Assisted Reproductive Technologies (ART) and genome editing to support a sustainable livestock

This article provides an overview of assisted reproductive technologies (ART) and genome engineering to improve livestock production systems for the contribution of global sustainability. Most ruminant production systems are conducted on grassland conditions, as is the case of South American countries that are leaders in meat and milk production worldwide with a well-established grass-feed livestock. These systems have many strengths from an environmental perspective and consumer preferences but requires certain improvements to enhance resource efficiency. Reproductive performance is one of the main challenges particularly in cow-calf operations that usually are conducted under adverse conditions and thus ART can make a great contribution. Fixed-time artificial insemination is applied in South America in large scale programs as 20 to 30% of cows receive this technology every year in each country, with greater calving rate and significant herd genetic gain occurred in this region. Sexed semen has also been increasingly implemented, enhancing resource efficiency by a) obtaining desired female replacement and improving animal welfare by avoiding newborn male sacrifice in dairy industry, or b) alternatively producing male calves for beef industry. In vitro embryo production has been massively applied, with this region showing the greatest number of embryos produced worldwide leading to significant improvement in herd genetics and productivity. Although the contribution of these technologies is considerable, further improvements will be required for a significant livestock transformation and novel biotechnologies such as genome editing are already available. Through the CRISPR/Cas-based system it is possible to enhance food yield and quality, avoid animal welfare concerns, overcome animal health threats, and control pests and invasive species harming food production. In summary, a significant enhancement in livestock productivity and resource efficiency can be made through reproductive technologies and genome editing, improving at the same time profitability for farmers, and global food security and sustainability.(AU)

Three superovulation protocols for in vivo embryo production in Santa Inês sheep / Três protocolos para produção in vivo de embriões em ovelhas Santa Inês

There is still no consensus regarding the best protocol for in vivo embryo production in sheep despite increasing studies in this area. Moreover, there is variability in the response of ewes to superovulation (SOV). An approach to mitigate this inconsistency is to initiate gonadotropin administration under favorable ovarian conditions. The present study compared three treatments in a crossover design: a traditional SOV protocol (TRAD) and "Day 0" D0 SOV protocol with (D0+GnRH), or without Lecilerin (D0-GnRH). Fifteen Santa Inês ewes received 200 mg of FSH at six decreasing doses and PGF2α with the fifth dose of FSH. They were naturally mated with fertile rams and subjected to surgical embryo collection. The number of viable embryos was similar among the different treatments (TRAD = 6.0 ± 4.7; D0-GnRH = 3.8 ± 6.4; D0+GnRH = 7.5 ± 6.5). Regardless of the treatment method, ewes with follicles ≤ 4 mm, at the first FSH dose, produced more viable embryos (9.6 ± 6.0, P < 0.05) compared to ewes that had follicles > 4 mm at the beginning of the SOV (2.9 ± 3.1, viable embryos). Both the TRAD and D0+GnRH groups had fewer animals with large follicles (> 4 mm) at the first FSH dose than the D0-GnRH group (P < 0.05). In conclusion, both the TRAD and D0+GnRH treatments induced a more favorable ovarian condition (follicles ≤ 4 mm) for adequate SOV; although, all three treatments exhibited similar efficacies in Santa Inês sheep.

Ainda não há consenso sobre qual é o protocolo mais apropriado para a produção in vivo de embriões em ovinos, apesar do crescente conhecimento. Uma abordagem para mitigar a variabilidade de resposta de ovelhas à superovulação (SOV) é iniciar a aplicação de gonadotrofinas em uma condição ovariana favorável. O presente estudo comparou três tratamentos em delineamento do tipo crossover: protocolo de SOV tradicional (TRAD) e "Dia 0" D0 SOV sem (D0-GnRH) ou com GnRH (D0+GnRH). Quinze ovelhas Santa Inês foram superovuladas com 200 mg de FSH em seis doses decrescentes e receberam PGF2α na quinta dose de FSH. As ovelhas foram submetidas a monta natural com carneiros férteis e os embriões colhidos por via cirúrgica. O número de embriões viáveis não diferiu entre os tratamentos (TRAD = 6,0 ± 4,7; D0-GnRH = 3,8 ± 6,4; D0+GnRH = 7,5 ± 6,5). Independentemente do tratamento, ovelhas com folículos ≤ 4 mm na primeira dose de FSH produziram mais embriões viáveis (9,6 ± 6,0; P < 0.05) quando comparadas aos animais que apresentavam folículos > 4 mm no início da SOV (2,9 ± 3,1 embriões viáveis). Os grupos TRAD e D0+GnRH apresentaram menor número de animais com folículos grandes (> 4 mm), no momento da primeira dose de FSH, quando comparados ao grupo D0-GnRH (P < 0,05). Em conclusão, os protocolos TRAD e D0+GnRH induziram uma condição ovariana mais favorável (folículos ≤ 4 mm) para a SOV. No entanto, os três tratamentos apresentaram eficiência semelhante em ovelhas Santa Inês.

New approaches to superovulation in goats and sheep / Novos enfoques sobre superovulação em caprinos e ovinos

A superovulação é a principal tecnologia reprodutiva utilizada para a produção de embriões em ovinos e caprinos, mas a imprevisibilidade dos resultados continua sendo sua maior desvantagem. Vários fatores intrínsecos e extrínsecos são responsáveis por respostas superovulatórias variáveis em pequenos ruminantes e, portanto, esta questão é o foco principal de muitos estudos que visam melhorar a produção de embriões in vivo. A raça da doadora de embriões é uma fonte importante de variação nos resultados superovulatórios, e essa variabilidade pode ser observada não apenas entre genótipos prolíficos e não prolíficos. A suplementação com progesterona usada em conjunto com protocolos superovulatórios tem efeitos benéficos no desenvolvimento folicular e na produção de embriões; no entanto, a duração ideal da exposição à progesterona também parece variar entre as raças. Alguns estudos recentes dos tratamentos superovulatórios com hormônio folículo-estimulante (FSH) abordaram o tempo para iniciar um regime, a dose total do hormônio exógeno e o número de administrações. Além disso, embora a atividade ovariana seja fortemente afetada pela estação do ano, as flutuações anuais nas respostas superovulatórias ainda são controversas e mal compreendidas. Por último, vários estudos demonstraram que a eficácia dos tratamentos superovulatórios recorrentes pode diminuir, permanecer constante ou mesmo aumentar. Esta revisão tem como objetivo discutir os principais achados em torno da superovulação em pequenos ruminantes publicados nos últimos cinco anos.

Superovulation is the main reproductive technology used for embryo production in sheep and goats, but the unpredictability of results remains its greatest disadvantage. Several intrinsic and extrinsic factors are responsible for variable superovulatory responses in small ruminants and so this issue is the primary focus of many studies aimed to ameliorate in vivo embryo production. The breed of the embryo donor is an important source of variation in superovulatory outcomes, and such a variability can be seen not only between prolific and non-prolific genotypes. Progesterone priming used in conjunction with superovulatory protocols has beneficial effects on follicular development and embryo production; however, the optimal duration of progesterone exposure also seems to vary between breeds. Some recent studies of the superovulatory treatments using follicle-stimulating hormone (FSH) have addressed the time to start a regimen, total dose of the exogenous hormone, and the number of injections. Moreover, even though the ovarian activity is strongly affected by the season, annual fluctuations in superovulatory responses are still controversial and incompletely understood. Lastly, several studies have shown that the efficacy of recurrent superovulatory treatments can either decline, remain constant or even increase. This review aims to discuss the main findings surrounding superovulation in small ruminants and published in recent five years.

Colheita transcervical de embriões em ovelhas e cabras / Transcervical embryo collection in ewes and does

A biotécnica de múltipla ovulação e transferência de embriões (MOTE) em pequenos ruminantes tem aplicações que se estendem da pesquisa básica à aplicada. Porém, ainda existem etapas no processo da biotécnica que reduzem sua eficiência e restringem sua utilização, a exemplo da necessidade de procedimentos cirúrgicos. Em caprinos, já é possível realizar a MOTE sem nenhuma intervenção cirúrgica e com resultados satisfatórios. Todavia, em ovinos, as particularidades anatômicas da cérvix dificultam sua transposição, fazendo com que etapas cirúrgicas ainda sejam necessárias. Com foco nessa limitação, tem-se estudado e descrito técnicas para a dilatação cervical e métodos para triagem de doadoras de embrião com maior facilidade para transposição cervical. Assim, a colheita não cirúrgica, principalmente na espécie ovina, vem se tornando uma realidade exequível em condições de campo e pesquisa.(AU)

In small ruminants, the multiple ovulation and embryo transfer (MOET) has applications in basic and applied research. However, there are still drawbacks in this biotechnology hampering its applicability and efficiency, as the need of surgical intervention. In goats, it is possible to perform MOET without any surgical procedure and with satisfactory results. Although, in sheep, the anatomical features of the cervix make transcervical transposition challenging, leading to a wider use of surgical steps in this specie. In the attempt to overcome these limitations, techniques for cervical dilation and methods for screening donors with cervices that can be easily transposed have been studied and described. Therefore, the nonsurgical embryo collection, mainly in the ovine species, has become feasible under field and research conditions.(AU)

Colheita transcervical de embriões em ovelhas e cabras / Transcervical embryo collection in ewes and does

A biotécnica de múltipla ovulação e transferência de embriões (MOTE) em pequenos ruminantes tem aplicações que se estendem da pesquisa básica à aplicada. Porém, ainda existem etapas no processo da biotécnica que reduzem sua eficiência e restringem sua utilização, a exemplo da necessidade de procedimentos cirúrgicos. Em caprinos, já é possível realizar a MOTE sem nenhuma intervenção cirúrgica e com resultados satisfatórios. Todavia, em ovinos, as particularidades anatômicas da cérvix dificultam sua transposição, fazendo com que etapas cirúrgicas ainda sejam necessárias. Com foco nessa limitação, tem-se estudado e descrito técnicas para a dilatação cervical e métodos para triagem de doadoras de embrião com maior facilidade para transposição cervical. Assim, a colheita não cirúrgica, principalmente na espécie ovina, vem se tornando uma realidade exequível em condições de campo e pesquisa.

In small ruminants, the multiple ovulation and embryo transfer (MOET) has applications in basic and applied research. However, there are still drawbacks in this biotechnology hampering its applicability and efficiency, as the need of surgical intervention. In goats, it is possible to perform MOET without any surgical procedure and with satisfactory results. Although, in sheep, the anatomical features of the cervix make transcervical transposition challenging, leading to a wider use of surgical steps in this specie. In the attempt to overcome these limitations, techniques for cervical dilation and methods for screening donors with cervices that can be easily transposed have been studied and described. Therefore, the nonsurgical embryo collection, mainly in the ovine species, has become feasible under field and research conditions.

From reproductive technologies to genome editing in small ruminants: an embryo’s journey

The beginning of this century has witnessed great advances in the understanding of ovarian physiology and embryo development, in the improvement of assisted reproductive technologies (ARTs), and in the arrival of the revolutionary genome editing technology through zygote manipulation. Particularly in sheep and goats, the current knowledge on follicular dynamics enables the design of novel strategies for ovarian control, enhancing artificial insemination and embryo production programs applied to genetic improvement. In vitro embryo production (IVEP) has evolved due to a better understanding of the processes that occur during oocyte maturation, fertilization and early embryo development. Moreover, interesting advances have been achieved in embryo and oocyte cryopreservation, thereby reducing the gap between the bench and on-farm application of IVEP technology. Nevertheless, the major breakthrough of this century has been the arrival of the CRISPR/Cas system for genome editing. By joining diverse disciplines such as molecular biology, genetic engineering and reproductive technologies, CRISPR allows the generation of knock-out and knock-in animals in a novel way never achieved before. The innumerable applications of this disruptive biotechnology are challenging the imagination of those who intend to build the animals of the future.

From reproductive technologies to genome editing in small ruminants: an embryos journey

The beginning of this century has witnessed great advances in the understanding of ovarian physiology and embryo development, in the improvement of assisted reproductive technologies (ARTs), and in the arrival of the revolutionary genome editing technology through zygote manipulation. Particularly in sheep and goats, the current knowledge on follicular dynamics enables the design of novel strategies for ovarian control, enhancing artificial insemination and embryo production programs applied to genetic improvement. In vitro embryo production (IVEP) has evolved due to a better understanding of the processes that occur during oocyte maturation, fertilization and early embryo development. Moreover, interesting advances have been achieved in embryo and oocyte cryopreservation, thereby reducing the gap between the bench and on-farm application of IVEP technology. Nevertheless, the major breakthrough of this century has been the arrival of the CRISPR/Cas system for genome editing. By joining diverse disciplines such as molecular biology, genetic engineering and reproductive technologies, CRISPR allows the generation of knock-out and knock-in animals in a novel way never achieved before. The innumerable applications of this disruptive biotechnology are challenging the imagination of those who intend to build the animals of the future.(AU)

Genetic market in cattle (Bull, AI, FTAI, MOET and IVP): financial payback based on reproductive efficiency in beef and dairy herds in Brazil

A number of reproductive biotechnologies are currently available to multiply offspring from high genetic merit animals to enhance reproductive efficiency and profitability both in dairy and beef herds. Some of these technologies such as fixed time artificial insemination (FTAI), when correctly implemented,generally allow greater reproductive performance than natural breeding. Besides the use of frozen-thawed semen during artificial insemination, cattle recipients can also be synchronized to receive embryos (produced in vivo or in vitro) at set dates with fertility results that usually outperforms natural breeding as well as artificial insemination (AI), particularly during warm seasons and in repeat breeders cows. Altogether, the use of hormonal programs to synchronize ovulation time simplify field routine, can easily fix physiological limitations related to postpartum anestrus (beef cows), poor estrus detection efficiency due to less evident estrus signs (dairy cows), making AI and ET viable to commercial herds both in terms of results and economical returns.

Genetic market in cattle (Bull, AI, FTAI, MOET and IVP): financial payback based on reproductive efficiency in beef and dairy herds in Brazil

A number of reproductive biotechnologies are currently available to multiply offspring from high genetic merit animals to enhance reproductive efficiency and profitability both in dairy and beef herds. Some of these technologies such as fixed time artificial insemination (FTAI), when correctly implemented,generally allow greater reproductive performance than natural breeding. Besides the use of frozen-thawed semen during artificial insemination, cattle recipients can also be synchronized to receive embryos (produced in vivo or in vitro) at set dates with fertility results that usually outperforms natural breeding as well as artificial insemination (AI), particularly during warm seasons and in repeat breeders cows. Altogether, the use of hormonal programs to synchronize ovulation time simplify field routine, can easily fix physiological limitations related to postpartum anestrus (beef cows), poor estrus detection efficiency due to less evident estrus signs (dairy cows), making AI and ET viable to commercial herds both in terms of results and economical returns.(AU)

Hormônio antimülleriano pode uma realidade usada em seres humanos ser transferida a bovinos e búfalos / Antimüllerian Hormone can a reality in humans translate to bovine and buffalos

O hormônio antimülleriano (AMH) nas fêmeas é produzido especificamente pelas células da granulosa dos folículos em crescimento e controla a velocidade do crescimento folicular ao inibir a enzima aromatase. Este hormônio tem sido explorado em várias aplicações biotecnológicas, sendo a mais bem estudada a relação positiva entre a sua concentração circulante e a população folicular antral (PFA) no ovário, tornando o AMH um indicador confiável desta característica em humanos e em outras espécies. O AMH também mostrou ser um indicador prognóstico positivo do rendimento de embriões em programas de ovulação múltipla e transferência de embriões (MOET) em bovinos, porém sua utilidade para identificar fêmeas doadoras de oócitos para produção de embriões in vitro (IVEP) ainda está em discussão. Em búfalos, apenas poucos estudos foram realizados até o momento, porém devido a baixa reserva folicular ovariana na espécie e a grande variabilidade individual, que criam um desafio para ART (Assisted Reproduction Technology) na espécie, o AMH surge com grande potencial de se tornar alternativa eficiente para a identificação precoce de doadores de oócitos para IVEP. Estudos sobre AMH demonstraram claramente sua utilidade como parte do "pacote de biotecnologia reprodutiva" em algumas espécies, especialmente em seres humanos. Em animais de produção, como bovinos, e principalmente no búfalo, estudos adicionais são necessários para definir a utilidade da AMH não apenas como um bom preditor da AFP, mas também como uma ferramenta chave em programas de biotecnologia reprodutiva em todo o mundo.(AU)

The antimüllerian hormone (AMH) in females ias specifically produced by the granulosa cells of growing follicles and controls the speed of follicular growth by inhibit the enzyme aromatase. This has been recently explored in several biotechnological applications with the most well studied being the positive relationship between circulating concentration of circulating AMH and the antral follicular population (PFA) in the ovary,where AMH is becoming accepted as a reliable indicator of this characteristic in both humans and other species. AMH has also been shown to be a positive prognostic indicator of embryo yield in multiple ovulation and embryo transfer (MOET) in cattle, however its utility for identifying good oocyte donors for in vitro embryo production (IVEP) in bovines is still under debate. In buffaloes, only limited studies have been completed, however with the low ovarian follicular reserve in the species and the great individual variability creating a challenge for ART (Assisted Reproduction Technology) the enormous potential of AMH as an efficient alternative of early identification of oocyte donors for IVEP has been suggested. In summary, studies on AMH have clearly demonstrated its utility as part of the "reproductive biotechnology package" in some species, especially in humans and in farm animals such as cattle. In the buffalo, further studies are needed to define the usefulness of AMH not only as a good predictor of AFP but also as a key tool in buffalo reproductive biotechnology programs worldwide.(AU)

Hormônio antimülleriano pode uma realidade usada em seres humanos ser transferida a bovinos e búfalos / Antimüllerian Hormone can a reality in humans translate to bovine and buffalos

O hormônio antimülleriano (AMH) nas fêmeas é produzido especificamente pelas células da granulosa dos folículos em crescimento e controla a velocidade do crescimento folicular ao inibir a enzima aromatase. Este hormônio tem sido explorado em várias aplicações biotecnológicas, sendo a mais bem estudada a relação positiva entre a sua concentração circulante e a população folicular antral (PFA) no ovário, tornando o AMH um indicador confiável desta característica em humanos e em outras espécies. O AMH também mostrou ser um indicador prognóstico positivo do rendimento de embriões em programas de ovulação múltipla e transferência de embriões (MOET) em bovinos, porém sua utilidade para identificar fêmeas doadoras de oócitos para produção de embriões in vitro (IVEP) ainda está em discussão. Em búfalos, apenas poucos estudos foram realizados até o momento, porém devido a baixa reserva folicular ovariana na espécie e a grande variabilidade individual, que criam um desafio para ART (Assisted Reproduction Technology) na espécie, o AMH surge com grande potencial de se tornar alternativa eficiente para a identificação precoce de doadores de oócitos para IVEP. Estudos sobre AMH demonstraram claramente sua utilidade como parte do "pacote de biotecnologia reprodutiva" em algumas espécies, especialmente em seres humanos. Em animais de produção, como bovinos, e principalmente no búfalo, estudos adicionais são necessários para definir a utilidade da AMH não apenas como um bom preditor da AFP, mas também como uma ferramenta chave em programas de biotecnologia reprodutiva em todo o mundo.

The antimüllerian hormone (AMH) in females ias specifically produced by the granulosa cells of growing follicles and controls the speed of follicular growth by inhibit the enzyme aromatase. This has been recently explored in several biotechnological applications with the most well studied being the positive relationship between circulating concentration of circulating AMH and the antral follicular population (PFA) in the ovary,where AMH is becoming accepted as a reliable indicator of this characteristic in both humans and other species. AMH has also been shown to be a positive prognostic indicator of embryo yield in multiple ovulation and embryo transfer (MOET) in cattle, however its utility for identifying good oocyte donors for in vitro embryo production (IVEP) in bovines is still under debate. In buffaloes, only limited studies have been completed, however with the low ovarian follicular reserve in the species and the great individual variability creating a challenge for ART (Assisted Reproduction Technology) the enormous potential of AMH as an efficient alternative of early identification of oocyte donors for IVEP has been suggested. In summary, studies on AMH have clearly demonstrated its utility as part of the "reproductive biotechnology package" in some species, especially in humans and in farm animals such as cattle. In the buffalo, further studies are needed to define the usefulness of AMH not only as a good predictor of AFP but also as a key tool in buffalo reproductive biotechnology programs worldwide.

Tratamentos hormonais e seus efeitos sobre a produção de embriões bovinos in vivo e in vitro

A transferência de embriões (TE) permite a multiplicação de fêmeas geneticamente superiores, contribuindo com o aumento da eficiência na produção de alimentos. Porém, tanto a produção in vivo quando a in vitro ainda necessitam de melhorias. No primeiro estudo, o objetivo foi identificar se a administração de PGF na inseminação artificial (IA) após a superovulação (SOV) melhora as taxas de fecundação e produção embrionária. Vacas doadoras de embriões (n=35) participaram de duas SOV (n=70 procedimentos) sendo que, em cada ciclo, a metade não foi tratada (controle; n=35) e as demais receberam PGF (482g de cloprostenol; n=35) no momento da primeira IA. No dia da coleta de embriões, registrou-se o número, estágio de desenvolvimento e qualidade das estruturas. As medianas (IC 95%) dos grupos controle e PGF foram, respectivamente, 12 (10-18) e 15 (12-18) estruturas totais; 9 (7-11) e 7 (6-10) embriões viáveis; 1 (0-1) e 1 (1-3) embriões degenerados; e 1 (0-3) e 2 (0-5) oócitos não fecundados (P>0,05). Conclui-se que a administração de PGF no momento da primeira IA não afeta o desempenho de vacas superovuladas. No segundo estudo, o objetivo foi avaliar o efeito de um tratamento hormonal injetável para sincronização da onda folicular de doadoras Bos taurus, sobre a concentração de progesterona (P4), número e qualidade dos complexos cumulus oócitos (CCOs) recuperados por aspiração folicular (OPU) e eficiência da PIVE. Vacas Bos taurus (n=11) foram submetidas a quatro sessões de OPU (n=44 procedimentos), sendo que no dia zero (D0), a metade foi alocada no grupo controle (não sincronizada; n=22) ou no tratamento (2 mg de benzoato de estradiol; 150 g de cloprostenol sódico; e 300 mg de progesterona injetável; n=22) e no dia 6 (D6) ocorreu a OPU. Nos resultados obtidos não houve diferença (P>0,05) entre controle e tratamento, nas medianas (IC 95%) de estruturas totais e viáveis, sendo respectivamente, 12 (6-15) e 10 (9-19) CCOs totais; 5,5 (5-8) e 6 (5-9) CCOs viáveis; e a taxa de produção de embriões foi 28% (21-46%) para controle e 33% (22-45%) para tratamento (P > 0,05). Observou-se diferença (P < 0,05) apenas na concentração média de progesterona no D6, sendo 2,8±0,8 ng/mL e 1,1±0,2 ng/mL, para os grupos controle e tratamento, respectivamente. Nas condições deste estudo, conclui-se que o tratamento hormonal para sincronização pré-aspiração não melhorou os parâmetros analisados, portanto, sua aplicação em vacas taurinas é questionável.

Embryo transfer (ET) allows the multiplication of genetically superior females, contributing to increased efficiency in food production. However, both in vivo and in vitro production still need to be improved. In the first study the objective was to identify if PGF administration at the time of artificial insemination (AI) improves fertilization and embryo production rates. Embryo donor cows (n=35) were submitted to superovulation (SOV) twice (n=70 procedures). In each round, half of the cows were non treated (control; n=35) or treated with PGF (482g cloprostenol; n=35) at the time of the first AI. The number, stage of development and quality of embryos were recorded on the day of embryo recovery. The medians (CI 95%) for control and PGF groups were, respectively, 12 (10-18) and 15 (12-18) total structures; 9 (7-11) and 7 (6-10) viable embryos; 1 (0-1) and 1 (1-3) degenerated embryos; and 1 (0-3) and 2 (0-5) non fertilized oocytes (P>0.05). In conclusion, PGF treatment at the time of the first AI does not affect the performance of superovulated cows. In the second study the objective was to evaluate the effect of an injectable hormonal treatment to synchronize the follicular wave of Bos taurus donors on progesterone (P4) concentration, number and quality of cumulus-oocyte complexes (COCs) recovered by ovum pick up (OPU) and IVP efficiency. Bos taurus cows (n=11) were submitted to four OPU sessions (n=44 procedures). On day zero (D0) the cows were allocated to control (not synchronized) or treated group (2 mg of estradiol benzoate; 150 g of sodium cloprostenol; and 300 mg of injectable progesterone). On day 6 (D6) the OPU procedures were performed. There was no difference (P > 0.05) between control and treatment, in the medians (CI 95%) of total and viable structures, being, respectively, 12 (6-15) and 10 (9-19) total oocytes; 5.5 (5-8) and 6 (5-9) viable oocytes; the rate of embryo production was 28% (21-46%) for control and 33% (22-45%) for treatment. A significant difference (P < 0.05) was observed in the concentration of progesterone on D6, being 2.8±0.8 and 1.1±0.2 ng / mL for control and treated groups, respectively. In conclusion, under the conditions of this study, the hormonal treatment for pre-aspiration synchronization did not improve the analyzed parameters, therefore, its application in taurine cows is questionable.

Produção de embriões em ovinos Morada Nova e Somalis Brasileira / Embryo production in Morada Nova and Somalis Brasileira ewes

Superovulatory response and embryo yield in 19 Morada Nova and 20 Somalis Brasileira ewes was analyzed. All animals were synchronized with the insertion of an intravaginal device (CIDR®) on Day 0, replaced by a new device on Day 7, which remained in place until Day 14 and superovulated with 133mg of porcine FSH (pFSH) in decreasing doses at 12h intervals from Day 12 until Day 15 of the treatment, and a single dose of equine chorionic gonadotropin (eCG, 200UI) on Day 14 (i.e., administered in CIDR removal). Fifty hours after CIDR® removal, females were inseminated by laparoscopy. All embryos were recovered by laparotomy 5 days after insemination. Sheep which responded to the superovulation protocol (P>0.05) included 74% of the Morada Nova ewes and 50% of the Somalis Brasileira ewes. Morada Nova showed better results (P<0.05) than Somalis Brasileira in number of ovulations (15.38 ± 5.24 vs. 10.56 ± 2.83), total structures (11.00 ± 7.55 vs. 3.33 ± 1.94) and embryo yields (6.79 ± 5.35 vs. 2.90 ± 2.18). Despite the high fertilization rate, degenerate embryo rate was high for both breeds, with an overall rate of 39% (57/145). In conclusion, superovulatory response and embryo yields in Morada Nova ewes were considered sufficient to justify the use of this procedure in genetic resources conservation programs. However, improvements to embryo quality and control of precocious regression of corpus luteum are necessary to produce better results in the MOET program, with minimal variations and maximum embryo yield in Morada Nova and Somalis Brasileira ewes.(AU)

Produção de embriões em ovinos Morada Nova e Somalis Brasileira / Embryo production in Morada Nova and Somalis Brasileira ewes

Superovulatory response and embryo yield in 19 Morada Nova and 20 Somalis Brasileira ewes was analyzed. All animals were synchronized with the insertion of an intravaginal device (CIDR®) on Day 0, replaced by a new device on Day 7, which remained in place until Day 14 and superovulated with 133mg of porcine FSH (pFSH) in decreasing doses at 12h intervals from Day 12 until Day 15 of the treatment, and a single dose of equine chorionic gonadotropin (eCG, 200UI) on Day 14 (i.e., administered in CIDR removal). Fifty hours after CIDR® removal, females were inseminated by laparoscopy. All embryos were recovered by laparotomy 5 days after insemination. Sheep which responded to the superovulation protocol (P>0.05) included 74% of the Morada Nova ewes and 50% of the Somalis Brasileira ewes. Morada Nova showed better results (P<0.05) than Somalis Brasileira in number of ovulations (15.38 ± 5.24 vs. 10.56 ± 2.83), total structures (11.00 ± 7.55 vs. 3.33 ± 1.94) and embryo yields (6.79 ± 5.35 vs. 2.90 ± 2.18). Despite the high fertilization rate, degenerate embryo rate was high for both breeds, with an overall rate of 39% (57/145). In conclusion, superovulatory response and embryo yields in Morada Nova ewes were considered sufficient to justify the use of this procedure in genetic resources conservation programs. However, improvements to embryo quality and control of precocious regression of corpus luteum are necessary to produce better results in the MOET program, with minimal variations and maximum embryo yield in Morada Nova and Somalis Brasileira ewes.(AU)

Circles around the farm animal embryo – a Danish perspective

With focus on the farm animal embryo, a short overview is given about my research activities over the last 35 years. These activities have been described in five circles, covering different key aspects of my work. The first circle included studies on the basic biology related to oocyte maturation and follicular endocrinology in superovulated dairy cows. Methods were developed to characterize the donor cows with respect to their production of transferable embryos, and some were implemented into a Danish MOET breeding plan. The second circle dealt with in-vitro embryo production in cattle with development of a protocol to produce such embryos at high and consistent levels. Several comparisons were made to reveal consequences of the artificial in-vitro methods on oocytes and embryos, but also through studies of the newborn calves. The third circle was related to development and implementation of a number of technologies within this broad field; examples are mentioned for both oocyte recovery from donor cows, different steps in the in-vitro embryo production system, new ways to perform vitrification and nuclear transfer, and finally a new system to determine oxygen consumption in single embryos. In the fourth circle is described activities from the last years, where work was done with focus on the pregnancy rates after insemination of the dairy cow in their post-partum period, and where somatic cell nuclear transfer was developed both as a technology in itself as well as a helping technique to produce transgenic pigs as models for important human diseases. The fifth and final circle is addressing and thanking the many colleagues and collaboration partners that I have been involved with during all the years to do this work. Nothing could or would have been the same without them and their participation.

Circles around the farm animal embryo a Danish perspective

With focus on the farm animal embryo, a short overview is given about my research activities over the last 35 years. These activities have been described in five circles, covering different key aspects of my work. The first circle included studies on the basic biology related to oocyte maturation and follicular endocrinology in superovulated dairy cows. Methods were developed to characterize the donor cows with respect to their production of transferable embryos, and some were implemented into a Danish MOET breeding plan. The second circle dealt with in-vitro embryo production in cattle with development of a protocol to produce such embryos at high and consistent levels. Several comparisons were made to reveal consequences of the artificial in-vitro methods on oocytes and embryos, but also through studies of the newborn calves. The third circle was related to development and implementation of a number of technologies within this broad field; examples are mentioned for both oocyte recovery from donor cows, different steps in the in-vitro embryo production system, new ways to perform vitrification and nuclear transfer, and finally a new system to determine oxygen consumption in single embryos. In the fourth circle is described activities from the last years, where work was done with focus on the pregnancy rates after insemination of the dairy cow in their post-partum period, and where somatic cell nuclear transfer was developed both as a technology in itself as well as a helping technique to produce transgenic pigs as models for important human diseases. The fifth and final circle is addressing and thanking the many colleagues and collaboration partners that I have been involved with during all the years to do this work. Nothing could or would have been the same without them and their participation.(AU)

PROTOCOLO DE RELAXAMENTO CERVICAL PARA COLETA DE EMBRIÕES EM OVELHAS SANTA INÊS: EFICIÊNCIA, BEM ESTAR ANIMAL, QUALIDADE EMBRIONÁRIA E PROTEÔMICA DO LAVADO UTERINO

Este estudo teve como objetivos avaliar: a) um teste de triagem para seleção de doadoras de embrião aptas para coleta transcervical (TC); b) a eficiência das técnicas de coleta de embrião TC ou cirúrgica por laparotomia (LP) e seus efeitos sobre o bem estar animal; c) o efeito do protocolo hormonal de dilatação da cérvix sobre o ambiente uterino e embrião. No primeiro experimento, o resultado do teste de transposição da cérvix no estro foi correlacionado com o resultado do teste imediatamente antes da coleta de embriões, sendo este último, precedido pelo protocolo de dilatação cervical que consistiu em: benzoato de estradiol (100 µg, i.v.) e cloprostenol (0,12 mg, i.m.) 12 h antes da coleta de embriões, acrescido de ocitocina (100 UI, i.v.) 15 min antes da coleta. No segundo experimento, a frequência cardíaca, temperatura retal, concentrações séricas de proteínas totais, albumina, globulina, cortisol e glicose foram mensuradas em animais submetidos à TC ou LP. As taxas de recuperação de fluido e estruturas também foram mensuradas. No terceiro e quarto experimentos, os grupos foram formados por ovelhas tratadas com o protocolo de dilatação da cérvix (descrito acima) ou ovelhas controles (solução salina). No terceiro experimento, a função luteal foi analisada através de ultrassonografia Doppler e mensuração das concentrações de progesterona. Os embriões foram avaliados quanto à morfologia e expressão gênica. Uma análise proteômica do lavado uterino recuperado também foi realizada. No quarto experimento, os embriões recuperados foram fixados para o teste de TUNEL e outra parte foi cultivada in vitro e submetida à qRT-PCR. No primeiro experimento, o teste de transposição apresentou acurácia de 80,0% e índice kappa de 0,52. No segundo experimento, a coleta TC foi mais eficiente que LP (taxas de recuperação de fluido, P = 0.0002; e de estruturas, P = 0.0180). Durante e imediatamente após procedimentos, a temperatura retal foi maior na coleta TC, enquanto que a frequência cardíaca foi maior no pós-operatório tardio da coleta LP (P < 0.05). Houve um pico no decorrer e logo após os procedimentos nas mensurações de glicose (maior na coleta TC, P < 0.05) e cortisol (maior na coleta LP, P < 0.05). A técnica de coleta não afetou as concentrações de proteínas totais, albumina e globulina. Nos dois últimos experimentos, a qualidade morfológica, e índice apoptótico não foram afetados pelo protocolo, mas os corpos lúteos de animais controle tiveram maior perfusão sanguínea em relação a animais tratados (P = 0.002). As concentrações de progesterona foram reduzidas no grupo tratado às 6, 9 e 12 h após a administração do tratamento (P < 0.0001). A expressão dos genes BAX, BCL2, PRDX1, e HSP90 não foi afetada pelo protocolo. Contudo, os embriões do grupo tratado tiveram menos transcritos de NANOG e OCT4 que embriões do grupo controle (P = 0.008; P = 0.006, respectivamente). Após o cultivo, não houve diferenças entre os grupos em nenhum gene. No lavado uterino, o grupo tratado obteve 436 proteínas exclusivas, destas 16 foram significativamente mais expressas que no grupo controle (P < 0,05). No grupo controle, 126 proteínas exclusivas e cinco proteínas diferenciais foram encontradas (P < 0.05). Em conclusão, o teste de transposição cervical é uma opção de triagem para doadoras de embrião pela técnica TC, que é mais eficiente e, possivelmente, menos estressante que a técnica LP. Contudo, o protocolo hormonal para dilatação cervical promove luteólise e uma alteração temporária da expressão gênica dos embriões, além de um perfil proteico do fluido uterino modificado.

This study aimed to evaluate: a) a screening test to select suitable embryo donors for transcervical collection (TC); b) the efficiency of embryo collection techniques TC or surgical by laparotomy (LP), and their effects on animal welfare; c) the effect of the hormonal protocol for dilation of the cervix on the uterine environment and embryo. In the first experiment, the result of the cervix transposition test at estrus was correlated with the test result immediately before embryo collection, the latter was preceded by the cervical dilation protocol which consisted of: estradiol benzoate (100 µg, iv) and cloprostenol (0.12 mg, im) 12 h before embryo collection, plus oxytocin (100 IU, iv) 15 min before collection. In the second experiment, heart rate, rectal temperature, serum concentrations of total proteins, albumin, globulin, cortisol and glucose were measured in animals submitted to TC or LP. The rates of fluid recovery and structures were also measured. In the third and fourth experiments, the groups were formed by ewes treated with the cervix dilation protocol (described above) or ewes control (saline). In the third experiment, luteal function was analyzed using Doppler ultrasound and measurement of progesterone concentrations. The embryos were evaluated for morphology and gene expression. A proteomic analysis of the recovered uterine lavage was also performed. In the fourth experiment, the recovered embryos were fixed for the TUNEL test and another part was cultured in vitro and submitted to qRT-PCR. In the first experiment, the transposition test showed an accuracy of 80.0% and a kappa index of 0.52. In the second experiment, TC collection was more efficient than LP (fluid recovery rates, P = 0.0002; and structures, P = 0.0180). During and immediately after procedures, the rectal temperature was greater in the TC collection, while the heart rate was greater in the late postoperative period of the LP collection (P < 0.05). There was a peak during and after the procedures in the measurements of glucose (greater in the TC collection, P < 0.05) and cortisol (greater in the LP collection, P < 0.05). The collection technique did not affect the concentrations of total proteins, albumin and globulin. In the last two experiments, the morphological quality and apoptotic index were not affected by the protocol, but the corpora lutea of control animals had greater blood perfusion compared to treated animals (P = 0.002). Progesterone concentrations were reduced in the treated group at 6, 9 and 12 h after treatment administration (P < 0.0001). The expression of the BAX, BCL2, PRDX1, and HSP90 genes was not affected by the protocol. However, embryos in the treated group had fewer NANOG and OCT4 transcripts than embryos in the control group (P = 0.008; P = 0.006, respectively). After culture, there were no differences between groups in any gene. In the uterine lavage, the treated group obtained 436 exclusive proteins, which 16 were significantly more expressed than in the control group (P < 0.05). In control group, 126 exclusive proteins and five differential proteins were found (P < 0.05). In conclusion, the cervical transposition test is a screening option for embryo donors by TC technique, which is more efficient and, possibly less stressful than the LP technique. However, the hormonal protocol for cervical dilation promotes luteolysis and a temporary alteration in the gene expression of the embryos, as well as a modified uterine fluid protein profile.

AVALIAÇÃO DA EFICIÊNCIA DA REUTILIZAÇÃO DO CIDR® NA SUPEROVULAÇÃO DE OVELHAS: UMA ABORDAGEM UTILIZANDO O DOPPLER COLORIDO

Em programas de múltipla ovulação e transferência de embriões (MOTE) são utilizados dispositivos intravaginais como o Controlador de Liberação de Droga Interna (CIDR®) impregnados de progesterona (P4) para a sincronização de estro de doadoras e receptoras. O objetivo deste estudo foi avaliar a reutilização de CIDR® na sincronização de estro em protocolos de MOTE de ovinos por meio da ultrassonografia modo Doppler colorido. Vinte ovelhas da raça Morada Nova e 20 da Santa Inês foram submetidas à colheita embrionária não cirúrgica (CENC) após protocolo de superovulação. Este consistiu na inserção de dispositivo intravaginal novo ou reutilizado (uma única vez por nove dias) à base de P4, mantido por nove dias e com aplicação de seis doses decrescentes (25-25-15-15-10-10%) de p-FSH injetadas a cada 12 h intramuscularmente (i.m.) 60 h antes da retirada do dispositivo. As avaliações ultrassonográficas modo B e Doppler colorido (Z5 Vet® Mindray, China) foram realizadas nos dias 0, 7, 9, 36h (Dia 11) após a retirada deste e 12 h antes (Dia 15) da CENC (Dia 16) para avaliação da população ovariana. As ovelhas receberam duas doses de 37,5 g de d-cloprostenol (Prolise®; Tecnopec, São Paulo, Brasil) no terceiro dia do tratamento e três administrações i.m. de flunixin-meglumine (Banamine®, MSD, São Paulo, Brasil) nos dias 3, 4 e 5 após a retirada do CIDR® sendo também monitoradas quanto à resposta ao início do estro e acasaladas com carneiros férteis. Realizou-se a CENC após a dilatação cervical usando d-cloprostenol i.m. e benzoato de estradiol (latero-vulvar) às 20h do dia anterior e oxitocina intravenoso aos 20 min antes da colheita, respectivamente, nas fêmeas que apresentavam pelo menos quatro corpos lúteos (Dia 15). Não houve diferença (p > 0,05) entre os grupos G-Novo e G-Usado quanto às variáveis início (IE) e duração do estro (DE), número de corpos lúteos (CL), folículos anovulatórios luteinizados (FAL), estruturas recuperadas (ER) e embriões viáveis (EV) e entre as porcentagens de áreas de perfusão ovariana em D11 e D15. A variável IE para o estro apresentou correlações positivas de perfusão ovariana em ambos os tratamentos e dias. Porém, apenas no Dia 11 do grupo novo esse valor foi significativo (r = - 0.63 e p = 0.01). Em relação às variáveis DE e CL estas correlações foram negativas e significativamente diferentes no D11 para o G-Novo (p = 0.01). As variáveis EV e FAL em D11 apresentaram correlações positivas no G-Novo ao passo que no G-Usado foram negativas. Porém, apenas a variável EV significativamente diferente apenas no G-Novo (r = 0.54 e p = 0.04). Por fim, ambos os tratamentos apresentaram correlações positivas nas variáveis ER, EV e FAL no D15. Porém, significativamente apenas para o G-Novo enquanto que no grupo usado esta diferença ocorreu apenas na variável DAL e a correlação foi negativa (r = 0.48 e p = 0.04). Conclui-se que o uso do CIDR® reutilizado por um único tempo nos protocolos MOTE de médio prazo foi eficiente na sincronização de estro em protocolo de MOTE de ovinos avaliado por meio da ultrassonografia modo Doppler colorido.

In multiple ovulation and embryo transfer (MOET) programs, intravaginal devices such as the Internal Drug Release Controller (CIDR®) impregnated with progesterone (P4) are used to synchronize the estrus of donors and recipients. The aim of this study was to evaluate the reuse of CIDR® in estrus synchronization in sheep MOET protocols by means of color Doppler ultrasonography. Twenty Morada Nova and 20 Santa Inês ewes were submitted to non-surgical embryonic recovery (NSER) after a superovulation protocol. This consisted of inserting a new or reused intravaginal device (once only for nine days) based on P4, maintained for nine days and with the application of six decreasing doses (25-25-15-15-10-10% ) of p-FSH injected every 12 hours intramuscularly (i.m.) 60 h before removal of the device. Mode B ultrasound and color Doppler evaluations (Z5 Vet® Mindray, China) were performed on days 0, 7, 9, 36 h (Day 11) after removal and 12 h before (Day 15) of NSER (Day 16) for evaluation of the ovarian population. The sheep received two doses of 37.5 g of d-cloprostenol (Prolise®; Tecnopec, São Paulo, Brazil) on the third day of treatment and three administrations of flunixin-meglumine i.m. (Banamine®, MSD, São Paulo, Brazil ) on days 3, 4 and 5 after the removal of the CIDR® and are also monitored for response to the onset of estrus and mated with fertile sheep. NSER was performed after cervical dilation using d-cloprostenol (i.m.) and estradiol benzoate laterovulvar at 8 pm the previous day and oxytocin intravenous at 20 min before harvest, respectively, in those females that had at least four corpora luteum (Day 15). There was no difference (p > 0.05) between the G-New and G-Used groups regarding response, estrus onset (IE), and estrus duration (DE), in the number of corpora luteum (CL), luteinized unovulatory follicles (LUF), recovered structures (RS) and viable embryos (VE) and among the percentages of areas of ovarian perfusion in D11 and D15. The IE variable for estrus showed positive correlations of ovarian perfusion in both treatments and days. However, only on Day 11 of G-New was this value significant (r = -0.63 and p = 0.01). Regarding the DE and CL variables, these correlations were negative and significantly different in the G-New and D11 (p = 0.01). The VE and LUF variables showed positive correlations in the G-New while in the G-used they were negative, but only the VE variable LUF significantly different only in the G-New (r = 0.54 and p = 0.04). Finally, both treatments showed positive correlations in the variables RS, VE and LUF at D15. However, significantly only for the G-New, whereas in the group used, this difference occurred only in the variable DAL and the correlation was negative (r = 0.48 and p = 0.04). It was concluded that the use of CIDR® reused for a single time for nine days in the medium-term MOET protocols was efficient in the estrus synchronization in the sheep MOET protocol evaluated by means of color Doppler ultrasonography.

Effect of pFSH dose reduction on in vivo embryo production in Dorper ewes / Efeito da redução da dose de pFSH na produção in vivo de embriões em ovelhas Dorper

To evaluate the effect of pFSH dose on the in vivo embryo production of Dorper ewes in the semi-arid northeast of Brazil, 40 sheep females were distributed into two groups of 20 animals that received intravaginal CIDR for 14 days, and two days before device removal, they received one of the following treatments: in the FSH200 group, the ewes received 200 mg of pFSH; and in the FSH128 group, the ewes received a total of 128 mg in decreasing doses every 12 h. Beginning 12 h after the conclusion of the treatments, estrus detection was performed every four hours using two Dorper rams of proven fertility. The ewes were mated at estrus onset and 24 hours later. Seven days after intravaginal device removal, the superovulatory response was evaluated, and embryo collection was performed using the laparotomy method. The recovered flushings were subjected to embryo searches under a stereomicroscope and classified according to their qualities. Analyses of variance (ANOVAs) and LSD tests were used to compare the different parameters. The data expressed as percentages were analysed by chi-square test. The ovulation rate was higher in the FSH200 group, which had 16.3 ± 0.3 corpora lutea (CL), than in the FSH128 group, which had 11.3 ± 0.3 CL (P 0.05). However, higher fertilization rate (83.6% vs. 62.4%) and higher transferable (86.0% vs. 71.6%) and freezable (67.9% vs. 40.8%) embryo rates were observedin the FSH 128 group compared with the group that received 200 mg. Furthermore, no significant differences in the remaining parameters were observed between the experimental groups (P>0.05), demonstrating that pFSH dose reduction promoted a greater production of freezable and transferableembryos in Dorper ewes subjected to MOET.(AU)

Com o objetivo de avaliar o efeito da redução de pFSH na produção in vivo de embriões de ovelhas da raça Dorper exploradas no semiárido do Nordeste do Brasil, 40 fêmeas ovinas foram distribuídas em dois grupos com 20 animais, os quais receberam um CIDR intravaginal por 14 dias e dois dias antes da remoção do dispositivo receberam um tratamento superovulatório proposto: grupo FSH200 onde as ovelhas receberam 200 mg de pFSH, enquanto o grupo FSH128 totalizou 128 mg em doses decrescentes intervaladas por 12 horas. Doze horas após o final do tratamento, foi realizada a detecção de estro, a cada quatro horas, utilizando dois carneiros Dorper, de fertilidade comprovada. As ovelhas foram cobertas no início do estro e 24 horas depois. Sete dias após a retirada do dispositivo intravaginal, foi realizada a avaliação da resposta superovulatória e a colheita de embriões pelo método de laparotomia. O lavado recuperado foi submetido à procura de embriões em estereomicroscópio e classificados de acordo com sua qualidade. Para comparação dos diversos parâmetros, foi utilizada a Análise de Variância (ANOVA), seguida da realização do teste LSD. Os dados expressos em porcentagem foram submetidos ao Teste de Qui-quadrado. A taxa de ovulação foi superior no grupo FSH200 com 16,3 ± 0,3 corpos lúteos (CL) quando comparado ao grupo FSH128 com de 11,3 ± 0,3 CL (P 0,05). Entretanto, foi verificada uma maior taxa de fecundação (83,6% vs. 62,4%) e uma maior taxa de embriões transferíveis (86,0% vs.71,6%) e congeláveis (67,9% vs. 40,8%) no grupo FSH 128 quando comparado ao grupo que recebeu200 mg. Além disso, não foi observada qualquer diferença significativa entre os grupos experimentais, para os demais parâmetros avaliados demonstrando que a redução da dose de pFSH promove maior produção de embriões congeláveis e transferíveis em ovinos Dorper submetidos à MOTE.(AU)

Effect of pFSH dose reduction on in vivo embryo production in Dorper ewes / Efeito da redução da dose de pFSH na produção in vivo de embriões em ovelhas Dorper

To evaluate the effect of pFSH dose on the in vivo embryo production of Dorper ewes in the semi-arid northeast of Brazil, 40 sheep females were distributed into two groups of 20 animals that received intravaginal CIDR for 14 days, and two days before device removal, they received one of the following treatments: in the FSH200 group, the ewes received 200 mg of pFSH; and in the FSH128 group, the ewes received a total of 128 mg in decreasing doses every 12 h. Beginning 12 h after the conclusion of the treatments, estrus detection was performed every four hours using two Dorper rams of proven fertility. The ewes were mated at estrus onset and 24 hours later. Seven days after intravaginal device removal, the superovulatory response was evaluated, and embryo collection was performed using the laparotomy method. The recovered flushings were subjected to embryo searches under a stereomicroscope and classified according to their qualities. Analyses of variance (ANOVAs) and LSD tests were used to compare the different parameters. The data expressed as percentages were analysed by chi-square test. The ovulation rate was higher in the FSH200 group, which had 16.3 ± 0.3 corpora lutea (CL), than in the FSH128 group, which had 11.3 ± 0.3 CL (P 0.05). However, higher fertilization rate (83.6% vs. 62.4%) and higher transferable (86.0% vs. 71.6%) and freezable (67.9% vs. 40.8%) embryo rates were observedin the FSH 128 group compared with the group that received 200 mg. Furthermore, no significant differences in the remaining parameters were observed between the experimental groups (P>0.05), demonstrating that pFSH dose reduction promoted a greater production of freezable and transferableembryos in Dorper ewes subjected to MOET.

Com o objetivo de avaliar o efeito da redução de pFSH na produção in vivo de embriões de ovelhas da raça Dorper exploradas no semiárido do Nordeste do Brasil, 40 fêmeas ovinas foram distribuídas em dois grupos com 20 animais, os quais receberam um CIDR intravaginal por 14 dias e dois dias antes da remoção do dispositivo receberam um tratamento superovulatório proposto: grupo FSH200 onde as ovelhas receberam 200 mg de pFSH, enquanto o grupo FSH128 totalizou 128 mg em doses decrescentes intervaladas por 12 horas. Doze horas após o final do tratamento, foi realizada a detecção de estro, a cada quatro horas, utilizando dois carneiros Dorper, de fertilidade comprovada. As ovelhas foram cobertas no início do estro e 24 horas depois. Sete dias após a retirada do dispositivo intravaginal, foi realizada a avaliação da resposta superovulatória e a colheita de embriões pelo método de laparotomia. O lavado recuperado foi submetido à procura de embriões em estereomicroscópio e classificados de acordo com sua qualidade. Para comparação dos diversos parâmetros, foi utilizada a Análise de Variância (ANOVA), seguida da realização do teste LSD. Os dados expressos em porcentagem foram submetidos ao Teste de Qui-quadrado. A taxa de ovulação foi superior no grupo FSH200 com 16,3 ± 0,3 corpos lúteos (CL) quando comparado ao grupo FSH128 com de 11,3 ± 0,3 CL (P 0,05). Entretanto, foi verificada uma maior taxa de fecundação (83,6% vs. 62,4%) e uma maior taxa de embriões transferíveis (86,0% vs.71,6%) e congeláveis (67,9% vs. 40,8%) no grupo FSH 128 quando comparado ao grupo que recebeu200 mg. Além disso, não foi observada qualquer diferença significativa entre os grupos experimentais, para os demais parâmetros avaliados demonstrando que a redução da dose de pFSH promove maior produção de embriões congeláveis e transferíveis em ovinos Dorper submetidos à MOTE.