6,69% (24/359) das amostras analisadas. A partir destes resultados pode-se inferir que os quatros métodos colorimétricos, foram eficazes na detecção de Cryptosporidium spp., sendo capaz de revelar este parasito mesmo em amostras com reduzido número de oocistos. Não houve diferença estatisticamente significante entre os métodos para o diagnóstico, apesar do método de fluorescência com coloração de Auramina ter apresentado o melhor resultado em comparação com as técnicas colorimétricas utilizadas neste estudo.(AU)

Cryptosporidiosis is an enteric disease with varied clinical manifestations and eventual mortality, mainly in young animals, causing impairment in development. This study aimed to compare staining techniques for the detection of Cryptosporidium spp. oocysts in dairy calf feces from 22 municipalities of the southern region of Rio Grande do Sul, Brazil. Fecal samples were collected directly from the rectum of 359 calves of different breeds ,male and female, up to twelve months old. Cryptosporidium spp. oocysts were observed using the colorimetric methods of Kinyoun, Safranina and Ziehl-Neelsen and were visualized under optical microscopy and by fluorescence with auramine stain. Cryptosporidium spp. oocysts were observed in 6.69% (24/359) of the analyzed samples. From these results it can be inferred that the four colorimetric methods were effective in the detection of Cryptosporidium spp., being able to reveal this parasite even in samples with a reduced number of oocysts. There was no statistically significant difference between the methods for diagnosis, even though, the Auramine staining fluorescence method presented the best result in comparison with the colorimetric techniques used in this study.(AU)

Surveillance of Giardia and Cryptosporidium in sewage from an urban area in Brazil / Monitoramento de Giardia e Cryptosporidium em esgoto de uma área urbana no Brasil

Cryptosporidium and Giardia are protozoan parasites that cause diarrhea in humans and animals. Molecular characterization of these pathogens in sewage may provide insight on their occurrence and prevalence in Brazil. This study aimed to investigate the presence of Giardia and Cryptosporidium in raw and treated sewage from Londrina, Paraná, Brazil. Samples were collected every two weeks during a year. Samples were concentrated, then DNA was extracted and subjected to a nested PCR targeting the Giardia 18S rRNA gene and the Cryptosporidium 18S rRNA gene. Species of Cryptosporidium were characterized by restriction fragment length polymorphism (RFLP). All raw sewage and 76% of the treated sewage were positive for Giardia; 84% of raw sewage samples and 8% of treated sewage were positive for Cryptosporidium. C. muris, C. hominis, C. baileyi, C. parvum and C. suis were detected in 100%, 19%, 9%, 9% and 4% of raw sewage, respectively. C. muris was the only species found in treated sewage. Multiple species of Cryptosporidium were present in 19.04% of the raw sewage. Treated sewage water can pose a threat to human health. The speciation of Cryptosporidium revealed the presence of non-common zoonotic species as C. suis and C. muris.(AU)

Cryptosporidium e Giardia são protozoários causadores de diarreia em animais e humanos. A caracterização molecular destes protozoários em esgoto pode prover dados ainda desconhecidos da ocorrência de espécies. O objetivo do presente estudo foi monitorar a ocorrência de Giardia e espécies de Cryptosporidium em esgoto bruto e tratado em uma estação de tratamento de esgoto (ETE) de Londrina, Paraná. Amostras de esgoto bruto e tratado foram coletadas no período de um ano, com periodicidade quinzenal. A ocorrência destes protozoários foi caracterizada por meio de concentração das amostras e posterior extração de DNA seguida de nested-PCR para amplificação de fragmentos dos genes 18S rRNA de Giardia e 18S rRNA de Cryptosporidium. A caracterização das espécies de Cryptosporidium foi realizada por meio de análise por polimorfismo de comprimento do fragmento de restrição (RFLP) dos produtos obtidos. Foram coletadas no total 25 amostras de cada, esgoto bruto e esgoto tratado. Para Giardia, todas as amostras de esgoto bruto e 76% das de esgoto tratado foram positivas. Cryptosporidium esteve presente em 84% das amostras de esgoto bruto e em 8% do tratado. No esgoto tratado foi encontrado apenas C. muris, já nas amostras de esgoto bruto foram encontradas cinco espécies: C. muris, C. hominis, C. baileyi, C. suis e C. parvum em 100%, 19%, 9%, 9% e 4%, respectivamente. A presença de espécies mistas foi observada em 19,04% das amostras. A presença de Giardia e Cryptosporidium em esgoto tratado pode pôr em risco a saúde humana. A discriminação de espécies de Cryptosporidium revelou a presença de espécies zoonóticas incomuns como C. suis e C. muris.(AU)